CN117063920A - 一种粪便样本的保存方法及其短链脂肪酸的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物样品保存和检测技术领域，具体提供了一种粪便样本的保存方法及其短链脂肪酸的检测方法。本发明的保存方法，使用碱性乙醇水溶液作为保存试剂，显著提高了粪便中短链脂肪酸的稳定性。本发明的检测方法适用于检测按本发明保存方法保存后的粪便样本，方法操作简单、准确度和灵敏度高，能同时检测7种短链脂肪酸的含量。此外，本发明的保存用试剂盒适用于本发明保存方法和检测方法，进一步提高了保存的稳定性和检测结果的准确性。
Description
技术领域
本发明属于生物样品保存和检测技术领域，具体涉及一种粪便样本的保存方法及其短链脂肪酸的检测方法。
背景技术
短链脂肪酸 (short-chain fatty acids, SCFAs) 是含有1~5个碳原子的脂肪酸，现也有将含有6个碳原子的脂肪酸（己酸）归入SCFAs，主要包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸等。动物体或人体的短链脂肪酸主要来源于膳食纤维和不可以消化糖的发酵。人体内的SCFAs主要生成部位是结肠。SCFAs也是肠道微生物发酵产生的最重要的终产物之一。结肠中产生的 SCFAs分为两种类型：直链（如甲酸、乙酸和丙酸）和支链SCFAs（如异丁酸和异戊酸）。作为关键信号分子，SCFAs与许多疾病的改善或恶化有关，包括免疫缺陷、结直肠癌、糖尿病和心血管疾病。粪便SCFAs常被用作生物标志物，对医学诊断和治疗的合理发展至关重要。
粪便成分复杂，如含有大量肠道微生物、活性酶等，致使常温下其中的SCFAs含量是不稳定的。在量化粪便中的SCFAs之前，如何正确的对粪便进行保存更为重要。目前粪便收集方法主要包括取样后立即液氮冷冻、粪便管收集、粪便收集卡等。在科学研究中，大部分的粪便样本采取，取样后立即冷冻，然后干冰寄送到公司检测。在临床检测试剂盒的使用过程中，立即冷冻对客户来说，条件较为苛刻，因此采用最简单的取样方式以及取样完成后常温寄送，实现量化，并且不影响SCFAs检测结果的准确可控尤为重要。
此外，现有的SCFAs的检测方法多需要进行衍生化，操作复杂，且需要使用酸、衍生剂等有害试剂，需要更简便、快速，能应用于临床实际的短链脂肪酸检测方法。
发明内容
在收集临床粪便样本进行短链脂肪酸的检测过程中，我们发现粪便样本在室温放置较短时间后（如室温放置24h），与0小时相比，短链脂肪酸的检测结果也会存在显著差异（含量变化超过15%）。为了提高粪便样本的稳定性，我们参考发明专利“CN115486439A粪便保存方法、乙醇在制备粪便保存液及短链脂肪酸检测试剂或试剂盒中的应用”的方法使用乙醇水溶液对粪便样本进行保存，发现该方法能提高粪便样本的稳定性，但是稳定性结果并不理想，特别是其中己酸的稳定性不满足稳定性时间要求。
针对上述问题，首先，本发明提供了一种粪便样本的保存方法，该方法包括：将待保存的粪便样本与保存液混合，所述保存液包括乙醇水溶液，所述乙醇水溶液为碱性。
在一些实施方式中，所述乙醇水溶液为50%~90%乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为50%~75%乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为70%~75%乙醇水溶液；优选地，所述乙醇水溶液为75%乙醇水溶液。
在一些实施方式中，所述乙醇水溶液的pH值为8及以上；优选地，pH值为8~11；优选地，pH值为8~10；优选地，pH值为8。
在一些实施方式中，所述内标为短链脂肪酸检测用内标。
优选地，所述内标包括异己酸。
优选地，所述内标包括短链脂肪酸的同位素内标。
在一些实施方式中，所述短链脂肪酸包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸中的一种或多种。
优选地，所述短链脂肪酸包括己酸。
在一些实施方式中，所述粪便样本与乙醇水溶液的重量体积比为50mg:0.5mL~2.0mL。
优选地，所述粪便样本与保存液的重量体积比为50mg:1.0mL~2.0mL。
优选地，所述粪便样本与保存液的重量体积比为50mg:1.0mL~1.5mL。
优选地，所述粪便样本与保存液的重量体积比为50mg:1.5mL。
在一些实施方式中，所述方法还包括：将粪便样本与保存液的混合体系置于密封环境中保存；优选地，保存温度为室温及以下。
第二方面，本发明提供了一种粪便样本中短链脂肪酸的检测方法，所述方法用于检测上所述粪便样本中短链脂肪酸的含量。
在一些实施方式中，所述方法包括：
步骤一：将待保存的粪便样本与保存液混合后或取通过前述方法保存一段时间后的粪便样本，研磨和/或超声提取，得提取液；
步骤二：用酸水溶液对提取液进行稀释；
步骤三：用有机溶剂对步骤二稀释后的溶液进行萃取，分层后取有机层；
步骤四：取步骤三的有机层进行短链脂肪酸的检测。
在一些实施方式中，步骤三中有机溶剂包括甲基叔丁基醚、正己烷、乙醚中的一种或多种。
优选地，所述有机溶剂包括甲基叔丁基醚。
在一些实施方式中，步骤一中所述保存液为75%乙醇水溶液。
在一些实施方式中，步骤二和步骤三中的提取液、酸水溶液和有机溶剂的体积比为20:5~30:40~80（200μL:50μL~300μL:400μL~800μL）。
优选地，提取液、酸水溶液和有机溶剂的体积比为20:10~30:60~80（200μL:100μL~300μL:600μL~800μL）。
优选地，提取液、酸水溶液和有机溶剂的体积比为20:10:60~70（200μL:100μL:600μL~700μL）。
在一些实施方式中，所述酸水溶液为盐酸、硫酸或磷酸中一种或多种的酸的水溶液；优选地，所述酸水溶液为盐酸水溶液。
在一些实施方式中，步骤四用GC-MS进行短链脂肪酸的检测。
优选地，GC-MS的GC条件包括：使用HP-INNOWAX，30m×0.25mm×0.25μm色谱柱，程序升温程序包括：初始温度90℃，保持0min；然后以30℃/min的速率升温至130℃，保持0min；以5℃/min的速率升温至150℃，保持0min；以25℃/min的速率升温至230℃，保持0min；进样口温度：250℃。
优选地，GC-MS的MS条件包括：使用EI电离源，电离能量为70eV，采样SIM模式。
优选地，乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸的定量离子分别为60、70、72、60、60、60、60；乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸的同位素内标的定量离子分别为63、77、76、63、63、63、63。
第三方面，本发明提供了一种粪便样本短链脂肪酸的检测试剂盒，该试剂盒包括：保存液、稀释剂、萃取试剂。
所述保存液用于保存和提取粪便样本，所述保存液包括碱性乙醇水溶液。这里的保存液即是保存试剂也是提取试剂。
所述稀释剂包括酸水溶液，酸水溶液用于酸化以及稀释提取试剂。
所述萃取试剂为有机试剂，优选地，所述有机试剂为甲基叔丁基醚、正己烷、乙醚中的一种或多种，萃取试剂用于将稀释剂酸化和稀释后的保存液中的短链脂肪酸提取出来。
在一些实施方式中，所述保存液、酸水溶液和有机试剂的体积比为50~200:5~30:40~80（500μL~2000μL:50μL~300μL:400μL~800μL）。
优选地，保存液、酸水溶液和有机溶剂的体积比为100~200:10~30:60~80（1000μL~2000μL:100μL~300μL:600μL~800μL）。
优选地，保存液、酸水溶液和有机溶剂的体积比为150:10:60~70（1500μL:100μL:600μL~700μL）。
第四方面，本发明提供了一种粪便样本采集和保存试剂盒，该试剂盒包括前述的保存液。
此外，该试剂盒还包括：保存装置，所述保存装置包括：保存腔，用于放置样本和/或保存液；所述保存腔包括第一开口端，样本和/或保存液通过该第一开口端进入保存腔中。
在一些实施方式中，所述保存装置包括：第一密封盖体，用于密封第一开口端，第一密封盖体与第一开口端可拆卸式连接。
在一些实施方式中，所述保存装置还包括：密封件，用于密封第一开口端，该密封件位于第一开口端和第一密封盖体之间。
在一些实施方式中，所述保存装置还包括检漏元件，使用所述第一密封盖体密封所述第一开口端时，所述检漏元件位于两者的封口处，用于检测是否存在样本和/或保存液泄露.
优选地，所述检漏元件包括pH试纸。
在一些实施方式中，所述保存装置还包括储液腔，该储液腔用于盛放储存液且所述保存腔位于所述储液腔内部；所述储液腔包括第二开口端，储存液通过该第二开口端进入储液腔。
优选地，所述储存液与保存液相同，如储存液为乙醇水溶液。
优选地，所述保存装置还包括第三密封盖体，所述第三密封盖体用于密封储液腔的第二开口端。
优选地，所述第三密封盖体包括挡板，该挡板的一端与第三密封盖体的内表面连接成一圈，当第三密封盖体与第二开口端密封连接时，所述挡板的另一端插入储液腔内的储存液中，保存腔位于挡板中间，从而使保存腔处于双层密闭环境中。
在一些实施方式中，所述试剂盒还包括粪便采集装置，所述采集装置包括采样杆，该采样杆的一端设置有采样头，所述采样头用于采集粪便样本。
在一些实施方式中，所述采样头的另一端为第二密封盖体，所述第二密封盖体能密封所述第一开口端。
与现有技术相比，本发明至少具有以下优势中的一种：
（1） 本发明的保存方法能提高粪便样本的稳定性，尤其是提高粪便样本中短链脂肪酸检测结果的稳定性，使长期保存后的粪便样本短链脂肪酸的检测结果与新鲜样本的结果一致。
（2） 本发明的粪便样本短链脂肪酸的检测方法适用于检测碱性乙醇水溶液保存的粪便样本，方法操作简单，准确度和灵敏度高，能同时检测粪便样本中的7种短链脂肪酸。
（3） 本发明的粪便采集和保存试剂盒，能用于粪便样本的采集和保存，能使粪便样本在室温下一周内短链脂肪酸检测结果稳定，因此，可用于粪便样本的常温运输，简化了运输过程，降低了运输成本。同时，该试剂盒的密封性好，能防止保存液的挥发性损失，进一步提升保存效果，提高了短链脂肪酸检测结果的准确性。
附图说明
图1 溶剂空白的代表性色谱图（TIC：总离子流图）；
图2 样品空白的代表性色谱图；
图3 对照品溶液的代表性色谱图；
图4 样品溶液的代表性色谱图；
图5 样品溶液的质谱图；
图6 一种保存装置的结构示意图；
图7 使用图6装置密封保存保存液时的示意图；
图8 一种粪便采集装置的示意图；
图9 另一种粪便采集装置的示意图；
图10 使用图6装置进行样本保存时的示意图；
图11 另一种保存装置的结构示意图；
图12 使用图11装置密封时的示意图；
图13 一种保存腔和检漏元件设置的示意图；
图14 另一种保存装置的结构示意图；
图15 使用图14装置密封时的示意图；
图16 另一种粪便采集装置；
图17 使用图16和图11装置保存采集的样本的示意图；
图18 另一种样本密封保存的示意图。
具体实施方式
下面结合附图与实施例对本发明作进一步的说明。应当指出的是，实施例只是对本发明的详细阐述，不能以此限定本发明的保护范围，本发明的实施例中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均能够以任何方式组合，均在本发明的保护范围之内。本发明未涉及的技术均可通过现有技术加以实现。
本申请具体实施例中使用的物料和设备信息列举如下，在具体实施例或比较例中不再一一赘述。
表 试剂来源信息表
表 仪器信息表
表 待测短链脂肪酸和同位素内标及对照品信息表
实施例1 一种粪便样本的保存方法
保存液的配制：按体积比配制乙醇水溶液，调节pH至碱性。
取粪便样本，加入同位素内标溶液和保存液，密封保存。或者，将同位素内标溶于保存液中，取粪便样本，加入保存液，密封保存。粪便样本重量与加入的保存液的体积比为：50mg : 0.5 mL ~2.0mL，保存液应能浸没粪便样本。
实施例2 一种粪便样本中短链脂肪酸的检测方法
1、溶液配制
（1）样本溶液
取实施例1保存的粪便样本；或者，取新鲜粪便样本，同实施例1加入内标和保存液，粪便样本重量与加入的保存液的体积比为50mg : 0.5mL ~2.0mL。研磨。离心取上清，加入酸水溶液酸化和稀释，用有机溶剂萃取，取上层有机层即得样本溶液。
（2）对照品溶液
取乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸对照品，加入同位素内标，稀释，配制成一系列梯度浓度的对照品溶液。
2、GC-MS条件
色谱柱：HP-INNOWAX，30m×0.25mm×0.25μm。
程序升温：初始温度90℃，保持0min；然后以30℃/min的速率升温至130℃，保持0min；以5℃/min的速率升温至150℃，保持0min；以25℃/min的速率升温至230℃，保持0min；进样口温度：250℃。
进样方式：分流进样，分流比为10:1；载气：氦气；离子化方式：电子轰击源(EI)；离子源温度：300℃；传输线温度：250℃；电离能量：70eV；溶剂延迟：2.5min；采用选择离子模式（SIM）扫描，待测短链脂肪酸及内标得定量离子如下表所示。
表 短链脂肪酸及内标的定量离子信息表
溶剂空白（有机溶剂）、空白溶液（不加样本，其他配制过程同样本溶液）、对照品溶液、样本溶液的代表性色谱图分别如图1-图4所示，样本溶液的代表性质谱图如图5所示。
比较例1不同保存液的对比研究
取来自健康人的新鲜粪便样本，每份称取约50mg于密封管中，平行称取多份。分别加入1.5mL纯乙醇、75%乙醇、50%乙醇、90%乙醇，密封后，室温下保存。分别于0h、12h、24h、48h取一份样品，加入同位素内标，放入高通量组织研磨仪中，60Hz 研磨60 s，重复2次，超声20min，12000 rpm 4℃离心5 min，取上清于1.5mL离心管；加入100μL稀盐酸，混合均匀，加入700μL甲基叔丁基醚萃取，离心，取上清上机检测。其他同实施例2，进行粪便中短链脂肪酸的定量检测，试验结果如下表：
表 纯乙醇作为保存液时粪便中短链脂肪酸在室温保存下的稳定性结果
备注：变化率=（保存一段时间时测得的含量-0h测得的含量）/0h测得的含量×100%，下同。
表 50%乙醇作为保存液时粪便中短链脂肪酸在室温保存下的稳定性结果
表 75%乙醇作为保存液时粪便中短链脂肪酸在室温保存下的稳定性结果
表 90%乙醇作为保存液时粪便中短链脂肪酸在室温保存下的稳定性结果
对比上表结果可知，使用75%乙醇保存粪便样本时，短链脂肪酸的检测结果最稳定；75%乙醇保存的稳定性结果优于50%乙醇的，优于90%乙醇的，优于纯乙醇。这可能与乙醇水溶液抑制微生物或酶的作用有关。粪便中是存在大量肠道菌群的，在室温下，这些微生物活动会影响粪便组成，包括影响短链脂肪酸含量，乙醇水溶液能抑制甚至杀死这些微生物，尤其是75%乙醇效果更优，因此，可以提高粪便中短链脂肪酸的稳定性。
然而即使使用75%乙醇保存粪便样本，待测短链脂肪酸的变化率仍然较大，例如48h时IBA的变化率达到了8.91%，特别是VA和CA的变化率分别达到了-11.11%、-10.42%，这样很难保证粪便样本更长时间保存后7种短链脂肪酸检测结果的准确性。
比较例2内标和保存液pH值优化
取75%乙醇溶液，用氢氧化钠溶液分别调节pH值至8、9、10、11。取来自健康人的新鲜粪便样本，称取约50mg于密封管中，平行称取多份。分别加入1.5mL不同pH值的75%乙醇溶液，密封后，室温下保存。分别于0h、12h、24h、48h取一份样品测定其中的短链脂肪酸含量，其他检测条件同对比例1。试验结果如下表：
表 75%乙醇作为保存液且不调pH时粪便中短链脂肪酸在室温保存下的稳定性结果
表 75%乙醇作为保存液且pH=8.0时粪便中短链脂肪酸在室温保存下的稳定性结果
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表 75%乙醇作为保存液且pH=9.0时粪便中短链脂肪酸在室温保存下的稳定性结果
表 75%乙醇作为保存液且pH=10.0时粪便中短链脂肪酸在室温保存下的稳定性结果
表 75%乙醇作为保存液且pH=11.0时粪便中短链脂肪酸在室温保存下的稳定性结果/>
由上表结果可知，将乙醇水溶液的pH调至碱性可以有效提高粪便中短链脂肪酸检测结果的稳定性，可能是由于在碱性条件下，短链脂肪酸呈离子状态，难发生挥发损失。同时，碱性条件也改变了原本的粪便中酶和微生物的环境，进一步抑制了酶和/或微生物的生物作用，从而减少了对短链脂肪酸含量的影响。pH=8.0、9.0、10.0和11.0条件下7种短链脂肪酸的稳定性结果是类似的，没有明显差异。然而，意外的是，随着pH值增大，PA、IBA、BA、IVA、VA的含量呈下降趋势，特别是IVA和VA的含量下降明显。这可能是由于水溶性差的短链脂肪酸在碱性条件下的溶解性变得更差，也可能是调节pH至碱性后影响了短链脂肪酸的质谱响应，另外，粪便成分复杂，也可能发生了其他反应，具体原因需要进一步研究。因此，优选地，调整保存液的pH值为碱性；更优地，pH值为8.0~10.0；更优地，pH值为8.0~9.0；最优地，pH值为8.0。
为了进一步提高样本放置后检测结果的准确性，取新鲜样本，立马加入含有内标的乙醇水溶液。具体为：取来自健康人的新鲜粪便样本，每份称取约50mg于密封管中，加入含有内标的75%乙醇水溶液（该溶液中内标及浓度为：AA-d4、PA-d3、BA-d7浓度为25μg/mL，IBA-d6、IVA-d9浓度为5μg/mL，VA-d9、CA-d11浓度为2.5μg/mL），平行配制多份，密封。室温放置，分别于0h、12h、24h、48h取一份样品测定其中的短链脂肪酸含量，放入高通量组织研磨仪中，60Hz 研磨60 s，重复2次，超声20min，12000 rpm 4℃离心5 min，取上清于1.5mL离心管；加入100μL稀盐酸，混合均匀，加入700μL甲基叔丁基醚萃取，离心，取上清上机检测，其他条件同实施例2。试验结果如下表：
表 不调pH时内标对粪便中短链脂肪酸稳定性结果的影响/>
意外的是，短链脂肪酸的稳定性检测结果反而变差。这说明待测短链脂肪酸与内标的变化是不一致的，可能是内标为氘代试剂，在溶液中氘氢被替换，稳定性差，也可能是由于内标为游离脂肪酸酸形式，更容易挥发损失。
同时，取来自同一健康人的新鲜粪便样本，每份称取约50mg于密封管中，加入含有内标的75%乙醇水溶液（pH=8.0，AA-d4、PA-d3、BA-d7浓度为25μg/mL，IBA-d6、IVA-d9浓度为5μg/mL，VA-d9、CA-d11浓度为2.5μg/mL），平行配制多份，密封。室温放置，分别于0h、12h、24h、48h取一份样品同上测定其中的短链脂肪酸含量，试验结果如下表：
表 pH=8.0时内标对粪便中短链脂肪酸稳定性结果的影响
由上表结果可知，短链脂肪酸的稳定性检测结果得到极大改善，这说明碱性条件极大提高了同位素内标的稳定性，同时该条件下，同位素内标和待测短链脂肪酸的变化趋势类似，进一步保证了检测结果的准确性。这可能是由于pH为碱性时，短链脂肪酸内标以盐形式存在，更难挥发损失，此外，碱性溶液体系中游离氢离子减少，氘代氢更难被取代，内标稳定性提高。另外，在不调pH条件下，粪便中短链脂肪酸即存在酸形式，也存在盐形式，盐形式的短链脂肪酸与酸形式的氘代内标差异更大，碱性条件下粪便中短链脂肪酸和氘代内标均为盐形式，二者的性质更为接近，内标能更好的校正误差及变化。
比较例3 保存液（提取试剂）的体积优化过程
乙醇水溶液即作为粪便的保存液，也是粪便中短链脂肪酸的提取试剂。在保存粪便样本时，乙醇水溶液体积能使粪便样本浸没完全即可，但提取粪便中的短链脂肪酸时，还需要考虑提取效率和灵敏度。为了提高检测方法的灵敏度，我们曾尝试对提取粪便样本后的乙醇水溶液进行浓缩，这样一方面操作复杂，另一方面效果并不理想，短链脂肪酸较容易挥发且含量低，在浓缩过程易损失，测得的含量值偏小，且检测结果的重复性差。因此，需要考虑在不进行浓缩的情况下使提取试剂中的短链脂肪酸浓度更高同时使检测结果更准确，我们对提取试剂的体积进行了考察，具体为：平行称取多份50mg粪便样本，分别加入0.5mL、0.8 mL、1.0 mL、1.5mL、2mL保存液（75%乙醇：pH=8.0，AA-d4、PA-d3、BA-d7浓度为25μg/mL，IBA-d6、IVA-d9浓度为5μg/mL，VA-d9、CA-d11浓度为2.5μg/mL），放入高通量组织研磨仪中，60Hz 研磨60 s，重复2次，超声20min，12000 rpm 4℃离心5 min，取上清于1.5mL离心管；加入100μL稀盐酸，混合均匀，加入700μL甲基叔丁基醚萃取，离心，取上清上机检测。其他同实施例2，进行粪便中短链脂肪酸的定量检测，检测在同一样品序列中进行，试验结果如下表。
表 不同提取试剂体积下粪便中短链脂肪酸的检测结果-提取试剂中的浓度（μg/mL）
表 不同提取试剂体积下粪便中短链脂肪酸的检测结果-含量（μg/mg）/>
如上表所示，增加提取试剂体积可以更好地将粪便中地短链脂肪酸溶解出来，检测的含量呈增大趋势，至提取试剂体积增大至1.0mL时，含量基本不再增加，同时，随着提取试剂体积增大，待测短链脂肪酸浓度下降，方法的检出限下降。综合考虑检出限和含量结果，优选提取试剂体积为1.0~2.0mL，更优为1.0~1.5mL，最优为1.5mL。
比较例4萃取过程研究
为了提高粪便的稳定性，同时简化短链脂肪酸的检测过程，我们开始使用纯乙醇对粪便样本进行保存，后进行研磨提取，离心取上清，进GC-MS检测。除了上述比较例1中存在的粪便样本短链脂肪酸在纯乙醇中的稳定性较差外的问题外，我们还发现直接用乙醇保存液提取，进样检测，检测结果的重复性很差，因而无法进行粪便中乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸这7种短链脂肪酸的定量检测。
粪便样本成分复杂，乙醇水溶液又是一种普适的提取剂，除了粪便中的短链脂肪酸外，还能提取其他大量成分，例如长链脂肪酸、氨基酸、蛋白、多糖等等，提取后直接进样会存在污染峰以及损害GC-MS仪器系统。使用乙醇水溶液保存粪便样本后，进行短链脂肪酸提取和直接进样也存在相同的污染问题，此外，乙醇水溶液中含有大量的水，直接进样，也会损坏GC系统，而使用顶空进样又难以获得理想的检测灵敏度。
因此，为了减少干扰和污染，在乙醇水溶液保存和提取后，需要将乙醇水溶液中的短链脂肪酸分离出来，同时还需要兼顾灵敏度。我们使用乙醇水溶液提取粪便样本后，离心取上清液，使用了不同的有机溶剂进行萃取，包括甲基叔丁基醚、正己烷、乙醚。试验过程发现，直接添加这些有机溶剂，均没有分层，无法进行萃取过程。这可能是由于上清液中乙醇含量过高，导致了乙醇、水和萃取试剂三者的互溶。进一步，考虑萃取操作以及酸形式短链脂肪酸极性低，在萃取试剂中的溶解性优于盐形式的脂肪酸，我们使用稀酸对上清液进行稀释，再分别使用甲基叔丁基醚、正己烷、乙醚进行萃取。
（1）不同萃取试剂
平行称取多份50mg健康人的粪便样本，加入1.5 mL保存液（75%乙醇：pH=8.0，AA-d4、PA-d3、BA-d7浓度为25μg/mL，IBA-d6、IVA-d9浓度为5μg/mL，VA-d9、CA-d11浓度为2.5μg/mL）；放入高通量组织研磨仪中，60Hz 研磨60 s，重复2次，超声20min，12000 rpm 4℃离心5 min，取上清200μL于1.5mL离心管；加入100μL稀盐酸，混合均匀，加入700μL甲基叔丁基醚或正己烷或乙醚进行萃取，离心，取上清上机检测。GC-MS检测条件同实施例2。
使用不同有机溶剂萃取的试验结果如下表：
表 使用不同萃取试剂时粪便中短链脂肪酸的检测结果（μg/mg）/>
由上表结果可知，使用甲基叔丁基醚萃取时，IBA、BA、IVA、VA、CA的含量检测结果与使用正己烷和乙醚萃取时的结果无明显差异，AA和PA的含量检测结果高于使用正己烷和乙醚萃取时的结果，尤其是AA的含量检测结果。这说明甲基叔丁基醚能更好的将AA和PA萃取出来，同时，考虑正己烷和乙醚更容易挥发，优选萃取试剂为甲基叔丁基醚。
（2）上清液（提取液）、稀释剂及萃取试剂的体积优化过程
上清液、稀释剂和萃取试剂三者体积会相互影响，并且会影响方法的灵敏度。例如，在一定范围内，稀释剂或萃取试剂体积增加同样会产生稀释作用，降低方法检出限；在一定范围内，上清液体积增加，对应稀释剂的体积也需要增加才能保证酸化和分层，对应萃取试剂体积也需要进行调整才能更好的将乙醇水体系中的短链脂肪酸萃取出来。
进一步，我们对上清夜、稀释剂和萃取试剂的体积比进行了研究，具体为：平行称取多份50mg健康人的粪便样本，加入1.5 mL保存液（75%乙醇：pH=8.0，AA-d4、PA-d3、BA-d7浓度为25μg/mL，IBA-d6、IVA-d9浓度为5μg/mL，VA-d9、CA-d11浓度为2.5μg/mL）；放入高通量组织研磨仪中，60Hz 研磨60 s，重复2次，超声20min，12000 rpm 4℃离心5 min，取200μL的上清液，加入不同体积的稀释剂（稀盐酸）和不同体积的萃取试剂（甲基叔丁基醚），进行萃取。上清液、稀释剂和萃取试剂体积及分组研究情况如下表：
表 上清夜、稀释剂和萃取试剂的体积比研究分组情况/>
由表中结果可知，稀释剂体积过低时，加入萃取试剂后不能分层，当上清夜、稀释剂和萃取试剂体积比为20：5~30：40~80（200μL：50μL~300μL：400μL~800μL）时，有机相和水相能够分层。接着，取组3至组13的有机相层进GC-MS检测，GC-MS条件同实施例2，检测在同一样品序列中进行，检测结果如下表：
表 上清夜、稀释剂和萃取试剂的体积比不同条件下粪便中短链脂肪酸的检测结果（μg/mg）/>
由表中结果可知，组3的短链脂肪酸含量整体低于其他组；组4至组7的短链脂肪酸含量呈增大趋势，组7至组9的短链脂肪酸含量无明显差异；组10至组12的短链脂肪酸含量呈增大趋势；组13至组14的短链脂肪酸含量呈增大趋势；对比组7、组12、组14可知，三组短链脂肪酸的含量无明显差异。这些结果表明：随着萃取试剂体积增大，检测的短链脂肪酸含量呈增大趋势，当萃取试剂体积为600μL~800μL时，短链脂肪酸含量基本一致。这可能是由于萃取试剂体积增大能更好的将水相中的待测短链脂肪酸萃取出来。除了稀释剂体积为50μL外，其体积从100μL增大至300μL，短链脂肪酸含量呈略微下降的趋势，但变化不明显。可能是由于稀释剂体积过低时，难以保证水相和有机相很好的分层。当能保证水相和有机相分层后，增大稀释剂体积即使萃取时水相体积增大，水相体积增加对有机溶剂萃取效果的影响较小。
综上，上清液、稀释剂及萃取试剂的比体积可以为20：5~30：40~80（200μL：50μL~300μL：400μL~800μL）；优选为20：10~30：60~80（200μL：100μL~300μL：600μL~800μL）。综合考虑方法的灵敏度，上清液、稀释剂及萃取试剂的体积优选为20：10~30：60~70（200μL：100μL~300μL：600μL~700μL），更优为20：10：60~70（200μL：100μL：600μL~700μL）。
需要说明的是，这里的稀释剂一方面起酸化作用，不限于盐酸溶液，也可以是硫酸、硝酸、磷酸等其他酸类的水溶液，酸的浓度可以为1%、2%、10%、25%、50%等等，只要能使溶液体系变为酸性即可；另一方面，稀释剂起到稀释乙醇，增加溶液中水的比例的作用，需要为水溶液。
除上述说明外，在进行方法摸索过程中，我们还对短链脂肪酸检测的其他条件参数进行了研究，例如研磨时间、是否超声、超声时间等，结果发现这些条件对方法的影响较低，使用现有条件即可，故未在此一一列举。
实施例3分析方法验证
1.稳定性试验
平行称取多份50mg健康人的粪便样本于离心管中，加入1.5 mL保存液（75%乙醇：氢氧化钠调pH至8.0，AA-d4、PA-d3、BA-d7浓度为25μg/mL，IBA-d6、IVA-d9浓度为5μg/mL，VA-d9、CA-d11浓度为2.5μg/mL），密封，分别于室温和-20℃下保存。
在0h、12h、24h、48h、72h、7天分别取出室温下保存的样本，放入高通量组织研磨仪中，60Hz 研磨60 s，重复2次，超声20min，12000 rpm 4℃离心5 min，取上清200μL于1.5mL离心管；加入100μL稀盐酸，混合均匀，加入700μL甲基叔丁基醚进行萃取，离心，同实施例2进行检测。
在0h、24h、48h、72h、7天、14天、30天、3个月分别取出-20℃下保存的样本，放入高通量组织研磨仪中，60Hz 研磨60 s，重复2次，超声20min，12000 rpm 4℃离心5 min，取上清200μL于1.5mL离心管；加入100μL稀盐酸，混合均匀，加入700μL甲基叔丁基醚进行萃取，离心，同实施例2进行检测。
稳定性试验结果如下表所示：
表 室温下稳定性试验结果
表 -20℃下稳定性试验结果/>
由上表结果可知，使用所述方法保存粪便样本时，7天室温保存后短链脂肪酸含量的检测结果与0h相比的变化率低于15%，说明粪便样本在室温下保存7天是稳定的。同理，粪便样本在在-20℃下保存3个月稳定。按现在的运输速度，一周基本可以实现样本的全国运输，甚至全世界运输，7天的稳定性可以满足基本的样本运输要求，因此，可将该粪便保存方法用于粪便样本的室温运输，有效解决了低温运输的成本和不便利问题。同时，使用本文的粪便保存方法可以在低温条件下进行粪便样本的长期保存。
2.线性
取乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸对照品，加入同位素内标，如下表，用甲基叔丁基醚稀释，配制成一系列梯度浓度的对照品溶液，按实施例2条件进GC-MS检测。
表 对照品溶液及其理论浓度（μg/mL）/>
根据对照品溶液的检测结果，拟合标准曲线，线性试验结果如下表所示：
表 线性试验结果
由上述结果可知，线性相关系数r均大于0.99，说明AA、PA、IBA、BA在0.1~500μg/mL，IVA在0.025~125μg/mL以及VA、CA在0.01~50μg/mL的范围内的线性良好。
3.精密度试验
（1）重复性试验
平行称取6份同一健康人的粪便样本，每份称取约50mg于离心管中，分别加入1.5mL 75%乙醇溶液（pH=8.0，AA-d4、PA-d3、BA-d7浓度为25μg/mL，IBA-d6、IVA-d9浓度为5μg/mL，VA-d9、CA-d11浓度为2.5μg/mL），放入高通量组织研磨仪中，60Hz 研磨60 s，重复2次，超声20min，12000 rpm 4℃离心5 min，取上清于1.5mL离心管；加入100μL稀盐酸，混合均匀，加入700μL甲基叔丁基醚萃取，离心，取上清，其他同实施例2，进行粪便中短链脂肪酸的定量检测。重复性试验结果如下表所示：
表 重复性试验结果/>
（2）中间精密度试验
同重复性试验配制3份样品溶液进行检测，连续进行3天，中间精密度试验结果如下表：
表 中间精密度试验结果
由上述结果可知，粪便中短链脂肪酸含量的检测精密度良好，检测结果的稳定性高。
3.准确度试验
称取乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸的对照品，用75%乙醇（pH=8.0，AA-d4、PA-d3、BA-d7浓度为25μg/mL，IBA-d6、IVA-d9浓度为5μg/mL，VA-d9、CA-d11浓度为2.5μg/mL）溶解，配制高、中、低浓度对照品储备液。同重复性项下配制样品溶液，将高、中、低浓度对照品储备液分别加入称好的粪便样本中，加入75%乙醇（pH=8.0，AA-d4、PA-d3、BA-d7浓度为25μg/mL，IBA-d6、IVA-d9浓度为5μg/mL，VA-d9、CA-d11浓度为2.5μg/mL），使加入的75%乙醇总体积为1.5mL，其他同样品溶液，配制成高、中、低浓度的加标溶液。进GC-MS检测，测定短链脂肪酸含量并计算回收率，回收率试验结果如下：
表 回收率试验结果
由上表结果可知，回收率在80%~120%范围内，方法的准确度良好。
实施例4一种粪便样本的采集和保存装置
本发明提供的一种粪便样本的采集和保存装置，该装置包括：保存装置和采集装置。
如图6-图7，保存装置包括：保存腔1、第一密封盖体2，其中，保存腔1中含有保存液5。在一些实施方式中，保存液5为上述的碱性75%乙醇水溶液，或含有内标的碱性75%乙醇水溶液。
在一些实施方式中，该装置还包括密封件6。现有生物样品的保存液多为水相体系，不含有易挥发的乙醇，如生理盐水、肝素钠水溶液等，使用第一密封盖体2进行密封就能满足密封要求。然而，我们使用的保存液中含有易挥发的有机溶剂（乙醇），容易挥发损失，对密封性提出了更高的要求。将保存液5置于保存腔1后，首先使用密封件6进行第一层密封，再进一步使用第一密封盖体2进行第二层密封。
在一些实施方式中，密封件6为塑封膜，可以与第一开口端11通过热塑封密封。当保存腔1为5mL离心管时，通过这样的双层密封的方式，我们将1.5mL pH=8.0的75%乙醇水溶液置于保存腔1中，结果发现保存液5几乎不发生挥发损失，室温下放置一年的损失率不超过0.1%。
在一些优选的实施方式中，保存装置还包括检漏元件3，检漏元件3紧贴保存腔1的第一开口端11外围，邻接外螺纹12的下方。检漏元件3也可以通过胶粘或封口膜固定的方式沿第一开口端11外围一圈分布。
如7，当第一密封盖体2与第一开口端12密封时，检漏元件3正好位于二者封口处，保存腔1中的液体泄露时则会首先接触检漏元件3，从而被检测到。
在一些实施方式中，检漏元件3为pH试纸。
优选地，在第一开口端11处设置有垫台13，垫台13为围绕第一开口端11的一圈凸起部分，其与检漏元件3相接。这样液体泄露时，垫台13能起到一定的聚集作用，能使泄露的液体更好的与检漏元件3接触。
在一些实施方式中，垫台13可以为弹性橡胶，在密封时其紧临第一密封盖体2的下端，可进一步加强密封性。
样本采集装置可以为如图8所示的采样杆7，该采样杆7包括采样头71，采样头71用于采集粪便样本。
在一些实施方式中，采样杆7的上端设置有卡扣72，对应在第一密封盖体2的内表面设置有卡套（图中未显示）。采用杆7采完样后，可以通过卡扣72与卡套嵌合，从而使采样杆7固定位于保存腔1中（如图10）。
在一些实施方式中，样本采集装置可以如图9所示，采样杆9一端连接于第二密封盖体8，另一端设置有采样头71。第二密封盖体8与第一密封盖体2相同，用于密封保存腔1，且第二密封盖体8与采样杆7连接，便于采样时抓握，方便患者采样。
当采集粪便样本后，可以打开第一密封盖体2和密封件6，如图10，立即使样本浸入保存液5中，并用第二密封盖体8进行密封，这样样本和保存液5的总重量在室温下放置一个月内的损失不超过0.2%，满足检测误差的要求，除此之外，这样能很好的保证粪便样本的稳定性。
实施例5 一种粪便样本的采集和保存装置
本发明提供的另一种粪便样本的采集和保存装置，该装置包括：保存装置和采集装置
如图11-图12，保存装置包括：保存腔1、储液腔9、第三密封盖体10。其中，第三密封盖体10的下表面设置有一圈挡板101。保存腔1中用于放置样本和/或保存液。
将保存液5加入保存腔1中，将储液腔9中加入储存液102，再将保存腔1置于储液腔9内，使用第三密封盖体10对第二开口端91进行密封，挡板102插入储存液102中，保存腔1位于挡板101中间。储存液102的液面应低于第一开口端11，高于挡板102的下端。挡板101内表面、第三密封盖体10内表面以及储存液102的液体表面构成密闭环境，对第一开口端11形成了很好的液体密封；同时，第三密封盖体10进一步对第二开口端91进行了物理密封，这样使保存腔1中的样本/和或样本保存液位于液体密封加结构密封的双层密闭环境中，极大提高了密闭性。
在一些实施方式中，保存液5为上述的碱性75%乙醇水溶液，或含有内标的碱性75%乙醇水溶液。
在一些实施方式中，储存液102为乙醇溶液，更优地，储存液102与保存液5相同。
在一些实施方式中，保存腔1的底部外表面与储液腔9的底部内表面存在固定连接结构，从而使保存腔1的更好的固定，防止倾倒。
需要注意的是，当样本和/或保存液置于保存腔1中时，所述装置不能颠倒，颠倒会导致样本和/或样本保存液从保存腔1中溢出。优选地，如图13，在保存腔1的第一开口端设置有检漏元件3，检漏元件3用于检测样本和/或样本保存液是否存在泄露。
在一些实施方式中，如图18，也可使用第一密封盖体2对保存腔1的第一开口端11进行密封，也可以在第一开口端11的外围设置检漏元件3、垫台13等结构。
在一些实施方式中，如图14，保存腔1由一圈圆柱体管壁与储液腔9底部内表面围成，进行样本和/或保存液密封保存时如图15所示。
在一些实施方式中，样本采集装置如上图8所示。其一端能与第三密封盖体10可拆卸式连接，另一端设置有采样用的采样头71。在一些实施方式中，采样杆7与第三密封盖体10一体连接，如图16所示，采样杆7位于挡板101的中间。采样完成后，如图17所示，将采样头71插入保存液5中，对样本和保存液5进行密封保存。
在一些实施方式中，采集装置如图8所示。保存装置如图11所示。使用图9装置采取粪便样本后，如图18，采样头71插入保存液5中，第一密封盖体2对保存腔1进行第一层密封。储存液102位于储液腔9中，储存液9的液面高于挡板101的底端，低于保存腔1的垫台13。第三密封盖体10与第二开口端91进行密封连接，这样储存液9液面、挡板101和第三密封盖体10形成第二层密封（液体密封），以及第三密封盖体10、储液腔9形成第三层密封。这样多重密封，能够更好保证保存腔1的密闭性，更好的防止保存液5或粪便中待测短链脂肪酸的挥发损失。进一步，垫台13上方也可设置检漏元件3，可用于检测样本保存液5是否泄露；或者，用于检测储存液102是否通过第一开口端11进入保存腔1。
实施例6 一种粪便样本的采集和保存试剂盒
一种粪便样本的采集和保存试剂盒，该试剂盒包括图6-图7所示的保存装置以及图8或图9所示的采集装置。其中，保存液5为碱性乙醇水溶液，优选地，乙醇水溶液中乙醇体积比为50%~90%，更优为50%~75%，最优为75%。优选地，碱性乙醇水溶液的pH值为8~11，更优pH值为8~9，最优为8。
在一些实施方式中，碱性乙醇水溶液中含有短链脂肪酸检测用的同位素内标，所述同位素内标为AA-d4、PA-d3、BA-d7、IBA-d6、IVA-d9、VA-d9、CA-d11中的一种或多种，优选地，AA-d4、PA-d3、BA-d7的浓度为25μg/mL，IBA-d6、IVA-d9的浓度为5μg/mL，VA-d9、CA-d11的浓度为2.5μg/mL。
在一些实施方式中，试剂盒中可以包含多套采集和保存装置。使用时，通过采集装置采集好粪便样本后，打开第一密封盖体2和密封件6，将粪便样本浸没至保存液5中，再密封，如图10进行保存。
在一些实施方式中，试剂盒中的保存装置可以替换为图11-图12所示的保存装置，或者图14-图15所示的保存装置。其中，图11所示的保存腔1也可以同图6-图7，设置密封件、密封盖体等密封结构，进一步增加密闭性。使用前，同图7，保存液5保存于保存腔1，再用密封件和第一密封盖体进行密封。
进一步，也可以通过储液腔9、储存液102、第三密封盖体10密封，从而对保存液5进行很好的密封保存。
使用时，如图18，采集粪便样本后，打开第三密封盖体10、第一密封盖体2、密封件等，使粪便样本置于保存液中，再通过第一密封盖体2、储液腔9、储存液102、挡板101、第三密封盖体10等进行多重密封。
实施例7一种粪便样本短链脂肪酸的检测试剂盒
一种粪便样本短链脂肪酸的检测试剂盒，该试剂盒用于本申请粪便样本中短链脂肪酸的检测。当粪便样本为保存于上述保存液（乙醇水溶液）中时，该试剂盒包括：稀释剂、萃取试剂。所述稀释剂为酸水溶液。所述萃取试剂为有机试剂。
在一些实施方式中，所述稀释剂为盐酸水溶液，例如2%、5%、7%、10%、20%、30%、40%的盐酸水溶液。这里的稀释剂一方面用于稀释保存液，使乙醇浓度降低，水的比例升高，从而进行后续的萃取过程，另一方面，使保存液呈酸性，有利于短链脂肪酸被萃取出来，除了盐酸外，其他能起到酸化作用的酸均可以使用。
在一些实施方式中，所述萃取试剂为甲基叔丁基醚、正己烷、乙醚中的一种或多种，优选为甲基叔丁基醚。
在一些实施方式中，保存液为75%乙醇水溶液，稀释剂为盐酸水溶液，萃取试剂为甲基叔丁基醚，稀释剂和萃取试剂的体积比为5~30：40~80（50μL~300μL：400μL~800μL）；优选为10~30：60~80（100μL~300μL：600μL~800μL），更优为10~30：60~70（100μL~300μL：600μL~700μL），更优为10：60~70（100μL：600μL~700μL）。
当粪便样本为固体样本，未浸于保存液中时，所述试剂盒还包括提取试剂（同上述保存液）。在一些实施方式中，提取试剂为乙醇水溶液，优选地，乙醇水溶液中乙醇体积比为50%~90%，更优为50%~75%，最优为75%。
在一些实施方式中，提取试剂为碱性乙醇水溶液，优选地，碱性乙醇水溶液的pH值为8~11，更优pH值为8~9，最优为8。
在一些实施方式中，提取试剂为碱性75%乙醇水溶液，稀释剂为盐酸水溶液，萃取试剂为甲基叔丁基醚，提取试剂、稀释剂、萃取试剂的体积比为50~200：5~30：40~80（500μL~2000μL：50μL~300μL：400μL~800μL）；优选为100~200：10~30：60~80（1000μL~2000μL：100μL~300μL：600μL~800μL），更优为100~150：10~30：60~70（1000μL~1500μL：100μL~300μL：600μL~700μL），更优为150：10：60~70（1500μL：100μL：600μL~700μL）。
综上所述，本申请对粪便样本的保存方法进行了详细研究，考察了保存用的保存液种类、pH值等参数，发现碱性乙醇水溶液能有效提高粪便样本中短链脂肪酸的稳定性，能用于粪便样本的室温保存和运输。
进一步，本申请提供了一种粪便样本中短链脂肪酸的检测方法，该检测方法适用于碱性乙醇水溶液保存的粪便样本的短链脂肪酸的检测。分析方法验证表明该方法的准确性、重复性等良好，能同时定量检测粪便中的7种短链脂肪酸。
此外，本申请还提供了保存液或粪便样本的保存装置，该装置密封性好，适用于粪便样本的采集和保存，且尤其适用于含有挥发性物质的样本或试液的保存。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
Claims (24)
1.一种粪便样本的保存方法，其特征在于，所述保存方法包括：将待保存的粪便样本与保存液混合，所述保存液包括乙醇水溶液，所述乙醇水溶液为碱性。
2.如权利要求1所述的保存方法，其特征在于， 所述乙醇水溶液为50%~90%乙醇水溶液。
3.如权利要求2所述的保存方法，其特征在于，所述乙醇水溶液为50%~75%乙醇水溶液。
4.如权利要求3所述的保存方法，其特征在于，所述乙醇水溶液为75%乙醇水溶液。
5.如权利要求1所述的保存方法，其特征在于，所述乙醇水溶液的pH值为8及以上。
6.如权利要求5所述的保存方法，其特征在于，所述乙醇水溶液的pH值为8~11。
7.如权利要求6所述的保存方法，其特征在于，所述乙醇水溶液的pH值为8。
8.如权利要求1所述的保存方法，其特征在于，所述保存液还包括待测短链脂肪酸的同位素内标。
9.如权利要求1所述的保存方法，其特征在于，所述短链脂肪酸包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸中的一种或多种。
10.如权利要求1所述的保存方法，其特征在于，所述待保存的粪便样本与保存液的重量体积比为50mg : 0.5 mL ~2.0mL。
11.如权利要求10所述的保存方法，其特征在于，所述待保存的粪便样本与保存液的重量体积比为50mg : 1.0 mL ~1.5mL。
12.如权利要求11所述的保存方法，其特征在于，所述待保存的粪便样本与保存液的重量体积比为50mg : 1.5mL。
13.如权利要求1所述的保存方法，其特征在于，所述保存方法还包括：将待保存的粪便样本与保存液混合后置于密封环境中并于室温下保存。
14.一种粪便样本中短链脂肪酸的检测方法，其特征在于，所述检测方法用于检测权利要求1-13之一所述的保存方法处理的粪便样本中短链脂肪酸的含量；所述检测方法包括：
步骤一：取待保存的粪便样本与保存液的混合溶液，研磨和/或超声提取，得提取液；
步骤二：用酸水溶液对提取液进行稀释；
步骤三：用有机溶剂对步骤二稀释后的溶液进行萃取，分层后取有机层；
步骤四：取有机层进行短链脂肪酸的检测。
15.如权利要求14所述的检测方法，其特征在于，步骤三中有机溶剂包括甲基叔丁基醚、正己烷、乙醚中的一种或多种。
16.如权利要求15所述的检测方法，其特征在于，所述保存液为碱性75%乙醇水溶液；有机溶剂为甲基叔丁基醚；步骤二和步骤三中提取液、酸水溶液和有机溶剂的体积比为20 :5~30 : 40~80。
17.如权利要求16所述的检测方法，其特征在于，步骤二和步骤三中提取液、酸水溶液和有机溶剂的体积比为20 : 10 : 60~70。
18.如权利要求14所述的检测方法，其特征在于，所述酸水溶液为盐酸水溶液。
19.如权利要求14所述的检测方法，其特征在于，步骤四中使用GC-MS进行短链脂肪酸的检测。
20.一种粪便样本短链脂肪酸的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：保存液、稀释剂、萃取试剂；
所述保存液用于保存和提取粪便样本，所述保存液包括碱性乙醇水溶液；
所述稀释剂包括酸水溶液；
其中，所述萃取试剂为有机试剂，所述有机试剂包括甲基叔丁基醚、正己烷、乙醚中的一种或多种。
21.如权利要求20所述的试剂盒，其特征在于，所述碱性乙醇水溶液的pH值为8及以上。
22.如权利要求20所述的试剂盒，其特征在于，所述保存液中还包括短链脂肪酸检测用同位素内标。
23.如权利要求20所述的试剂盒，其特征在于，所述保存液、稀释剂和萃取试剂的体积比为100~200 : 10~30 : 60~80。
24.如权利要求23所述的试剂盒，其特征在于，所述保存液、稀释剂和萃取试剂的体积比为150 : 10 : 60~70。
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Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104480012A (zh) * | 2014-11-27 | 2015-04-01 | 南方医科大学 | 一种粪便细菌的保存液 |
| CN106755442A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-05-31 | 苏州普瑞森基因科技有限公司 | 一种粪便微生物样品dna保存液 |
| CN107312717A (zh) * | 2017-08-08 | 2017-11-03 | 苏州阿迪康生物科技有限公司 | 一种粪便类样本的保存方法、保存用溶液、制备方法及应用 |
| CN107988076A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-05-04 | 东莞博奥木华基因科技有限公司 | 一种粪便保存液及其应用 |
| CN109371015A (zh) * | 2018-12-14 | 2019-02-22 | 北京奥维森基因科技有限公司 | 一种粪便保存液及其制备方法和应用 |
| CN110004212A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-07-12 | 康美华大基因技术有限公司 | 粪便保存液及其制备方法和保存粪便的方法 |
| CN111239291A (zh) * | 2020-02-27 | 2020-06-05 | 山东省分析测试中心 | 基于gc-ms的小鼠肠-脑轴相关组织样本中短链脂肪酸的检测方法 |
| CN111826371A (zh) * | 2019-04-15 | 2020-10-27 | 上海锐翌生物科技有限公司 | 粪便核酸保存液及其制备方法和应用 |
| CN112881580A (zh) * | 2021-01-12 | 2021-06-01 | 成都大熊猫繁育研究基地 | 一种基于气相色谱法的大熊猫粪便短链脂肪酸含量在线检测方法 |
| CN114369537A (zh) * | 2022-01-11 | 2022-04-19 | 广东量子天健医疗科技有限公司 | 粪便保存液及其制备方法和应用 |
| CN115486439A (zh) * | 2022-09-23 | 2022-12-20 | 深圳微辰生命科技有限公司 | 粪便保存方法、乙醇在制备粪便保存液及短链脂肪酸检测试剂或试剂盒中的应用 |
| CN115553286A (zh) * | 2022-09-23 | 2023-01-03 | 深圳微辰生命科技有限公司 | 一种粪便保存液、保存粪便的方法及乙腈在制备粪便保存液中的应用 |
-
2023
- 2023-10-16 CN CN202311331209.1A patent/CN117063920A/zh active Pending
Patent Citations (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104480012A (zh) * | 2014-11-27 | 2015-04-01 | 南方医科大学 | 一种粪便细菌的保存液 |
| CN106755442A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-05-31 | 苏州普瑞森基因科技有限公司 | 一种粪便微生物样品dna保存液 |
| CN107312717A (zh) * | 2017-08-08 | 2017-11-03 | 苏州阿迪康生物科技有限公司 | 一种粪便类样本的保存方法、保存用溶液、制备方法及应用 |
| CN107988076A (zh) * | 2017-12-19 | 2018-05-04 | 东莞博奥木华基因科技有限公司 | 一种粪便保存液及其应用 |
| CN109371015A (zh) * | 2018-12-14 | 2019-02-22 | 北京奥维森基因科技有限公司 | 一种粪便保存液及其制备方法和应用 |
| CN111826371A (zh) * | 2019-04-15 | 2020-10-27 | 上海锐翌生物科技有限公司 | 粪便核酸保存液及其制备方法和应用 |
| CN110004212A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-07-12 | 康美华大基因技术有限公司 | 粪便保存液及其制备方法和保存粪便的方法 |
| CN111239291A (zh) * | 2020-02-27 | 2020-06-05 | 山东省分析测试中心 | 基于gc-ms的小鼠肠-脑轴相关组织样本中短链脂肪酸的检测方法 |
| CN112881580A (zh) * | 2021-01-12 | 2021-06-01 | 成都大熊猫繁育研究基地 | 一种基于气相色谱法的大熊猫粪便短链脂肪酸含量在线检测方法 |
| CN114369537A (zh) * | 2022-01-11 | 2022-04-19 | 广东量子天健医疗科技有限公司 | 粪便保存液及其制备方法和应用 |
| CN115486439A (zh) * | 2022-09-23 | 2022-12-20 | 深圳微辰生命科技有限公司 | 粪便保存方法、乙醇在制备粪便保存液及短链脂肪酸检测试剂或试剂盒中的应用 |
| CN115553286A (zh) * | 2022-09-23 | 2023-01-03 | 深圳微辰生命科技有限公司 | 一种粪便保存液、保存粪便的方法及乙腈在制备粪便保存液中的应用 |
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