CN117088976B - 一种抗nfl的单克隆抗体 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种抗NFL的单克隆抗体,该单克隆抗体包括重链可变区与轻链可变区;所述重链可变区的互补决定区包括CDR1、CDR2、CDR3,其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:1、2、3所示;所述轻链可变区的互补决定区包括CDR1、CDR2、CDR3,其氨基酸序列分别如SEQ ID NO:10、11、12所示。本发明所述的单克隆抗体具有生物活性好的特点,对抗原亲和度高,具备优良的市场价值。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,涉及一种抗NFL的单克隆抗体。
背景技术
神经丝蛋白(NF)是在神经元的细胞质中发现的中间丝。它们是蛋白质聚合物,直径约10nm,长度许多微米。它们与微管和微丝一起形成神经元细胞骨架,神经元神经丝蛋白主要为轴突提供结构支持并调节轴突直径,影响神经传导速度。神经丝的蛋白质组成在不同的动物门中变化很大。大多数人都知道哺乳动物的神经丝。历史上,哺乳动物神经丝最初被认为仅由三种蛋白质组成,称为神经丝蛋白L(低分子量;NFL),M(中等分子量;NFM)和H(高分子量;NFH)。这些蛋白质是从轴突运输的研究中发现的,通常被称为“神经丝三联体”。
阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种常见的神经退行性疾病,临床特征主要表现为空间学习记忆等认知障碍和行为障碍。目前全球有数千万的AD患者,且逐年增加,攻克该疾病一直是亟待解决的医学难题。脑神经损伤包括脑外伤、脑血管硬化(脑溢血、脑血栓)后遗症、脑炎与脑膜炎后遗症、脱髓鞘疾病等脑血管病后遗症。
发明内容
为了解决现有技术中存在的技术问题,本发明提供了如下技术方案:
本发明提供了一种抗NFL蛋白的抗体或其抗原结合部分,包含:
(i)重链可变区结构域,其包括分别包含如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ IDNO:3所示的氨基酸序列的CDR1区、CDR2区和CDR3区,和
(ii)轻链可变区结构域,其包括分别包含如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ IDNO:12所示的氨基酸序列的CDR1区、CDR2区和CDR3区。
进一步,还包含:
(i)重链可变区框架区结构域,其包括分别包含如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQID NO:6、SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的FR1区、FR2区、FR3区和FR4区,和
(ii)轻链可变区框架区结构域,其包括分别包含如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列的FR1区、FR2区、FR3区和FR4区。
进一步,还包含:
(i)重链信号肽结构域,其包括如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列,和
(ii)轻链信号肽结构域,其包括如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。
进一步,所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示,所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示。
本发明的抗NFL蛋白的抗体或其抗原结合部分,可为单克隆的、多克隆的、鼠类的、嵌合的、灵长类化的、人源化的或全人抗体。本发明的抗NFL蛋白的抗体或其抗原结合部分,可为多聚、异二聚、半二聚(hemidimeric)、单价、二价、四价、双特异性的,并且可包括单链抗体。
涉及本发明的抗NFL蛋白的抗体或其抗原结合部分的任何实施方案中,抗体可在重链、轻链或两条链上经PEG化。
术语“NF蛋白”称为神经元神经丝蛋白,在神经元轴突部位高表达,发挥着维持轴突形态稳定,保证神经元信号传导的功能。神经纤维丝轻链(NFL)是神经元神经丝蛋白(NF)的重要组成亚基,作为神经元轴突主要的细胞骨架蛋白。
本发明提供了一种多核苷酸分子或包含其的载体,所述多核苷酸分子包括编码前面所述的抗体或其抗原结合部分的核苷酸序列。
进一步,所述多核苷酸分子包含:
(i)编码重链可变区结构域的核苷酸序列,其包括分别包含编码如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的CDR1区、CDR2区和CDR3区的核苷酸序列,和
(ii)编码轻链可变区结构域的核苷酸序列,其包括分别包含编码如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列的CDR1区、CDR2区和CDR3区的核苷酸序列。
进一步,所述编码重链可变区结构域CDR1区的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示。
进一步,所述编码重链可变区结构域CDR2区的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。
进一步,所述编码重链可变区结构域CDR3区的核苷酸序列如SEQ ID NO:21所示。
进一步,所述编码轻链可变区结构域CDR1区的核苷酸序列如SEQ ID NO:28所示。
进一步,所述编码轻链可变区结构域CDR2区的核苷酸序列如SEQ ID NO:29所示。
进一步,所述编码轻链可变区结构域CDR3区的核苷酸序列如SEQ ID NO:30所示。
进一步,所述多核苷酸分子还包含:
(i)编码重链可变区框架区结构域的核苷酸序列,其包括分别包含编码如SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的FR1区、FR2区、FR3区和FR4区的核苷酸序列,和
(ii)编码轻链可变区框架区结构域的核苷酸序列,其包括分别包含编码如SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列的FR1区、FR2区、FR3区和FR4区的核苷酸序列。
进一步,所述编码重链可变区框架区结构域FR1区的核苷酸序列如SEQ ID NO:22所示。
进一步,所述编码重链可变区框架区结构域FR2区的核苷酸序列如SEQ ID NO:23所示。
进一步,所述编码重链可变区框架区结构域FR3区的核苷酸序列如SEQ ID NO:24所示。
进一步,所述编码重链可变区框架区结构域FR4区的核苷酸序列如SEQ ID NO:25所示。
进一步,所述编码轻链可变区框架区结构域FR1区的核苷酸序列如SEQ ID NO:31所示。
进一步,所述编码轻链可变区框架区结构域FR2区的核苷酸序列如SEQ ID NO:32所示。
进一步,所述编码轻链可变区框架区结构域FR3区的核苷酸序列如SEQ ID NO:33所示。
进一步,所述编码轻链可变区框架区结构域FR4区的核苷酸序列如SEQ ID NO:34所示。
进一步,所述多核苷酸分子还包含:
(i)编码重链信号肽结构域的核苷酸序列,其包括编码如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的核苷酸序列,和
(ii)编码轻链信号肽结构域的核苷酸序列,其包括编码如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列的核苷酸序列。
进一步,所述编码重链信号肽结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO:27所示。
进一步,所述编码轻链信号肽结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO:36所示。
进一步,所述编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:26所示,所述编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:35所示。
本发明的DNA序列可含例如通过化学处理产生的合成DNA、cDNA、基因组DNA或其任何组合。本发明进一步提供含本发明的一种以上的核酸(例如DNA序列)的克隆或表达载体。
本发明提供了一种细胞,所述细胞包括前面所述的抗体或其抗原结合部分,或包括前面所述的多核苷酸分子或包含其的载体。
在某些方面,本发明涉及用于生产抗NFL蛋白抗体的方法,其包括在适合于由细胞产生抗NFL蛋白抗体的条件下,培养含上述任何载体的细胞。在一些实施方案中,该方法包括从细胞培养物中回收抗NFL蛋白抗体。
本发明所述的抗体或其抗原结合部分可另外经选择或改造,以减少相应的效应子功能。例如,可使抗体或其抗原结合部分无Fc区或恒定区序列,或缺乏功能Fc区或恒定区序列。
在某些其他的实施方案中,若Fc或恒定区序列存在于抗NFL蛋白的抗体或多肽中,则可对所述Fc或恒定区序列进行选择或改造,以含一种以上的修饰(例如,氨基酸置换、插入、加合或缺失),相对于含天然、亲本或未经修饰的Fc或恒定区序列的对照抗NFL蛋白的抗体,所述修饰减少或消除一种以上的效应子功能。
在本发明的一些实施方案中,Fc区(当存在时)是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体的Fc区,或者源自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4抗体。在一些实施方案中,可使用嫁接(hybrid)Fc区,即IgG1/IgG4嫁接Fc序列。
在某些其他的实施方案中,抗体的Fc部分的糖基化经减少或消除,或抗体的糖基化特征被改变。在某些备选实施方案中,修饰阻止在糖基化位点处的成熟N-聚糖的形成。
本发明提供了一种抗体偶联物,所述抗体偶联物包括前面所述的抗体或其抗原结合部分与治疗剂偶联形成的偶联物,及合适的药学载体。
在本发明的某些实施方案中,含变体Fc区的抗NFL蛋白抗体的经修饰的第一个氨基酸残基与功能部分连接。在进一步的实施方案中,功能部分是阻断部分、可检测部分、诊断部分或治疗部分、或其组合。在某些实施方案中,阻断部分可为例如半胱氨酸加合物、混合的二硫化物、聚乙二醇或聚乙二醇马来酰亚胺。在某些实施方案中,可检测部分可为例如荧光部分、发光部分或同位素部分。使用了诊断部分的实施方案中,诊断部分可能能够揭示病状、疾病或病症的存在。在其他实施方案中,可使用治疗部分,例如抗炎剂、抗癌剂、抗神经变性剂、对于除NFL外的分子选择的抗体、或抗感染剂。
在某些实施方案中,本发明的抗NFL蛋白抗体或核酸经可检测标记进行标记,所述可检测标记可为放射性同位素、酶、染料或生物素。在某些其他实施方案中,本发明的抗体与至少一种其他治疗剂缀合,所述治疗剂可为放射性同位素、放射性核酸、毒素、类毒素、非NFL蛋白特异性抗体多肽或片段(即,产生双特异性或多特异性抗体的)、或例如化学治疗剂。在另外其他的实施方案中,本发明的抗体与可为标记部分的显像剂缀合。标记剂可为生物素、荧光或发光部分、放射性部分、组氨酸标签或肽标签。在一些实施方案中,其可进一步含药学上可接受的载体。本发明的药物组合物可任选地进一步含另外的生物活性剂或治疗剂(例如免疫抑制或免疫调节化合物或制剂);或诊断剂。
本发明提供了一种组合物,所述组合物包括前面所述的抗体或其抗原结合部分,前面所述的多核苷酸分子或包含其的载体,前面所述的细胞,或前面所述的抗体偶联物。
在某些实施方案中,本发明的嵌合、人源化或人抗NFL蛋白抗体多肽是例如dAb、Fab、Fab’、scFv、Fv、二硫键合的Fv,或含单免疫球蛋白可变结构域,例如VH或VL结构域,其对于NFL蛋白结合特异且是单价的。
本发明提供了前面所述的抗体或其抗原结合部分、前面所述的多核苷酸分子或包含其的载体、前面所述的细胞、或前面所述的抗体偶联物在制备检测、预防或治疗神经元轴突损伤、神经损伤类疾病的产品中的应用。
进一步,所述产品包括药物、层析纸条、试剂盒。
进一步,所述神经损伤类疾病包括阿尔兹海默症、Pick病、中风、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化、外伤性中枢神经系统疾病、脊髓损伤疾病、多发性硬化、创伤性脑损伤、急性缺血性卒中。
本发明提供了一种非诊断和非治疗目的地检测待测样本中NFL蛋白的方法,所述方法包括如下步骤:将待测样本与前面所述的抗体或其抗原结合部分,或将待测样本与前面所述的抗体偶联物接触;检测NFL蛋白与前面所述的抗体或其抗原结合部分,或前面所述的抗体偶联物的复合物的形成。
在一个实施方案中,本发明提供是单克隆抗体的“抗NFL蛋白抗体”。单克隆抗体指得自基本上均质抗体群的抗体,即构成所述抗体群的单个抗体除可能的可少量存在的天然发生的突变外是相同的。修饰词“单克隆”指得自基本上均质的抗体群的抗体的特征,并且不解释为需要通过任何具体方法产生抗体。例如,根据本发明使用的单克隆抗体可通过由Kohler et al.,Nature,256:495(1975)首次描述的杂交瘤(鼠类或人的)方法制备,或可通过重组DNA方法(参见例如,US 4,816,567)制备。“单克隆抗体”也可使用例如Clacksonetal.,Nature,352:624-628(1991)和Marks et al.,JMol.Biol.,222:581-597(1991)中所述技术从噬菌体抗体文库中分离。还应当理解本发明的某些实施方案涉及含一种以上的不同单克隆抗体的组合物,所述单克隆抗体特异性结合NFL蛋白,即含具有不同表位特异性的多种单克隆抗体的多克隆抗体组合物。
在本发明的另一实施方案中,“抗NFL蛋白抗体”指是嵌合抗体的抗体、或其抗体衍生物或缀合物或抗原结合片段。嵌合抗体一般包括与另一个物种(一般是人)的恒定区融合的一个物种(一般是小鼠)的重链和/或轻链可变区(包括CDR和构架残基)。这些嵌合小鼠/人抗体含约75%人和25%小鼠氨基酸序列。人序列表示抗体的恒定区,而小鼠序列表示抗体的可变区(且因此含抗原结合位点)。
本发明的优点和有益效果:
本发明的抗体与重组及天然人神经纤维丝轻链蛋白有很好的亲和力,可作为体外诊断试剂的核心原料,应用于神经损伤类疾病及阿尔兹海默症检测试剂盒的开发和生产。
附图说明
图1是western检测抗体培养上清对重组抗原识别能力图;
图2是不同纯化抗体和18A12C11检测抗体联合检测与抗原结合的特异性图。
具体实施方式
实施例1抗NFL蛋白抗体的制备
1、实验方法
1)动物免疫:选取BALB/c小鼠,常规方法免疫。经三次免疫后,用间接ELISA方法测试抗血清效价,选取效价高的小鼠进行后续实验,使用western测试抗血清对重组抗原的识别。
2)脾细胞制备:引颈处死小鼠,无菌条件下取出脾脏,置于已消毒的90~100目不锈钢网中。用注射器向脾脏内注入3ml无血清培养液,反复抽吸数次获取细胞,再制成细胞悬液。把细胞悬液注入50ml离心管中,加10~20ml培养液,轻轻吹打数次,室温中静置5分钟。离心(800~1000转/分)计数,备用。
3)细胞融合:将小鼠骨髓瘤细胞和小鼠脾细胞按1:5比例混合,离心弃去上清,并以消毒滤纸吸净多余上清。将1ml 40%的PEG溶液60秒内逐滴加入到细胞团中,同时并不断轻微转动离心管。在不断转动的离心管中,60秒内逐滴加入1ml无血清培养液。而后于5分钟内缓慢加完20ml无血清培养基。离心(800转/分,8分钟),去上清,用完全培养液10ml悬浮,轻轻混匀。将细胞悬液加入96孔板内,每孔50微升。37℃CO2培养箱中培养24小时后更换成HAT选择性培养液。
4)融合后细胞培养:以NFL重组蛋白和HIS标签蛋白作为抗原包被酶标板,包被抗原浓度为1μg/ml,100μl/孔。包被缓冲液为PBS(PH=7.4)。4℃放置过夜。次日PBS洗涤3次,每次5分钟。以1% BSA封闭,每孔加入200μl。37℃恒温箱孵育2小时。弃去BSA,加入含有单克隆抗体的细胞培养上清,每孔100μl。以小鼠的阳性抗血清作为阳性对照,以空白培养上清作为阴性对照。37℃恒温箱孵育2小时。弃去一抗,洗涤液洗5次,加Peroxidase-AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG,37℃恒温箱孵育1小时。加入底物显色后,以酶标仪测定吸光值。
将检测的阳性细胞进行再一轮的克隆化培养,经验证后确定阳性细胞株,增殖后进行冻存和体外培养。
2、实验结果
抗体对NFL重组蛋白的吸光值>1.7,远远大于阴性对照值0.067,对HIS标签蛋白的吸光值与阴性对照值相当,说明抗体对NFL重组蛋白抗原有很好的亲和力,结果如表1所示。B列数据是指对NFL抗原上标签的反应性,对标签蛋白不反应,说明对NFL蛋白反应的特异性。
表1单克隆抗体细胞培养上清识别重组蛋白
实施例2单克隆抗体的纯化及测序
1、实验方法
首先将产生单克隆抗体的培养液,应用半饱和、饱和硫酸铵进行沉淀,进行初步浓缩和纯化;再用亲和层析法进一步纯化。
1)用饱和硫酸铵溶液进行盐析。临用前取所需的量,用2mol/L NaOH调PH至7.8;将产生抗体的培养液移入烧杯中,边搅拌边滴加饱和硫酸铵溶液5ml,继续缓慢搅拌30分钟;10000rpm/min离心15分钟;弃去上清液,沉淀物用1/3饱和度硫酸铵悬浮,搅拌作用30分钟,同法离心;重复前一步1-2次;沉淀物溶于PBS(0.01mol/L PH7.2)缓冲液中。
用透析法对盐析样本进行脱盐。将透析袋于2% NaHCO3,1mmol/L EDTA溶液中煮10分钟,用蒸馏水清洗透析袋内外表面,再用蒸馏水煮透析袋10分钟,冷至室温即可使用。将盐析样品装入透析袋中,对50-100倍体积的PBS缓冲液透析(4℃)12-24小时,其间更换5次透析液,用萘氏试剂(碘化汞11.5g,碘化钾8g,加蒸馏水50ml,待溶解后,再加20% NaOH50ml)检测,直至透析外液无黄色物形成为止。
2)亲和层析法进行抗体纯化:将初步纯化的抗体溶液经过protein A/G亲和层析柱过滤,经过结合、洗脱、收集,得到高纯度的抗体。利用分光光度计测定抗体浓度。将纯化的抗体分装后在-80℃保存。
3)单克隆抗体序列的测定:取对数生长期的杂交瘤细胞,采用Invitrogen公司的Trizol抽提总RNA,逆转录生成cDNA。然后利用特异性引物PCR分别扩增其重、轻链可变区基因。PCR产物经电泳纯化后,通过TA克隆插入载体,测序、进行序列分析。
2、实验结果
18A12C11抗体序列检测结果如表2所示。
表2 18A12C11抗体的序列
实施例3 18A12C11抗体的功能鉴定
1、实验方法
1)以临床样本中的人神经纤维丝轻链蛋白作为抗原,以小鼠杂交瘤细胞18A12C11的单克隆细胞培养上清进行检测,使用间接ELISA方法检测抗体识别抗原的能力。
2)以临床样本中的人神经纤维丝轻链蛋白作为抗原,以小鼠杂交瘤细胞18A12C11的单克隆细胞培养上清进行检测,使用western blot检测抗体抗原的结合能力。
3)应用双抗体夹心ELISA方法,以3D1F9、5A6H6、14G11F12为包被抗体,以18A12C11-biotin抗体为检测抗体,检测抗体对抗原的识别和捕获作用。
以2.5μg/ml的纯化抗体包被酶标板,包被液为PBS(pH=7.4),4℃放置过夜。洗涤液洗涤3次,加入重组蛋白作为抗原,抗原浓度分别为0、1、10、100ng/ml。37℃孵育1小时。洗涤3次,加入生物素标记的检测抗体,浓度为1μg/ml。37℃孵育1小时。洗涤3次,加入HRP标记的链酶亲和素,与检测抗体结合,浓度为1mg/ml,1:10,000稀释,每孔加入100μl。37℃孵育30分钟。加底物显色,酶标仪测定吸光值。
4)将3D1F9、5A6H6、14G11F12抗体与抗体18A12C11-biotin配对组合,检测纯化抗体与抗原结合的特异性,将抗原进行倍比稀释,根据抗原浓度与吸光值进行绘图。
2、实验结果
以临床样本中的人神经纤维丝轻链蛋白作为抗原,以含有单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞培养上清进行检测。在目标位置,出现强阳性条带,说明抗体对临床样本中的抗原有很强的结合力,实验结果如图1所示。
双抗夹心ELISA检测结果如表3所示,抗体3D1F9、5A6H6、14G11F12与抗体18A12C11-biotin配对成功,随着抗体含量的增加,吸光值随之上升。抗原浓度为100ng/ml时,吸光值>2.6,明显高于阴性对照。说明该抗体对抗原有很强的识别和捕获作用。
抗体3D1F9、5A6H6、14G11F12与抗体18A12C11-biotin配对组合,对重组蛋白进行检测。将抗原浓度进行倍比稀释,根据抗原浓度与吸光值进行绘图,结果如图2中显示,随着抗原浓度升高,吸光值也随之升高,说明抗体与抗原结合具有特异性。
表3纯化抗体对Tau抗原的识别
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以对本发明进行若干改进和修饰,这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (32)
1.一种抗NFL蛋白的抗体或其抗原结合部分,包含:
(i)重链可变区结构域,其包括分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的CDR1区、CDR2区和CDR3区,和
(ii)轻链可变区结构域,其包括分别如SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列的CDR1区、CDR2区和CDR3区。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分,还包含:
(i)重链可变区框架区结构域,其包括分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的FR1区、FR2区、FR3区和FR4区,和
(ii)轻链可变区框架区结构域,其包括分别如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列的FR1区、FR2区、FR3区和FR4区。
3.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分,还包含:
(i)重链信号肽结构域,其包括如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列,和
(ii)轻链信号肽结构域,其包括如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。
4.如权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合部分,所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示,所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示。
5.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分,其特征在于,所述NFL蛋白包括神经纤维丝轻链蛋白。
6.一种多核苷酸分子或包含其的载体,所述多核苷酸分子包括编码权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合部分的核苷酸序列。
7.如权利要求6所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述多核苷酸分子包含:
(i)编码重链可变区结构域的核苷酸序列,其包括分别编码如SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2和SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的CDR1区、CDR2区和CDR3区的核苷酸序列,和
(ii)编码轻链可变区结构域的核苷酸序列,其包括分别编码如SEQ ID NO:10、SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列的CDR1区、CDR2区和CDR3区的核苷酸序列。
8.如权利要求7所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码重链可变区结构域CDR1区的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示。
9.如权利要求7所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码重链可变区结构域CDR2区的核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示。
10.如权利要求7所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码重链可变区结构域CDR3区的核苷酸序列如SEQ ID NO:21所示。
11.如权利要求7所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码轻链可变区结构域CDR1区的核苷酸序列如SEQ ID NO:28所示。
12.如权利要求7所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码轻链可变区结构域CDR2区的核苷酸序列如SEQ ID NO:29所示。
13.如权利要求7所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码轻链可变区结构域CDR3区的核苷酸序列如SEQ ID NO:30所示。
14.如权利要求6所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述多核苷酸分子还包含:
(i)编码重链可变区框架区结构域的核苷酸序列,其包括分别编码如SEQ ID NO:4、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列的FR1区、FR2区、FR3区和FR4区的核苷酸序列,和
(ii)编码轻链可变区框架区结构域的核苷酸序列,其包括分别编码如SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列的FR1区、FR2区、FR3区和FR4区的核苷酸序列。
15.如权利要求14所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码重链可变区框架区结构域FR1区的核苷酸序列如SEQ ID NO:22所示。
16.如权利要求14所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码重链可变区框架区结构域FR2区的核苷酸序列如SEQ ID NO:23所示。
17.如权利要求14所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码重链可变区框架区结构域FR3区的核苷酸序列如SEQ ID NO:24所示。
18.如权利要求14所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码重链可变区框架区结构域FR4区的核苷酸序列如SEQ ID NO:25所示。
19.如权利要求14所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码轻链可变区框架区结构域FR1区的核苷酸序列如SEQ ID NO:31所示。
20.如权利要求14所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码轻链可变区框架区结构域FR2区的核苷酸序列如SEQ ID NO:32所示。
21.如权利要求14所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码轻链可变区框架区结构域FR3区的核苷酸序列如SEQ ID NO:33所示。
22.如权利要求14所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码轻链可变区框架区结构域FR4区的核苷酸序列如SEQ ID NO:34所示。
23.如权利要求6所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述多核苷酸分子还包含:
(i)编码重链信号肽结构域的核苷酸序列,其包括编码如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列的核苷酸序列,和
(ii)编码轻链信号肽结构域的核苷酸序列,其包括编码如SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列的核苷酸序列。
24.如权利要求23所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码重链信号肽结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO:27所示。
25.如权利要求23所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码轻链信号肽结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO:36所示。
26.如权利要求23所述的多核苷酸分子或包含其的载体,其特征在于,所述编码重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:26所示,所述编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:35所示。
27.一种细胞,所述细胞包括权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合部分,或包括权利要求6-26任一项所述的多核苷酸分子或包含其的载体。
28.一种抗体偶联物,所述抗体偶联物包括权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合部分与可检测标记偶联形成的偶联物。
29.一种组合物,所述组合物包括权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合部分,权利要求6-26任一项所述的多核苷酸分子或包含其的载体,权利要求27所述的细胞,或权利要求28所述的抗体偶联物。
30.权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合部分、权利要求6-26任一项所述的多核苷酸分子或包含其的载体、权利要求27所述的细胞、或权利要求28所述的抗体偶联物在制备检测NFL蛋白的产品中的应用。
31.如权利要求30所述的应用,其特征在于,所述产品包括药物、层析纸条、试剂盒。
32.一种非诊断和非治疗目的地检测待测样本中NFL蛋白的方法,所述方法包括如下步骤:将待测样本与权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合部分,或将待测样本与权利要求28所述的抗体偶联物接触;检测NFL蛋白与权利要求1-5任一项所述的抗体或其抗原结合部分,或权利要求28所述的抗体偶联物的复合物的形成。
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