WO2020230780A1 - Ｒａｓ阻害ペプチド - Google Patents

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WO2020230780A1
WO2020230780A1 PCT/JP2020/018956 JP2020018956W WO2020230780A1 WO 2020230780 A1 WO2020230780 A1 WO 2020230780A1 JP 2020018956 W JP2020018956 W JP 2020018956W WO 2020230780 A1 WO2020230780 A1 WO 2020230780A1
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pro
cys
amino acid
peptide
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PCT/JP2020/018956
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孝太郎 坂元
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一丸ファルコス株式会社
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a peptide or the like that inhibits the activity of Ras, and more particularly to a cyclic peptide or the like having a specific amino acid sequence and a cyclic structure.
  • the Ras protein (meaning the Ras subfamily, hereinafter abbreviated as Ras) is a GTPase expressed in cells, and by binding to GDP or GTP, cell proliferation signal transduction is turned off (inactivated) / on (active). It functions as a molecular switch that controls the transformation.
  • the GDP-bound type is in the off state and the GTP-bound type is in the on state.
  • a guanine nucleotide exchange factor (GEF) induced by a signal from a cell surface receptor converts Ras from GDP-bound to GTP-bound, and GTP-bound Ras interacts with downstream proteins such as RAF and PI3K. By doing so, the signal is further transmitted.
  • Ras-bound GTP is hydrolyzed from GTP to GDP with the help of Ras' own enzymatic activity and GTPase-activating protein (GAP).
  • GAP GTPase-activating protein
  • Ras consists of 188 to 189 amino acid sequences, and any amino acid mutation greatly suppresses its own GTPase activity and the resolution of GTP to be hydrolyzed by GAP, and is biased toward the GTP-bound type. As a result, the cell proliferation signal is prolonged.
  • Non-Patent Document 1 Approximately 30% of human tumors express mutant Ras with amino acid mutations, which is used as a driver for tumor growth.
  • K-Ras, N-Ras, and H-Ras are examples of members who are attracting attention as drug discovery targets.
  • amino acid mutations of K-Ras are known to occur at the highest frequency of about 20% of human tumors (Non-Patent Document 1).
  • Non-Patent Document 2 It has been reported that most of the amino acid mutation positions in K-Ras are position 12 glycine, followed by position 13 glycine, position 61 glutamine, and other positions. The most common mutations in position 12 glycine are aspartic acid (about 30%), followed by valine (about 20%), cysteine (about 10%), alanine (about 5%), and serine (about 5%). About 5%), arginine (about 3%), and other amino acids (Non-Patent Document 2).
  • K-Ras which is K-Ras in which glycine at position 12 is mutated to aspartic acid
  • G12D K-Ras in which glycine at position 12 is mutated to aspartic acid
  • the present inventor selectively bound K-Ras (G12D) over wild-type K-Ras in cell-free tests, and GDP-bound K-Ras (G12D) became GTP-bound K-Ras ( Cyclic peptide KRpep-2d that inhibits conversion to G12D): Ac-Arg-Arg-Arg-Arg-c (Cys-Pro-Leu-Tyr-Ile-Ser-Tyr-Asp-Pro-Val-Cys) It was reported that -Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-NH 2 (SEQ ID NO: 22) was found (Non-Patent Document 3).
  • KRpep-2d was shown in cell studies to significantly and selectively suppress the proliferation of A427 cells expressing K-Ras (G12D).
  • the present inventor has analyzed the crystal structure of the complex of KRpep-2d and K-Ras (G12D) and reported the mechanism of its binding (Non-Patent Document 4).
  • KRpep-2d which is composed only of natural amino acids, has low resistance to protease degradation.
  • Cys cysteines
  • the present inventor has shown that in a cell-free test under reducing conditions containing dithiothreitol (DTT), the inhibitory activity of KRpep-2d on the exchange reaction of K-Ras (G12D) from GDP-bound to GTP-bound.
  • DTT dithiothreitol
  • the inhibitory activity is attenuated by 50 times or more as compared with the inhibitory activity under non-reducing conditions (Non-Patent Documents 3 and 5).
  • the significant growth inhibitory activity of KRpep-2d in a cell test is several to several tens of ⁇ M (Non-Patent Documents 3 and 5), and it can be used as a drug, a diagnostic agent, and / or a research reagent. There is room for improvement.
  • the present invention has been made in view of such a problem, the object of which is to improve at least one of the above problems for using a Ras inhibitor peptide as a drug, a diagnostic agent, and / or a research reagent.
  • the purpose is to provide a novel Ras inhibitory peptide.
  • the present inventor has found a novel group of Ras-inhibiting peptides in conducting an optimization study of KRpep-2d.
  • Ras binding activity and protease degradation resistance of KRpep-2d are based on the structural information of the complex of KRpep-2d and K-Ras (G12D) described in Non-Patent Document 4.
  • Amino acid substitution was predicted to improve functions such as cell growth inhibitory activity.
  • KRpep-2d is (1) circularized by a disulfide bond between the side chains of 5-position Cys and 15-position Cys, and (2) the amino acids at positions 6 to 14 are used as pharmacophore with K-Ras (G12D).
  • the predominantly interacting amino acids (3) at positions 1 to 4 and 16 to 19 mainly contribute to the intracellular translocation of peptides, but when deleted, they bind to Ras and inhibit them. Since the activity is significantly attenuated (Non-Patent Documents 4 and 5), it also contributes to the control of the three-dimensional structure of the peptide. Therefore, (1) a binding form in which the disulfide bond between the side chains of 5-position Cys and 15-position Cys is not easily cleaved even under reducing conditions so that Ras binding activity can be maintained even under reducing intracellular conditions. , (2) Introducing an unnatural amino acid structure at positions 6 to 14 to enhance interaction with Ras, (3) Positions 1 to 4 and 16 for the purpose of reducing molecular weight.
  • X 3, X 5 and X 7 is an amino acid residue having a respective amino acid residue having a hydrocarbon group which may have a substituent independently optionally substituted aromatic carbocyclic group , An amino acid residue having an aromatic heterocyclic group which may have a substituent, or a derivative thereof.
  • X 8 is an aspartic acid residue or a derivative thereof, and X 2 , X 6 , X 9 , and X 10 are arbitrary amino acid residues.
  • X 1 and X 11 and X 4 and X 11 independently form an indirect covalent bond between them, either directly or via a linker, whereby the peptide of formula (1) is intramolecular.
  • the covalent bond between X 1 and X 11 is any of their main chain-main chain, main chain-side chain, side chain-main chain, or side chain-side chain.
  • may, also, covalent bond between X 4 and X 11 are their side chains - between the main chain, or side chain - can be any bond between side chains.
  • a novel cyclic peptide useful for using the Ras inhibitory peptide as a drug, a diagnostic agent, and / or a research reagent.
  • FIG. 1 shows amino acid sequences involved in functions such as Ras binding activity (pharmacophore) of KRpep-2d, cyclic structure regulation (SS binding), and cell-penetrating peptide (CPP). Moreover, the outline of the structure of the peptide of this invention which modified KRpep-2d is shown.
  • FIG. 2 shows an example of amino acids used in the amino acid residue substitution study at each amino acid position of KRpep-2d.
  • FIG. 3 outlines a competitive binding test by ELISA used to compare the binding activity of a peptide substituted with an amino acid residue to that of K-Ras (G12D) with that of KRpep-2d.
  • FIG. 4 shows the peptide concentration-dependent binding activity of N-terminal biotin-modified KRpep-2d (Biotin-KRpep-2d) to K-Ras (G12D).
  • FIG. 5 shows wild-type K-Ras, K-Ras (G12D), K-Ras (G12V), K-Ras (G12C), K-Ras (G13D), and wild-type biomodified products of the peptides of the present invention.
  • FIG. 6 shows the results of mixing KRpep-2d and a representative example of the peptide of the present invention with rat plasma and comparing the resistance to protease degradation.
  • FIG. 7A shows the results of evaluation of the growth inhibitory activity on A427 cells expressing K-Ras (G12D) by quantification of ATP with respect to KRpep-2d and a representative example of the peptide of the present invention.
  • FIG. 7B shows the results of evaluating the growth inhibitory activity of the peptide of sequence 17 on PANC-1 cells expressing K-Ras (G12D) by quantification of ATP.
  • FIG. 8 shows the results of evaluating the anticancer activity of a representative example of the peptide of the present invention by administering it to subcutaneous cancer-bearing mice by tail vein.
  • FIG. 9 shows the results of evaluating the anticancer activity of a representative example of the peptide of the present invention by administering it to an orthotopic transplant model mouse by tail vein.
  • FIG. 10 shows a structural formula of a representative example of the peptide of the present invention used in the examples.
  • a peptide refers to a peptide in which two or more amino acids are bound by an amide bond (peptide bond), and for example, 2 to 20 amino acids may be bound by an amide bond.
  • the left end is the N-terminal (amino terminal) and the right end is the C-terminal (carboxy-terminal) according to the convention of peptide marking.
  • the first carbon atom adjacent to the carbonyl group forming the peptide bond is referred to as C ⁇ carbon.
  • arbitrary amino acid or a derivative thereof is used in the broadest sense, and in addition to a natural amino acid, an artificial amino acid having an unnatural structure and a property known in the art which is a characteristic of the amino acid. It also contains chemically synthesized compounds as well as carboxylic acids having functional groups.
  • unnatural amino acids are D-amino acids, ⁇ / ⁇ -disubstituted amino acids with different main chain structures (such as ⁇ -methylated amino acids such as 2-aminoisobutyric acid), and N-alkyl-amino acids (N-methyl).
  • the hydrocarbon group which may have a substituent is, for example, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, 1-.
  • C 1-10 alkyl groups such as ethylpropyl, hexyl, isohexyl, 1,1-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 3,3-dimethylbutyl, 2-ethylbutyl, ethenyl, 1-propenyl, 2-propenyl, 2-Methyl-1-propenyl, 1-butenyl, 2-butenyl, 3-butenyl, 3-methyl-2-butenyl, 1-pentenyl, 2-pentenyl, 3-pentenyl, 4-pentenyl, 4-methyl-3- C 2-10 alkenyl groups such as pentenyl, 1-hexenyl, 3-hexenyl, 5-hexenyl, ethynyl, 1-propynyl, 2-propynyl, 1-butynyl, 2-butynyl, 3-butynyl, 1-pentynyl, 2- C 2-10 alkynyl groups such as
  • 5- to 6-membered monocyclic aromatic heterocycles such as 1,2,4-oxadiazolyl, 1,3,4-oxadiazolyl, 1,2,4-thiadiazolyl, 1,3,4-thiadiazolyl, triazolyl, tetrazolyl, triazinyl, etc.
  • Ras means all wild-type proteins and amino acid mutant proteins of the Ras subfamily such as K-Ras, N-Ras, and H-Ras of mammals such as mice, rats, dogs, monkeys, and humans. , Both GDP-bound and GTP-bound.
  • the peptide of the present invention (1) inhibits the binding of the previously reported Ras inhibitory peptide KRpep-2d to the Ras protein of a biotin-labeled product. That, (2) binding to Ras protein in a concentration-dependent manner, (3) inhibiting the phosphorylation of Erk in Ras-expressing cells, (4) suppressing the proliferation of Ras-expressing cells, etc. Meaning, when any one of these effects is shown, it is said to have "Ras inhibitory activity”.
  • the presence or absence of Ras inhibitory activity can be confirmed according to a method known to those skilled in the art.
  • Examples of the method for confirming the inhibitory activity include a method for evaluating the reaction in which GDP on the Ras protein is exchanged for GTP (Non-Patent Document 3), a method for co-culturing Ras-expressing cells and a peptide, and a signal downstream of Ras.
  • a method for examining the presence or absence of phosphorylation of a certain Erk (Non-Patent Document 3), a method for co-culturing Ras-expressing cells and a peptide and examining the presence or absence and rate of proliferation of the cells (Non-Patent Document 3), a cancer-bearing mouse, etc. Examples include, but are not limited to, a method of administering a peptide to a disease model animal of the above and examining the presence or absence and rate of growth of cancer cells.
  • FIG. 1 shows characteristics related to Ras-binding activity of KRpep-2d (pharmacophore), cyclic structure regulation (SS binding), intracellular transferability (Cell Penetrating Peptide: CPP), etc., which were the basis of cyclic peptide design.
  • KRpep-2d the 6th to 14th amino acid residues forming the Ras binding site correspond to the 2nd to 10th amino acid residues in the cyclic peptide of this embodiment.
  • the cyclization between the 5th and 15th cysteine residues in KRpep-2d is the binding A between the 1st and 11th amino acid residues and the 4th and 11th amino acid residues in the cyclic peptide of this embodiment. It is more stabilized as a two cyclic structure with bond B between amino acid residues. Then, an example of the amino acid subjected to the substitution of the amino acid residue at each amino acid position of KRpep-2d is shown in FIG.
  • the cyclic peptide in one preferred embodiment of the present invention can be represented by the following formula (1).
  • c [X 1- X 2- X 3- c (X 4- X 5- X 6- X 7- X 8- X 9- X 10- X 11 )]
  • each amino acid residue of X 1 to X 11 is as follows.
  • X 1 , X 4 and X 11 independently represent an amino acid residue having an amino group, a carboxy group, a thiol group, an allyl group, an alkynyl group, an azido group, or a halogen atom, or a derivative thereof.
  • X 3, X 5 and X 7 is an amino acid residue having a respective amino acid residue having a hydrocarbon group which may have a substituent independently optionally substituted aromatic carbocyclic group , Or an amino acid residue having an aromatic heterocyclic group which may have a substituent, or a derivative thereof.
  • X 8 is an aspartic acid residue or a derivative thereof, and X 2 , X 6 , X 9 , and X 10 are arbitrary amino acid residues.
  • the amino group and the carboxy group in the "amino acid residue having an amino group or a carboxy group" may be a group forming an amide bond in the main chain.
  • X 1 and X 11 and X 4 and X 11 independently form an indirect covalent bond between them, either directly or via a linker, whereby the peptide of formula (1) is intramolecular.
  • the covalent bond between X 1 and X 11 is any of their main chain-main chain, main chain-side chain, side chain-main chain, or side chain-side chain.
  • may, also, covalent bond between X 4 and X 11 are their side chains - between the main chain, or side chain - can be any bond between side chains.
  • X represents CH 2- S—CH 2
  • examples thereof include a thioether bond formed by a thiol-ene reaction between the main chain allyl group of 3-butenoic acid and the side chain thiol group of 11-position cysteine.
  • CH CH
  • Y represents S-CH 2 -S
  • X 4 and X 11 are both cysteine, between side chain thiol group of 4-position of the side chain thiol group and diiodomethane (DIM) Linker and 11 of -S-CH 2 -S-bonds formed in.
  • DIM diiodomethane
  • Y represents S- (CH 2 ) 3- S, for example, between the side chain thiol group of 4-position cysteine, the 1,3-diiodopropane (DIP) linker and the side chain thiol group of 11-position cysteine. Examples include the formed -S- (CH 2 ) 3 -S-bond.
  • Y triazole
  • a triazole-mediated bond formed by a click reaction between the side chains of 4-position butenyl-L-glycine and 11-position ⁇ -azido-L-alanine.
  • X 3 and X 5 are amino acid residues independently represented by any of the following formulas (4) to (7).
  • the amino acid residue of formula (4) is (In the formula, the wavy line represents the attachment point with the carbonyl group or the nitrogen atom forming the amide bond of the main chain, and R 1 , R 2 and R 6 each independently represent the hydrogen atom or the methyl group, and R 3 , R 4 and R 5 each independently represent a hydrogen atom, a methyl group, or a halogen atom (F, Cl, Br, I), and n represents an integer of 0 to 10). ..
  • leucine, norleucine, isoleucine, valine, 2-aminoheptanoic acid, 2-aminooctanoic acid, 2-aminononanoic acid, 2-aminodecanoic acid, ⁇ -methyl-leucine and 5,5'-dimethylnorleucine, etc. preferable.
  • the amino acid residue of formula (5) is (In the formula, Z represents C or N, R 6 represents a hydrogen atom or a methyl group, and n represents an integer of 1 to 6).
  • Z represents C or N
  • R 6 represents a hydrogen atom or a methyl group
  • n represents an integer of 1 to 6.
  • cyclobutylglycine, cyclopentylglycine, cyclohexylglycine and the like are preferable.
  • the amino acid residue of the following formula (6) is (In the formula, R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 independently represent a hydrogen atom or a halogen atom (F, Cl, Br, I), and R 6 is a hydrogen atom or a methyl group. Represents).
  • R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 independently represent a hydrogen atom or a halogen atom (F, Cl, Br, I)
  • R 6 is a hydrogen atom or a methyl group.
  • phenylglycine, 3-chlorophenylglycine, 2-chlorophenylglycine, 4-chlorophenylglycine, 3-fluorophenylglycine, 2-fluorophenylglycine, 4-fluorophenylglycine and the like are preferable.
  • the amino acid residue of formula (7) is (In the formula, R 12 is a 2-thienyl group, a 3-thienyl group, a 2-pyridyl group, a 3-pyridyl group, a 4-pyridyl group, a 2-thiazolyl group, a 4-thiazolyl group, a 2-oxazolyl group, 4-. oxazolyl group, 1-pyrazolyl group, 1-imidazolyl group, a 1,2,3-triazol-1-yl group, or 1,2,4-triazol-1-yl group, R 6 is a hydrogen atom, or Represents a methyl group).
  • the amino acid residue represented by any of these formulas (4) to (7) may be a derivative thereof.
  • X 7 is an amino residue represented by any of the following formulas (8) to (11).
  • the amino acid residue of formula (8) is (In the formula, the wavy line represents the attachment point with the carbonyl group or nitrogen atom forming the amide bond of the main chain, and R 7 , R 8 , R 9 , R 10 , and R 11 are independent hydrogen atoms and hydroxy groups, respectively.
  • R 6 represents a hydrogen atom or a methyl group). ..
  • 4-fluorophenylalanine, 4-methylphenylalanine, 4-chlorophenylalanine, 4-trifluoromethyl-phenylalanine, 4-bromophenylalanine, 4-iodophenylalanine and the like are preferable.
  • the amino acid residue of formula (9) is (In the formula, R 13 , R 14 , R 15 and R 16 are independently hydrogen atoms, hydroxy groups, methoxy groups, methyl groups, tert-butyl groups, methyl halide groups, or halogen atoms (F, Cl, It represents Br, I), and R 6 is represented by a hydrogen atom or a methyl group).
  • R 13 , R 14 , R 15 and R 16 are independently hydrogen atoms, hydroxy groups, methoxy groups, methyl groups, tert-butyl groups, methyl halide groups, or halogen atoms (F, Cl, It represents Br, I)
  • R 6 is represented by a hydrogen atom or a methyl group.
  • tryptophan, 6-chlorotryptophan, 5-chlorotryptophan and the like are preferable.
  • the amino acid residue of formula (10) is (In the formula, the wavy line represents the bond site with the carbonyl group or nitrogen atom forming the amide bond of the main chain, Z represents C or N, R 6 represents a hydrogen atom or a methyl group, and n represents a hydrogen atom or a methyl group. It represents an integer of 1 to 6). Among these, cyclohexylalanine and the like are preferable.
  • R 17 is a 2-thienyl group, a 3-thienyl group, a 2-pyridyl group, a 3-pyridyl group, a 4-pyridyl group, a 2-thiazolyl group, a 4-thiazolyl group, a 2-oxazolyl group, 4-.
  • X 6 is an amino acid residue represented by the following formula (12):
  • the wavy line represents the attachment point with the carbonyl group or nitrogen atom forming the amide bond of the main chain
  • R 18 , R 19 , and R 20 are independently hydrogen atom, hydroxy group, methoxy group, amino group, respectively.
  • 6 represents a hydrogen or a methyl group
  • n represents 0 or 1.
  • valine, leucine, serine, threonine and 2,3-diaminopropanoic acid are preferable.
  • X 2 and X 9 are amino acids having a hydrocarbon group which may independently have a substituent, N-methylated glycine, 2-azetidine-2-carboxylic acid, proline, thioproline, 3, Represents 4-dehydroproline, pipecholinic acid, or derivatives thereof.
  • X 10 is valine, norvaline, leucine, norleucine, isoleucine, methionine, cyclopropylglycine, cyclobutylglycine, phenylalanine, 4-fluoro-phenylalanine, 2-thienylalanine, 3-thienylalanine, 2-pyridylalanine, 3-Pyridylalanine, 4-Pyridylalanine, 2-thiazolylalanine, 4-thiazolylalanine, 2-oxazolylalanine, 4-oxazolylalanine, 1-pyrazolylalanine, 1-imidazolylalanine, 3- (1,2,3-triazole-1-yl) -alanine, 3- (1,2,4-triazole-1-yl) -alanine, 3- (1H-benzoimidazole-1-yl) -alanine, 3 -(1H-Benzoimidazole-2-yl) -alanine, 3- (1,3
  • the cyclic peptide in one embodiment of the present invention has the following formula (13): c [X 1 -Pro-X 3- c (Cys-X 5- Ser-4fF-Asp-Pro-X 10- X 11 )] Consists of the amino acid sequence represented by (13).
  • X 1 represents ⁇ -alanine or ⁇ -aminobutyric acid residue
  • X 3 is leucine, norleucine, cyclohexylglycine, phenylglycine, 2-aminoheptanoic acid, 2-aminooctanoic acid
  • 2 - represents aminononanoic acid or 2 aminodecane residue
  • X 5 is isoleucine, norleucine, cyclohexylglycine, phenylglycine, 2-amino-heptanoic acid, 2-amino octanoic acid, 2-aminononanoic acid or 2 aminodecane acid residue
  • X 10 represents valine, phenylalanine, tryptophan, 1-naphthylalanine or their N-methylated amino acid residues
  • X 11 represents D-form or L-form cysteine residues.
  • X 1 and X 11 form an amide bond between the amino group and the carboxyl group of the main chain
  • X 4 and X 11 form a methylene group and an ethylene group between the respective side chains and SH groups.
  • a covalent bond is formed via a linker of a propylene group or a butylene group, whereby the peptide of formula (13) has two cyclic structures in the molecule.
  • a cyclic peptide of a more preferable embodiment is described in the following formula (14): c [ ⁇ Ala-Pro-X 3- c (Cys-X 5- Ser-4fF-Asp-Pro-Trp- D Cys)] It consists of the amino acid sequence represented by (14).
  • X 3 represents leucine, norleucine, cyclohexylglycine, phenylglycine, 2-aminoheptanoic acid, 2-aminooctanoic acid, 2-aminononanoic acid or 2-aminodecanoic acid residue
  • X 5 is Represents isoleucine, norleucine, cyclohexylglycine, phenylglycine, 2-aminoheptanoic acid, 2-aminooctanoic acid, 2-aminononanoic acid or 2-aminodecanoic acid residue.
  • residues at the 1st and 11th positions form an amide bond between the amino group and the carboxyl group of the main chain
  • the two cysteine residues at the 4th and 11th positions are the side chain-SH groups, respectively.
  • a covalent bond is formed between the peptides via a linker of a propylene group, whereby the peptide of formula (14) has two cyclic structures in the molecule.
  • Examples of the individual cyclic peptides contained in the above formula (13) or formula (14) include the following examples. c [ ⁇ Ala-Pro-Nle-c (Cys-Ile-Ser-4fF-Asp-Pro-Val-Cys)] (SEQ ID NOs: 1-3) c [ ⁇ Ala-Pro-Nle-c (Cys-Ile-Ser-4fF-Asp-Pro-Val- D Cys)] (SEQ ID NOs: 4-6) c [ ⁇ Aba-Pro-Nle-c (Cys-Ile-Ser-4fF-Asp-Pro-Val-Cys)] (SEQ ID NOs: 7-9) c [ ⁇ Aba-Pro-Nle-c (Cys-Ile-Ser-4fF-Asp-Pro-Val- D Cys)] (SEQ ID NOs: 10-12) c [ ⁇ Ala-Pro-Nle-c (Cys-Phg-Ser-4fF
  • the peptide according to the present invention is a peptide having homology in which one to several amino acids are deleted, added, and / or substituted in the amino acid sequence represented by the above [1] to [10]. Even if there is, those having a binding activity to Ras are included.
  • the number of those amino acids is not particularly limited as long as the peptide has Ras-binding activity. However, the number is preferably 1 to 5, and more preferably 1 or 2.
  • the sites of deletion, addition, and / or substitution may be at the end of the peptide, in the middle, at one place, or at two or more places.
  • amino acid sequence in which one to several amino acids are deleted, added, and / or substituted in the above amino acid sequence the amino acid sequence and BLAST (Basic Local Alginment Search Tool at the National Center for Biological Information (USA)). At least 50% or more, preferably 70% or more, more preferably 80, when calculated using (eg, using default or default parameters), etc. (eg, the National Center for Biological Information, Basic Local Alignment Search Tool). % Or more, particularly preferably 90% or more.
  • peptides and protein domains that have highly similar three-dimensional structures even if they have low primary structural homology. Therefore, a peptide having at least 50% or more, preferably 70% or more, more preferably 80% or more, particularly preferably 90% or more of three-dimensional structural homology with the above amino acid sequence, and having Ras-binding activity is also present. Included in embodiments.
  • the homology of the three-dimensional structures of such peptides can be predicted as follows from the amino acid sequence of the peptide having an unknown three-dimensional structure by using a homology modeling method or the like.
  • target sequence having a sequence similar to that of the cyclic peptide (reference peptide) of the present embodiment
  • an alignment sequence juxtaposition
  • the target sequence and the reference sequence are given. ..
  • the correspondence relationship between the target sequence and the reference sequence for each amino acid is determined. Based on this relationship, each amino acid on the target sequence is determined from the three-dimensional coordinates of the reference peptide. Create 3D coordinates of. In the construction of three-dimensional coordinates, structurally inappropriate gaps, collisions, and distortions may occur between amino acid residues, and these structural distortions are eliminated by energy minimization calculation.
  • the modeling software in order to smoothly eliminate this structural distortion, it may be performed step by step instead of simultaneously for all the atoms of the peptide. That is, it is first performed on the ⁇ carbon atom forming the skeleton of the peptide, then on the main chain atom containing the ⁇ carbon atom, and finally on the entire peptide containing the side chain atom. If the alignment with respect to the target sequence is obtained in this way, the three-dimensional structure can be predicted and constructed.
  • the index of three-dimensional structure homology can be compared using RMSD (Root Mean Square Deviation) or the like, which is the difference in XYZ coordinates when optimally superposed.
  • the peptides of the invention also include various derivatives and / or modifications thereof, as long as they solve the problems of the present invention.
  • Such derivatives include those in which the saturated fatty chain of the peptide is replaced with an unsaturated fatty chain, those in which some of the atoms of the peptide are replaced with other atoms including radioactive or non-radioactive isotope atoms, and peptides.
  • the amide bond of the peptide is N-alkylated, and some of the functional groups of the peptide are halogenated, cyanated, nitrated, oxoylated, hydroxyated, aminated, deaminoated, dehydrolated, amidated, and acetylated. , Prenylated, prenylated, alkylated, etc. (for example, some amino groups of the peptide are acetylated, alkylated or deaminoized, some of the carboxy groups of the peptide are amides.
  • peptide is multimerized via a chemical linker
  • peptide is Biotin-labeled
  • peptides fluorescently labeled peptides luminescent labeled
  • alkyl chains polyethylene glycols
  • antibodies, lectins, sugar chains enzymes, membrane-permeable peptides , Low molecular weight compounds, and those obtained by fusing a peptide with a molecule that induces ubiquitination of a protein, etc., but are not limited thereto.
  • the peptide of the present invention also includes a salt of the peptide.
  • a salt with a physiologically acceptable base or acid is used.
  • an additional salt of an inorganic acid hydroochloride, hydrobromic acid, hydroiodic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, etc.
  • an organic Addition salts of acids p-toluene sulfonic acid, methane sulfonic acid, oxalic acid, p-bromophenyl sulfonic acid, carboxylic acid, succinic acid, citric acid, benzoic acid, acetic acid, etc.
  • inorganic bases ammonium hydroxide or alkali
  • Alkaline earth metal hydroxides carbonates, bicarbonates, etc.
  • the peptide of the present invention may be a prodrug.
  • a prodrug is a compound that is converted to the peptide of the present invention by a reaction with an enzyme or gastric acid under physiological conditions in vivo, that is, a compound that enzymatically undergoes oxidation, reduction, hydrolysis, etc. to change to the peptide of the present invention.
  • Examples of the prodrug of the peptide of the present invention include compounds in which the amino group of the peptide of the present invention is acylated, alkylated or phosphorylated (for example, the amino group of the peptide of the present invention is echosanoylated, alanylated or pentylaminocarbonylated.
  • Alkylation, alanylation, or dimethylaminomethylcarbonylated compounds compounds in which the hydroxy or carboxy groups of the peptides of the invention are esterified or amidated (eg, hydroxy or carboxy groups of the peptides of the invention) C 1-6 Alkylation, phenyl esterification, carboxymethyl esterification, dimethylaminomethyl esterification, pivaloyloxymethyl esterification, ethoxycarbonyloxyethyl esterification, phthalidyl esterification, (5-methyl-2- Examples include, but are not limited to, oxo-1,3-dioxolen-4-yl) methyl esterified, cyclohexyloxycarbonylethyl esterified, or methylamided compounds). These compounds can be produced from the peptides of the invention by methods known per se.
  • the prodrug of the peptide of the present invention may be changed to the peptide of the present invention under physiological conditions as described in "Drug Development", Vol. 7, Molecular Design, pp. 163 to 198 of Hirokawa Shoten, 1990. Good.
  • the prodrug may form a salt
  • examples of the salt include those exemplified as the salt of the peptide of the present invention.
  • the peptide of the present invention may be a crystal, and is included in the peptide of the present invention regardless of whether it has a single crystal form or a mixture of crystalline forms. Crystals can be produced by crystallization by applying a crystallization method known per se.
  • the peptide of the present invention may be a pharmaceutically acceptable co-crystal or co-crystal salt.
  • the co-crystal or co-crystal salt is two or more kinds at room temperature, each having different physical properties (for example, structure, melting point, heat of fusion, hygroscopicity, solubility and stability). It means a crystalline substance composed of a unique solid.
  • the co-crystal or co-crystal salt can be produced according to a co-crystallization method known per se.
  • Sequence 17, Sequence 20 (LO2) and Sequence 21 (LO3) which are representative examples of the amino acid sequence group represented by this embodiment, have resistance to protease degradation and K-Ras (G12D).
  • LO2 Sequence 17, Sequence 20
  • LO3 Sequence 21
  • G12D K-Ras
  • KRpep-2d binds not only to K-Ras (G12D) but also to K-Ras (G12C) and wild-type K-Ras, and its binding activity is to both GDP-binding Ras and GTP-binding Ras. It has been confirmed that they are almost equivalent (Non-Patent Document 3 and Non-Patent Document 4). And the amino acid sequence of Ras is highly conserved regardless of the presence or absence of mutation.
  • the biotin modified product (Biotin-BC-1) of the representative example of the amino acid sequence group represented by this embodiment is wild type K-Ras, K-Ras (G12D), K- Ras (G12V), K-Ras (G12C), K-Ras (G13D), wild N-Ras, N-Ras (Q61K), wild H-Ras, H-Ras (G12V), and H-Ras ( It binds to Q61L).
  • the amino acid sequence group represented by the present embodiment has an amino acid sequence and three-dimensional structural features similar to those of KRpep-2d pharmacophore and Biotin-BC-1, mutant K-Ras and mutant N.
  • -It binds to all Ras such as Ras and mutant H-Ras, and its binding activity is for both GDP-bound Ras and GTP-bound Ras, and it is highly possible that the binding inhibits the function of Ras in general. it is conceivable that.
  • Biotin-BC-1's K-Ras (G12D) binding activity and sequences 1-21 to K-Ras (G12D) -expressing cells show the following.
  • (1) the covalent bond between the 1st and 11th positions has a wide range of shapes, from a flexible structure such as an SS bond to a relatively rigid structure having flatness such as an amide bond. Accepts the structure of.
  • the target binding activity of a cyclic peptide generally draws a bell-shaped shape with the optimum cyclic size as the apex, and thus is shared between the 4-11 positions of the dicyclic peptide of the present invention.
  • Bonds are highly likely to be accepted if the number of atoms between C ⁇ carbons peaks at 4 to 8 and further increases by about 1 to 2 atoms. That is, the covalent bond between the 4- and 11-positions is considered to accept a wide range of atoms between C ⁇ carbons from 4 to 10.
  • the covalent bond between the 4-11 positions contributes to the regulation of the bicyclic structure of the peptide, but does not directly contribute to the Ras bond.
  • the amino acid sequence of Ras in general is highly conserved in mammals, the peptide group consisting of the amino acid sequence represented by this embodiment is a mutant K- of mammals other than humans such as mice, rats, dogs, and monkeys. It is highly likely that it also binds to Ras, mutant N-Ras, and / or mutant H-Ras and inhibits its function.
  • the peptide of the present embodiment can be produced by a known peptide production method such as a liquid phase method, a solid phase method, or a chemical synthesis method such as a hybrid method combining a liquid phase method and a solid phase method.
  • a commercially available automatic synthesizer can be used for the solid phase method.
  • the hydroxyl group of a resin having a hydroxyl group and the carboxy group of the first amino acid (usually the C-terminal amino acid of the target peptide) in which the ⁇ -amino group is protected by a protecting group such as Fmoc group are subjected to an esterification reaction.
  • known dehydration condensing agents such as 1-mesitylenesulfonyl-3-nitro-1,2,4-triazole (MSNT), dicyclohexylcarbodiimide (DCC), and diisopropylcarbodiimide (DIPCDI) can be used.
  • the protective group of the ⁇ -amino group of the first amino acid is eliminated, and the second amino acid in which all functional groups other than the carboxy group of the main chain are protected is added to activate the carboxy group.
  • the first and second amino acids are bound.
  • the ⁇ -amino group of the second amino acid is deprotected, and a third amino acid in which all functional groups other than the carboxy group of the main chain are protected is added to activate the carboxy group to activate the second and second amino acids. Bind the third amino acid.
  • This is repeated to synthesize a peptide of the desired length.
  • the linear peptide is cleaved from the resin, purified, and then the functional groups for cyclizing the peptide are deprotected and the peptide is cyclized according to a conventional method.
  • Resins for solid phase synthesis include Merrifield resin, MBHA resin, Cl-Trt resin, SASRIN resin, Wang resin, Link amide resin, HMFS resin, Amino-PEGA resin (Merck), HMPA-PEG, etc. Can be mentioned. These resins may be used after washing with a solvent (dimethylformamide (DMF), 2-propanol, methylene chloride, etc.).
  • a solvent dimethylformamide (DMF), 2-propanol, methylene chloride, etc.
  • the protective group for the ⁇ -position amino group includes a benzyloxycarbonyl (Cbz) group, a tert-butoxycarbonyl (Boc) group, a fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) group, a benzyl group, an allyl group, and an allyloxycarbonyl (Allloc) group. And so on.
  • the Cbz group can be deprotected by hydrofluoric acid, hydrogenation, etc.
  • the Boc group can be deprotected by trifluoroacetic acid (TFA)
  • the Fmoc group can be deprotected by treatment with piperidine.
  • methyl ester, ethyl ester, benzyl ester, tert-butyl ester, cyclohexyl ester and the like can be used.
  • hydroxy groups such as serine and threonine can be protected with benzyl or tert-butyl groups, and hydroxy groups such as tyrosine can be protected with 2-bromobenzyloxycarbonyl or tert-butyl groups.
  • Side chain amino groups such as lysine and carboxy groups such as glutamic acid and aspartic acid can be protected in the same manner as ⁇ -position amino groups and ⁇ -position carboxy groups.
  • Activation of the carboxy group can be performed using a condensing agent.
  • the condensing agent include dicyclohexylcarbodiimide (DCC), diisopropylcarbodiimide (DIPCDI), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC or WSC), and (1H-benzotriazole-1-yloxy) tris.
  • DCC dicyclohexylcarbodiimide
  • DIPCDI diisopropylcarbodiimide
  • EDC or WSC 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide
  • (1H-benzotriazole-1-yloxy) tris examples thereof include (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate (BOP), 1- [bis (dimethylamino) methyl] -1H-benzotriazolium-3-oxide hexaflu
  • cyclization means that two or more amino acids separated by one or more amino acids are covalently bonded directly or indirectly via a linker in one peptide, and one or more cyclizations in the molecule. It means to make a structure.
  • the cyclization can be carried out according to the methods described in Non-Patent Document 3, Non-Patent Document 6, and Non-Patent Document 7.
  • cysteine having a thiol group D-form cysteine, homocysteine, and D-form homocysteine are independently designated as amino acids 1 and 2, and are formed between the thiol groups.
  • Amino acids eg, 3-chloroalanine
  • a halogen atom chloro, bromo, or iodine
  • a nucleophilic group or a halogen atom (chloro, bromo, or iodine)
  • a halogen atom chloro, bromo, or iodine
  • a carboxylic acid having (for example, 3-chloropropanoic acid) can be used as amino acid 1, and a thioether bond formed with amino acid 2 having a thiol group can be used.
  • a linker having a halogen atom (chloro, bromo, or iodine) as a nucleophilic group for example, diiodomethane (DIM), 1,2-diiodoethane (DIE), 1,3-diiodopropane (DIP), 1,4- A thioether bond formed between diiodobutane (DIB), hexafluorobenzene, etc.
  • DIB diiodobutane
  • ⁇ -azidoalanine having an azido group is amino acid 1, 2-amino-5-hexic acid having an alkynyl group.
  • Amino acid 2 can be used, and a covalent bond via a triazole formed by a click reaction between them can be used.
  • Amino acid having an allyl group for example, allylglycine, D-form allylglycine, homoallylglycine, D-form homo
  • a thioether bond formed by a thiol-ene reaction between amino acid 1 and amino acid 2 having a thiol group can be used, using allylglycine or the like or a carboxylic acid having an allyl group (for example, 3-butenoic acid).
  • amino acid 2 having a carboxy group aspartic acid, glutamate, their D-amino acids, etc.
  • C-terminal carboxy group Use amide bond (9)
  • An amide bond between an amino acid having an N-terminal amino group and a carboxy group or a C-terminal carboxy group can be used. Either amino acid 1 or amino acid 2 may come to the N-terminal side.
  • the pharmaceutical composition according to the present invention contains a peptide consisting of the above-mentioned amino acid sequence as an active ingredient, and the peptide binds to Ras and inhibits its activity, thereby suppressing the growth of malignant tumors and the like. ..
  • the administration form of the above-mentioned pharmaceutical composition is not particularly limited, and may be administered orally or parenterally.
  • Parenteral administration includes, for example, injection administration such as intramuscular injection, intravenous injection, subcutaneous injection, transdermal administration, and transmucosal administration (nasal, oral cavity, eye, lung, vaginal, or rectal administration).
  • Etc. can be mentioned.
  • sustained-release bases include biodegradable polymerized compounds such as polylactic acid / glycol (PLGA), porous hydroxyapatite, liposomes, surface-modified liposomes, emulsions prepared with unsaturated fatty acids, nanoparticles, and nanospheres. It may be used as an inclusion of a peptide.
  • PLGA polylactic acid / glycol
  • a weak electric current can be passed through the skin surface to permeate the stratum corneum (iontophoresis method).
  • the above-mentioned pharmaceutical composition may use the active ingredient as it is, or may be formulated by adding a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, additive or the like.
  • Dosage forms include, for example, liquids (injections, etc.), dispersants, suspensions, tablets, pills, powders, suppositories, powders, fine granules, granules, capsules, syrups, troches, etc. Examples thereof include inhalants, ointments, eye drops, nasal drops, ear drops, and poultices.
  • These preparations may be release control preparations (such as sustained-release microcapsules) such as immediate-release preparations or sustained-release preparations.
  • Formulations include, for example, excipients, binders, disintegrants, lubricants, solubilizers, solubilizers, colorants, flavoring agents, stabilizers, emulsifiers, absorption promoters, surfactants, pH adjusters. It can be carried out by a conventional method by appropriately using an agent, a preservative, an antioxidant and the like.
  • ingredients used in the formulation include purified water, saline solution, phosphate buffer, dextrose, glycerol, ethanol and other pharmaceutically acceptable organic solvents, animal and vegetable oils, lactose, mannitol, glucose, sorbitol, crystals.
  • surfactants such as polyoxyethylene lauryl ethers, sodium lauryl sulfate, and saponin are used as absorption enhancers to improve the absorption of poorly absorbable drugs; glycocholic acid, deoxycholic acid, etc.
  • Bile acids such as taurocholic acid; chelating agents such as EDTA and salicylic acids; fatty acids such as caproic acid, capric acid, lauric acid, oleic acid, linoleic acid and mixed micelles; enamine derivatives, N-acylcollagen peptides, N- Acyl amino acids, cyclodextrins, chitosans, nitrogen monoxide donors and the like may be used.
  • Pills or tablets can also be coated with sugar-coated, gastric-soluble, enteric-soluble substances.
  • the injection may contain distilled water for injection, physiological saline, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil, alcohols and the like. Further, wetting agents, emulsifiers, dispersants, stabilizers, solubilizers, solubilizing agents, preservatives and the like can be added. If necessary, an appropriate amount of additives such as ordinary preservatives, antioxidants, colorants, sweeteners, adsorbents, and wetting agents can also be used.
  • pancreatic cancer eg, pancreatic duct cancer, etc.
  • colon cancer eg, familial colon cancer, hereditary nonpolyposis colon cancer, gastrointestinal stromal tumor, etc.
  • small bowel cancer eg, non-hodgkin lymphoma, gastrointestinal stromal tumor, etc.
  • breast cancer eg, invasive ductal carcinoma, non-invasive ductal carcinoma, inflammatory breast cancer, etc.
  • prostate cancer eg, hormone-dependent prostate cancer, hormone-independent prostate cancer, etc.
  • gastric cancer eg, hormone-dependent prostate cancer, etc.
  • lung cancer eg, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, malignant mesoderma, etc.
  • lung cancer eg, non-small cell lung cancer, small cell lung cancer, malignant mesoderma, etc.
  • the pharmaceutical composition of the present invention may be administered in combination with other pharmaceuticals or therapeutic methods useful for the above-mentioned diseases.
  • malignant tumors may be combined with various types of chemotherapy, surgical treatment, and radiation therapy.
  • the dosage may be determined by symptoms, patient age, sex, etc. It depends on the body weight, sensitivity difference, administration method, administration interval, type of active ingredient, type of preparation, and is not particularly limited, but for example, 30 ⁇ g to 1000 mg, 100 ⁇ g to 500 mg, 100 ⁇ g to 100 mg are divided into one or several times. Can be administered.
  • K-Ras V-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma virtual oncogene homolog
  • N-Ras Neuroblastoma ras oncogene homolog
  • H-Ras Harvery rat sarcoma virus oncogene homolog GDP: Guanoncine diphophosphate
  • GTP Guanosine triphosphate
  • GEF Guanine nucleotide exchange factor
  • GAP GTPase accelerating protein
  • BSA Bovine serum albumin
  • RP-HPLC Reverse-phase high performance limit chromatography
  • HRP Horseradish peroxidase SA: Streptavidin DTT: Dithiothreitol
  • PBS Phosphate buffered saline
  • ELISA Enzyme-linked immunosorbent assay ATP: Adenosine triphosphate Ac: Acetyl Arg: L-Arginine Cys: L-Cysteine
  • Gly Glycine Al
  • HATU 1- [bis (dimethylamino) methylene] -1H-1,2,3-triazolo [4,5-b] pyridinium 3-oxide hexafluorophosphate
  • HFIP hexafluoro-2-propanol
  • DCM dichloromethane
  • Non-Patent Document 3 Non-Patent Document 6 and Non-Patent Document 7 were referred to.
  • LO3 the cyclization of sequence 21 (LO3) is shown below.
  • a linear side chain protective peptide was dissolved in DCM, 1-hydroxybenzotriazole (HOAt) dissolved in dimethylformamide (DMF) and ethyl (dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC) hydrochloride were added, and a C-terminal carboxy group was added. Was activated.
  • HOAt 1-hydroxybenzotriazole
  • DMF dimethylformamide
  • EDC ethyl (dimethylaminopropyl) carbodiimide
  • the reaction was further carried out overnight at room temperature, and the side chain protective peptide was cyclized by the amide bond between the N-terminal amino group and the C-terminal carboxy group.
  • the cells were washed 3 times with distilled water, the DCM was distilled off and dried, and then the side chain protecting groups were deprotected and a monocyclic peptide was obtained by ether precipitation.
  • the monocyclic peptide was purified by RT-HPLC using a SunFire C18 column (10 ⁇ 150 mm) (manufactured by Waters) and then lyophilized.
  • the molecular weight of the finally obtained peptide was measured using microflex (Bruker) to identify the desired product.
  • Table 2 shows the theoretical molecular weight, the measured molecular weight, the purity, the cyclization type, and the amino acid sequence of the peptides synthesized in this example. Further, among these, the structural formulas of Biotin-BC-1 and sequences 1 to 21 (Seq-1 to 21) are shown in FIG. In Table 2, amino acid residues without D-form notation indicate L-form.
  • Biotin-KRpep-2d to Ras competes with the binding of amino acid-substituted peptide or KRpep-2d to Ras coexisting in solution, and thus is inhibited depending on the concentration of the amino acid-substituted peptide or KRpep-2d. That is, the binding activity of the amino acid-substituted peptide or KRpep-2d to Ras is detected as a competitive inhibitory activity to the binding of Biotin-KRpep-2d.
  • the binding value of Biotin-KRpep-2d to the wells not coated with Ras is defined as 100% inhibitory activity, and the binding value of Biotin-KRpep-2d to the wells not supplemented with the amino acid-substituted peptide or KRpep-2d is defined as 0% inhibitory activity.
  • Amino acid-substituted peptides and KRpep-2d 50% inhibitory activity values were calculated. Subsequently, the relative value of the inhibitory activity value of the amino acid-substituted peptide was calculated with the 50% inhibitory activity value of KRpep-2d as 1.
  • FIG. 4 shows the peptide concentration-dependent binding of Biotin-KRpep-2d to K-Ras (G12D) (Catalog No. 12259-H07E1-200, manufactured by Sino Biological) used in this competitive test.
  • the absorbance obtained when Biotin-KRpep-2d was added to the wells coated with K-Ras (G12D) was subtracted from the absorbance obtained when Biotin-KRpep-2d was added to the wells blocked only by BSA. , The specific binding activity was estimated.
  • Biotin-KRpep-2d showed a concentration-dependent binding of the peptide to K-Ras (G12D). On the other hand, it did not show binding activity to negative control proteins.
  • Biotin which is a typical example of the peptide of the present invention, is a representative example of the peptide of the present invention in which an unnatural amino acid is introduced into KRpep-2d, a continuous arginine sequence is removed, and bicyclization is performed by a covalent bond between the 1-position-11 position and the 4-position-11 position.
  • the biotin-modified peptide bicyclized by the covalent bond between the 1-position-11-position and the 4-position-11-position binds to any Ras in a concentration-dependent manner. showed that. On the other hand, it did not show binding activity to negative control proteins.
  • the biotin-modified peptide in which the covalent bond between the 4-position and the 11-position was cleaved by the reducing conditions and became a monocycle only by the covalent bond between the 1-position and the 11-position has a binding activity for any Ras. It was greatly weakened.
  • FIGS. 7 (A) and 7 (B) The results are shown in FIGS. 7 (A) and 7 (B).
  • the peptides (sequences 1 to 21) synthesized in the examples suppressed the proliferation of A427 cells.
  • the growth inhibitory activity of the monocyclic peptides MC1 to 12 on A427 cells was significantly attenuated as compared with the bicyclized peptide.
  • the peptide of sequence 17 suppressed the proliferation of not only A427 cells but also PANC-1 cells expressing K-Ras (G12D).
  • K-Ras PANC-1 cells expressing (G12D) (Cat No. CRL-1469, ATCC Co.) at 1 ⁇ 10 7 cells
  • Crlj SHO-Prkdc scid Hr hr mouse (female, 7 weeks old) (Japan It was implanted subcutaneously in the left inguinal region of Charles River), and when the tumor volume reached about 50 mm 3 , it was subjected to the test.
  • the tumor volume was obtained by measuring the major axis (mm) of the tumor mass and the minor axis (mm) orthogonal to the major axis (mm) from the skin surface with a nogis, and calculating the tumor volume by the formula of major axis ⁇ minor axis 2 ⁇ 0.5, and the unit was mm 3 .
  • the Vehicle group is a group in which cancer cells are transplanted and physiological saline (10% DMSO) is administered.
  • mice to which the representative example of the peptide of the present invention (sequence 17) was administered the increase in tumor volume due to the proliferation of PANC-1 cells was significantly suppressed, and the p value calculated by Student's t-test was 0.005 or less. Met. On the other hand, no weight loss was observed in the mice.
  • the Sham group is a group in which a transplantation procedure is performed in a cell medium containing no cancer cells and physiological saline (10% DMSO) is administered
  • the Vehicle group is a group in which cancer cells are transplanted and physiological saline (10% DMSO) is administered. It is a group to which 10% DMSO) was administered.
  • the body weight of the mice and the weight of the organs (pancreas, liver, kidney) 4 weeks after the start of administration were measured.
  • the peptide according to the present invention has protease degradation resistance, and by binding the peptide to Ras, it inhibits the off / on cycle of the molecular switch function of Ras, and the growth of cancer cells using Ras as a growth driver. Suppress. Therefore, the peptide according to the present invention is considered to be useful for the prevention and treatment of diseases involving cancer cells expressing Ras, such as colon cancer, pancreatic cancer, and lung cancer.
  • the peptide according to the present invention can be used not only as an anticancer agent itself, but also as a medicinal molecule to be combined with a delivery molecule to a cancer tissue such as an antibody, a lectin, a sugar chain, a liposome, or a nanoparticle. It can also be used as a functional molecule that selectively degrades intracellular Ras by combining it with a molecule that ubiquitinates a protein and induces degradation.
  • the peptide according to the present invention can more strongly suppress the growth of cancer cells when used in combination with a drug or therapy having another mechanism of action such as an immune checkpoint inhibitor or neutron supplementation therapy.

Abstract

【課題】Ｒａｓ阻害ペプチドを医薬品、診断薬、及び／又は研究試薬として使用するためにプロテアーゼによる分解性、および立体構造の安定性を改善する。 【解決手段】下記式（１）： ｃ［Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－ｃ（Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１）］　（１） で表されるアミノ酸配列からなる環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。ここで、上記式中、Ｘ１、Ｘ４及びＸ１１は、それぞれ独立にアミノ基、カルボキシ基、チオール基、アリル基、アルキニル基、アジド基、若しくはハロゲン原子を有するアミノ酸残基、又はそれらの誘導体を表す。Ｘ３、Ｘ５及びＸ７は、それぞれ独立に置換基を有していてもよい炭化水素基を有するアミノ酸残基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環基を有するアミノ酸残基、若しくは置換基を有していてもよい芳香族複素環基を有するアミノ酸残基、又はそれらの誘導体である。Ｘ８は、アスパラギン酸残基、又はその誘導体であり、Ｘ２、Ｘ６、Ｘ９、Ｘ１０は、任意のアミノ酸残基である。

Description

Ｒａｓ阻害ペプチド クロスリファレンス
　本出願は、日本国において、２０１９年５月１４日に出願された特願２０１９－０９１４１９号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。
　本発明は、Ｒａｓの活性を阻害するペプチド等に関し、詳細には特定のアミノ酸配列と環状構造を有する環状ペプチド等に関する。
　Ｒａｓタンパク質（Ｒａｓサブファミリーを意味し、以下Ｒａｓと略す）は、細胞内に発現するＧＴＰａｓｅであり、ＧＤＰまたはＧＴＰと結合することで、細胞増殖シグナル伝達のオフ（不活性化）／オン（活性化）を司る分子スイッチとして機能する。ＧＤＰ結合型は、オフの状態であり、ＧＴＰ結合型は、オンの状態である。細胞表面受容体からのシグナルによって誘導されたグアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）がＲａｓをＧＤＰ結合型からＧＴＰ結合型に変換し、ＧＴＰ結合型Ｒａｓが下流のタンパク質であるＲＡＦやＰＩ３Ｋなどと相互作用することで、シグナルをさらに伝達していく。Ｒａｓに結合したＧＴＰは、Ｒａｓ自身の酵素活性及びＧＴＰａｓｅ活性化タンパク質（ＧＡＰ）の助けを借りて、ＧＴＰからＧＤＰに加水分解される。
　Ｒａｓは、１８８～１８９個のアミノ酸配列からなっており、任意のアミノ酸変異によって、自身のＧＴＰａｓｅ活性とＧＡＰによるＧＴＰの加水分解能が大きく抑制され、ＧＴＰ結合型に偏重する。この結果、細胞増殖シグナルが延長される。
　ヒト腫瘍の約３０％がアミノ酸変異を生じた変異型Ｒａｓを発現しており、腫瘍増殖のドライバーとしている（非特許文献１）。Ｒａｓの中で、創薬ターゲットとして注目されているメンバーにＫ－Ｒａｓ、Ｎ－Ｒａｓ、Ｈ－Ｒａｓが挙げられる。その中でもＫ－Ｒａｓのアミノ酸変異は、ヒト腫瘍の約２０％という最も高い頻度で発生することが知られている（非特許文献１）。
　Ｋ－Ｒａｓにおけるアミノ酸変異の位置の大部分が１２位グリシンであり、続いて１３位グリシン、６１位グルタミン、そしてその他の位置であることが報告されている。１２位グリシンの変異の内容で最も高頻度にみられるのが、アスパラギン酸（約３０％）、続いてバリン（約２０％）、システイン（約１０％）、アラニン（約５％）、セリン（約５％）、アルギニン（約３％）、そしてその他のアミノ酸である（非特許文献２）。
　これらのことから、１２位グリシンがアスパラギン酸に変異しているＫ－ＲａｓであるＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）は、癌治療における最も重要な創薬ターゲットであることがわかる。２０１７年、本発明者は、無細胞試験において、野生型Ｋ－ＲａｓよりもＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）に選択的に結合し、ＧＤＰ結合型Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）がＧＴＰ結合型Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）に変換されることを阻害する環状ペプチドＫＲｐｅｐ－２ｄ：Ａｃ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｔｙｒ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｃｙｓ）－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－ＮＨ２（配列番号２２）を見出したことを報告した（非特許文献３）。ＫＲｐｅｐ－２ｄは、細胞試験においてＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）を発現するＡ４２７細胞の増殖を有意かつ選択的に抑制することが示された。また、本発明者は、ＫＲｐｅｐ－２ｄとＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）の複合体の結晶構造を解析し、その結合のメカニズムを報告している（非特許文献４）。
Ｔａｋａｓｈｉｍａ　Ａ　ａｎｄ　Ｆａｌｌｅｒ　ＤＶ．　Ｅｘｐｅｒｔ　Ｏｐｉｎ　Ｔｈｅｒ　Ｔａｒｇｅｔｓ．　２０１３，　１７（５）：５０７－５３１． Ｐｅｎｄｅｒ　Ａ，　Ｇａｒｃｉａ－Ｍｕｒｉｌｌａｓ　Ｉ，　Ｒａｎａ　Ｓ，　Ｃｕｔｔｓ　ＲＪ，　Ｋｅｌｌｙ　Ｇ，　Ｆｅｎｗｉｃｋ　Ｋ，　Ｋｏｚａｒｅｗａ　Ｉ，　Ｇｏｎｚａｌｅｚ　ｄｅ　Ｃａｓｔｒｏ　Ｄ，　Ｂｈｏｓｌｅ　Ｊ，　Ｏ’Ｂｒｉｅｎ　Ｍ，　Ｔｕｒｎｅｒ　ＮＣ，　Ｐｏｐａｔ　Ｓ，　ａｎｄ　Ｄｏｗｎｗａｒｄ　Ｊ．　ＰＬｏＳ　Ｏｎｅ．　２０１５，　１０（９）：ｅ０１３９０７４． Ｓａｋａｍｏｔｏ　Ｋ，　Ｋａｍａｄａ　Ｙ，　Ｓａｍｅｓｈｉｍａ　Ｔ，　Ｙａｇｕｃｈｉ　Ｍ，　Ｎｉｉｄ，　Ｓａｓａｋｉ　Ｓ，　Ｍｉｗａ　Ｍ，　Ｏｈｋｕｂｏ　Ｓ，　Ｓａｋａｍｏｔｏ　ＪＩ，　Ｋａｍａｕｒａ　Ｍ，　Ｃｈｏ　Ｎ，　ａｎｄ　Ｔａｎｉ　Ａ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ．　２０１７，　４８４（３）：６０５－６１１． Ｓｏｇａｂｅ　Ｓ，　Ｋａｍａｄａ　Ｙ，　Ｍｉｗａ　Ｍ，　Ｎｉｉｄ，　Ｓａｍｅｓｈｉｍａ　Ｔ，　Ｋａｍａｕｒａ　Ｍ，　Ｙｏｎｅｍｏｒｉ　Ｋ，　Ｓａｓａｋｉ　Ｓ，　Ｓａｋａｍｏｔｏ　ＪＩ，　ａｎｄ　Ｓａｋａｍｏｔｏ　Ｋ．　ＡＣＳ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　Ｌｅｔｔ．　２０１７，　８（７）：７３２－７３６． Ｎｉｉｄａ　Ａ，　Ｓａｓａｋｉ　Ｓ，　Ｙｏｎｅｍｏｒｉ　Ｋ，　Ｓａｍｅｓｈｉｍａ　Ｔ，　Ｙａｇｕｃｈｉ　Ｍ，　Ａｓａｍｉ　Ｔ，　Ｓａｋａｍｏｔｏ　Ｋ，　ａｎｄ　Ｋａｍａｕｒａ　Ｍ．　Ｂｉｏｏｒｇ　Ｍｅｄ　Ｃｈｅｍ　Ｌｅｔｔ．　２０１７，　２７（１２）：２７５７－２７６１． Ｆａｉｒｌｉｅ　ＤＰ　ａｎｄ　Ｄａｎｔａｓ　ｄｅ　Ａｒａｕｊｏ．　Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ　２０１６，　１０６（６）：８４３－８５２． Ｌａｕ　ＹＨ，　ｄｅ　Ａｎｄｒａｄｅ　Ｐ，　Ｗｕ　Ｙ，　ａｎｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　ＤＲ．　Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ　Ｒｅｖ．　２０１５，　４４（１）９１－１０２．
　本発明者の分析によれば、ＫＲｐｅｐ－２ｄを医薬品、診断薬、及び／又は研究試薬として使用するには、以下に示すようないくつかの課題がある。（１）天然アミノ酸のみから構成されるＫＲｐｅｐ－２ｄは、プロテアーゼ分解に対する耐性が低いことが懸念される。（２）配列に含まれる二つのシステイン（Ｃｙｓ）の側鎖間のジスルフィド結合で環状化しているため、細胞内の還元的な条件下ではジスルフィド結合が開裂し、ペプチドの環状構造を維持することができず、Ｒａｓに対する結合活性及び阻害活性が減弱することが懸念される。実際に本発明者は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）を含む還元的条件下における無細胞試験では、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）のＧＤＰ結合型からＧＴＰ結合型への交換反応に対するＫＲｐｅｐ－２ｄの阻害活性が、非還元的条件下の阻害活性と比較して５０倍以上減弱することを見出している（非特許文献３及び非特許文献５）。（３）ＫＲｐｅｐ－２ｄの細胞試験における有意な増殖抑制活性は数～数十μＭであり（非特許文献３及び非特許文献５）、医薬品、診断薬、及び／又は研究試薬として使用するには改善の余地がある。
　本発明は、かかる課題に鑑みてなされたものであって、その目的とするところはＲａｓ阻害ペプチドを医薬品、診断薬、及び／又は研究試薬として使用するための少なくとも１つの上記課題を改善しうる新規なＲａｓ阻害ペプチドを提供することにある。
　本発明者は、ＫＲｐｅｐ－２ｄの最適化研究を実施する中で、新規のＲａｓ阻害ペプチド群を見出した。ＫＲｐｅｐ－２ｄの課題を解決するために、非特許文献４に記載のＫＲｐｅｐ－２ｄとＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）の複合体の構造情報を基にして、ＫＲｐｅｐ－２ｄのＲａｓ結合活性やプロテアーゼ分解耐性や細胞増殖抑制活性といった機能を向上させるアミノ酸置換を予想した。ＫＲｐｅｐ－２ｄは、（１）５位Ｃｙｓと１５位Ｃｙｓの側鎖間のジスルフィド結合によって環状化している、（２）６位から１４位のアミノ酸がファーマコフォアとしてＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）と主に相互作用している、（３）１位から４位および１６位から１９位のアミノ酸はペプチドの細胞内移行性に主に寄与しているが、欠失させるとＲａｓに対する結合活性および阻害活性が大幅に減弱することから（非特許文献４および非特許文献５）、ペプチドの立体構造制御にも寄与している、という特徴を有している。そこで、（１）細胞内の還元的な条件下でもＲａｓ結合活性を維持できるように、５位Ｃｙｓと１５位Ｃｙｓの側鎖間のジスルフィド結合を還元的条件下においても容易に開裂しない結合形態に置換すること、（２）Ｒａｓとの相互作用を増強するために、６位から１４位に非天然アミノ酸構造を導入すること、（３）分子量の低減を目的に１位から４位及び１６位から１９位のアミノ酸を欠失させてもＲａｓ結合活性を有する分子構造の設計を試みた。このようなＫＲｐｅｐ－２ｄの最適化研究を実施する中で、Ｒａｓ結合活性、プロテアーゼ分解耐性、そして細胞増殖抑制活性を有する新規のＲａｓ阻害ペプチドの配列群を見出し、本発明を完成するに至った。
　即ち、本発明の一態様は、
　下記式（１）：
ｃ［Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－ｃ（Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１）］　　　（１）
で表されるアミノ酸配列からなる環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩である。ここで、上記式中、Ｘ１、Ｘ４及びＸ１１は、それぞれ独立にアミノ基、カルボキシ基、チオール基、アリル基、アルキニル基、アジド基、若しくはハロゲン原子を有するアミノ酸残基、又はそれらの誘導体を表す。Ｘ３、Ｘ５及びＸ７は、それぞれ独立に置換基を有していてもよい炭化水素基を有するアミノ酸残基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環基を有するアミノ酸残基、置換基を有していてもよい芳香族複素環基を有するアミノ酸残基、又はそれらの誘導体である。Ｘ８は、アスパラギン酸残基、又はその誘導体であり、Ｘ２、Ｘ６、Ｘ９、Ｘ１０は、任意のアミノ酸残基である。
　そして、Ｘ１とＸ１１及びＸ４とＸ１１は、それぞれの間で独立に、直接的な又はリンカーを介した間接的な共有結合を形成し、それによって式（１）のペプチドは分子内に２つの環状構造を有する。Ｘ１とＸ１１との間の共有結合は、それらの主鎖－主鎖間、主鎖－側鎖間、側鎖－主鎖間、又は側鎖－側鎖間のいずれの結合であってもよく、また、Ｘ４とＸ１１の間の共有結合は、それらの側鎖－主鎖間、又は側鎖－側鎖間のいずれの結合であってもよい。
　上記式（１）のペプチドにおけるＸ１からＸ１１の各アミノ酸残基の好ましい態様は、以下の実施形態において詳細に説明するが、それぞれの好ましい実施形態は相互に独立して任意に組み合わせることができるものとする。
　本発明によれば、Ｒａｓ阻害ペプチドを医薬品、診断薬、及び／又は研究試薬として使用するために有用な新規な環状ペプチドが提供される。
図１は、ＫＲｐｅｐ－２ｄのＲａｓ結合活性（ファーマコフォア）、環状構造規制（Ｓ－Ｓ結合）、細胞内移行性（Ｃｅｌｌ　Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ　Ｐｅｐｔｉｄｅ：ＣＰＰ）といった機能に関わるアミノ酸配列を示している。また、ＫＲｐｅｐ－２ｄを改変した本発明ペプチドの構造の概要を示す。 図２は、ＫＲｐｅｐ－２ｄの各アミノ酸ポジションにおけるアミノ酸残基の置換研究に供したアミノ酸の例を示す。 図３は、アミノ酸残基を置換したペプチドのＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）に対する結合活性をＫＲｐｅｐ－２ｄのそれと比較するために用いたＥＬＩＳＡ法による競合結合試験の概要を示す。図中、ＳＡはストレプトアビジン、Ｂはビオチン、ＨＲＰは西洋わさびペルオキシダーゼを示す。 図４は、Ｎ末端ビオチン修飾ＫＲｐｅｐ－２ｄ（Ｂｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄ）のＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）に対するペプチド濃度依存的な結合活性を示す。 図５は、本発明ペプチドの代表例のビオチン修飾体の野生型Ｋ－Ｒａｓ、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｖ）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｃ）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１３Ｄ）、野生型Ｎ－Ｒａｓ、Ｎ－Ｒａｓ（Ｑ６１Ｋ）、野生型Ｈ－Ｒａｓ、Ｈ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｖ）及びＨ－Ｒａｓ（Ｑ６１Ｌ）に対するペプチド濃度依存的な結合活性を示す。 図６は、ＫＲｐｅｐ－２ｄと本発明ペプチドの代表例について、ラット血漿と混合し、プロテアーゼ分解に対する耐性を比較した結果を示す。 図７Ａは、ＫＲｐｅｐ－２ｄと本発明ペプチドの代表例について、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）を発現するＡ４２７細胞に対する増殖抑制活性をＡＴＰの定量によって評価した結果を示す。 図７Ｂは、配列１７のペプチドについて、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）を発現するＰＡＮＣ－１細胞に対する増殖抑制活性をＡＴＰの定量によって評価した結果を示す。 図８は、本発明ペプチドの代表例について、皮下担癌マウスに尾静脈投与し、抗癌活性を評価した結果を示す。 図９は、本発明ペプチドの代表例について、同所性移植モデルマウスに尾静脈投与し、抗癌活性を評価した結果を示す。 図１０は、実施例で用いた本発明ペプチドの代表例の構造式を示す。
　次に、本発明の好適な実施形態について、図面を参照して説明する。なお、以下に説明する実施形態は、特許請求の範囲に係る発明を限定するものではなく、また、実施形態の中で説明されている諸要素及びその組み合わせのすべてが本発明の解決手段に必須であるとは限らない。また、本明細書において引用されるすべての特許文献及び非特許文献の開示は、全体として本明細書に参照として組み込まれる。
（定義）
　本明細書においてペプチドは、２つ以上のアミノ酸がアミド結合（ペプチド結合）で結合しているものを指し、例えば２～２０アミノ酸がアミド結合したものとすることができる。また、ペプチド標記の慣例に従って左端がＮ末端（アミノ末端）、右端がＣ末端（カルボキシ末端）である。ペプチド結合を形成するカルボニル基に隣接する１番目の炭素原子をＣα炭素と称する。
　本明細書において「任意のアミノ酸、又はその誘導体」は、その最も広い意味で用いられ、天然アミノ酸に加え、非天然構造を有する人工のアミノ酸、アミノ酸の特徴である当業界で公知の特性を有する化学的に合成された化合物、さらに官能基を有するカルボン酸も含む。非天然アミノ酸の例として、Ｄ体アミノ酸、主鎖の構造が天然型と異なるα／α－二置換アミノ酸（２－アミノイソ酪酸といったα－メチル化アミノ酸など）、Ｎ－アルキル－アミノ酸（Ｎ－メチル化アミノ酸など）、Ｎ－置換グリシン（ペプトイド）、主鎖が伸長しているアミノ酸（βホモアミノ酸やγホモアミノ酸）、側鎖の構造が天然型と異なるアミノ酸（シクロヘキシルアラニンやアリルグリシンや２－（２－ピリジル）－グリシンや３－（１Ｈ－ベンゾイミダゾール－２－イル）－アラニンなど）、側鎖の一部が置換されているアミノ酸（ノルロイシンやジアミノプロパン酸や３－（２－ピリジル）－アラニンなど）、側鎖に余分の官能基を有するアミノ酸；側鎖に余分のＣやアルキル基やメチル基を有するアミノ酸（ホモノルロイシンやγ－メチルロイシンなど）、側鎖にハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を有するアミノ酸（３－クロロ－アラニンなど）、側鎖にハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を有するカルボン酸（３－クロロプロパン酸など）、側鎖に官能基を有するカルボン酸（３－ブテン酸など）、側鎖に余分のＮやアミノ基を有するアミノ酸（β－アジドアラニンやオルニチンなど）、側鎖に余分のＯやメトキシ基を有するアミノ酸（Ｏ－メチル－セリンやＯ－メチル－スレオニンなど）、側鎖に余分のヒドロキシ基を有するアミノ酸（３－ヒドロキシ－フェニルアラニンなど）、側鎖に余分のカルボキシ基（－ＣＯＯＨ）を有するアミノ酸（３－カルボキシ－フェニルアラニンなど）、側鎖に余分のＳを有するアミノ酸（エチオニンなど）、側鎖中のカルボン酸官能基がエステルで保護されているアミノ酸（アスパラギン酸－４－メチルエステルなど）、側鎖のチオ基（－Ｓ－）が酸化されてスルフィニル基（－Ｓ（＝Ｏ）－）やスルホニル基（－Ｓ（＝Ｏ）２－）に変換されているアミノ酸（メチオニンスルホキシド）などが挙げられるが、これらに限定されない。
　本明細書において、置換基を有していてもよい炭化水素基とは、例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、１－エチルプロピル、ヘキシル、イソヘキシル、１，１－ジメチルブチル、２，２－ジメチルブチル、３，３－ジメチルブチル、２－エチルブチルなどのＣ１－１０アルキル基、エテニル、１－プロペニル、２－プロペニル、２－メチル－１－プロペニル、１－ブテニル、２－ブテニル、３－ブテニル、３－メチル－２－ブテニル、１－ペンテニル、２－ペンテニル、３－ペンテニル、４－ペンテニル、４－メチル－３－ペンテニル、１－ヘキセニル、３－ヘキセニル、５－ヘキセニルなどのＣ２－１０アルケニル基、エチニル、１－プロピニル、２－プロピニル、１－ブチニル、２－ブチニル、３－ブチニル、１－ペンチニル、２－ペンチニル、３－ペンチニル、４－ペンチニル、１－ヘキシニル、２－ヘキシニル、３－ヘキシニル、４－ヘキシニル、５－ヘキシニル、４－メチル－２－ペンチニルなどＣ２－１０アルキニル基、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、ビシクロ［２．２．１］ヘプチル、ビシクロ［２．２．２］オクチル、ビシクロ［３．２．１］オクチル、アダマンチルなどのＣ３－１０シクロアルキル基、シクロプロペニル、シクロブテニル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、シクロオクテニルなどのＣ３－１０シクロアルケニル基を指し、置換基を有していてもよい芳香族炭素環基とは、例えば、フェニル基やナフチル基などを指し、置換基を有していてもよい芳香族複素環基とは、例えば、ピリジル、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、１，２，４－オキサジアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリル、１，２，４－チアジアゾリル、１，３，４－チアジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリアジニルなどの５ないし６員単環式芳香族複素環基、さらにはベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリル、ベンゾトリアゾリル、イミダゾピリジニル、チエノピリジニル、フロピリジニル、ピロロピリジニル、ピラゾロピリジニル、オキサゾロピリジニル、チアゾロピリジニル、イミダゾピラジニル、イミダゾピリミジニル、チエノピリミジニル、フロピリミジニル、ピロロピリミジニル、ピラゾロピリミジニル、オキサゾロピリミジニル、チアゾロピリミジニル、ピラゾロトリアジニル、ナフト［２，３－ｂ］チエニル、フェノキサチイニル、インドリル、イソインドリル、１Ｈ－インダゾリル、プリニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、カルバゾリル、β－カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニルなどの８ないし１４員縮合多環式（好ましくは２または３環式）芳香族複素環基を指すが、これらに限定されない。
　本明細書において、「Ｒａｓ」はマウス、ラット、イヌ、サル、ヒトなどの哺乳類のＫ－Ｒａｓ、Ｎ－Ｒａｓ、Ｈ－ＲａｓといったＲａｓサブファミリーの野生型タンパク質及びアミノ酸変異型タンパク質全般を意味し、ＧＤＰ結合型とＧＴＰ結合型のいずれも包含する。
　本明細書において、「Ｒａｓ阻害活性を有する」という場合、インビトロ試験において、本発明のペプチドが、（１）既報告のＲａｓ阻害ペプチドＫＲｐｅｐ－２ｄのビオチン標識化体のＲａｓタンパク質に対する結合を阻害すること、（２）Ｒａｓタンパク質に対して濃度依存的に結合すること、（３）Ｒａｓ発現細胞内のＥｒｋのリン酸化を阻害すること、（４）Ｒａｓ発現細胞の増殖を抑制すること、などを意味し、これらの効果のうちいずれか一つでも示す場合には、「Ｒａｓ阻害活性を有する」という。Ｒａｓ阻害活性の有無は、当業者が公知の方法に従って確認することができる。阻害活性を確認する方法としては、例えば、Ｒａｓタンパク質上のＧＤＰがＧＴＰに交換される反応を評価する方法（非特許文献３）、Ｒａｓ発現細胞とペプチドを共培養して、Ｒａｓ下流のシグナルであるＥｒｋのリン酸化の有無を調べる方法（非特許文献３）、Ｒａｓ発現細胞とペプチドを共培養して、その細胞の増殖の有無や速度を調べる方法（非特許文献３）、担癌マウスなどの疾病モデル動物にペプチドを投与して、癌細胞の増殖の有無や速度を調べる方法などが挙げられるが、これらに限定されない。
（環状ペプチド）
　本発明の一実施形態にかかる環状ペプチドの構造を図１に基づき説明する。図１は、環状ペプチド設計の基礎としたＫＲｐｅｐ－２ｄのＲａｓ結合活性にかかわる特徴（ファーマコフォア）、環状構造規制（Ｓ－Ｓ結合）、細胞内移行性（Ｃｅｌｌ　Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ　Ｐｅｐｔｉｄｅ：ＣＰＰ）などの機能に関わる構造と、これを改変した本実施形態の環状ペプチドとの関係を模式的に示したものである。ＫＲｐｅｐ－２ｄにおいて、Ｒａｓ結合部位を形成する６～１４番目のアミノ酸残基は、本実施形態の環状ペプチドでは２～１０番目のアミノ酸残基に対応する。また、ＫＲｐｅｐ－２ｄにおける５番目と１５番目のシステイン残基間での環状化は、本実施形態の環状ペプチドでは１番目と１１番目のアミノ酸残基間における結合Ａと、４番目と１１番目のアミノ酸残基間における結合Ｂとの２つの環状構造としてより安定化されている。そして、ＫＲｐｅｐ－２ｄの各アミノ酸ポジションにおけるアミノ酸残基の置換に供したアミノ酸の例を図２に示した。
　したがって、本発明の１つの好ましい実施形態における環状ペプチドは、下記式（１）のように表すことができる。
ｃ［Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－ｃ（Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１）］　　　（１）
ここで、Ｘ１からＸ１１の各アミノ酸残基は以下のとおりである。
［１］Ｘ１、Ｘ４及びＸ１１は、それぞれ独立にアミノ基、カルボキシ基、チオール基、アリル基、アルキニル基、アジド基、若しくはハロゲン原子を有するアミノ酸残基、又はそれらの誘導体を表す。Ｘ３、Ｘ５及びＸ７は、それぞれ独立に置換基を有していてもよい炭化水素基を有するアミノ酸残基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環基を有するアミノ酸残基、若しくは置換基を有していてもよい芳香族複素環基を有するアミノ酸残基、又はそれらの誘導体である。Ｘ８は、アスパラギン酸残基、又はその誘導体であり、Ｘ２、Ｘ６、Ｘ９、Ｘ１０は、任意のアミノ酸残基である。「アミノ基又はカルボキシ基を有するアミノ酸残基」におけるアミノ基及びカルボキシ基とは、主鎖のアミド結合を形成する基であってもよい。
　そして、Ｘ１とＸ１１及びＸ４とＸ１１は、それぞれの間で独立に、直接的な又はリンカーを介した間接的な共有結合を形成し、それによって式（１）のペプチドは分子内に２つの環状構造を有する。Ｘ１とＸ１１との間の共有結合は、それらの主鎖－主鎖間、主鎖－側鎖間、側鎖－主鎖間、又は側鎖－側鎖間のいずれの結合であってもよく、また、Ｘ４とＸ１１の間の共有結合は、それらの側鎖－主鎖間、又は側鎖－側鎖間のいずれの結合であってもよい。
［２］Ｘ１とＸ１１のＣα炭素原子間の結合が下記式（２）：
Ｃα１－（ＣＨ２）Ａ－Ｘ－（ＣＨ２）Ｂ－Ｃα１１　　　（２）
で表される構造を含む。ここで、上記式中、ＡとＢは、それぞれ独立に０～２のいずれかの整数を表し、ＡとＢの総和は、１～４のいずれかの整数であり、Ｘは、Ｓ－Ｓ、ＣＨ２－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２、ＣＨ２－Ｓ、Ｏ－ＣＨ２、ＣＨ２－Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）、Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（＝Ｏ）、ＮＨ－Ｃ（＝Ｓ）、Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（＝Ｓ）、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（ＣＨ３）、Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ、Ｃ（＝Ｓ）－Ｎ（ＣＨ３）、Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ、ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２、ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ、ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２、Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２、ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ、ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－Ｃ（＝ＣＨ２）－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）２－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）３－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）４－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＣＨ２－Ｓ（フェニレン環へのメチレン基の結合部位は、オルト、メタ及びパラの何れであってもよい）、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｓ、又はＳ－ＣＨ２－Ｃ（＝ＣＨ２）－ＣＨ２－Ｓを表す。
　これらの中でも、Ｘが、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）、ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２、ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ２－ＣＨ２を表すことが好ましく、さらに好ましくは、ＸがＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）を表す場合である。ＸがＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）を表す場合とは、例えば、Ｘ１のＮ末端アミノ基とＸ１１のＣ末端カルボキシ基との間で形成されるアミド結合がある。ＸがＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２を表す場合とは、例えば、１位の３－クロロプロパン酸の主鎖クロロ基と１１位システインの側鎖チオール基間で形成されるチオエーテル結合や、１位の３－ブテン酸の主鎖アリル基と１１位システインの側鎖チオール基間のチオール‐エン反応で形成されるチオエーテル結合が挙げられる。また、ＸがＣＨ＝ＣＨを表す場合とは、例えば、１位の３－ブテン酸の主鎖アリル基と１１位のβ－ホモ－Ｌ－アリルグリシンの側鎖アリル基間のオレフィンメタセシス反応により形成されるＣＨ＝ＣＨ結合が挙げられる。このＣＨ＝ＣＨ結合が還元された場合は、ＸがＣＨ２－ＣＨ２を表す。
［３］Ｘ４とＸ１１のＣα炭素原子間の結合が下記式（３）：
Ｃα４－（ＣＨ２）Ａ－Ｙ－（ＣＨ２）Ｂ－Ｃα１１　　　（３）
で表される構造を含む。ここで、式中、ＡとＢは、それぞれ独立に０～４のいずれかの整数を表し、ＡとＢの総和は、２～４のいずれかの整数であり、Ｙは、Ｓ－Ｓ、ＣＨ２－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２、ＣＨ２－Ｓ、Ｏ－ＣＨ２、ＣＨ２－Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）、Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（＝Ｏ）、ＮＨ－Ｃ（＝Ｓ）、Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（＝Ｓ）、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（ＣＨ３）、Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ、Ｃ（＝Ｓ）－Ｎ（ＣＨ３）、Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ、ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２、ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ、ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２、Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２、ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ、ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－Ｃ（＝ＣＨ２）－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）２－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）３－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）４－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＣＨ２－Ｓ（フェニレン環へのメチレン基の結合部位は、オルト、メタ及びパラの何れであってもよい）、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ（＝ＣＨ２）－ＣＨ２－Ｓ、トリアゾール、又はジチオテトラフルオロベンゼンを表す。
　これらの中でも、Ｙが、Ｓ－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－Ｃ（＝ＣＨ２）－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）２－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）３－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ（＝ＣＨ２）－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）４－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－Ｓ、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）を表すことが好ましく、さらに好ましくは、ＹがＳ－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）２－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）３－Ｓ、又はＳ－（ＣＨ２）４－Ｓを表す場合である。ＹがＳ－ＣＨ２－Ｓを表す場合とは、例えば、Ｘ４及びＸ１１が共にシステインであるとき、４位の側鎖チオール基とジヨードメタン（ＤＩＭ）リンカーと１１位の側鎖チオール基間に形成される－Ｓ－ＣＨ２－Ｓ－結合が挙げられる。ＹがＳ－（ＣＨ２）３－Ｓを表す場合とは、例えば、４位システインの側鎖チオール基と１，３－ジヨードプロパン（ＤＩＰ）リンカーと１１位システインの側鎖チオール基間に形成される－Ｓ－（ＣＨ２）３－Ｓ－結合が挙げられる。Ｙがトリアゾールを表す場合とは、例えば、４位ブテニル－Ｌ－グリシンと１１位β－アジド－Ｌ－アラニンの側鎖間でクリック反応によって形成されるトリアゾールを介した結合が挙げられる。また、４位アリルグリシンと１１位ホモシステイン間のチオール‐エン反応によるチオエーテル結合や、４位アリルグリシンと１１位βホモアリルグリシン間のオレフィンメタセシス反応によるＣＨ＝ＣＨ結合であってもよい。このＣＨ＝ＣＨ結合が還元された場合は、ＹがＣＨ２－ＣＨ２を表す。
［４］Ｘ３とＸ５は、それぞれ独立に下記式（４）～（７）のいずれかで表されるアミノ酸残基である。式（４）のアミノ酸残基は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
 （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｒ１、Ｒ２及びＲ６は、それぞれ独立に水素原子、又はメチル基を表し、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に水素原子、メチル基、又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を表し、ｎは、０～１０のいずれかの整数を表す）で表される。これらの中でも、ロイシン、ノルロイシン、イソロイシン、バリン、２－アミノヘプタン酸、２－アミノオクタン酸、２－アミノノナン酸、２－アミノデカン酸、γ－メチル－ロイシン及び５，５‘－ジメチルノルロイシンなどが好ましい。
　式（５）のアミノ酸残基は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
 （式中、Ｚは、Ｃ又はＮを表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表し、ｎは、１～６のいずれかの整数を表す）で表される。これらの中でも、シクロブチルグリシン、シクロペンチルグリシン及びシクロヘキシルグリシンなどが好ましい。
　下記式（６）のアミノ酸残基は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
 （式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立に水素原子又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表す）で表される。これらの中でも、フェニルグリシン、３－クロロフェニルグリシン、２－クロロフェニルグリシン、４－クロロフェニルグリシン、３－フルオロフェニルグリシン、２－フルオロフェニルグリシン及び４－フルオロフェニルグリシンなどが好ましい。
　式（７）のアミノ酸残基は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
 （式中、Ｒ１２は、２－チエニル基、３－チエニル基、２－ピリジル基、３－ピリジル基、４－ピリジル基、２－チアゾリル基、４－チアゾリル基、２－オキサゾリル基、４－オキサゾリル基、１－ピラゾリル基、１－イミダゾリル基、１，２，３－トリアゾール－１－イル基、又は１，２，４－トリアゾール－１－イル基を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表す）で表される。これらの式（４）～（７）のいずれかで表されるアミノ酸残基はその誘導体であってもよい。
［５］Ｘ７は、下記式（８）～（１１）のいずれかで表されるアミノ残基である。式（８）のアミノ酸残基は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
 （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１は、それぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ基、メトキシ基、メチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ハロゲン化メチル基、又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表す。）で表される。これらの中でも、４－フルオロフェニルアラニン、４－メチルフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－トリフルオロメチル－フェニルアラニン、４－ブロモフェニルアラニン及び４－ヨードフェニルアラニンなどが好ましい。
　式（９）のアミノ酸残基は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
 （式中、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６は、それぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ基、メトキシ基、メチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ハロゲン化メチル基、又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表す。）で表される。これらの中でも、トリプトファン、６－クロロトリプトファン及び５－クロロトリプトファンなどが好ましい。
式（１０）のアミノ酸残基は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
 （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との結合部位を表し、Ｚは、Ｃ又はＮを表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表し、ｎは、１～６のいずれかの整数を表す。）で表される。これらの中でもシクロヘキシルアラニンなどが好ましい。
　式（１１）のアミノ酸残基は、
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
 （式中、Ｒ１７は、２－チエニル基、３－チエニル基、２－ピリジル基、３－ピリジル基、４－ピリジル基、２－チアゾリル基、４－チアゾリル基、２－オキサゾリル基、４－オキサゾリル基、１－ピラゾリル基、１－イミダゾリル基、１，２，３－トリアゾール－１－イル基、１，２，４－トリアゾール－１－イル基、１Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル基、１Ｈ－ベンゾイミダゾール－２－イル基、１，３－ベンゾチアゾール－２－イル基、１，３－ベンゾオキサゾール－２－イル基、２－キノイル基、８－キノイル基、１－ナフチル基、又は２－ナフチル基を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表す。）で表される。これらの中でも、２－ナフチルアラニンなどが好ましい。
［６］Ｘ６は、下記式（１２）で表されるアミノ酸残基である：
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
 　式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０は、それぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ基、メトキシ基、アミノ基、モノメチル化アミノ基、ジメチル化アミノ基、トリメチル化アミノ基、メチル基、エチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ハロゲン化メチル基、又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を表し、Ｒ６は、水素、又はメチル基を表し、ｎは、０又は１を表す。これらの中でも、バリン、ロイシン、セリン、スレオニン及び２，３－ジアミノプロパン酸などが好ましい。
［７］Ｘ２とＸ９は、それぞれ独立に置換基を有していてもよい炭化水素基を有するアミノ酸、Ｎ－メチル化グリシン、２－アゼチジン－２－カルボン酸、プロリン、チオプロリン、３，４－デヒドロプロリン、ピペコリン酸、又はそれらの誘導体を表す。
［８］Ｘ１０は、バリン、ノルバリン、ロイシン、ノルロイシン、イソロイシン、メチオニン、シクロプロピルグリシン、シクロブチルグリシン、フェニルアラニン、４－フルオロ－フェニルアラニン、２－チエニルアラニン、３－チエニルアラニン、２‐ピリジルアラニン、３‐ピリジルアラニン、４‐ピリジルアラニン、２－チアゾリルアラニン、４－チアゾリルアラニン、２－オキサゾリルアラニン、４－オキサゾリルアラニン、１－ピラゾリルアラニン、１－イミダゾリルアラニン、３－（１，２，３－トリアゾール－１－イル）－アラニン、３－（１，２，４－トリアゾール－１－イル）－アラニン、３－（１Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル）－アラニン、３－（１Ｈ－ベンゾイミダゾール－２－イル）－アラニン、３－（１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）－アラニン、３－（１，３－ベンゾオキサゾール－２－イル）－アラニン、２－キノイルアラニン、８‐キノイルアラニン、トリプトファン、１－ナフチルアラニン、２－ナフチルアラニン、若しくはそれらのＮ－メチル化アミノ酸残基、又はそれらの誘導体を表す。
［９］本発明の１つの実施形態における環状ペプチドは、下記式（１３）：
ｃ［Ｘ１－Ｐｒｏ－Ｘ３－ｃ（Ｃｙｓ－Ｘ５－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｘ１０－Ｘ１１）］　　　（１３）で表されるアミノ酸配列からなる。
式（１３）において、Ｘ１は、β－アラニン又はγ－アミノ酪酸残基を表し、Ｘ３は、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルグリシン、フェニルグリシン、２－アミノヘプタン酸、２－アミノオクタン酸、２－アミノノナン酸又は２－アミノデカン酸残基を表し、Ｘ５は、イソロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルグリシン、フェニルグリシン、２－アミノヘプタン酸、２－アミノオクタン酸、２－アミノノナン酸又は２－アミノデカン酸残基を表し、Ｘ１０は、バリン、フェニルアラニン、トリプトファン、１－ナフチルアラニン又はそれらのＮ－メチル化アミノ酸残基を表し、Ｘ１１は、Ｄ体又はＬ体のシステイン残基を表わす。また、Ｘ１とＸ１１は、主鎖のアミノ基とカルボキシル基との間でアミド結合を形成し、Ｘ４とＸ１１は、それぞれの側鎖－ＳＨ基の間で、メチレン基、エチレン基、プロピレン基又はブチレン基のリンカーを介して共有結合を形成し、それによって式（１３）のペプチドは分子内に２つの環状構造を有する。
［１０］さらに好ましい実施形態の環状ペプチドは、下記式（１４）：
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｘ３－ｃ（Ｃｙｓ－Ｘ５－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］　　　（１４）で表されるアミノ酸配列からなる。
式（１４）において、Ｘ３は、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルグリシン、フェニルグリシン、２－アミノヘプタン酸、２－アミノオクタン酸、２－アミノノナン酸又は２－アミノデカン酸残基を表し、Ｘ５は、イソロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルグリシン、フェニルグリシン、２－アミノヘプタン酸、２－アミノオクタン酸、２－アミノノナン酸又は２－アミノデカン酸残基を表わす。また、１位と１１位の残基は、主鎖のアミノ基とカルボキシル基との間でアミド結合を形成し、４位と１１位の２つのシステイン残基は、それぞれの側鎖－ＳＨ基の間で、プロピレン基のリンカーを介して共有結合を形成し、それによって式（１４）のペプチドは分子内に２つの環状構造を有する。
　上記式（１３）又は式（１４）に含まれる個々の環状ペプチドとしては、例えば、以下のような例を挙げることができる。
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｃｙｓ）］（配列番号１～３）
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－ＤＣｙｓ）］（配列番号４～６）
ｃ［γＡｂａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－Ｃｙｓ）］（配列番号７～９）
ｃ［γＡｂａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－ＤＣｙｓ）］（配列番号１０～１２）
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｐｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－ＤＣｙｓ）］（配列番号１３）
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｏｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－ＤＣｙｓ）］（配列番号１４）
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｖａｌ－ＤＣｙｓ）］（配列番号１５）
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｐｈｅ－ＤＣｙｓ）］（配列番号１６）
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］（配列番号１７）
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－１ＮａｐｈＡ－ＤＣｙｓ）］（配列番号１８）
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｎｏｎ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］（配列番号１９）
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｏｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－ｍＶａｌ－ＤＣｙｓ）］（配列番号２０～２１）
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｎｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｃｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｐｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｈｅｐ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｏｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｄｅｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｎｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｃｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｐｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｈｅｐ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｏｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｎｌｅ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｄｅｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｃｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｃｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｎｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｃｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｃｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｃｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｐｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｃｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｈｅｐ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｃｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｏｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｃｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｃｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｄｅｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｎｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｃｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｐｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｈｅｐ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｏｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｐｈｇ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｄｅｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｈｅｐ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｈｅｐ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｎｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｈｅｐ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｃｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｈｅｐ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｐｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｈｅｐ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｈｅｐ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｈｅｐ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｏｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｈｅｐ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｈｅｐ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｄｅｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｏｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｏｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｎｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｏｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｃｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｏｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｐｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｏｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｈｅｐ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｏｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｏｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｏｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｏｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｄｅｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｎｏｎ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｎｏｎ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｎｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｎｏｎ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｃｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｎｏｎ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｐｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｎｏｎ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｈｅｐ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｎｏｎ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｏｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｎｏｎ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｄｅｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｄｅｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｉｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｄｅｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｎｌｅ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｄｅｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｃｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｄｅｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ｐｈｇ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｄｅｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｈｅｐ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｄｅｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｏｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｄｅｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｎｏｎ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］
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ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ａｄｅｃ－ｃ（Ｃｙｓ－Ａｄｅｃ－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－Ｃｙｓ）］
［１１］本発明に係るペプチドは、上記［１］～［１０］で表されるアミノ酸配列において、１～数個のアミノ酸が欠失、付加、及び／又は置換された相同性を有するペプチドであっても、Ｒａｓに対する結合活性を有するものは包含する。本明細書において、「１～数個のアミノ酸が欠失、付加、及び／又は置換されているペプチド」という場合、それらのアミノ酸の個数は、そのペプチドがＲａｓ結合活性を有する限りは特に限定されないが、好ましくは１～５個、さらに好ましくは１個若しくは２個である。欠失、付加、及び／又は置換されている場所は、ペプチドの末端であっても、中間であってもよく、１ヶ所であっても２ヶ所以上であってもよい。
　このような上記アミノ酸配列において１～数個のアミノ酸が欠失、付加、及び／又は置換されたアミノ酸配列として、前記アミノ酸配列と、ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ　Ｌｏｃａｌ　Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ　Ｓｅａｒｃｈ　Ｔｏｏｌ　ａｔ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（米国国立生物学情報センターの基本ローカルアラインメント検索ツール））等（例えば、デフォルトすなわち初期設定のパラメータを用いて）を用いて計算したときに、少なくとも５０％以上、好ましくは７０％以上、さらに好ましくは８０％以上、特に好ましくは９０％以上の同一性を有しているものが挙げられる。
　また、一次構造上の相同性が低くても、立体構造が高度に類似しているペプチドやタンパク質ドメインも存在することが知られている。したがって、上記アミノ酸配列と少なくとも５０％以上、好ましくは７０％以上、さらに好ましくは８０％以上、特に好ましくは９０％以上の立体構造相同性を有するペプチドであって、Ｒａｓ結合活性を有するペプチドも本実施形態に含まれる。このようなペプチド同士の立体構造の相同性は、ホモロジーモデリング法などを用いて、立体構造未知のペプチドのアミノ酸配列から、その立体構造を以下のように予測して行うことができる。例えば、本実施形態の環状ペプチド（参照ペプチド）と類似の配列を有する任意のアミノ酸配列（目的配列）が与えられたとき、目的配列と参照配列の間のアライメント（配列を並置したもの）を与える。ＦＡＳＴＡ、ＰＳＩ－ＢＬＡＳＴ、ＬＩＢＲＡなどにより算出したアライメントを用いれば、目的配列と参照配列間のアミノ酸ごとの対応関係が決まるので、この関係に基づき、参照ペプチドの３次元座標から目的配列上のアミノ酸ごとの３次元座標を作成する。３次元座標の構築では、アミノ酸残基間に構造的に不適切な隙間や衝突や歪みが生じることがあるので、エネルギー極小化計算により、これらの構造的な歪みを解消する。モデリングソフトによっては、この構造的な歪みの解消をスムーズに行うため、ペプチドの全原子に対して同時に行うのではなく、段階的に行うものもある。即ち、まずペプチドの骨格を形成するα炭素原子について行い、次いでα炭素原子を含む主鎖原子について行い、最後に側鎖原子を含むペプチド全体について行うものである。このようにして目的配列に対するアライメントが得られれば、その立体構造を予測構築することができる。立体構造相同性の指標は、最適に重ね合わせたときのＸＹＺ座標の差であるＲＭＳＤ（Ｒｏｏｔ　Ｍｅａｎ　Ｓｑｕａｒｅ　Ｄｅｖｉａｔｉｏｎ）などを用いて比較することができる。
　本発明のペプチドは、本発明の課題を解決するものである限り、その種々の誘導体、及び／又は修飾体も包含する。係る誘導体としては、ペプチドの飽和脂肪鎖が不飽和脂肪鎖に置換されているもの、ペプチドの原子の一部が放射性または非放射性の同位体原子を含む他の原子に置換されているもの、ペプチドのアミド結合がチオアミド結合（－ＮＨ－Ｃ（＝Ｓ）－）に置換されているもの、ペプチドのアミド結合がアルケン（－Ｃ＝Ｃ－）に置換されているもの、ペプチドのアミド結合がアルキル（－Ｃ－Ｃ－）に置換されているもの、ペプチドのアミド結合がヒドロキシエチレン（－Ｃ（－ＯＨ）－Ｃ－）に置換されているもの、ペプチドのアミド結合がエステル（－Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）－）に置換されているもの、ペプチドのアミド結合がアルケン（－Ｃ＝Ｃ－）に置換されているもの、ペプチドのアミド結合が（－Ｃ－ＮＨ－）に置換されているもの、又はペプチドのアミド結合が（－Ｃ（＝Ｏ）－Ｃ－）に置換されているものなどが挙げられ、係る修飾体としては、ペプチドのα位炭素が二置換されているもの、ペプチドのアミド結合がＮ－アルキル化されているもの、ペプチドの官能基の一部がハロゲン化、シアノ化、ニトロ化、オキソ化、ヒドロキシ化、アミノ化、デアミノ化、デヒドロ化、アミド化、アセチル化、メトキシ化、プレニル化、アルキル化などの修飾を受けているもの（例えば、ペプチドのアミノ基の一部がアセチル化やアルキル化やデアミノ化されているもの、ペプチドのカルボキシ基の一部がアミドやエステルになっているものなど）、ペプチドのＳがスルホキシドＳ（＝Ｏ）又はスルホンＳ（＝Ｏ）２になっているもの、ペプチドがケミカルリンカーを介して多量体化しているもの、ペプチドがビオチン標識化されているもの、ペプチドが蛍光標識化されているもの、ペプチドが発光標識化されているもの、さらにはアルキル鎖、ポリエチレングリコール、抗体、レクチン類、糖鎖、酵素、膜透過性ペプチド、低分子化合物、又はタンパク質のユビキチン化を誘導する分子などとペプチドを融合させたもの等が挙げられるが、これらに限定されない。
　本発明のペプチドは、ペプチドの塩も包含する。ペプチドの塩としては、生理学的に許容される塩基や酸との塩が用いられ、例えば、無機酸（塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸等）の付加塩、有機酸（ｐ－トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ－ブロモフェニルスルホン酸、カルボン酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、酢酸等）の付加塩、無機塩基（水酸化アンモニウム、又はアルカリ、若しくはアルカリ土類金属水酸化物、炭酸塩、重炭酸塩等）、アミノ酸の付加塩等が挙げられる。
　本発明のペプチドは、プロドラッグであってもよい。プロドラッグは、生体内における生理条件下で酵素や胃酸などによる反応によって本発明のペプチドに変換される化合物、すなわち酵素的に酸化、還元、加水分解などを起こして本発明のペプチドに変化する化合物、胃酸などにより加水分解などを起こして本発明のペプチドに変化する化合物をいう。
　本発明のペプチドのプロドラッグとしては、本発明のペプチドのアミノ基がアシル化、アルキル化またはリン酸化された化合物（例えば、本発明のペプチドのアミノ基がエイコサノイル化、アラニル化、ペンチルアミノカルボニル化、（５－メチル－２－オキソ－１，３－ジオキソレン－４－イル）メトキシカルボニル化、テトラヒドロフラニル化、ピロリジルメチル化、ピバロイルオキシメチル化、又はｔｅｒｔ－ブチル化された化合物）、本発明のペプチドのヒドロキシ基がアシル化、アルキル化、リン酸化、又はホウ酸化された化合物（例えば、本発明のペプチドのヒドロキシ基がアセチル化、パルミトイル化、プロパノイル化、ピバロイル化、スクシニル化、フマリル化、アラニル化、又はジメチルアミノメチルカルボニル化された化合物）、本発明のペプチドのヒドロキシ基やカルボキシ基がエステル化、又はアミド化された化合物（例えば、本発明のペプチドのヒドロキシ基やカルボキシ基がＣ１－６アルキルエステル化、フェニルエステル化、カルボキシメチルエステル化、ジメチルアミノメチルエステル化、ピバロイルオキシメチルエステル化、エトキシカルボニルオキシエチルエステル化、フタリジルエステル化、（５－メチル－２－オキソ－１，３－ジオキソレン－４－イル）メチルエステル化、シクロヘキシルオキシカルボニルエチルエステル化、又はメチルアミド化された化合物）などが挙げられるが、これらに限定されない。これらの化合物は自体公知の方法によって本発明のペプチドから製造することができる。
　本発明のペプチドのプロドラッグは、広川書店１９９０年刊「医薬品の開発」第７巻分子設計１６３～１９８頁に記載されているような生理的条件で本発明のペプチドに変化するものであってもよい。
　本明細書において、プロドラッグは塩を形成していてもよく、係る塩としては、本発明のペプチドの塩として例示したものが挙げられる。
　本発明のペプチドは、結晶であってもよく、結晶形が単一であっても結晶形混合物であっても本発明のペプチドに包含される。結晶は、自体公知の結晶化法を適用して、結晶化することによって製造することができる。
　本発明のペプチドは、薬学的に許容され得る共結晶や共結晶塩であってもよい。ここで共結晶、又は共結晶塩とは、各々が異なる物理的特性（例えば、構造、融点、融解熱、吸湿性、溶解性及び安定性等）を持つ、室温で二種、又はそれ以上の独特な固体から構成される結晶性物質を意味する。共結晶、又は共結晶塩は、自体公知の共結晶化法に従い製造することができる。
（環状ペプチドの作用効果）
　後述する実施例に示される通り、本実施形態で表されるアミノ酸配列群の代表例である配列１７、配列２０（ＬＯ２）及び配列２１（ＬＯ３）は、プロテアーゼ分解に対する耐性とＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）発現細胞に対する増殖抑制活性を有している。本実施形態で表されるアミノ酸配列群は、これらの代表例と類似のアミノ酸配列及び立体構造的特徴を有することから、それらもプロテアーゼ分解に対する耐性と細胞増殖抑制活性を有している可能性が極めて高いと考えられる。
　ＫＲｐｅｐ－２ｄは、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）のみならずＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｃ）や野生型Ｋ－Ｒａｓにも結合し、その結合活性はＧＤＰ結合型ＲａｓとＧＴＰ結合型Ｒａｓのいずれに対してもほぼ同等であることが確認されている（非特許文献３及び非特許文献４）。そして、Ｒａｓのアミノ酸配列は、変異の有無に関わらず高度に保存されている。後述する実施例に示される通り、本実施形態で表されるアミノ酸配列群の代表例のビオチン修飾体（Ｂｉｏｔｉｎ－ＢＣ－１）は、野生型Ｋ－Ｒａｓ、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｖ）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｃ）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１３Ｄ）、野生型Ｎ－Ｒａｓ、Ｎ－Ｒａｓ（Ｑ６１Ｋ）、野生型Ｈ－Ｒａｓ、Ｈ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｖ）、そしてＨ－Ｒａｓ（Ｑ６１Ｌ）に対して結合する。本実施形態で表されるアミノ酸配列群は、ＫＲｐｅｐ－２ｄのファーマコフォア、そしてＢｉｏｔｉｎ－ＢＣ－１と類似のアミノ酸配列及び立体構造的特徴を有することから、変異型Ｋ－Ｒａｓ、変異型Ｎ－Ｒａｓ、変異型Ｈ－ＲａｓといったＲａｓ全般に結合し、その結合活性はＧＤＰ結合型ＲａｓとＧＴＰ結合型Ｒａｓのいずれに対してもあり、結合によってＲａｓ全般の機能を阻害する可能性が極めて高いと考えられる。
　非特許文献５に記載されているＫＲｐｅｐ－２ｄ改変ペプチドのＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）阻害活性、そして後述する実施例に示される２ｄ－５／１５－Ｄａｐ／ＡｓｐのＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）結合活性、Ｂｉｏｔｉｎ－ＢＣ－１のＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）結合活性、配列１～２１のＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）発現細胞に対する増殖抑制活性は、以下のことを示している。本発明の二環ペプチドにおいて、（１）１位－１１位間の共有結合はＳ－Ｓ結合のような柔軟な構造から、アミド結合のような平面性を有する比較的堅い構造まで、幅広い形状の構造を受容する。（２）１位－１１位間の共有結合は、Ｃα炭素間の原子数が３～７までの幅広い距離を受容する、（３）４位－１１位間の共有結合は、Ｃα炭素間の原子数が４～８までの幅広い距離を受容する。
　非特許文献５にも示される通り、一般的に環状ペプチドの標的結合活性は、最適な環状サイズを頂点としてベルシェイプ型を描くことから、本発明の二環ペプチドの４－１１位間の共有結合は、Ｃα炭素間の原子数が４～８を頂点として、さらに１～２原子数程度の増加であれば受容する可能性が極めて高い。すなわち４位－１１位間の共有結合は、Ｃα炭素間の原子数が４～１０までの幅広い距離を受容すると考えられる。また、４－１１位間の共有結合は、ペプチドの二環構造規制に寄与するが、Ｒａｓ結合には直接寄与していないため、アミド結合、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、Ｃ＝Ｃ結合、Ｃ－Ｃ結合、トリアゾールを介した結合、ジチオテトラフルオロベンゼンを介した結合などの幅広い形状の構造を受容すると考えられる。
　Ｒａｓ全般のアミノ酸配列は、哺乳類で高度に保存されているため、本実施形態で表されるアミノ酸配列からなるペプチド群は、マウス、ラット、イヌ、サルなどのヒト以外の哺乳類の変異型Ｋ－Ｒａｓ、変異型Ｎ－Ｒａｓ、及び／又は変異型Ｈ－Ｒａｓに対しても結合して、その機能を阻害する可能性が極めて高いと考えられる。
（環状ペプチドの製造方法）
　本実施形態のペプチドは、液相法、固相法、又は液相法と固相法を組み合わせたハイブリッド法等の化学合成法等、公知のペプチドの製造方法などによって製造することができる。
　固相法には、市販の自動合成機を用いることができる。例えば、水酸基を有するレジンの水酸基と、α位アミノ基がＦｍｏｃ基といった保護基で保護された第一のアミノ酸（通常、目的とするペプチドのＣ末端アミノ酸）のカルボキシ基をエステル化反応させる。エステル化触媒としては、１－メシチレンスルホニル－３－ニトロ－１、２、４－トリアゾール（ＭＳＮＴ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤＩ）等の公知の脱水縮合剤を用いることができる。次に、第一アミノ酸のα位アミノ基の保護基を脱離させるとともに、主鎖のカルボキシ基以外のすべての官能基が保護された第二のアミノ酸を加え、当該カルボキシ基を活性化させて、第一及び第二のアミノ酸を結合させる。さらに、第二のアミノ酸のα位アミノ基を脱保護し、主鎖のカルボキシ基以外のすべての官能基が保護された第三のアミノ酸を加え、当該カルボキシ基を活性化させて、第二及び第三のアミノ酸を結合させる。これを繰り返して、目的とする長さのペプチドを合成する。直鎖ペプチドをレジンから切断し、精製後、ペプチドを環状化するための官能基を脱保護し、定法にしたがって、ペプチドを環状化する。
　固相合成のレジンとしては、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ　ｒｅｓｉｎ、ＭＢＨＡ　ｒｅｓｉｎ、Ｃｌ－Ｔｒｔ　ｒｅｓｉｎ、ＳＡＳＲＩＮ　ｒｅｓｉｎ、Ｗａｎｇ　ｒｅｓｉｎ、Ｒｉｎｋ　ａｍｉｄｅ　ｒｅｓｉｎ、ＨＭＦＳ　ｒｅｓｉｎ、Ａｍｉｎｏ－ＰＥＧＡ　ｒｅｓｉｎ（メルク社）、ＨＭＰＡ－ＰＥＧＡ　ｒｅｓｉｎ（メルク社）等が挙げられる。これらのレジンは、溶剤（ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、２－プロパノール、塩化メチレン等）で洗浄してから用いてもよい。α位アミノ基の保護基としては、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、ベンジル基、アリル基、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）基等が挙げられる。Ｃｂｚ基はフッ化水素酸、水素化等によって脱保護でき、Ｂｏｃ基はトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）により脱保護でき、Ｆｍｏｃ基はピペリジンによる処理で脱保護できる。α位カルボキシ基の保護は、メチルエステル、エチルエステル、ベンジルエステル、ｔｅｒｔ－ブチルエステル、シクロヘキシルエステル等を用いることができる。アミノ酸のその他の官能基として、セリンやスレオニンなどのヒドロキシ基はベンジル基やｔｅｒｔ－ブチル基で保護することができ、チロシンなどのヒドロキシ基は２－ブロモベンジルオキシカルボニル基やｔｅｒｔ－ブチル基で保護できる。リジンなどの側鎖のアミノ基、グルタミン酸やアスパラギン酸などのカルボキシ基は、α位アミノ基、α位カルボキシ基と同様に保護することができる。
　カルボキシ基の活性化は、縮合剤を用いて行うことができる。縮合剤としては、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＤＩ）、１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣあるいはＷＳＣ）、（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスファート（ＢＯＰ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチル］－１Ｈ－ベンゾトリアゾリウム－３－オキシドヘキサフルオロホスファート（ＨＢＴＵ）等が挙げられる。レジンからのペプチド鎖の切断は、ＴＦＡ、フッ化水素（ＨＦ）等の酸で処理することによって行うことができる。
　本実施形態のペプチドは、一態様として環状化されている。本明細書において環状化とは、１つのペプチド内において、１アミノ酸以上離れた２つ以上のアミノ酸が直接的に、又はリンカーを介して間接的に共有結合し、分子内に１つ以上の環状構造を作ることを意味する。環状化は、非特許文献３や非特許文献６や非特許文献７に記載の手法に則って、実施することができる。例えば、アミノ基とカルボキシ基間のアミド結合、チオール基とチオール基間のジスルフィド結合、チオール基とハロゲン基間のチオエーテル結合、チオール基とアリル基間のチオール‐エン反応によるチオエーテル結合、アリル基とアリル基間のオレフィンメタセシス反応によるＣ＝Ｃ結合（当該Ｃ＝Ｃ結合は還元反応によって、Ｃ－Ｃ結合に変換されていてもよい）、アルキニル基とアジド基間のクリック反応によるトリアゾールを介した結合、ハロゲン基を有するリンカーと二つのチオール基間のチオエーテル結合などによることができるが、これらに限定されない。環状化のための直接的な又はリンカーを介した間接的な共有結合は、主鎖－主鎖間、主鎖－側鎖間、側鎖－主鎖間、側鎖－側鎖間のいずれであってもよい。
　本発明のペプチドの環状化には、例えば、（１）チオール基を有するシステイン、Ｄ体システイン、ホモシステイン、Ｄ体ホモシステインをそれぞれ独立にアミノ酸１及びアミノ酸２とし、それらのチオール基間で形成されるジスルフィド結合を用いることができる、（２）求核基であるハロゲン原子（クロロ、ブロモ、又はヨード）を有するアミノ酸（例えば３－クロロアラニン）、又はハロゲン原子（クロロ、ブロモ、又はヨード）を有するカルボン酸（例えば３－クロロプロパン酸）をアミノ酸１とし、チオール基を有するアミノ酸２との間で形成されるチオエーテル結合を用いることができる、（３）チオール基を有するアミノ酸１及びアミノ酸２、そして求核基であるハロゲン原子（クロロ、ブロモ、又はヨード）を有するリンカー（例えばジヨードメタン（ＤＩＭ）、１，２－ジヨードエタン（ＤＩＥ）、１，３－ジヨードプロパン（ＤＩＰ）、１，４－ジヨードブタン（ＤＩＢ）、ヘキサフルオロベンゼンなど）の間で形成されるチオエーテル結合を用いることができる、（４）アジド基を有するβアジドアラニンをアミノ酸１、アルキニル基を有する２－アミノ－５－ヘキシン酸をアミノ酸２とし、その間のクリック反応によって形成されるトリアゾールを介した共有結合を用いることができる、（５）アリル基を有するアミノ酸（例えばアリルグリシン、Ｄ体アリルグリシン、ホモアリルグリシン、Ｄ体ホモアリルグリシンなど）、又はアリル基を有するカルボン酸（例えば３－ブテン酸）をアミノ酸１とし、チオール基を有するアミノ酸２との間のチオール‐エン反応によって形成されるチオエーテル結合を用いることができる、（６）アリル基を有するアミノ酸、又はアリル基を有するカルボン酸をそれぞれ独立にアミノ酸１及びアミノ酸２とし、それらのアリル基間のオレフィンメタセシス反応によって形成されるＣ＝Ｃ結合を用いることができる、（７）オレフィンメタセシス反応によって形成されたＣ＝Ｃ結合を還元することで形成されるＣ－Ｃを用いることができる、（８）アミノ基を有するアミノ酸１（例えば２，３－ジアミノプロパン酸、２，４－ジアミノブタン酸、オルニチン、リジン、それらのＤ体アミノ酸、βアラニンなど）とカルボキシ基を有するアミノ酸２（アスパラギン酸、グルタミン酸、それらのＤ体アミノ酸など）又はＣ末端カルボキシ基の間のアミド結合を用いることができる、（９）Ｎ末端アミノ基とカルボキシ基を有するアミノ酸又はＣ末端カルボキシ基の間のアミド結合を用いることができる。アミノ酸１とアミノ酸２は、どちらがＮ末端側にきてもよい。
（環状ペプチドを含む医薬、診断薬、研究用試薬）
　本発明に係る医薬組成物は、上述したアミノ酸配列からなるペプチドを有効成分として含み、ペプチドがＲａｓに結合し、その活性を阻害することを通じて、悪性腫瘍などの増殖を抑制することが可能である。上記の医薬組成物の投与形態は特に限定されず、経口的投与でも非経口的投与でもよい。非経口投与としては、例えば、筋肉内注射、静脈内注射、皮下注射等の注射投与、経皮投与、経粘膜投与（経鼻、経口腔、経眼、経肺、経膣、又は経直腸投与）等が挙げられる。医薬組成物中のペプチドは、代謝及び排泄されやすい性質に鑑みて、各種の修飾を行うことができる。例えば、ペプチドにアルキル鎖、ポリエチレングリコール、又は糖鎖などを付加することで、血中滞留時間を長くする、抗原性を低下させることができる。また、ポリ乳酸・グリコール（ＰＬＧＡ）などの生体内分解性の高分子化合、多孔性ヒドロキシアパタイト、リポソーム、表面修飾リポソーム、不飽和脂肪酸で調製したエマルジョン、ナノパーティクル、ナノスフェア等を徐放化基剤として用い、これにペプチドを内包させてもよい。経皮投与する場合、弱い電流を皮膚表面に流して角質層を透過させることもできる（イオントフォレシス法）。
　上記の医薬組成物は、有効成分をそのまま用いてもよいし、薬学的に許容できる担体、賦形剤、添加剤等を加えて製剤化してもよい。剤形としては、例えば、液剤（注射剤など）、分散剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、粉末剤、坐剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、吸入剤、軟膏剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、パップ剤等が挙げられる。これらの製剤は、速放性製剤又は徐放性製剤等の放出制御製剤（徐放性マイクロカプセルなど）であってもよい。製剤化は、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、溶解剤、溶解補助剤、着色剤、矯味矯臭剤、安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤などを適宜使用し、常法により行うことができる。製剤化に用いられる成分の例としては、精製水、食塩水、リン酸緩衝液、デキストロース、グリセロール、エタノール等の薬学的に許容される有機溶剤、動植物油、乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ソルビトール、結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、コーンスターチ、無水ケイ酸、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナトリウム、ぺクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、キサンタンガム、アラビアゴム、トラガント、カゼイン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、グリセリン、プロピレングリコール、ワセリン、パラフィン、ミリスチン酸オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、高級アルコール、ステアリルアルコール、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン等が挙げられるが、これらに限定されない。ペプチドが経粘膜吸収されにくい場合は、難吸収性薬物の吸収を改善する吸収促進剤として、ポリオキシエチレンラウリルエーテル類、ラウリル硫酸ナトリウム、サポニン等の界面活性剤；グリココール酸、デオキシコール酸、タウロコール酸等の胆汁酸塩；ＥＤＴＡ、サリチル酸類等のキレート剤；カプロン酸、カプリン酸、ラウリン酸、オレイン酸、リノール酸、混合ミセル等の脂肪酸類；エナミン誘導体、Ｎ－アシルコラーゲンペプチド、Ｎ－アシルアミノ酸、シクロデキストリン類、キトサン類、一酸化窒素供与体等を用いてもよい。
　丸剤又は錠剤は、糖衣、胃溶性、腸溶性物質で被覆することもできる。注射剤は、注射用蒸留水、生理食塩水、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、アルコール類等を含むことができる。さらに、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、溶解剤、溶解補助剤、防腐剤等を加えることができる。必要に応じ、通常の防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、吸着剤、湿潤剤等の添加物を適宜、適量用いることもできる。
　本発明の医薬組成物は、Ｒａｓの機能阻害を通じて、Ｒａｓを発現する悪性腫瘍が関与するとされる種々の疾患の治療又は予防に有効である。例えば、膵癌（例えば、膵管癌等）、大腸癌（例えば、家族性大腸癌、遺伝性非ポリポーシス大腸癌、消化管間質腫瘍等）、小腸癌（例えば、非ホジキンリンパ腫、消化管間質腫瘍等）、乳癌（例えば、浸潤性乳管癌、非浸潤性乳管癌、炎症性乳癌等）、前立腺癌（例えば、ホルモン依存性前立腺癌、ホルモン非依存性前立腺癌等）、胃癌（例えば、乳頭腺癌、粘液性腺癌、腺扁平上皮癌等）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、悪性中皮腫等）、結腸癌（例えば、消化管間質腫瘍等）、直腸癌（例えば、消化管間質腫瘍等）、食道癌、十二指腸癌、舌癌、咽頭癌（例えば、上咽頭癌、中咽頭癌、下咽頭癌等）、唾液腺癌、脳腫瘍（例えば、松果体星細胞腫瘍、毛様細胞性星細胞腫、びまん性星細胞腫、退形成性星細胞腫等）、神経鞘腫、肝臓癌（例えば、原発性肝癌、肝外胆管癌等）、腎臓癌（例えば、腎細胞癌、腎盂と尿管の移行上皮癌等）、胆管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、卵巣癌（例えば、上皮性卵巣癌、性腺外胚細胞腫瘍、卵巣性胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍等）、膀胱癌、尿道癌、皮膚癌（例えば、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌等）、血管腫、悪性リンパ腫、悪性黒色腫、甲状腺癌（例えば、甲状腺髄様癌等）、副甲状腺癌、鼻腔癌、副鼻腔癌、骨腫瘍（例えば、骨肉腫、ユーイング腫瘍、子宮肉腫、軟部組織肉腫等）、血管線維腫、網膜肉腫、陰茎癌、精巣腫瘍、小児固形癌（例えば、ウィルムス腫瘍、小児腎腫瘍等）、カポジ肉腫、ＡＩＤＳに起因するカポジ肉腫、上顎洞腫瘍、線維性組織球腫、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、白血病（例えば、急性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病等）などが挙げられるが、これらに限定されない。
　本発明の医薬組成物は、上記疾患に有用な他の医薬や治療法と併用投与してもよい。例えば悪性腫瘍であれば、各種の化学療法、外科的治療、放射線療法と組み合わせてもよい。
　本発明の医薬組成物を哺乳類（例えば、ヒト、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、ウマ、サル、ブタ等）、特にヒトに投与する場合の投与量は、症状、患者の年齢、性別、体重、感受性差、投与方法、投与間隔、有効成分の種類、製剤の種類によって異なり、特に限定されないが、例えば、３０μｇ～１０００ｍｇ、１００μｇ～５００ｍｇ、１００μｇ～１００ｍｇを１回、又は数回に分けて投与することができる。
　以下に示す実施例は、単なる例示であって、上述した実施形態と共に本発明を詳細に説明することのみを意図しており、本発明を限定するものではない。当業者は、本発明の意義を逸脱することなく様々な態様に本発明を変更することができ、係る変更も本発明の範囲に含まれる。
　本明細書中で用いられている略号は下記の意味を表す。
Ｋ－Ｒａｓ：Ｖ－Ｋｉ－ｒａｓ２　Ｋｉｒｓｔｅｎ　ｒａｔ　ｓａｒｃｏｍａ　ｖｉｒａｌ　ｏｎｃｏｇｅｎｅ　ｈｏｍｏｌｏｇ
Ｎ－Ｒａｓ：Ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ　ｒａｓ　ｏｎｃｏｇｅｎｅ　ｈｏｍｏｌｏｇ
Ｈ－Ｒａｓ：Ｈａｒｖｅｒｙ　ｒａｔ　ｓａｒｃｏｍａ　ｖｉｒａｌ　ｏｎｃｏｇｅｎｅ　ｈｏｍｏｌｏｇ
ＧＤＰ：Ｇｕａｎｏｎｓｉｎｅ　ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ
ＧＴＰ：Ｇｕａｎｏｎｓｉｎｅ　ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ
ＧＥＦ：Ｇｕａｎｉｎｅ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｅｘｃｈａｎｇｅ　ｆａｃｔｏｒ
ＧＡＰ：ＧＴＰａｓｅ　ａｃｃｅｌｅｒａｔｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ
ＢＳＡ：Ｂｏｖｉｎｅ　ｓｅｒｕｍ　ａｌｂｕｍｉｎ
ＲＰ－ＨＰＬＣ：Ｒｅｖｅｒｓｅ－ｐｈａｓｅ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＨＲＰ：Ｈｏｒｓｅｒａｄｉｓｈ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ
ＳＡ：Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ
ＤＴＴ：Ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ
ＰＢＳ：Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓａｌｉｎｅ
ＥＬＩＳＡ：Ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ
ＡＴＰ：Ａｄｅｃｎｏｓｉｎｅ　ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ
Ａｃ：Ａｃｅｔｙｌ
Ａｒｇ：Ｌ－Ａｒｇｉｎｉｎｅ
Ｃｙｓ：Ｌ－Ｃｙｓｔｅｉｎｅ
Ｇｌｙ：Ｇｌｙｃｉｎｅ
Ａｌａ：Ｌ－Ａｌａｎｉｎｅ
βＡｌａ：ｂｅｔａ－Ａｌａｎｉｎｅ　（ｂｅｔａ－ｈｏｍｏ－Ｇｌｙｃｉｎｅ）
γＡｂａ：ｇａｍｍａ―ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃ　ａｃｉｄ
Ａｚｅ：Ｌ－Ａｚｅｔｉｄｉｎｅ　ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄ
Ｐｒｏ：Ｌ－Ｐｒｏｌｉｎｅ
ｔ４ｆＰ：Ｔｒａｎｓ－４－ｆｌｕｏｒｏ－Ｌ－Ｐｒｏｌｉｎｅ
Ｐｉｐ：Ｌ－Ｐｉｐｅｃｏｌｉｃ　ａｃｉｄ
Ｖａｌ：Ｌ－Ｖａｌｉｎｅ
Ｌｅｕ：Ｌ－Ｌｅｕｃｉｎｅ
Ｉｌｅ：Ｌ－Ｉｓｏｌｅｕｃｉｎｅ
γｍＬ：ｇａｍｍａ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｌ－Ｌｅｕｃｉｎｅ　（３－ｔｅｒｔ－ｂｕｔｙｌ－Ｌ－Ａｌａｎｉｎｅ）
Ｎｌｅ：Ｌ－Ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ
ｄｍＮｌ：５，５－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－Ｌ－Ｎｏｒｌｅｕｃｉｎｅ
Ａｈｅｐ：（Ｓ）－２－Ａｍｉｎｏｈｅｐｔａｎｏｎｉｃ　ａｃｉｄ
Ａｏｃ：（Ｓ）－２－Ａｍｉｎｏｏｃｔａｎｏｎｉｃ　ａｃｉｄ
Ａｎｏｎ：（Ｓ）－２－Ａｍｉｎｏｎｏｎａｎｏｎｉｃ　ａｃｉｄ
Ａｄｅｃ：（Ｓ）－２－Ａｍｉｎｏｄｅｃａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ
Ｃｐｒｇ：Ｌ－Ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌｇｌｙｃｉｎｅ
Ｃｂｕｇ：Ｌ－Ｃｙｃｌｏｂｕｔｙｌｇｌｙｃｉｎｅ
Ｃｐｅｎｇ：Ｌ－Ｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌｇｌｙｃｉｎｅ
Ｃｈｇ：Ｌ－Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌｇｌｙｃｉｎｅ
Ｃｈａ：Ｌ－Ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌａｌａｎｉｎｅ
Ｐｈｇ：Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅ
Ｐｈｅ：Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ
３ｃＰｇ：３－ｃｈｌｏｒｏ－Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅ
２ｃＰｇ：２－ｃｈｌｏｒｏ－Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅ
４ｆＰｇ：４－ｆｌｕｏｒｏ－Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌｇｌｙｃｉｎｅ
Ｔｙｒ：Ｌ－Ｔｙｒｏｓｉｎｅ
３ｈＦ：３－ｈｙｄｒｏｘｙ－Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ
Ｔｒｐ：Ｌ－Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ
５ｈＷ：５－ｈｙｄｒｏｘｙ－Ｌ－Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ
６ｃＷ：６－ｃｈｌｏｒｏ－Ｌ－Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ
１ＮａｐｈＡ：Ｌ－１－Ｎａｐｈｔｈｙｌａｌａｎｉｎｅ
２ＮａｐｈＡ：Ｌ－２－Ｎａｐｈｔｈｙｌａｌａｎｉｎｅ
Ｄａｐ：（Ｓ）－２，３－Ｄｉａｍｉｎｏｐｒｏｐａｎｏｎｉｃ　ａｃｉｄ
Ｌｙｓ：Ｌ－Ｌｙｓｉｎｅ
Ｓ（Ｏｍｅ）：Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｌ－Ｓｅｒｉｎｅ
ｈｍＳ（Ｏｍｅ）：Ｏ－ｍｅｔｈｙｌ－Ｌ－ｈｏｍｏｓｅｒｉｎｅ
Ｔｈｒ：Ｌ－Ｔｈｒｅｏｎｉｎｅ
Ａｓｐ：Ｌ－Ａｓｐａｒｔｉｃ　ａｃｉｄ
４ｆＦ：４－ｆｌｕｏｒｏ－Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ
４ｍＦ：４－ｍｅｔｈｙｌ－Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ
４ｃＦ：４－ｃｈｌｏｒｏ－Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ
４ｔｆｍＦ：４－ｔｒｉｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｙｌ－Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ
４ｂＦ：４－ｂｒｏｍｏ－Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ
４ｉＦ：４－ｉｏｄｏ－Ｌ－Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ
２ＰｙｒｄＡ：３－（２－Ｐｙｒｉｄｙｌ）－Ｌ－Ａｌａｎｉｎｅ
Ｔｉｃ：（Ｓ）－１，２，３，４－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｉｓｏｑｕｉｎｏｌｉｎｅ－３－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ　ａｃｉｄ
ＤＩＥ：１，２－Ｄｉｉｏｄｏｅｔｈａｎｅ
ＤＩＰ：１，３－Ｄｉｉｏｄｏｐｒｏｐａｎｅ
ＤＩＢ：１，４－Ｄｉｉｏｄｏｂｕｔａｎｅ
ｍＸ：Ｎ－ｍｅｔｈｙｌａｔｅｄ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　Ｘ
ＤＸ：Ｄ－ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　Ｘ
ｃ［ＸＹ］，ｃ（ＸＹ）：Ｃｙｃｌｉｚａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　Ｘ　ｔｏ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　Ｙ
（ペプチド合成）
　本実施例に使用した全てのペプチドの化学合成は、株式会社スクラム（東京、日本）に委託し、９－フルオレニルメトキシカルボニル基（Ｆｍｏｃ基）をαアミノ基の保護基として用いる標準的な固相合成法を自動合成機ＳｙｒｏＩＩ（Ｂｉｏｔａｇｅ社製）で実施した。Ｃ末端に位置する側鎖保護アミノ酸－レジンを合成カラムに入れて、装置をセットした。続いて、Ｆｍｏｃ基で保護した次アミノ酸に１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロフォスフェート（ＨＡＴＵ）／ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）を加えて活性化し、カラムに入れて反応させた。反応終了後に洗浄し、２０％ピペリジンを用いて、Ｆｍｏｃ基を脱保護した。本工程を繰り返すことで、ペプチド鎖を伸長し、最終アミノ酸のＦｍｏｃ基を脱保護した後、装置からペプチドレジンを取り出した。ペプチドレジンに３０％ヘキサフルオロ－２－プロパノール（ＨＦＩＰ）／ジクロロメタン（ＤＣＭ）を加えて、レジンから直鎖の側鎖保護ペプチドを切り出し、エーテル沈殿によって側鎖保護ペプチドを回収した。ＳｕｎＦｉｒｅ　Ｃ１８カラム（１０×１５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社製）を用いたＲＴ－ＨＰＬＣによって、側鎖保護ペプチドを精製した後、凍結乾燥した。
　ペプチドの環状化は、非特許文献３や非特許文献６や非特許文献７に記載の手法を参考とした。例として、配列２１（ＬＯ３）の環状化を以下に示す。直鎖の側鎖保護ペプチドをＤＣＭに溶解し、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解した１－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）とエチル（ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩を添加し、Ｃ末端カルボキシ基を活性化させた。氷上で１時間反応後、さらに室温で一晩反応させ、Ｎ末端アミノ基とＣ末端カルボキシ基間のアミド結合によって、側鎖保護ペプチドを環状化した。蒸留水で３回洗浄し、ＤＣＭを留去して乾燥後、側鎖保護基を脱保護し、エーテル沈殿によって、単環ペプチドを得た。ＳｕｎＦｉｒｅ　Ｃ１８カラム（１０×１５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社製）を用いたＲＴ－ＨＰＬＣによって、単環ペプチドを精製した後、凍結乾燥した。単環ペプチドをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、ＤＭＦに溶解した１，４－ジヨードブタン（ＤＩＢ）、１０ｍＭトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）を含む０．１ＭのＮａＨＣＯ３とアセトニトリルの混液に加え、８０℃で反応させることで、チオール基とハロゲン化アルキルリンカーの間のチオエーテル結合によって、ペプチドを環状化した。ＳｕｎＦｉｒｅ　Ｃ１８カラム（１０×１５０ｍｍ）（Ｗａｔｅｒｓ社製）を用いたＲＴ－ＨＰＬＣによって、二環ペプチドＬＯ３を精製した後、凍結乾燥した。最終的に得られたペプチドの分子量は、ｍｉｃｒｏｆｌｅｘ（Ｂｒｕｋｅｒ社）を用いて測定し、目的物を同定した。本実施例で合成したペプチドの理論分子量、実測分子量、純度、環状化タイプ、アミノ酸配列を表２に示す。また、これらの中でＢｉｏｔｉｎ－ＢＣ－１、配列１～２１（Ｓｅｑ－１～２１）の構造式を図１０に示す。なお、表２において、Ｄ体表記のないアミノ酸残基はＬ体を示す。
（ＥＬＩＳＡ法による競合結合試験の構築）
　アミノ酸置換したペプチドのＲａｓに対する結合活性をＫＲｐｅｐ－２ｄのそれと比較するため、図３に示したＥＬＩＳＡ法による競合結合試験を構築した。以下、本ＥＬＩＳＡ法を簡単に説明する。まず、Ｒａｓの組み換えタンパク質を１０ｍＭのＭｇＣｌ２／１０μＭのＧＤＰ／ＰＢＳを用いて、１２．５ｎｇ／５０μＬ／ウェルで９６穴マキシソーププレート（カタログＮｏ．４３９４５４、Ｎｕｎｃ社製）に添加し、４℃で一晩コートした後、０．１％ＢＳＡ／１０ｍＭのＭｇＣｌ２／１０μＭのＧＤＰ／ＰＢＳをさらに３００μＬ／ウェルで添加し、室温で３０分間ブロックした。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳでプレートを洗浄後、０．０２５％ＢＳＡ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／１０ｍＭのＭｇＣｌ２／１０μＭのＧＤＰ／ＰＢＳを用いて、Ｂｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄ（１００ｎＭ）と任意の濃度のアミノ酸置換ペプチド又は比較対象であるＫＲｐｅｐ－２ｄとの混合液を調製し、５０μＬ／ウェルで添加した。室温で３０分間反応後、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳでプレートを洗浄した。プレートにコートされたＲａｓに結合したＢｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄをＳＡ－ＨＲＰ（カタログＮｏ．ａｂ７４０３、アブカム社製）で検出した。ＨＲＰの定量には、ＴＭＢ－ＥＬＩＳＡ　Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（カタログＮｏ．３４０２８、サーモフィッシャー社製）を用いて、吸光度４５０ｎｍを測定した。Ｂｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄのＲａｓに対する結合は、溶液中に共存するアミノ酸置換ペプチドやＫＲｐｅｐ－２ｄのＲａｓに対する結合と競合するため、アミノ酸置換ペプチドやＫＲｐｅｐ－２ｄの濃度依存的に阻害される。すなわち、アミノ酸置換ペプチドやＫＲｐｅｐ－２ｄのＲａｓに対する結合活性は、Ｂｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄの結合に対する競合的な阻害活性として検出される。Ｒａｓをコートしていないウェルに対するＢｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄの結合値を阻害活性１００％、アミノ酸置換ペプチドやＫＲｐｅｐ－２ｄを添加していないウェルに対するＢｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄの結合値を阻害活性０％として、アミノ酸置換ペプチド及びＫＲｐｅｐ－２ｄの５０％阻害活性値を算出した。続いて、ＫＲｐｅｐ－２ｄの５０％阻害活性値を１として、アミノ酸置換ペプチドの阻害活性値の相対値を算出した。
　本競合試験に用いたＢｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄのＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）（カタログＮｏ．１２２５９－Ｈ０７Ｅ１－２００、Ｓｉｎｏ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ社製）に対するペプチド濃度依存的な結合を図４に示す。Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）をコートしたウェルにＢｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄを添加した場合に得られた吸光度から、ＢＳＡでブロッキングのみしたウェルにＢｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄを添加した場合に得られた吸光度を差し引き、特異的な結合活性を見積もった。この結果、Ｂｉｏｔｉｎ－ＫＲｐｅｐ－２ｄは、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）に対してペプチドの添加濃度依存的な結合を示した。一方、ネガティブコントロールのタンパク質に対しては、結合活性を示さなかった。
（アミノ酸置換ペプチドのＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）に対する結合活性の評価）
　Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）に対する競合結合試験をＮ＝４で実施した結果を表１に示す。ＫＲｐｅｐ－２ｄに対して１アミノ酸置換もしくは２アミノ酸置換を導入したペプチド配列のほとんどが、ＫＲｐｅｐ－２ｄと同等の結合活性又はＫＲｐｅｐ－２ｄより強い結合活性を示したことから、これらのアミノ酸置換がＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）に対するペプチドの結合活性の向上に有効であることが示された。
　５位Ｃｙｓと１５位ＣｙｓをそれぞれＤａｐとＡｓｐに置換し、アミド結合によって環化した２ｄ－５／１５－Ｄａｐ／Ａｓｐは、ＫＲｐｅｐ－２ｄの０．６倍とやや減弱したもののＫ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）結合活性を示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000019
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000020
（本発明ペプチドのＲａｓに対する結合活性の評価）
　ＫＲｐｅｐ－２ｄに非天然アミノ酸を導入し、さらに連続するアルギニン配列を除去し、１位－１１位間と４位－１１位間の共有結合によって二環化した本発明ペプチドの代表例であるビオチン修飾体Ｂｉｏｔｉｎ－ＢＣ－１の野生型Ｋ－Ｒａｓ、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｖ）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｃ）、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１３Ｄ）、野生型Ｎ－Ｒａｓ、Ｎ－Ｒａｓ（Ｑ６１Ｋ）、野生型Ｈ－Ｒａｓ、Ｈ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｖ）、及びＨ－Ｒａｓ（Ｑ６１Ｌ）に対するペプチド濃度依存的な結合を図５に示す。ＲａｓをコートしたウェルにＢｉｏｔｉｎ－ＢＣ－１を添加した場合に得られた吸光度から、ＢＳＡでブロッキングのみしたウェルにＢｉｏｔｉｎ－ＢＣ－１を添加した場合に得られた吸光度を差し引き、特異的な結合活性を見積もった。
　図５に示したように、１位－１１位間と４位－１１位間の共有結合によって二環化しているビオチン修飾ペプチドは、いずれのＲａｓに対してもペプチドの添加濃度依存的な結合を示した。一方、ネガティブコントロールのタンパク質に対しては、結合活性を示さなかった。還元条件によって、４位－１１位間の共有結合が切断され、１位－１１位間の共有結合のみで単環となったビオチン修飾ペプチドは、いずれのＲａｓに対しても、その結合活性が大幅に減弱した。
（本発明ペプチドのプロテアーゼ分解に対する耐性の評価）
　本発明ペプチドがＫＲｐｅｐ－２ｄと比較して、プロテアーゼ分解に対する耐性を有していることを確認するため、ラット血漿中にＫＲｐｅｐ－２ｄ又は本実施例で合成したペプチド（配列１７、配列２０（ＬＯ２）及び配列２１（ＬＯ３））を混合し、一定時間の培養後にペプチドの残存をＲＰ－ＨＰＬＣのピークの有無で評価した。各１０ｍＭのペプチド１μＬに対して、ラット血漿を２０μＬ添加し、３７℃にて任意の時間（０又は２４時間）培養した。その後、ＫＲｐｅｐ－２ｄに対しては８０％メタノールを２００μＬ添加し、合成ペプチド（配列１７、配列２０、配列２１）に対してはアセトニトリルを２００μＬ添加し、よく混合した後、氷上で１０分間静置し、４℃下、１５，０００ｒｐｍの速度で１０分間遠心することで、血漿タンパク質を除去した。上清を回収し、ＳｕｎＦｉｒｅ　Ｃ１８カラム（５μｍ　４．６×１５０ｍｍ）を用いたＲＰ－ＨＰＬＣ（Ａ液：０．１％ＴＦＡ／水、Ｂ液：０．１％ＴＦＡ／アセトニトリル、１ｍＬ／ｍｉｎにて８０％Ａ液→１０％Ａ液を２０ｍｉｎグラジエント）でペプチドの残量を検出した。
　その結果を図６に示す。図６に示される通り、ＫＲｐｅｐ－２ｄ由来のピークは、２４時間の培養後には消失しており、配列中のいずれかの部分がプロテアーゼ分解を受けたことが示唆された。一方、合成ペプチド（配列１７、配列２０、配列２１）由来のピークは、２４時間後でも培養時間０時間と比較して、ほぼ同等を維持しており、プロテアーゼ分解に対する耐性を有していることが示された。
（本発明ペプチドの変異型Ｋ－Ｒａｓ発現細胞に対する増殖抑制活性の評価）
　本発明ペプチドが細胞内のＲａｓのシグナル伝達を抑制し、その結果として細胞増殖を抑制することを確認するため、細胞増殖試験をＮ＝４で行った。以下、細胞増殖試験を簡単に説明するが、非特許文献３に従って行ってもよい。Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）を発現するＡ４２７細胞（カタログＮｏ．ＨＴＢ－５３、ＡＴＣＣ社製）又はＰＡＮＣ－１細胞（カタログＮｏ．ＣＲＬ－１４６９、ＡＴＣＣ社製）を１×１０３細胞／ウェルで９６穴プレートに撒きこみ、ＣＯ２培養機内で３７℃にて、一晩培養した。血清培地で希釈したペプチド（終濃度３０μＭ）をウェルに添加し、２４時間培養後、培地を全て除去し、続いて、新たに血清培地で希釈したペプチド（終濃度３０μＭ）をウェルに添加し、２４時間培養した。培地の除去とペプチドを添加する工程を計３回実施した後、ウェル中の細胞数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（カタログＮｏ．Ｇ７５７０、プロメガ社製）で定量した。ペプチド添加前の細胞数を増殖抑制率１００％、全工程を経たペプチド非添加ウェル内の細胞数を増殖抑制率０％として、任意の濃度のペプチドの増殖抑制活性を算出した。
　その結果を図７（Ａ）及び図７（Ｂ）に示す。図７（Ａ）に示される通り、実施例で合成したペプチド（配列１～２１）は、Ａ４２７細胞の増殖を抑制した。一方、単環ペプチドであるＭＣ１～１２の、Ａ４２７細胞に対する増殖抑制活性は、二環化ペプチドと比較して、大きく減弱した。また、図７（Ｂ）に示したように、配列１７のペプチドは、Ａ４２７細胞だけでなく、Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）を発現するＰＡＮＣ－１細胞の増殖も抑制した。
（本発明ペプチドの皮下担癌マウスにおける抗癌活性の評価）
　本発明ペプチドがｉｎ　ｖｉｖｏで抗癌活性を示すかを評価した。Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）を発現するＰＡＮＣ－１細胞（カタログＮｏ．ＣＲＬ－１４６９、ＡＴＣＣ社製）を１×１０７細胞でＣｒｌｊ：ＳＨＯ－ＰｒｋｄｃｓｃｉｄＨｒｈｒマウス（雌、７週齢）（日本チャールス・リバー）の左鼠径部皮下に移植し、腫瘍体積が約５０ｍｍ３に達した時点で、試験に供した。腫瘍体積は、皮膚表面から、腫瘍塊の長径（ｍｍ）及びそれに直交する短径（ｍｍ）をノギスで測り、長径×短径２×０．５の式で求め、単位はｍｍ３とした。本発明ペプチドの代表例（配列１７）をＤＭＳＯに溶解後、生理食塩水で１０倍に希釈し、４０ｍｇ／ｋｇで二日に一回、尾静脈から投与し、経日的にマウスの体重と腫瘍体積を測定した（ペプチド投与群：Ｎ＝１０、Ｖｅｈｉｃｌｅ群：Ｎ＝４）。なお、Ｖｅｈｉｃｌｅ群とは、癌細胞の移植ありで生理食塩水（１０％ＤＭＳＯ）を投与した群である。
　結果を図８に示す。本発明ペプチドの代表例（配列１７）を投与したマウスでは、ＰＡＮＣ－１細胞の増殖に由来する腫瘍体積の増大が有意に抑制され、スチューデントのｔ検定によって算出されたｐ値は０．００５以下であった。一方、マウスの体重の減少はみられなかった。
（本発明ペプチドの同所性移植モデルマウスにおける抗癌活性の評価）
　本発明ペプチドがｉｎ　ｖｉｖｏで抗癌活性を示すかを評価した。Ｋ－Ｒａｓ（Ｇ１２Ｄ）を発現するＰＡＮＣ－１細胞（カタログＮｏ．ＣＲＬ－１４６９、ＡＴＣＣ社製）を２．５×１０６細胞でＢＡＬＢ／ｃＡＪｃｌ－ｎｕ／ｎｕマウス（雄、８週齢）（日本クレア株式会社）の膵臓尾部被膜下に移植し、１週間後、試験に供した。本実施例で合成したペプチド（配列１７）をＤＭＳＯに溶解後、生理食塩水で１０倍に希釈し、４０ｍｇ／ｋｇで二日に一回、尾静脈から投与した（Ｓｈａｍ群、ペプチド投与群、Ｖｅｈｉｃｌｅ群：各Ｎ＝７）。なお、Ｓｈａｍ群とは、癌細胞を含まない細胞培地で移植手技を実施し生理食塩水（１０％ＤＭＳＯ）を投与した群であり、Ｖｅｈｉｃｌｅ群とは、癌細胞の移植ありで生理食塩水（１０％ＤＭＳＯ）を投与した群である。投与開始から４週間後のマウスの体重と臓器（膵臓、肝臓、腎臓）の重量を測定した。
　その結果を図９に示す。本発明ペプチドの代表例（配列１７）を投与したマウスでは、ＰＡＮＣ－１細胞の増殖に由来する膵臓の重量の増加が有意に抑制され、スチューデントのｔ検定によって算出されたｐ値は０．０５以下であった。一方、肝臓や腎臓の重量には有意な差はみられなかった。また、マウスの体重の減少はみられなかった。

 
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000021
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000022
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000023
　本発明に係るペプチドは、プロテアーゼ分解耐性を有しており、Ｒａｓにペプチドが結合することで、Ｒａｓの分子スイッチ機能のオフ／オンのサイクルを阻害し、Ｒａｓを増殖ドライバーとする癌細胞の増殖を抑制する。従って、本発明に係るペプチドは、Ｒａｓを発現する癌細胞が関与する疾患、例えば、大腸癌、膵臓癌、肺癌などの予防や治療に有用であると考えられる。
　本発明に係るペプチドは、そのものを抗癌剤として使用できるだけでなく、抗体、レクチン、糖鎖、リポソーム、ナノパーティクルなどといった癌組織へのデリバリー分子と組み合わせる薬効分子として使用することも可能である。また、タンパク質をユビキチン化し、分解へと誘導する分子と組み合わせることで、細胞内のＲａｓを選択的に分解する機能性分子として使用することも可能である。
　さらに本発明に係るペプチドは、免疫チェックポイント阻害剤や中性子補足療法など、他の作用機序を有する医薬品や療法と併用すれば、癌細胞の増殖をより強力に抑制できると考えられる。

Claims (14)

  1. 　下記式（１）：
    ｃ［Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－ｃ（Ｘ４－Ｘ５－Ｘ６－Ｘ７－Ｘ８－Ｘ９－Ｘ１０－Ｘ１１）］　　　（１）
    （式中、Ｘ１、Ｘ４及びＸ１１は、それぞれ独立にアミノ基、カルボキシ基、チオール基、アリル基、アルキニル基、アジド基、若しくはハロゲン原子を有するアミノ酸残基、又はそれらの誘導体を表し、
    　Ｘ３、Ｘ５及びＸ７は、それぞれ独立に置換基を有していてもよい炭化水素基を有するアミノ酸残基、置換基を有していてもよい芳香族炭素環基を有するアミノ酸残基、若しくは置換基を有していてもよい芳香族複素環基を有するアミノ酸残基、又はそれらの誘導体を表し、
    　Ｘ８は、アスパラギン酸残基、又はその誘導体を表し、
    　Ｘ２、Ｘ６、Ｘ９、Ｘ１０は、任意のアミノ酸残基を表し、
    　Ｘ１とＸ１１及びＸ４とＸ１１は、それぞれの間で独立に、直接的な又はリンカーを介した間接的な共有結合を形成し、それによって式（１）のペプチドは分子内に２つの環状構造を有し、
    　Ｘ１とＸ１１との間の前記共有結合は、それらの主鎖－主鎖間、主鎖－側鎖間、側鎖－主鎖間、又は側鎖－側鎖間のいずれの結合であってもよく、
    　Ｘ４とＸ１１の間の前記共有結合は、それらの側鎖－主鎖間、又は側鎖－側鎖間のいずれの結合であってもよい。）
    　で表されるアミノ酸配列からなる環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  2. 　Ｘ１とＸ１１のＣα炭素原子間の結合が下記式（２）：
    Ｃα１－（ＣＨ２）Ａ－Ｘ－（ＣＨ２）Ｂ－Ｃα１１　　　（２）
    （式中、ＡとＢは、それぞれ独立に０～２のいずれかの整数を表し、
    　ＡとＢの総和は、１～４のいずれかの整数であり、
    　Ｘは、Ｓ－Ｓ、ＣＨ２－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２、ＣＨ２－Ｓ、Ｏ－ＣＨ２、ＣＨ２－Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）、Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（＝Ｏ）、ＮＨ－Ｃ（＝Ｓ）、Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（＝Ｓ）、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（ＣＨ３）、Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ、Ｃ（＝Ｓ）－Ｎ（ＣＨ３）、Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ、ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２、ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ、ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２、Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２、ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ、ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－Ｃ（＝ＣＨ２）－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）２－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）３－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）４－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｓ、又はＳ－ＣＨ２－Ｃ（＝ＣＨ２）－ＣＨ２－Ｓを表す。）
    　で表される構造を含む請求項１に記載の環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  3. 　Ｘ４とＸ１１のＣα炭素原子間の結合が下記式（３）：
    Ｃα４－（ＣＨ２）Ａ－Ｙ－（ＣＨ２）Ｂ－Ｃα１１　　　（３）
    （式中、ＡとＢは、それぞれ独立に０～４のいずれかの整数を表し、
    　ＡとＢの総和は、２～４のいずれかの整数であり、
    　Ｙは、Ｓ－Ｓ、ＣＨ２－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２、ＣＨ２－Ｓ、Ｏ－ＣＨ２、ＣＨ２－Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）、Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（＝Ｏ）、ＮＨ－Ｃ（＝Ｓ）、Ｎ（ＣＨ３）－Ｃ（＝Ｓ）、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ、Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（ＣＨ３）、Ｃ（＝Ｓ）－ＮＨ、Ｃ（＝Ｓ）－Ｎ（ＣＨ３）、Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ、ＣＨ２－ＣＨ２－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２、ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ、ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２、Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ２、ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ、ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ２、Ｓ－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－Ｃ（＝ＣＨ２）－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）２－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）３－Ｓ、Ｓ－（ＣＨ２）４－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＮＨ、ＮＨ－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－ＣＨ２－Ｓ、Ｓ－ＣＨ２－Ｃ（＝ＣＨ２）－ＣＨ２－Ｓ、トリアゾール、又はジチオテトラフルオロベンゼンを表す。）
    　で表される構造を含む請求項１又は２に記載の環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  4. 　Ｘ３とＸ５がそれぞれ独立に下記式（４）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
     （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｒ１、Ｒ２及びＲ６は、それぞれ独立に水素原子、又はメチル基を表し、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、それぞれ独立に水素原子、メチル基、又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を表し、ｎは、０～１０のいずれかの整数を表す。）；又は
    　下記式（５）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
     （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｚは、Ｃ又はＮを表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表し、ｎは、１～６のいずれかの整数を表す。）；又は
    　下記式（６）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
     （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立に水素原子又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表す。）；又は
    　下記式（７）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
     （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｒ１２は、２－チエニル基、３－チエニル基、２－ピリジル基、３－ピリジル基、４－ピリジル基、２－チアゾリル基、４－チアゾリル基、２－オキサゾリル基、４－オキサゾリル基、１－ピラゾリル基、１－イミダゾリル基、１，２，３－トリアゾール－１－イル基、又は１，２，４－トリアゾール－１－イル基を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表す。）
    　で表されるアミノ酸残基であるか、又はそれらの誘導体である、請求項１～３のいずれか１項に記載の環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  5. 　Ｘ７が下記式（８）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
     （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ基、メトキシ基、メチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ハロゲン化メチル基、又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表す。）；
    　下記式（９）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
     （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５及びＲ１６は、それぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ基、メトキシ基、メチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ハロゲン化メチル基、又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表す。）；
    下記式（１０）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
     （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｚは、Ｃ又はＮを表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表し、ｎは、１～６のいずれかの整数を表す。）；又は
    　下記式（１１）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
     （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｒ１７は、２－チエニル基、３－チエニル基、２－ピリジル基、３－ピリジル基、４－ピリジル基、２－チアゾリル基、４－チアゾリル基、２－オキサゾリル基、４－オキサゾリル基、１－ピラゾリル基、１－イミダゾリル基、１，２，３－トリアゾール－１－イル基、１，２，４－トリアゾール－１－イル基、１Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル基、１Ｈ－ベンゾイミダゾール－２－イル基、１，３－ベンゾチアゾール－２－イル基、１，３－ベンゾオキサゾール－２－イル基、２－キノイル基、８－キノイル基、１－ナフチル基、又は２－ナフチル基を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表す。）；
    　で表されるアミノ酸残基であるか、又はそれらの誘導体である、請求項１～４のいずれか１項に記載の環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  6. 　Ｘ６が下記式（１２）：
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
     （式中、波線は主鎖のアミド結合を形成するカルボニル基又は窒素原子との付着点を表し、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０は、それぞれ独立に水素原子、ヒドロキシ基、メトキシ基、アミノ基、モノメチル化アミノ基、ジメチル化アミノ基、トリメチル化アミノ基、メチル基、エチル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ハロゲン化メチル基、又はハロゲン原子（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を表し、Ｒ６は、水素原子、又はメチル基を表し、ｎは、０又は１を表す。）
    　で表されるアミノ酸残基であるか、又はそれらの誘導体である、請求項１～５のいずれか１項に記載の環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  7. 　Ｘ２とＸ９が、それぞれ独立に置換基を有していてもよい炭化水素基を有するアミノ酸、Ｎ－メチル化グリシン、２－アゼチジン－２－カルボン酸、プロリン、チオプロリン、３，４－デヒドロプロリン、ピペコリン酸又はそれらの誘導体を表す、請求項１～６いずれか１項に記載の環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  8. 　Ｘ１０が、バリン、ノルバリン、ロイシン、ノルロイシン、イソロイシン、メチオニン、シクロプロピルグリシン、シクロブチルグリシン、フェニルアラニン、４－フルオロ－フェニルアラニン、２－チエニルアラニン、３－チエニルアラニン、２‐ピリジルアラニン、３‐ピリジルアラニン、４‐ピリジルアラニン、２－チアゾリルアラニン、４－チアゾリルアラニン、２－オキサゾリルアラニン、４－オキサゾリルアラニン、１－ピラゾリルアラニン、１－イミダゾリルアラニン、３－（１，２，３－トリアゾール－１－イル）－アラニン、３－（１，２，４－トリアゾール－１－イル）－アラニン、３－（１Ｈ－ベンゾイミダゾール－１－イル）－アラニン、３－（１Ｈ－ベンゾイミダゾール－２－イル）－アラニン、３－（１，３－ベンゾチアゾール－２－イル）－アラニン、３－（１，３－ベンゾオキサゾール－２－イル）－アラニン、２－キノイルアラニン、８‐キノイルアラニン、トリプトファン、１－ナフチルアラニン、２－ナフチルアラニン、若しくはそれらのＮ－メチル化アミノ酸残基又はそれらの誘導体を表す、請求項１～７のいずれか１項に記載の環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  9. 　下記式（１３）：
    ｃ［Ｘ１－Ｐｒｏ－Ｘ３－ｃ（Ｃｙｓ－Ｘ５－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｘ１０－Ｘ１１）］　　　（１３）
    （式中、Ｘ１は、β－アラニン又はγ－アミノ酪酸残基を表し、
    　Ｘ３は、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルグリシン、フェニルグリシン、２－アミノヘプタン酸、２－アミノオクタン酸、２－アミノノナン酸又は２－アミノデカン酸残基を表し、
    　Ｘ５は、イソロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルグリシン、フェニルグリシン、２－アミノヘプタン酸、２－アミノオクタン酸、２－アミノノナン酸又は２－アミノデカン酸残基を表し、
    　Ｘ１０は、バリン、フェニルアラニン、トリプトファン、１－ナフチルアラニン又はそれらのＮ－メチル化アミノ酸残基を表し、
    　Ｘ１１は、Ｄ体又はＬ体のシステイン残基を表し、
    　Ｘ１とＸ１１は、主鎖のアミノ基とカルボキシル基との間でアミド結合を形成し、Ｘ４とＸ１１は、それぞれの側鎖－ＳＨ基の間で、メチレン基、エチレン基、プロピレン基又はブチレン基のリンカーを介して共有結合を形成し、それによって式（１３）のペプチドは分子内に２つの環状構造を有する。）で表されるアミノ酸配列からなる環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  10. 　下記式（１４）：
    ｃ［βＡｌａ－Ｐｒｏ－Ｘ３－ｃ（Ｃｙｓ－Ｘ５－Ｓｅｒ－４ｆＦ－Ａｓｐ－Ｐｒｏ－Ｔｒｐ－ＤＣｙｓ）］　　　（１４）
    （式中、Ｘ３は、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルグリシン、フェニルグリシン、２－アミノヘプタン酸、２－アミノオクタン酸、２－アミノノナン酸又は２－アミノデカン酸残基を表し、
    　Ｘ５は、イソロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルグリシン、フェニルグリシン、２－アミノヘプタン酸、２－アミノオクタン酸、２－アミノノナン酸又は２－アミノデカン酸残基を表し、
    　１位と１１位の残基は、主鎖のアミノ基とカルボキシル基との間でアミド結合を形成し、４位と１１位の２つのシステイン残基は、それぞれの側鎖－ＳＨ基の間で、プロピレン基のリンカーを介して共有結合を形成し、それによって式（１４）のペプチドは分子内に２つの環状構造を有する。）で表されるアミノ酸配列からなる環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  11. 　請求項１～１０のいずれか１項に記載のペプチドのアミノ酸配列において、１～数個のアミノ酸が欠失、付加、及び／又は置換されているか若しくは前記アミノ酸配列と少なくとも５０％以上の配列相同性を有するか、及び／又は請求項１～８のいずれか１項に記載のペプチドと少なくとも５０％以上の立体構造相同性を有するペプチドであって、Ｒａｓ阻害活性を有する環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  12. 　配列番号１～２１のいずれかに記載のアミノ酸配列を有する環状ペプチド、若しくは配列番号１～２１のいずれかに記載のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸が欠失、付加、及び／又は置換したアミノ酸配列を含み、Ｒａｓ阻害活性を有する環状ペプチド又はその薬理学的に許容される塩。
  13. 　請求項１～１２のいずれか１項に記載のペプチドの誘導体、及び／又は修飾体。
  14. 　請求項１～１３のいずれか１項に記載のペプチドを含む医薬、診断薬、及び／又は研究試薬。

     
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