CN117089508A - 一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法及其应用 - Google Patents
一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117089508A CN117089508A CN202311009662.0A CN202311009662A CN117089508A CN 117089508 A CN117089508 A CN 117089508A CN 202311009662 A CN202311009662 A CN 202311009662A CN 117089508 A CN117089508 A CN 117089508A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stress
- lactobacillus
- acid
- preparation
- mice
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 64
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 50
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title claims abstract description 37
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title claims abstract description 37
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 68
- 239000011572 manganese Substances 0.000 claims abstract description 44
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims abstract description 25
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims abstract description 22
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 7
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 claims abstract description 5
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 229910052748 manganese Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N Manganese Chemical compound [Mn] PWHULOQIROXLJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- -1 iron ions Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 claims description 84
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 claims description 73
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 claims description 73
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 60
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 56
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 28
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 28
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 24
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 19
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 10
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 9
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 claims description 9
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 claims description 9
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 claims description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 7
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 6
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 2
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 claims 1
- 241001052560 Thallis Species 0.000 abstract description 11
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 65
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 58
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 50
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 41
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 24
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 23
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 20
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 19
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 17
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 15
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 12
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 12
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 12
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 10
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 10
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 8
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 6
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 6
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical group OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 5
- GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N Trolox Chemical compound O1C(C)(C(O)=O)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C GLEVLJDDWXEYCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 5
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 5
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 5
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 5
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- 101710168515 Cell surface glycoprotein Proteins 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 4
- 101710099182 S-layer protein Proteins 0.000 description 4
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 230000006518 acidic stress Effects 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 4
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 4
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000702460 Akkermansia Species 0.000 description 2
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 2
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- MLFHJEHSLIIPHL-UHFFFAOYSA-N isoamyl acetate Chemical compound CC(C)CCOC(C)=O MLFHJEHSLIIPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000018191 liver inflammation Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241001227086 Anaerostipes Species 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 108020000946 Bacterial DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000071140 Candidatus Saccharimonas Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251477 Chimaera Species 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000605716 Desulfovibrio Species 0.000 description 1
- 241001560646 Enterorhabdus Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 241001112693 Lachnospiraceae Species 0.000 description 1
- 101900228457 Lactobacillus acidophilus S-layer protein Proteins 0.000 description 1
- 208000017170 Lipid metabolism disease Diseases 0.000 description 1
- 206010024642 Listless Diseases 0.000 description 1
- 244000302512 Momordica charantia Species 0.000 description 1
- 235000009811 Momordica charantia Nutrition 0.000 description 1
- 235000009812 Momordica cochinchinensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000018365 Momordica dioica Nutrition 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000566145 Otus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010082913 S-layer proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000032140 Sleepiness Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010041349 Somnolence Diseases 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000001949 anaesthesia Methods 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N carbocromen Chemical compound CC1=C(CCN(CC)CC)C(=O)OC2=CC(OCC(=O)OCC)=CC=C21 KLOIYEQEVSIOOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004534 cecum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000008645 cold stress Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000008642 heat stress Effects 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 229940117955 isoamyl acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000006372 lipid accumulation Effects 0.000 description 1
- 208000017971 listlessness Diseases 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000011506 response to oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 150000004666 short chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011816 wild-type C57Bl6 mouse Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/36—Adaptation or attenuation of cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/23—Lactobacillus acidophilus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法及其应用，特点是包括以下步骤：将活化好的乳杆菌按体积比2％的接种量接入含有10mM钙、10mM镁、10mM锰或2mM铁离子的MRS肉汤培养基中，于37℃胁迫培养18h，在4℃条件下离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤2‑5次后，即得到耐酸乳酸菌，上述制备方法制备的耐酸乳酸菌具有在制备益生菌功效增强剂或胃肠道保护剂中、制备抗氧化和/或抗炎药品中、制备预防急性酒精性肝损伤的食品和/或药品中和制备改善肠道菌群的组成结构的食品和/或药品中的应用，优点是提高耐酸能力且具有抗氧化能力和缓解酒精肝的功效。
Description
技术领域
本发明涉及一种提高乳酸菌耐酸的方法，尤其是涉及一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法及其应用。
背景技术
乳酸菌(lactic acidbacteria，LAB)是一类能够定植于人体、畜禽的肠道中的生理有益菌，不仅能够改善发酵产品的风味，还具有丰富的益生功效：如调节宿主肠道微生态平衡，促进营养物质的消化吸收，抗肿瘤、调节免疫，降胆固醇、降血糖、降高血压，增强肠道防御功能等。
乳酸菌生产和应用过程中不可避免的会面临各种环境胁迫影响，如氧胁迫、热胁迫、冷胁迫、酸胁迫等，导致其自身的生长代谢受到抑制，益生功能无法正常发挥。而在乳酸菌面临的所有胁迫环境中，酸胁迫无疑是最具破坏力的。尽管大多数乳酸菌可以适应相对较酸的环境，但随着发酵生产及后期储存运输过程中乳酸的大量积累，环境pH不断下降，也会危及自身的生长代谢，影响其益生功能的发挥。特别是在进入人体消化道后，乳酸菌会遭遇更加恶劣的无机酸环境(pH为2.0～4.0)，这与大多数乳酸菌的最优生长条件相差甚远。乳酸菌必须耐受低pH环境存活下来，才能发挥其应有的益生功能。
金属离子是一种重要的蛋白结合配体，在蛋白质的结构稳定及生物功能调节方面发挥着重要作用，也因此对生物体的生理状态有着积极的推动作用。目前已经出现了一些关于乳酸菌与金属离子的相互作用的报道，主要涉及以下几点：利用乳酸菌的吸附功能来去除水和食物中残留的重金属污染；利用食品级乳酸菌作为载体来提高有益金属元素的膳食补充；通过金属离子的预处理来提高乳酸菌的益生功能特性。然而，现有技术中，还未能实现利用金属离子预胁迫提高乳酸菌耐酸能力的方法，此外，金属离子对于乳酸菌益生功能特性的增强也有待进一步发掘。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种提高耐酸能力且具有抗氧化能力和缓解酒精肝的功效的基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法及其应用。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法，包括以下步骤：将活化好的乳杆菌按体积比2％的接种量接入含有10mM钙、10mM镁、10mM锰或2mM铁离子的MRS肉汤培养基中，于37℃胁迫培养18h，在4℃条件下离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤2-5次后，即得到耐酸乳酸菌。
进一步，所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌CICC 6074。购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心买的，菌株编号为CICC 6074。
上述制备方法制备的耐酸乳酸菌在制备益生菌功效增强剂或胃肠道保护剂中的应用。
上述制备方法制备的耐酸乳酸菌在制备抗氧化和/或抗炎药品中的应用。
上述制备方法制备的耐酸乳酸菌在制备预防急性酒精性肝损伤的食品和/或药品中的应用。
上述制备方法制备的耐酸乳酸菌在制备抗氧化酶CAT、SOD和GPx促进剂中的应用。
上述制备方法制备的耐酸乳酸菌在制备改善肠道菌群的组成结构的食品和/或药品中的应用。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法及其应用，利用金属离子预胁迫显著提高嗜酸乳杆菌CICC 6074的酸耐受能力。Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+预胁迫可显著提高嗜酸乳杆菌的生长性能和酸胁迫条件下的存活率，其中Mn2+预胁迫的保护效果相对更好，酸耐受3小时，活菌数分别达到了8.77×106CFU/mL，存活率为82.62％，是未胁迫组的1.70倍。同时，金属离子预胁迫还可以提高S-层蛋白表达分泌，减缓细胞膜损伤，更好地保持菌体结构的完整性，减少胞内物质的流出及胞外有害物质的进入，从而有效地减轻酸环境对细胞的损伤。同时，Mn2+和Fe2+预胁迫显著提高了嗜酸乳杆菌CICC 6074酸耐受前后的抗氧化能力。进一步体内实验发现，Mn2+和Fe2+预胁迫的嗜酸乳杆菌通过缓解肝内氧化应激和炎症反应展现出了更好的缓解酒精性肝损伤的效果。采用金属离子预胁迫处理乳酸菌，方法简单、便于操作，有效提高了乳酸菌的酸耐受能力及体内外的抗氧化特性，此外，金属离子预胁迫乳酸菌展现出了更好的缓解酒精性肝损伤的效果，进一步提高了食品发酵菌株的工业生产能力和功能特性。
综上所述，本发明以嗜酸乳杆菌CICC6074为研究对象，通过金属离子预胁迫提高了菌体的生长及酸耐酸抗性，并进一步测定了酸胁迫条件下的各项生理指标，发现金属离子预胁迫通过减缓细胞膜损伤，调节表面蛋白表达等途径提高了嗜酸乳杆菌的存活能力。此外，金属离子预胁迫提高了嗜酸乳杆菌的抗氧化、抗炎、肠道定植能力，展现了更好的缓解酒精肝的能力。增强菌体的耐酸及功能特性，为微量元素与乳酸菌在功能性食品及药品等方面的开发利用提供了理论与实践依据。
附图说明
图1为不同金属离子对嗜酸乳杆菌生长情况的影响图，其中A为Ca2+，B为Mg2+，C为Mn2+，D为Fe2+；
图2为不同金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌酸耐受存活率的影响图；
图3为不同金属离子预胁迫影响酸处理后嗜酸乳杆菌的菌体扫描电镜图；
图4为不同金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌酸处理后细胞膜完整性的影响图；
图5为不同金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌表面蛋白表达的影响图；
图6为不同金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌抗氧化能力的影响图，其中A为T-AOC指标，B为DPPH自由基清除率指标；
图7为金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠体重和肝脏指数的影响图；
图8为金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠血清ALT、AST和TG水平的影响图，中A为ALT指标，B为AST指标，C为肝脏中TG指标，D为血清中TG指标；
图9为金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠肝脏组织病理学的影响图；
图10为金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠肝脏中氧化应激指标的影响图，其中A为CAT指标，B为SOD指标，C为GPx指标，D为MDA指标；
图11为金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠肝脏炎症指标的影响图，其中A为LPS指标，B为TNF-α指标，C为IL-6指标，D为IL-8指标，E为MPO指标，F为NO指标；
图12为金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠肠道微生物丰度的影响图；
图13为金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠肠道菌群属分类水平上相对丰度的影响图。
具体实施方式
以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
一、实验测定方法
(1)菌种活化与培养
将适量MRS液体培养基灭菌，溶解嗜酸乳杆菌菌种干粉，将其均匀涂布于MRS琼脂培养基上，于37℃培养箱培养至长出单菌落，挑取单菌于已经灭菌的MRS液体培养基中活化两次，混匀后按2％(v/v)的接种量接种到MRS液体培养基中，37℃静置培养至菌悬液OD600达到1.8左右。
MRS液体培养基的组分为：蛋白胨10g/L、牛肉浸粉8g/L、酵母浸粉4g/L、葡萄糖20g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、乙酸钠5g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.04g/L、吐温80 1g/L，pH为5.7±0.2。
(2)不同金属离子对嗜酸乳杆菌CICC 6074生长情况的影响将培养活化了18h的二代菌按2％(v/v)的接种量接种到已经灭菌的分别添加有不同摩尔浓度的钙、镁、锰、铁(以元素的量计)的MRS液体培养基中，其中Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+的摩尔浓度分别设置为0、2、10、50mM，37℃静置培养，每隔3h分别随机取出菌液检测OD600值，通过检测不同摩尔浓度Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+胁迫下的乳酸菌OD值，确定各离子对菌生长的最适影响浓度。
(3)不同金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌CICC 6074酸耐受存活率的影响将嗜酸乳杆菌以2％的接种量分别接入含有10mM Ca2+，10mM Mg2+，10mM Mn2+，2mM Fe2+的MRS液体培养基中，于37℃静置培养18h，在4℃条件下3000×g离心5min，收集菌体，用预冷灭菌的生理盐水洗涤菌体两次并收集，将所得菌体分别重悬于pH为2.5的MRS培养基中，静置于37℃培养箱中胁迫3h，每间隔1.5h取菌液平板涂布分析其中的活菌数。计算金属离子处理对乳酸菌酸耐受存活率的影响，公式如下：
存活率M1：pH 2.5胁迫后的活菌数；M0：pH 2.5胁迫前的活菌数。
(4)扫描电镜观察乳酸菌细胞形态
将嗜酸乳杆菌CICC 6074以2％的接种量接入正常MRS以及分别含有10mM Ca2+，10mM Mg2+，10mM Mn2+，2mM Fe2+的MRS培养基中，于37℃静置培养18h，在4℃条件下3000×g离心10min，收集菌体，用预冷的灭菌生理盐水洗涤菌体，分别重悬于pH为2.5的MRS培养基和正常MRS培养基中，37℃静置胁迫3h。离心收集菌体并用PBS清洗3次，分别加入戊二醛常温固定过夜，3000×g离心15min去除上清。预冷的PBS洗涤3次，再用30％、50％、70％、80％、90％、95％和100％的乙醇梯度洗脱，每次8～10min，最后加入准备好的乙酸异戊酯置换20min，收集菌体冷冻干燥。取适量冻干样品均匀涂于碳导电胶带上，置于样品室喷金，处理结束后放入扫描电子显微镜中观察。
(5)流式细胞仪检测乳酸菌细胞膜情况
将嗜酸乳杆菌CICC 6074以2％的接种量分别接入含有10mM Ca2+，10mM Mg2+，10mMMn2+，2mM Fe2+的MRS肉汤培养基中，于37℃静置培养18h，在4℃条件下3000×g离心5min，收集菌体，用预冷的灭菌生理盐水洗涤菌体两次并收集，将所得菌体分别重悬于pH为2.5的MRS培养基中37℃静置胁迫3h。10000×g离心10min收集菌体，重悬于0.85％的生理盐水中孵育1h且每隔15min混合一次，10000×g离心10min，0.85％生理盐水再洗涤两次后重悬。将等量荧光染料的SYTO 9和碘化丙锭(PI)混合在微量离心管中，每毫升菌悬液中加入3μL染料混合物，室温避光孵育15分钟，用流式细胞仪进行检测。
(6)不同金属离子对嗜酸乳杆菌表面蛋白的影响
将嗜酸乳杆菌CICC 6074以2％的接种量分别接入含有10mM Ca2+，10mM Mg2+，10mMMn2+，2mM Fe2+的MRS肉汤培养基中，于37℃静置培养18h，取35mL左右菌液至50mL灭菌后的离心瓶中，在4℃6000×g条件下离心10min，弃去上清液，收集菌体沉淀。用灭菌后的PBS溶液(0.1mol/L，pH＝7.4)洗涤菌体，将其溶解后再次离心(6000×g，10min)，重复三次后备用。配制5mol/L，pH＝2.0的酸性氯化锂溶液，按1L菌体加15mL酸性LiCl的比例将LiCl加入菌体中，在冰水浴下反应30min后，于冷冻离心机中，8000×g，离心20min，弃去菌体沉淀，收集上清液，即为粗提的嗜酸乳杆菌表面蛋白。
(7)不同金属离子对嗜酸乳杆菌抗氧化活性的影响
收集不同金属离子预胁迫组酸耐受前后的嗜酸乳杆菌，用生理盐水洗涤2次并悬于其中，用于抗氧化活性的检测。
①总抗氧化能力(T-AOC)的测定
使用总抗氧化能力(T-AOC)试剂盒测定。测定原理是：ABTS在有氧化性物质存在的条件下会生成绿色的ABTS+，测定405nm吸光值可计算出样品的总抗氧化活性。其中Trolox是VE的一种类似物，将其抗氧化活性视为1，结果表示为Trolox当量。
②DPPH自由基清除率的测定
用无水乙醇为溶剂，配制0.2mmol/L的DPPH溶液，充分混匀后避光放置。将1ml待测样品和1ml 0.2mmol/L的DPPH溶液混合均匀，作为实验组；1ml待测样品与1ml无水乙醇混合均匀，作为空白组；1ml无水乙醇与1ml 0.2mmol/L的DPPH溶液混合均匀，作为对照组；暗室反应30min，测定混合液在517nm处的吸光度，按照下列公式计算清除率。注：Ai为实验组吸光值，Aj为空白组吸光值，A0为对照组吸光值。
(8)金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌菌剂的制备
将活化好的L.acidophilus CICC 6074以2％的接种量分别接入空白MRS、含有10mM Mn2+或2mM Fe2+的MRS肉汤培养基中，于37℃静置培养18h，在4℃条件下3000×g离心10min，收集菌体，无菌生理盐水洗涤3次。用质量分数0.9％的无菌生理盐水调整菌体浓度为2.0×107和2.0×109CFU/mL。
(9)实验动物分组灌胃及取样
健康的野生型C57BL/6小鼠81只(雄性，7～8周龄，体重20-23g)将小鼠圈养在22±2℃的受控环境中，湿度40～60％，光/暗周期12h。小鼠适应性喂养1周，期间标准饲料喂养且自由饮水，并对其体重和总体健康状况进行密切监测。然后将小鼠随机分为9个组，每组9只，分别为空白对照组(Control)、模型组(Model)、阳性对照组(谷胱甘肽，GSH)、H-M(高剂量L.acidophilus CICC 6074)、L-M(低剂量L.acidophilus CICC 6074)、H-Mn(高剂量Mn2+预胁迫的L.acidophilus CICC 6074)、L-Mn(低剂量Mn2+预胁迫的L.acidophilus CICC6074)、H-Fe(高剂量Fe2+预胁迫的L.acidophilus CICC 6074)、L-Fe(低剂量Fe2+预胁迫的L.acidophilus CICC 6074)，其中高、低剂量分别代表菌体浓度为(2×109CFU/mL)和(2×107CFU/mL)。每组小鼠具体灌胃安排如下表：
表1小鼠分组及每日灌胃情况
适应性喂养1周后，连续17天。每天在处理前，对小鼠的生长状况进行记录，观察有无死亡情况，精神状态和活动能力是否正常等。在12～17天中，灌胃乳酸菌4小时后，除正常组给予等量蒸馏水外，其他组所有小鼠均给予56°酒精(12mL/kg)，记录所有小鼠体重。末次灌胃后小鼠禁食12h，正常饮水，麻醉后眼球取血，颈椎脱臼处死，收集血液和组织样本。血液样本于室温下静置1h，在4℃条件下1500×g离心10min，收集上层血清-80℃条件下保存，用于后续生化分析。无菌条件下解剖小鼠，将各组织分离，其中肝脏分为两部分，一部分置于-80℃冰箱中用于生化指标分析，另一部分置于4％多聚甲醛中用于病理学分析，于无菌条件下，在冰上将小鼠的盲肠内容物收集入无菌的冻存管中，置于-80℃冰箱中，用于肠道菌群组成分析。
(10)肝脏氧化及炎症指标检测
取收集的血清样本，参照试剂盒说明，采用96孔板微板法检测谷氨酸-丙酮酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯含量(TG)。此外，-80℃的冰箱中取约100mg肝脏组织块，快速剪碎组织块至于离心管中，每0.1g加入2mL预冷的生理盐水，置于匀浆器中，冰浴充分研磨，使组织匀浆化，在4℃条件下5000×g离心10min，取上清液，根据试剂盒检测肝脏中的脂质(TG含量)，氧化指标(SOD、GPx、CAT、MDA、NO的含量)和炎症指标(LPS、TNF-α、IL-8、IL-6和MPO含量)。
(11)肠道菌群测定
按照QIAamp DNA Stool Mini Kit试剂盒说明对小鼠盲肠内容物中细菌总DNA进行抽提，使用1％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的提取质量，使用NanoDrop 2000测定DNA浓度和纯度，通过聚合酶链式反应(PCR)扩增细菌16S rRNA基因，引物：338F(5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAG-3’)和806R(5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’)。PCR反应体系为：5×TransStart FastPfu缓冲液4μL，2.5mM dNTPs 2μL，上游引物(5uM)0.8μL，下游引物(5uM)0.8μL，TransStart FastPfu DNA聚合酶0.4μL，模板DNA 10ng，ddH2O补足至20μL。扩增程序：95℃预变性3min，27个循环(95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸45s)，然后72℃稳定延伸10min，最后在4℃进行保存。
PCR扩增回收产物利用AxyPrep DNA Gel Extraction Kit(Axygen Biosciences，Union City，CA，USA)进行回收纯化，用QuantusTM Fluorometer(Promega，USA)对回收产物进行检测定量，使用NEXTflexTM Rapid DNA-Seq Kit(Bioo Scientific，USA)进行建库，利用Illumina公司的Miseq PE300/NovaSeq PE250平台进行测序。采用微生物16S rRNA使用UPARSE软件(http://drive5.com/uparse/)将97％相似度的序列进行OTUs聚类并剔除嵌合体。采用RDP-classifier对OUTs代表序列进行序列分类注释，应用Mothur软件(version1.30.2)比对Silva数据库进行单个样品物种Shannon多样性分析，应用QIIME(Version1.9.1)分析样本的α-多样性和β-多样性，统计每个样本的群落组成。在上述分析的基础上，应用R软件进行后续统计学及可视化分析。
二、具体实施例
实施例1金属离子对嗜酸乳杆菌生长及耐酸存活情况的影响
本实验选取了4种2价金属离子：Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+，考察不同金属离子对嗜酸乳杆菌CICC 6074生长情况的影响，将嗜酸乳杆菌CICC 6074静置培养于添加了0、2、10、50mM金属离子的MRS培养基中，定期取样，测定不同时间的OD600绘制其生长曲线，观察不同金属离子对菌生长速率的影响情况，结果如图1A-D所示，相比于空白MRS组，2mM浓度的Ca2+、Mg2 +、Mn2+、Fe2+对嗜酸乳杆菌CICC 6074的生长速度有一定的促进作用，其中Ca2+和Mg2+对CICC6074的促进效果最明显。添加10mM浓度的Ca2+、Mg2+、Mn2+培养的乳酸菌显著提高了嗜酸乳杆菌达到稳定期时的OD600值，培养24h时菌液OD值分别为1.916±0.011、1.954±0.009、1.922±0.052，而纯MRS培养基中培养的菌液OD600为1.865±0.007，此外，10mM浓度的Fe2+对菌的生长产生了一定的抑制作用。随着浓度增加到50mM时Mn2+也表现出了对菌体生长的抑制作用。根据此结果，选择2mM浓度的Fe2+和10mM浓度的Ca2+、Mg2+、Mn2+作为后续实验中的菌体的预胁迫浓度。
进一步考察了2mM浓度的Fe2+和10mM浓度的Ca2+、Mg2+、Mn2+预胁迫的嗜酸乳杆菌CICC 6074在pH＝2.5酸环境下存活能力的变化情况。结果如图2所示，金属离子的预胁迫显著提高了嗜酸乳杆菌酸耐受的存活能力，酸耐受1.5h时，空白MRS组活菌数为2.05×105CFU/mL，存活率为63.56％，Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe2+的预胁迫显著提高了菌体的存活率，活菌数上升了1-2个数量级，其中添加Mn2+预胁迫后的效果最为明显，活菌数为3.75×107CFU/mL，存活率上升到90.22％，是空白MRS组的1.42倍。酸耐受3小时，空MRS组活菌数仅为1.10×104CFU/mL，存活率为48.54％，而Ca2+、Mg2+、Fe2+的预胁迫显著提高了菌体酸耐受的存活能力，活菌数分别达到了1.91×106、9.1×105、1.25×106CFU/mL，存活率显著提升(P<0.05)，Mn2+的保护效果更为显著，活菌数达到了8.77×106CFU/mL，存活率为82.62％，是空白MRS的1.70倍。此结果表明金属离子预胁迫可以有效提高嗜酸乳杆菌CICC 6074低酸条件下的存活能力，其中Mn2+的保护效果相对更佳。
实施例2
金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌酸耐受后形态的影响
为了更清楚的观测金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌CICC 6074酸耐受的影响，本实验进一步通过扫描电镜对菌体形态进行了观察。结果如图3所示，正常状态下的菌体形态，结构保持良好，细胞膜均呈现出完整平滑的状态；经过pH 2.5酸耐受3h后的嗜酸乳杆菌菌体表面变得粗糙，出现不规则的凹陷，类似“苦瓜”表面；Ca2+预胁迫的菌体分泌了丝状物质使菌贴合更为紧密，这与前面的生物膜分泌结果相吻合，可能因此提高了菌在低酸环境中的存活情况；Mg2+预胁迫并没有改善菌在酸耐受后的形态，部分菌体甚至出现了细胞塌陷、细胞膜破损以及胞内物质外溢现象；Mn2+离子预胁迫的菌在酸耐受3h后形态最为完好，只有少量菌体表面出现轻微粗糙，几乎没有出现细胞膜破碎以及胞内物质外溢的现象；Fe2+离子预胁迫的乳酸菌在酸耐受后体型相对缩小，且分布较为分散，菌体表面仍有少许凹陷，未见细胞膜破碎现象，有分泌物附着于菌体表面，形态较pH 2.5组有所改善。以上结果表明，当嗜酸乳杆菌遭遇酸处理前，Mn2+离子预胁迫缓解了嗜酸乳杆菌CICC 6074酸处理产生的细胞膜毛糙与破裂现象，有效地维持了菌体形态。
实施例3
金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌酸耐受后细胞膜完整性的影响
通过荧光探针对嗜酸乳杆菌CICC 6074酸处理前后的细胞膜完整性进行了检测。SYTO-9是一种绿色荧光染料，可以穿透具有完整细胞膜的细菌使其染成绿色，PI是一种红色荧光染料，只能渗透细菌受损的细胞膜使其染成红色。通常情况下，SYTO-9染色剂会标记出一个群体中所有的细菌，即细胞膜完整的细菌和细胞膜受损的细菌，而PI仅能标记细胞膜受损的细菌，通过SYTO-9和PI两种荧光染料可以区分嗜酸乳杆菌CICC 6074酸耐受后的死活及细胞膜完整情况。结果如图4所示，正常MRS培养的菌红色荧光强度最弱，占比只有10.7％，pH＝2.5酸处理3h后红色荧光标记死菌所占比率为40.2％，相比原MRS组明显增加，金属离子预胁迫对酸处理导致的红色荧光增加有所缓解，Mn2+和Fe2+预胁迫的效果相对明显，细胞膜受损情况显著降低，红色荧光标记的死菌所占比率分别降为28.3％和29.8％。金属离子预胁迫的确缓解了酸耐受过程导致的细胞膜损伤，这也是其提高菌体酸耐受存活率的原因之一，其中Mn2+和Fe2+预胁迫对嗜酸乳杆菌CICC 6074酸耐受的保护效果最好，这与实施例2扫描电镜的观察结果相吻合。
实施例4
金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌S-层蛋白分泌的影响
表层蛋白分泌：收集不同金属离子预胁迫的嗜酸乳杆菌，用灭菌后的PBS溶液(0.1mol/L，pH＝7.4)洗涤菌体，配制5mol/LpH＝2.0的酸性氯化锂溶液，按1L菌液加15mL酸性LiCl的比例将LiCl加入菌体中，在冰水浴下反应30min后收集上清，即为粗提的表层蛋白，SDS-PAGE检测表层蛋白差异。
不同金属离子预胁迫改变了菌表面蛋白各组分的占比，如图5所示，其中45KD处的条带在之前研究中被鉴定为嗜酸乳杆菌CICC 6074的S-层蛋白。相比于空白MRS组，Ca2+和Mg2+处理都改变了菌表面蛋白的占比，其中分子量为33KD、45KD、65KD的表面蛋白占比增加，10mM浓度的Mg2+对S-层蛋白的表达有促进作用。相比之下，10mM浓度的Mn2+和Fe2+预胁迫对菌体S-层蛋白表达量的影响最为突出，同等条件下45KD处表面蛋白占比明显提高。结果发现，不同金属离子预胁迫可以改变乳酸菌表面蛋白的占比，其中，Mn2+和Fe2+预胁迫显著提高了S-层蛋白的含量。
实施例5
金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌抗氧化能力的影响
不同金属离子预胁迫对嗜酸乳杆菌CICC 6074酸耐受前后抗氧化能力的影响通过T-AOC(结果如图6A所示)和DPPH自由基清除率(结果如图6B)所示来反映。Mn2+预胁迫显著提高了嗜酸乳杆菌CICC 6074的抗氧化能力，总抗氧化能力T-AOC由最初的0.129mM Trolox当量提升至0.217mM Trolox当量，DPPH自由基清除率由61.59％提升至71.35％。pH＝2.5酸处理后，嗜酸乳杆菌CICC 6074的T-AOC和DPPH自由基清除率分别提升至0.193mM Trolox当量和73.69％(P<0.05)。Fe2+预胁迫同样显著提高了嗜酸乳杆菌CICC 6074酸耐受前后抗氧化能力，但抗氧化能力略低于Mn2+预胁迫的提升效果。Ca2+、Mg2+预胁迫后嗜酸乳杆菌CICC6074的抗氧化能力虽也有变化，但未出现统计学意义(P>0.05)。综上所述，Mn2+和Fe2+预胁迫可以显著提高嗜酸乳杆菌CICC 6074酸耐受前后的抗氧化能力。
实施例6
金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠体重和肝脏指数的影响
实验期间，各组小鼠未出现异常体征，无死亡情况。空白对照组小鼠动作敏捷，精神活跃，食欲良好；酒精灌胃后，模型组在被灌胃酒精半小时后有些小鼠出现暂时性的兴奋，而后则出现了不同程度的精神萎靡、活动迟缓、食欲不振及嗜睡醉酒状态，乳酸菌灌胃组一般状况较模型组有所改善，食量增加，醉酒状态有所减轻。体重变化如图7A所示，与模型组的小鼠相比，正常组小鼠体重(20.41±0.94g)有显著性差异(P<0.05)，各乳酸菌灌胃组小鼠的体重变化不大，只有L-Mn和L-Fe组展现出了统计学意义，小鼠体重基本都维持在19g左右。肝脏情况如图7B和C所示，正常对照组小鼠肝脏色泽鲜亮，呈红褐色；模型组肝脏外观发白，弥漫性肿大且边缘稍钝，有油腻感，小鼠肝脏指数较正常组有所增加，表明模型组小鼠肝脏出现了肿大、脂肪积累的病变现象；各乳酸菌灌胃组肝脏指数更接近正常组，肝脏色泽有所恢复。以上结果说明L.acidophilus CICC 6074摄入可以抑制小鼠肝体重系数的上升，减轻肝脏的肿大，进而缓解酒精对小鼠的毒害作用。
实施例7
金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠血清ALT、AST和TG水平的影响当酒精刺激时，肝细胞会发生损伤或坏死，导致细胞膜通透性会增加，胞内ALT和AST泄漏到血液，因此常把血清中ALT和AST的含量作为评测肝损伤程度的指标。由图8A和B可知，相比对照组小鼠，酒精灌胃使得模型组小鼠血清中的ALT和AST活性显著性升高(P<0.01)，表明肝细胞已经受损，侧面反映了急性酒精肝损模型建立成功。与模型组比较，高剂量H-M、H-Mn和H-Fe组小鼠血清中ALT显著降低(P<0.01)，均达到了阳性药物GSH的治疗效果，且H-M和H-Mn组小鼠血清中AST含量较H-Fe组更低(P<0.05)，但是均未达到空白对照组水平；低剂量L-M、L-Mn和L-Fe组小鼠血清组血清中ALT和AST也有所降低，但没有高剂量组保护效果好，之间无显著差异(P>0.05)。综上表明，各预胁迫嗜酸乳杆菌可以缓解酒精引起小鼠肝脏损伤，其中H-Mn组效果更好。
酒精肝的另一个表现就是脂肪代谢的紊乱，酒精会诱导肝细胞内TG(甘油三酯)的合成，造成肝细胞内的脂肪蓄积，过多的脂质会占据肝细胞的胞质空间，导致其功能障碍。因此我们对肝脏和血清中的TG含量进行了检测，结果如图8C和D所示，与对照组相比，模型组小鼠肝脏和血清中TG的含量明显升高(P<0.01)，表明酒精诱使小鼠肝脏出现脂质堆积现象。各胁迫L.acidophilus CICC 6074干预后小鼠血清和肝脏中的TG含量均显著降低(P<0.05)，其中H-Mn组肝脏中TG含量下降最为明显，可以达到阳性药物GSH的治疗效果。高剂量H-M、H-Mn和H-Fe组小鼠血清中TG含量显著降低(P<0.05)，低剂量L-Fe组小鼠血清中TG含量下降最为明显。综合以上结果表明，Mn2+和Fe2+预胁迫可以使嗜酸乳杆菌更有效地缓解酒精引起小鼠肝脏和血清的脂肪堆积情况，缓解小鼠体内脂质代谢紊乱状况。
实施例8
金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对对小鼠肝脏组织病理形态的影响
采用H&E染色法对小鼠肝脏组织的病理情况进行分析，结果如图9所示。正常组小鼠肝细胞形态正常，肝小叶结构完整，肝索结构以中央静脉为中心呈放射状排列，边界清晰，有较多的双核细胞，未见明显的炎性浸润；相比正常组，模型组小鼠肝小叶结构紊乱，大部分肝细胞体积增大，细胞间无明显的界限，致使肝索拥挤，肝窦狭窄甚至消失，胞浆内出现大小不等的脂肪空泡，小叶内出现炎症细胞浸润。与模型组相比，阳性药组肝脏组织仍可见圆形空泡，但体积变小且数量减少，细胞边界趋于明显，肝窦间无可见明显炎症细胞浸润，双核细胞数目增加。相比模型组，H-M、H-Mn和H-Fe组肝索排序逐渐恢复整齐，核仁清晰，双核细胞增多，细胞形态正常，无明显炎症细胞浸润，但H-M组肝细胞仍相对肥大，H-Fe组肝细胞仍可见较多脂滴。L-M、L-Mn和L-Fe组肝小叶结构较模型组均有所改善，肝索排序相对清晰，但胞内仍然存在较多脂滴，此结果与图7C的肝脏外形观测及图8C中肝脏TG检测相呼应。Mn2+预胁迫嗜酸乳杆菌更好的缓解了酒精肝的病变现象。
实施例9
金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠肝脏中氧化应激指标(CAT,SOD,GPx,MDA)的影响
通过检测肝脏中CAT、SOD、GPx和MDA的含量，考察了各预胁迫嗜酸乳杆菌在体内的抗氧化调控能力。结果分别如图10A、图10B、图10C和图10D所示，模型组小鼠肝脏中CAT、SOD和GPx酶活力下降，MDA含量上升，与对照组相比具有极显著性差异(P<0.01)，表明酒精摄入已经引起了小鼠肝脏的氧化应激反应。与模型组相比，高剂量预胁迫的嗜酸乳杆菌干预后小鼠肝脏中的SOD、GPx和CAT酶活力均显著性升高(P<0.01)，而MDA含量极显著性减少(P<0.01)。其中H-M和H-Mn组的CAT酶活力均已略高于阳性药物GSH的治疗水平，较空白对照组无显著性差异(P>0.05)；H-Mn和H-Fe组干预对SOD酶和GPx酶活力增强较为显著，也达到了GSH组的治疗效果(P>0.05)，较H-M组有所提升但没显著性差异(P>0.05)。SOD本身就是体内的抗氧化金属酶，Mn和Fe元素的富集可能提高了肝脏SOD的合成。此外，H-M、H-Mn和H-Fe组干预均使得MDA含量较模型组显著下降(P<0.01)，但没能达到GSH的治疗效果。以上结果表明，高浓度的预胁迫嗜酸乳杆菌干预能够提高机体对乙醇的还原能力，减轻线粒体脂质过氧化反应，从而起到保护肝脏的效果，其中，H-Mn组干预对抗氧化酶系(CAT、SOD、GPx)的提升效果更为突出。Mn2+预胁迫提高了嗜酸乳杆菌的体内抗氧化能力进而更好的缓解了酒精肝的病理现象。
实施例10
金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠肝脏炎症指标(LPS，TNF-α，IL-6，IL-8，MPO，NO)的影响；
急性酒精摄入后，模型组小鼠肝脏内LPS含量极显著增加(P<0.01)，表明LPS已渗透进入肝脏组织，高剂量H-M、H-Mn和H-Fe组干预都使小鼠肝脏的LPS含量极显著性降低(P<0.01)，均能达到GSH的治疗效果(P>0.05)，如图11A所示。低剂量干预后LPS有所下降，L-M效果不显著(P>0.05)，L-Mn和L-Fe较模型组显著降低(P<0.05)，与L-M组无显著差异。此外，酒精灌胃后，模型组小鼠肝脏中TNF-α、IL-6、IL-8、MPO和NO含量较空白对照组均极显著增加(P<0.01)，相应如图11B、图11C、图11D、图11E和图11F所示。高剂量H-M、H-Mn和H-Fe组干预使得小鼠肝脏TNF-α、IL-6、IL-8、MPO和NO的含量均极显著性降低(P<0.01)，其中H-Mn组肝脏中TNF-α、IL-6和NO含量相对更低，H-Fe组IL-8和NO含量相对较少，与空白对照组无显著差异(P>0.05)。Mn2+和Fe2+预胁迫提高了嗜酸乳杆菌的体内抗炎能力更好的缓解了酒精肝的病理现象。
实施例11
金属离子预胁迫嗜酸乳杆菌对小鼠肠道微生物的影响
如图12A、图12B和图12C所示，H-Mn和H-Fe组的Sobs、Ace和Chao1指数接近于空白对照组，而H-M组较模型组接近，表明H-Mn或者H-Fe干预能够使小鼠肠道中恢复至对照组水平。如图12D和图12E所示，模型组小鼠肠道中Simpson和Shannon指数相对于空白对照组均显著升高(P<0.05)，表明小鼠肠道菌种多样性增加，物种更加均匀，酒精暴露已经显著改变了肠道菌种所占比例(P<0.05)，H-M、H-Mn和H-Fe干预后Simpson和Shannon指数趋于空白对照组，小鼠肠道菌群开始恢复正常，H-Mn和H-Fe组效果更为显著。如图12F所示，Coverage均高于0.997表明样品覆盖率很高。
高剂量H-Mn组的干预使得小鼠肠道中Lachnospiraceae比例有所恢复，Lactobacillus、Enterorhabdus、Desulfovibrio、Akkermansia、Anaerostipes等部分有益菌相对丰度增加，而norank_f_Muribaculaceae、Candidatus Saccharimonas、Blautia等有害菌相对丰度降低，菌群朝空白对照组水平恢复(图13)。值得注意的是，H-Mn组乳杆菌属的相对丰度增加最为明显。这可能与Mn2+预胁迫显著提高了L.acidophilus CICC 6074的胃肠道存活能力有关。H-Fe组显著提高了益生菌Akkermansia的相对丰度，Akkermansia是一种粘液降解细菌，属于疣微菌门，可以定植于人体肠道粘膜层产生低聚糖和短链脂肪酸，激发机体的先天和获得性免疫系统并缓解炎症反应。综上所述，短期大量饮酒会造成小鼠肠道菌群紊乱，大量病原菌滋生，Mn2+和Fe2+预胁迫提高了嗜酸乳杆菌调节肠道菌群的能力，显著提高了小鼠肠道有益菌的相对丰度，其中H-Mn组菌群组成与空白对照组最为接近，且显著提高了乳杆菌属的相对丰度。
上述说明并非对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例。本技术领域的普通技术人员在本发明的实质范围内，做出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法，其特征在于包括以下步骤：将活化好的乳杆菌按体积比2％的接种量接入分别含有10mM钙、10mM镁、10mM锰或2mM铁离子的MRS肉汤培养基中，于37℃胁迫培养18h，在4℃条件下离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤2-5次后，即得到耐酸乳酸菌。
2.根据权利要求1所述的一种基于金属离子预胁迫制备乳酸菌菌剂的方法，其特征在于所述的乳酸菌为嗜酸乳杆菌CICC 6074。
3.一种权利要求1所述的制备方法制备的耐酸乳酸菌在制备益生菌功效增强剂或胃肠道保护剂中的应用。
4.一种权利要求1所述的制备方法制备的耐酸乳酸菌在制备抗氧化和/或抗炎药品中的应用。
5.一种权利要求1所述的制备方法制备的耐酸乳酸菌在制备预防急性酒精性肝损伤的食品和/或药品中的应用。
6.一种权利要求1所述的制备方法制备的耐酸乳酸菌在制备抗氧化酶CAT、SOD和GPx促进剂中的应用。
7.一种权利要求1所述的制备方法制备的耐酸乳酸菌在制备改善肠道菌群的组成结构的食品和/或药品中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311009662.0A CN117089508A (zh) | 2023-08-11 | 2023-08-11 | 一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202311009662.0A CN117089508A (zh) | 2023-08-11 | 2023-08-11 | 一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117089508A true CN117089508A (zh) | 2023-11-21 |
Family
ID=88782292
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202311009662.0A Pending CN117089508A (zh) | 2023-08-11 | 2023-08-11 | 一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117089508A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015118516A1 (en) * | 2014-02-10 | 2015-08-13 | Biofil Mikrobiológiai, Géntechnológiai És Biokémiai Kft. | Soil bacteria for inoculating stress soils |
| CN109097317A (zh) * | 2018-09-04 | 2018-12-28 | 江南大学 | 一种酸胁迫抗性提高的乳酸菌工程菌及其应用 |
| CN111235060A (zh) * | 2020-02-27 | 2020-06-05 | 陕西科技大学 | 一种提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法 |
| CN114426570A (zh) * | 2021-12-06 | 2022-05-03 | 南京师范大学 | 乳脂肪球膜蛋白在提高嗜酸乳杆菌酸胁迫抗性中的应用 |
-
2023
- 2023-08-11 CN CN202311009662.0A patent/CN117089508A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2015118516A1 (en) * | 2014-02-10 | 2015-08-13 | Biofil Mikrobiológiai, Géntechnológiai És Biokémiai Kft. | Soil bacteria for inoculating stress soils |
| CN109097317A (zh) * | 2018-09-04 | 2018-12-28 | 江南大学 | 一种酸胁迫抗性提高的乳酸菌工程菌及其应用 |
| CN111235060A (zh) * | 2020-02-27 | 2020-06-05 | 陕西科技大学 | 一种提高乳酸菌谷胱甘肽过氧化物酶酶活的方法 |
| CN114426570A (zh) * | 2021-12-06 | 2022-05-03 | 南京师范大学 | 乳脂肪球膜蛋白在提高嗜酸乳杆菌酸胁迫抗性中的应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 张钰等: "鼠李糖乳杆菌胁迫应答机制的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库工程科技Ⅰ辑》, no. 8, 15 August 2014 (2014-08-15), pages 68 - 69 * |
| 赵佳伟等: "金属离子对植物乳杆菌ＲS66CD 生物膜形成及环境耐受性的影响", 《食品与发酵工业》, vol. 45, no. 21, 31 December 2019 (2019-12-31) * |
| 赵欣等: "《益生菌与健康》", 30 November 2022, 中国纺织出版社 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2758109C2 (ru) | Бактерия lactobacillus rhamnosus для лечения, например, бактериального вагиноза | |
| CN100591756C (zh) | 一种新颖的耐酸耐胆盐、抗肠道致病菌和抗氧化能力鼠李糖乳杆菌株 | |
| CN110684697B (zh) | 一种具有抗氧化功能的发酵乳杆菌jx306及其用途 | |
| CN113061543A (zh) | 一种植物乳杆菌及其用途 | |
| CN112574924B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌菌株及其微生态制剂和应用 | |
| CN110023486B (zh) | 一种嗜酸乳杆菌及其培养方法和应用 | |
| CN115322932B (zh) | 一株具有解酒醒酒能力的植物乳植杆菌和应用 | |
| KR102251295B1 (ko) | 락토바실러스 살리바리우스 v133 균주의 사균체를 유효성분으로 함유하는 숙취 예방 또는 해소용 조성물 | |
| CN114561320B (zh) | 乳酸杆菌益生菌CGMCC No.1.13855在制备肝病治疗药物中的应用 | |
| CN114292795B (zh) | 乳酸杆菌益生菌CGMCC No.1.13855及在制备降脂药物中的应用 | |
| CN114107134B (zh) | 一株侧孢短芽孢杆菌及其应用 | |
| JP5740613B2 (ja) | 疾患の予防改善剤、持久力向上剤、抗疲労剤、並びにそれらを用いた医薬品および飲食品 | |
| CN116083325A (zh) | 一种改善幽门螺杆菌相关性胃肠疾病的鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
| CN115381860A (zh) | 一种保护酒精性肝损伤组合物及其制备方法与应用 | |
| CN107412272A (zh) | 植物乳杆菌在预防肠道屏障损伤中的应用 | |
| CN117143767B (zh) | 可调节肠道菌群的母乳源发酵粘液乳杆菌msjk0025及其应用 | |
| CN114533768B (zh) | 乳酸杆菌益生菌CGMCC No.1.13855在制备糖尿病治疗药物中的应用 | |
| CN114854623B (zh) | 德氏乳杆菌保加利亚亚种、含有该菌的菌剂及应用 | |
| CN117089508A (zh) | 一种基于金属离子预胁迫制备耐酸乳酸菌的方法及其应用 | |
| WO2018051895A1 (ja) | 乳酸菌を有効成分として含む、皮膚における特定細菌の異常増殖に起因する皮膚の状態の悪化を防止又は改善するための組成物 | |
| Lavanya et al. | Isolation and characterization of probiotic bacteria from the soil samples of the coastal areas of (Gudur division, Nellore Dt.) for utilization in Shrimp farming | |
| CN114426936A (zh) | 一种降亚硝酸盐的清酒乳杆菌及其在发酵香肠中的应用 | |
| CN114262671B (zh) | 一株可用于防治胆汁淤积型肝病的瑞士乳杆菌及其应用 | |
| CN113046274B (zh) | 缓解辣椒素致胃肠损伤的罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
| CN115975846B (zh) | 一株沙阿霉素链霉菌、其微生态制剂及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |