CN117100739B - 负调节Nrf2信号通路的小分子组合物及其应用 - Google Patents
负调节Nrf2信号通路的小分子组合物及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117100739B CN117100739B CN202210532017.6A CN202210532017A CN117100739B CN 117100739 B CN117100739 B CN 117100739B CN 202210532017 A CN202210532017 A CN 202210532017A CN 117100739 B CN117100739 B CN 117100739B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- licochalcone
- liver
- rats
- group
- nrf2
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 101000588302 Homo sapiens Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 Proteins 0.000 title claims abstract description 37
- 102100031701 Nuclear factor erythroid 2-related factor 2 Human genes 0.000 title claims abstract description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 32
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 title claims abstract description 8
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 title claims description 4
- 208000008338 non-alcoholic fatty liver disease Diseases 0.000 claims abstract description 61
- MEHHCBRCXIDGKZ-UHFFFAOYSA-N 5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-8-(3-methylbut-2-enyl)chromen-4-one Chemical compound CC(C)=CCC1=C(O)C=C(O)C(C(C=2)=O)=C1OC=2C1=CC=C(O)C=C1 MEHHCBRCXIDGKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- HKQYGTCOTHHOMP-UHFFFAOYSA-N formononetin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC=C2C1=O HKQYGTCOTHHOMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- KAZSKMJFUPEHHW-UHFFFAOYSA-N (2E)-3-[5-(1,1-dimethyl-2-propenyl)-4-hydroxy-2-methoxyphenyl]-1-(4-hdyroxyphenyl)-2-propen-1-one Natural products COC1=CC(O)=C(C(C)(C)C=C)C=C1C=CC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 KAZSKMJFUPEHHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- IUCVKTHEUWACFB-UHFFFAOYSA-N Licochalcone A Natural products COC1=CC=C(C(C)(C)C=C)C=C1C=CC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 IUCVKTHEUWACFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- KAZSKMJFUPEHHW-DHZHZOJOSA-N Licochalcone A Chemical compound COC1=CC(O)=C(C(C)(C)C=C)C=C1\C=C\C(=O)C1=CC=C(O)C=C1 KAZSKMJFUPEHHW-DHZHZOJOSA-N 0.000 claims abstract description 14
- WBDNTJSRHDSPSR-UHFFFAOYSA-N Licochalcone C Natural products C1=CC(O)=C(CC=C(C)C)C(OC)=C1C=CC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 WBDNTJSRHDSPSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- RETRVWFVEFCGOK-RMKNXTFCSA-N (e)-3-(3,4-dihydroxy-2-methoxyphenyl)-1-[4-hydroxy-3-(3-methylbut-2-enyl)phenyl]prop-2-en-1-one Chemical compound COC1=C(O)C(O)=CC=C1\C=C\C(=O)C1=CC=C(O)C(CC=C(C)C)=C1 RETRVWFVEFCGOK-RMKNXTFCSA-N 0.000 claims abstract description 11
- WBDNTJSRHDSPSR-KPKJPENVSA-N (e)-3-[4-hydroxy-2-methoxy-3-(3-methylbut-2-enyl)phenyl]-1-(4-hydroxyphenyl)prop-2-en-1-one Chemical compound C1=CC(O)=C(CC=C(C)C)C(OC)=C1\C=C\C(=O)C1=CC=C(O)C=C1 WBDNTJSRHDSPSR-KPKJPENVSA-N 0.000 claims abstract description 11
- SWPKMTGYQGHLJS-RNVIBTMRSA-N (e)-3-[4-hydroxy-2-methoxy-5-[(2s)-3-methylbut-3-en-2-yl]phenyl]-1-(4-hydroxyphenyl)prop-2-en-1-one Chemical compound COC1=CC(O)=C([C@@H](C)C(C)=C)C=C1\C=C\C(=O)C1=CC=C(O)C=C1 SWPKMTGYQGHLJS-RNVIBTMRSA-N 0.000 claims abstract description 11
- RETRVWFVEFCGOK-UHFFFAOYSA-N Licochalcone D Natural products COC1=C(O)C(O)=CC=C1C=CC(=O)C1=CC=C(O)C(CC=C(C)C)=C1 RETRVWFVEFCGOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- SWPKMTGYQGHLJS-AWEZNQCLSA-N Licochalcone E Natural products COc1cc(O)c(cc1C=CC(=O)c2ccc(O)cc2)[C@@H](C)C(=C)C SWPKMTGYQGHLJS-AWEZNQCLSA-N 0.000 claims abstract description 11
- RIKPNWPEMPODJD-UHFFFAOYSA-N formononetin Natural products C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC=CC=C2C1=O RIKPNWPEMPODJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 206010053219 non-alcoholic steatohepatitis Diseases 0.000 claims description 44
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 33
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 7
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 claims description 7
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 claims description 4
- -1 glabronol Chemical compound 0.000 claims description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 12
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 97
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 43
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 31
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 24
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 102100036009 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Human genes 0.000 description 21
- 101000783681 Homo sapiens 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Proteins 0.000 description 21
- 102100031455 NAD-dependent protein deacetylase sirtuin-1 Human genes 0.000 description 21
- 108010041191 Sirtuin 1 Proteins 0.000 description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 16
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 16
- PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N Monacolin X Natural products C12C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C2C=CC(C)C1CCC1CC(O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N lovastatin Chemical compound C([C@H]1[C@@H](C)C=CC2=C[C@H](C)C[C@@H]([C@H]12)OC(=O)[C@@H](C)CC)C[C@@H]1C[C@@H](O)CC(=O)O1 PCZOHLXUXFIOCF-BXMDZJJMSA-N 0.000 description 15
- 229960004844 lovastatin Drugs 0.000 description 15
- QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N lovastatin hydroxy acid Natural products C1=CC(C)C(CCC(O)CC(O)CC(O)=O)C2C(OC(=O)C(C)CC)CC(C)C=C21 QLJODMDSTUBWDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- ZXERDUOLZKYMJM-ZWECCWDJSA-N obeticholic acid Chemical compound C([C@@]12C)C[C@@H](O)C[C@H]1[C@@H](CC)[C@@H](O)[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@H]([C@H](C)CCC(O)=O)CC[C@H]21 ZXERDUOLZKYMJM-ZWECCWDJSA-N 0.000 description 15
- 229960001601 obeticholic acid Drugs 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 108010023302 HDL Cholesterol Proteins 0.000 description 12
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 12
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 12
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 10
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 10
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 7
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 7
- KXMTXZACPVCDMH-UHFFFAOYSA-N methyl 4-[5-(hydroxymethyl)-7-methoxy-1,3-benzodioxol-4-yl]-7-methoxy-1,3-benzodioxole-5-carboxylate Chemical compound COC(=O)C1=CC(OC)=C2OCOC2=C1C1=C2OCOC2=C(OC)C=C1CO KXMTXZACPVCDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 6
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 6
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 6
- 206010022489 Insulin Resistance Diseases 0.000 description 6
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 6
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 6
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 6
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 6
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 210000000702 aorta abdominal Anatomy 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 5
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 5
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 5
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 description 4
- 101000585555 Homo sapiens PCNA-associated factor Proteins 0.000 description 4
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 4
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 4
- 102100029879 PCNA-associated factor Human genes 0.000 description 4
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 4
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000202807 Glycyrrhiza Species 0.000 description 3
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 3
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 3
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 3
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 3
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 230000007863 steatosis Effects 0.000 description 3
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 3-[3-[3,5-dihydroxy-6-methyl-4-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]oxydecanoyloxy]decanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC1C(OC(CC(=O)OC(CCCCCCC)CC(O)=O)CCCCCCC)OC(C)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(C)O1 HVCOBJNICQPDBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 2
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 2
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 2
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 2
- DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N Chalcone Natural products C=1C=CC=CC=1C(=O)C=CC1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 2
- 235000001453 Glycyrrhiza echinata Nutrition 0.000 description 2
- 244000303040 Glycyrrhiza glabra Species 0.000 description 2
- 235000017382 Glycyrrhiza lepidota Nutrition 0.000 description 2
- 240000008917 Glycyrrhiza uralensis Species 0.000 description 2
- 235000000554 Glycyrrhiza uralensis Nutrition 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- DAYLJWODMCOQEW-TURQNECASA-O NMN(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O2)O)=C1 DAYLJWODMCOQEW-TURQNECASA-O 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000005747 Transcription Factor RelA Human genes 0.000 description 2
- 108010031154 Transcription Factor RelA Proteins 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 235000005513 chalcones Nutrition 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 2
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 2
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 2
- 238000000556 factor analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 2
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 2
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000008798 inflammatory stress Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 229940010454 licorice Drugs 0.000 description 2
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 2
- 235000011477 liquorice Nutrition 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 2
- 229930189775 mogroside Natural products 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 2
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- DQFBYFPFKXHELB-VAWYXSNFSA-N trans-chalcone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 DQFBYFPFKXHELB-VAWYXSNFSA-N 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 description 1
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 1
- CUFAXDWQDQQKFF-DEOSSOPVSA-N Glabrol Chemical compound C1=C(O)C(CC=C(C)C)=CC([C@H]2OC3=C(CC=C(C)C)C(O)=CC=C3C(=O)C2)=C1 CUFAXDWQDQQKFF-DEOSSOPVSA-N 0.000 description 1
- CUFAXDWQDQQKFF-XMMPIXPASA-N Glabrol Natural products O=C1c2c(c(C/C=C(\C)/C)c(O)cc2)O[C@@H](c2cc(C/C=C(\C)/C)c(O)cc2)C1 CUFAXDWQDQQKFF-XMMPIXPASA-N 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- DRDRYGIIYOPBBZ-XBXARRHUSA-N Licochalcone B Natural products COC1=C(O)C(O)=CC=C1\C=C\C(=O)C1=CC=C(O)C=C1 DRDRYGIIYOPBBZ-XBXARRHUSA-N 0.000 description 1
- 102000006833 Multifunctional Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010047290 Multifunctional Enzymes Proteins 0.000 description 1
- SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N Nitroglycerin Chemical compound [O-][N+](=O)OCC(O[N+]([O-])=O)CO[N+]([O-])=O SNIOPGDIGTZGOP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N Oil red O Chemical compound Cc1ccc(C)c(c1)N=Nc1cc(C)c(cc1C)N=Nc1c(O)ccc2ccccc12 NPGIHFRTRXVWOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000008484 agonism Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 235000014590 basal diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007321 biological mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- LTINPJMVDKPJJI-UHFFFAOYSA-N iodinated glycerol Chemical compound CC(I)C1OCC(CO)O1 LTINPJMVDKPJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000009731 jinlong Substances 0.000 description 1
- 238000010150 least significant difference test Methods 0.000 description 1
- 229930187586 licochalcone Natural products 0.000 description 1
- 229940069445 licorice extract Drugs 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 231100000832 liver cell necrosis Toxicity 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000000643 oven drying Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920006122 polyamide resin Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
- A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属于医药技术和保健食品领域，具体而言，本发明提供了负调节Nrf2信号通路的小分子组合物，其包含甘草查耳酮A、甘草查耳酮C、甘草查耳酮D、甘草查耳酮E、芒柄花素、光甘草酚和甘草黄酮C，可用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病。
Description
技术领域
本发明属于医药技术和保健食品领域，具体而言，本发明提供了负调节Nrf2信号通路的小分子组合物，可用于负调节Nrf2信号通路或用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病等。
发明背景
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)或代谢相关脂肪性肝炎(MASH)是一种常见的慢性肝脏疾病,其发生发展过程非常复杂，通常包括以下几个阶段:糖脂代谢紊乱-肝细胞脂肪堆积；肝细胞脂肪氧化-肝脏炎症；炎症相关的肝纤维化-肝硬化，以致出现肝细胞癌变-肝癌。研究表明这个过程涉及多个细胞信号通路，其中KEAP1-NRF2信号通路的激动与抑制对疾病的发生发展有很大的影响。NRF2基因可以激活下游数百个基因及基因簇群,主要功能是抗氧化、保护细胞受损、控制炎症等，因此NRF2激动剂(angonist)通常被认为有益于NAFLD或NASH的治疗。
甘草在中草药中应用广泛，中草药传承方剂中使用的频率也最高，因此被称之为中草药之王。然而中药方剂中的甘草通常以汤剂入药，从药学的物质基础而言入药成分多数是水溶性分子。
甘草查耳酮A(Licochalcone A)是甘草中主要非水溶性查耳酮类分子，与多数甘草查耳酮或其它查耳酮类分子相似，是KEAP1-NRF2通路的激动剂，应当正调节Nrf2信号通路。然而，本发明人在研究中发现了一中富含甘草查耳酮A的甘草提取物，竟然在非酒精性脂肪肝发生发展过程中对Nrf2基因表达发挥的负调节作用，即作为Nrf2拮抗剂(antagonist)，本该弃去，但是凭借长期研究经验，继续深入研究，最终令人意外地获得了十分有益于治疗非酒精性脂肪肝病的药物或保健品。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于提供新的小分子组合物，其负调节Nrf2信号通路，但可以有效地预防或治疗非酒精性脂肪性肝病。另外，本发明还提供了包括该小分子组合物的药物制剂或保健食品以及应用等。
具体而言，在第一方面，本发明提供了负调节Nrf2信号通路的小分子组合物，其包含甘草查耳酮A、甘草查耳酮C、甘草查耳酮D、甘草查耳酮E、芒柄花素、光甘草酚和甘草黄酮C。该组合物在非酒精性脂肪肝发生发展过程中对Nrf2基因表达发挥负调节作用。
在发明中，甘草查耳酮A、甘草查耳酮C、甘草查耳酮D、甘草查耳酮E、芒柄花素、光甘草酚和/或甘草黄酮C可以是从植物中提取的，也可以是人工合成的。优选其中，植物是甘草，例如胀果甘草。
优选在本发明第一方面的组合物中，甘草查耳酮A、甘草查耳酮C、甘草查耳酮D、甘草查耳酮E、芒柄花素、光甘草酚和甘草黄酮C的重量比为60～75：2～6：1～4：5～10：1～5：1～5：1～5。
更优选在本发明第一方面的组合物中，甘草查耳酮A、甘草查耳酮C、甘草查耳酮D、甘草查耳酮E、芒柄花素、光甘草酚和甘草黄酮C的重量比为65～75：3～5：1～3：6～8：2～3：2～3：1～2。
在第二方面，本发明提供了制剂，其包括本发明第一方面的组合物以及药学上或食品上可接受的辅料。所述制剂可以是药物制剂，也可以是保健食品。
在本文中，术语“药学上可接受的辅料”包括药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂等，它们与药物活性成分相容。运用药学上可接受的辅料制备药物制剂对本领域普通技术人员来说是公知的。本发明的药物制剂包含烟酰胺单核苷酸、罗汉果苷和赤鲜糖醇作为活性成分，将该活性成分和药学上可接受的辅剂(如本领域普通技术人员所熟知的载体、赋形剂、稀释剂等)组合在一起，配制成各种制剂，优选为固体制剂和液体制剂，如片剂、丸剂、胶囊(包括持续释放或延迟释释放形式)、粉剂、混悬剂、颗粒剂、糖浆剂、乳液剂、悬浮液等剂型以及各种缓释剂型，优选以口服给药形式。在本发明的一个具体实施方式中，本发明第一方面的组合物使用0.5％CMC-Na溶液稀释成液体制剂。以本发明第一方面的组合物计，预防或治疗的有效量可以通过实验动物的剂量来推算。
在本文中，术语“食品上可接受的辅料”包括食品上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、调味剂、着色剂、增香剂等，它们与食品保健活性成分相容。包含烟酰胺单核苷酸、罗汉果苷和赤鲜糖醇的组合物可以直接构成食品或者食品原料，也可以加入食品或者食品原料中，例如可以涂敷其他食品的表面，也可以与其他食品混合。
在第三方面，本发明提供了本发明第一方面的组合物在制备用于负调节Nrf2信号通路的试剂中的应用。相应地，在第四方面，本发明提供了负调节Nrf2信号通路的方法，包括施用本发明第一方面的组合物。
在第五方面，本发明提供了本发明第一方面的组合物在制备用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的药物中的应用。相应地，在第六方面，本发明提供了预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的方法，包括施用本发明第一方面的组合物。
在本文中，施用对象可以是人，也可以是实验动物，优选是人。
优选地，非酒精性脂肪性肝病是非酒精性脂肪肝炎(NASH)。
也优选地，非酒精性脂肪性肝病是糖脂代谢紊乱性疾病、肝纤维化、肝硬化或肝癌。
为了便于理解，以下将通过具体的实施例和附图对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见的。
附图说明
图1是NR218提取物的特征图谱及其对照图谱。
图2显示了NR218提取物中主要成分的化学结构。
图3显示了大鼠肝组织HE染色结果(200×,400×)，其中，(A)正常对照组；(B)模型组；(C)双环醇阳性对照组；(D)洛伐他汀阳性对照组；(E)奥贝胆酸阳性对照组；(F)NR218低剂量组；(G)NR218中剂量组；(H)NR218高剂量组。
图4显示了大鼠肝组织油红〇染色结果(200×,400×)，其中(A)正常对照组；(B)模型组；(C)双环醇阳性对照组；(D)洛伐他汀阳性对照组；(E)奥贝胆酸阳性对照组；(F)NR218低剂量组；(G)NR218中剂量组；(H)NR218高剂量组。
图5显示了NR218对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中AMPK、NF-κB、Nrf2和SIRT1蛋白表达的影响(400×)，其中，(A)正常对照组；(B)模型组；(C)NR218低剂量组；(D)NR218中剂量组；(E)NR218高剂量组。
图6显示了大鼠肝脏组织HE染色结果(200×，400×)，其中，(A)正常对照组；(B)模型组；(C)奥贝胆酸阳性对照组；(D)洛伐他汀阳性对照组；(E)双环醇阳性对照组；(F)NR218高剂量组；(G)NR218中剂量组；(H)NR218低剂量组。
图7显示了大鼠肝脏组织油红〇染色结果(200×，400×)，其中，(A)正常对照组；(B)模型组；(C)奥贝胆酸阳性对照组；(D)洛伐他汀阳性对照组；(E)双环醇阳性对照组；(F)NR218高剂量组；(G)NR218中剂量组；(H)NR218低剂量组。
图8显示了大鼠肝脏组织Masson染色结果(200×和400×)，其中，(A)正常对照组；(B)模型组；(C)奥贝胆酸阳性对照组；(D)洛伐他汀阳性对照组；(E)双环醇阳性对照组；(F)NR218高剂量组；(G)NR218中剂量组；(H)NR218低剂量组。
图9显示了NR218对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中NF-κB、Nrf2、Smad、TGFβ、α-SMA、AMPK、NS5ATP9和SIRT1蛋白表达的影响，其中，(A)正常对照组；(B)模型组；(C)NR218低剂量组；(D)NR218中剂量组；(E)NR218高剂量组。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明的内容。如未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段和市售的常用仪器、试剂，可参考相应仪器和试剂的厂商说明书等。
实施例1甘草提取物的制备
取胀果甘草根和根茎，粉碎，用水(60℃)温浸提取，提取液另行处理。药渣烘干至含水量(15±5)％，用(85±5)％乙醇回流提取，合并提取液，回收乙醇并浓缩至适量，加在已处理好的大孔吸附树脂柱上，依次用不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇并浓缩至适量，加在已处理好的聚酰胺树脂柱上，依次用不同浓度的乙醇洗脱，收集相应的洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，减压干燥，粉碎，即得。其中，编号为NR218的组分(提取物)在初步试验中表现出了令我们感兴趣的特性，因而进行深入研究。
实施例2 NR218提取物的鉴定
经委托鉴定，NR218提取物的特征图谱如图1所示，其中最主要的7种化合物的结构经解析如图2所示，分别为甘草查耳酮A、甘草查耳酮C、甘草查耳酮D、甘草查耳酮E、芒柄花素、光甘草酚及甘草黄酮C，它们的比例如表1所示。除了以上主要成分之外，经HPLC-MS检测，还含有如表2所示的低含量的成分。
表1 NR218提取物中主要成分及其比例
表2 NR218提取物中的其他成分
实施例3 NR218组合物的制备
为了保证产物稳定，取甘草查耳酮A 7.2g、甘草查耳酮C 0.38g、甘草查耳酮D0.22g、甘草查耳酮E 0.68g、芒柄花素0.25g、光甘草酚0.28g和甘草黄酮C0.12g，混合均匀后，即为NR218组合物，用于进一步试验。
实施例4 NR218组合物对高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型NRF2通路的影响及治疗作用
【实验材料】
造模饲料：高脂饲料(88％基础饲料+10％猪油+2％胆固醇)，购于斯贝福(北京)生物技术有限公司，许可证号SCXK(京)2019-0010，合格证号1103242000022188。
动物：SPF级雄性Wistar大鼠，160±10g，购于斯贝福(北京)生物技术有限公司，许可证号SCX(京)2019-0010。
药物：NR218组合物；双环醇片，北京协和药厂，规格50mg/片，批号191116；洛伐他汀胶囊，扬子江药业集团有限公司，规格20mg/粒，批号19030461；奥贝胆酸，湖北九洲康达生物科技有限公司，规格100g/袋，批号20200210。
仪器：多功能酶标仪，广州市达瑞生物技术股份有限公司，型号H1M；多样品组织研磨仪，上海净信实业发展有限公司，型号Tissuelyser-24；冷冻离心机，型号Micro 21R；离心机，Thermo Fisher，型号LR58495；电子天平，上海越平电子天平，型号YP10001；分析天平，梅特勒-托利多公司，型号PL602-L；立式压力蒸汽灭菌器，重庆雅马拓科技有限公司，型号SN510C；电泳仪电源，北京市六一仪器厂，型号DYY-6C型；蛋白电泳和转印系统，BIO-RAD公司，型号Mini-PROTEAN。
材料：高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测试盒，南京建成生物工程研究所，货号A112-1-1，批号20201012；低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测试盒，南京建成生物工程研究所，货号A113-1-1，批号20201012；游离脂肪酸(NEFA)试剂盒，南京建成生物工程研究所，货号A042-2-1，批号20201012；谷草转氨酶(AST/GOT)试剂盒，南京建成生物工程研究所，货号C010-2-1，批号20201012；谷丙转氨酶(ALT/GPT)试剂盒，南京建成生物工程研究所，货号C009-2-1，批号20201012；总胆固醇(T-CHO)测试盒，南京建成生物工程研究所，货号A111-1-1，批号20200815；甘油三酯(TG)测试盒，南京建成生物工程研究所，货号A110-1-1，批号20200814；尿酸(UA)测试盒，南京建成生物工程研究所，货号C012-2-1，批号20201012；血糖含量试剂盒，金克隆生物技术有限公司，货号SH152W，批号20201012；大鼠空腹胰岛素(FINS)酶联免疫分析试剂盒，金克隆生物技术有限公司，货号SEKR-0160，批号20201012；高效RIPA组织快速裂解液，索莱宝生物科技有限公司，货号R0010，生产批号20200926；BCA试剂盒，索莱宝生物科技有限公司，货号PC0020，生产批号20201010；SIRT1抗体，Cell Signalingtechnology公司，货号9475S；AMPKα1抗体，Proteinteck公司，货号10929-2-AP；NF-κB p65抗体，Proteinteck公司，货号10745-1-AP；Nrf2抗体，Proteinteck公司，货号16396-1-AP；GAPDH抗体，Proteinteck公司，货号10494-1-AP。
【实验方法】
(1)高脂饮食诱导大鼠非酒精性脂肪性肝炎造模及给药
取Wistar大鼠120只，随机分为8组，分别为正常对照组、模型组、双环醇阳性对照组、洛伐他汀阳性对照组、奥贝胆酸阳性对照组、NR218高(90mg/kg)、中(30mg/kg)、低(10mg/kg)剂量组，每组15只。除正常对照组给予普通饲料饲养12周外，其余各组以高脂饲料喂养(88％基础饲料+10％猪油+2％胆固醇)，饲养12周。模型建立后，给药组分别给予相应药物(10ml/kg)，正常对照组和模型组分别给予等体积的0.5％CMC-Na溶液。每日灌胃1次，连续8周。实验期间，动物自由饮水和进食，动物房保持安静，自然采光，温度25±0.5℃，湿度55±5％，每周对大鼠进行一次称重并记录体重数据。
(2)样本收集及检测
①动物一般状况考察
每周称重1次，对各组大鼠体重变化进行考察。
②非酒精性脂肪性肝炎相关血清生化指标检测
给药第8周末，所有大鼠在末次给药后，禁食不禁水16h，以20％乌来糖溶液腹腔注射(10ml/kg)麻醉后腹主动脉取血，静置1小时，4℃，3000r/min离心15min，取上层血清于-80℃保存。按照生化指标检测试剂盒说明书，对大鼠血清中HDL-C、LDL-C、NEFA、AST、ALT、UA、TC、TG、FPG、FINS水平进行检测；同时考察大鼠胰岛素抵抗指数【(HOMA-IR)＝FPG(mmol/L)×FINS(mIU/L)/22.5】。
③肝脏指数考察
大鼠腹主动脉取血后分离肝组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸擦干后称质量，计算肝脏指数：肝脏指数＝肝脏湿质量/体质量×100％。
④大鼠肝组织病理学考察
HE染色和油红染色：大鼠腹主动脉取血后分离肝组织，用10％中性福尔马林固定，按照常规制片程序进行包埋、切片、脱蜡、二甲苯透明、染色、封片等操作，于显微镜下观察各组大鼠肝组织的病理改变。
⑤非酒精性脂肪性肝炎相关蛋白检测
免疫组化检测：将5um厚度的石蜡包埋肝组织切片用目标抗体孵育90min，进一步用过氧化物酶偶联二抗孵育30min。随后在室温下用“链霉亲和素-过氧化物酶-生物素复合物”孵育20min。显色后在显微镜下观察和分析。
蛋白免疫印迹实验：取适量肝组织，采用高效RIPA组织快速裂解液和PMSF进行裂解，进行蛋白提取。通过BCA Protein Assay Kit对提取的肝组织蛋白进行定量检测。按照Western blotting实验常规程序以GAPDH为内参，检测AMPK、SIRT1、NF-κB和Nrf2蛋白表达变化。使用ImageJ 1.48软件进行定量分析。
(3)统计学处理
实验结果以均值±标准差(X±SD)表示，采用SPSS软件17.0进行单因素方差分析。P<0.05表示具有显著性差异，P<0.01表示极具显著性差异。采用GraphPad Prism软件(版本6.02)对所有结果进行可视化。
【实验结果】
(1)各组大鼠体重变化考察
体重分析结果如表3所示，造模前12周，大鼠体重呈上升趋势，给药后各组体重有一定程度下降，但无显著性差异。
表3各组大鼠体重变化(X±SD，n＝15)
(2)NR218对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏指数的影响
实验结束后，通过对各组大鼠肝脏指数的考察发现，如表4所示，与正常对照组相比，模型组肝脏指数显著升高(P<0.01)；与模型组相比，双环醇、洛伐他汀、奥贝胆酸阳性对照组、NR218高、中、低剂量组大鼠肝脏指数均显著降低(P<0.01或P<0.05)，且NR218中、高剂量效果优于阳性药。
表4各组大鼠肝脏指数(X±SD)
注：与正常对照组相比，##P<0.01；与模型组相比，**P<0.01，*P<0.05。
(3)NR218对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织病理的影响
HE结果如图3所示，正常对照组肝细胞排列整齐，肝小叶结构清晰，细胞无脂肪变性，无炎症细胞浸润。模型组大鼠肝细胞肿胀，细胞内有大小不一的脂滴空泡，细胞核边缘化，呈气球样变性，且可见炎细胞浸润。与模型组相比，各给药组脂肪变性情况均有一定程度减轻，炎性细胞减少。NR218高剂量组最为明显，肝细胞形态基本正常。
油红O染色结果如图4所示，模型组肝组织脂肪含量显著增高，肝细胞排列不规则，细胞骨架丧失。模型组可见细胞内脂滴多为多囊泡型大泡，脂肪滴多呈片分布，封片后脂滴常汇集在切片表面。NR218给药组大鼠肝细胞内散布有少数细小脂滴，脂肪变性程度和脂滴含量均较模型组有明显改善。
(4)NR218对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清生化指标的影响
按照生化指标检测试剂盒说明书，对大鼠血清ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C、UA、NEFA、FPG、FINS水平进行检测。实验结果如表5所示：与正常对照组相比，模型组大鼠血清ALT、AST、TC、TG、LDL-C、UA、NEFA水平均显著升高(P<0.01或P<0.05)，HDL-C水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比，NR218显著降低大鼠血清AST、ALT、TC、TG、LDL-C、UA、NEFA水平，同时升高有利脂蛋白HDL-C的含量(P<0.01或P<0.05)，改善非酒精性脂肪性肝炎肝功能和脂质代谢。通过考察各组大鼠胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)发现，与正常对照组相比，模型组大鼠HOMA-IR显著升高(P<0.01)；与模型组相比，NR218显著降低非酒精性脂肪性肝炎大鼠胰岛素抵抗。以上结果提示，NR218能够显著改善非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏功能，降低血脂含量，改善胰岛素抵抗。
表5 NR218对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清生化指标的影响(X±SD，n＝15)
注：与正常对照组相比，#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。
(5)NR218对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中相关蛋白表达的影响
采用免疫组化方法检测非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中AMPK、NF-κB、Nrf2和SIRT1蛋白表达情况。结果如图5所示，NR218高、中、低剂量可不同程度显著降低非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中NF-κB、Nrf2蛋白表达水平，显著升高肝组织中AMPK和SIRT1蛋白表达水平。同时，如表6所示，与正常对照组相比，模型组AMPK和SIRT1蛋白表达显著降低(P<0.01)，NF-κB和Nrf2表达显著升高(P<0.01)。与模型组相比，NR218高、中、低剂量均显著升高AMPK和SIRT1蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05)，抑制NF-κB和Nrf2的蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05)，且以高剂量最佳。以上结果提示，NR218治疗非酒精性脂肪性肝炎可能是通过AMPK/SIRT1/NF-κB信号轴调节炎症和氧化应激来实现的。
表6 NR218对大鼠肝组织AMPK、SIRT1、Nrf2和NF-κB表达的影响(X±SD)
注：与正常对照组相比，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。
【实验结论】
本实验采用高脂饲料喂养建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型，发现NR218能缓解非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织脂肪变性程度，降低肝脏指数，改善肝功能和脂质代谢，降低血脂和胰岛素抵抗指数。在蛋白水平上，NR218显著升高肝脏AMPK和SIRT1蛋白表达水平，抑制NF-κB和Nrf2蛋白表达水平。以上结果提示：NR218对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎有显著改善作用，该作用是通过AMPK/SIRT1/NF-κB信号轴改善炎症和抗氧化应激来实现的。
实施例5 NR218对高脂饲料+CCL4联合诱导大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型NRF2通路的抑制及治疗作用
【实验材料】
造模剂：高脂饲料(88％基础饲料+10％猪油+2％胆固醇)，购于北京科澳协力饲料有限公司，饲料许可证号SCXK(京)2019-0003，饲料合格证号1112622000028380；四氯化碳(CCL4)，上海麦克林生化科技有限公司，批号C10921057；橄榄油，国药集团化学试剂有限公司，批号0191008。
动物：SPF级雄性Wistar大鼠，160±10g，购自斯贝福(北京)生物技术有限公司，许可证号SCX(京)2019-0010。
药物：NR218组合物；双环醇片，北京协和药厂，规格50mg/片，批号191116；洛伐他汀胶囊，扬子江药业集团有限公司，规格20mg/粒，批号19030461；奥贝胆酸，湖北九洲康达生物科技有限公司，规格100g/袋，批号20200210。
仪器：全功能微孔板检测仪，美国伯腾仪器有限公司，型号Synergy H1；多样品组织研磨仪，上海净信实业发展有限公司，型号Tissuelyser-24；离心机，赛默飞世尔科技有限公司，型号PICO 17；电子天平，上海越平电子天平，型号YP10001；分析天平，梅特勒-托利多公司，型号AL204；立式压力蒸汽灭菌器，重庆雅马拓科技有限公司，型号SN510C；电泳仪，北京市六一仪器厂，型号DYY-6C；低温离心机，赛默飞世尔科技有限公司，型号FRESCO21。
材料：高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测试盒，南京建成生物工程研究所，货号A112-1-1,批号20201010；低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测试盒，南京建成生物工程研究所，货号A113-1-1，批号20201010；谷丙转氨酶(ALT/GPT)测试盒，南京建成生物工程研究所，货号C009-2-1,批号20200912；谷草转氨酶(AST/GOT)测试盒，南京建成生物工程研究所，货号C010-2-1,批号20200929；尿酸(UA)测试盒，南京建成生物工程研究所，货号C012-2,批号20200907；游离脂肪酸(NEFA)测定试剂盒，南京建成生物工程研究所，货号A042-2-1,批号20201010；血糖(FPG)含量测定试剂盒，金克隆(北京)生物技术有限公司，货号SH152W,批号20201016；总胆固醇(TC)检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，货号A111-1-1,批号20200825；甘油三酯(TG)检测试剂盒，南京建成生物工程研究所，货号A110-1-1,批号20200825；大鼠空腹胰岛素(FINS)酶联免疫分析试剂盒，上海酶联生物技术有限公司，货号ml302840；大鼠III型前胶原(PC-III)检测试剂盒，上海酶联生物科技有限公司，货号ml038007；大鼠层粘连蛋白(LN)检测试剂盒，上海酶联生物科技有限公司，货号ml823654；大鼠IV型胶原(IV-C)检测试剂盒，上海酶联生物科技有限公司，货号ml038234；大鼠透明质酸(HA)检测试剂盒，上海酶联生物科技有限公司，货号ml852321；SIRT1抗体，CellSignaling technology公司，货号9475S；AMPKα1抗体，Proteinteck公司，货号10929-2-AP；NF-κB p65抗体，Proteinteck公司，货号10745-1-AP；Nrf2抗体，Proteinteck公司，货号16396-1-AP；GAPDH抗体，Proteinteck公司，货号10494-1-AP。
【实验方法】
(1)高脂饲料+CCL4联合诱导大鼠非酒精性脂肪性肝炎模型的复制及给药
取雄性Wistar大鼠120只，按随机数字表法随机分为8组，即正常对照组、模型组、双环醇阳性对照组、洛伐他汀阳性对照组、奥贝胆酸阳性药对照组、NR218高(90mg/kg)、中(30mg/kg)、低(10mg/kg)剂量组，每组15只。正常对照组给予普通饲料，其余大鼠前6周单独给予高脂饲料，从第7周开始，给予30％的CCL4橄榄油溶液背后皮下注射，剂量按照0.2ml/100g，每周2次，注射4次[24]。模型复制成功后，各给药组分别灌胃给予相应药物(10ml/kg)，正常对照组和模型组分别给予等体积的0.5％CMC-Na溶液，每日1次，连续10周。实验期间，实验动物自由饮水和进食，动物房保持安静，自然采光，温度25±0.5℃，湿度55±5％，每周对大鼠进行1次称重并记录体重数据。
(2)样本收集及检测
①大鼠一般状况观察
每周称量一次体重，实验结束后对各组大鼠体重的变化情况进行比较。
②肝脏指数测定
大鼠腹主动脉取血后，分离大鼠肝组织，用生理盐水冲洗干净，滤纸擦干后称质量，计算肝脏指数：肝脏指数＝肝脏湿质量/体质量×100％
③非酒精性脂肪性肝炎血清生化指标检测
给药第10周末，所有大鼠在末次给药后，禁食不禁水16h，以20％乌来糖溶液腹腔注射(10ml/kg)麻醉后腹主动脉取血，静置1小时，4℃，3000r/min离心15min，取上次血清于-80℃保存。按照生化指标检测试剂盒说明书，对大鼠血清HDL-C、LDL-C、NEFA、AST、ALT、UA、TC、TG、PCIII、IV-C、LN和HA水平进行检测。
④HOMA-IR指数计算
按照试剂盒说明书，通过比色法检测血清中FPG的含量，放免法检测血清中FINS的浓度，根据公式计算HOMA-IR指数，即HOMA-IR＝FPG(mmol/L)×FINS(mIU/L)/22.5。
⑤组织病理学观察
大鼠腹主动脉取血后分离肝组织，用10％中性福尔马林固定，按照常规制片程序进行包埋、切片、脱蜡、二甲苯透明、染色、封片等操作，然后分别进行HE染色、Masson染色和油红染色，于显微镜下观察各组大鼠肝脏组织的病理改变。
⑥非酒精性脂肪性肝炎相关蛋白检测
免疫组化检测：将5um厚度的石蜡包埋肝组织切片用目标抗体孵育90min，进一步用过氧化物酶偶联二抗孵育30min。随后在室温下用“链霉亲和素-过氧化物酶-生物素复合物”孵育20min。显色后在显微镜下观察和分析。
蛋白免疫印迹实验：在无菌条件下，每只大鼠取肝组织80mg，采用高效RIPA组织快速裂解液和PMSF进行裂解，对肝组织蛋白提取。通过BCAProtein Assay Kit对提取的肝组织蛋白进行定量检测，具体操作方法按说明书进行。按照Western blotting实验常规程序检测AMPK、SIRT1、NF-κB、Nrf2、GAPDH蛋白的表达变化。使用ImageJ 1.48软件进行定量分析。
(3)统计学处理
实验结果以均数±标准差(X±SD)表示，采用SPSS 17.0统计软件进行单因素方差分析，事后两组间比较采用LSD检验，P＜0.05表示有显著差异，P＜0.01表示有极显著差异。采用GraphPad Prism软件(版本6.02)对所有结果进行可视化。
【实验结果】
(1)各组大鼠体重变化考察
如表7所示，通过对大鼠每周的体重统计分析发现：给药之前各组大鼠体重随着饲养时间持续升高；给药之后大鼠体重增长速度明显减慢，且与模型组相比，双环醇、洛伐他汀和奥贝胆酸阳性对照组以及NR218低、中、高剂量组大鼠体重均有下降趋势，但无显著差异。
表7各组大鼠体重变化(X±SD，n＝15)
(2)NR218对高脂饲料+CCL4联合诱导非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏指数的影响
如表8所示，通过对各组大鼠肝脏指数考察发现，与正常对照组相比，模型组大鼠肝脏指数显著升高(P<0.01)；与模型组相比，双环醇阳性对照组大鼠肝脏指数显著降低，NR218低、中、高剂量均能够显著降低大鼠肝脏指数(P<0.01)。以上结果提示，NR218能够有效抑制高脂饲料+CCL4联合诱导非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏肥大，且效果均比阳性药好。
表8各组大鼠肝脏指数(X±SD)
注：与正常对照组相比，##P<0.01；与模型组相比，**P<0.01，*P<0.05。
(3)NR218对高脂饲料+CCL4联合诱导非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清指标的影响
按照试剂盒检测说明书，对大鼠血清AST、ALT、HDL-C、LDL-C、UA、NEFA、TC、TG、FPG、FINS、PCIII、IV-C、LN和HA水平进行检测。实验结果如表9和10所示：与正常对照组相比，模型组大鼠血清中ALT、AST、TC、TG、LDL-C、UA、PCIII、IV-C、LN和HA表达均显著升高(P<0.01)，HDL-C表达显著降低(P<0.01)。与模型组相比，NR218高、中、低剂量不同程度地显著降低了大鼠血清AST、ALT、LDL-C、UA、NEFA、TC、TG、PCIII、IV-C、LN和HA水平(P<0.01或P<0.05)，显著升高了有利脂蛋白HDL-C的含量(P<0.01或P<0.05)，明显改善了非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝脏功能、血脂水平及肝纤维化程度。
表9NR218对非酒精性脂肪性肝炎大鼠血清生化指标的影响(X±SD，n＝15)
注：与正常对照组相比，#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。
表10 NR218对大鼠血清肝纤四项指标的影响(X±SD，n＝15)
注：与正常对照组相比，#P<0.05，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。
(4)NR218对高脂饲料+CCL4联合诱导非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织病理影响
①HE染色结果如图6所示，正常对照组大鼠肝细胞排列整齐，肝小叶结构清晰，细胞无脂变，无炎性细胞浸润。模型组大鼠肝细胞肿胀，细胞内有较大的脂滴空泡，细胞核边缘化，呈气球样变性，肝窦明显增大，炎性细胞浸润明显，肝脏胶原含量明显增多，提示模型建立成功。与模型组相比，NR218高、中、低剂量组均不同程度地减少肝细胞内脂肪粒数量和肝组织中胶原含量，明显降低炎性细胞浸润程度及肝细胞坏死程度，且效果均比阳性药奥贝胆酸、洛伐他汀及双环醇显著。
②油红〇染色检测结果如图7所示，正常对照组大鼠肝细胞核浅染，无红染脂滴；模型组大鼠肝细胞肿胀，细胞浆可见大量大泡样红色脂滴，部分融合为大脂滴，脂肪滴多呈片分布，肝细胞排列不规则，细胞骨架丧失。相比于模型组，双环醇、洛伐他汀和奥贝胆酸阳性对照组及NR218高、中、低剂量组大鼠肝细胞内散布有少数细小脂滴，偶见个别大脂滴，脂肪变性程度和脂滴含量均有明显改善，且NR218各剂量均比阳性药双环醇、洛伐他汀和奥贝胆酸效果显著。
③Masson染色检测结果如图8所示，与正常组相比，模型组大鼠肝组织中胶原含量明显增加，多沉积于肝组织中央静脉区和汇管区，胶原沉积多呈现网状。与模型组相比，NR218高、中、低剂量组大鼠肝组织中胶原含量明显减少，网状胶原沉积消失，且NR218各剂量均比阳性药双环醇、洛伐他汀和奥贝胆酸效果显著。
(5)NR218对非酒精性脂肪性肝炎相关蛋白表达的影响
为了进一步探索NR218治疗高脂饲料+CCL4联合诱导非酒精性脂肪性肝炎潜在的生物学机制，采用免疫组化方法检测非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中Smad、TGFβ、α-SMA和NS5ATP9蛋白表达情况。结果如图9所示，NR218高、中、低剂量可不同程度地显著降低非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织中Smad、TGFβ和α-SMA蛋白表达水平，显著升高肝组织中NS5ATP9蛋白表达水平。采用Western blotting和免疫组化实验对大鼠肝组织中AMPK、SIRT1、Nrf2和NF-κB蛋白表达变化进行检测，结果如表11所示，与正常对照组相比，模型组大鼠肝组织中AMPK和SIRT1蛋白表达水平显著降低(P<0.01)，NF-κB、Nrf2蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比，NR218高、中、低剂量组均不同程度显著升高AMPK和SIRT1蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05)，显著降低NF-κB、Nrf2蛋白表达水平(P<0.01)，且以高剂量组改善效果最佳。以上结果提示，NR218可能通过AMPK/SIRT1/NF-κB/Smad通路调节炎症、氧化应激和肝纤维化改善非酒精性脂肪性肝炎。
表11 NR218对大鼠肝组织AMPK、SIRT1、Nrf2和NF-κB表达的影响(X±SD)
注：与正常对照组相比，##P<0.01；与模型组相比，*P<0.05，**P<0.01。
【实验结论】
本实验采用高脂饲料+CCL4联合诱导非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型，通过考察大鼠一般状况(体重和肝脏质量)、血清生化指标、组织病理学发现，NR218能显著改善非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织脂肪变性和纤维化程度，显著降低大鼠肝脏指数、血脂和胰岛素抵抗指数。在蛋白表达水平上，NR218显著增加了大鼠肝组织中AMPK、NS5ATP9和SIRT1蛋白表达水平，降低肝组织中NF-κB、Nrf2、Smad、TGFβ和α-SMA蛋白表达水平。以上结果提示，NR218对高脂饲料+CCL4联合诱导的非酒精性脂肪性肝炎有显著改善作用，该作用可能是通过AMPK/SIRT1/NF-κB通路调节炎症和氧化应激，通过Smad信号调节肝纤维化来实现的。
Claims (7)
1.负调节Nrf2信号通路的小分子组合物，其由甘草查耳酮A、甘草查耳酮C、甘草查耳酮D、甘草查耳酮E、芒柄花素、光甘草酚和甘草黄酮C组成，其中，甘草查耳酮A、甘草查耳酮C、甘草查耳酮D、甘草查耳酮E、芒柄花素、光甘草酚和甘草黄酮C的重量比为60～75：2～6：1～4：5～10：1～5：1～5：1～5。
2.权利要求1所述的组合物，其中，甘草查耳酮A、甘草查耳酮C、甘草查耳酮D、甘草查耳酮E、芒柄花素、光甘草酚和甘草黄酮C的重量比为65～75：3～5：1～3：6～8：2～3：2～3：1～2。
3.权利要求1~2之任一所述的组合物，其在非酒精性脂肪肝发生发展过程中对Nrf2基因表达发挥负调节作用。
4.权利要求1所述的组合物，其中，甘草查耳酮A、甘草查耳酮C、甘草查耳酮D、甘草查耳酮E、芒柄花素、光甘草酚和/或甘草黄酮C是从植物中提取的或是人工合成的。
5.负调节Nrf2信号通路的制剂，其包括权利要求1~4之任一所述的组合物以及药学上可接受的辅料。
6.权利要求1~4之任一所述的组合物在制备用于预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的药物中的应用。
7.权利要求6所述的应用，其中非酒精性脂肪性肝病是非酒精性脂肪肝炎。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210532017.6A CN117100739B (zh) | 2022-05-17 | 2022-05-17 | 负调节Nrf2信号通路的小分子组合物及其应用 |
| PCT/CN2023/070440 WO2023221533A1 (zh) | 2022-05-17 | 2023-01-04 | 负调节Nrf2信号通路的小分子组合物及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210532017.6A CN117100739B (zh) | 2022-05-17 | 2022-05-17 | 负调节Nrf2信号通路的小分子组合物及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117100739A CN117100739A (zh) | 2023-11-24 |
| CN117100739B true CN117100739B (zh) | 2024-04-12 |
Family
ID=88800748
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210532017.6A Active CN117100739B (zh) | 2022-05-17 | 2022-05-17 | 负调节Nrf2信号通路的小分子组合物及其应用 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117100739B (zh) |
| WO (1) | WO2023221533A1 (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013103925A (ja) * | 2011-11-16 | 2013-05-30 | Minofuaagen Seiyaku:Kk | 肝臓線維化抑制剤 |
| CN105708891A (zh) * | 2016-03-23 | 2016-06-29 | 北京慧宝源生物技术有限公司 | 控制和治疗人体脂肪肝的药物组合物及其应用 |
| CN106420902A (zh) * | 2016-10-13 | 2017-02-22 | 北京大学 | 胀果甘草提取物及甘草查耳酮a的保肝活性及药物新用途 |
| CN107510710A (zh) * | 2017-10-12 | 2017-12-26 | 沈阳药科大学 | 一种从甘草残渣中富集2型糖尿病靶点抑制剂的方法和医药用途 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110090209A (zh) * | 2019-06-11 | 2019-08-06 | 中日友好医院 | 刺芒柄花素在治疗非酒精性脂肪肝中的应用 |
-
2022
- 2022-05-17 CN CN202210532017.6A patent/CN117100739B/zh active Active
-
2023
- 2023-01-04 WO PCT/CN2023/070440 patent/WO2023221533A1/zh unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2013103925A (ja) * | 2011-11-16 | 2013-05-30 | Minofuaagen Seiyaku:Kk | 肝臓線維化抑制剤 |
| CN105708891A (zh) * | 2016-03-23 | 2016-06-29 | 北京慧宝源生物技术有限公司 | 控制和治疗人体脂肪肝的药物组合物及其应用 |
| CN106420902A (zh) * | 2016-10-13 | 2017-02-22 | 北京大学 | 胀果甘草提取物及甘草查耳酮a的保肝活性及药物新用途 |
| CN107510710A (zh) * | 2017-10-12 | 2017-12-26 | 沈阳药科大学 | 一种从甘草残渣中富集2型糖尿病靶点抑制剂的方法和医药用途 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Formononetin alleviates hepatic steatosis by facilitating TFEB-mediated lysosome biogenesis and lipophagy;Yan Wang等;Journal of Nutritional Biochemistry;第73卷;文献号：108214（1-11） * |
| Licochalcone Suppresses LXRα-Induced Hepatic Lipogenic Gene Expression through AMPK/Sirt1 Pathway Activation;Jae Yun Han等;Toxicological Research;第30卷(第1期);19-25 * |
| Modulation of Oxidative Stress-Induced Senescence during Non-Alcoholic Fatty Liver Disease;Johanna Pedroza-Diaz等;Antioxidants;第11卷;文献号：975（1-30） * |
| Protective Effects of Licochalcone A Ameliorates Obesity and Non-Alcoholic Fatty Liver Disease Via Promotion of the Sirt-1/AMPK Pathway in Mice Fed a High-Fat Diet;Chian-Jiun Liou等;Cells;第8卷;文献号：447（1-20） * |
| 甘草总黄酮对非酒精性脂肪肝的干预作用及作用机制的研究;景晶;中国优秀硕士学位论文全文数据库医药卫生科技辑(第3期);文献号：E057-348 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2023221533A1 (zh) | 2023-11-23 |
| CN117100739A (zh) | 2023-11-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2700793C2 (ru) | Фармацевтическая композиция, содержащая силибин, витамин е и l-карнитин | |
| US10624942B2 (en) | Composition for amelioration of peri- and post-menopausal symptoms and a process for producing the same | |
| US8394431B2 (en) | Composition of extracts from plants and the use thereof in prophylaxis or treatment of metabolism disorder of blood lipid | |
| KR102676056B1 (ko) | 비알코올성 지방간 질환의 치료 또는 예방용 의약의 제조에서의 트리아세틸-3-하이드록시페닐아데노신의 용도 | |
| CA2743266A1 (en) | Pumpkin and rose hips weight loss composition | |
| Zhao et al. | Quercetin ameliorates hepatic fat accumulation in high-fat diet-induced obese mice via PPARs | |
| CN111513155B (zh) | 一种防治脂代谢异常的组合物 | |
| CN117100739B (zh) | 负调节Nrf2信号通路的小分子组合物及其应用 | |
| CN114699437B (zh) | 含有灯盏细辛提取物的口服制剂及其制备方法 | |
| Lu et al. | A comprehensive review of the classical prescription Yiguan Jian: Phytochemistry, quality control, clinical applications, pharmacology, and safety profile | |
| TWI438001B (zh) | 用於治療糖尿病之植物萃取物及其製備方法 | |
| CN104547588B (zh) | 一种胃康灵滴丸的制备方法 | |
| CN111184782B (zh) | 一种保肝降脂的中药组合物及其制备方法和应用 | |
| Yang et al. | Differential absorption and metabolic characteristics of organic acid components in pudilan xiaoyan oral liquid between young rats and adult rats | |
| CN108514093B (zh) | 一种辅助降血糖的多功能食品组合物及其制备方法 | |
| CN109966283A (zh) | 脱脂肉桂多酚提取物在制备防治糖尿病肾病产品中的应用 | |
| CN112451558A (zh) | 牛大力醇提物在制备降糖或降脂药物、保健品中的应用 | |
| KR101312025B1 (ko) | 소태나무 추출물의 제조방법 및 추출물의 용도 | |
| CN106974917B (zh) | 茯苓皮三萜在制备治疗肾病药物中的应用 | |
| CN116019854B (zh) | 桑提取物在制备预防和/或治疗肝胆疾病药物中的应用 | |
| CN111000852B (zh) | 苦蘵中睡茄内酯提取物在制备预防或治疗非酒精性脂肪性肝病的药物中应用 | |
| CN117338796B (zh) | 一种包含苦杏仁苷和大黄酸的组合物及其应用 | |
| CN108619264B (zh) | 一种参黄胶囊及其制备工艺 | |
| CN117224602A (zh) | 中药组合物及其制备方法和应用 | |
| CN117338862A (zh) | 龙胆泻肝汤复方及在制备治疗和/或预防非酒精性脂肪性肝炎药物及食品中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |