CN117177987A

CN117177987A - 对突变型ras(g12d)显示选择结合性的结合分子

Info

Publication number: CN117177987A
Application number: CN202280027920.5A
Authority: CN
Inventors: 林龙儿; 桥本哲; 南沙纪
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2021-05-07
Filing date: 2022-05-06
Publication date: 2023-12-05
Also published as: JPWO2022234851A1; WO2022234639A1; EP4339204A1; WO2022234851A1

Abstract

本公开发现具有下列特征的结合分子对突变型RAS(G12D)具有大的结合选择性：(i)与突变型RAS(G12D)中的Asp12直接相互作用，和(ii)与突变型RAS(G12D)中的Switch2区相互作用、并且突变型RAS(G12D)中Switch2区与突变型RAS(G12D)中的Asp12分子内相互作用。这样的分子可成为与突变型RAS(G12D)的表达有关的疾病的处置和/或预防中有希望的候选化合物。

Description

对突变型RAS(G12D)显示选择结合性的结合分子

技术领域

本公开涉及对突变型RAS(G12D)显示选择结合性的结合分子。

背景技术

RAS是属于小GTP酶家族的蛋白，已知KRAS、NRAS、HRAS。RAS通过与GDP或GTP的结合状态规定失活状态或活化状态，通过经GEF(鸟嘌呤核苷酸交换因子)从GDP至GTP的交换反应活化，通过经GAP(GTP酶活化蛋白)的GTP的水解反应失活(非专利文献1)。活化的RAS通过活化MAPK途径、PI3K/Akt途径、RAL途径等各种下游信号诱导细胞的增殖、生存、分化，RAS的恒定活化对癌症的发生、进展起重要作用。已知在癌症中，通过RAS的上游信号的活化、RAS的恒定的活化、和/或RAS的活性型突变，RAS-RAF-MEK-ERK途径活化(非专利文献2)。这些RAS的活性型突变在数目众多的癌症种类中见到。作为RAS突变的热点已知G12、G13、Q61，对于KRAS在G12中、对于NRAS在Q61中高频率地见到突变。此外，也已知这些突变与患者的预后相关(非专利文献3)。

其中针对KRAS G12突变的选择性抑制剂显示临床价值。这些化合物是对G12C高选择性并且共价结合的抑制剂。作为进一步的特征，与野生型KRAS相比提高对G12C的选择性，认为这与维持药效、同时提高安全性有关。

代表性KRAS G12突变为G12D、G12V、G12C，其中KRAS G12D突变的癌症患者的数目最多，期望针对G12D突变癌症的治疗药。

例如，作为对KRAS G12D的抑制剂公开了低分子化合物(专利文献2)，作为对KRASG12D显示选择结合性的化合物公开了一些环状肽化合物(专利文献1，非专利文献4、5)。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：US20210032293A

专利文献2：WO2021041671

非专利文献

非专利文献1：Nat.Rev.Drug Discov.2014Nov；13(11):828-851.

非专利文献2：Nat.Rev.Drug Discov.2014Dec；13(12):928-942.

非专利文献3：Nat.Rev.Drug Discov.2016Nov；15(11):771-785.

非专利文献4：ACS Med.Chem.Lett.2017,8,732-736

非专利文献5：ACS Cent.Sci.2020,6,1753-1761

发明概述

发明要解决的课题

在专利文献1、非专利文献4和非专利文献5中，公开了对KRAS G12D显示一定选择结合性的肽化合物。为了使这些肽化合物成为有效药物的有效成分，需要发现进一步优异的选择结合性。但是，迄今尚未阐明关于对突变型RAS(G12D)达成哪种结合形式提高选择结合性的系统机制。

用于解决课题的手段

在这样的背景下，本发明人等进行深入研究，结果令人惊讶地发现，通过满足以下的条件，化合物对突变型RAS(G12D)的结合选择性飞跃性提高。

1.突变型RAS(G12D)中的Asp12与化合物相互作用。

2.突变型RAS(G12D)中的Switch2区与化合物相互作用，并且突变型RAS(G12D)中的Switch2区与突变型RAS(G12D)中的Asp12分子内相互作用。

本发明基于这样的知识，包括以下内容。

[1]一种结合分子，其对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS是5倍以，其具有以下(1)和(2)的特征：

(1)前述结合分子与前述突变型RAS(G12D)中的Asp12相互作用，和

(2)前述结合分子与前述突变型RAS(G12D)中的Switch2区相互作用，并且在前述突变型RAS(G12D)中，存在于前述Switch2区的氨基酸残基与Asp12分子内相互作用。

[2][1]中记载的结合分子，其中，进一步地，前述结合分子与前述突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区相互作用。

[3][1]或[2]中记载的结合分子，其中，在存在于前述Switch2区的氨基酸残基与Asp12分子内相互作用的情形中，在前述突变型RAS(G12D)中，存在于前述Switch2区的Asp69中的α碳原子与存在于前述α3螺旋区的Gln99中的α碳原子之间的距离是15.0埃以下。

[4][1]～[3]的任一项中记载的结合分子，其中，前述结合选择性是10倍以上。

[5][1]～[4]的任一项中记载的结合分子，其中，针对前述突变型RAS(G12D)的解离常数(K_D)是10nM以下。

[6][1]～[5]的任一项中记载的结合分子，其中，前述突变型RAS(G12D)是突变型KRAS(G12D)。

[7][1]～[6]的任一项中记载的结合分子，其中，前述突变型RAS(G12D)是GDP形式。

[8][1]～[7]的任一项中记载的结合分子，其中，前述Switch2区包含Ala59～Glu76。

[9][1]～[8]的任一项中记载的结合分子，其中，前述Switch2区包含序列编号：6中记载的氨基酸序列。

[10][1]～[9]的任一项中记载的结合分子，其中，存在于前述Switch2区、并且与前述Asp12相互作用的氨基酸残基是选自由Ala59、Gly60、Gln61和Glu62组成的组中的任一个以上。

[11][10]中记载的结合分子，其中，在前述Ala59、Gly60、Gln61和Glu62之中，构成以下氨基酸残基的主链的全部原子各自与Asp12的全部原子各自的相互作用能的总和是-0.5kcal/mol以下，前述氨基酸残基为具有一个以上距前述Asp12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个4.5埃以内存在的非氢原子的氨基酸残基。

[12][10]中记载的结合分子，其中，在前述Ala59、Gly60、Gln61和Glu62之中，构成以下氨基酸残基的全部原子各自与Asp12的全部原子各自的相互作用能的总和是-0.5kcal/mol以下，前述氨基酸残基为具有一个以上距前述Asp12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个4.5埃以内存在的非氢原子的氨基酸残基。

[13][1]～[12]的任一项中记载的结合分子，其与选自由前述Switch2区的Gln61～Met72组成的组中的任一个以上的氨基酸残基相互作用。

[14][1]～[12]的任一项中记载的结合分子，其与选自由前述Switch2区的Gln61～Arg73组成的组中的任一个以上的氨基酸残基相互作用。

[15][13]中记载的结合分子，其中，前述Switch2区的Gln61～Met72由序列编号：7中记载的氨基酸序列表示。

[16][14]中记载的结合分子，其中，前述Switch2区的Gln61～Arg73由序列编号：10中记载的氨基酸序列表示。

[17][1]～[12]、[14]、和[16]的任一项中记载的结合分子，其与选自由前述Switch2区的Gln61、Glu62、Arg68、Asp69、Met72、和Arg73组成的组中的任一个以上的氨基酸残基相互作用。

[18][1]～[13]和[15]的任一项中记载的结合分子，其与选自由前述Switch2区的Gln61、Glu62、Arg68、Asp69和Met72组成的组中的任一个以上的氨基酸残基相互作用。

[19][1]～[18]的任一项中记载的结合分子，其与前述Switch2区的Gln61相互作用。

[20][1]～[19]的任一项中记载的结合分子，其包含与Gln61相互作用的氨基酸残基，其中，与前述Gln61相互作用的氨基酸残基的全部原子各自与前述Gln61的全部原子各自之间的相互作用能的总和是-10kcal/mol以下。

[21][2]～[20]的任一项中记载的结合分子，其中，前述突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区包含Thr87～Lys104。

[22][2]～[21]的任一项中记载的结合分子，其中，前述突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区包含序列编号：8中记载的氨基酸序列。

[23][2]～[22]的任一项中记载的结合分子，其与选自由前述突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区的His95～Val103组成的组中的任一个以上氨基酸残基相互作用。

[24][23]中记载的结合分子，其中，前述突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区的His95～Val103由序列编号：9中记载的氨基酸序列表示。

[25][2]～[24]的任一项中记载的结合分子，其与选自由前述突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区的His95、Tyr96、Gln99、Arg102、和Val103组成的组中的任一个以上氨基酸残基相互作用。

[26][2]～[25]的任一项中记载的结合分子，其与前述突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区的Gln99相互作用。

[27][1]～[26]的任一项中记载的结合分子，其包含与前述Switch2区相互作用的1个或多个α氨基酸残基。

[28][2]～[27]的任一项中记载的结合分子，其包含与前述α3螺旋区相互作用的1个或多个α氨基酸残基。

[29][1]～[28]的任一项中记载的结合分子，其包含与前述Asp12氨基酸相互作用的1个或多个α氨基酸残基。

[30][1]～[29]的任一项中记载的结合分子，其包含为＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-X、或＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-(C₆～C₁₀亚芳基)-X的结构(1)，此处，X是羟基、Cl、Br、I、-NR_AR_B(此处，R_A和R_B都是氢、或分别独立地是C₁～C₃烷基、或R_A和R_B与它们结合的氮原子一起形成包含选自由N、O、和S组成的组中的1～3个杂原子的4～8元杂环)、C₁～C₃烷基、C₁～C₃卤烷基、-C≡CH、或任选被取代的C₃～C₈环烷基，＊意味着结合点，但是，在结合分子包含＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-X的情形中，X不是C₁～C₃烷基。

[31][1]～[30]的任一项中记载的结合分子，其包含为＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-Y的结构(2)，此处，Y是任选被取代的C₁～C₁₀烷基、任选被取代的C₂～C₁₀烯基、任选被取代的C₂～C₁₀炔基、任选被取代的C₁～C₆烷氧基C₁～C₆烷基、任选被取代的C₆～C₁₀芳基、或任选被取代的C₃～C₈环烷基，＊意味着结合点。

[32][1]～[31]的任一项中记载的结合分子，其包含下述的结构(3)：

式中，

R₉是C₁～C₆烷基、任选被取代的C₁～C₆烷氧基C₁～C₆烷基、或任选被取代的C₆～C₁₀芳基，或

R₉与P₉、R₉结合的碳原子、和P₉结合的氮原子一起形成4～7元饱和杂环，

除了R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形之外，P₉是氢或C₁～C₃烷基，

Q₉是氢或C₁～C₆烷基，

＊意味着结合点。

[33][31]或[32]中记载的结合分子，其中，结构(1)中的X所包含的原子中距结构(1)的结合点最远的原子与结构(2)中的Y所包含的原子中距结构(2)的结合点最远的原子经由20个以内的原子结合。

[34][32]或[33]中记载的结合分子，其中，除了R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形之外，结构(1)中的X所包含的原子中距结构(1)的结合点最远的原子与结构(3)中的R₉所包含的原子中距结构(3)中与Q₉和R₉结合的碳原子最远的原子经由25个以内的原子结合。

[35][1]～[34]的任一项中记载的结合分子，其中，结合分子的分子量是5000以下。

[36][1]～[35]的任一项中记载的结合分子，其中，结合分子的CLogP是25以下。

[37][1]～[36]的任一项中记载的结合分子，其为肽化合物。

[38][1]～[37]的任一项中记载的结合分子，其为环状肽化合物。

[39][1]～[38]的任一项中记载的结合分子，其为具有5～30个氨基酸残基的肽化合物。

[40][1]～[39]的任一项中记载的结合分子，其为含有1个或多个非天然氨基酸残基的肽化合物。

[41][1]～[40]的任一项中记载的结合分子，其为含有1个或多个N取代氨基酸残基的肽化合物。

[42][1]～[41]的任一项中记载的结合分子，其具有以下的结构：

式中：

A₇和A₈独立地是任意的氨基酸残基、或任意的肽残基，A₇和A₈可以连接，

R₇是-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-X、或-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-(C₆～C₁₀亚芳基)-X，

X是羟基、Cl、Br、I、-NR_AR_B(此处，R_A和R_B都是氢、或分别独立地是C₁～C₃烷基、或R_A和R_B与它们结合的氮原子一起形成包含选自由N、O、和S组成的组中的1～3个杂原子的4～8元杂环)、C₁～C₃烷基、C₁～C₃卤烷基、-C≡CH、或任选被取代的C₃～C₈环烷基，但是，在R₇是-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-X的情形中，X不是C₁～C₃烷基，

P₇是氢或C₁～C₃烷基，

R₈是-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-Y，

Y是任选被取代的C₁～C₁₀烷基、任选被取代的C₂～C₁₀烯基、任选被取代的C₂～C₁₀炔基、任选被取代的C₁～C₆烷氧基C₁～C₆烷基、任选被取代的C₆～C₁₀芳基、或任选被取代的C₃～C₈环烷基，

P₈是氢或C₁～C₃烷基。

[43][1]～[42]的任一项中记载的结合分子，其具有以下的结构：

式中，

A₈和A₉独立地是任意的氨基酸残基、或任意的肽残基，A₈和A₉可以连接，

R₈是-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-Y，

P₈是氢或C₁～C₃烷基，

Q₉是氢或C₁～C₆烷基。

[44][1]～[43]的任一项中记载的结合分子，其具有以下的结构：

式中：

A₇和A₉独立地是任意的氨基酸残基、或任意的肽残基，A₇和A₉可以连接，

P₇是氢或C₁～C₃烷基，

R₈是-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-Y，

P₈是氢或C₁～C₃烷基，

Q₉是氢或C₁～C₆烷基。

[45][43]或[44]中记载的结合分子，其中，除了R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形之外，X所包含的原子中距R₇结合的α碳原子最远的原子与R₉所包含的原子中距R₉结合的α碳原子最远的原子经由25个以内的原子结合。

[46][2]～[45]的任一项中记载的结合分子，其中，与Switch2区的相互作用、与Asp12的相互作用、和/或与α3螺旋区的相互作用不是共价键。

[47][2]～[46]的任一项中记载的结合分子，其中，与Switch2区的相互作用、与Asp12的相互作用、和/或与α3螺旋的相互作用各自独立地选自由静电相互作用、范德华相互作用、和通过氢键的相互作用组成的组中。

[48][2]～[47]的任一项中记载的结合分子，其中，与Switch2区的相互作用、与Asp12的相互作用、和/或与α3螺旋区的相互作用是不经由其它分子的相互作用。

[49][1]～[48]的任一项中记载的结合分子，其中，与Asp12的相互作用是不经由其它分子的相互作用。

[50][1]～[49]的任一项中记载的结合分子，其中，在前述突变型RAS(G12D)中，存在于前述Switch2区的氨基酸残基与Asp12不经由其它分子分子内相互作用。

[51][1]～[50]的任一项中记载的结合分子，其中，前述与Switch2区的相互作用是不经由其它分子的相互作用。

[52][1]～[51]的任一项中记载的结合分子，其中，前述结合分子不是选自由以下(1)～(149)组成的组中的化合物。

(1)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-22-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(2)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(3-碘苯基)甲基]-18-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,7,16,19,22,25,31-八甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(3)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-31-(环己基甲基)-25-[(3-碘苯基)甲基]-22-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(4)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-22-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(5)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-9-[(2-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(6)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-(环己基甲基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(7)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-6-[(3-氟苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(8)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(9)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-25-[(5-碘-2-甲基苯基)甲基]-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(10)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-(环己基甲基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-9-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(11)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-31-[(4-氯苯基)甲基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-22-(3-甲基丁-2-烯基)-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(12)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-丙-2-炔基-31-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(13)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-12-[(3-溴苯基)甲基]-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(14)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,7,16,19,22,25,31-八甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(15)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-丙-2-炔基-31-[[4-(三氟甲氧基)苯基]甲基]-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(16)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-丙-2-炔基-18-[[4-(三氟甲氧基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(17)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-(环己基甲基)-9-[(4-氟苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(18)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-25-[(3-溴苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-31-[(4-氯苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(19)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-12-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(20)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-25-[(5-溴-2-甲基苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(21)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-乙炔基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(22)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-31-苄基-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-丙-2-炔基-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(23)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(5-氯噻吩-2-基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(24)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-12-[(5-溴噻吩-2-基)甲基]-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(25)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(4-氟苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(26)(3S,6S,12S,15S,20S,23S,26S,30S,33S,36R)-23-[(2S)-丁烷-2-基]-3-丁基-6-[(3-碘苯基)甲基]-10,13,20,21,27,31-六甲基-12-[(4-甲基苯基)甲基]-26,33-双(2-甲基丙基)-30-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,18,21,24,27,31,34-十一氮杂三环[34.3.0.015,18]三十九烷-2,5,8,11,14,19,22,25,28,32,35-十一酮、

(27)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,12,16,19,22,25,31-十甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(28)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-31-(环戊基甲基)-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-22-(2-甲基丙-2-烯基)-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(29)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-(环己基甲基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(30)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-31-(环丁基甲基)-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(31)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-31-(环己基甲基)-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(32)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-31-[(4-氯苯基)甲基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-22-(2-甲基丙-2-烯基)-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(33)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-9-(2-甲基丙-2-烯基)-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(34)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34R)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31,34-十甲基-9-(3-甲基丁-2-烯基)-3,30-双(2-甲基丙基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(35)(6S,9S,13R,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-31-[(4-氯苯基)甲基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,13,14,19,19,20,29,32-九甲基-22-(3-甲基丁-2-烯基)-9,16-双(2-甲基丙基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(36)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-31-[(4-氯苯基)甲基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-22-(2-甲基丙-2-烯基)-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(37)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3-(3-甲基丁基)-30-(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-18-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(38)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34R)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31,34-十甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-9-丙-2-炔基-18-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(39)(6S,9S,13R,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,13,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-22-丙-2-炔基-31-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(40)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-丙-2-炔基-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(41)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-31-[(4-氯苯基)甲基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-丙-2-炔基-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(42)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-3-(环丁基甲基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-30-(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(43)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-(环戊基甲基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(44)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-3,9-ジ丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-30-(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(45)(1S,4S,7S,12S,15S,21S,24S,30S,33S)-4-[(2S)-丁烷-2-基]-24-丁基-15-(环戊基甲基)-21-[(3-碘苯基)甲基]-6,7,14,17,26,27,27,32-八甲基-30-(2-甲基丙基)-33-(哌啶-1-羰基)-3,6,9,14,17,20,23,26,29,32,36-十一氮杂三环[34.4.0.09,12]四十烷-2,5,8,13,16,19,22,25,28,31,35-十一酮、

(46)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-31-(环戊基甲基)-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(47)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-19-乙基-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,22,25,31-八甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(48)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3,5-二氯苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(49)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(3-氯-5-氟苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(50)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(51)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,9,30-三(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(52)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-9-乙基-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(53)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-3-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-30-(2-甲基丙基)-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(54)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-30-(2-甲基丙基)-3-丙基-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(55)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-30-(2-甲基丙基)-3-(2-苯基乙基)-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(56)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-9-丙-2-烯基-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(57)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(3-氯苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(58)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(59)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6,9-二苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-12-[(3-甲基苯基)甲基]-3-丙烷-2-基-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(60)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6,9-二苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-氟苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-3-丙烷-2-基-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(61)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6,9-二苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3,5-二氟苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-3-丙烷-2-基-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(62)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6,9-二苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-氯苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-25-乙基-4,7,16,19,22,30,31-七甲基-3-丙烷-2-基-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(63)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6,9-二苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-氯苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-16-乙基-4,7,19,22,25,30,31-七甲基-3-丙烷-2-基-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(64)(3S,9S,18S,21S,25S,28S,31S,34S,36R)-18-[(2S)-丁烷-2-基]-3-[(3-氯苯基)甲基]-9-[(4-氯苯基)甲基]-36-乙氧基-7,10,13,16,21,22,29,32-八甲基-31-(3-甲基丁氧基甲基)-28-(2-甲基丙基)-25-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-十一氮杂双环[32.3.0]三十七烷-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-十一酮、

(65)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-氯苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-3,9-双(2-甲基丙基)-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(66)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-氯-5-氟苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-3,9-双(2-甲基丙基)-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(67)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-3,9-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(68)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34R)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31,34-九甲基-3,9-双(2-甲基丙基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(69)3-[[(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-3,9-双(2-甲基丙基)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一氧代-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四-12-基]甲基]苄腈、

(70)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-3,9-双(2-甲基丙基)-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(71)(3S,9S,18S,21S,25S,28S,31S,34S,36R)-31-苄基-18-[(2S)-丁烷-2-基]-9-[(4-氯苯基)甲基]-36-乙氧基-3-[(3-碘苯基)甲基]-7,10,13,16,21,22,29,32-八甲基-28-(2-甲基丙基)-25-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-十一氮杂双环[32.3.0]三十七烷-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-十一酮、

(72)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-氯苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-7,16,19,22,25,30,31-七甲基-3,9-双(2-甲基丙基)-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(73)3-[[(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-3,9-双(2-甲基丙基)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一氧代-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四-12-基]甲基]苄腈、

(74)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-3,9-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-12-[[3-(三氟甲氧基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(75)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-氯苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-9-[(3-甲基苯基)甲基]-3-丙烷-2-基-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(76)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-氯苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-4,7,9,16,19,22,25,30,31-九甲基-3-丙烷-2-基-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(77)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(2-氟-5-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(78)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(2-氯-5-碘苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(79)(1S,10S,13S,17S,20S,26S,29S)-10-[(2S)-丁烷-2-基]-29-[(3-碘苯基)甲基]-2,5,8,14,18,23,23,24,33-九甲基-13,20-双(2-甲基丙基)-17-(哌啶-1-羰基)-2,5,8,11,14,18,21,24,27,30,33-十一氮杂双环[24.8.6]四十烷-3,6,9,12,15,19,22,25,28,31,34-十一酮、

(80)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-己基-25-[(3-碘苯基)甲基]-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(81)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-22-[(2-甲氧基苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(82)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-22-(苯氧基甲基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(83)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-22-(2-苯基乙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(84)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-(环己基甲基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(85)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-[(4-氯苯基)甲基]-18-(环己基甲基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(86)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-31-[(4-氟苯基)甲基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-丙-2-炔基-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(87)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-[[2-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(88)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-[(2-氯苯基)甲基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(89)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-[(2-氟苯基)甲基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(90)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-22-[(2-甲基苯基)甲基]-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(91)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-22-(2-苯基乙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(92)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-31-(环己基甲基)-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-22-(2-苯基乙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(93)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-丙-2-炔基-18-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(94)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-18-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-丙-2-炔基-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(95)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-18-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-丙-2-炔基-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(96)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氟苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-丙-2-炔基-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(97)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-丙-2-炔基-31-[[4-(三氟甲氧基)苯基]甲基]-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(98)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-丙-2-炔基-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(99)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-31-[(4-氟苯基)甲基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,19,19,20,29,32-八甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-丙-2-炔基-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(100)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-9-(2-苯基乙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(101)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-[[2-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(102)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-[(2-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(103)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-[(2-氟苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(104)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-丙-2-炔基-31-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(105)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-丙-2-炔基-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(106)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-9-[(2-甲基苯基)甲基]-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(107)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-[[3-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(108)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-22-苄基-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(109)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-22-[(2-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(110)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-22-[[2-(三氟甲氧基)苯基]甲基]-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(111)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-6-[(2-氟苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(112)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-6-[(4-氟苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(113)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-6-[(2-氯苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(114)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-6-[(3-氯苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(115)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-6,18-双[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(116)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-6-[(2-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(117)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-6-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(118)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-6-[[2-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(119)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-6-[[3-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(120)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-6-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(121)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-6-[(2-甲氧基苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(122)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-6-[[2-(三氟甲氧基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(123)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-6-[[3-(三氟甲氧基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(124)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-6-[[4-(三氟甲氧基)苯基]甲基]-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(125)(6S,9S,13S,16S,19S,22S,25S,31S,34S)-19-苄基-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-31-(环己基甲基)-25-[(3-碘苯基)甲基]-4,10,14,20,29,32-六甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(126)(6S,9S,13S,16S,19S,22S,25S,31S,34S)-19-苄基-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-25-[(3-碘苯基)甲基]-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4,10,14,19,20,29,32-七甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(127)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(2-氟苯基)甲基]-6,18-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(128)(3S,9S,12S,17S,20S,23S,27S,30S,36S)-20-[(2S)-丁烷-2-基]-9-(环己基甲基)-7,10,17,18,23,24,28,31-八甲基-3-(3-苯基丙基)-27-(哌啶-1-羰基)-30-丙烷-2-基螺[1,4,7,10,15,18,21,24,28,31,34-十一氮杂三环[34.3.0.012,15]三十九烷-33,1'-环戊烷]-2,5,8,11,16,19,22,25,29,32,35-十一酮、

(129)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-25-[(2,3-二氟苯基)甲基]-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(130)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-25-[(2,5-二氟苯基)甲基]-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(131)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-25-[(2,6-二氟苯基)甲基]-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(132)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-25-[(2-氟-3-碘苯基)甲基]-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(133)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-25-[(3-溴-2-氟苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(134)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-25-[(3-氟-5-碘苯基)甲基]-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(135)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-25-[(3-氯-5-碘苯基)甲基]-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(136)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-25-[(5-溴吡啶-3-基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(137)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-25-[(3-溴-5-氟苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(138)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-25-[(2-溴-5-碘苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(139)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-25-[(5-溴-2-氟苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(140)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-25-[(5-溴-2-氯苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(141)(3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-18-[(2S)-丁烷-2-基]-28-环己基-9-(环己基甲基)-7,10,13,16,21,22,26,29-八甲基-3-(3-苯基丙基)-25-(哌啶-1-羰基)螺[1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-十一氮杂双环[32.3.0]三十七烷-31,1'-环戊烷]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-十一酮、

(142)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,9,16,19,22,25,31-八甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(143)(3S,6S,9S,13S,16S,19S,22S,25S,31S,34S)-19-苄基-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,9,10,14,20,22,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(144)3-[(3S,6S,9S,13S,16S,19S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-25-[(3-碘苯基)甲基]-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,20,29,32-七甲基-9,16-双(2-甲基丙基)-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一氧代-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-19-基]-N,N-二甲基丙酰胺、

(145)3-[(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一氧代-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四-6-基]-N,N-二甲基丙酰胺、

(146)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-34-(4,4-二氟哌啶-1-羰基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(147)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-34-(3,3-二氟哌啶-1-羰基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(148)(3S,9S,18S,21S,25S,28S,34S)-18-[(2S)-丁烷-2-基]-28-环己基-9-(环己基甲基)-7,10,13,16,21,22,26,29-八甲基-25-(哌啶-1-羰基)-3-[3-[4-(三氟甲基)苯基]丙基]螺[1,4,7,10,13,16,19,22,26,29,32-十一氮杂双环[32.3.0]三十七烷-31,1'-环戊烷]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-十一酮、和

(149)(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-6,12-二苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-3,9-双(2-甲基丙基)-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮。

[53]药物组合物，其包含[1]～[52]的任一项中记载的结合分子。

[54]癌症治疗剂，其包含[1]～[52]的任一项中记载的结合分子。

发明效果

根据本发明，提供了对突变型RAS(G12D)具有高结合选择性的新的结合分子。本公开中的结合分子对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS是5倍以上。此外，在本公开中阐明了为实现对突变型RAS(G12D)的高结合选择性所需的、突变型RAS(G12D)与结合分子的结合形式。通过经本公开阐明的结合形式与突变型RAS(G12D)结合的分子期待成为与突变型RAS(G12D)的表达有关的疾病的治疗和/或预防中的治疗候选分子。

附图简述

[图1]图1是实施例1所示化合物1和突变型RAS(G12D)的复合物的X线晶体结构的整体结构。突变型RAS(G12D)显示为带状型，化合物1和二磷酸鸟苷(GDP)显示为棒状型。

[图2]图2是实施例2所示化合物2和突变型RAS(G12D)的复合物的X线晶体结构的整体结构。突变型RAS(G12D)显示为带状型，化合物2和二磷酸鸟苷(GDP)显示为棒状型。

[图3]图3是实施例3所示化合物3和突变型RAS(G12D)的复合物的X线晶体结构的整体结构。突变型RAS(G12D)显示为带状型，化合物3和二磷酸鸟苷(GDP)显示为棒状型。

[图4]图4是实施例4所示化合物4和突变型RAS(G12D)的复合物的X线晶体结构的整体结构。突变型RAS(G12D)显示为带状型，化合物4和二磷酸鸟苷(GDP)显示为棒状型。

用于实施发明的方式

官能团等的定义

本说明书中的“烷基”是从脂肪族烃除去任意一个氢原子衍生的1价基团，具有骨架中不含杂原子(指碳和氢原子以外的原子。)或不饱和碳-碳键、含有氢和碳原子的烃基或烃基团结构的子集。烷基不仅包含直链状的那种，也包含支链状的那种。作为烷基，具体地，列举碳原子数1～20(C₁～C₂₀，下文“C_p～C_q”意味着碳原子数p～q个)的烷基，优选C₁～C₁₀烷基，更优选C₁～C₆烷基。作为烷基，具体地，列举甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基(2-甲基丙基)、正戊基、仲戊基(1-甲基丁基)、叔戊基(1,1-二甲基丙基)、新戊基(2,2-二甲基丙基)、异戊基(3-甲基丁基)、3-戊基(1-乙基丙基)、1,2-二甲基丙基、2-甲基丁基、正己基、1,1,2-三甲基丙基、1,2,2-三甲基丙基、1,1,2,2-四甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、3，3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基等。

本说明书中的“烯基”是具有至少1个双键(2个相邻SP²碳原子)的1价基团。根据双键和取代基(存在时)的构型，双键的几何学形式可以是entgegen(E)或zusammen(Z)、顺式或反式构型。烯基不仅包含直链状的那种，也包含支链状的那种。作为烯基，优选列举C₂～C₁₀烯基，更优选列举C₂～C₆烯基，具体地，例如，列举乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基(包括顺式、反式)、3-丁烯基、戊烯基、3-甲基-2-丁烯基、己烯基等。

本说明书中的“炔基”是具有至少1个三键(2个相邻SP碳原子)的1价基团。炔基不仅包含直链状的那种，也包含支链状的那种。作为炔基，优选列举C₂～C₁₀炔基，更优选列举C₂～C₆炔基，具体地，例如，列举乙炔基、1-丙炔基、炔丙基、3-丁炔基、戊炔基、己炔基、3-苯基-2-丙炔基、3-(2'-氟苯基)-2-丙炔基、2-羟基-2-丙炔基、3-(3-氟苯基)-2-丙炔基、3-甲基-(5-苯基)-4-戊炔基等。

本说明书中的“环烷基”意味着饱和或部分饱和的环状1价脂肪族烃基，包含单环、双环、螺环。作为环烷基，优选列举C₃～C₈环烷基，具体地，例如，列举环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、双环[2.2.1]庚基、螺[3.3]庚基等。

本说明书中的“芳基”意味着1价芳香族烃环，优选列举C₆～C₁₀芳基。作为芳基，具体地，例如，列举苯基、萘基(例如，1-萘基、2-萘基)等。

本说明书中的“卤烷基”意味着前述定义“烷基”的一个或多个氢被卤素取代的基团，优选C₁～C₆卤烷基，更优选C₁～C₆氟烷基。作为卤烷基，具体地，例如，列举二氟甲基、三氟甲基、2，2-二氟乙基、2，2，2-三氟乙基、3，3-二氟丙基、4，4-二氟丁基、5，5-二氟戊基等。

本说明书中的“烷氧基烷基”意味着前述定义的“烷基”的一个或多个氢被前述定义的“烷氧基”取代的基团，优选C₁～C₆烷氧基C₁～C₆烷基，更优选C₁～C₆烷氧基C₁～C₂烷基。作为烷氧基烷基，具体地，例如，列举甲氧基甲基、乙氧基甲基、1-丙氧基甲基、2-丙氧基甲基、正丁氧基甲基、异丁氧基甲基、仲丁氧基甲基、叔丁氧基甲基、戊氧基甲基、3-甲基丁氧基甲基、1-甲氧基乙基、2-甲氧基乙基、2-乙氧基乙基等。

本说明书中的“亚烷基”意味着从前述“烷基”进一步除去任意一个氢原子而衍生的二价基团，优选C₁～C₈亚烷基。作为亚烷基，具体地，列举-CH₂-、-(CH₂)₂-、-(CH₂)₃-、-CH(CH₃)CH₂-、-C(CH₃)₂-、-(CH₂)₄-、-CH(CH₃)CH₂CH₂-、-C(CH₃)₂CH₂-、-CH₂CH(CH₃)CH₂-、-CH₂C(CH₃)₂-、-CH₂CH₂CH(CH₃)-、-(CH₂)₅-、-(CH₂)₆-、-(CH₂)₇-、-(CH₂)₈-等。

本说明书中的“亚芳基”意味着从前述“芳基”进一步除去任意一个氢原子而衍生的二价基团。亚芳基可为单环也可为稠环。构成环的原子数目没有特别限定，优选6～10(C₆～₁₀亚芳基)。作为亚芳基，具体地，例如，列举1，2-亚苯基、1,3-亚苯基、1，4-亚苯基、1，2-亚萘基、1，3-亚萘基、1，4-亚萘基等。

本说明书中的“杂环”意味着构成环的原子中优选含有1～5个、更优选1～3个杂原子的非芳香族杂环。杂环可以在环中具有双键和/或三键，环中的碳原子可以被氧化形成羰基，可以是单环、稠环、螺环。构成环的原子数优选3～12(3～12元杂环)，更优选4～8(4～8元杂环)。

作为杂环，具体地，例如，列举氮杂环丁烷环、氧杂环丁烷环、四氢呋喃环、四氢吡喃环、吗啉环、硫代吗啉环、吡咯烷环、4-氧代吡咯烷环、哌啶环、4-氧代哌啶环、哌嗪环、吡唑烷环、咪唑烷环、噁唑烷环、异噁唑烷环、噻唑烷环、异噻唑烷环、噻二唑烷环、噁唑烷酮环、二氧戊环、二噁烷环、硫杂环丁烷环、八氢吲哚环、或氮杂环辛烷(azocane)环、或这些饱和杂环中的1个或多个单键被置换为双键或三键的环等。

本说明书中的“饱和杂环”意味着除碳原子外还包含1～5个杂原子、环中不含双键和/或三键的非芳香族的杂环。饱和杂环可以是单环，也可以与其它的环、例如苯环等芳香环形成稠环。作为饱和杂环，优选列举4～7元饱和杂环，具体地，例如，列举氮杂环丁烷环、氧杂环丁烷环、四氢呋喃环、四氢吡喃环、吗啉环、硫代吗啉环、吡咯烷环、4-氧代吡咯烷环、哌啶环、4-氧代哌啶环、哌嗪环、吡唑烷环、咪唑烷环、噁唑烷环、异噁唑烷环、噻唑烷环、异噻唑烷环、噻二唑烷环、噁唑烷酮环、二氧戊环、二噁烷环、硫杂环丁烷环、八氢吲哚环、二氢吲哚环等。

本说明书中的“任选被取代的”意味着某基团被任意取代基任选取代。

本说明书中的“肽”指1、2、3、4、5个或其以上的天然氨基酸和/或非天然氨基酸通过酰胺键和/或酯键连接的肽。

本说明书中的“氨基酸”包含天然氨基酸和非天然氨基酸。本说明书中的“天然氨基酸”指Gly、Ala、Ser、Thr、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、His、Glu、Asp、Gln、Asn、Cys、Met、Lys、Arg、Pro。非天然氨基酸没有特别限定，示例β-氨基酸、γ-氨基酸、D型氨基酸、N取代氨基酸、α,α-二取代氨基酸、侧链与天然不同的氨基酸、羟基羧酸等。作为本说明书中的氨基酸，容许任意的空间构型。氨基酸的侧链的选择不设特别限制，除氢原子外也自由选自例如烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、环烷基，这些基团中的不相邻的1或2个亚甲基可以被氧原子、羰基(-CO-)、或磺酰基(-SO₂-)取代。可以分别赋予取代基，这些取代基也没有限制，例如，可以从包含卤素原子、O原子、S原子、N原子、B原子、Si原子、或P原子的任意的取代基中独立地自由选择1个或2个以上。即，示例任选被取代的烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、环烷基等。在非限定的一个方式中，本说明书中的氨基酸可以是同一分子内具有羧基与氨基的化合物(即使该情形中，如脯氨酸、羟脯氨酸的亚氨基酸也包含在氨基酸中)。

氨基酸的主链氨基可以未取代(NH₂基)，也可以被取代(即，-NHR基：R表示任选地具有取代基的烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基、环烷基，这些基团中的不相邻的1或2个亚甲基可以被氧原子、羰基(-CO-)、或磺酰基(-SO₂-)取代，此外，如脯氨酸与N原子结合的碳链和α位的碳原子可以形成环)。前述R的取代基与上述的氨基酸侧链中的取代基同样地选择。主链氨基被取代的情形中的前述R包含在本说明书中的“氨基酸的侧链”中。这样的主链氨基的氢原子被取代的氨基酸在本说明书中称为“N取代氨基酸”。作为本说明书中的“N取代氨基酸”，优选示例N-烷基氨基酸、N-C₁～C₆烷基氨基酸、N-C₁～C₄烷基氨基酸、N-甲基氨基酸，但不限于这些。

构成本说明书中肽化合物的“氨基酸”中包含分别对应的全部同位素。“氨基酸”的同位素是至少一个原子被原子编号(质子数)相同、质量数(质子和中子数的和)不同的原子取代的那种。作为构成本公开中的肽化合物的“氨基酸”所包含的同位素的实例，有氢原子、碳原子、氮原子、氧原子、磷原子、硫原子、氟原子、氯原子等，分别包含²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁷O、¹⁸O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F、³⁶Cl等。

作为本说明书中包含卤素原子的取代基，示例取代基中有卤素的烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基等，更具体地，示例氟烷基、二氟烷基、三氟烷基等。

作为包含O原子的取代基，列举羟基(-OH)、氧基(-OR)、羰基(-C＝O-R)、羧基(-CO₂H)、氧基羰基(-C＝O-OR)、羰基氧基(-O-C＝O-R)、硫代羰基(-C＝O-SR)、羰基硫代(-S-C＝O-R)、氨基羰基(-C＝O-NHR)、羰基氨基(-NH-C＝O-R)、氧基羰基氨基(-NH-C＝O-OR)、磺酰基氨基(-NH-SO₂-R)、氨基磺酰基(-SO₂-NHR)、氨磺酰氨基(-NH-SO₂-NHR)、硫代羧基(-C＝O-SH)、羧基羰基(-C＝O-CO₂H)等基团。

作为氧基(-OR)的实例，列举烷氧基、环烷氧基、烯基氧基、炔基氧基、芳基氧基、杂芳基氧基、芳烷基氧基等。作为烷氧基，优选C₁～C₄烷氧基、C₁～C₂烷氧基，特别优选甲氧基、或乙氧基。

作为羰基(-C＝O-R)的实例，列举甲酰基(-C＝O-H)、烷基羰基、环烷基羰基、烯基羰基、炔基羰基、芳基羰基、杂芳基羰基、芳烷基羰基等。

作为氧基羰基(-C＝O-OR)的实例，列举烷基氧基羰基、环烷基氧基羰基、烯基氧基羰基、炔基氧基羰基、芳基氧基羰基、杂芳基氧基羰基、芳烷基氧基羰基等。

作为羰基氧基(-O-C＝O-R)的实例，列举烷基羰基氧基、环烷基羰基氧基、烯基羰基氧基、炔基羰基氧基、芳基羰基氧基、杂芳基羰基氧基、芳烷基羰基氧基等。

作为硫代羰基(-C＝O-SR)的实例，列举烷基硫代羰基、环烷基硫代羰基、烯基硫代羰基、炔基硫代羰基、芳基硫代羰基、杂芳基硫代羰基、芳烷基硫代羰基等。

作为羰基硫代(-S-C＝O-R)的实例，列举烷基羰基硫代、环烷基羰基硫代、烯基羰基硫代、炔基羰基硫代、芳基羰基硫代、杂芳基羰基硫代、芳烷基羰基硫代等。

作为氨基羰基(-C＝O-NHR)的实例，列举烷基氨基羰基(例如，C₁～C₆或C₁～C₄烷基氨基羰基，特别示例乙基氨基羰基、甲基氨基羰基等)、环烷基氨基羰基、烯基氨基羰基、炔基氨基羰基、芳基氨基羰基、杂芳基氨基羰基、芳烷基氨基羰基等。除这些外，还列举与-C＝O-NHR中的N原子结合的H原子被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基进一步取代的基团。

作为羰基氨基(-NH-C＝O-R)的实例，列举烷基羰基氨基、环烷基羰基氨基、烯基羰基氨基、炔基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂芳基羰基氨基、芳烷基羰基氨基等。除这些外，还列举与-NH-C＝O-R中的N原子结合的H原子被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基进一步取代的基团。

作为氧基羰基氨基(-NH-C＝O-OR)的实例，列举烷氧基羰基氨基、环烷氧基羰基氨基、烯基氧基羰基氨基、炔基氧基羰基氨基、芳基氧基羰基氨基、杂芳基氧基羰基氨基、芳烷基氧基羰基氨基等。除这些外，还列举与-NH-C＝O-OR中的N原子结合的H原子被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基进一步取代的基团。

作为磺酰基氨基(-NH-SO₂-R)的实例，列举烷基磺酰基氨基、环烷基磺酰基氨基、烯基磺酰基氨基、炔基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂芳基磺酰基氨基、芳烷基磺酰基氨基等。除这些外，还列举与-NH-SO₂-R中的N原子结合的H原子被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基进一步取代的基团。

作为氨基磺酰基(-SO₂-NHR)的实例，列举烷基氨基磺酰基、环烷基氨基磺酰基、烯基氨基磺酰基、炔基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、杂芳基氨基磺酰基、芳烷基氨基磺酰基等。除这些外，还列举与-SO₂-NHR中的N原子结合的H原子被烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基进一步取代的基团。

作为氨磺酰氨基(-NH-SO₂-NHR)的实例，列举烷基氨磺酰氨基、环烷基氨磺酰氨基、烯基氨磺酰氨基、炔基氨磺酰氨基、芳基氨磺酰氨基、杂芳基氨磺酰氨基、芳烷基氨磺酰氨基等。进一步，与-NH-SO₂-NHR中的N原子结合的2个H原子可以被独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、和芳烷基的取代基取代，此外，这2个取代基可以形成环。

作为包含S原子的取代基，列举硫醇(-SH)、硫代(-S-R)、亚磺酰基(-S＝O-R)、磺酰基(-SO₂-R)、磺基(-SO₃H)等基团。

作为硫代(-S-R)的实例，选自烷基硫代、环烷基硫代、烯基硫代、炔基硫代、芳基硫代、杂芳基硫代、芳烷基硫代等。

作为磺酰基(-SO₂-R)的实例，列举烷基磺酰基、环烷基磺酰基、烯基磺酰基、炔基磺酰基、芳基磺酰基、杂芳基磺酰基、芳烷基磺酰基等。

作为包含N原子的取代基，列举叠氮(-N₃，也称为“叠氮基”)、氰基(-CN)、伯氨基(-NH₂)、仲氨基(-NH-R；也称为单取代氨基)、叔氨基(-NR(R')；也称为二取代氨基)、脒基(-C(＝NH)-NH₂)、取代脒基(-C(＝NR)-NR'R")、胍基(-NH-C(＝NH)-NH₂)、取代胍基(-NR-C(＝NR”')-NR'R")、氨基羰基氨基(-NR-CO-NR'R")、吡啶基、哌啶子基、吗啉代、氮杂环丁烷基等基团。

作为仲氨基(-NH-R；单取代氨基)的实例，列举烷基氨基、环烷基氨基、烯基氨基、炔基氨基、芳基氨基、杂芳基氨基、芳烷基氨基等。

作为叔氨基(-NR(R')；二取代氨基)的实例，例如，列举烷基(芳烷基)氨基等具有分别独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基等的任意2个取代基的氨基，这些任意2个取代基可以形成环。具体地，示例二烷基氨基、特别C₁～C₆二烷基氨基、C₁～C₄二烷基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基等。本说明书中的“C_p～C_q二烷基氨基”指氨基中取代有2个C_p～C_q烷基的基团，两个C_p～C_q烷基可以相同也可以不同。

作为取代脒基(-C(＝NR)-NR'R")的实例，列举N原子上的3个取代基R、R'、和R"分别独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基的基团，例如烷基(芳烷基)(芳基)脒基等。

作为取代胍基(-NR-C(＝NR”')-NR'R")的实例，列举R，R'、R"、和R”'分别独立地选自烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基的基团，或它们形成环的基团等。

作为氨基羰基氨基(-NR-CO-NR'R")的实例，列举R、R'、和R"分别独立地选自氢原子、烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、芳烷基的基团，或它们形成环的基团等。

构成本说明书中肽化合物的“氨基酸残基”有时简单称为“氨基酸”，“肽残基”有时简单称为“肽”。

本说明书中的结合分子可以是其盐，优选其化学或药学上容许的盐。此外，本公开中的结合分子或其盐可以是它们的溶剂化物，优选其化学或药学上容许的溶剂化物。在本公开中的结合分子的盐中，例如，包含：盐酸盐；氢溴酸盐；氢碘酸盐；磷酸盐；膦酸盐；硫酸盐；甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐等磺酸盐；乙酸盐、柠檬酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、琥珀酸盐、水杨酸盐等羧酸盐；或钠盐、钾盐等碱金属盐；镁盐、钙盐等碱土金属盐；铵盐、烷基铵盐、二烷基铵盐、三烷基铵盐、四烷基铵盐等铵盐等。这些盐通过例如使该结合分子与药物制备中可使用的酸或碱接触而制备。在本公开中，结合分子的溶剂化物指溶液中溶质分子强烈吸引溶剂分子、形成一个分子集团的现象，若溶剂是水则称为水合物。作为本公开中的结合分子的溶剂化物，优选水合物，作为这样的水合物，具体地，列举1～10水合物、优选1～5水合物、进一步优选1～3水合物。本公开中的结合分子的溶剂化物不仅包含与水、醇(例如，甲醇、乙醇、1-丙醇、2-丙醇等)、二甲基甲酰胺等单独的溶剂的溶剂化物，也包含与多种溶剂的溶剂化物。

本说明书中的“1个或多个”意味着1个或2个以上的数目。“1个或多个”在与某基团的取代基有关的上下文中应用的情形中，该术语意味着从1个至该基团容许的取代基的最大数目的数目。作为“1个或多个”，具体地，例如，列举1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、和/或比其大的数目。

本说明书中，表示范围的“～”包含其两端的值，例如，“A～B”意味着A以上、并且B以下的范围。

本说明书中，称为“约”的术语在与数值组合使用的情形中，意味着该数值的+10％和-10％的值范围。

本发明中，术语“和/或”的含义包括适当组合“和”与“或”的所有组合。具体地，例如，“A、B、和/或C”包括以下的7种变体：

(i)A、(ii)B、(iii)C、(iv)A和B、(v)A和C、(vi)B和C、(vii)A、B、和C。

结合分子

本公开涉及对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS是5倍以上的结合分子，其具有以下(1)和(2)的特征。

(1)结合分子与前述突变型RAS(G12D)中的Asp12相互作用，和

(2)结合分子与前述突变型RAS(G12D)中的Switch2区相互作用，并且，在前述突变型RAS(G12D)中，存在于前述Switch2区的氨基酸残基与Asp12分子内相互作用。

本公开中的对突变型RAS(G12D)具有选择结合活性的结合分子可以进一步具有以下的特征。

(3)结合分子与突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区相互作用，和/或

(4)在存在于前述Switch2区的氨基酸残基与Asp12分子内相互作用的情形中，在前述突变型RAS(G12D)中，存在于前述Switch2区的Asp69中的α碳原子与存在于前述α3螺旋区的Gln99中的α碳原子之间的距离是15.0埃以下。

此外，本公开涉及具有上述(1)～(4)中记载的特征的结合分子与突变型RAS(G12D)的复合物。另外，本公开中的“结合分子”意味着可与某分子结合的分子。例如，在分子A可与分子B结合的情形中，分子A表示为分子B的结合分子。

本公开中的结合分子是与突变型RAS(G12D)选择性结合的分子。本公开中的突变型RAS(G12D)指野生型RAS中的第12位的氨基酸残基中包含从甘氨酸(Gly)至天冬氨酸(Asp)的突变的RAS。本公开中的突变型RAS(G12D)只要包含第12位的氨基酸残基中甘氨酸(Gly)至天冬氨酸(Asp)的突变，也可以具有其它部位中的氨基酸残基的突变。作为其它部位中的突变，可以示例第13位的氨基酸残基中甘氨酸(Gly)至天冬氨酸(Asp)或缬氨酸(Val)的突变、第59位的氨基酸残基中丙氨酸(Ala)至丝氨酸(Ser)或甘氨酸(Gly)的突变、第61位的氨基酸残基中谷氨酰胺(Gln)至组氨酸(His)、赖氨酸(Lys)或亮氨酸(Leu)的突变、第96位的氨基酸残基中酪氨酸(Tyr)至天冬氨酸(Asp)、亮氨酸(Leu)或丝氨酸(Ser)的突变等。认为具有这样的突变的RAS在体内表达蓄积时，恒定地活化促进细胞的增殖的信号传导途径，癌症变得容易发生。因此，以具有这样的突变的RAS为靶标的化合物期待成为癌症治疗和/或预防中有用的候选化合物。

本公开中的突变型RAS(G12D)的来源没有特别限制，可包含人、小鼠、大鼠、兔、狗、猫、牛、马、猪、山羊、猕猴、食蟹猴、黑猩猩、鸡等各种动物来源的突变型RAS(G12D)，但本公开中的突变型RAS(G12D)优选人来源的突变型RAS(G12D)。作为RAS的同种型，已知NRAS、HRAS、KRAS这3种。人来源的野生型NRAS的氨基酸序列示于序列编号：2，人来源的野生型HRAS的氨基酸序列示于序列编号：3，人来源的野生型KRAS的氨基酸序列示于序列编号：4。

本公开中的突变型RAS(G12D)只要包含这些野生型NRAS、HRAS、KRAS第12位氨基酸残基中甘氨酸(Gly)至天冬氨酸(Asp)的突变则没有限定，优选列举突变型KRAS(G12D)，更优选列举人来源的突变型KRAS(G12D)。人来源的KRAS(G12D)的氨基酸序列示于序列编号：5。

此外，已知RAS与GDP结合的失活状态和与GTP结合的活化状态。本公开中的突变型RAS(G12D)可以是GTP形式、GDP形式的任一种，但优选是GDP形式。

结合选择性/结合活性

在非限定的一个方式中，本公开中的结合分子关于相对于野生型RAS的对突变型RAS(G12D)的结合具有高结合选择性。此外，在非限定的一个方式中，本公开中的结合分子具有对突变型RAS(G12D)的高结合活性。

相对于野生型RAS的对突变型RAS(G12D)的结合选择性可以根据本公开中的结合分子对野生型RAS的结合活性与本公开中的结合分子对突变型RAS(G12D)的结合活性的比求得。作为一个实例，在将与野生型RAS比较情形中对突变型RAS(G12D)的结合选择性定义为[本公开中的结合分子对野生型RAS的解离常数(K_D值)]除以[本公开中的结合分子对突变型RAS(G12D)的解离常数(K_D值)]的值的情形中，如果该值大，意味着对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS高，相反，如果该值小，意味着对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS低。不限于这些，但优选本公开中的结合分子对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS是5倍以上、6倍以上、7倍以上、8倍以上、9倍以上、10倍以上、11倍以上、12倍以上、13倍以上、14倍以上、15倍以上、16倍以上、17倍以上、18倍以上、19倍以上、20倍以上、21倍以上、22倍以上、23倍以上、24倍以上、或25倍以上。结合选择性的上限没有特别限定，例如，可以示例100倍以下、90倍以下、80倍以下、70倍以下、60倍以下、50倍以下、40倍以下、30倍以下、25倍以下、20倍以下或15倍以下。本公开中的结合分子对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS的值可以是通过这些上限和下限的任意组合指定的范围的值。

本公开中的“结合活性”意味着反映结合对的成员(例如，本公开中的结合分子和突变型RAS(G12D)或野生型RAS)间的1:1的相互作用的固有的结合亲和性。

测定结合亲和性和解离常数(K_D)的方法没有特别限定，可应用表面等离子体共振法(BIACORE等)。通过使结合和解离的传感器图同时拟合，应用一对一Langmuir结合模型((one-to-one Langmuir binding model)、Biacore Insight Evaluation Software(GEHealthcare))等，可以算出结合速度常数(kon)和解离速度常数(koff)。解离常数(K_D)作为koff/kon比算出。此外，测定时的温度可以设为30℃，运行缓冲液可以应用包含1mM DTT、10mM MgCl2、0.01％TWeen20、10μM GDP和4％DMSO的HBS(10mM HEPES-NaOH、150mM NaCl、pH7.4)，可以在将Biotin化的Avi标签融合野生型RAS、突变型RAS固定于用Biotin CAPtureReagent涂覆的Sensor Chip CAP(Cytiva)表面的状态下进行测定。

本公开中的结合分子对突变型RAS(G12D)具有高结合活性。具体地，作为本公开中的结合分子对突变型RAS(G12D)的解离常数(K_D)，示例10.0nM以下、9.0nM以下、8.0nM以下、7.0nM以下、6.0nM以下、5.0nM以下、4.0nM以下、3.0nM以下、2.0nM以下、或1.0nM以下等，但不限于这些。

直接交互

在非限定的一个方式中，本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)的Asp12相互作用。因此，本公开中的结合分子可以是可与突变型RAS(G12D)的Asp12相互作用的分子。本公开中，结合分子与突变型RAS(G12D)的Asp12的相互作用优选不经由其它分子的直接相互作用。因此，本公开中的结合分子可以是不经由其它分子等的存在、可与突变型RAS(G12D)的Asp12氨基酸残基直接相互作用的分子。作为其它分子示例水分子，但不限于这些。

在本公开中，将结合分子与突变型RAS(G12D)的Asp12相互作用的情况称为“直接交互(Direct Interraction)”。本公开中的结合分子可以是可引起与突变型RAS(G12D)的Asp12之间的直接交互的分子。

在本公开中，在结合分子与突变型RAS(G12D)的Asp12之间产生直接交互的情形中，与突变型RAS(G12D)的Asp12所包含的羧基的2个氧原子中的一个氧原子的原子间距离最短的结合分子中存在的非氢原子(以下，有时称为“直接交互原子”)与构成Asp12的原子之间的距离可以是4.50埃以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、或它们以下，但不限于这些。作为直接交互原子，例如，列举氟原子、氯原子、溴原子、碘原子、乙炔基的末端炔的氢侧的碳原子、或胺基的氮原子。这些原子或取代基可以与构成结合分子的骨架直接结合，也可以经由任选被取代的直链状或支链状的亚烷基、任选被取代的环亚烷基、任选被取代的环烷基、任选被取代的亚芳基、和/或任选被取代的芳基结合。构成这些直链状或支链状的亚烷基、环亚烷基、环烷基、亚芳基、或烷基的碳原子的一部分可以被其它原子置换。作为这样的其它原子，优选氧原子、氮原子、磷原子、硫原子，更优选碳原子、氧原子、氮原子。构成该亚烷基的骨架的原子数优选1以上且6以下，构成该环亚烷基、该环烷基、该亚芳基、或该芳基的环状部分的原子数优选3以上且8以下。此外，选自该亚烷基、该环亚烷基、该环烷基、该亚芳基、和该芳基的任意2个、3个、4个、或5个基团可以互相结合。

作为直接交互原子，更具体地，列举在苯丙氨酸的苯基的3位取代的碘原子、或在苯丙氨酸的苯基的3位取代的乙炔基的末端炔的氢侧的碳原子、或位于哌嗪基的4位的氮原子。此外，上述原子间距离优选下列中较短的距离：在结合分子所包含的苯丙氨酸的苯基的3位取代的碘原子、在苯丙氨酸的苯基的3位取代的乙炔基的末端炔的氢侧的碳原子、或位于哌嗪基的4位的氮原子、与突变型RAS(G12D)的Asp12所包含的羧基的2个氧原子中一个氧原子的原子间距离；和在结合分子所包含的苯丙氨酸的苯基的3位取代的碘原子、在苯丙氨酸的苯基的3位取代的乙炔基的末端炔的氢侧的碳原子、或位于哌嗪基的4位的氮原子与突变型RAS(G12D)的Asp12所包含的羧基的2个氧原子中另一个氧原子的原子间距离。

另外，在1个或多个氢原子与直接交互原子结合的情形中，在直接交互原子和与该直接交互原子结合的1个或多个氢原子中，优选与构成突变型RAS(G12D)的Asp12所包含的羧基的原子最强相互作用的原子是结合分子与突变型RAS(G12D)的Asp12之间产生直接交互的原子。即，直接交互原子和产生直接交互的原子不一定相同。例如，在苯丙氨酸的苯基的3位取代的碘原子是直接交互原子的情形中，优选碘原子是产生直接交互的原子，在苯丙氨酸的苯基的3位取代的乙炔基的末端炔的氢侧的碳原子是直接交互原子的情形中，优选乙炔基的末端炔的氢原子是产生直接交互的原子，在位于哌嗪基的4位的氮原子是直接交互原子的情形中，优选与该氮原子结合的氢是产生直接交互的原子。

本公开中的结合分子可具有可引起与突变型RAS(G12D)的Asp12之间直接交互的结构。在本公开中，可引起与突变型RAS(G12D)的Asp12之间直接交互的结构没有特别限定，从更容易引起与Asp12的直接交互的观点出发，可以示例为＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-X、或＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-(C₆～C₁₀亚芳基)-X的结构(1)。此处，X是羟基、Cl、Br、I、-NR_AR_B(此处，R_A和R_B都是氢、或分别独立地是C₁～C₃烷基、或R_A和R_B与它们结合的氮原子一起形成包含选自由N、O、和S组成的组中的1～3个杂原子的4～8元杂环)、C₁～C₃烷基、C₁～C₃卤烷基、-C≡CH、或任选被取代的C₃～C₈环烷基，＊意味着结合点。但是，在结合分子包含＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-X的情形中，X不含C₁～C₃烷基。

另外，上述结构(1)可能与容易引起Switch2区中存在的氨基酸残基与Asp12的分子内相互作用的效果有关。

作为结构(1)的更优选方式，可以示例-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-(C₆～C₁₀亚芳基)-是苄基或苯乙基、X是苯基的3位的乙基、环丙基、Cl、Br、I、或-C≡CH的方式，进一步优选X是苯基的3位的I、或-C≡CH的方式等。

作为结构(1)，特别优选地，可以示例以下：

此外，作为结构(1)，进一步优选地，可以示例以下：

在非限定的一个方式中，作为与直接交互有关的突变型RAS(G12D)的Asp12中包含的原子，可以示例羧基的2个氧原子。

此外，在非限定的一个方式中，在本公开中的结合分子是肽化合物的情形中，该肽化合物包含与突变型RAS(G12D)的Asp12相互作用的1个或多个氨基酸残基。从更容易引起与Asp12的直接交互的观点出发，该氨基酸残基优选α氨基酸残基。更具体地，可以示例在侧链具有结构(1)的α氨基酸残基。

结合分子与Switch2区的相互作用

在非限定的一个方式中，本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)中的Switch2区相互作用。本公开中的Switch2区包含由序列编号：6表示的、突变型RAS(G12D)中的Ala59～Glu76。优选地，本公开中的Switch2区由突变型RAS(G12D)中的Ala59～Glu76组成。因此，本公开中的结合分子可以是可与选自由突变型RAS(G12D)中的Switch2区的Ala59～Glu76组成的组中的任一个以上氨基酸残基相互作用的结合分子。

在非限定的一个方式中，从容易引起与Switch2区的相互作用的观点出发，本公开中的结合分子可以是：与选自由Switch2区的Gln61～Met72(序列编号：7中记载的氨基酸序列)组成的组中的一个以上(1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、或11个)的氨基酸残基相互作用的分子、或与选自由Switch2区的Gln61～Arg73(序列编号：10中记载的氨基酸序列)组成的组中的一个以上(1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、或13个)的氨基酸残基相互作用的分子。此外，从同样的观点出发，本公开中的结合分子优选可以是与选自由Switch2区的Gln61、Glu62、Arg68、Asp69、Met72和Arg73组成的组中的一个以上(1个、2个、3个、4个、5个、或6个)的氨基酸残基相互作用的分子。此外，从同样的观点出发，本公开中的结合分子优选可以是与选自由Switch2区的Gln61、Glu62、Arg68、Asp69和Met72组成的组中的一个以上(1个、2个、3个、或4个或5个)的氨基酸残基相互作用的分子。此外，从同样的观点出发，本公开中的结合分子更优选可以是与Switch2区的Gln61相互作用的分子。特别地，在本公开中的结合分子是肽化合物的情形中，该肽化合物优选包含与突变型RAS(G12D)的Switch2区中这些氨基酸残基相互作用的1个或多个氨基酸残基。此外，从容易引起与Switch2区的相互作用的观点出发，该氨基酸残基优选α氨基酸残基。

作为这样的结合分子，更具体地，可以示例：具有与Switch2区中Gln61、Glu62、Arg68、和Met72的1个或多个(例如2个、3个、或4个)相互作用的1个或多个(例如2个、3个、或4个)氨基酸残基的分子，具有与Gln61、Arg68、和Met72的1个或多个(例如2个、或3个)相互作用的1个或多个(例如2个、或3个)氨基酸残基的分子，具有与Gln61、Glu62、Arg68、Asp69、和Met72的1个或多个(例如2个、3个、4个、或5个)相互作用的1个或多个(例如2个、3个、4个、或5个)氨基酸残基的分子，以及具有与Gln61、Glu62、Arg68、Asp69、Met72、和Arg73的1个或多个(例如2个、3个、4个、5个、或6个)相互作用的1个或多个(例如2个、3个、4个、5个、或6个)氨基酸残基的分子，但不限于这些。

在非限定的一个方式中，由于本公开中的结合分子与Switch2区的Gln61的相互作用能是大的负值，知晓结合分子与Switch2区强相互作用。在非限定的一个方式中，从容易引起与Switch2区的相互作用的观点出发，在本公开中的结合分子是具有与Switch2区的Gln61相互作用的氨基酸残基的肽化合物的情形中，该肽化合物的全部原子各自与Gln61氨基酸残基的全部原子(构成主链的原子和构成侧链的原子两者)各自之间的相互作用能的总和可以是例如-7.0kcal/mol以下、优选-10kcal/mol以下、更优选-11.0kcal/mol以下、进一步优选-13.0kcal/mol以下、进一步优选-15.0kcal/mol以下、进一步优选-16.0kcal/mol以下、进一步优选-18.0kcal/mol以下、进一步优选-19.0kcal/mol以下、特别优选-20.0kcal/mol以下，但不限于这些。本公开的相互作用能可以是通过能计算中应用的程序自动优化氢原子的坐标后计算的那种、不优化氢原子的坐标计算的那种的任一种，优选优化氢原子的坐标后计算的那种。

此外，从容易引起与Switch2区的相互作用的观点出发，结合分子与突变型RAS(G12D)的Switch2区之间的相互作用优选不经由其它分子的相互作用。

结合分子与α3螺旋区的相互作用

在非限定的一个方式中，本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)的α3螺旋区相互作用。本公开中的突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区包含由序列编号：8表示的、突变型RAS(G12D)中的Thr87～Lys104。优选地，本公开中的α3螺旋区由突变型RAS(G12D)中的Thr87～Lys104组成。因此，本公开中的结合分子可以是可与由突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区的Thr87～Lys104组成的氨基酸残基相互作用的结合分子。

在非限定的一个方式中，从容易引起结合分子与α3螺旋区的相互作用的观点出发，本公开中的结合分子可以是与选自由突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区的Thr87～Lys104组成的组中的任一个以上(1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、或18个)的氨基酸残基相互作用的分子。此外，本公开中的结合分子优选可以是与选自由α3螺旋区的His95～Val103(序列编号：9)组成的组中的任一个以上(1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、或9个)的氨基酸残基相互作用的分子。此外，本公开中的结合分子进一步优选可以是与选自由α3螺旋区的His95、Tyr96、Gln99、Arg102、和Val103组成的组中的任一个以上(1个、2个、3个、4个、或5个)的氨基酸残基相互作用的分子，特别优选可以是与α3螺旋区的Gln99相互作用的分子。

特别地，在本公开中的结合分子是肽化合物的情形中，该肽化合物包含与突变型RAS(G12D)的α3螺旋区中这些氨基酸残基相互作用的1个或多个氨基酸残基。从容易引起结合分子与α3螺旋区的相互作用的观点出发，该氨基酸残基优选α氨基酸残基。

作为这样的结合分子，更具体地，可以示例：具有与α3螺旋区中His95、Tyr96、Gln99、Arg102、和Val103的1个或多个(例如2个、3个、4个、或5个)相互作用的1个或多个(例如2个、3个、4个、或5个)氨基酸残基的分子，具有与His95、Tyr96、Gln99、和Val103的1个或多个(例如2个、3个、或4个)相互作用的1个或多个(例如2个、3个、或4个)氨基酸残基的分子，具有与His95、Tyr96、Gln99、Arg102、和Val103的1个或多个(例如2个、3个、4个、或5个)相互作用的1个或多个(例如2个、3个、4个、或5个)氨基酸残基的分子，但不限于这些。

此外，从容易引起与α3螺旋区的相互作用的观点出发，结合分子与突变型RAS(G12D)的α3螺旋区之间的相互作用优选不经由其它分子的相互作用。

Switch2区与α3螺旋区的相互作用

在非限定的一个方式中，在本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)形成复合物的情形中，在突变型RAS(G12D)中，Switch2区与α3螺旋区接近。具体地，存在于突变型RAS(G12D)的Switch2区的Asp69中的α碳原子与α3螺旋区内存在的Gln99中的α碳原子之间的距离接近至约15.0埃以下、优选约/>以下、更优选约/>以下、进一步优选约/>以下、特别优选约/>以下。在本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)形成复合物的情形中，存在于突变型RAS(G12D)中Switch2区的Asp69中的α碳原子与α3螺旋区内存在的Gln99中的α碳原子之间的距离如此接近被认为容易引起存在于Switch2区的氨基酸残基与Asp12的分子内相互作用，是本公开中的结合分子的特征之一。因此，本公开中的结合分子可以是可使突变型存在于RAS(G12D)中Switch2区的Asp69中的α碳原子与α3螺旋区内存在的Gln99中的α碳原子之间的距离接近至15.0埃/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、或/>以下的分子。

预定位

在非限定的一个方式中，在本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)形成复合物的情形中，具体地，在本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)的Switch2区相互作用的情形中，在突变型RAS(G12D)中，发生存在于Switch2区的氨基酸残基与Asp12之间的分子内相互作用。将本公开中的这样的相互作用称为“预定位(Pre-orientation)”。在非限定的一个方式中，从将结合分子对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS更提高的观点出发，本公开中的Switch2区中存在的氨基酸残基与Asp12之间的分子内相互作用优选不经由其它分子的相互作用。此外，在非限定的一个方式中，从同样的观点出发，与Asp12相互作用的Switch2区内存在的氨基酸残基优选选自Ala59、Gly60、Gln61、和Glu62的任一个以上(1个、2个、3个、或4个)。从同样的观点出发，构成这些氨基酸残基中至少1个、至少2个、至少3个、或4个氨基酸残基的非氢原子优选在距Asp12的羧基的2个氧原子的任一者或两者约4.5埃以内存在。作为具有这样的非氢原子的氨基酸残基，可以示例Ala59、Gly60、和Gln61的组合。

从将结合分子对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS更提高的观点出发，在本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)的复合物中，在突变型RAS(G12D)中的Ala59、Gly60、Gln61和Glu62之中存在1个或多个具有一个以上距Asp12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个约4.5埃以内存在的非氢原子的氨基酸残基的情形中，构成该1个或多个氨基酸残基的主链的全部原子各自与Asp12的全部原子各自的相互作用能的总和例如可以是-0.5kcal/mol以下、-1.0kcal/mol以下、-3.0kcal/mol以下、-5.0kcal/mol以下、-7.5kcal/mol以下、-10.5kcal/mol以下、-13.0kcal/mol以下、-15.0kcal/mol以下、-15.5kcal/mol以下、-16.0kcal/mol以下、-16.5kcal/mol以下、-17.0kcal/mol以下、-17.5kcal/mol以下、或-18.0kcal/mol以下，但不限于这些。相互作用能的总和可以是通过能计算中应用的程序自动优化氢原子的坐标后计算的那种、不优化氢原子的坐标计算的那种的任一种，优选优化氢原子的坐标后计算的那种。

此外，从将结合分子对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS更提高的观点出发，在本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)的复合物中，在突变型RAS(G12D)中的Ala59、Gly60、Gln61和Glu62之中存在1个或多个具有一个以上距Asp12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个约4.5埃以内存在的非氢原子的氨基酸残基的情形中，构成该1个或多个氨基酸残基的全部原子(例如，构成主链的全部原子和构成侧链的全部原子)各自与Asp12的全部原子各自的相互作用能的总和例如可以是-0.5kcal/mol以下、-1.0kcal/mol以下、-3.0kcal/mol以下、-5.0kcal/mol以下、-7.5kcal/mol以下、-10.5kcal/mol以下、-13.0kcal/mol以下、-14.0kcal/mol以下、-15.0kcal/mol以下、-15.5kcal/mol以下、-16.0kcal/mol以下、-16.5kcal/mol以下、-17.0kcal/mol以下、-17.5kcal/mol以下、或-18.0kcal/mol以下，但不限于这些。相互作用能的总和可以是通过能计算中应用的程序自动优化氢原子的坐标后计算的那种、不优化氢原子的坐标计算的那种的任一种，优选优化氢原子的坐标后计算的那种。

在非限定的一个方式中，是否产生“预定位”、和产生的“预定位”的强度可以通过以下的阶段判定。

(I)确定突变型RAS(G12D)中的Ala59、Gly60、Gln61和Glu62之中，这些氨基酸残基所包含的1个或多个非氢原子距Asp12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个4.5埃以内的氨基酸残基的阶段。在该阶段中存在前述确定的氨基酸残基的情形中，知晓产生“预定位”。

(II)算出构成阶段(I)中确定的1个或多个氨基酸残基的主链或主链和侧链的全部原子各自与Asp12的全部原子各自的相互作用能的总和的阶段，和

(III)(i)在将构成阶段(I)中确定的1个或多个氨基酸残基的主链的全部原子作为相互作用能的对象的情形中，相互作用能的总和是-0.5kcal/mol以下、-1.0kcal/mol以下、-3.0kcal/mol以下、-5.0kcal/mol以下、-7.5kcal/mol以下、-10.5kcal/mol以下、-13.0kcal/mol以下、-15.0kcal/mol以下、-15.5kcal/mol以下、-16.0kcal/mol以下、-16.5kcal/mol以下、-17.0kcal/mol以下、-17.5kcal/mol以下、或-18.0kcal/mol以下的情形中，判定为产生强预定位的阶段，或(ii)在将构成阶段(I)中确定的1个或多个氨基酸残基的主链和侧链的全部原子作为相互作用能的对象的情形中，相互作用能的总和是-0.5kcal/mol以下、-1.0kcal/mol以下、-3.0kcal/mol以下、-5.0kcal/mol以下、-7.5kcal/mol以下、-10.5kcal/mol以下、-13.0kcal/mol以下、-14.0kcal/mol以下、-15.0kcal/mol以下、-15.5kcal/mol以下、-16.0kcal/mol以下、-16.5kcal/mol以下、-17.0kcal/mol以下、-17.5kcal/mol以下、或-18.0kcal/mol以下的情形中，判定为产生强预定位的阶段。

即，在阶段(I)中，在相互作用能的总和的算出中应用的氨基酸残基的确定中，利用Ala59、Gly60、Gln61、和Glu62中包含的非氢原子，另一方面，在阶段(II)中，相互作用能的总和的算出自身利用构成主链、或主链和侧链的全部原子，其中也包含氢原子。

本公开中的结合分子可以是可引起突变型RAS(G12D)中预定位的分子。此外，本公开中的结合分子可具有可引起突变型RAS(G12D)中预定位的结构。在本公开中，可引起突变型RAS(G12D)中预定位的结构没有特别限定，可以示例为＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-Y的结构(2)。此处，Y是任选被取代的C₁～C₁₀烷基、任选被取代的C₂～C₁₀烯基、任选被取代的C₂～C₁₀炔基、任选被取代的C₁～C₆烷氧基C₁～C₆烷基、任选被取代的C₆～C₁₀芳基、或任选被取代的C₃～C₈环烷基，＊意味着结合点。

作为结构(2)的更优选方式，示例＊-(CH₂)-Y、＊-(CH₂)₂-Y等，此处，Y是被C₃～C₈烷基、C₃～C₈环烷基、C₃～C₈烯基、或C₁～C₆烷氧基任选取代的C₆～C₁₀芳基。

作为结构(2)，特别优选地，可以示例以下：

此外，本公开中的结合分子可以包含下述的结构(3)，作为可引起突变型RAS(G12D)中预定位的结构。

(式中，

除了R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形之外，P₉是氢或C₁～C₃烷基，Q₉是氢或C₁～C₆烷基，

＊意味着结合点。)

在某一方式中，R₉优选C₁～C₄烷基、苯基C₁～C₂烷基、C₁～C₃烷氧基C₁～C₂烷基。此外，在R₉是C₁～C₄烷基、例如甲基的情形中，Q₉优选C₁～C₄烷基，更优选甲基。在R₉是苯基C₁～C₂烷基、或C₁～C₃烷氧基C₁～C₂烷基的情形中，Q₉优选氢。P₉优选甲基。

在某一方式中，在R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形中，作为该4～7元饱和杂环，优选氮杂环丁烷环、吡咯烷环、哌啶环，更优选吡咯烷环。在R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形中，Q₉优选C₁～C₆烷基，更优选甲基。

作为结构(3)，特别优选地，可以示例以下：

此外，从容易同时引起直接交互和预定位的观点出发，对于本公开中的结合分子，结构(1)中的X所包含的原子中距结构(1)的结合点最远的原子与结构(2)中的Y所包含的原子中距结构(2)的结合点最远的原子优选经由20个以内(例如19个、18个、17个、16个、15个、14个、或其以下)的原子结合。

此外，从容易同时引起直接交互和预定位的观点出发，对于本公开中的结合分子，除了R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形之外，结构(1)中的X所包含的原子中距结构(1)的结合点最远的原子与结构(3)中的R₉所包含的原子中距结构(3)中与Q₉和R₉结合的碳原子最远的原子优选经由25个以内(例如24个、23个、22个、21个、20个、19个、18个、17个、16个、或其以下)的原子结合。

本公开中的“相互作用”包含突变型RAS(G12D)与结合分子相互作用的状态，其中，形成突变型RAS(G12D)的氨基酸残基中侧链或主链的原子、和构成本公开中的结合分子的原子以可提供以下的(1)～(4)的各特征的至少1个、优选2个、更优选3个、特别优选4个的原子间距离，或可提供以下的(1)～(4)的各特征的至少1个、优选2个、更优选3个、特别优选4个的原子间能相互作用。

(1)结合分子与突变型RAS(G12D)中的Asp12相互作用。

(2)结合分子与突变型RAS(G12D)中的Switch2区相互作用，并且，在突变型RAS(G12D)中，存在于Switch2区的氨基酸残基与Asp12分子内相互作用。

(3)结合分子与突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区相互作用。

(4)在存在于Switch2区的氨基酸残基与Asp12分子内相互作用的情形中，在突变型RAS(G12D)中，存在于Switch2区的Asp69中的α碳原子与存在于α3螺旋区的Gln99中的α碳原子之间的距离是15.0埃以下。

另外，在构成突变型RAS(G12D)的氨基酸残基之中，哪一氨基酸残基与结合分子相互作用可通过本领域技术人员公知的方法判定。作为一个实例，如果使用在Discoverystudio 2020Client、MOE(Molecular Operating Environment)、Maestro等分子建模或分子模拟中应用的软件程序中读入本公开中的结合分子和突变型RAS(G12D)的复合物的结构信息、并入软件程序的功能(例如，在Discovery studio 2020Client的情形中，展示受体-配体相互作用(Display receptor-ligand interactions)功能)，可判定构成突变型RAS(G12D)的氨基酸残基中哪一氨基酸残基与结合分子相互作用。此外，使用的软件以哪种条件、基准判断相互作用的有无的细节可以用软件所附说明书、规格书等确认(例如，在Discovery studio 2020Client的情形中，通过从帮助按钮打开规格书的WeB页，选择“受体-配体相互作用工具(Receptor-Ligand Interactions tools)”，进一步选择“理论-受体-配体相互作用(Theory-Receptor-Ligand Interactions)”，进一步选择“非结合相互作用(Non-bond Interactions)”，可以确认以哪种条件、基准判断相互作用的有无的细节)。

本公开中的“相互作用”意味着示例为静电相互作用(包含离子键、氢键和偶极子相互作用)、范德华相互作用(包含疏水性相互作用)等的非共价结合性相互作用。本公开中的相互作用可以是经由水分子等其它分子的那种，也可以是不经由水分子等其它分子的那种，优选不经由水分子等其它分子的相互作用。

在本公开中，突变型RAS(G12D)的特定氨基酸残基中包含的非氢原子、和与其相互作用的分子中包含的非氢原子是否相互作用可以通过双方的非氢原子的原子间距离(在经由水分子等其它分子的结合的情形中，忽略该其它分子的双方的非氢原子的原子间距离)判定。作为一个实例，在原子间距离是4.6埃以下的情形中，可以判定为双方的非氢原子具有相互作用。在几个方式中，相互作用的2个非氢原子的原子间距离例如可以是/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下、或/>以下。此外，可以是以上、/>以上或/>以上。

但是，在双方的非氢原子中任一方或双方具有电荷的情形中，作为一个实例，在原子间距离是以下的情形中，可以判定为双方的非氢原子具有相互作用。该情形中，在几个方式中，相互作用的2个非氢原子的原子间距离例如可以是/>以下、/>以下、以下、/>以下、/>以下、/>以下、/>以下或/>以下。

本公开中的原子间距离例如可以通过突变型RAS(G12D)与本公开中的结合分子的复合物的三维结构的分析测定。具体地，配制突变型RAS(G12D)和本公开中的结合分子的复合物的晶体。进行该晶体的X线衍射，取得空间群、晶胞等X线衍射强度数据。如果将取得的X线衍射强度数据用于Coot(Emsley,P.et al.,2010)、Phenix(Adams,P.D.et al.,2010)、Phaser(J.Appl.Cryst.40:658-674(2007))、Refmac5(Acta Cryst.D67:355-467(2011))和ARP/wARP(Cohen,S.X.et al.,2008)等本领域技术人员公知的用于确定初始结构或精密结构的程序，可以确定突变型RAS(G12D)与本公开中的结合分子的复合物的三维结构。

如果可以确定突变型RAS(G12D)与本公开中的结合分子的复合物的三维结构，可通过本领域技术人员公知的方法测定原子间距离。作为一个实例，如果使用在Discoverystudio 2020Client、MOE(Molecular Operating Environment)、Maestro等分子建模或分子模拟中应用的软件程序中读入本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)的复合物的结构信息、并入软件程序的功能(例如，在Discovery studio 2020Client的情形中，距离监测功能)，可测定原子间距离。此外，使用的软件以哪种条件、基准判断相互作用的有无的细节可以用软件所附说明书、规格书等确认(例如，在Discovery studio 2020Client的情形中，通过从帮助按钮打开规格书的WeB页，选择“受体-配体相互作用工具(Receptor-LigandInteractions tools)”，进一步选择“理论-受体-配体相互作用(Theory-Receptor-LigandInteractions)”，进一步选择“非结合相互作用(Non-bond Interactions)”，可以确认以哪种条件、基准判断相互作用的有无的细节)。

突变型RAS(G12D)与本公开中的结合分子的复合物的晶体也可以通过本领域技术人员公知的方法取得。例如，混合包含本公开中的结合分子的溶液和包含突变型RAS(G12D)的溶液，取得突变型RAS(G12D)与本公开中的结合分子的复合物。通过将得到的复合物供给蒸气扩散法、分批法(大量分批法，微分批法)、透析法、反扩散法等本领域技术人员公知的结晶化方法，可以配制突变型RAS(G12D)与本公开中的结合分子的复合物的晶体。作为蒸气扩散法，已知坐滴法、悬滴法、夹心滴法。

另外，突变型RAS(G12D)也可以通过本领域技术人员公知的方法取得。例如，可以利用应用细胞的重组多肽表达方法配制突变型RAS(G12D)，但不限于此。在一个方式中，将编码本公开中的突变型RAS(G12D)的核酸插入适当的表达载体，将该载体导入适当的细胞，培养转化细胞，将表达的改变的蛋白分离、纯化、培养。以容易纯化等目的，这样的蛋白也可作为与其它蛋白的融合蛋白表达。例如，可利用：以大肠杆菌为宿主配制为与麦芽糖结合蛋白的融合蛋白的方法(美国New England BioLabs公司发售的载体pMAL系列)、配制为与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的融合蛋白的方法(Amersham Pharmacia Biotech公司发售的载体pGEX系列)、附加组氨酸标签配制的方法(Novagen公司的pET系列)和附加HAT标签配制的方法等。作为宿主细胞，只要是适于重组蛋白的表达的细胞则没有特别限制，除上述的大肠杆菌外，例如，也可利用酵母、各种动植物细胞、昆虫细胞等。载体向宿主细胞的导入可应用本领域技术人员公知的各种方法。例如，向大肠杆菌的导入可以应用利用钙离子的导入方法(Mandel,M.,Higa，A.(1970)Journal of Molecular Biology，53，158-162、Hanahan，D.(1983)Journal of Molecular Biology，166,557-580)。在宿主细胞内表达的蛋白可通过本领域技术人员公知的方法从该宿主细胞或其细胞培养物或培养上清纯化、回收。在将蛋白表达为与上述的麦芽糖结合蛋白、HAT标签等的融合蛋白的情形中，可容易地进行亲和纯化、凝胶过滤色谱(尺寸排阻色谱、SEC)纯化。亲和色谱纯化和SEC纯化可以应用AKTAxpress(商标)装置(GE Healthcare)或NGC(商标)色谱系统(Bio-Rad)或BioLogic DuoFlow(商标)色谱系统(Bio-Rad)等。

原子间能也可通过本领域技术人员公知的方法测定。作为一个实例，如果在Discovery studio 2020Client、MOE(Molecular Operating Environment)、Maestro等本领域技术人员公知的分子模拟程序中读入测定对象的物质的三维结构，按该程序的指示，选择计算中使用的力场(例如Amber、CHARM等)、作为能计算的对象的原子，则可以容易地计算。例如，在Discovery studio 2020Client的情形中，可以应用Calculate InteractionEnergy功能计算原子间能。在该情形中，可以通过能计算中应用的程序自动优化氢原子的坐标后计算。本说明书中，在优化氢原子的坐标后计算的原子间能、和不优化氢原子的坐标计算的原子间能有差异的情形中，采用优化氢原子的坐标后计算的原子间能作为原子间能。

在非限定的一个方式中，在本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)的复合物中，本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)中的Asp12相互作用(直接交互)。

在非限定的一个方式中，在本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)的复合物中，本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)中的Switch2区相互作用。而且，构成突变型RAS(G12D)中Switch2区的原子(具体地，Asp69中的α碳原子)与构成α3螺旋区的原子(具体地，氨基酸残基Gln99中的α碳原子)接近。这被认为与构成突变型RAS(G12D)中Switch2区的氨基酸残基(例如Gln61)与Asp12在分子内相互作用相关(预定位)。

尽管不受特定理论的约束，但本公开中的结合分子与突变型RAS(G12D)以这样的方式形成复合物被认为与本公开中的结合分子对突变型RAS(G12D)的大结合活性和结合选择性的贡献有关。

在非限定的一个方式中，从将结合分子对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS更提高的观点出发，本公开中的结合分子的分子量优选5000以下、更优选3000以下、进一步优选2500以下、进一步优选2300以下、进一步优选2000以下、优选500以上、更优选800以上、进一步优选1000以上。例如，肽化合物的分子量可优选500以上5000以下、更优选800以上3000以下、进一步优选1000以上2000以下。

在非限定的一个方式中，对于本公开中的结合分子的ClogP，肽化合物的CLogP优选25以下、更优选22以下、进一步优选20以下、进一步优选18以下、进一步优选16以下、进一步优选15以下、优选5以上、更优选10以上、进一步优选12以上。例如，肽化合物的CLogP可优选5以上25以下、更优选10以上20以下、进一步优选12以上18以下。本说明书中的ClogP是用计算机计算的分配系数，可以应用Daylight Chemical Information Systems，Inc.的Daylight Version 4.9计算。

在非限定的一个方式中，在本公开中的结合分子是肽化合物的情形中，肽化合物的ClogP/总aa优选1.0以上，更优选1.1以上，进一步优选1.2以上，优选示例1.8以下、1.7以下、1.6以下、1.5以下，示例1.0以上且1.8以下、1.0以上且1.7以下、1.1以上且1.6以下、和1.1以上且1.5以下。本说明书中的“总aa”(也记为“总AA”)意味着构成肽化合物的氨基酸的数目。

在非限定的一个方式中，本公开中的结合分子包含低分子化合物、肽化合物、多肽、蛋白、抗体、碳水化合物、核酸、和它们的衍生物，但不限于这些。此外，在非限定的一个方式中，本公开中的结合分子也包含其盐、或它们的溶剂化物。本公开中的结合分子可以是肽化合物，肽化合物可以是环状肽化合物。在几个方式中，本公开中的肽化合物可包含1个或多个天然氨基酸残基和非天然氨基酸残基。这些氨基酸的比率没有特别限定。本公开中的非天然氨基酸残基可以是N取代氨基酸残基。即，本公开中的肽化合物可以含有1个或多个N取代氨基酸残基。N取代氨基酸优选可以是N-烷基氨基酸，更优选N-甲基氨基酸。或者，N取代氨基酸优选可以是如脯氨酸的、与N原子结合的碳链与α位的碳原子形成环的那种。

在几个方式中，从将结合分子对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS更提高的观点出发，本公开中的肽化合物所包含的氨基酸残基的总数可以优选4以上、更优选5以上、进一步优选6以上、进一步优选8以上、进一步优选9以上、进一步优选10以上，优选30以下、更优选20以下、进一步优选15以下、进一步优选14以下、进一步优选13以下、进一步优选12以下，最优选11。在某一方式中，对于本公开中的环状肽化合物，环状部分所包含的氨基酸的总数可以优选5以上、更优选7以上、进一步优选8以上、进一步优选9以上、进一步优选10以上，优选15以下、更优选13以下、进一步优选12以下，最优选11。

在几个方式中，在本公开中的环状肽化合物具有直链部分的情形中，该直链部分的氨基酸残基的数目优选0以上17以下，更优选0以上8以下，进一步优选0以上5以下，特别优选0以上3以下。另外，在非限定的一个方式中，本说明书中的“直链部分”有时包含天然氨基酸残基、非天然氨基酸残基(包含化学修饰、骨架改变的氨基酸)。

在非限定的一个方式中，本公开中的肽化合物所包含的非天然氨基酸的数目优选3以上，更优选4以上、5以上、或6以上，进一步优选7以上，进一步优选8以上，特别优选9以上，此外，优选示例20以下、15以下、14以下、13以下、12以下、10以下。作为本公开中的肽化合物中包含的非天然氨基酸的数目，示例肽化合物中包含的氨基酸的数目的30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上。

在非限定的一个方式中，本公开中的肽化合物所包含的N取代氨基酸残基的数目优选3以上，更优选4以上、5以上、或6以上，进一步优选7以上，此外，优选示例20以下、15以下、14以下、13以下、12以下、10以下、9以下、8以下。作为本公开中的肽化合物所包含的N取代氨基酸的数目，示例构成肽化合物的氨基酸的数目的30％以上、40％以上、50％以上、60％以上。

在非限定的一个方式中，本公开中的肽化合物所包含的N取代氨基酸残基以外的非天然氨基酸残基的数目优选3以上，更优选4以上、5以上、或6以上，进一步优选7以上，特别优选8以上，此外，优选示例20以下、15以下、14以下、13以下、12以下、10以下、9以下。作为本公开中的肽化合物所包含的N取代氨基酸的数目，示例构成肽化合物的氨基酸的数目的30％以上、40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上。

在几个方式中，在本公开中的结合分子是肽化合物的情形中，该肽化合物可以具有本公开中的结构(1)和结构(2)经由酰胺键连接的以下的结构(4)。

式中：

P₇是氢或C₁～C₃烷基，

R₈是-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-Y，

P₈是氢或C₁～C₃烷基。

作为R₇和X的优选方式，可以示例R₇是苄基或苯乙基、并且X是苯基的3位的乙基、环丙基、Cl、Br、I、或-C≡CH的方式，进一步优选R₇是苄基或苯乙基、并且X是苯基的3位的I、或-C≡CH的方式等。在任一方式中，P₇优选氢或甲基。

R₈优选-(CH₂)-Y或-(CH₂)₂-Y，Y优选被C₃～C₈烷基、C₃～C₈环烷基、C₃～C₈烯基、或C₁～C₆烷氧基任选取代的C₆～C₁₀芳基。P₈优选氢或甲基。

在A₇和/或A₈是氨基酸残基的情形中，该氨基酸残基可以是任意的天然或非天然氨基酸残基。

在A₇和/或A₈是肽残基的情形中，该肽残基由任意的种类和数目的天然和/或非天然氨基酸残基构成。作为构成肽残基的氨基酸残基的数目，优选2～13，更优选2～9。

在某一方式中，A₇和A₈可连接。A₇和A₈连接形成的肽残基可以包含任意的数目和种类的天然和/或非天然氨基酸残基。该肽残基优选由5～15个氨基酸残基组成，更优选由8个或9个氨基酸残基组成。

作为结构(4)，特别优选地，可以示例以下：

此外，在非限定的一个方式中，在本公开中的结合分子是肽化合物的情形中，该肽化合物可以具有本公开中的结构(2)和结构(3)经由酰胺键连接的以下的结构(5)。

/>

式中，

R₈是-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-Y，

P₈是氢或C₁～C₃烷基，

Q₉是氢或C₁～C₆烷基。

R₉优选C₁～C₄烷基、苯基C₁～C₂烷基、C₁～C₃烷氧基C₁～C₂烷基。此外，在R₉是C₁～C₄烷基、例如甲基的情形中，Q₉优选C₁～C₄烷基，更优选甲基。在R₉是苯基C₁～C₂烷基、或C₁～C₃烷氧基C₁～C₂烷基的情形中，Q₉优选氢。P₉优选甲基。

在R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形中，作为该4～7元饱和杂环，优选氮杂环丁烷环、吡咯烷环、哌啶环，更优选吡咯烷环。在R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形中，Q₉优选C₁～C₆烷基，更优选甲基。

在A₈和/或A₉是氨基酸残基的情形中，该氨基酸残基可以是任意的天然或非天然氨基酸残基。

在A₈和/或A₉是肽残基的情形中，该肽残基由任意的种类和数目的天然和/或非天然氨基酸残基构成。作为构成肽残基的氨基酸残基的数目，优选2～13，更优选2～9。

在某一方式中，A₈和A₉可连接。A₈和A₉连接形成的肽残基可以包含任意的数目和种类的天然和/或非天然氨基酸残基。该肽残基优选由5～15个氨基酸残基组成，更优选由8个或9个氨基酸残基组成。

作为结构(5)，特别优选地，可以示例以下：

在进一步非限定的一个方式中，在本公开中的结合分子是肽化合物的情形中，该肽化合物可以具有本公开中的结构(1)～结构(3)经由酰胺键连接的以下的结构(6)。

式中：

X是羟基、Cl、Br、I、-NR_AR_B(此处，R_A和R_B都是氢、或分别独立地是C₁～C₃烷基、或R_A和R_B与它们结合的氮原子一起形成包含选自N、O、和S的1～3个杂原子的4～8元杂环)、C₁～C₃烷基、C₁～C₃卤烷基、-C≡CH、或任选被取代的C₃～C₈环烷基，但是，在R₇是-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-X的情形中，X不是C₁～C₃烷基，

P₇是氢或C₁～C₃烷基，

R₈是-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-Y，

P₈是氢或C₁～C₃烷基，

Q₉是氢或C₁～C₆烷基。

在A₇和/或A₉是氨基酸残基的情形中，该氨基酸残基可以是任意的天然或非天然氨基酸残基。

在A₇和/或A₉是肽残基的情形中，该肽残基由任意的种类和数目的天然和/或非天然氨基酸残基构成。作为构成肽残基的氨基酸残基的数目，优选2～13，更优选2～9。

在某一方式中，A₇和A₉可连接。A₇和A₉连接形成的肽残基可以包含任意的数目和种类的天然和/或非天然氨基酸残基。该肽残基优选由5～15个氨基酸残基组成，更优选由7个或8个氨基酸残基组成。

作为结构(6)，特别优选地，可以示例以下：

在进一步非限定的一个方式中，在本公开中的结合分子是肽化合物的情形中，从容易引起直接交互和预定位的观点出发，对于该肽化合物，除了R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形之外，X所包含的原子中距R₇结合的α碳原子最远的原子与R₉所包含的原子中距R₉结合的α碳原子最远的原子优选经由25个以内(例如24、23、22、21、20、19、18、17、16、或其以下)的原子结合。

此外，本公开中的结合分子优选不是以下的化合物的结合分子。

(1)(6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-25-[(3-碘苯基)甲基]-22-[(4-甲氧基苯基)甲基]-4，10,14，19,19,20,29,32-八甲基-31-[(4-甲基苯基)甲基]-9,16-双(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7，10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2，5,8,11，15,18，21，24，27，30，33-十一酮、

(2)(3S,6S，9S,12S,18S,27S，30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(3-碘苯基)甲基]-18-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,7,16,19,22,25,31-八甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(49)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(3-氯-5-氟苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25，28,31-十一氮杂环三十四烷-2，5,8,11,14,17，20，23，26,29,32-十一酮、

(50)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-12-[(3-氯-4-氟苯基)甲基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25，28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(58)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-丁基-18-[(4-氯苯基)甲基]-12-[(3-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(吡咯烷-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22，25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20，23,26,29,32-十一酮、

(59)(3S,6S,9S,12S,18S,27S，30S,34S)-6，9-二苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氯苯基)甲基]-4,7,16,19,22,25,30,31-八甲基-12-[(3-甲基苯基)甲基]-3-丙烷-2-基-34-(吡咯烷-1-羰基)-1，4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(96)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-18-[(4-氟苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1，6，6,7,16,19,22,25,31-九甲基-3，30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-丙-2-炔基-1,4，7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2，5，8,11,14，17，20，23，26，29，32-十一酮、

(100)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-9-(2-苯基乙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20，23,26,29,32-十一酮、

(101)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-9-[[2-(三氟甲基)苯基]甲基]-1,4，7,10,13,16,19，22,25,28，31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23，26,29，32-十一酮、

(102)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-9-[(2-氯苯基)甲基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1，4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(134)(3S,6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-25-[(3-氟-5-碘苯基)甲基]-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18，21,24，27,30,33-十一酮、

(135)(3S,6S，9S,13S,16S，22S，25S,31S,34S)-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-25-[(3-氯-5-碘苯基)甲基]-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7，10,14,17,20，23,26，29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(136)(3S，6S,9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-25-[(5-溴吡啶-3-基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30，33-十一酮、

(137)(3S,6S，9S,13S,16S,22S，25S，31S,34S)-25-[(3-溴-5-氟苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3，4，10,14,19,19，20,29，32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(138)(3S,6S，9S,13S,16S,22S,25S,31S,34S)-25-[(2-溴-5-碘苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(139)(3S,6S，9S,13S,16S,22S，25S，31S,34S)-25-[(5-溴-2-氟苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4，7，10，14,17,20，23，26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8，11,15,18,21,24,27,30,33-十一酮、

(140)(3S,6S，9S,13S,16S,22S,25S,31S，34S)-25-[(5-溴-2-氯苯基)甲基]-6-[(2S)-丁烷-2-基]-22-丁基-9-乙基-31-[(4-甲氧基苯基)甲基]-3,4,10,14,19,19,20,29,32-九甲基-16-(2-甲基丙基)-13-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,14,17,20,23,26,29,32-十一氮杂双环[32.2.0]三十六烷-2,5,8,11，15,18，21,24，27,30,33-十一酮、

(141)(3S，9S,18S,21S,25S,28S,34S)-18-[(2S)-丁烷-2-基]-28-环己基-9-(环己基甲基)-7,10，13,16,21，22,26,29-八甲基-3-(3-苯基丙基)-25-(哌啶-1-羰基)螺[1,4,7,10,13,16,19，22,26,29,32-十一氮杂双环[32.3.0]三十七烷-31,1'-环戊烷]-2,5,8,11,14,17,20,23,27,30,33-十一酮、

(142)(3S,6S,9S,12S,18S,27S，30S,34S)-6-苄基-27-[(2S)-丁烷-2-基]-12-[(3-碘苯基)甲基]-1,7,9,16,19,22,25,31-八甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-34-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(146)(3S,9S,12S,18S,27S，30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-34-(4,4-二氟哌啶-1-羰基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6，7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28，31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮、

(147)(3S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-27-[(2S)-丁烷-2-基]-34-(3,3-二氟哌啶-1-羰基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,31-九甲基-18-[(4-甲基苯基)甲基]-3,30-双(2-甲基丙基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23，26,29,32-十一酮、

本公开中的结合分子可以通过从任意的分子中选择具有本说明书中记载的特征(1)～(4)的分子而取得。此外，本公开中的结合分子可以利用例如本领域技术人员公知的多肽的化学合成方法、或应用细胞的重组多肽表达方法制备。

作为本公开中的结合分子的化学合成方法，示例液相合成法、应用Fmoc或Boc等的固相合成法、和它们的组合等。在Fmoc合成中，以主链氨基被Fmoc基保护、侧链官能团按需要被不被哌啶等碱性切断的保护基保护、不保护主链羧酸的氨基酸为基本单元。作为基本单元，除此之外，只要是具有被Fmoc保护的氨基和羧酸基的组合即可，没有特别限定。例如，可以将二肽作为基本单元。配置在N末端的基本单元可以是Fmoc氨基酸以外的。例如，可以是Boc氨基酸，也可以是不具有氨基的羧酸类似物。将主链羧酸基通过与固相载体的官能团的化学反应负载于固相。随后，通过哌啶、DBU等碱将Fmoc基脱保护，使新产生的氨基和随后添加的具有基本单元的羧酸的保护氨基酸缩合反应，从而生成肽键。在缩合反应中，DIC与HOBt的组合、DIC与HOAt的组合、HATU与DIPEA的组合等各种组合是可能的。通过脱Fmoc基和其后肽键生成反应的重复，可以生成期望的肽序列。得到期望的序列后，进行从固相切割和按需要导入的侧链官能团的保护基的脱保护。此外，进行从固相切割前也可进行肽的结构改变、环化。从固相切割和脱保护可以在相同条件、例如90:10的TFA/H₂O进行，也可以按需要在单独条件下脱保护。从固相切割可用1％TFA等弱酸切割，也可利用Pd等作为保护基、利用二者的化学反应的正交性。这些步骤之间或最后，也可以实施环化等步骤。例如，可以使侧链羧酸和N末端主链的氨基缩合、使侧链氨基和C末端主链的羧酸缩合。此时，需要C末端侧的羧酸和环化的侧链羧酸之间、或N末端侧的主链氨基或羟基和环化的侧链氨基之间的反应正交性，如前述考虑保护基的正交性进行保护基的选择。此外，通过在N末端定位氯乙酰基，也可在半胱氨酸残基的侧链的硫醇基之间环化。可以将如此得到的反应物用反相柱、分子筛柱等纯化。它们的细节记载在例如默克株式会社在平成14年5月1日出版的固相合成手册等中。

本公开中的结合分子也可以应用重组的方法、组分而制备。在一个方式中，将编码本公开中的结合分子的核酸插入适当的表达载体，将该载体导入适当的细胞，培养转化细胞，将表达的改变的蛋白分离、纯化、培养。以容易纯化等目的，这样的蛋白也可作为与其它蛋白的融合蛋白表达。例如，可利用：以大肠杆菌为宿主配制为与麦芽糖结合蛋白的融合蛋白的方法(美国New England BioLabs公司发售的载体pMAL系列)、配制为与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的融合蛋白的方法(Amersham Pharmacia Biotech公司发售的载体pGEX系列)、附加组氨酸标签配制的方法(Novagen公司的pET系列)等。作为宿主细胞，只要是适于重组蛋白的表达的细胞则没有特别限制，除上述的大肠杆菌外，例如，也可应用酵母、各种动植物细胞、昆虫细胞等。载体向宿主细胞的导入可应用本领域技术人员公知的各种方法。例如，向大肠杆菌的导入可以应用利用钙离子的导入方法(Mandel,M.,Higa,A.(1970)Journal of Molecular Biology,53,158-162、Hanahan,D.(1983)Journal of MolecularBiology,166,557-580)。在宿主细胞内表达的蛋白可通过本领域技术人员公知的方法从该宿主细胞或其细胞培养物或培养上清纯化、回收。在将蛋白表达为与上述的麦芽糖结合蛋白等的融合蛋白的情形中，可容易地进行亲和纯化。

在非限定的一个方式中，本公开中的结合分子的制备可以包含指定本公开中的结合分子的步骤。即，本公开中的结合分子也可以通过使被测分子与突变型RAS(G12D)接触、按本说明书的记载选择具有上述的(1)～(4)的特征的分子、即对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS是5倍以上的结合分子而取得。

作为本公开中的被测分子，没有特别限制，例如，可以列举天然物、有机化合物、无机化合物、蛋白、肽、氨基酸等单一化合物，以及化合物文库、基因文库的表达产物、细胞提取物、细胞培养上清、发酵微生物生成物、海洋生物提取物、植物提取物、原核细胞提取物、真核单细胞提取物或动物细胞提取物等。它们可以是纯化物，此外，也可以是如植物、动物或微生物等的提取物等的粗纯化物。此外，被测分子的制备方法也没有特别限制，可以从天然物分离，可以化学或生物化学合成，此外，也可以基因工程配制。

此外，本公开提供含有本公开的结合分子的药物组合物。

本公开中的药物组合物除本公开的结合分子、结合分子的盐、或它们的溶剂化物外还可导入药学上可容许的载体、用公知的方法制剂化。制剂化可以使用通常应用的赋形剂、粘合剂、润滑剂、着色剂、矫味剂、按需要稳定剂、乳化剂、吸收促进剂、表面活性剂、pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂等，配合通常作为药物制剂的原料应用的成分通过常规方法制剂化。

例如，为了制备口服制剂，加入本公开的结合分子或其盐与赋形剂、进一步按需要加入粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味剂等后，通过常规方法制成散剂、细粒剂、颗粒剂、片剂、包衣片剂、胶囊剂等。

作为这些成分，例如，列举：大豆油、牛脂、合成甘油酯等动植物油；液体石蜡、角鲨烷、固体石蜡等烃；肉豆蔻酸辛基十二烷基酯、肉豆蔻酸异丙酯等酯油；鲸蜡硬脂醇、山嵛醇等高级醇；硅树脂；硅油；聚氧乙烯脂肪酸酯、山梨糖醇酐脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物等表面活性剂；羟乙基纤维素、聚丙烯酸、羧基乙烯基聚合物、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素等水溶性高分子；乙醇、异丙醇等低级醇；甘油、丙二醇、二丙二醇、山梨糖醇等多元醇；葡萄糖、蔗糖等糖；无水硅酸、硅酸铝镁、硅酸铝等无机粉末、纯化水等。

作为赋形剂，例如，列举：乳糖、玉米淀粉、白糖、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇、结晶纤维素、二氧化硅等。

作为粘合剂，例如，列举：聚乙烯醇、聚乙烯醚、甲基纤维素、乙基纤维素、阿拉伯树胶、黄蓍胶、明胶、虫胶、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙二醇/聚氧乙烯嵌段聚合物、葡甲胺等。

作为崩解剂，例如，列举：淀粉、琼脂、明胶粉、结晶纤维素、碳酸钙、碳酸氢钠、柠檬酸钙、糊精、果胶、羧甲基纤维素钙等。

作为润滑剂，例如，列举：硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇、二氧化硅、氢化植物油等。

作为着色剂应用允许添加到药物的那种，作为矫味剂，应用可可粉、薄荷脑、芳香粉、薄荷油、龙脑、桂皮粉等。

对这些片剂/颗粒剂进行糖衣、按需要进行其它适当包衣当然无妨。此外，在制备糖浆剂、注射用制剂等液体剂时，向本公开中的结合分子或其药理学容许的盐加入pH调节剂、溶解剂、等渗剂等、和按需要加入溶解助剂、稳定剂等，通过常规方法制剂化。

例如，可以以与水或其以外的药学上可容许的液体的无菌性溶液、或悬浮液的注射剂的形式非口服使用。例如，可以考虑通过与药理学容许的载体或介质、具体地无菌水或生理盐水、植物油、乳化剂、悬浮剂、表面活性剂、稳定剂、调味剂、赋形剂、载体、防腐剂、粘合剂等适当组合，以通常认可的药物实施所需的单位剂量形式混合而制剂化。具体地，可以列举轻质无水硅酸、乳糖、结晶纤维素、甘露醇、淀粉、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯醇缩醛二乙基氨基乙酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、中链脂肪酸甘油三酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、白糖、羧甲基纤维素、玉米淀粉、无机盐类等作为载体。这些制剂中的有效成分量使得获得指示范围的适当的容量。

用于注射的无菌组合物可以应用如注射用蒸馏水的载体、按照通常的制剂实施而处方。

作为注射用水溶液，列举例如包含生理盐水、葡萄糖、其它辅助药的等渗液，例如D-山梨醇、D-甘露糖、D-甘露醇、氯化钠，可以与适当的溶解助剂联用，例如：醇，具体地乙醇；多元醇，例如丙二醇、聚乙二醇；非离子性表面活性剂，例如聚山梨醇酯80(注册商标)、HCO-50。

作为油性液体，列举芝麻油、大豆油，作为溶解助剂，可以与苯甲酸苄酯、苄醇联用。此外，可以与缓冲剂例如磷酸盐缓冲液、乙酸钠缓冲液、止痛剂例如盐酸普鲁卡因、稳定剂例如苄醇、苯酚、抗氧化剂配合。配制的注射液通常填充到合适的安瓿中。

施用优选口服施用，但施用方法不限于口服施用。作为非口服施用，具体地，列举注射剂型、经鼻施用剂型、经肺施用剂型、经皮施用型等。作为注射剂型的实例，例如，可以通过静脈内注射、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射等全身或局部施用。

此外，可以根据患者的年龄、症状选择适当施用方法。作为本公开中含有结合分子的药物组合物的施用量，例如，可在每一次每1kg体重0.0001mg至1000mg的范围选择。或者，例如，可以在每一患者0.001至100000mg/机体的范围选择施用量，但不一定限于这些数值。施用量、施用方法根据患者的体重和年龄、症状等变动，但只要是本领域技术人员则可适当选择。

在某一方式中，本公开中的结合分子可以用于抑制突变型RAS(G12D)的功能。此外，在某一方式中，本公开的结合分子可以用于处置或预防对象中与突变型RAS(G12D)的表达有关的疾病。作为这样的疾病，可以示例癌症。因此，本公开提供含有本公开中的结合分子的癌症治疗剂、和用于处置和/或预防癌症的含有本公开中的结合分子的药物组合物。此外，本公开涉及用于处置和/或预防癌症的方法，其包括将本公开中的结合分子施用于对象的步骤。此外，本公开涉及本公开中的结合分子在用于处置和/或预防癌症的药物的配制中的应用。进一步，本公开涉及用于处置和/或预防癌症的本公开中的结合分子。作为癌症，可以示例胰腺癌、大肠癌和肺癌等，但不限于这些。

本说明书中的“对象”包含哺乳动物，作为哺乳动物，优选人。

另外，本说明书中引用的全部现有技术文献作为参考并入本说明书。

实施例

本发明的内容用以下的制备例、实施例、比较例和评价例进一步说明，但本发明不限于该内容。

制备例1肽化合物的固相合成

在关于制备方法没有其它记载的情形中，全部原料和试剂都从商业供应商获得或应用公知的方法合成。

按照根据WO2013/100132或WO2018/225864中记载的Fmoc法的肽合成法，用下述的基本路线进行肽的延伸。即，下列5阶段的步骤：

1)在2-氯三苯甲基树脂负载了Asp侧链的羧酸或D-3-ABu的羧酸的物质的、从氨基酸的N末端通过Fmoc法的肽延伸反应、

2)从2-氯三苯甲基树脂的肽的切割过程、

3)通过经切割过程从2-氯三苯甲基树脂脱离产生的Asp侧链的羧酸或D-3-ABu的羧酸、与肽链N末端(下述方案中的三角单元)的氨基的缩合的酰胺环化、

4)按需要肽链中包含的侧链官能团的保护基的脱保护、

5)通过制备型HPLC的化合物的纯化。在实施例和比较例中，除非另有记载，基于该基本路线进行肽化合物的合成。

LC/MS的分析条件在表1中记载。

[表1]

1.通过肽合成仪的肽合成中应用的Fmoc-氨基酸

在本说明书内中记载的肽合成中，通过肽合成仪的合成应用表2～表3中记载的Fmoc-氨基酸。

表2记载的Fmoc-氨基酸购自商业供应商。

表3记载的Fmoc-氨基酸按本制备例中记载合成。

[表2]

/>

[表3]

Fmoc-氨基酸的合成

化合物aa001、((2S)-4-[3-氯-4-(三氟甲基)苯基]-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)丁酸Fmoc-Hph(4-CF3-3-Cl)-OH的合成

在(4S)-4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基氨基]-5-氧代-5-苯基甲氧基戊酸(Boc-Glu-OBn、CAS编号30924-93-7)(200g，592.82mmol)、N-羟基邻苯二甲酰亚胺(106g，649.78mmol，1.10当量)、4-二甲基氨基吡啶(DMAP、3.6g，29.47mmol，0.05当量)的四氢呋喃(THF、2L)溶液中，在氮气氛下，在0℃滴加N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC、138mL，1.54当量)。在25℃搅拌反应液16小时，通过过滤除去固形物，将滤液在减压下蒸馏除去溶剂。用甲苯稀释残渣，通过过滤除去产生的固体，将滤液在减压下蒸馏除去溶剂。通过重结晶(丙酮/庚烷)纯化残渣，得到化合物aa001-a(1-O-苄基5-O-(1,3-二氧代异吲哚-2-基)(2S)-2-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基氨基]戊二酸酯)。(230g，80％)

LCMS(ESI)m/z＝505.2(M+Na)+

保留时间：0.992分钟(分析条件SMD方法＿16)

在DMA(500mL)中加入溴化镍三水合物(NiBr₂·3H₂O)(4g，0.07当量)和4,4’-二-叔丁基-2,2’-联吡啶(dtbbpy，CAS编号72914-19-3)(3.9g，14.55mmol，0.07当量)，在氮气氛下，在50℃搅拌2小时配制Ni溶液。

在化合物aa001-a(100g，207.3mmol)、锌粉末(70g，5当量)和4-溴-2-氯-1-(三氟甲基)苯(CAS编号467435-07-0，160g，617mmol，3当量)的DMA(500mL)混合液中添加之前配制的Ni溶液，在25℃搅拌16小时。在反应液中加入乙二胺四乙酸二钠(EDTA·2Na)水溶液(10％)，用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤合并的有机层后，用无水硫酸钠干燥，减压下蒸馏除去溶剂。用硅胶柱色谱(乙酸乙酯/石油醚)纯化得到的残渣，得到化合物aa001-b。(75g，77％)

LCMS(ESI)m/z＝494(M+Na)+

保留时间：2.863分钟(分析条件SMD方法＿17)

在0℃冷却化合物aa001-b(75g，158.93mmol)的甲苯溶液(900mL)，滴加三氟甲磺酸(TfOH)(42mL，3.00当量)。在室温搅拌1小时后，加入水(75mL)。用水萃取该混合液，用乙酸乙酯萃取合并的水层。用水洗涤合并的有机层，用无水硫酸钠干燥后，减压下蒸馏除去溶剂。在残渣中加入乙腈/水(900/900mL)，用氢氧化钠水溶液(48％)调整pH为7。在该溶液中加入Fmoc-OSu(51.2g，151.93mmol，0.95当量)，边维持pH7.8至8.0边在室温搅拌16小时。过滤反应液，用6mol/L盐酸水将滤液的pH调整为2。收集析出的固体，在50℃干燥，得到化合物aa001((2S)-4-[3-氯-4-(三氟甲基)苯基]-2-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)丁酸、Fmoc-Hph(4-CF3-3-Cl)-OH)。(70g，87％)

LCMS(ESI)m/z＝525.8(M+Na)+

保留时间：2.180分钟(分析条件SMD方法＿21)

¹H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.70(s，1H)，7.91(d，J＝7.5Hz，2H)，7.79-7.59(m，5H)，7.45-7.28(m，5H)，4.40-4.19(m，3H)，3.96-3.88(m，1H)，2.82-2.60(m，2H)，2.11-1.77(m，2H)

化合物aa002、(2S)-2-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-4-甲氧基丁酸 (Fmoc-MeHse(Me)-OH)的合成

将化合物aa002-a((2S)-2-[9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基]-4-甲氧基丁酸、Fmoc-Hse(Me)-OH)(5.0g，14.07mmol)、低聚甲醛(1.27g，42.2mmol)和10-樟脑磺酸(CSA,0.163g，0.70mmol)悬浮于甲苯(82mL)，在80℃搅拌14小时。将反应液冷却至室温后，用乙酸乙酯(100mL)稀释滤液后，用饱和碳酸氢钠水溶液/水(1/1)和饱和盐水/水(1/1)洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥、过滤后减压浓缩，作为粗产物得到化合物aa002-b。(5.1g，99％)

LCMS(ESI)m/z＝368(M+H)+

保留时间：0.84分钟(分析条件SQDFA05)

在得到的化合物aa002-b(5.12g，13.94mmol)的二氯甲烷(DCM、46.5mL)溶液中，在冰冷下、氮气氛下，加入三乙基硅烷(TES,6，68mL，41.8mmol)、水(0.251mL，13.94mmol)、三氟化硼二乙醚络合物(BF₃·OEt₂)(3.53mL，27.9mmol)，搅拌2小时。在反应液中加入饱和氯化铵水溶液/水(1/1)和水(5mL)，分离有机层。用DCM萃取水层，用饱和盐水/水(1/1)洗涤有机层。通过用无水硫酸钠干燥有机层，过滤后减压浓缩，将得到的化合物溶解于乙腈，用正己烷洗涤并减压浓缩，得到化合物aa002((2S)-2-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-4-甲氧基丁酸、Fmoc-MeHse(Me)-OH)。(4.9g，95％)

LCMS(ESI)m/z＝370(M+H)+

保留时间：0.76分钟(分析条件SQDFA05)

化合物aa003、(2S)-2-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-3-(4-甲基苯基)丙酸(Fmoc-MePhe(4-Me)-OH)的合成

以化合物aa003-a(2S)-2-[9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基]-3-(4-甲基苯基)丙酸、Fmoc-Phe(4-Me)-OH)(20g，49.8mmol)为起始原料，用与化合物aa002-b的合成同样的方法，作为粗产物得到化合物aa003-b(22.66g)。

LCMS(ESI)m/z＝414(M+H)+

保留时间：1.04分钟(分析条件SQDFA05)

应用得到的化合物aa003-b(22.66g)，用与化合物aa002的合成同样的方法反应后，通过将得到的粗产物用反相柱色谱(0.1％甲酸-水/0.1％甲酸-乙腈)纯化，得到化合物aa003((2S)-2-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-3-(4-甲基苯基)丙酸、Fmoc-MePhe(4-Me)-OH)。(17.3g，2步骤83.5％)。

LCMS(ESI)m/z＝416(M+H)+

保留时间：2.41分钟(分析条件SQDFA3080)

化合物aa004、(2S)-2-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-3-甲氧基丙酸 (Fmoc-MeSer(Me)-OH)的合成

将市售的O-甲基-L-丝氨酸(H-Ser(Me)-OH)(498mg，4.18mmol)和碳酸钠(1.329g，12.54mmol)溶解于水(8mL)后，在室温加入N-(9-芴基甲氧基羰基氧基)琥珀酰亚胺(Fmoc-OSu)(1.41g，4.18mmol)的1,4-二噁烷溶液(12mL)，搅拌过夜。在反应液中加入水，用叔丁基甲醚/正己烷＝1/10洗涤。在得到的水层中加入1N盐酸水至pH为酸性，用乙酸乙酯萃取2次。用饱和盐水洗涤得到的有机层，用无水硫酸镁干燥、进行过滤后，通过减压下蒸馏除去溶剂，作为粗产物得到化合物aa004-a(Fmoc-Ser(Me)-OH)(1.46g)。得到的化合物aa004-a不进行进一步纯化用于下一反应。

在为上述的粗产物的化合物aa004-a(1.46g)和低聚甲醛(377mg，12.54mmol)的甲苯溶液(12mL)中加入三氟乙酸(TFA)(2.90mL，37.6mmol)，在室温过夜搅拌。减压下蒸馏除去溶剂后，加入乙酸乙酯，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤有机层后，用饱和盐水洗涤，用无水硫酸镁干燥得到的有机层后，进行过滤。通过从得到的滤液减压下蒸馏除去溶剂，得到作为粗产物的化合物aa004-b(2.13g)。得到的化合物aa004-b不进行进一步纯化用于下一反应。

在室温在作为上述的粗产物的化合物aa004-b(2.13g)的二氯乙烷(DCE)溶液(15mL)中加入三乙基硅烷(TES)(6.02mL，37.7mmol)和三氟乙酸(TFA)(8.72mL，113mmol)，在60℃搅拌3小时。将反应液冷却至室温，在通过减压下蒸馏除去溶剂得到的粗产物中加入叔丁基甲醚/正己烷＝1/4，加入饱和碳酸氢钠水溶液时产生白色固体。减压下蒸馏除去有机溶剂，通过用反相柱色谱(0.1％甲酸水溶液/0.1％甲酸乙腈溶液)纯化在水层中加入二甲基亚砜的溶液，得到化合物aa004((2S)-2-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-3-甲氧基丙酸、Fmoc-MeSer(Me)-OH)(782mg，3步骤53％)。

LCMS(ESI)m/z＝356(M+H)+

保留时间：0.76分钟(分析条件SQDFA05)

化合物aa005、(2S)-3-(4,4-二氟环己基)-2-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]丙酸(Fmoc-MeCha(4-F2)-OH)的合成

在化合物aa005-a(S)-2-((((9H-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(4,4-二氟环己基)丙酸、Fmoc-Cha(4-F2))-OH)(1.89g，4.40mmol)的DCM(22mL)溶液中，在氮气氛下加入低聚甲醛(0.661g，22.00mmol)、硫酸镁(1.324g，11.00mmol)、三氟化硼二乙醚络合物(BF₃·OEt₂)(0.558mL，4.40mmol)，在室温搅拌2小时。用硅藻土过滤反应液，该滤液在冰冷下、氮气氛下，加入三乙基硅烷(2.103mL，13.20mmol)、水(0.079mL，4.40mmol)、三氟化硼二乙醚络合物(BF₃·OEt₂)(0.837mL，6.60mmol)，搅拌4小时。在反应液中加入50％盐水，进一步在室温搅拌30分钟。用相分离器过滤，回收有机层，通过减压下浓缩得到粗产物。将得到的粗产物用乙腈溶解、用正己烷洗涤后，将乙腈层减压下浓缩，得到化合物aa005((2S)-3-(4,4-二氟环己基)-2-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]丙酸、Fmoc-MeCha(4-F2)-OH)(1.89g，97％)。

LCMS(ESI)m/z＝444(M+H)+

保留时间：0.89分钟(分析条件SQDFA05)

化合物aa006的合成

在氮气氛下，将aa006-a(90g、443mmol)和甲基碘(314g、2.21mol)溶解于四氢呋喃(3.15L)。将混合溶液在0℃冷却，边搅拌边加入氢化钠(60％、77.56g、2.21mol)。将反应溶液在室温搅拌5小时后，加入冰水。将得到的溶液用叔丁基甲醚/正己烷(1/3)洗涤3次。在水相中加入1N盐酸使pH为2～3，用乙酸乙酯萃取3次。将得到的有机相用饱和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，通过减压浓缩，作为粗产物得到aa006-b(94g)。得到的粗产物原样用于下一反应。

LCMS(ESI)m/z＝240(M+Na)+

保留时间：1.1分钟(分析条件SMD方法＿14)

将aa006-b的粗产物(94g)溶解于二氯甲烷(600mL)。将该溶液冷却至0℃，加入4NHCl/1,4-二噁烷(660mL)。将反应溶液在室温搅拌2小时，通过减压下浓缩，得到aa006-c的粗产物(90g)。

LCMS(ESI)m/z＝118(M+H)+

保留时间：0.25分钟(分析条件SMD方法＿14)

将aa006-c的粗产物(90g)溶解于水(560mL)，加入碳酸钾成为pH7。随后，在反应溶液中加入碳酸钾(149g、1.08mol)、Fmoc-OSu(131g、389mmol)和1,4-二噁烷(560mL)，在室温搅拌3小时。其后，用叔丁基甲醚/正己烷(1/3)洗涤反应溶液，加入1N盐酸成为pH2～3，过滤得到固体。将得到的固体用水洗涤，通过在50℃减压干燥16小时，得到aa006(130g、86％(3步骤)。

LCMS(ESI)m/z＝362(M+Na)+

保留时间：2.0分钟(分析条件SMD方法＿15)

2.通过自动合成仪的肽固相合成中应用的、氨基酸负载树脂的合成

用以下所示方法合成化合物aa011，负载于树脂用于通过肽合成仪的肽合成。从商业供应商购入化合物aa012，负载于树脂用于通过肽合成仪的肽合成。按照WO2013/100132或WO2018/225864中记载的方法进行Fmoc氨基酸的制备和制备的Fmoc氨基酸向树脂的负载反应和分析方法。2-氯三苯甲基氯树脂(100-200目、1％DVB)从渡边化学工业株式会社和Chem-Impex公司购入。

[表4]

化合物aa011-树脂、(3S)-3-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-4-氧代-4-哌啶-1-基丁酸-2-氯三苯甲基树脂(Fmoc-MeAsp(O-Trt(2-Cl)树脂)-pip)的合成

用WO2018/225864中记载的方法合成化合物aa011-树脂((3S)-3-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-4-氧代-4-哌啶-1-基丁酸-2-氯三苯甲基树脂、Fmoc-MeAsp(O-Trt(2-Cl)树脂)-pip)。

另外，本说明书中，在树脂与化合物结合的情形中，树脂部位有时用○标记。此外，以明确树脂部位的反应点为目的，有时与○连接标记反应部位的化学结构。在上述结构中显示，在Fmoc-MeAsp(O-Trt(2-Cl)树脂)-pip(化合物aa011-树脂)中，树脂上的2-氯三苯甲基与MeAsp的侧链羧酸经由酯键结合的样式。

化合物aa012-树脂、(3R)-3-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)丁酸-2-氯三苯甲基树脂(Fmoc-D-3-ABu-O-Trt(2-Cl)树脂)的合成

应用从商业供应商购入的(3R)-3-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)丁酸(Fmoc-D-3-ABu-OH)(7.1g，21.82mmol)和2-氯三苯甲基氯树脂(1.6mmol/g、100-200目、1％DVB、27.25g、43.6mmol)，用与化合物aa011-树脂的合成同样的方法，得到化合物aa012-树脂、(3R)-3-(9H-芴-9-基甲氧基羰基氨基)丁酸-2-氯三苯甲基树脂(Fmoc-D-3-ABu-O-Trt(2-Cl)树脂)。(33.44g，负载量0.598mmol/g)

另外，同样合成的负载量不同的另一批次也用于本实施例中的肽合成。

3.通过自动合成仪的肽固相合成

用WO2013/100132、WO2018/225864或WO2021/090855中记载的方法，合成环状肽化合物(化合物1、化合物3、化合物4、化合物6和化合物7)(表5)。应用肽合成仪(Multipep RS；Intavis公司制)，通过下述进一步显示细节的Fmoc法进行肽合成，关于操作的详细顺序，按照合成仪所附的手册。

1)从氨基酸的N末端通过Fmoc法的肽延伸反应

应用Intavis公司制肽合成仪(Multipep RS或Multipep RSi)，通过应用Fmoc保护氨基酸的固相合成法合成肽化合物。关于操作的详细顺序，按照合成仪所附的手册。

将构成作为目标的肽的Fmoc保护氨基酸(0.3-0.6mol/L)、和作为羧基的活化剂的HOAt、oxyma或HOOBt(0.375mol/L)溶解于NMP或NMP/DMF(1/1)，配制溶液1。在Fmoc保护氨基酸难溶于上述溶剂的情形中，添加DMSO使得成为20～30％(v/v)，配制溶液1。混合N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)(10％v/v)和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，配制溶液2。

将结合了N末端被Fmoc基保护的天冬氨酸的侧链羧酸部位、或N末端被Fmoc基保护的氨基酸的主链羧酸部位的2-氯三苯甲基树脂(100mg)加入固相反应容器，设置于肽合成仪。通过向该树脂(100mg)加入二氯甲烷(DCM)(0.8mL)静置1小时，进行树脂的膨胀。其后，从筛板排出溶液。将溶液1和溶液2设置于肽合成仪，开始通过肽合成仪的自动合成。

在包含树脂的固相反应容器中添加二氮杂双环十一烯(DBU)的DMF溶液(2％v/v、0.7mL)，在室温进行N末端的Fmoc基的脱保护。在第1残基的脱保护中反应4.5分钟、在第2残基以后的脱保护中反应10分钟后，从筛板排出溶液。向其中加入DMF(0.7mL)，静置5分钟后，从筛板排出溶液。通过进一步重复3次该树脂的洗涤步骤，得到树脂上结合的氨基酸、或肽的N末端的Fmoc基被除去成为氨基的树脂。

随后，将溶液1(0.3mL)和溶液2(0.36mL)用合成仪的混合小瓶混合后，添加于上述脱保护处理后的树脂，将固相反应容器加温至40℃。在难延伸序列等情形中按需要加温至60℃。树脂上的氨基和Fmoc保护氨基酸的缩合反应反应2.5小时。在难延伸序列等情形中按需要反应20小时。反应后，从筛板排出溶液。在延伸效率低的情形中，将该Fmoc保护氨基酸的缩合反应进一步重复进行1次或2次。随后，将树脂用DMF(0.7mL)洗涤3次。该Fmoc基的脱保护反应后Fmoc氨基酸的缩合反应为1个循环，通过重复该循环使肽在树脂表面上延伸。肽延伸结束后，向树脂添加二氮杂双环十一烯(DBU)的DMF溶液(2％v/v、0.7mL)，反应15分钟进行Fmoc基的脱保护反应后，从筛板排出溶液。将得到的树脂用DMF(0.7mL)洗涤4次后，用DCM(0.7mL)洗涤4次。

2)延伸的肽从树脂的切割

对通过WO2013/100132、WO2018/225864中记载的方法、或上述的方法得到的树脂加入包含0.75％(v/v)的DIPEA的2,2,2-三氟乙醇(TFE)/DCM(1/1，v/v，2mL)，在室温反应2小时进行肽链从树脂的切割反应。反应后，从筛板回收试管内的溶液。进行2次向残余的树脂加入2,2,2-三氟乙醇(TFE)/DCM(1/1，v/v，1mL)、从筛板回收溶液的操作。混合得到的全部切割溶液，混合DMF(4mL)或1,2-二氯乙烷(4mL)后，通过Genevac公司制高通量离心蒸发器(HT-12)减压下蒸馏除去溶剂。

3)切割的肽的环化法

将通过上述的方法得到的残渣溶解于DMF(4mL)和DCM(4mL)的混合液，加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(COMU)的DMF溶液(0.5M、1.5当量)或O-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)的DMF溶液(0.5M、1.5当量)和DIPEA(1.8当量)，通过在室温搅拌2小时，进行N末端的氨基和C末端的羧基的缩合环化反应。当量数基于将用作原料的树脂的氨基酸负载率(mmol/g)与使用的树脂量(通常为100mg)相乘而计算。通过LC/MS测定(Waters公司制SQDetector2)确认目标的环状肽的生成后，将反应液通过Genevac公司制高通量离心蒸发器(HT-12)减压下蒸馏除去溶剂。

4)环状肽的纯化法

在通过上述的方法得到的残渣中加入DMF或DMSO，用滤器过滤除去不溶物后，用制备型-HPLC纯化得到目标环状肽。纯化装置应用Waters Auto Purification System，柱使用YMC-Actus Triart C18(内径20mm，长度100mm)或YMC-Actus Triart Phenyl(内径20mm，长度100mm)，流动相使用甲醇乙酸铵水溶液(50mmol/L)或包含0.1％的甲酸的乙腈-水。

实施例1化合物1((3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-9-(环己基甲基)-12-[(3- 碘苯基)甲基]-3,30-二异丁基-6-(甲氧基甲基)-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-27-[(1S)- 1-甲基丙基]-34-(哌啶-1-羰基)-18-(对甲苯基甲基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31- 十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮)的合成

化合物1

作为原料应用化合物aa011-树脂((3S)-3-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-4-氧代-4-哌啶-1-基丁酸-2-氯三苯甲基树脂、Fmoc-MeAsp(O-Trt(2-Cl)树脂)-pip)(0.462mmol/g，100mg，0.0462mmol)，进行应用Fmoc-Leu-OH、Fmoc-MeSer(Me)-OH、Fmoc-Cha-OH、Fmoc-Phe(3-I)-OH、Fmoc-MeGly-OH、Fmoc-MePhe(4-Me)-OH、Fmoc-MeGly-OH、Fmoc-MeGly-OH、Fmoc-Ile-OH、和Fmoc-MeLeu-OH通过上述的Fmoc法的肽延伸反应、延伸的肽从树脂的切割、切割的肽的环化(作为环化试剂使用O-(7-氮杂-1H-苯并三唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU))、和环状肽的纯化，得到作为目标的化合物1(11.69mg、17.1％)。

实施例2化合物2((1S,6S,9S,15S,18S,21S,24S,27S,31S,34S)-21-苄基-34-环丁基-9-[(4,4-二氟环己基)甲基]-15-[(3-碘苯基)甲基]-24,31-二异丁基-8,11,20,26,30- 五甲基-18-(3-甲基丁-2-烯基)-27-(哌啶-1-羰基)-3,8,11,14,17,20,23,26,30,33,36- 十一氮杂三环[34.4.0.03,6]四十烷-2,7,10,13,16,19,22,25,29,32,35-十一酮)的合成

化合物2

作为原料应用化合物aa011-树脂((3S)-3-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-4-氧代-4-哌啶-1-基丁酸-2-氯三苯甲基树脂、Fmoc-MeAsp(O-Trt(2-Cl)树脂)-pip)，用本说明书中记载的通常的肽延伸法以Fmoc-Leu-OH、Fmoc-MePhe-OH、Fmoc-Pregly-OH、Fmoc-Phe(3-I)-OH、Fmoc-MeGly-OH、Fmoc-MeCha(4-F2)-OH、Fmoc-Aze(2)-OH、Fmoc-Pic(2)-OH、Fmoc-Gly(cBu)-OH的顺序使肽链延伸。在残留N末端的Fmoc基的状态进行下一操作。

用DMF(0.7mLx4次)、DCM(0.7mLx2次)、甲苯(0.7mLx2次)按顺序洗涤树脂。向其中添加二氮杂双环十一烯(DBU)的甲苯溶液(2％v/v、0.7mL)，反应10分钟进行Fmoc基的脱保护。从筛板排出溶液后，用甲苯(0.7mLx2次)、DCM(0.7mLx2次)按顺序洗涤树脂。

对通过上述得到的树脂加入Fmoc-MeLeu-OH(49mg、0.134mmol，4当量)、[乙基氰基(羟基亚氨基)乙酸-O2]三-1-吡咯烷基磷鎓六氟磷酸(PyOxim)(70.6mg、0.134mmol，4当量)、DIPEA(0.035mL、0.2mmol、6当量)的DCM(0.7mL)溶液，在室温静置3小时。从筛板排出溶液后，用DCM(0.7mLx3次)洗涤树脂，进一步用DMF(0.7mLx3次)洗涤。向得到的树脂添加二氮杂双环十一烯(DBU)的DMF溶液(2％v/v、0.7mL)，反应15分钟进行Fmoc基的脱保护后，从筛板排出溶液。用DMF(0.7mLx4次)洗涤得到的树脂后，用DCM(1.25mLx4次)进行洗涤。

向通过上述的方法得到的树脂上加入包含0.75％的DIPEA的2,2,2-三氟乙醇(TFE)/DCM(1/1，v/v，2mL)，在室温振荡2小时，进行肽链从树脂的切割反应。反应后，从筛板回收试管内的溶液。进行2次向残余的树脂加入2,2,2-三氟乙醇(TFE)/DCM(1/1，v/v，1mL)、从筛板回收溶液的操作。混合得到的全部切割溶液，加入DMF(4mL)，通过Genevac公司制高通量离心蒸发器(HT-12)减压下蒸馏除去溶剂。

将通过上述的方法得到的残渣溶解于DMF(4mL)和DCM(4mL)的混合液，加入(1-氰基-2-乙氧基-2-氧代亚乙基氨基氧基)二甲基氨基-吗啉代-碳鎓六氟磷酸盐(COMU)的DMF溶液(0.5M、0.1mL)和DIPEA(0.015mL)，通过在室温搅拌2小时，进行N末端的氨基和侧链羧酸的缩合环化反应。通过LC/MS测定(Waters公司制SQ Detector2)确认目标的环状肽的生成后，将反应液通过Genevac公司制高通量离心蒸发器(HT-12)减压下蒸馏除去溶剂。

向通过上述的方法得到的残渣加入DMF，用滤器过滤除去不溶物后，用制备型-HPLC(用Waters Auto Purification System，柱使用YMC-Actus Triart Phenyl(内径20mm，长度100mm)，作为流动相使用甲醇乙酸铵水溶液(50mmol/L))纯化，得到作为目标的化合物2(3.49mg、4.6％)。

实施例3化合物3((3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-9-丁基-12-[(3-碘苯基)甲基]-3-异丁基-30-(2-甲氧基乙基)-6-(甲氧基甲基)-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-27- [(1S)-1-甲基丙基]-34-(哌啶-1-羰基)-18-(对甲苯基甲基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25, 28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮)的合成

化合物3

基于化合物1的制备方法制备化合物3。

实施例4化合物4((3S,9S,12S,18S,27S,30R,35S)-18-(环己基甲基)-12-[(3-乙炔基苯基)甲基]-3-异丁基-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,30,32-十甲基-27-[(1S)-1-甲基丙基]-35-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,32-十一氮杂环三十五烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,33-十一酮)的合成

化合物4

基于化合物1的制备方法制备化合物4，得到作为目标的化合物4(14.72mg、26％)。

比较例1化合物5((1S,6S,9S,15S,18S,24S,27S,31S,34S)-18-丁基-34-环丁基- 15-[(2,3-二氟苯基)甲基]-24,31-二异丁基-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-8,11,20,21,21, 26,30-七甲基-27-(哌啶-1-羰基)-3,8,11,14,17,20,23,26,30,33,36-十一氮杂三环 [34.4.0.03,6]四十烷-2,7,10,13,16,19,22,25,29,32,35-十一酮)的合成

化合物5

作为原料应用化合物aa011-树脂((3S)-3-[9H-芴-9-基甲氧基羰基(甲基)氨基]-4-氧代-4-哌啶-1-基丁酸-2-氯三苯甲基树脂、Fmoc-MeAsp(O-Trt(2-Cl)树脂)-pip)，用本说明书中记载的通常的肽延伸法，按Fmoc-Leu-OH、Fmoc-MeAib-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Phe(23-F2)-OH、Fmoc-MeGly-OH、Fmoc-MeTyr(Me)-OH、Fmoc-Aze(2)-OH、Fmoc-Pic(2)-OH、Fmoc-Gly(cBu)-OH的顺序使肽链延伸。在残留N末端的Fmoc基的状态下，进行下一操作。

向通过上述的方法得到的树脂上加入包含0.75％的DIPEA的2,2,2-三氟乙醇(TFE)/DCM(1/1，v/v，2mL)在室温振荡2小时，进行肽链从树脂的切割反应。反应后，从筛板回收试管内的溶液。进行2次向残余的树脂加入2,2,2-三氟乙醇(TFE)/DCM(1/1，v/v，1mL)、从筛板回收树脂的操作。混合得到的全部切割溶液，加入DMF(4mL)，通过Genevac公司制高通量离心蒸发器(HT-12)减压下蒸馏除去溶剂。

向通过上述的方法得到的残渣加入DMF，用滤器过滤去除不溶物后，用制备型-HPLC(用Waters Auto Purification System，柱使用YMC-Actus Triart Phenyl(内径20mm，长度100mm)，作为流动相使用甲醇乙酸铵水溶液(50mmol/L))纯化，得到作为目标的化合物5(16.92mg、29％)。

比较例2化合物6((3S,9S,12S,17S,20S,23S,27R,30S,36S)-3-[2-[3-氯-4-(三氟甲基)苯基]乙基]-9-(环己基甲基)-23-异丁基-30-异丙基-7,10,17,18,24,27,31-七甲基-20-[(1S)-1-甲基丙基]螺[1,4,7,10,15,18,21,24,28,31,34-十一氮杂三环 [34.3.0.012,15]三十九烷-33,1'-环戊烷]-2,5,8,11,16,19,22,25,29,32,35-十一酮)的合成

化合物6

基于化合物1的制备方法制备化合物6。得到作为目标的化合物6(4.41mg、11％)。

比较例3化合物7((11S,17S,26S,29S,33S,36S)-11-[2-[3-氯-4-(三氟甲基)苯基]乙基]-36-环己基-17-(环己基甲基)-29-异丁基-15,18,21,24,30,34,37-七甲基-26- [(1S)-1-甲基丙基]-9-(2-哌嗪-1-基乙基)-33-(哌啶-1-羰基)-6,9,12,15,18,21,24,27, 30,34,37-十一氮杂螺[4.33]三十八烷-7,10,13,16,19,22,25,28,31,35,38-十一酮)的合成

/>

化合物7

基于WO2021090855的制备方法(化合物2184)制备化合物7。

[表5]

/>

化合物1：(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-9-(环己基甲基)-12-[(3-碘苯基)甲基]-3,30-二异丁基-6-(甲氧基甲基)-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-27-[(1S)-1-甲基丙基]-34-(哌啶-1-羰基)-18-(对甲苯基甲基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮(分子量：1479.6、CLogP：15.1)

化合物2：(1S,6S,9S,15S,18S,21S,24S,27S,31S,34S)-21-苄基-34-环丁基-9-[(4,4-二氟环己基)甲基]-15-[(3-碘苯基)甲基]-24,31-二异丁基-8,11,20,26,30-五甲基-18-(3-甲基丁-2-烯基)-27-(哌啶-1-羰基)-3,8,11,14,17,20,23,26,30,33,36-十一氮杂三环[34.4.0.03,6]四十烷-2,7,10,13,16,19,22,25,29,32,35-十一酮(分子量：1575.7、CLogP：15.8)

化合物3：(3S,6S,9S,12S,18S,27S,30S,34S)-9-丁基-12-[(3-碘苯基)甲基]-3-异丁基-30-(2-甲氧基乙基)-6-(甲氧基甲基)-1,7,16,19,22,25,31-七甲基-27-[(1S)-1-甲基丙基]-34-(哌啶-1-羰基)-18-(对甲苯基甲基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-十一氮杂环三十四烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32-十一酮(分子量：1441.5、CLogP：11.8)

化合物4：(3S,9S,12S,18S,27S,30R,35S)-18-(环己基甲基)-12-[(3-乙炔基苯基)甲基]-3-异丁基-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-1,6,6,7,16,19,22,25,30,32-十甲基-27-[(1S)-1-甲基丙基]-35-(哌啶-1-羰基)-1,4,7,10,13,16,19,22,25,28,32-十一氮杂环三十五烷-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,33-十一酮)(分子量：1349.7、CLogP：12.5)

化合物5：(1S,6S,9S,15S,18S,24S,27S,31S,34S)-18-丁基-34-环丁基-15-[(2,3-二氟苯基)甲基]-24,31-二异丁基-9-[(4-甲氧基苯基)甲基]-8,11,20,21,21,26,30-七甲基-27-(哌啶-1-羰基)-3,8,11,14,17,20,23,26,30,33,36-十一氮杂三环[34.4.0.03,6]四十烷-2,7,10,13,16,19,22,25,29,32,35-十一酮(分子量：1399.7、CLogP：13.4)

化合物6：(3S,9S,12S,17S,20S,23S,27R,30S,36S)-3-[2-[3-氯-4-(三氟甲基)苯基]乙基]-9-(环己基甲基)-23-异丁基-30-异丙基-7,10,17,18,24,27,31-七甲基-20-[(1S)-1-甲基丙基]螺[1,4,7,10,15,18,21,24,28,31,34-十一氮杂三环[34.3.0.012,15]三十九烷-33,1'-环戊烷]-2,5,8,11,16,19,22,25,29,32,35-十一酮(分子量：1317.0、CLogP：14.2)

化合物7：(11S,17S,26S,29S,33S,36S)-11-[2-[3-氯-4-(三氟甲基)苯基]乙基]-36-环己基-17-(环己基甲基)-29-异丁基-15,18,21,24,30,34,37-七甲基-26-[(1S)-1-甲基丙基]-9-(2-哌嗪-1-基乙基)-33-(哌啶-1-羰基)-6，9，12，15，18，21，24，27，30，34，37-十一氮杂螺[4.33]三十八烷-7，10，13，16，19，22，25，28，31，35，38-十一酮))(分子量：1514.3、CLogP：15.7)

[表6]

化合物编号	测定条件	保留时间(分钟)	MS Found(m/z)	MS极性
					1	SSC-A-FA-01	6.685	1478.1	(M-H)-
2	SSC-A-FA-01	6.745	1574.3	(M-H)-
					3	SSC-A-FA-01	5.564	1439.6	(M-H)-
4	SSC-A-AF-01	7.212	1347.7	(M-H)-
					5	SSC-A-FA-01	5.425	1397.8	(M-H)-
6	SSC-A-FA-01	6.063	1316.6	(M+H)+
					7	SSC-A-AF-01	7.564	1513.9	(M+H)+

评价例1 KRASG12D与肽化合物复合物的X线晶体结构分析

1.人KRASG12D突变体蛋白的制备

关于人KRASG12D突变体蛋白[基于Uniprot ID：P01116，Isoform 2B制备]，设计向表达区2-174的N末端附加HAT(组氨酸亲和标签)标签序列和凝血酶识别序列的构建体HATnorTh-KRasG12D。其氨基酸序列示于序列编号：1。设计的基因掺入pETBlue-1载体，转化至用于大肠杆菌表达系统的大肠杆菌株Tuner(DE3)pLacI[Novagen]。

用含有氨苄西林的LB(Lysogeny Broth)培养基在37℃振荡培养保有目标载体的基因重组大肠杆菌，直至成为OD(光密度)＝0.6。其后将培养温度降低至30℃，关于化合物3、4和7，添加IPTG(异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷)使得成为0.1mM，培养16小时，关于化合物1、2、5和6，添加IPTG(异丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷)使得成为1.0mM，培养24小时，诱导目标蛋白的表达。

通过离心回收培养后的大肠杆菌。对回收的菌体，作为提取缓冲液，关于化合物1～5和7应用50mM Tris pH 8.0，150mM NaCl，1％CHAPS(3-[(3-胆酰胺丙基)-二甲氨]-1-丙磺酸盐))，5％甘油，完全蛋白酶抑制剂(无EDTA(乙二胺四乙酸))，关于化合物6应用50mMTris pH 8.0，400mM NaCl，1％CHAPS，5％甘油，1mM DTT(二硫苏糖醇)，完全蛋白酶抑制剂(无EDTA)，悬浮菌体。向菌体悬浮液添加溶菌酶，在室温温育20分钟后，通过超声破碎法破碎菌体。关于化合物1～5和7，向破碎后的液体添加MgCl₂(氯化镁六水合物)和全能核酸酶(benzonase)。在室温静置20分钟后通过离心回收上清，通过滤器。

通过下述条件纯化得到的菌体破碎液的上清。

[化合物1]

应用cOmplete His-Tag Purification Column[Roche 6781543001]和BioLogicDuoFlow[Bio-Rad]纯化菌体破碎液的上清。通过缓冲液A(50mM Tris-HCl,400mM NaCl,1％CHAPS,5％甘油,1mM DTT,pH 8.0)平衡柱后，向柱加载菌体破碎液上清，向柱吸附人KRasG12D突变体蛋白。用缓冲液A洗涤柱后，通过将缓冲液A和缓冲液B(50mM Tris-HCl,400mM NaCl,1％CHAPS,5％甘油,1M咪唑,1mM DTT,pH 8.0)以浓度梯度混合流动，洗脱人KRasG12D突变体蛋白。浓缩包含人KRasG12D突变体蛋白的洗脱级分，添加凝血酶[SigmaT6634]，通过在透析缓冲液(50mM Tris-HCl,400mM NaCl,1mM DTT,pH 8.0)中在15℃透析，切断纯化用附加的HAT(组氨酸亲和标签)标签。透析的外液和内液的比率为100:1。随后，向透析后的样品添加NaCl使得成为最终浓度0.8M，进一步添加用缓冲液C(50mM Tris-HCl,800mM NaCl,1mM DTT,pH 8.0)平衡的Benzamidine Sepharose 4Fast Flow[GEhealthcare 17-5123-10]。2小时后通过离心除去Benzamidine Sepharose 4Fast Flow，添加缓冲液D(150mM Tris-HCl,pH 7.6,1.5M精氨酸-HCl)使得精氨酸浓度成为0.5M，进行浓缩。

最后，应用向HiLoad 26/600Superdex 75pg[GE healthcare 28-9893-34]连接cOmplete His-Tag Purification Column的那种、和BioLogic DuoFlow，进行SEC(尺寸排阻色谱)纯化。

[化合物2]

应用cOmplete His-Tag Purification Column[Roche 6781535001]和BioLogicDuoFlow[Bio-Rad]纯化菌体破碎液的上清。通过缓冲液A(50mM Tris-HCl,400mM NaCl,1％CHAPS,5％甘油,1mM DTT,pH 8.0)平衡柱后，向柱加载菌体破碎液上清，向柱吸附人KRasG12D突变体蛋白。用缓冲液A洗涤柱后，通过将缓冲液A和缓冲液B(50mM Tris-HCl,400mM NaCl,1％CHAPS,5％甘油,1M咪唑,1mM DTT,pH 8.0)以浓度梯度混合流动，洗脱人KRasG12D突变体蛋白。浓缩包含人KRasG12D突变体蛋白的洗脱级分，添加凝血酶[SigmaT6634]，通过在透析缓冲液(50mM Tris-HCl,400mM NaCl,1mM DTT,pH 8.0)中在15℃透析，切断纯化用附加的HAT(组氨酸亲和标签)标签。透析的外液和内液的比率为100:1。随后，向透析后的样品添加NaCl使得成为最终浓度0.8M，进一步添加用缓冲液C(50mM Tris-HCl,800mM NaCl,1mM DTT,pH 8.0)平衡的Benzamidine Sepharose 4Fast Flow(GEhealthcare 17-5123-10)。2小时后通过离心除去Benzamidine Sepharose 4Fast Flow，添加缓冲液D(150mM Tris-HCl,pH 7.6,1.5M精氨酸-HCl)使得精氨酸浓度成为0.5M，进行浓缩。

[化合物3]

应用HisTrap excel 5mL[GE healthcare 17-3712-06]纯化菌体破碎液的上清。向柱吸附人KRasG12D突变体蛋白后，向柱注入凝血酶。通过凝血酶切断向人KRasG12D突变体蛋白附加的纯化用HAT标签，仅洗脱人KRasG12D突变体蛋白。最后，应用HiLoad 26/600Superdex 75pg[GE healthcare 28-9893-34]进行SEC(尺寸排阻色谱)纯化。

[化合物4]

应用Ni Sepharose excel[GE healthcare 17-3712-01]纯化菌体破碎液的上清。向柱吸附人KRasG12D突变体蛋白后，向柱注入凝血酶。通过凝血酶切断向人KRasG12D突变体蛋白附加的纯化用HAT标签，仅洗脱人KRasG12D突变体蛋白。最后，应用HiLoad 26/600Superdex 75pg[GE healthcare 28-9893-34]进行SEC(尺寸排阻色谱)纯化。

[化合物5]

应用镍柱和NGC色谱系统[Bio-Rad]纯化菌体破碎液的上清。通过缓冲液A(50mMTris-HCl,400mM NaCl,1％CHAPS,5％甘油,1mM DTT,pH 8.0)平衡柱后，向柱加载菌体破碎液上清，向柱吸附人KRasG12D突变体蛋白。用缓冲液A洗涤柱后，通过将缓冲液A和缓冲液B(50mM Tris-HCl,400mM NaCl,1％CHAPS,5％甘油,1M咪唑,1mM DTT,pH 8.0)以浓度梯度混合流动，洗脱人KRasG12D突变体蛋白。浓缩包含人KRasG12D突变体蛋白的洗脱级分，添加凝血酶[GE healthcare 27-0846-01]，通过在透析缓冲液(50mM Tris-HCl,400mM NaCl,1mMDTT,pH 8.0)中在20℃透析，切断纯化用附加的HAT标签。透析的外液和内液的比率为100:1。随后，向透析后的样品添加NaCl使得成为最终浓度0.8M，进一步添加用缓冲液C(50mMTris-HCl,800mM NaCl,1mM DTT,pH 8.0)平衡的Benzamidine Sepharose 4Fast Flow[GEhealthcare 17-5123-10]。2小时后通过离心除去Benzamidine Sepharose 4Fast Flow，进行浓缩。

最后，应用凝胶过滤柱和NGC色谱系统进行SEC(尺寸排阻色谱)纯化。

[化合物6]

应用镍柱和色谱系统纯化菌体破碎液的上清。通过缓冲液A(50mM Tris-HCl,400mM NaCl,1％CHAPS,5％甘油,1mM DTT,pH 8.0)平衡柱后，向柱加载菌体破碎液上清，向柱吸附人KRasG12D突变体蛋白。用缓冲液A洗涤柱后，通过将缓冲液A和缓冲液B(50mMTris-HCl,400mM NaCl,1％CHAPS,5％甘油,1M咪唑,1mM DTT,pH 8.0)以浓度梯度混合流动，洗脱人KRasG12D突变体蛋白。浓缩包含人KRasG12D突变体蛋白的洗脱级分，添加凝血酶[GE healthcare 27-0846-01]，通过在透析缓冲液(50mM Tris-HCl,400mM NaCl,1mM DTT,pH 8.0)中在20℃透析，切断纯化用附加的HAT标签。透析的外液和内液的比率为100:1。随后，向透析后的样品添加NaCl提高盐浓度后，添加用缓冲液C(向50mM Tris-HCl,800mMNaCl,1mM DTT,pH 8.0添加NaCl使NaCl浓度接近1M)平衡的Benzamidine Sepharose 4FastFlow[GE healthcare 17-5123-10]。2小时后通过离心除去Benzamidine Sepharose 4FastFlow，进行浓缩。

最后，应用凝胶过滤柱HiLoad 16/600Superdex 75pg[GE healthcare28-9893-33]和cOmplete His-Tag Purification Column 1mL[Roche06781543001]、色谱系统，进行SEC(尺寸排阻色谱)纯化。

[化合物7]

另外，在化合物1～7的任一个中，应用的最终SEC缓冲液的条件为20mM HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸),100mM NaCl,1mM DTT,5mM MgCl₂,pH 8.0。

2.复合物的配制

关于化合物2和5，应用KRAS缓冲液(20mM HEPES,100mM NaCl,5mM MgCl₂,1mM DTTpH7.1)将人KRasG12D突变体蛋白稀释至1mg/mL。关于化合物1、2、3、4、7应用KRAS缓冲液(20mM HEPES(pH7.1),100mM NaCl,5mM MgCl2,1mM DTT pH7.1)、关于化合物5应用KRAS缓冲液(20mM HEPES,100mM NaCl,5mM MgCl₂,1mM DTT pH7.1)、关于化合物6应用纯水，将溶解于100％DMSO(二甲亚砜)的10mM的化合物1～7稀释至1mM。以化合物肽化合物相对于人KRasG12D突变体蛋白的摩尔比分别成为以下的方式，混合为3倍以上。

化合物1：8.03倍

化合物2：5.73倍

化合物3：5.73倍

化合物4：5.68倍

化合物5：3.34倍

化合物6：5.69倍

化合物7：5.73倍

其后，关于化合物1在冰上静置2小时、关于化合物2、3、4、7在冰上静置1小时、关于化合物5在4℃静置1小时、关于化合物6在室温静置1小时，配制人KRasG12D突变体蛋白-肽化合物复合物。

3.结晶化

离心人KRasG12D突变体蛋白-肽化合物复合物溶液，回收上清。浓缩人KRasG12D突变体蛋白-肽化合物复合物，直至在波长280nm的吸光度A₂₈₀(吸光度280)在各化合物中为下述数值。

化合物1：11.2

化合物2：23.9

化合物3：17.6

化合物4：18.18

化合物5：8.352

化合物6：10

化合物7：17.6

应用浓缩后的样品，在化合物1，2，5和6中通过ATS-100[EDC Biosystems]、在化合物3、4、7中通过NT-8[Formulatrix]实施结晶化条件的筛选。通过坐滴蒸气扩散法分别在下述条件得到晶体。

化合物1：90mM Morpheus Halogens,0.1M Morpheus缓冲液1(pH6.5),

30.0％w/v P550MME_P20K,20℃

化合物2：0.1M Tris pH 8.5,

25.0％w/v聚乙二醇3,350,20℃

化合物3：0.2M MgCl₂,0.1M Tris pH 8.5,

20.0％w/v聚乙二醇8,000,20℃

化合物4：0.2M一水合硫酸锂,

0.1M 2,2-二(羟甲基)-2,2',2"-三乙醇胺

[BIS-TRIS](pH 6.5),

25.0％w/v聚乙二醇3,350,20℃

化合物5：0.2M一水合硫酸锂,0.1M Tris pH 8.5,

30.0％w/v聚乙二醇4,000,20℃

化合物6：30.0％w/v P550MME_P20K[550M_20K],

0.1M Morpheus缓冲液3[MB3](pH 8.5),

60mM Morpheus Divalents[二价],21℃

化合物7：0.2M一水合硫酸锂,0.1M Tris pH 8.5,

30.0％w/v聚乙二醇4,000,20℃

4.X线衍射数据取得和结构分析

通过各自的下述条件取得X线衍射数据。

化合物1：

[大型放射光设备]

Swiss Light Source X10SA(Paul Scherrer Institute)

[样品处理条件]

在用作冷冻保护液的90mM Morpheus Halogens,0.1M Morpheus缓冲液1(pH6.5),30.0％w/v P550MME_P20K中，通过液氮冷冻晶体。

[测定条件]

温度：100K

X线波长：

化合物2：

[大型放射光设备]

SPring-8 BL45XU(国立研究开发法人理化学研究所播磨事业所)

[样品处理条件]

在用作冷冻保护液的0.1M Tris pH 8.5,25.0％w/v聚乙二醇3,350,25％乙二醇中，通过液氮冷冻晶体。

[测定条件]

温度：100K

X线波长：

化合物3：

[大型放射光设备]

SPring-8 BL45XU(国立研究开发法人理化学研究所播磨事业所)

[样品处理条件]

在用作冷冻保护液的0.2M MgCl₂,0.1M Tris pH 8.5,20.0％w/v聚乙二醇8,000,25％乙二醇中，通过液氮冷冻晶体。

[测定条件]

温度：100K

X线波长：

化合物4：

[大型放射光设备]

SPring-8 BL45XU(国立研究开发法人理化学研究所播磨事业所)

[样品处理条件]

在用作冷冻保护液的0.2M一水合硫酸锂,0.1M 2,2-二(羟甲基)-2,2',2"-三乙醇胺[BIS-TRIS](pH 6.5),25.0％w/v聚乙二醇3,350,30％乙二醇中，通过液氮冷冻晶体。

[测定条件]

温度：100K

X线波长：

化合物5：

[大型放射光设备]

光子工厂BL1A(大学共同利用机关法人高能加速器研究机构)

[样品处理条件]

在用作冷冻保护液的0.2M一水合硫酸锂,0.1M Tris pH 8.5,

30.0％w/v聚乙二醇4,000,25％甘油中，通过液氮冷冻晶体。

[测定条件]

温度：95K

X线波长：

化合物6：

[大型放射光设备]

光子工厂BL17A(大学共同利用机关法人高能加速器研究机构)

[样品处理条件]

在用作冷冻保护液的30.0％w/v P550MME_P20K[550M_20K],0.1MMorpheus缓冲液3[MB3](pH 8.5,60mM Morpheus Divalents[二价]中，通过液氮冷冻晶体。

[测定条件]

温度：95K

X线波长：

化合物7：

[大型放射光设备]

SPring-8 BL45XU(国立研究开发法人理化学研究所播磨事业所)

[样品处理条件]

[测定条件]

温度：100K

X线波长：

关于化合物1～6，通过autoPROC(XDS(Kabsch,W.2010)、AIMLESS(Evans,P.R.2006)、STARANISO(Tickle,I.J.et al.,2019)、CCP4(Winn,M.D.et al.,2011))(Global Phasing Ltd.)(Vonrhein,C.et al.,2001)分析X线衍射数据。关于化合物7，通过XDS(Kabsch,W.2010)、CCP4(Winn,M.D.et al.,2011)分析X线衍射数据。应用Phaser(McCoy,A.J.et al.,2007)，通过以已知的KRAS的结构为搜索模型的分子置换法，确定晶体结构。得到的结构应用Coot(Emsley,P.et al.,2010)、Phenix(Adams,P.D.et al.,2010)等细化。

5.晶体结构的确定

用下述分解能确定人KRasG12D突变体蛋白-肽化合物复合物的晶体结构。

化合物1：

化合物2：

化合物3：

化合物4：

化合物5：

化合物6：

化合物7：

根据确定的结构，阐明肽化合物1～7与人KRasG12D突变体蛋白的结合方式。结构分析的结果得到的各种统计值如以下的表。此外，化合物1和人KRasG12D突变体蛋白复合物的整体结构示于图1，化合物2和人KRasG12D突变体蛋白复合物的整体结构示于图2，化合物3和人KRasG12D突变体蛋白复合物的整体结构示于图3，化合物4和人KRasG12D突变体蛋白复合物的整体结构示于图4。

[表7]

评价例2KRASG12D与肽化合物的相互作用分析

1.与肽化合物相互作用的氨基酸的定义

应用Discovery studio 2020Client的展示受体-配体相互作用功能，鉴定与肽化合物相互作用的、突变型RAS中的氨基酸。

[表8]

2.肽化合物与ASP12的原子间距离的计算

应用Discovery studio 2020Client，指定位于距ASP12中存在的羧基的二个氧原子内的任一个以内的距离的氢原子以外的原子(直接交互原子)。关于化合物1～3在来自Fmoc-Phe(3-I)-OH的氨基酸残基中存在的苯基的3位取代的碘、关于化合物4在来自Fmoc-Phe(3-C#C)-OH的氨基酸残基中存在的苯基的3位取代的乙炔基的末端炔的氢侧的碳、关于化合物7位于哌嗪基的4位的氮属于直接交互原子。随后，指定这些直接交互原子、和KRASG12D的ASP12中存在的羧基的二个氧原子中的一个，测定双方的原子间距离。随后，对另一氧原子进行同样的测定，将距离短的一个作为肽化合物与ASP12的原子间距离。另外，关于化合物5和6，由于未见直接交互原子，不进行原子间距离的测定。

结果示于以下的表。

[表9]

另外，在化合物1～4和7的任一情形中，直接交互原子、和KRASG12D的ASP12中存在的羧基的氧原子(与直接交互原子的距离短的一个)都不经由其它分子相互作用。

根据表9所示结果可知，在化合物1～4的任一情形中，直接交互原子和KRASG12D的ASP12中存在的羧基的二个氧原子(与直接交互原子的距离短的一个)都直接相互作用。

此外，关于化合物7，见到与前述ASP12中存在的羧基的二个氧原子(与直接交互原子的距离短的一个)的直接相互作用，但后述的与Switch2区中GLN61的强相互作用、Switch2区和α3螺旋区的距离接近的现象和Switch2区中存在的氨基酸残基的原子与ASP12的原子的强相互作用均未见到。

3-1.肽化合物与GLN61的相互作用能的计算

应用Discovery studio 2020Client的计算相互作用能(Calculate InteractionEnergy)功能计算。

进行计算前，使用应用力场(Apply force field)功能对整个系统分配力场。力场使用默认的CHARMm。

打开计算相互作用能(Calculate Interaction Energy)面板，将肽化合物设定为原子选择1(Atom Selection 1)，将突变型RAS指定为残基选择2(Residue Selection 2)。介电模型(Dielectric Model)参数指定隐式距离相关电介质(Implicit Distance-Dependent Dielectrics)，介电常数(Dielectric Constant)参数设定为1。非结合列表半径(Nonbond List Radius)参数设定为14。

应用计算结果的、肽化合物与GLN61的相互作用能(Interaction Energy)项的值，求得构成肽化合物的全部原子与GLN61的全部原子间的相互作用能的总和。

3-2.肽化合物与GLN61的氢原子优化后的相互作用能的计算

应用Discovery studio 2020Client的最小化(Minimization)功能，按以下的顺序进行氢原子的优化。

首先，选择整个系统的重原子，应用创建固定原子约束(Create Fixed AtomConstraint)功能，进行重原子的构象固定。其后，使用应用力场(Apply force field)功能分配力场。力场应用CHARMm。

其后，用最小化(Minimization)功能进行氢原子的优化。此时，隐式溶剂模型(Implicit Solvent Model)指定距离相关电介质(Distance-Dependent Dielectrics)。

氢原子的优化后，用与3-1同样的方法，求得构成肽化合物的全部原子与GLN61的全部原子间的相互作用能的总和。

计算结果示于以下的表。

[表10]

根据表10所示结果可知，在化合物1～4的任一情形中，与Switch2区中GLN61都强相互作用。另一方面，在化合物6和7的任一情形中，与Switch2区中GLN61的相互作用都比化合物1～4弱。此外，关于化合物5，与Switch2区中GLN61的相互作用比化合物6、7强，但比化合物1～4弱，此外，如前述未见直接交互原子。

4.Switch2与α3螺旋的距离的计算

应用从Dassault Systemes株式会社销售的Discovery studio 2020Client的距离监测(Distance Monitor)功能，计算突变型RAS的ASP69中的Cα与GLN99中的Cα的原子间距离。

计算结果示于以下的表。

[表11]

根据表11所示结果可知，在化合物1～4的任一个与KRAS(G12D)结合的情形中，与化合物6和7比较，Switch2区与α3螺旋区的距离都更近。

此外，在化合物5中，见到Switch2区与α3螺旋区的距离与化合物1～4同程度地近，但如前述未见直接交互原子。

5-1.预定位的相互作用能的计算(对象：主链原子)

计算ALA59、GLY60、GLN61和GLU62的氨基酸之中，构成以下氨基酸残基的主链的全部原子各自与ASP12的全部原子各自的相互作用能的总和，前述氨基酸残基为具有一个以上位于距ASP12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个以内的距离的非氢原子的氨基酸残基。

另外，关于化合物1～4，ALA59、GLY60、GLN61是具有一个以上位于距ASP12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个以内的距离的非氢原子的氨基酸残基，关于化合物5，GLN61是具有一个以上位于距ASP12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个/>以内的距离的非氢原子的氨基酸残基。此外，关于化合物6和7，由于不存在满足上述条件的氨基酸残基，不进行相互作用能的计算。

进行计算前，使用应用力场(Apply force field)功能对整个系统分配力场。力场应用CHARMm。打开计算相互作用能面板，将突变型RAS的ASP12中的全部原子指定为原子选择1(Atom Selection 1)。将突变株RAS的ALA59、GLY60、GLN61、GLU62的氨基酸内、位于距ASP12的羧基的2个O原子以内的距离的氨基酸的全部主链原子指定为原子选择2(Atom Selection 2)。介电模型(Dielectric Model)参数指定隐式距离相关电介质(Implicit Distance-Dependent Dielectrics)，介电常数(Dielectric Constant)参数设定为1。非结合列表半径(Nonbond List Radius)参数设定为14。应用计算结果的相互作用能(Interaction Energy)项的值。

5-2.氢原子优化后的预定位的相互作用能的计算(对象：主链原子)

应用Discovery studio 2020Client的最小化(Minimization)功能，按以下的顺序进行氢原子的优化。首先，选择整个系统的重原子，应用创建固定原子约束(CreateFixed Atom Constraint)功能，进行重原子的构象固定。其后，使用应用力场(Apply forcefield)功能分配力场。力场应用CHARMm。

氢原子的优化后，用与5-1同样的方法，进行预定位的相互作用能计算。

5-3.预定位的相互作用能的计算(对象：全部原子)

除了将ALA59、GLY60、GLN61和GLU62的氨基酸之中、具有一个以上位于距ASP12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个以内的距离的非氢原子的氨基酸残基的全部原子作为计算的对象以外，用与5-1同样的方法，进行预定位的相互作用能计算。

5-4.氢原子优化后的预定位的相互作用能的计算(对象：全部原子)

除了将ALA59、GLY60、GLN61和GLU62的氨基酸之中、具有一个以上位于距ASP12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个以内的距离的非氢原子的氨基酸残基的全部原子作为计算的对象以外，用与5-2同样的方法，进行预定位的相互作用能计算。

计算结果示于以下的表。

[表12]

另外，在化合物1～4和5的任一情形中，Switch2区中存在的氨基酸残基的原子与ASP12的原子都分别不经由其它分子相互作用。

根据表12所示结果可知，在化合物1～4的任一情形中，KRAS-G12D的Switch2区中存在的氨基酸残基的原子与ASP12的原子分别都强相互作用。

此外，在化合物5中也见到KRAS-G12D的Switch2区中存在的氨基酸残基的原子与ASP12的原子的相互作用，但不是如化合物1～4的强相互作用。此外，如前述未见直接交互原子。

此外，关于化合物6未见预定位，关于化合物7仅见到比化合物5弱的相互作用。

评价例3通过表面等离子体共振(SPR)的化合物对KRAS的结合评价

应用Biacore 8K+(GE Healthcare)作为装置，运行缓冲液应用包含1mM DTT、10mMMgCl₂、0.01％Tween20、10μM GDP和4％DMSO的HBS(10mM HEPES-NaOH、150mM NaCl、pH7.4)。各化合物溶液配制为以运行缓冲液为溶剂、以表13所示浓度为最高浓度的公比3倍、4浓度的稀释系列。在稀释系列制备中，首先，以DMSO为溶剂制备终浓度的100倍浓的化合物溶液的稀释系列，其后通过用稀释用缓冲液(包含1mM DTT、10mM MgCl₂、0.01％Tween20、10μMGDP、3.03％DMSO的HBS)稀释100倍而配制。

生物素化的Avi标签融合野生型KRAS(WT)和突变型KRAS(G12D)以150-300RU左右的固定量固定于用生物素CAPture试剂(Biotin CAPture Reagent)涂覆的传感器芯片CAP(Sensor Chip CAP)(Cytiva)的表面。各化合物的结合评价用单循环动力学(Single CycleKinetics)法进行，向KRAS非固定表面和固定表面添加运行缓冲液或化合物溶液，得到结合应答。流速设为100μL/min，化合物添加循环中从低浓度断续地每75秒添加4种不同浓度的化合物溶液。观测解离相3500秒。在空白循环中，断续地添加4次运行缓冲液而不是化合物溶液。每一循环固定生物素CAPture试剂和KRAS，各循环结束时通过生物素CAPture试剂盒(Biotin CAPture Kit)(Cytiva)所附的再生溶液(Regeneration solution)再生传感器芯片。测定在30℃进行。

[表13]

	KRAS(G12D)-GDP	KRAS(WT)-GDP
			化合物编号	最高剂量(μM)	最高剂量(μM)
1	1	1
			2	5	5
3	0.5	5
			4	0.5	0.5
5	0.5	1
			6	1	1
7	0.1	0.5

得到的传感器图用Biacore Insight评价软件实施双参比处理和溶剂校正后，基于1∶1结合模型进行曲线拟合，确定实施例1中配制的化合物1～7对KRAS的解离常数K_D。

以下的表显示，关于各肽化合物，基于解离常数K_D计算的相对于野生型KRAS的对突变型KRAS(G12D)的选择性。

[表14]

根据表14所示结果可知，化合物1～4的任一个都表现出与化合物5～7相比对KRAS(G12D)的高选择性。

表现出这样的对KRAS(G12D)的高选择性的理由并没有确定，但作为假说考虑以下。

首先，本申请公开的实施例1～4的化合物与KRAS(G12D)中ASP12直接相互作用(表9)。进一步，实施例1～4的化合物通过与KRAS(G12D)的Switch2区、α3螺旋相互作用(表8)，使Switch2区和α3螺旋区的距离接近(表11)。认为这是引起作为Switch2区与KRAS(G12D)中ASP12的相互作用的预定位(表12)的主要原因。

综上，认为实施例1～4的化合物通过与KRAS(G12D)中ASP12直接相互作用、连同也与KRAS(G12D)的Switch2区和α3螺旋区相互作用，导致分子内结构的变化使得在KRAS(G12D)中更具优势地稳定，作为结果发挥对KRAS(G12D)的高选择性。

进一步，关于一部分化合物，对KRAS(G12D)的选择性比未见直接交互原子的化合物5和未见预定位的化合物7的选择性的合计值高。由此提示，前述与KRAS(G12D)中ASP12的直接相互作用(直接交互)、和导致分子内结构的变化使得在KRAS(G12D)中更具优势地稳定(预定位)的作用发挥协同效果，有助于对KRAS(G12D)的高选择性。

序列表

<110> 中外制药株式会社

<120> 对突变型RAS(G12D)显示选择结合性的结合分子

<130> C1-A2108PP

<150> PCT/JP2021/017466

<151> 2021-05-07

<160> 10

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 205

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成序列（an artificially synthesized sequence）

<400> 1

Met Lys Asp His Leu Ile His Asn Val His Lys Glu Glu His Ala His

1 5 10 15

Ala His Ser Ser Gly Ser Leu Val Pro Arg Gly Ser Ser Gly Gly Ser

20 25 30

Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys Ser

35 40 45

Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr Asp

50 55 60

Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly Glu

65 70 75 80

Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr Ser

85 90 95

Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys Val

100 105 110

Phe Ala Ile Asn Asn Thr Lys Ser Phe Glu Asp Ile His His Tyr Arg

115 120 125

Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Glu Asp Val Pro Met Val Leu

130 135 140

Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Ser Arg Thr Val Asp Thr Lys Gln

145 150 155 160

Ala Gln Asp Leu Ala Arg Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr Ser

165 170 175

Ala Lys Thr Arg Gln Gly Val Asp Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val Arg

180 185 190

Glu Ile Arg Lys His Lys Glu Lys Met Ser Lys Asp Gly

195 200 205

<210> 2

<211> 189

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 2

Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys

1 5 10 15

Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr

20 25 30

Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly

35 40 45

Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr

50 55 60

Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys

65 70 75 80

Val Phe Ala Ile Asn Asn Ser Lys Ser Phe Ala Asp Ile Asn Leu Tyr

85 90 95

Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Asp Asp Val Pro Met Val

100 105 110

Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Thr Arg Thr Val Asp Thr Lys

115 120 125

Gln Ala His Glu Leu Ala Lys Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr

130 135 140

Ser Ala Lys Thr Arg Gln Gly Val Glu Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val

145 150 155 160

Arg Glu Ile Arg Gln Tyr Arg Met Lys Lys Leu Asn Ser Ser Asp Asp

165 170 175

Gly Thr Gln Gly Cys Met Gly Leu Pro Cys Val Val Met

180 185

<210> 3

<211> 189

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 3

Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys

1 5 10 15

Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr

20 25 30

Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly

35 40 45

Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr

50 55 60

Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys

65 70 75 80

Val Phe Ala Ile Asn Asn Thr Lys Ser Phe Glu Asp Ile His Gln Tyr

85 90 95

Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Asp Asp Val Pro Met Val

100 105 110

Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Ala Ala Arg Thr Val Glu Ser Arg

115 120 125

Gln Ala Gln Asp Leu Ala Arg Ser Tyr Gly Ile Pro Tyr Ile Glu Thr

130 135 140

Ser Ala Lys Thr Arg Gln Gly Val Glu Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val

145 150 155 160

Arg Glu Ile Arg Gln His Lys Leu Arg Lys Leu Asn Pro Pro Asp Glu

165 170 175

Ser Gly Pro Gly Cys Met Ser Cys Lys Cys Val Leu Ser

180 185

<210> 4

<211> 189

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 4

Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Gly Gly Val Gly Lys

1 5 10 15

Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr

20 25 30

Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly

35 40 45

Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr

50 55 60

Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys

65 70 75 80

Val Phe Ala Ile Asn Asn Thr Lys Ser Phe Glu Asp Ile His His Tyr

85 90 95

Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Glu Asp Val Pro Met Val

100 105 110

Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Ser Arg Thr Val Asp Thr Lys

115 120 125

Gln Ala Gln Asp Leu Ala Arg Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr

130 135 140

Ser Ala Lys Thr Arg Gln Arg Val Glu Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val

145 150 155 160

Arg Glu Ile Arg Gln Tyr Arg Leu Lys Lys Ile Ser Lys Glu Glu Lys

165 170 175

Thr Pro Gly Cys Val Lys Ile Lys Lys Cys Ile Ile Met

180 185

<210> 5

<211> 189

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 5

Met Thr Glu Tyr Lys Leu Val Val Val Gly Ala Asp Gly Val Gly Lys

1 5 10 15

Ser Ala Leu Thr Ile Gln Leu Ile Gln Asn His Phe Val Asp Glu Tyr

20 25 30

Asp Pro Thr Ile Glu Asp Ser Tyr Arg Lys Gln Val Val Ile Asp Gly

35 40 45

Glu Thr Cys Leu Leu Asp Ile Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Glu Tyr

50 55 60

Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr Gly Glu Gly Phe Leu Cys

65 70 75 80

Val Phe Ala Ile Asn Asn Thr Lys Ser Phe Glu Asp Ile His His Tyr

85 90 95

Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val Lys Asp Ser Glu Asp Val Pro Met Val

100 105 110

Leu Val Gly Asn Lys Cys Asp Leu Pro Ser Arg Thr Val Asp Thr Lys

115 120 125

Gln Ala Gln Asp Leu Ala Arg Ser Tyr Gly Ile Pro Phe Ile Glu Thr

130 135 140

Ser Ala Lys Thr Arg Gln Arg Val Glu Asp Ala Phe Tyr Thr Leu Val

145 150 155 160

Arg Glu Ile Arg Gln Tyr Arg Leu Lys Lys Ile Ser Lys Glu Glu Lys

165 170 175

Thr Pro Gly Cys Val Lys Ile Lys Lys Cys Ile Ile Met

180 185

<210> 6

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成序列（an artificially synthesized sequence）

<400> 6

Ala Gly Gln Glu Glu Tyr Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg Thr

1 5 10 15

Gly Glu

<210> 7

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成序列（an artificially synthesized sequence）

<400> 7

Gln Glu Glu Tyr Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met

1 5 10

<210> 8

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成序列（an artificially synthesized sequence）

<400> 8

Thr Lys Ser Phe Glu Asp Ile His His Tyr Arg Glu Gln Ile Lys Arg

1 5 10 15

Val Lys

<210> 9

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成序列（an artificially synthesized sequence）

<400> 9

His Tyr Arg Glu Gln Ile Lys Arg Val

1 5

<210> 10

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 人工合成序列（an artificially synthesized sequence）

<400> 10

Gln Glu Glu Tyr Ser Ala Met Arg Asp Gln Tyr Met Arg

1 5 10

Claims

1.一种结合分子，其对突变型RAS(G12D)的结合选择性相对于野生型RAS是5倍以上，其具有以下(1)和(2)的特征：

(1)所述结合分子与所述突变型RAS(G12D)中的Asp12相互作用，和

(2)所述结合分子与所述突变型RAS(G12D)中的Switch2区相互作用，并且，在所述突变型RAS(G12D)中，存在于所述Switch2区的氨基酸残基与Asp12分子内相互作用。

2.权利要求1中所述的结合分子，其中，进一步，所述结合分子与所述突变型RAS(G12D)中的α3螺旋区相互作用。

3.权利要求1或2中所述的结合分子，其中，在存在于所述Switch2区的氨基酸残基与Asp12分子内相互作用的情形中，在所述突变型RAS(G12D)中，存在于所述Switch2区的Asp69中的α碳原子与存在于所述α3螺旋区的Gln99中的α碳原子之间的距离是15.0埃以下。

4.权利要求1～3的任一项中所述的结合分子，其中，所述结合选择性是10倍以上。

5.权利要求1～4的任一项中所述的结合分子，其中，针对所述突变型RAS(G12D)的解离常数(K_D)是10nM以下。

6.权利要求1～5的任一项中所述的结合分子，其中，存在于所述Switch2区、并且与所述Asp12相互作用的氨基酸残基是选自由Ala59、Gly60、Gln61和Glu62组成的组中的任一个以上。

7.权利要求6中所述的结合分子，其中，在所述Ala59、Gly60、Gln61和Glu62之中，构成以下氨基酸残基的主链的全部原子各自与Asp12的全部原子各自的相互作用能的总和是-0.5kcal/mol以下，所述氨基酸残基为具有一个以上距所述Asp12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个4.5埃以内存在的非氢原子的氨基酸残基。

8.权利要求6中所述的结合分子，其中，在所述Ala59、Gly60、Gln61和Glu62之中，构成以下氨基酸残基的全部原子各自与Asp12的全部原子各自的相互作用能的总和是-0.5kcal/mol以下，所述氨基酸残基为具有一个以上距所述Asp12的侧链中羧基的2个氧原子的任一个4.5埃以内存在的非氢原子的氨基酸残基。

9.权利要求1～8的任一项中所述的结合分子，其与所述Switch2区的Gln61相互作用。

10.权利要求1～9的任一项中所述的结合分子，其包含与Gln61相互作用的氨基酸残基，其中，与所述Gln61相互作用的氨基酸残基的全部原子各自与所述Gln61的全部原子各自之间的相互作用能的总和是-7.0kcal/mol以下。

11.权利要求1～10的任一项中所述的结合分子，其包含为＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-X、或＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-(C₆～C₁₀亚芳基)-X的结构(1)，此处，X是羟基、Cl、Br、I、-NR_AR_B(此处，R_A和R_B都是氢、或分别独立地是C₁～C₃烷基、或R_A和R_B与它们结合的氮原子一起形成包含选自由N、O、和S组成的组中的1～3个杂原子的4～8元杂环)、C₁～C₃烷基、C₁～C₃卤烷基、-C≡CH、或任选被取代的C₃～C₈环烷基，＊意味着结合点，但是，在结合分子包含＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-X的情形中，X不是C₁～C₃烷基。

12.权利要求1～11的任一项中所述的结合分子，其包含为＊-(直链或支链C₁～C₈亚烷基)-Y的结构(2)，此处，Y是任选被取代的C₁～C₁₀烷基、任选被取代的C₂～C₁₀烯基、任选被取代的C₂～C₁₀炔基、任选被取代的C₁～C₆烷氧基C₁～C₆烷基、任选被取代的C₆～C₁₀芳基、或任选被取代的C₃～C₈环烷基，＊意味着结合点。

13.权利要求1～12的任一项中所述的结合分子，其包含下述的结构(3)：

式中，

Q₉是氢或C₁～C₆烷基，

＊意味着结合点。

14.权利要求13中所述的结合分子，其中，结构(1)中的X所包含的原子中距结构(1)的结合点最远的原子与结构(2)中的Y所包含的原子中距结构(2)的结合点最远的原子经由20个以内的原子结合。

15.权利要求13中所述的结合分子，其中，除了R₉和P₉形成4～7元饱和杂环的情形之外，结构(1)中的X所包含的原子中距结构(1)的结合点最远的原子与结构(3)中的R₉所包含的原子中距结构(3)中与Q₉和R₉结合的碳原子最远的原子经由25个以内的原子结合。

16.权利要求1～15的任一项中所述的结合分子，其中，结合分子的分子量是5000以下。