CN117223850A - 一种燕窝制品及其制备方法 - Google Patents

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CN117223850A CN202311252472.1A CN202311252472A CN117223850A CN 117223850 A CN117223850 A CN 117223850A CN 202311252472 A CN202311252472 A CN 202311252472A CN 117223850 A CN117223850 A CN 117223850A
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张广照
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Abstract

本发明涉及到益生菌以及食品加工技术领域，具体为一种燕窝制品及其制备方法。本发明通过对燕窝进行预处理得到纯净燕窝，干净安全，此外还对燕窝进行改性，得到的燕窝提取物燕窝酸、燕窝多肽和燕窝多糖与冰糖、以及植物乳杆菌发酵菌液和枯草芽孢杆菌发酵液先后混合发酵制得冻干粉，缩短了发酵进程，延长保质期，而且还可以最大程度的保留燕窝的营养结构，增加食品风味，提升食品安全。经过改性处理保持了燕窝原有天然的生物营养成分，品质稳定、易吸收、利用率高。在改性步骤中加入的杜仲绿原酸能够提高燕窝酸的活性，且与燕窝酸具有协同作用能够促进人体皮肤、骨骼和肌肉中胶蛋白的合成与分解，同时能够促进代谢，防止衰退的功效，有效改善了贫血症状。

Description

一种燕窝制品及其制备方法
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，涉及一种制品，尤其涉及一种燕窝制品及其制备方法。
背景技术
燕窝又称燕菜、燕根、燕蔬菜，是雨燕目雨燕科的部分雨燕和金丝燕属的几种金丝燕分泌出来的唾液及其绒羽混合粘结所筑成的巢穴。燕窝按筑巢的地方可分为“屋燕”及“洞燕”两种，洞燕因其受矿物质影响导致颜色不同，有白燕、黄燕、红燕之分，而屋燕只有象牙白一种颜色。
现代医学研究发现，燕窝主要成分有水溶性蛋白质、碳水化合物、钙、磷、铁、钠、钾及对促进人体活力起重要作用的氨基酸(赖氨酸、胱氨酸和精氨酸)。近年来更发现，燕窝含有唾液酸(Sialic acid)、促进细胞分裂因子、水解蛋白胜肽等生化活性成分，使燕窝具备抑制流感病毒；促进皮肤细胞增值与组织修补；增加免疫力等效果。因此，燕窝实为养颜美容、滋补强身、营养补充、健康维持之精致补品。
然而，天然的燕窝即毛燕，是直接采摘下来，未经任何处理的燕窝，其中夹杂了许多金丝燕的羽毛和杂物。燕窝必须要经过深加工才能食用，但是，目前市场上销售的燕窝大多数都是没有经过处理的，大多数消费者买到后需要经过复杂的处理才能食用。通常毛燕盏被采摘之后，还要经过蒸细、浸泡、除杂、挑毛、烘干等复杂的加工才能制成成品燕窝。现有的技术主要是简单依靠水冲洗和人工挑毛清洁燕丝，然而这种清洗方法存在燕丝中的许多细微的杂质或细菌清洁不干净，也无法更好得除掉燕窝中存在的亚硝酸盐，因而处理效果往往不理想。
目前，市面上的燕窝品种繁多，其中有一些是经过工艺流程处理过的，有的公开的方案是对燕窝进行清洗然后干燥，经过了初步的加工，但是后续的泡发和熬煮仍然要经过很长世间的处理。还有的是进行浸泡、挑毛、撕条、沥水、熬煮、封装冰冻等处理过程。但是，这些现有纯净燕窝的具体处理过程和加工步骤过于简单，所以产品处理纯净度不高，直接影响燕窝的功效，而且，用于制作成食品后仍存杂味，口感也差。
发明内容
针对以上问题，本发明通过对燕窝进行预处理得到纯净燕窝，干净安全，此外还对燕窝进行改性，得到的燕窝提取物燕窝酸、燕窝多肽和燕窝多糖与冰糖、以及植物乳杆菌发酵菌液和枯草芽孢杆菌发酵液先后混合发酵制得冻干粉，对燕窝改性后保持了燕窝原有天然的生物营养成分，活性、风味提高、易吸收、利用率高、保质期长。本发明具体操作过程如下：
S1、燕窝的预处理：将燕窝置于燕窝重量5～15倍的水中，在温度为20～30℃下泡发10～20min，取出沥水，得到泡发后的燕窝，泡发后的燕窝含有燕窝质量4～10倍的水分；将泡发后的燕窝置于温度为20～30℃的水中超声清洗2～4次，超声功率为150～350W，超声频率为20～40kHz，时间为5～15min，目的是去除其中的羽毛、灰尘及其他杂质，取出沥水，得到清洗后的燕窝；将清洗后的燕窝置于由下述方法制备的处理液中：水20～30ml、大蒜提取液2～3ml、90wt％L-苹果酸和10wt％迷迭香酸组成的抗氧剂0.1～0.2g，在温度为20～30℃下浸渍1～3h，取出沥干，得到浸渍后的燕窝；将浸渍后的燕窝在真空度为100～150Pa、温度为40～60℃下真空干燥20～30h，得到干燥燕窝；将干燥燕窝粉碎至60～160目，采用巴士杀菌，在40～45℃下杀菌1～2h，得纯净燕窝；其中所述大蒜提取液的制备方法为：将大蒜清洗干净，粉碎过60目筛，加入大蒜重量10倍的水，在温度为40℃下以300r/min的转速搅拌30min，过300目筛，得到大蒜提取液；
S2、制备燕窝酸浓缩液：取1.5～2.5g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末配制成3～6mg/mL的水溶液，与20～30ml浓度为2mmol/L的NaHCO3、10～20ml浓度为6mmol/L的TCEP和10～20ml浓度为1mmol/L的海藻糖三种原料制得的处理液混合后于65～75℃水浴锅中，以250～350r/min的转速搅拌3～6h，得混合液A，随后将所得混合液A冷却至24～28℃，真空冷冻干燥得到固体甲，将1～2g固体甲与25～45ml摩尔浓度为0.03～0.07mol/L的杜仲绿原酸混合均匀，得到混合液B；将混合液B于90～100℃水浴锅中，加热15～25min，得到提取液，将提取液冷却至22～26℃，以4000～6000r/min的转速离心8～16min，收集上清液，将上清液进行抽滤，抽滤膜含有两层超滤膜和两层纳滤膜，其中超滤膜一层为10000Da；二层30000Da，纳滤膜一层为500Da；二层为200Da；抽滤时控制泵压0.1～0.2Mpa，抽滤完成后收集滤液，在滤液中加入5％醋酸调pH值至4～5，即得燕窝酸浓缩液；该步骤中加入的杜仲绿原酸能够提高燕窝酸的活性，并且能够保护燕窝酸不被氧化，而且与燕窝酸具有协同作用能够促进人体皮肤、骨骼和肌肉中胶蛋白的合成与分解，同时能够促进代谢，防止衰退的功效，有效改善了贫血症状；
S3、提取燕窝多肽和燕窝多糖：①再取1.5～2.5g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末按照质量比1:20～40的料液比加水浸泡，恒温水浴处理3～5h，得到燕窝匀浆，向燕窝匀浆中加入1～3％的所述燕窝粉末的蛋白酶酶解处理3～5h，沸水浴灭酶，得到燕窝酶解液，向燕窝酶解液加入硫酸铵沉淀，冷冻离心，分别收集上清液和沉淀；②将得到的沉淀加水复溶，进行反渗透脱盐处理后，进行二次酶解和酸解处理，调节溶液的pH至中性，冷冻离心，膜过滤，收集滤液，冷冻干燥，即得燕窝多肽；③将得到的上清液浓缩后，复溶，过DEAE-52纤维素柱子，采用梯度洗脱，分别收集洗脱峰和透过峰，再经SephadexG-100进行脱盐和定向收集燕窝多糖的组分，旋蒸浓缩后进行醇沉，冷冻干燥后，即得燕窝多糖；
S4、枯草芽孢杆菌的活化：菌种：Bacillus subtilis(保藏编号CGMCC(B)63501),由北京三药科技有限公司提供，将Bacillus subtilis接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于烘箱中35～37℃进行培养，培养至形成微黄色菌落；
S5、植物乳杆菌的活化：菌种：Lactobacillus plantarum(保藏编号ATCC14917)，由上海沪峥生物科技有限公司提供，将Lactobacillus plantarum接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于烘箱中35～37℃进行培养，培养至形成黄色菌落；
S6、分别制备植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌发酵菌液：将步骤S4中活化的枯草芽孢杆菌和步骤S5中活化的植物乳杆菌分别转接于500～1000ml牛肉膏蛋白胨液体培养基的摇瓶中发酵6～10h即可得到接种量在1.5×108～3.5×109cfu·ml-1的植物乳杆菌发酵菌液以及接种量在2.0×108～3.5×109cfu·ml-1枯草芽孢杆菌发酵菌液；
S7、发酵燕窝酸、燕窝多肽及燕窝多糖：先将步骤S2制备的燕窝酸浓缩液、步骤S3制备的燕窝多肽及燕窝多糖和1.5～2.0g步骤S6制备的枯草芽孢杆菌发酵菌液混合后，在30～35℃下发酵12～24h，再置于1.5～2.0g步骤S6制备的植物乳杆菌发酵液在33～37℃下发酵12～24h后，取发酵液，加入40～50ml水和0.5～2.0g冰糖在85～100℃温度下炖煮10～30min，得到炖煮燕窝；
S8、制备冻干粉：将步骤S7得到炖煮燕窝的进行分段冻融处理后，再进行冷冻干燥，使用砂磨机研磨后得到炖煮燕窝冻干粉；所述分段式冻融条件包括：在-8～-20℃下冷冻3～5h后，于40～55℃下迅速融化，如此反复处理1～3次；所述冷冻干燥条件包括：预冻温度为-6～-80℃，时间为24～72h；冷冻干燥冷肼温度为-30～-50℃，真空度为80～180Pa，时间为24～72h；所述研磨条件包括：氧化锆珠规格为0.2～1.0mm，氧化锆珠加入量为砂磨机内腔体积的60～70％，转速设置为1000～3000r/min，研磨时间为0.5～2.5h。
优选地：所述步骤S1中所选燕窝以金丝燕窝为主，将燕窝置于燕窝重量10倍的水中，在温度为25℃下泡发15min，取出沥水，得到泡发后的燕窝，泡发后的燕窝含有燕窝质量6倍的水分，将泡发后的燕窝置于温度为25℃的水中超声清洗3次，超声功率为200W，超声频率为30kHz，时间为10min。
优选地：所述步骤S1处理液的制备方法为：水25ml、大蒜提取液2.5ml、90wt％L-苹果酸和10wt％迷迭香酸组成的抗氧剂0.15g。
优选地：所述步骤S1将清洗后的燕窝置于处理液中在温度为25℃下浸渍2h，取出沥干，得到浸渍后的燕窝；将浸渍后的燕窝在真空度为100Pa、温度为50℃下真空干燥25h，得到干燥燕窝；将干燥燕窝粉碎至100目，采用巴士杀菌，在40℃下杀菌1h，得到纯净燕窝。
优选地：所述步骤S2中取2.0g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末配制成5mg/mL的水溶液，与25ml浓度为2mmol/L的NaHCO3、15ml浓度为6mmol/L的TCEP和15ml浓度为1mmol/L的海藻糖三种原料制得的处理液混合后于70℃水浴中以300r/min的转速搅拌4h，得混合液A，随后将所得混合液A冷却至26℃，真空冷冻干燥得到固体甲，将1.5g固体甲与35ml摩尔浓度为0.05mol/L的杜仲绿原酸混合均匀，得到混合液B；将混合液B于95℃水浴锅中，加热20min，得到提取液，将提取液冷却至24℃，以5000r/min的转速离心12min，收集上清液。
优选地：所述步骤S3中再取2.0g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末按照质量比1:30的料液比加水浸泡，恒温水浴处理4h，得到燕窝匀浆，向燕窝匀浆中加入2％的所述燕窝粉末的蛋白酶酶解处理4h，沸水浴灭酶，得到燕窝酶解液。
优选地：所述步骤S4与S5所用的固体培养基配制材料为牛肉膏：3.0g，蛋白胨：10.0g，NaCl：5.0g，琼脂：15～25g，水：1000ml，同时调节pH为7.4～7.6，均置于烘箱中35℃进行培养。
优选地：所述步骤S6所用液体培养基材料为若配置1000mL的液体培养基，则取牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g加蒸馏水配置，用5mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至7.2～7.4。
优选地：所述步骤S7中先将步骤S2制备的燕窝酸浓缩液、步骤S3制备的燕窝多肽及燕窝多糖和2.0g步骤S6制备的枯草芽孢杆菌发酵菌液混合后，在32℃下发酵12h，再置于2.0g步骤S6制备的植物乳杆菌发酵液在37℃下发酵12h后，取发酵液，加入50ml水和1.0g冰糖在100℃温度下炖煮30min，得到炖煮燕窝。
优选地：所述步骤S8中分段式冻融条件包括：在-15℃下冷冻4h后，于50℃下迅速融化，如此反复处理3次；所述冷冻干燥条件包括：预冻温度为-43℃，时间为48h；冷冻干燥冷肼温度为-40℃，真空度为130Pa，时间为48h；所述研磨条件包括：氧化锆珠规格为0.6mm，氧化锆珠加入量为砂磨机内腔体积的65％，转速设置为2000r/min，研磨时间为1.5h。
由于采用上述技术方案，本发明取得的技术进步是：
1.本发明利用一定频率及功率的超声波，使其产生一定的空化反应作用于燕窝，同时结合巴氏杀菌达到微生物控制指标，使燕窝里的营养物质保留率较高，便于对燕窝进行改性处理。
2.本发明制备的燕窝制品，使用的燕窝经过处理有效的去掉了亚硝酸、细菌，充分保留了燕窝的营养价值，保证了燕窝食用的安全性。且经过改性处理保持了燕窝原有天然的生物营养成分，品质稳定、易吸收、利用率高。
3.本发明含燕窝的制品冻干粉使用特定的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌巧妙进行短期分段发酵，先用枯草芽孢杆菌进行有氧发酵，再用植物乳杆菌进行厌氧发酵，不但可以协同缩短发酵进程，延长保质期，而且还可以最大程度的保留燕窝的营养结构，增加食品风味，提升食品安全。
4.本发明在改性步骤中加入的杜仲绿原酸能够提高燕窝酸的活性，且与燕窝酸具有协同作用能够促进人体皮肤、骨骼和肌肉中胶蛋白的合成与分解，同时能够促进代谢，防止衰退的功效，有效改善了贫血症状。
5.本发明使用分段冻融处理制得的冻干粉，可以使保湿功效更加显著，还可以促进愈合修复功效。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例1与对比例1-9的营养结构保留对比图。
图2是本发明实施例1植物乳杆菌的SEM图。
图3是本发明实施例1枯草芽孢杆菌的SEM图。
图4是本发明实施例3和对比例11的保湿率对比图。
图5是本发明实施例3和对比例11的划痕修复率对比图。
具体实施方式
为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清晰，下面结合具体案例对本发明进行进一步的描述。此外，本发明的保护范围并不仅限于此，且在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作出改动或修改，但这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例中所述的燕窝制品所需的原料包括：纯净燕窝、杜仲绿原酸、冰糖、植物乳杆菌、枯草芽孢杆菌。
实施例1
本实施例证明在制备冻干粉过程中所选用的菌种具有较好的效果，将其替换为其它菌种在相同的发酵条件下并没有达到本实施例所选用菌种的效果。
S1、燕窝的预处理：将燕窝置于燕窝重量5倍的水中，在温度为20℃下泡发10min，取出沥水，得到泡发后的燕窝，泡发后的燕窝含有燕窝质量4倍的水分；将泡发后的燕窝置于温度为20℃的水中超声清洗2次，超声功率为150W，超声频率为20kHz，时间为5min，目的是去除其中的羽毛、灰尘及其他杂质，取出沥水，得到清洗后的燕窝；将清洗后的燕窝置于由下述方法制备的处理液中：水20ml、大蒜提取液2ml、90wt％L-苹果酸和10wt％迷迭香酸组成的抗氧剂0.1g，在温度为20℃下浸渍1h，取出沥干，得到浸渍后的燕窝；将浸渍后的燕窝在真空度为100Pa、温度为40℃下真空干燥20h，得到干燥燕窝；将干燥燕窝粉碎至60目，采用巴士杀菌，在40℃下杀菌1h，得纯净燕窝；其中所述大蒜提取液的制备方法为：将大蒜清洗干净，粉碎过60目筛，加入大蒜重量10倍的水，在温度为40℃下以300r/min的转速搅拌30min，过300目筛，得到大蒜提取液；
S2、制备燕窝酸浓缩液：取1.5g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末配制成3mg/mL的水溶液，与20ml浓度为2mmol/L的NaHCO3、10ml浓度为6mmol/L的TCEP和10ml浓度为1mmol/L的海藻糖三种原料制得的处理液混合后于65℃水浴锅中，以250r/min的转速搅拌3h，得混合液A，随后将所得混合液A冷却至24℃，真空冷冻干燥得到固体甲，将1g固体甲与25ml摩尔浓度为0.03mol/L的杜仲绿原酸混合均匀，得到混合液B；将混合液B于90℃水浴锅中，加热15min，得到提取液，将提取液冷却至22℃，以4000r/min的转速离心8min，收集上清液，将上清液进行抽滤，抽滤膜含有两层超滤膜和两层纳滤膜，其中超滤膜一层为10000Da；二层30000Da，纳滤膜一层为500Da；二层为200Da；抽滤时控制泵压0.1～0.2Mpa，抽滤完成后收集滤液，在滤液中加入5％醋酸调pH值至4～5，即得燕窝酸浓缩液；该步骤中加入的杜仲绿原酸能够提高燕窝酸的活性，并且能够保护燕窝酸不被氧化，而且与燕窝酸具有协同作用能够促进人体皮肤、骨骼和肌肉中胶蛋白的合成与分解，同时能够促进代谢，防止衰退的功效，有效改善了贫血症状；
S3、提取燕窝多肽和燕窝多糖：①再取1.5g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末按照质量比1:20的料液比加水浸泡，恒温水浴处理3h，得到燕窝匀浆，向燕窝匀浆中加入1％的所述燕窝粉末的蛋白酶酶解处理3h，沸水浴灭酶，得到燕窝酶解液，向燕窝酶解液加入硫酸铵沉淀，冷冻离心，分别收集上清液和沉淀；②将得到的沉淀加水复溶，进行反渗透脱盐处理后，进行二次酶解和酸解处理，调节溶液的pH至中性，冷冻离心，膜过滤，收集滤液，冷冻干燥，即得燕窝多肽；③将得到的上清液浓缩后，复溶，过DEAE-52纤维素柱子，采用梯度洗脱，分别收集洗脱峰和透过峰，再经SephadexG-100进行脱盐和定向收集燕窝多糖的组分，旋蒸浓缩后进行醇沉，冷冻干燥后，即得燕窝多糖；
S4、枯草芽孢杆菌的活化：菌种：Bacillus subtilis(保藏编号CGMCC(B)63501),由北京三药科技有限公司提供，将Bacillus subtilis接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于烘箱中35℃进行培养，培养至形成微黄色菌落；
S5、植物乳杆菌的活化：菌种：Lactobacillus plantarum(保藏编号ATCC14917)，由上海沪峥生物科技有限公司提供，将Lactobacillus plantarum接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于烘箱中35℃进行培养，培养至形成黄色菌落；
S6、分别制备植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌发酵菌液：将步骤S4中活化的枯草芽孢杆菌和步骤S5中活化的植物乳杆菌分别转接于500ml牛肉膏蛋白胨液体培养基的摇瓶中发酵6h即可得到接种量在1.5×108cfu·ml-1的植物乳杆菌发酵菌液以及接种量在2.0×108cfu·ml-1枯草芽孢杆菌发酵菌液；
S7、发酵燕窝酸、燕窝多肽及燕窝多糖：先将步骤S2制备的燕窝酸浓缩液、步骤S3制备的燕窝多肽及燕窝多糖和1.5g步骤S6制备的枯草芽孢杆菌发酵菌液混合后，在30℃下发酵12h，再置于1.5g步骤S6制备的植物乳杆菌发酵液在33℃下发酵12h后，取发酵液，加入40ml水和0.5g冰糖在85℃温度下炖煮10min，得到炖煮燕窝；
S8、制备冻干粉：将步骤S7得到炖煮燕窝的进行分段冻融处理后，再进行冷冻干燥，使用砂磨机研磨后得到炖煮燕窝冻干粉；所述分段式冻融条件包括：在-8℃下冷冻3h后，于40℃下迅速融化，如此反复处理3次；所述冷冻干燥条件包括：预冻温度为-6℃，时间为24h；冷冻干燥冷肼温度为-30℃，真空度为80Pa，时间为24h；所述研磨条件包括：氧化锆珠规格为0.2mm，氧化锆珠加入量为砂磨机内腔体积的60％，转速设置为1000r/min，研磨时间为0.5h。
对比例1：除步骤S8中的枯草芽孢杆菌替换为双歧杆菌ATCC55813由上海瑞生科技有限公司提供外，其余步骤均与实施例1相同。
对比例2：除步骤S8中的枯草芽孢杆菌替换为干酪乳杆菌ATCC393由深圳子科生物科技有限公司提供外，其余步骤均与实施例1相同。
以下对比例的设置证明实施例1在制备冻干粉过程中使用的菌种只有特定的菌株即选用的菌株才具有较好的发酵效果，并不是任意菌株均有效果。
对比例3：除步骤S4中的植物乳杆菌换成植物乳杆菌ACCC11095由上海沪峥生物科技有限公司提供，其余步骤均与实施例1相同。
对比例4：除步骤S4中的植物乳杆菌换成植物乳杆菌ATCC8014由上海北诺生物科技有限公司提供，其余步骤均与实施例1相同。
对比例5：除步骤S5中的枯草芽孢杆菌换成枯草芽孢杆菌ACCC11060由瑞楚生物科技有限公司提供，其余步骤均与实施例1相同。
对比例6：除步骤S5中的枯草芽孢杆菌换成枯草芽孢杆菌ATCC21778由瑞楚生物科技有限公司提供，其余步骤均与实施例2相同。
以下对比例的设置证明实施例1在制备冻干粉过程中使用的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌具有协同作用。
对比例7：除步骤S11中只使用枯草芽孢杆菌外，其余步骤均与实施例1相同。
对比例8：除步骤S11中只使用植物乳杆菌外，其余步骤均与实施例1相同。
对比例9：不使用任何菌种发酵，直接将燕窝进行炖煮，其余步骤均与实施例1相同。
取实施例1，对比例1-9制备的燕窝冻干粉制品，分别测定各营养成分含量见下表1。
表1
从表1中可以看出，实施例1制备的燕窝比对比例1-6制备的燕窝的营养成分含量多，说明本发明加入所选用的两种菌株具有协同作用，发酵后可以最大程度的保留燕窝的营养结构。其中对比例1-2中将枯草芽孢杆菌(CGMCC(B)63501)替换为双歧杆菌(ATCC55813)或干酪乳杆菌(ATCC393)导致营养成分流失的原因可能是这两种菌均为厌氧菌；对比例3-6中将枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌替换为不同菌株后营养物质较少的原因可能是植物乳杆菌(ATCC14917)和枯草芽孢杆菌(CGMCC(B)63501)具有特殊的生理活性，其他植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌并不能产生协同作用，甚至还会产生竞争；对比例7-9只使用枯草芽孢杆菌(CGMCC(B)63501)或者只使用植物乳杆菌(ATCC14917)进行发酵，可能因为枯草芽孢杆菌(CGMCC(B)63501)属于好氧菌对于发酵液中无氧处发酵的不彻底，而植物乳杆菌(ATCC14917)属于厌氧或兼氧菌，也会因为发酵不充分，所以导致营养物质较少，而不进行发酵营养物质流失更加严重。
图1是本发明实施例1与对比例1-9的营养结构保留对比图：由条形图可以形象的看出采用实施例的方案营养结构保留比对比例好，说明所选用的两种菌株发酵改性后可以协同保留营养物质。
图2是本发明实施例1植物乳杆菌的SEM图，图3是本发明实施例1枯草芽孢杆菌的SEM图：植物乳杆菌形状为原端直杆，枯草芽孢杆菌为椭球体，均可以增加接触面积，有利于发酵更加的充分。
实施例2
本实施例证明在改性步骤中加入的杜仲绿原酸能够提高燕窝酸的活性，与燕窝酸具有协同作用能够促进人体皮肤、骨骼和肌肉中胶蛋白的合成与分解，同时能够促进代谢，防止衰退的功效，有效改善了贫血症状。
S1、燕窝的预处理：将燕窝置于燕窝重量10倍的水中，在温度为25℃下泡发15min，取出沥水，得到泡发后的燕窝，泡发后的燕窝含有燕窝质量7倍的水分；将泡发后的燕窝置于温度为25℃的水中超声清洗3次，超声功率为200W，超声频率为30kHz，时间为10min，目的是去除其中的羽毛、灰尘及其他杂质，取出沥水，得到清洗后的燕窝；将清洗后的燕窝置于由下述方法制备的处理液中：水25ml、大蒜提取液2.5ml、90wt％L-苹果酸和10wt％迷迭香酸组成的抗氧剂0.15g，在温度为25℃下浸渍2h，取出沥干，得到浸渍后的燕窝；将浸渍后的燕窝在真空度为120Pa、温度为50℃下真空干燥25h，得到干燥燕窝；将干燥燕窝粉碎至100目，采用巴士杀菌，在43℃下杀菌1.5h，得纯净燕窝；其中所述大蒜提取液的制备方法为：将大蒜清洗干净，粉碎过60目筛，加入大蒜重量10倍的水，在温度为40℃下以300r/min的转速搅拌30min，过300目筛，得到大蒜提取液；
S2、制备燕窝酸浓缩液：取2.0g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末配制成4mg/mL的水溶液，与25ml浓度为2mmol/L的NaHCO3、15ml浓度为6mmol/L的TCEP和15ml浓度为1mmol/L的海藻糖三种原料制得的处理液混合后于70℃水浴锅中，以300r/min的转速搅拌3～6h，得混合液A，随后将所得混合液A冷却至26℃，真空冷冻干燥得到固体甲，将1.5g固体甲与35ml摩尔浓度为0.05mol/L的杜仲绿原酸混合均匀，得到混合液B；将混合液B于95℃水浴锅中，加热20min，得到提取液，将提取液冷却至24℃，以5000r/min的转速离心12min，收集上清液，将上清液进行抽滤，抽滤膜含有两层超滤膜和两层纳滤膜，其中超滤膜一层为10000Da；二层30000Da，纳滤膜一层为500Da；二层为200Da；抽滤时控制泵压0.1～0.2Mpa，抽滤完成后收集滤液，在滤液中加入5％醋酸调pH值至4～5，即得燕窝酸浓缩液；该步骤中加入的杜仲绿原酸能够提高燕窝酸的活性，并且能够保护燕窝酸不被氧化，而且与燕窝酸具有协同作用能够促进人体皮肤、骨骼和肌肉中胶蛋白的合成与分解，同时能够促进代谢，防止衰退的功效，有效改善了贫血症状；
S3、提取燕窝多肽和燕窝多糖：①再取2.0g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末按照质量比1:30的料液比加水浸泡，恒温水浴处理4h，得到燕窝匀浆，向燕窝匀浆中加入2％的所述燕窝粉末的蛋白酶酶解处理4h，沸水浴灭酶，得到燕窝酶解液，向燕窝酶解液加入硫酸铵沉淀，冷冻离心，分别收集上清液和沉淀；②将得到的沉淀加水复溶，进行反渗透脱盐处理后，进行二次酶解和酸解处理，调节溶液的pH至中性，冷冻离心，膜过滤，收集滤液，冷冻干燥，即得燕窝多肽；③将得到的上清液浓缩后，复溶，过DEAE-52纤维素柱子，采用梯度洗脱，分别收集洗脱峰和透过峰，再经SephadexG-100进行脱盐和定向收集燕窝多糖的组分，旋蒸浓缩后进行醇沉，冷冻干燥后，即得燕窝多糖；
S4、枯草芽孢杆菌的活化：菌种：Bacillus subtilis(保藏编号CGMCC(B)63501),由北京三药科技有限公司提供，将Bacillus subtilis接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于烘箱中37℃进行培养，培养至形成微黄色菌落；
S5、植物乳杆菌的活化：菌种：Lactobacillus plantarum(保藏编号ATCC14917)，由上海沪峥生物科技有限公司提供，将Lactobacillus plantarum接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于烘箱中35℃进行培养，培养至形成黄色菌落；
S6、分别制备植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌发酵菌液：将步骤S4中活化的枯草芽孢杆菌和步骤S5中活化的植物乳杆菌分别转接于1000ml牛肉膏蛋白胨液体培养基的摇瓶中发酵10h即可得到接种量在3.5×109cfu·ml-1的植物乳杆菌发酵菌液以及接种量在3.3×109cfu·ml-1枯草芽孢杆菌发酵菌液；
S7、发酵燕窝酸、燕窝多肽及燕窝多糖：先将步骤S2制备的燕窝酸浓缩液、步骤S3制备的燕窝多肽及燕窝多糖和1.8g步骤S6制备的枯草芽孢杆菌发酵菌液混合后，在32℃下发酵18h，再置于1.7g步骤S6制备的植物乳杆菌发酵液在35℃下发酵18h后，取发酵液，加入45ml水和1.0g冰糖在90℃温度下炖煮20min，得到炖煮燕窝；
S8、制备冻干粉：将步骤S7得到炖煮燕窝的进行分段冻融处理后，再进行冷冻干燥，使用砂磨机研磨后得到炖煮燕窝冻干粉；所述分段式冻融条件包括：在-14℃下冷冻4h后，于45℃下迅速融化，如此反复处理3次；所述冷冻干燥条件包括：预冻温度为-43℃，时间为36h；冷冻干燥冷肼温度为-40℃，真空度为130Pa，时间为36h；所述研磨条件包括：氧化锆珠规格为0.6mm，氧化锆珠加入量为砂磨机内腔体积的65％，转速设置为2000r/min，研磨时间为1.5h。
对比例10：在提取燕窝酸步骤S2中不加入杜仲绿原酸，其余步骤同实施例2。
通过动物实验测定实施例2和对比例10所制得的产品对代谢活动的影响：选取两条年龄相同，体重相近，生理状态相似的草鱼，在外界条件相同的情况下分别服用相同剂量的产品1(实施例2)和产品2(对比例10)，并定时收集鱼体粪便，一段时间后鱼体有一定的体质量增长，采用氧弹量热仪测定摄食能、粪能和生长能，从氮收支间接计算排泄能，通过公式R＝C-F-G-U，求得代谢能，结果如下表2所示：
表2
项目 实施例2 对比例10
R(％) 30±5 20±6
由测试结果可知，实施例2代谢能力强于对比例10，由此证明杜仲绿原酸与燕窝酸具有协同作用，可能是通过促进胶蛋白的合成与分解来促进代谢的，同时有防止衰退的功效，有效改善了贫血症状。
实施例3
本实施例证明使用分段冻融处理制得的冻干粉，可以使保湿功效更加显著，还可以促进愈合修复功效。
S1、燕窝的预处理：将燕窝置于燕窝重量15倍的水中，在温度为30℃下泡发20min，取出沥水，得到泡发后的燕窝，泡发后的燕窝含有燕窝质量10倍的水分；将泡发后的燕窝置于温度为30℃的水中超声清洗4次，超声功率为350W，超声频率为40kHz，时间为15min，目的是去除其中的羽毛、灰尘及其他杂质，取出沥水，得到清洗后的燕窝；将清洗后的燕窝置于由下述方法制备的处理液中：水30ml、大蒜提取液3ml、90wt％L-苹果酸和10wt％迷迭香酸组成的抗氧剂0.2g，在温度为30℃下浸渍3h，取出沥干，得到浸渍后的燕窝；将浸渍后的燕窝在真空度为150Pa、温度为60℃下真空干燥30h，得到干燥燕窝；将干燥燕窝粉碎至160目，采用巴士杀菌，在45℃下杀菌2h，得纯净燕窝；其中所述大蒜提取液的制备方法为：将大蒜清洗干净，粉碎过60目筛，加入大蒜重量10倍的水，在温度为40℃下以300r/min的转速搅拌30min，过300目筛，得到大蒜提取液；
S2、制备燕窝酸浓缩液：取2.5g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末配制成6mg/mL的水溶液，与30ml浓度为2mmol/L的NaHCO3、20ml浓度为6mmol/L的TCEP和20ml浓度为1mmol/L的海藻糖三种原料制得的处理液混合后于65～75℃水浴锅中，以350r/min的转速搅拌6h，得混合液A，随后将所得混合液A冷却至28℃，真空冷冻干燥得到固体甲，将2g固体甲与45ml摩尔浓度为0.07mol/L的杜仲绿原酸混合均匀，得到混合液B；将混合液B于100℃水浴锅中，加热25min，得到提取液，将提取液冷却至26℃，以6000r/min的转速离心16min，收集上清液，将上清液进行抽滤，抽滤膜含有两层超滤膜和两层纳滤膜，其中超滤膜一层为10000Da；二层30000Da，纳滤膜一层为500Da；二层为200Da；抽滤时控制泵压0.1～0.2Mpa，抽滤完成后收集滤液，在滤液中加入5％醋酸调pH值至4～5，即得燕窝酸浓缩液；该步骤中加入的杜仲绿原酸能够提高燕窝酸的活性，并且能够保护燕窝酸不被氧化，而且与燕窝酸具有协同作用能够促进人体皮肤、骨骼和肌肉中胶蛋白的合成与分解，同时能够促进代谢，防止衰退的功效，有效改善了贫血症状；
S3、提取燕窝多肽和燕窝多糖：①再取2.5g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末按照质量比1:40的料液比加水浸泡，恒温水浴处理5h，得到燕窝匀浆，向燕窝匀浆中加入3％的所述燕窝粉末的蛋白酶酶解处理5h，沸水浴灭酶，得到燕窝酶解液，向燕窝酶解液加入硫酸铵沉淀，冷冻离心，分别收集上清液和沉淀；②将得到的沉淀加水复溶，进行反渗透脱盐处理后，进行二次酶解和酸解处理，调节溶液的pH至中性，冷冻离心，膜过滤，收集滤液，冷冻干燥，即得燕窝多肽；③将得到的上清液浓缩后，复溶，过DEAE-52纤维素柱子，采用梯度洗脱，分别收集洗脱峰和透过峰，再经SephadexG-100进行脱盐和定向收集燕窝多糖的组分，旋蒸浓缩后进行醇沉，冷冻干燥后，即得燕窝多糖；
S4、枯草芽孢杆菌的活化：菌种：Bacillus subtilis(保藏编号CGMCC(B)63501),由北京三药科技有限公司提供，将Bacillus subtilis接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于烘箱中35℃进行培养，培养至形成微黄色菌落；
S5、植物乳杆菌的活化：菌种：Lactobacillus plantarum(保藏编号ATCC14917)，由上海沪峥生物科技有限公司提供，将Lactobacillus plantarum接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于烘箱中37℃进行培养，培养至形成黄色菌落；
S6、分别制备植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌发酵菌液：将步骤S4中活化的枯草芽孢杆菌和步骤S5中活化的植物乳杆菌分别转接于1000ml牛肉膏蛋白胨液体培养基的摇瓶中发酵10h即可得到接种量在2.0×109cfu·ml-1的植物乳杆菌发酵菌液以及接种量在3.0×109cfu·ml-1枯草芽孢杆菌发酵菌液；
S7、发酵燕窝酸、燕窝多肽及燕窝多糖：先将步骤S2制备的燕窝酸浓缩液、步骤S3制备的燕窝多肽及燕窝多糖和2.0g步骤S6制备的枯草芽孢杆菌发酵菌液混合后，在35℃下发酵24h，再置于2.0g步骤S6制备的植物乳杆菌发酵液在37℃下发酵24h后，取发酵液，加入50ml水和2.0g冰糖在100℃温度下炖煮30min，得到炖煮燕窝；
S8、制备冻干粉：将步骤S7得到炖煮燕窝的进行分段冻融处理后，再进行冷冻干燥，使用砂磨机研磨后得到炖煮燕窝冻干粉；所述分段式冻融条件包括：在-20℃下冷冻5h后，于55℃下迅速融化，如此反复处理3次；所述冷冻干燥条件包括：预冻温度为-80℃，时间为72h；冷冻干燥冷肼温度为-50℃，真空度为180Pa，时间为72h；所述研磨条件包括：氧化锆珠规格为1.0mm，氧化锆珠加入量为砂磨机内腔体积的70％，转速设置为3000r/min，研磨时间为2.5h。
对比例11：除步骤S12不使用分段冻融处理外，其余步骤均同实施例3。
1.测量保湿率
使用PBS将炖煮燕窝冻干粉(实施例5制备)以及未经分段冻融的炖煮燕窝冻干粉进行复溶，用于后续检测实验。将贴了医用胶带的载玻片放入干燥器中，干燥器的底层注入了饱和硫酸铵溶液，用带孔的塑料板将饱和硫酸铵隔开，载玻片放于板上。取待测样品，使用橡胶手套将样品均匀涂抹在载玻片上的医用胶带上。称重并记录，精确至0.001g，即为0h数据。称量后马上放入干燥器上层静置。静置2h、4h、8h、24h后，每个时间点各称量一次载玻片(含医用胶带和样品)的重量，并记录，精确至0.001g。计算各个时间点样品中水分的损失量并计算出其保水率。参照公式保湿率(％)＝(M0-Mt)/M0×100，式中：M0：初始水分重量；Mt：各时间节点损失水分重量。实验结果如下表所示：
表3
由结果可知，相比未经分段冻融处理的的炖煮燕窝冻干粉来说，分段冻融处理可以使保湿功效更加显著。
2.测量愈合修复功效(HDF细胞划痕实验)
首先使用marker笔在孔板背后均匀的划横线，在孔中加入约5×105个细胞，接种原则为过夜后融合率达到100％。第二天用1ml枪头沿着此前一天划在平板背面的线在细胞层上进行划痕，划痕完成后，使用无菌PBS洗细胞3次，洗去不贴壁的细胞，即划线时划线的细胞，使划线后留下的间隙清晰可见，然后更换含有炖煮燕窝冻干粉复溶物或未经分段冻融的炖煮燕窝冻干粉复溶物的新鲜无血清培养基。将细胞放入37℃5％CO2培养箱，培养。然后在24h取出细胞，显微镜线观察并测量划痕的宽度，并拍照。使用Image J软件打开图片，随机划取水平线，计算细胞间距离的均值，并计算划痕修复率。实验结果如下表所示：
表4
项目 实施例3 对比例11
24h后划痕面积差μm2 3900±100 3400±110
由结果可知燕窝对真皮细胞的划痕的修复比较明显，尤其是经分段冻融的冻干粉复溶物有更高的修复能力。
图4是本发明实施例3和对比例11的保湿率对比图，图5是本发明实施例3和对比例11的划痕修复率对比图：通过图形可以更加清晰地看出实施例3制备出来的产品保湿效果和划痕修复效果均优于对比例11，说明经分段冻融的冻干粉复溶物有更好的保湿功效和更高的修复能力。
以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。

Claims (11)

1.一种复合菌剂，其特征在于：用于改性燕窝，由枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），保藏编号CGMCC(B)63501以及植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）保藏编号ATCC14917组成。
2.使用权利要求1所述的复合菌剂制备种燕窝制品的制备方法，其特征在于：具体制备步骤如下：
S1、燕窝的预处理：将燕窝置于燕窝重量5~15倍的水中，在温度为20~30℃下泡发10~20min，取出沥水，得到泡发后的燕窝，泡发后的燕窝含有燕窝质量4~10倍的水分；将泡发后的燕窝置于温度为20~30℃的水中超声清洗2~4次，超声功率为150~350W，超声频率为20~40kHz，时间为5~15min，得到清洗后的燕窝；将清洗后的燕窝置于由下述方法制备的处理液中：水20~30ml、大蒜提取液2~3ml、90wt％L-苹果酸和10wt％迷迭香酸组成的抗氧剂0.1~0.2g，在温度为20~30℃下浸渍1~3h，取出沥干，得到浸渍后的燕窝；将浸渍后的燕窝在真空度为100~150Pa、温度为40~60℃下真空干燥20~30h，得到干燥燕窝；将干燥燕窝粉碎至60~160目，采用巴士杀菌，在40~45℃下杀菌1~2h，得纯净燕窝；其中所述大蒜提取液的制备方法为：将大蒜清洗干净，粉碎过60目筛，加入大蒜重量10倍的水，在温度为40℃下以300r/min的转速搅拌30min，过300目筛，得到大蒜提取液；
S2、制备燕窝酸浓缩液：取1.5~2.5g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末配制成3~6mg/mL的水溶液，与20~30ml浓度为2mmol/L的NaHCO3、10~20ml浓度为6mmol/L的TCEP和10~20ml浓度为1mmol/L的海藻糖三种原料制得的处理液混合后于65~75℃水浴锅中，以250~350r/min的转速搅拌3~6h，得混合液A，随后将所得混合液A冷却至24~28℃，真空冷冻干燥得到固体甲，将1~2g固体甲与25~45ml摩尔浓度为0.03~0.07mol/L的杜仲绿原酸混合均匀，得到混合液B；将混合液B于90~100℃水浴锅中，加热15~25min，得到提取液，将提取液冷却至22~26℃，以4000~6000r/min的转速离心8~16min，收集上清液，将上清液进行抽滤，抽滤膜含有两层超滤膜和两层纳滤膜，其中超滤膜一层为10000Da；二层30000Da，纳滤膜一层为500Da；二层为200Da；抽滤时控制泵压0.1~0.2Mpa，抽滤完成后收集滤液，在滤液中加入5％醋酸调pH值至4~5，即得燕窝酸浓缩液；
S3、提取燕窝多肽和燕窝多糖：①再取1.5~2.5g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末按照质量比1:20~40的料液比加水浸泡，恒温水浴处理3~5h，得到燕窝匀浆，向燕窝匀浆中加入1~3％的所述燕窝粉末的蛋白酶酶解处理3~5h，沸水浴灭酶，得到燕窝酶解液，向燕窝酶解液加入硫酸铵沉淀，冷冻离心，分别收集上清液和沉淀；②将得到的沉淀加水复溶，进行反渗透脱盐处理后，进行二次酶解和酸解处理，调节溶液的pH至中性，冷冻离心，膜过滤，收集滤液，冷冻干燥，即得燕窝多肽；③将得到的上清液浓缩后，复溶，过DEAE-52纤维素柱子，采用梯度洗脱，分别收集洗脱峰和透过峰，再经SephadexG-100进行脱盐和定向收集燕窝多糖的组分，旋蒸浓缩后进行醇沉，冷冻干燥后，即得燕窝多糖；
S4、枯草芽孢杆菌的活化：菌种：Bacillus subtilis(保藏编号CGMCC(B)63501),由北京三药科技有限公司提供，将Bacillus subtilis接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于烘箱中35~37℃进行培养，培养至形成微黄色菌落；
S5、植物乳杆菌的活化：菌种：Lactobacillus plantarum(保藏编号ATCC14917)，由上海沪峥生物科技有限公司提供，将Lactobacillus plantarum接种于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于烘箱中35~37℃进行培养，培养至形成黄色菌落；
S6、分别制备植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌发酵菌液：将步骤S4中活化的枯草芽孢杆菌和步骤S5中活化的植物乳杆菌分别转接于500~1000ml牛肉膏蛋白胨液体培养基的摇瓶中发酵6~10h即可得到接种量在1.5×108~3.5×109cfu•ml-1的植物乳杆菌发酵菌液以及接种量在2.0×108~3.5×109cfu•ml-1枯草芽孢杆菌发酵菌液；
S7、发酵燕窝酸、燕窝多肽及燕窝多糖：先将步骤S2制备的燕窝酸浓缩液、步骤S3制备的燕窝多肽及燕窝多糖和1.5~2.0g步骤S6制备的枯草芽孢杆菌发酵菌液混合后，在30~35℃下发酵12~24h，再置于1.5~2.0g步骤S6制备的植物乳杆菌发酵液在33~37℃下发酵12~24h后，取发酵液，加入40~50ml水和0.5~2.0g冰糖在85～100℃温度下炖煮10~30min，得到炖煮燕窝；
S8、制备冻干粉：将步骤S7得到炖煮燕窝的进行分段冻融处理后，再进行冷冻干燥，使用砂磨机研磨后得到炖煮燕窝冻干粉；所述分段式冻融条件包括：在-8～-20℃下冷冻3～5h后，于40～55℃下迅速融化，如此反复处理1～3次；所述冷冻干燥条件包括：预冻温度为-6～-80℃，时间为24～72h；冷冻干燥冷肼温度为-30～-50℃，真空度为80～180Pa，时间为24～72h；所述研磨条件包括：氧化锆珠规格为0.2～1.0mm，氧化锆珠加入量为砂磨机内腔体积的60～70％，转速设置为1000～3000r/min，研磨时间为0.5~2.5h。
3.根据权利要求2所述的一种燕窝制品及其制备方法，其特征在于：所述步骤S1中所选燕窝以金丝燕窝为主，将燕窝置于燕窝重量10倍的水中，在温度为25℃下泡发15min，取出沥水，得到泡发后的燕窝，泡发后的燕窝含有燕窝质量6倍的水分，将泡发后的燕窝置于温度为25℃的水中超声清洗3次，超声功率为200W，超声频率为30kHz，时间为10min。
4.根据权利要求2所述的一种燕窝制品及其制备方法，其特征在于：所述步骤S1处理液的制备方法为：水25ml、大蒜提取液2.5ml、90wt％L-苹果酸和10wt％迷迭香酸组成的抗氧剂0.15g。
5.根据权利要求2所述的一种燕窝制品及其制备方法，其特征在于：所述步骤S1将清洗后的燕窝置于处理液中在温度为25℃下浸渍2h，取出沥干，得到浸渍后的燕窝；将浸渍后的燕窝在真空度为100Pa、温度为50℃下真空干燥25h，得到干燥燕窝；将干燥燕窝粉碎至100目，采用巴士杀菌，在40℃下杀菌1h，得到纯净燕窝。
6.根据权利要求2所述的一种燕窝制品及其制备方法，其特征在于：所述步骤S2中取2.0g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末配制成5mg/mL的水溶液，与25ml浓度为2mmol/L的NaHCO3、15ml浓度为6mmol/L的TCEP和15ml浓度为1mmol/L的海藻糖三种原料制得的处理液混合后于70℃水浴中以300r/min的转速搅拌4h，得混合液A，随后将所得混合液A冷却至26℃，真空冷冻干燥得到固体甲，将1.5g固体甲与35ml摩尔浓度为0.05mol/L的杜仲绿原酸混合均匀，得到混合液B；将混合液B于95℃水浴锅中，加热20min，得到提取液，将提取液冷却至24℃，以5000r/min的转速离心12min，收集上清液。
7.根据权利要求2所述的一种燕窝制品及其制备方法，其特征在于：所述步骤S3中再取2.0g经步骤S1处理过的纯净燕窝，将燕窝粉末按照质量比1:30的料液比加水浸泡，恒温水浴处理4h，得到燕窝匀浆，向燕窝匀浆中加入2％的所述燕窝粉末的蛋白酶酶解处理4h，沸水浴灭酶，得到燕窝酶解液。
8.根据权利要求2所述的一种燕窝制品及其制备方法，其特征在于：所述步骤S4与S5所用的固体培养基配制材料为牛肉膏：3.0g，蛋白胨：10.0g，NaCl：5.0g，琼脂：15~25g，水：1000ml，同时调节pH为7.4~7.6，均置于烘箱中35℃进行培养。
9.根据权利要求2所述的一种燕窝制品及其制备方法，其特征在于：所述步骤S6所用液体培养基材料为若配置1000mL的液体培养基，则取牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g加蒸馏水配置，用5mol/L的氢氧化钠溶液调pH值至7.2~7.4。
10.根据权利要求2所述的一种燕窝制品及其制备方法，其特征在于：所述步骤S7中先将步骤S2制备的燕窝酸浓缩液、步骤S3制备的燕窝多肽及燕窝多糖和2.0g步骤S6制备的枯草芽孢杆菌发酵菌液混合后，在32℃下发酵12h，再置于2.0g步骤S6制备的植物乳杆菌发酵液在37℃下发酵12h后，取发酵液，加入50ml水和1.0g冰糖在100℃温度下炖煮30min，得到炖煮燕窝。
11.根据权利要求2所述的一种燕窝制品及其制备方法，其特征在于：所述步骤S8中分段式冻融条件包括：在-15℃下冷冻4h后，于50℃下迅速融化，如此反复处理3次；所述冷冻干燥条件包括：预冻温度为-43℃，时间为48h；冷冻干燥冷肼温度为-40℃，真空度为130Pa，时间为48h；所述研磨条件包括：氧化锆珠规格为0.6mm，氧化锆珠加入量为砂磨机内腔体积的65％，转速设置为2000r/min，研磨时间为1.5h。
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Citations (12)

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