CN113317377A - 一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法 - Google Patents
一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法，包括以下步骤：A、杀青：将新鲜采集的沙棘叶清洗并沥干水分，然后采用红外或微波方式进行杀青；B、揉捻：将杀青后的沙棘叶放入揉捻机内揉捻3‑6min得沙棘叶茶坯；C、干燥：将沙棘叶茶坯通过热风干燥或微波干燥得沙棘叶茶样品。本发明与现有技术相比的优点在于：最大化的保留沙棘叶中的营养成分。
Description
技术领域
本发明涉及沙棘茶叶加工技术领域，具体是指一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法。
背景技术
植物沙棘分属于胡颓子科沙棘属，与其果实统称为沙棘，形态为小乔木或落叶性灌木，在国内主要分布于华北、西北、西南等地区。近年来，人们对寻找具有抗氧化、抗炎、抗菌和抗肿瘤等活性的天然化合物有着广泛的兴趣，在多种多样的天然资源中，沙棘作为一种多用途的营养植物引起了人们的广泛兴趣，有资料称沙棘全身都是宝，它的叶片、根茎以及沙棘果中存在着许多生理活性物质。
从营养价值及药用价值角度来看，沙棘叶制成保健茶或许可以用来预防和治疗心血管系统疾病，也有可能具备抗肿瘤、抗病毒、杀菌消炎、抗衰老以及降血脂、改善消化系统和免疫系统等药理功效，极具经济价值和发展潜能，不仅为沙棘茶的开发提供了广阔的发展前景，同时也降低了对沙棘叶的资源浪费。
市面上卖的沙棘叶茶多是不杀青，直接干燥制得，不能最大化的利用沙棘叶的营养成分。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服以上技术缺陷，提供一种最大化保留沙棘叶营养成分的一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法，包括以下步骤：
A、杀青：将新鲜采集的沙棘叶清洗并沥干水分，然后采用红外或微波方式进行杀青；
B、揉捻：将杀青后的沙棘叶放入揉捻机内揉捻3-6min得沙棘叶茶坯；
C、干燥：将沙棘叶茶坯通过热风干燥或微波干燥得沙棘叶茶样品。
进一步的，A中采用微波方式进行杀青，微波干燥功率700W，时间为2min。
进一步的，A中采用红外方式进行杀青，采用红外烘箱杀青7min。
进一步的，C中热风干燥温度为45℃。
进一步的，C中微波干燥功率为P-40。
本发明与现有技术相比的优点在于：
在杀青方法中，红外杀青法和微波杀青法是取代传统方法的最佳方法，其中微波杀青法相比于红外杀青法又具有时间短、效率高的优势；
热风干燥和微波干燥均优于传统干燥方式，在热风干燥(45℃)条件下进行干燥，总黄酮，总多酚、异鼠李素含量、还原力、清除DPPH自由基和亚硝酸根自由基活性方面显著强于干燥方式，且经热风干燥(45℃)后沙棘叶中水分含量很少，便于储存，而微波干燥(P-40)干燥效率更高。
附图说明
图1为水分含量结果(Un-rolling：未揉捻；Rolling：揉捻；VD：真空干燥；MWD：微波干燥；HAD：热风干燥)。
图2为总黄酮含量结果(Un-rolling：未揉捻；Rolling：揉捻；VD：真空干燥；MWD：微波干燥；HAD：热风干燥)。
图3为总多酚含量结果(Un-rolling：未揉捻；Rolling：揉捻；VD：真空干燥；MWD：微波干燥；HAD：热风干燥)。
图4为异鼠李素含量结果(Un-rolling：未揉捻；Rolling：揉捻；VD：真空干燥；MWD：微波干燥；HAD：热风干燥)。
图5为还原性结果(Un-rolling：未揉捻；Rolling：揉捻；VD：真空干燥；MWD：微波干燥；HAD：热风干燥)。
图6为羟基自由基清除率(Un-rolling：未揉捻；Rolling：揉捻；VD：真空干燥；MWD：微波干燥；HAD：热风干燥)。
图7为抗NO2-结果(Un-rolling：未揉捻；Rolling：揉捻；VD：真空干燥；MWD：微波干燥；HAD：热风干燥)。
图8为DPPH半清除率(EC50)结果(Un-rolling：未揉捻；Rolling：揉捻；VD：真空干燥；MWD：微波干燥；HAD：热风干燥)。
具体实施方式
1.1.1.1沙棘叶茶的制备
将新鲜采集的沙棘叶(采自吕梁方山野生沙棘叶)，清洗并沥干水分。采用等分法将沙棘叶片分为7组，每组总重量300g。第1组在60℃烘箱中干燥，第2组在150℃下用平底锅(PF)杀青3分钟，第3组用蒸汽(SF)杀青叶片。将蒸笼放在沸水上，然后将沙棘叶铺在蒸笼上约3mm厚，蒸2分钟，第4组用沸水(BF)杀青，将沙棘叶放入沸水中约1分钟，用滤器迅速取出，沥干水分。第5组采用热风杀青法(HF)，在140℃烘箱中杀青5min。第6组用微波炉(MWF)杀青，微波干燥功率700w，时间为2min。第7组用红外烘箱(IRF)杀青7min，杀青后的沙棘叶以同样的方式揉捻，然后在60℃烘箱中干燥。
1.1.1.2沙棘叶茶提取物的制备
取沙棘叶茶样品分别放入研钵中研磨，得到沙棘叶茶粉末，取研磨后的沙棘叶茶粉末，精确称取约5g，加入60％乙醇100mL(料液比1:20)，置于超声波提取器中(功率100W，温度65℃)，超声1h后离心，将上清液转移至圆底烧瓶中。将残渣再次加入100mL 60％的乙醇于上述条件下超声提取30min，离心，将上清液合并，残渣再用相同方法提取2次。将所得上清液，在55℃下旋干溶剂后，加入60％乙醇定容至75mL，得到沙棘叶茶提取液。每种干燥方法取3个平行。
1.1.1.3沙棘叶茶中水分测定
根据2015版《中国药典》中水分测定法的第二法中烘干法，精确称取约2g沙棘叶茶粉末，即为鲜量(MF)，将沙棘叶茶粉末平铺于已知质量的称量中。开启瓶盖后放置烘箱温度为100℃的烘箱中干燥5h，干燥至5h后将瓶盖盖上，冷却后，准确称重，再在上述温度的烘箱中干燥2h，冷却称重，至连续两次称重的差值不差过50mg为止。用干燥后的沙棘叶茶粉末和称量瓶质量减去称量瓶质量即干重(MD)。
沙棘叶茶的含水量(％)的计算公式：
M0—沙棘叶样品鲜重；
M1—沙棘叶样品干重。
1.1.1.4多酚氧化酶(PPO)活性测定
多酚氧化酶活性测定，首先配制提取溶液，称取2g交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)于烧杯中，放入少量磷酸钠缓冲液(0.2mol·L-1，pH 7.0)使其溶解，再倒入容量瓶中，向其中加入磷酸钠缓冲液(0.2mol·L-1，pH 7.0)，定容至100mL，不断振摇。准确称取沙棘叶粉末0.5g于试管中置于冰水浴中，向其中加入4mL提取液，涡旋1min。混合溶液用离心机(10000r·min-1)用时5min，倒出上清液，此提取过程重复3次。3次上清液倒入同一试管中，取上清液来测定多酚氧化酶(PPO)。
多酚氧化酶活性的测定：在20mL的试管中加入1.5mL底物20mg·mL-1的邻苯二酚，0.2mL的酶提取液，1.5mL的50mmol/L的磷酸钠缓冲溶液(pH 7.0)。以0.2mL的磷酸钠缓冲液(0.2mol/L,pH 7.0)代替酶提取液，作为空白对照。PPO活性是在410nm下酶催化线性增长0.001吸光度每分钟每克沙棘叶粉末。
1.1.1.5沙棘叶茶总多酚含量测定
分别取不同浓度的没食子酸溶液660μL，混悬后，加入120μL的福林酚试剂，将混合溶液在室温下静置5min，向其中加入120μL的20％Na2CO3溶液混匀，在680nm波长下用酶标仪测定吸光度；其标准曲线回归方程为y＝32.675x+0.0178，R2＝0.9911。取样品溶液，按标准曲线法测定总多酚含量。
1.1.1.6沙棘叶茶总黄酮含量测定
分别取不同浓度的芦丁标准溶液1.5mL置于10mL量瓶中，加入400μL 5％亚硝酸钠溶液，混悬，静置6min，加入400μL 10％硝酸铝溶液，摇匀，放置6min，再加入4mL4％氢氧化钠溶液，最后用60％乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min，在510nm波长下用酶标仪测定吸光度；其制标准曲线回归方程为y＝4.029x+0.0752，R2＝0.998。取样品溶液，按标准曲线法测定总黄酮含量。
1.1.1.7沙棘叶茶沙棘叶茶提取液中异鼠李素含量测定
色谱柱：Kromasil 100-5-C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)流动相：甲醇-0.4％磷酸溶液(58:42)；检测波长：370nm；流速：1mL·min-1；柱温：25℃。
取不同浓度的异鼠李素标准溶液各20μL，按上述色谱条件测定，绘制标准曲线。其标准曲线回归方程为y＝3×109x+18186，R2＝0.9996。
取沙棘叶茶提取液370μL，加350μL HCI，75℃水浴1h，冷却至室温后加乙醇4.3mL。吸取处理过的沙棘叶茶提取液10μL，按上述色谱条件测定。
1.1.1.8沙棘叶茶抗氧化活性测定
1.1.1.8.1沙棘叶茶还原力测定
取不同浓度的抗坏血酸标准溶液1mL。加入0.2mol·L-1、pH＝6.6的磷酸缓冲溶液2.5mL，1％的铁氰化钾溶液2.5mL，混匀，50℃水浴条件下反应20min。迅速冷却，立即加入10％三氯乙酸溶液2.5mL，再在3000r·min-1离心10min。取离心后的上清液2.5mL，加2.5mL蒸馏水，0.1％的三氯化铁溶液0.5mL，摇匀后，反应10min，于690nm波长下用酶标仪测定吸光度。其标准曲线回归方程为y＝2.479x+0.072，R2＝0.999。样品的还原力根据标曲方法测定。
1.1.1.8.2沙棘叶茶清除DPPH自由基测定
取不同浓度的样品溶液样品溶液用60％乙醇定容到600μL，然后与300μL的DPPH混合。混合溶液混悬后室温下避光静置20min。在492nm波长下用酶标仪测定吸光度。DPPH自由基半清除率浓度按下面公式计算：
A0—空白吸光值；
A1—样品吸光值。
以浓度为横坐标，清除率为纵坐标做图，半数清除率EC50，即清除自由基达到50％时的有效浓度，从线性回归方程得到。清除DPPH自由基的结果以浓度(mg·mL-1)表示。
1.1.1.8.3沙棘叶茶清除羟基自由基测定
取1.5mL 0.2mol/LpH＝7.4的磷酸缓冲溶液，向其加0.7mL2.0 mmol·L-1的EDTANa2Fe(II)溶液，加0.2mL 520μg·mL-1的Saffron T番红花T溶液，加2.2mL不同浓度的提取液，再加0.4mL 6％的H2O2溶液混合均匀，37℃水浴，反应30min，测定样品在波长520nm下的吸光值，其中，空白组以超纯水替代样品，沙棘果汁、果渣及果籽羟自由基半清除率浓度按下面公式计算：
A0—空白吸光值；
A1—样品吸光值。
以浓度为横坐标，清除率为纵坐标做图，半数清除率EC50，即清除自由基达到50％时的有效浓度，从线性回归方程得到。清除羟自由基的结果以浓度(mg·mL-1)表示。
1.1.1.8.4沙棘叶茶亚硝酸根清除能力测定
准确吸取50mg·L-1的NaNO2标准液50μL于10mL离心管中，向其中加入不同浓度的样品溶液(以蒸馏水作为空白对照)90μL，再加入250μL 0.1mol·L-1pH＝3.0的柠檬酸钠-柠檬酸缓冲溶液，用水定容到500μL在37℃的水浴中加热1h，冷却至室温后向其中加入1.0mL对氨基苯磺酸反应5min后再向其中加入500μLN-1-奈基乙二胺盐酸盐，用水定容至5mL，混悬后待体系反应15min后在538nm波长处测吸光度。按下面公式计算对亚硝酸根半清除率浓度：
A0—空白吸光值；
A1—样品吸光值。
以浓度为横坐标，清除率为纵坐标做图，半数清除率EC50，即清除自由基达到50％时的有效浓度，从线性回归方程得到。清除亚硝酸根的结果以浓度(mg·mL-1)表示。
1.1.1.9沙棘叶茶α-糖苷酶抑制活性测定
准确吸取不同浓度的样品溶液100μL于10mL离心管中，向其中加入60μL糖苷酶(5u·mL-1)，350μL 0.1mol·L-1pH＝6.8的磷酸缓冲溶液，在37℃的水浴中加热30min，然后向其中加入10μL10 mM PNPG，再在37℃水浴中加热30min，最后向体系中加入500μL0.5mol·L-1Na2CO3溶液，混合均匀后在405nm波长下用酶标仪测定吸光度值。然后按下面给出的公式计算对α-糖苷酶抑制能力：
A0—空白吸光值；
A1—样品吸光值。
以浓度为横坐标，清除率为纵坐标做图，半数清除率EC50，即清除自由基达到50％时的有效浓度，从线性回归方程得到体外抑制α-糖苷酶活性的结果以浓度(mg·mL-1)表示。
1.1.1.10沙棘叶茶胰脂肪酶抑制活性测定
分别取100μL总黄酮含量相同(或总多酚含量相同)的提取液于试管中，再加入100μL 5mg·mL-1猪胰Ⅱ型脂肪酶，加入400μL 0.1moL·L-1pH＝8.2的Tris-HCl缓冲溶液，加入450μL 0.8mg·mL-1PNP，在37℃下水浴1h，反应完毕后用酶标仪在405nm处测吸光度。
A0—空白吸光值；
A1—样品吸光值。
1.1.1.11数据处理
所有测定均一式三份，数据以平均值±标准差表示。使用IBM SPSS 20统计软件对数据进行统计分析。
1.1.2实验结果
1.1.2.1水分、总多酚、总黄酮、异鼠李素和多酚氧化酶活性
沙棘叶茶的水分、多酚氧化酶活性、总多酚、总黄酮、异鼠李素含量见表1。沙棘叶茶的含水量在5.73％至6.18％之间，低于绿茶标准中对茶叶含水量的规定(7％)。
杀青样品的PPO活性(0.0054-0.0069au/g·min)显著低于沙棘叶(0.0231au/g·min)。SF样品和HF样品的PPO活性略高于其他杀青样品。结果表明，杀青处理对PPO活性有抑制作用。
杀青样品的总可溶性多酚含量(93.11-135.18mg GA/g)高于SBL样品(76.34mgGA/g)。杀青样品中，HF样品和BF样品的总多酚含量最低，可溶性总多酚含量依次为SF样品、PF样品、IRF样品和MWF样品。总多酚含量与多酚氧化酶活性呈负相关(r＝-0.701，数据未显示)，表明多酚氧化酶加速了多酚的氧化或分解。杀青样品的总黄酮含量(46.07-92.48mgRE/g)高于SBL样品(38.27mg RE/g)。杀青样品中，BF样品的总黄酮含量最低，总黄酮含量依次为PF样品、HF样品、SF样品、MWF样品和IRF样品。总黄酮含量与PPO活性呈弱负相关(r＝-0.319，数据未显示)。BF样品的总可溶性多酚含量和总黄酮含量较低，这可能是由于在沸水中固定期间扩散或/或浸出到水中所致。与传统杀青方法相比，MWF样品和IRF样品的总可溶性多酚含量和总黄酮含量较高，这可能是由于热处理引起的酚氧化或聚合，MWF和IRF可快速达到高温并迅速削弱PPO活性。
SBL样品(2.40mg/g)的异鼠李素含量高于杀青样品(0.34-0.96mg/g)。杀青样品中，BF样品中异鼠李素含量最低，异鼠李素含量依次为IRF、SF、MWF、PF、HF。样品中的异鼠李素苷可能在PPO作用下水解为异鼠李素，在SBL样品中异鼠李素含量最高。
表1沙棘叶茶的水分、多酚氧化酶(PPO)、总多酚、总黄酮、异鼠李素含量测定结果
数值为平均值±标准差。同一列中不同字母的平均数差异显著(P≤0.05)。SBL:沙棘叶；PF:锅烧杀青；SF:蒸气杀青；BF:沸水杀青；HF:热风杀青；MWF:微波杀青；IRF:红外杀青。
1.1.2.2沙棘叶茶抗氧化能力的测定结果
采用DPPH自由基测定法、羟自由基清除能力测定法、亚硝酸盐清除能力测定法和还原力测定法对沙棘叶茶的抗氧化能力进行了评价(表2)。杀青样品对DPPH自由基的清除活性(EC50值为0.1039-0.1653mg/mL)高于SBL样品(EC50值为0.2292mg/mL)。在杀青样品中，SF样品清除DPPH自由基的活性最强，其次是PF、IRF和MWF(EC50值为0.1327-0.1376mg/mL)，三种样品之间无显著差异，HF样品(EC50值为0.1446mg/mL)和BF样品。EC50值与总黄酮含量呈显著负相关(r＝-0.811，数据未显示)，与总多酚含量呈弱负相关(r＝-0.268，数据未显示)。这些结果表明，黄酮类化合物是DPPH自由基清除活性的主要原因。
杀青样品(EC50值为0.5158-0.7003mg/mL)对羟自由基的清除能力强于SBL样品(EC50值为0.7062mg/mL)。在杀青样品中，IRF样品的羟自由基清除活性最强，其次是MWF、SF、BF、PF和HF。总黄酮和总多酚含量与羟自由基清除活性呈负相关，相关系数分别为-0.747和-0.495。结果表明，黄酮类化合物对羟自由基的清除活性起主要作用。
杀青样品(EC50值为0.7950-1.7937mg/mL)对亚硝酸盐的清除能力强于SBL样品(EC50值为3.0656mg/mL)。在杀青样品中，MWF样品对亚硝酸盐的清除活性最强，其次是SF、PF、BF、IRF和HF。总多酚和总黄酮含量与清除亚硝酸盐活性呈负相关，相关系数分别为-0.758和-0.658。结果表明，可溶性多酚对亚硝酸盐的清除活性起主要作用。
IRF(153.38μmolAC/g dw)的还原能力最高，其次是MWF(133.83μmolAC/g dw)、SF(120.39μmolAC/g dw)、SBL(106.06μmolAC/g dw)、PF(102.66μmolAC/g dw)、HF(97.14μmolAC/g dw)和BF(90.55μmolAC/g dw)。还原力与总黄酮(r＝0.998，P≤0.01，数据未显示)和总多酚(r＝0.536，P≤0.05，数据未显示)的含量呈正相关。结果表明，总黄酮对还原力起主要作用。
表2沙棘叶茶抗氧化活性测定结果
数值为平均值±标准差。同一列中不同字母的平均数差异显著(P≤0.05)。SBL:沙棘叶；PF:锅烧杀青；SF:蒸气杀青；BF:沸水杀青；HF:热风杀青；MWF:微波杀青；IRF:红外杀青。
1.1.2.3沙棘叶茶α-糖苷酶抑制活性和胰脂肪酶抑制活性测定结果
沙棘叶茶的α-葡萄糖苷酶抑制活性如表3所示。IRF样品的IC50值(0.0772mg/mL)最低，具有最强的α-葡萄糖苷酶抑制活性。α-葡萄糖苷酶抑制活性依次为PF(IC50值为0.1127mg/mL)、SF(IC50值为0.1651mg/mL)、HF(IC50值为0.1957mg/mL)、BF(IC50值为0.2444mg/mL)、SBL(IC50值为0.3726mg/mL)和MWF(IC50值为0.5776mg/mL)。
采用两种方法对沙棘叶茶的脂肪酶抑制活性进行了评价，一种是样品中总黄酮(IRTF)含量相同，另一种是样品中可溶性总多酚(IRTP)含量相同，结果见表3。大多数杀青样品的IRTF(62.02-92.15％)强于SBL样品(59.38％)。在杀青样品中，PF的IRTF最高，其次是SF(83.72％)、HF(75.53％)、BF(73.88％)、MWF(62.02％)和IRF(56.27％)，IRTF最低。IRTF与异鼠李素含量呈正相关(r＝0.928，P≤0.05，数据未显示)。杀青样品的IRTP(55.62-75.66％)强于SBL样品(55.06％)。杀青样品中，MWF的IRTP最高，其次为PF(71.56％)、HF(71.06％)、SF(69.50％)、BF(63.30％)和IRF。IRTP与异鼠李素含量呈显著正相关(r＝0.606，P≤0.05，数据未显示)。结果表明，异鼠李素对脂肪酶有抑制作用。
表3沙棘叶茶α-糖苷酶抑制活性和胰脂肪酶抑制活性测定结果
数值为平均值±标准差。同一列中不同字母的平均数差异显著(P≤0.05)。SBL:沙棘叶；PF:锅烧杀青；SF:蒸汽杀青；BF:沸水杀青；HF:热风杀青；MWF:微波杀青；IRF:红外杀青。
1.1.3结论
不同杀青沙棘叶茶的主要成分、α-葡萄糖苷酶抑制活性、脂肪酶抑制活性和抗氧化活性存在显著差异。在杀青方法中，红外杀青法和微波杀青法是取代传统方法的最佳方法。沸水杀青法导致主要成分和功能活性显著降低。结合PCA分析，锅炒杀青法和热风杀青法得分较低，主要成分抗氧化活性含量较低。从组分保留率和生物活性的角度来看，蒸汽杀青法是继微波杀青法和红外杀青法之后的最佳杀青方法之一。与IRF相比，MWF具有时间短、效率高等优点。MWF是沙棘叶茶的适宜杀青方法。
1.2沙棘叶茶干燥工艺的确定
1.2.1实验方法
1.2.1.1沙棘叶茶的制备
将沙棘鲜叶(采自岢岚县神堂坪乡人工种植)洗净，沥水，经蒸汽杀青后，分为两组，一组进行揉捻，另一组不揉捻。再将每一组叶子分为9小组，分别进行热风干燥(45℃、60℃、75℃)、真空干燥(45℃、60℃、75℃)、微波干燥(P-20、P-40、P-60)。得到共18种沙棘叶茶样品。
1.2.1.2沙棘叶茶提取物的制备
沙棘叶茶提取物的制备同1.1.1.2。
1.2.1.3沙棘叶茶中水分测定
沙棘叶茶中水分测定同1.1.1.3。
1.2.1.4沙棘叶茶总多酚含量测定
沙棘叶茶总多酚含量测定同1.1.1.5。
1.2.1.5沙棘叶茶总黄酮含量测定
沙棘叶茶总多酚含量测定同1.1.1.6。
1.2.1.6沙棘叶茶提取液中异鼠李素含量测定
沙棘叶茶提取液中异鼠李素含量测定同1.1.1.7。
1.2.1.7沙棘叶茶抗氧化活性测定
1.2.1.7.1沙棘叶茶还原力测定
沙棘叶茶还原力测定同1.1.1.8.1。
1.2.1.7.2沙棘叶茶清除DPPH自由基测定
沙棘叶茶清除DPPH自由基测定同1.1.1.8.2。
1.2.1.7.3沙棘叶茶清除羟基自由基测定
沙棘叶茶清除羟基自由基测定同1.1.1.8.3。
1.2.1.7.4沙棘叶茶亚硝酸根清除能力测定
沙棘叶茶亚硝酸根清除能力测定同1.1.1.8.4。
1.2.2实验结果
1.2.2.1沙棘叶茶中水分含量
图1显示，沙棘叶茶的含水量在5.29％-6.53％之间，四种干燥中，微波干燥(P-20)、真空干燥(45℃)和热风干燥(45℃)后的沙棘叶的水分含量高，其他干燥方法无显著性变化。微波干燥随着功率的升高，含水量降低。真空干燥和热风干燥的含水量随着温度的升高而降低。在高温、高功率条件下，水分子运动速度加快，加快了沙棘叶中水分的挥发。由图1可知，经过揉捻和不揉捻的样品的含水量无显著性差异。
1.2.2.2沙棘叶茶中总黄酮含量
图2显示，沙棘叶茶总黄酮含量在71.6mg·g-1-127.6mg·g-1之间，对于真空干燥而言，揉捻的样品溶液的总黄酮含量高于未揉捻的样品溶液的总黄酮含量；微波干燥(P-40)的揉捻后的总黄酮含量高于未揉捻的总黄酮含量，微波干燥(P-20、P-60)的揉捻和未揉捻的总黄酮含量无显著性差异；热风干燥的未揉捻的样品提取液的总黄酮含量多于揉捻后样品提取液的总黄酮含量。温度对总黄酮的影响程度不大比较可知，由图2知，热风干燥(45℃)后的沙棘叶的黄酮的保留较好。
比较揉捻后的样品含量，真空干燥(75℃)和热风干燥(45℃)后的沙棘叶茶中的总黄酮量较高。比较未揉捻的样品含量可知，热风(45℃)的沙棘叶茶中的总黄酮量最高，热风干燥(60℃)次之。
1.2.2.3沙棘叶茶中总多酚含量
由图3显示，沙棘叶茶总多酚含量在155.9mg·g-1-247.3mg·g-1之间，四种干燥中，真空干燥(45℃)的未揉捻的样品溶液的总多酚含量多于揉捻的样品溶液的总多酚含量，真空干燥(60℃、75℃)的揉捻与未揉捻总多酚含量无显著性差异；微波干燥的揉捻后的总多酚含量高于未揉捻的总多酚含量；热风干燥(60℃)的未揉捻的样品提取液的总多酚含量多于揉捻后样品提取液的总多酚含量，热风干燥(45℃、75℃)的揉捻与未揉捻总多酚含量无显著性差异。
比较揉捻后的样品含量，热风干燥(45℃、60℃)和微波干燥(P-40)的总多酚含量最高，由于微波干燥有局部过热的现象，所以总体而言，微波干燥的多酚含量低于热风干燥的含量。比较未揉捻的样品含量可知，热风干燥(60℃)的总多酚含量最高，真空干燥(45℃)次之。
1.2.2.3沙棘叶茶中异鼠李素含量
由图4显示，沙棘叶茶异鼠李素含量在0.35mg·g-1-0.82mg·g-1之间。真空干燥的揉捻高于未揉捻的样品溶液中异鼠李素含量。微波干燥(P-20)的揉捻高于未揉捻的异鼠李素含量，微波干燥(P-40、P-60)揉捻与未揉捻异鼠李素含量无显著性差异；热风干燥(45℃、60℃)的揉捻高于未揉捻的异鼠李素含量，热风干燥(75℃)的揉捻与未揉捻的样品溶液中异鼠李素含量无显著性差异。总体而言，揉捻后的沙棘叶茶对异鼠李素的保留效果较好。
比较揉捻后的样品含量，经热风干燥(45℃、60℃)后的沙棘叶茶，对异鼠李素保留效果最好；而未揉捻的样品中，微波干燥(P-40)样品略高，但其他干燥方法无显著性差异。
1.2.2.4沙棘叶茶中抗氧化活性结果
1.2.2.4.1沙棘叶茶中还原力测定结果
由图5显示，沙棘叶茶提取液还原能力在232.5-365.6mg·g-1之间。在四种干燥中，对于真空干燥、微波干燥而言，揉捻的样品溶液的还原能力比未揉捻的强；热风干燥的揉捻与未揉捻的样品溶液的还原能力无显著性差异。总体而言，揉捻后的沙棘叶茶提取液还原能力较强。
比较揉捻后的样品溶液可知，经微波干燥(P-60)和热风干燥(45℃)后样品溶液的还原能力最强，微波干燥(P-40)次之。比较未揉捻的样品溶液可知，经热风干燥(45℃)后的还原能力最强，微波干燥(P-60)次之。
1.2.2.4.2沙棘叶茶羟基自由基清除率结果
分析图6可知，沙棘叶茶的羟自由基半清除率浓度在4.91×10-3-9.64×10-3mg·mL-1之间。总体来说，揉捻后的沙棘叶茶羟自由基清除能力较好。
比较揉捻后的样品溶液可知，微波干燥(P-40)样品的半清除率浓度最低，故微波干燥(P-40)的样品抗羟基自由基能力最强。未揉捻的样品溶液羟自由基清除能力无显著性差异。
1.2.2.4.3沙棘叶茶亚硝酸根离子的清除能力结果
分析图7可知，沙棘叶茶亚硝酸根离子的半清除率浓度在6.05×10-3-1.29×10-3mg·mL-1之间。真空干燥(45℃、75℃、60℃)的揉捻比未揉捻对亚硝酸根离子的清除能力强；微波干燥(P-20)的揉捻比未揉捻的样品亚硝酸根离子的清除能力强，微波干燥(P-40、P-60)未揉捻与揉捻样品对亚硝酸根离子的清除能力无显著性差异。热风干燥(45℃、75℃)揉捻样品比未揉捻的样品亚硝酸根离子的清除能力强，热风干燥(60℃)的揉捻与未揉捻的样品亚硝酸根离子的清除能力无显著性差异。总体而言，揉捻后的沙棘叶的对亚硝酸根的清除能力较强。
比较经揉捻后的沙棘叶茶，热风干燥(45℃)的样品亚硝酸根离子的清除能力最强；未揉捻的样品溶液的亚硝酸根离子的清除能力无显著性差异。
1.2.2.4.4沙棘叶茶DPPH自由基清除能力结果
分析图8可知，沙棘叶茶DPPH自由基半清除率在9.92×10-4-1.79×10-3mg·mL-1之间。真空干燥(75℃)的未揉捻比揉捻的样品对DPPH自由基清除能力强，真空干燥(45℃、60℃)揉捻比未揉捻对DPPH自由基清除能力强；微波干燥的揉捻与未揉捻对DPPH自由基清除能力无显著性差异；热风干燥(45℃)的未揉捻与揉捻对DPPH自由基清除能力无显著性差异，热风干燥(60℃、75℃)的揉捻比未揉捻的样品对DPPH自由基清除能力强。总体而言，揉捻后的沙棘叶茶对DPPH自由基清除能力强。
比较经揉捻后的沙棘叶，热风干燥(45℃)的样品对DPPH自由基清除能力强；比较未揉捻的样品溶液可知，热风干燥(45℃)对DPPH自由基清除能力强。
1.2.3实验结论
通过对活性成分(黄酮、多酚、异鼠李素)含量及抗氧化性活性的比较研究，发现揉捻后的样品的品质比未揉捻的沙棘叶茶的品质好。经揉捻后的沙棘叶茶，在热风干燥(45℃)条件下进行干燥，总黄酮，总多酚、异鼠李素含量、还原力、清除DPPH自由基和亚硝酸根自由基活性方面显著强于其他样品，且经热风干燥(45℃)后沙棘叶中水分含量很少，便于储存。而微波(P-40)样品抗羟基活性最强，异鼠李素含量和抗亚硝酸根盐在热风45℃干燥样品之后。综上所述，揉捻后的沙棘叶茶经热风干燥(45℃)后品质最佳。考虑到微波干燥的时间远远短于热风干燥的时间，所以揉捻后，微波(P-40)干燥也是可以选择的沙棘叶茶制作工艺。
Claims (5)
1.一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、杀青：将新鲜采集的沙棘叶清洗并沥干水分，然后采用红外或微波方式进行杀青；
B、揉捻：将杀青后的沙棘叶放入揉捻机内揉捻3-6min得沙棘叶茶坯；
C、干燥：将沙棘叶茶坯通过热风干燥或微波干燥得沙棘叶茶样品。
2.根据权利要求1所述的一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法，其特征在于，A中采用微波方式进行杀青，微波干燥功率700W，时间为2min。
3.根据权利要求1所述的一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法，其特征在于，A中采用红外方式进行杀青，采用红外烘箱杀青7min。
4.根据权利要求1所述的一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法，其特征在于，C中热风干燥温度为45℃。
5.根据权利要求1所述的一种具有抑制α糖苷酶活性的沙棘叶茶的制备方法，其特征在于，C中微波干燥功率为P-40。
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