CN117158444A - 一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护品及抗流感病毒药物中的应用 - Google Patents

一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护品及抗流感病毒药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117158444A
CN117158444A CN202311135912.5A CN202311135912A CN117158444A CN 117158444 A CN117158444 A CN 117158444A CN 202311135912 A CN202311135912 A CN 202311135912A CN 117158444 A CN117158444 A CN 117158444A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibacterial peptide
wood frog
preparation
extract
frog antibacterial
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202311135912.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN117158444B (zh
Inventor
林万君
郑玲玲
张丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tonghua Kang Yuan Biological Technology Co ltd
Original Assignee
Tonghua Kang Yuan Biological Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Tonghua Kang Yuan Biological Technology Co ltd filed Critical Tonghua Kang Yuan Biological Technology Co ltd
Priority to CN202311135912.5A priority Critical patent/CN117158444B/zh
Publication of CN117158444A publication Critical patent/CN117158444A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN117158444B publication Critical patent/CN117158444B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明属于生物和医药技术领域，具体涉及一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护品及抗流感病毒药物中的应用，所述林蛙抗菌肽制剂，包括以下原料：林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素‑7‑O‑葡萄糖苷。所述制剂具有较好的协同作用，在消杀甲流、乙流等病毒方面，具有显著的效果，同时兼具较好的杀菌作用，是一种性能优良的外用防护产品，还可以进一步制备成其它制剂或抗流感病毒的药物，副作用小，具有良好的应用前景。

Description

一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护品及抗流感 病毒药物中的应用
技术领域
本发明属于生物和医药技术领域，具体涉及一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护产品及抗流感病毒药物中的应用。
背景技术
东北林蛙(Rana dybowskii)是我国特有的重要药食两用两栖动物，其药用历史悠久，早在明代李时珍《本草纲目》中便有记载。已有研究表明，东北林蛙皮分泌物由多种组分组成，其皮肤分泌物抗菌肽粗提物具有广谱的抗菌活性。根据相关资料记载，一只东北林蛙个体可以同时在表皮分泌多达12种成熟抗菌肽。已经证实的，林蛙皮抗菌肽具有广谱的抗菌作用，已经在饲料、化妆品、卫生用品中广泛应用。
如中国专利CN113713081A公开一种林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用，涉及抗幽门螺旋杆菌药物领域，所述抗幽门螺旋杆菌药物的剂型为口腔喷剂，包括林蛙抗菌肽浓缩液17～23wt％，金银花提取液1.0～1.8wt％，五味子提取液1.0～1.8wt％，罗汉果提取液1.0～1.8wt％，三氯蔗糖0.001～0.007wt％，蜂蜜3～5wt％，茶多酚0.08～0.12wt％，西瓜霜0.5～1.1wt％，山梨糖醇12.6～14.6wt％，卡松0.1～0.3wt％，薄荷0.01～0.1wt％，余量为纯化水。该发明对幽门螺旋杆菌的杀菌率达到92.29％以上，提高了杀菌效果和口感效果，对口腔内幽门螺旋杆菌有较强的杀灭和抑制作用。另外，中国专利CN112704072 A林蛙抗菌肽在制备抗新型冠状病毒SARS-CoV-2药物中的应用，涉及抗新型冠状病毒SARS-CoV-2药物领域。通过试验验证了林蛙抗菌肽具有抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的作用，为预防和防治新型冠状病毒SARS-CoV-2提供了新的途径，扩展了抗新型冠状病毒SARS-CoV-2药物的范围，提高了抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的效果，为全球的公共卫生安全事业提供了有利支撑。
因此，林蛙抗菌肽的研究具有重要的意义。然而现有技术中对于林蛙抗菌肽在外用防护产品中的研究还存在较大的不足，药效及与其它成分的协同性有待进一步提高等等。本发明旨在提供一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护产品及在抗病毒药物中的应用，该林蛙抗菌肽制剂各成分间具有较好的协同性，能起到较好的抗病毒的作用，尤其是在预防甲流、乙流等病毒方面，具有及其显著的效果；同时兼具较好的杀菌效果，是一种应用前景较为广泛的外用防护产品，还可用于抗流感病毒药物中。
发明内容
为克服以上技术问题，本发明提供了一种林蛙抗菌肽制剂，本发明的制剂具有较好的协同作用，在消杀甲流、乙流等病毒方面，具有显著的效果，同时兼具较好的杀菌作用，具有良好的应用前景。
为实现以上目的，本发明提供的技术方案如下：
一种林蛙抗菌肽制剂，包括以下原料：林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷。
优选地，按照重量百分数计，所述林蛙抗菌肽制剂，包括以下原料：林蛙抗菌肽浓缩液15-25wt％、板蓝根提取物1-5wt％、鱼腥草提取物1-5wt％、木犀草素0.5-1.5wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.1-0.5wt％。
优选地，按照重量百分数计，所述林蛙抗菌肽制剂，包括以下原料：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、板蓝根提取物2.3wt％、鱼腥草提取物3.2wt％、木犀草素1.15wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.35wt％。
优选地，所述林蛙抗菌肽制剂中，还包括如下原料：蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜(中药名)、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠、纯化水。
优选地，按照重量百分数计，所述林蛙抗菌肽制剂，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液15-25wt％、板蓝根提取物1-5wt％、鱼腥草提取物1-5wt％、木犀草素0.5-1.5wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.1-0.5wt％、蜂蜜3-5wt％、DL-苹果酸1-5wt％、西瓜霜0.5-1.1wt％、山梨糖醇10-15wt％、月桂酰肌氨酸钠0.5-1％，其余为纯化水。
优选地，按照重量百分数计，所述林蛙抗菌肽制剂，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液15-20wt％、板蓝根提取物1-3.5wt％、鱼腥草提取物1-3.5wt％、木犀草素1.0-1.5wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.1-0.35wt％、蜂蜜3-4wt％、DL-苹果酸1-3wt％、西瓜霜0.5-0.8wt％、山梨糖醇10-12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.5-0.75％，其余为纯化水。
优选地，按照重量百分数计，所述林蛙抗菌肽制剂，包括以下原料：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、板蓝根提取物2.3wt％、鱼腥草提取物3.2wt％、木犀草素1.15wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.35wt％、蜂蜜4wt％、DL-苹果酸3wt％、西瓜霜0.8wt％、山梨糖醇12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.75％，其余为纯化水。
本发明中所述林蛙抗菌肽浓缩液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取林蛙干体为原料；
(2)加醋酸水溶液及木瓜蛋白酶对林蛙干体溶胀、酶解，灭酶，制得粗提物；
(3)将粗提物，进行超声提取，过滤，得提取液；
(4)取提取液，离心，弃去沉淀，收集上清液；
(5)将上清液加热，降温后过滤，浓缩，得抗菌肽浓缩液。
本发明中所述林蛙抗菌肽浓缩液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取林蛙干体为原料；
(2)加10-20倍于林蛙干体的4-8wt％醋酸水溶液及1-5wt％的木瓜蛋白酶于10-30℃下溶胀、酶解0.5-1.5小时，灭酶，制得粗提物；
(3)将粗提物，在功率为100-250W，频率为20-60kHz超声波发生器内进行超声提取10-40分钟，过滤，得提取液；
(4)取提取液，在300-1000prm条件下离心10-20min，弃去沉淀，收集上清液；
(5)将上清液在40-60℃温度下加热5-15min，然后降至5-10℃过滤后，再将滤液浓缩至比重为1.1-1.2，得抗菌肽浓缩液。
本发明中所述林蛙抗菌肽的浓缩液还可以按照公开号为CN103073628A的中国专利记载的方法制备后再浓缩至比重为1.1-1.2后获得，该制备方法本领域技术人员均可根据以上专利记载的内容获得，此处不再赘述。
本发明还提供一种所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：
取林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
本发明还提供所述林蛙抗菌肽制剂在制备在外用防护产品中的应用。
本发明还提供所述林蛙抗菌肽制剂在制备在抗流感病毒药物中的应用。
优选地，所述外用防护产品选自皮肤外用药剂；优选为消毒剂、防护剂、清洗剂、洗涤剂、护肤品、个人护理用品、洗衣液。
优选地，所述消毒剂选自医用消毒剂、环境消毒剂、食品消毒剂、消毒湿巾、消毒棉棒或消毒纱布。
优选地，所述洗涤剂选自医疗洗涤剂、防止家具或其他固体表面病毒吸附的洗涤剂或工业洗涤剂。
优选地，所述外用防护产品的剂型为溶液剂、乳剂、霜剂、膏剂、凝胶剂或喷雾剂。
与现有技术比，本发明的技术优势在于：
(1)本发明提供一种林蛙抗菌肽制剂，含有林蛙抗菌肽和板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷等活性成分，具有较好的抗病毒的作用，能够用于消杀病毒，尤其是预防H1N1型流感病毒、H3N2型流感病毒引起的流行性感冒，具有见效快、副作用及伤害性小等优势；同时具有较好的杀菌效果，可以广泛用于抗流感病毒的皮肤外用药剂、防护剂、清洗剂、洗涤剂、个人护理/护肤用品、喷雾等，可用于衣物洗涤、医疗用品洗涤、防止家具或固体表面病毒吸附及工业洗涤等。
(2)本发明中含有的林蛙抗菌肽和板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷等活性成分具有较好的协同增效作用，可用于制备抗流感病毒的药物，相较于传统抗病毒药物或单纯林蛙抗菌肽等，其药效显著性增高，适用于推广应用。
(3)本发明提供的一种林蛙抗菌肽制剂可以作为口腔喷剂使用，是一种性能优良的外用防护产品，可直接使用或进一步制成其它制剂，还可以进一步制备成抗流感病毒的药物，副作用小，具有良好的应用前景。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明进行说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得，且均为标准品或分析纯。
本发明实施例或对比例中所用的板蓝根提取物的制备方法如下：取板蓝根药材，加10倍量水超声提取两次，第一次1小时，第二次1小时，过滤后合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.10(60℃)，即得。
本发明实施例或对比例中所用的鱼腥草提取物的制备方法如下：取鱼腥草药材，加10倍量水超声提取两次，第一次1小时，第二次1小时，过滤后合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.10(60℃)，即得。
本发明对比例中所用的金银花提取物的制备方法如下：取金银花药材，加10倍量水超声提取两次，第一次1小时，第二次1小时，过滤后合并提取液，提取液浓缩至相对密度1.10(60℃)，即得。
香叶木素-7-O-葡萄糖苷CAS号:20126-59-4；木犀草素CAS号:491-70-3；芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷CAS号:578-74-5。
林蛙抗菌肽浓缩液制备例1
本发明中所述林蛙抗菌肽浓缩液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取林蛙干体为原料；
(2)以林蛙干体计，加10倍的8wt％醋酸水溶液，5wt％的木瓜蛋白酶(活性2000u/mg)于10℃下溶胀、酶解1.5小时，灭酶，制得粗提物；
(3)将粗提物，在功率为100W，频率为20kHz超声波发生器内进行超声提取40分钟，过滤，得提取液；
(4)取提取液，在300prm条件下离心20min，弃去沉淀，收集上清液；
(5)将上清液在40℃温度下加热15min，然后降至5-10℃过滤后，再将滤液浓缩至比重为1.1-1.2，得林蛙抗菌肽浓缩液。
林蛙抗菌肽浓缩液制备例2
本发明中所述林蛙抗菌肽浓缩液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取林蛙干体为原料；
(2)以林蛙干体计，加20倍的4wt％醋酸水溶液，1wt％的木瓜蛋白酶(活性2000u/mg)于30℃下溶胀、酶解0.5小时，灭酶，制得粗提物；
(3)将粗提物，在功率为250W，频率为60kHz超声波发生器内进行超声提取10分钟，过滤，得提取液；
(4)取提取液，在1000prm条件下离心10min，弃去沉淀，收集上清液；
(5)将上清液在60℃温度下加热5min，然后降至5-10℃过滤后，再将滤液浓缩至比重为1.1-1.2，得林蛙抗菌肽浓缩液。
实施例1
一种林蛙抗菌肽制剂，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液15wt％、板蓝根提取物5wt％、鱼腥草提取物5wt％、木犀草素1.5wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.5wt％、蜂蜜5wt％、DL-苹果酸5wt％、西瓜霜0.5wt％、山梨糖醇10wt％、月桂酰肌氨酸钠0.5％，其余为纯化水。
所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：取制备例1所得林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
实施例2
按照重量百分数计，所述林蛙抗菌肽制剂，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液25wt％、板蓝根提取物1wt％、鱼腥草提取物1wt％、木犀草素0.5wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.1wt％、蜂蜜3wt％、DL-苹果酸1wt％、西瓜霜1.1wt％、山梨糖醇15wt％、月桂酰肌氨酸钠1％，其余为纯化水。
所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：取制备例1所得林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
实施例3
一种林蛙抗菌肽制剂，按照重量百分数计，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、板蓝根提取物2.3wt％、鱼腥草提取物3.2wt％、木犀草素1.15wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.35wt％、蜂蜜4wt％、DL-苹果酸3wt％、西瓜霜0.8wt％、山梨糖醇12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.75％，其余为纯化水。
所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：取制备例2所得林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
对比例1
与实施例3不同仅在于将木犀草素替换为等量的香叶木素-7-O-葡萄糖苷。
一种林蛙抗菌肽制剂，按照重量百分数计，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、板蓝根提取物2.3wt％、鱼腥草提取物3.2wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷1.5wt％、蜂蜜4wt％、DL-苹果酸3wt％、西瓜霜0.8wt％、山梨糖醇12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.75％，其余为纯化水。
所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：取制备例2所得林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、香叶木素-7-O-葡萄糖苷、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
对比例2
与实施例3不同仅在于将香叶木素-7-O-葡萄糖苷替换为等量的木犀草素。
一种林蛙抗菌肽制剂，按照重量百分数计，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、板蓝根提取物2.3wt％、鱼腥草提取物3.2wt％、木犀草素1.5wt％、蜂蜜4wt％、DL-苹果酸3wt％、西瓜霜0.8wt％、山梨糖醇12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.75％，其余为纯化水。
所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：取制备例2所得林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
对比例3
与实施例3的不同在于将木犀草素和香叶木素-7-O-葡萄糖苷替换为等量的芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷。
一种林蛙抗菌肽制剂，按照重量百分数计，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、板蓝根提取物2.3wt％、鱼腥草提取物3.2wt％、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷1.5wt％、蜂蜜4wt％、DL-苹果酸3wt％、西瓜霜0.8wt％、山梨糖醇12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.75％，其余为纯化水。
所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：取制备例2所得林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
对比例4
与实施例3的区别仅在于将板蓝根提取物替换为等量的金银花提取物。
一种林蛙抗菌肽制剂，按照重量百分数计，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、金银花提取物2.3wt％、鱼腥草提取物3.2wt％、木犀草素1.15wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.35wt％、蜂蜜4wt％、DL-苹果酸3wt％、西瓜霜0.8wt％、山梨糖醇12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.75％，其余为纯化水。
所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：取制备例2所得林蛙抗菌肽浓缩液、金银花提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
对比例5
与实施例3的区别仅在于将鱼腥草提取物替换为等量的板蓝根提取物。
一种林蛙抗菌肽制剂，按照重量百分数计，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、板蓝根提取物5.5wt％、木犀草素1.15wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.35wt％、蜂蜜4wt％、DL-苹果酸3wt％、西瓜霜0.8wt％、山梨糖醇12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.75％，其余为纯化水。
所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：取制备例2所得林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
对比例6
与实施例3的区别仅在于使用等量的林蛙抗菌肽浓缩液替换板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷。
一种林蛙抗菌肽制剂，按照重量百分数计，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液27wt％、蜂蜜4wt％、DL-苹果酸3wt％、西瓜霜0.8wt％、山梨糖醇12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.75％，其余为纯化水。
所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：取实施例2制备所得林蛙抗菌肽浓缩液、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
效果试验例
1、抗病毒试验
1.1试验试剂
试验样品：实施例1-3及对比例1-6所得制剂。
试验病毒：甲型流感病毒H3N2 ATCC 1679；宿主名称：MDCK细胞；细胞培养基：DMEM培养基。
1.2实验方法
1.2.1细胞毒性分析
取制备例1-2、实施例1-3及对比例1-6中所得产物原液各100μl，加入到900μl 2％DMEM中，得到10-1稀释度的溶液，重复上述操作多次，分别获得10-2，10-3，10-4，10-5各稀释度的林蛙抗菌肽浓缩液或制剂，取原液及各稀释度的林蛙抗菌肽制剂各100μl加入提前一天铺好MDCK细胞的24孔板中，37℃孵育一小时后，弃掉林蛙抗菌肽浓缩液或制剂，用PBS洗两次后，换成2％DMEM的培养基，置于37℃培养24h后观察细胞存活情况，结果如下。
表1样品细胞毒性分析
以上试验可知，林蛙抗菌肽浓缩液具有一定的毒性，稀释后或制成本发明的制剂后降低了林蛙抗菌肽浓缩液的毒性；可以保证细胞存活。
1.2.2抗病毒效果实验
(1)样品准备：取实施例1-3及对比例1-6所得制剂，加纯水稀释20倍后，制得各组的待测样品溶液，每组溶液各自取50μl，分别加入1.5ml EP管中；
(2)病毒暴露：取50μl H3N2病毒液(105pfu/ml)加入各待测样品溶液中，吹打待液体完全混匀；室温下分别静置2min；
(3)经上述处理后，取900μl、2％DMEM培养基加入各组实验组待测样品中，使得样品溶液的稀释比为1:10；
(4)取100μl上述(3)处理好的稀释样品记为10-1，加入900μl、2％DMEM培养基中，即为10-2稀释组，进一步的重复操作，得到10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，10-8稀释度；
(5)将上述的各组稀释溶液100μl加入96孔板(每组稀释度8个样品孔)中，使用2％DMEM培养基稀释MDCK细胞，得到细胞量2～3×105个/ml的细胞悬液，在上述每孔加入MDCK细胞悬液100μl；设置正常细胞对照组(100μl MDCK细胞悬液+100μl 2％DMEM培养基)，对照作两纵排；
(6)置于37℃培养4d即可观察细胞病变形成，并记录相应稀释度的细胞病变孔数(70％以上的细胞出现CPE判为感染)；对照组无任何CPE且细胞生长良好；使用Reed-Muench法计算lgTCID50(该方法是本领域常用病毒检测方法)。
(7)另取实施例1-3及对比例1-6所得制剂，纯水稀释30倍后，加入等体积的H3N2病毒液(105pfu/ml)作用两分钟后，计算病毒灭活率。
以上试验结果如下表2：
表2样品抗病毒效果
以上试验可知，本发明提供的林蛙抗菌肽制剂与病毒作用两分钟后的病毒灭活率可达99％以上，具有显著的抗病毒作用。同时根据其TCID50实验和灭活试验的数据结果可知，且其各组分间具有较好的协同增效作用。
2、杀菌试验
试验样品：本发明实施例1-3及对比例1-6所制备的林蛙抗菌肽制剂。
试验菌株：大肠杆菌(8099)，取其第5代和第6代新鲜斜面培养物进行试验；金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)，取其第6代新鲜斜面培养物进行试验。以上菌种均由广东省食品微生物安全工程技术研究开发中心提供。
主要仪器与试剂：生物安全柜(HR50-ⅡA2)、KC-SP-YQ-179电热恒温培养箱(DHP-9272)，依据GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》进行试验，试验过程中的中和剂为D/E中和肉汤，已验证中和剂适用于以上菌种的杀菌性能试验。
杀菌试验：将新鲜培养的菌株用PBS稀释，制成1×105cfu/mL～9.0×105cfu/mL的菌悬液。吸取菌悬液加入到试验样品中进行测试(试验样品原液，作用2min)。阳性对照组用PBS代替试验样品，吸取菌悬液加入到PBS中进行平行试验。其中PBS、试验样品原液均检测无菌，试验过程均无菌生长。各组试验重复3次，取平均值；试验温度：20℃，湿度48％；计算抑菌率。抑菌率＝(对照组菌落数-试验组菌落数)/对照组菌落数×100％。
表3杀菌效果
以上试验数据可知，本发明提供的林蛙抗菌肽制剂具有较好的杀菌效果，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的杀菌率可达99％以上，同时其各组分间具有较好的协同增效作用。
综上所述，本发明提供的林蛙抗菌肽制剂不仅具有较好的消毒效果，同时还具有显著的杀菌效果；在外用防护产品或抗病毒药物领域具有优良的应用前景。
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种林蛙抗菌肽制剂，其特征在于，包括以下原料：林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷。
2.如权利要求1所述的林蛙抗菌肽制剂，其特征在于，按照重量百分数计，包括以下原料：林蛙抗菌肽浓缩液15-25wt％、板蓝根提取物1-5wt％、鱼腥草提取物1-5wt％、木犀草素0.5-1.5wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.1-0.5wt％。
3.如权利要求1所述的林蛙抗菌肽制剂，其特征在于，按照重量百分数计，所述林蛙抗菌肽制剂，包括以下原料：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、板蓝根提取物2.3wt％、鱼腥草提取物3.2wt％、木犀草素1.15wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.35wt％。
4.如权利要求1所述的林蛙抗菌肽制剂，其特征在于，所述林蛙抗菌肽制剂中，还包括如下原料：蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠、纯化水。
5.如权利要求4所述的林蛙抗菌肽制剂，其特征在于，按照重量百分数计，所述林蛙抗菌肽制剂，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液15-25wt％、板蓝根提取物1-5wt％、鱼腥草提取物1-5wt％、木犀草素0.5-1.5wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.1-0.5wt％、蜂蜜3-5wt％、DL-苹果酸1-5wt％、西瓜霜0.5-1.1wt％、山梨糖醇10-15wt％、月桂酰肌氨酸钠0.5-1％，其余为纯化水；
优选地，按照重量百分数计，所述林蛙抗菌肽制剂，包括如下原料：林蛙抗菌肽浓缩液15-20wt％、板蓝根提取物1-3.5wt％、鱼腥草提取物1-3.5wt％、木犀草素1.0-1.5wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.1-0.35wt％、蜂蜜3-4wt％、DL-苹果酸1-3wt％、西瓜霜0.5-0.8wt％、山梨糖醇10-12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.5-0.75％，其余为纯化水；
优选地，按照重量百分数计，所述林蛙抗菌肽制剂，包括以下原料：林蛙抗菌肽浓缩液20wt％、板蓝根提取物2.3wt％、鱼腥草提取物3.2wt％、木犀草素1.15wt％、香叶木素-7-O-葡萄糖苷0.35wt％、蜂蜜4wt％、DL-苹果酸3wt％、西瓜霜0.8wt％、山梨糖醇12wt％、月桂酰肌氨酸钠0.75％，其余为纯化水。
6.如权利要求1-5任一所述林蛙抗菌肽制剂，其特征在于，所述林蛙抗菌肽浓缩液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取林蛙干体为原料；
(2)加醋酸水溶液及木瓜蛋白酶对林蛙干体溶胀、酶解，灭酶，制得粗提物；
(3)将粗提物，进行超声提取，过滤，得提取液；
(4)取提取液，离心，弃去沉淀，收集上清液；
(5)将上清液加热，降温后过滤，浓缩，得抗菌肽浓缩液。
7.如权利要求1-6任一所述林蛙抗菌肽制剂的制备方法，包括如下步骤：取林蛙抗菌肽浓缩液、板蓝根提取物、鱼腥草提取物、木犀草素、香叶木素-7-O-葡萄糖苷、蜂蜜、DL-苹果酸、西瓜霜、山梨糖醇、月桂酰肌氨酸钠分散于纯化中，搅拌，即得。
8.如权利要求1-6任一所述林蛙抗菌肽制剂在制备外用防护品中的应用。
9.如权利要求1-6任一所述林蛙抗菌肽制剂在制备在抗流感病毒药物中的应用。
10.如权利要求8所述林蛙抗菌肽制剂在制备外用防护产品中的应用，所述外用防护产品选自消毒剂、防护剂、清洗剂、洗涤剂、护肤品、个人护理用品、洗衣液；
优选地，所述消毒剂选自医用消毒剂、环境消毒剂、食品消毒剂、消毒湿巾、消毒棉棒或消毒纱布；
优选地，所述洗涤剂选自医疗洗涤剂、防止家具或其他固体表面病毒吸附的洗涤剂或工业洗涤剂；
优选地，所述外用防护产品的剂型为溶液剂、乳剂、霜剂、膏剂、凝胶剂或喷雾剂。
CN202311135912.5A 2023-09-05 2023-09-05 一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护品及抗流感病毒药物中的应用 Active CN117158444B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311135912.5A CN117158444B (zh) 2023-09-05 2023-09-05 一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护品及抗流感病毒药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311135912.5A CN117158444B (zh) 2023-09-05 2023-09-05 一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护品及抗流感病毒药物中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN117158444A true CN117158444A (zh) 2023-12-05
CN117158444B CN117158444B (zh) 2024-02-27

Family

ID=88933128

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311135912.5A Active CN117158444B (zh) 2023-09-05 2023-09-05 一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护品及抗流感病毒药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117158444B (zh)

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2004201961A1 (en) * 2003-12-30 2005-07-14 National Defense Medical Center Pharmaceutical composition and medicine for external use containing antiviral component from houttuynia cordata
CN101491245A (zh) * 2009-02-25 2009-07-29 吉林大学 一种含林蛙抗菌肽的消毒制剂及其制备方法和应用
WO2012045198A1 (zh) * 2010-10-09 2012-04-12 广州白云山和记黄埔中药有限公司 板蓝根多糖在制备抗流感病毒的药物中的用途
CN103073628A (zh) * 2013-02-01 2013-05-01 通化康元生物科技有限公司 一种利用超声波从林蛙体中提取抗菌肽的生产制备方法
US20140234488A1 (en) * 2013-02-15 2014-08-21 Alice Chang Beverage system, including bubble beverage, instant beverage, beverage with dissolved gas, and beverage with ingredient
CN107029210A (zh) * 2017-04-22 2017-08-11 通化康元生物科技有限公司 雪蛤抗菌肽口腔喷雾剂
CN111249404A (zh) * 2020-03-30 2020-06-09 李群营 一种散剂及其制备方法
CN112704072A (zh) * 2020-12-26 2021-04-27 通化康元生物科技有限公司 林蛙抗菌肽在制备抗新型冠状病毒SARS-CoV-2药物中的应用
CN113713081A (zh) * 2021-10-11 2021-11-30 通化康元生物科技有限公司 林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用
WO2022029577A1 (en) * 2020-08-03 2022-02-10 Bict S.R.L. Composition for use in the treatment of viral infections

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2004201961A1 (en) * 2003-12-30 2005-07-14 National Defense Medical Center Pharmaceutical composition and medicine for external use containing antiviral component from houttuynia cordata
CN101491245A (zh) * 2009-02-25 2009-07-29 吉林大学 一种含林蛙抗菌肽的消毒制剂及其制备方法和应用
WO2012045198A1 (zh) * 2010-10-09 2012-04-12 广州白云山和记黄埔中药有限公司 板蓝根多糖在制备抗流感病毒的药物中的用途
CN103073628A (zh) * 2013-02-01 2013-05-01 通化康元生物科技有限公司 一种利用超声波从林蛙体中提取抗菌肽的生产制备方法
US20140234488A1 (en) * 2013-02-15 2014-08-21 Alice Chang Beverage system, including bubble beverage, instant beverage, beverage with dissolved gas, and beverage with ingredient
CN107029210A (zh) * 2017-04-22 2017-08-11 通化康元生物科技有限公司 雪蛤抗菌肽口腔喷雾剂
CN111249404A (zh) * 2020-03-30 2020-06-09 李群营 一种散剂及其制备方法
WO2022029577A1 (en) * 2020-08-03 2022-02-10 Bict S.R.L. Composition for use in the treatment of viral infections
CN112704072A (zh) * 2020-12-26 2021-04-27 通化康元生物科技有限公司 林蛙抗菌肽在制备抗新型冠状病毒SARS-CoV-2药物中的应用
CN113713081A (zh) * 2021-10-11 2021-11-30 通化康元生物科技有限公司 林蛙抗菌肽在制备抗幽门螺旋杆菌药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN117158444B (zh) 2024-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2153838B1 (en) Anti-norovirus agent, and composition comprising the same
CN105087732B (zh) 一种天麻多肽及制备方法和在抗菌抗病毒中的医用用途
CN103356738B (zh) 一种皮肤消毒凝胶及其应用
NO331654B1 (no) Xylitolblandinger, farmasoytisk preparat, nesespray og medisinert vattpinne.
CN111135160B (zh) 一种泡沫私护免洗抗菌液及其制备方法
CN106668832B (zh) 一种多肽在制备治疗肠道病毒感染药物的应用
CN103356999B (zh) 新型海洋生物免洗消毒液及其应用
CN104688648A (zh) 一种口腔用组合物及其制备方法
CN1173820A (zh) 治疗疱疹的药物组合物
CN103451032A (zh) 安全环保茶籽洗洁粉及其制备方法
WO2014019485A1 (zh) 广藿香酮的新用途
CN111493097A (zh) 一种抑制病毒和致病菌的集合型消毒剂及其制备方法
CN113995744A (zh) 一种组合物及其抗菌应用
CN117158444B (zh) 一种林蛙抗菌肽制剂及其制备方法和在外用防护品及抗流感病毒药物中的应用
CN116440057B (zh) 基于复合植物发酵浓缩液的活性组合物及其制备方法
RU2499600C1 (ru) Состав со стабилизированным окислительно-восстановительным потенциалом
KR20160079459A (ko) 녹차 추출물을 유효성분으로 포함하여 항바이러스 활성을 가지는 세정 또는 소독용 조성물
CN111905058A (zh) 一种用于皮肤黏膜护理和伤口修复的药物组合物及其制备方法
CN107714649B (zh) 一种抑制口腔致病菌的口腔喷雾剂及其应用
JP4185996B2 (ja) 抗インフルエンザウイルス剤
KR101928211B1 (ko) 수족구 원인균 엔테로바이러스 71을 포함한 바이러스 및 균에 대해 저해 효과를 갖는 조성물
CN104000767B (zh) 一种女性护理液及其制备方法
CN113444696A (zh) 一种嗜水气单胞菌噬菌体及其应用
CN111467288A (zh) 一种免洗手消毒液及其制备方法
WO2020026945A1 (ja) 殺ウイルス剤

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right
PE01 Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right

Denomination of invention: A forest frog antimicrobial peptide preparation and its preparation method, as well as its application in topical protective products and anti influenza virus drugs

Granted publication date: 20240227

Pledgee: Tonghua Branch of China Everbright Bank Co.,Ltd.

Pledgor: TONGHUA KANG YUAN BIOLOGICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.

Registration number: Y2024220000023