CN117054650A - 一种用于检测猫疱疹病毒i型抗体的试剂盒 - Google Patents
一种用于检测猫疱疹病毒i型抗体的试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117054650A CN117054650A CN202311051152.XA CN202311051152A CN117054650A CN 117054650 A CN117054650 A CN 117054650A CN 202311051152 A CN202311051152 A CN 202311051152A CN 117054650 A CN117054650 A CN 117054650A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- gold
- feline herpesvirus
- type
- recombinant protein
- colloidal gold
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000701087 Felid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 title claims abstract description 49
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 36
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 34
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 34
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims abstract description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 55
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 40
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 14
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 12
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 12
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 10
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 10
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 10
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 8
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 7
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 5
- MPOKJOWFCMDRKP-UHFFFAOYSA-N gold;hydrate Chemical compound O.[Au] MPOKJOWFCMDRKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 4
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 3
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 claims description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 18
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 14
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 14
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 14
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 101710126487 Envelope glycoprotein B Proteins 0.000 description 6
- 101710126486 Envelope glycoprotein D Proteins 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 4
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 4
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 4
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 4
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 241001052560 Thallis Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 108700010070 Codon Usage Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000012270 DNA recombination Methods 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000009351 contact transmission Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010304 firing Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 101150029683 gB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150036031 gD gene Proteins 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011309 routine diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 210000000427 trigeminal ganglion Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56994—Herpetoviridae, e.g. cytomegalovirus, Epstein-Barr virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
- G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
- G01N33/587—Nanoparticles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/01—DNA viruses
- G01N2333/03—Herpetoviridae, e.g. pseudorabies virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用于检测猫疱疹病毒I型抗体的试剂盒,属于动物病毒抗体检测领域。包括猫疱疹病毒I型gB‑gD重组蛋白、鼠IgG和羊抗鼠IgG,所述猫疱疹病毒I型gB‑gD重组蛋白由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成。利用本发明的用于检测猫疱疹病毒I型抗体的试剂盒检测猫疱疹病毒I型抗体,方便快捷,灵敏度高,与其他病原体无交叉反应,特异性强,具有巨大的临床意义和和广泛的应用前景。
Description
相关专利
本申请是申请号为2020114597564,申请日为2020年12月11日,发明名称为“一种猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白及其制备方法和应用”的中国发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明属于动物病毒抗体检测领域,具体地,涉及一种用于检测猫疱疹病毒I型抗体的试剂盒。
背景技术
猫疱疹病毒I型(Feline herpesvirus 1,FHV-1)又称猫鼻气管炎病毒,属α-疱疹病毒科,是具有囊膜的双链DNA病毒,可引起猫科动物急性、高度接触性上呼吸道疾病。该病毒主要侵害仔猫,通过直接接触传播,发病率高达100%,死亡率可达50%。该病最早发现于美国,随后在加拿大、英国等地发现和流行,目前我国也多次报道该病例,并分离到病毒。
FHV-1隐性感染和感染后康复的猫能长期带毒和排毒,成为传染源。同其他疱疹病毒一样,FHV-1可潜伏在猫的三叉神经节,并在猫免疫力低下时再激活而导致发病,给该病的防控造成困难。因此,加强FHV-1鉴定及诊断方法的建立对该病的防控具有重要意义。
病毒分离是鉴定FHV-1最可靠的诊断方法,虽然它不如PCR那样敏感,但却能检测到活的病毒粒子,而不仅仅是它的DNA。虽然病毒分离是最为可靠的检测方法,但其耗时长所以一般不用于常规诊断FHV-1感染。而免疫荧光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)技术等方法需要使用指定的仪器设备、具备相应的试验条件和技能,难以在基层推广。
发明内容
为了解决上述技术问题,本发明采用的技术方案如下:
本发明第一方面提供一种猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白,包括SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。
在本发明中,重组蛋白也叫融合蛋白或重组融合蛋白,是通过DNA重组技术得到的两个基因重组后的表达产物。
gB(envelope glycoprotein B)和gD(envelope glycoprotein D)蛋白是猫疱疹病毒主要的免疫原性抗原且高度保守,可诱发和启动机体免疫系统产生免疫应答,诱导宿主细胞产生中和抗体,因此将gB和gD蛋白主要抗原表位融合在一起表达,不仅能够提高诊断的灵敏度,还能减少与其他病原体的交叉反应。
在本发明的一些实施方案中,优选地,所述重组蛋白由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成。
本发明的第二方面提供一种编码本发明第一方面所述重组蛋白的基因,其包括SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。
该基因序列是为了在大肠杆菌中表达所述重组蛋白,根据大肠杆菌对密码子的偏好性,对密码子进行了优化。不同物种对同义密码子的使用频率是不同的,而这种密码子偏好性对翻译过程有影响。如果一条mRNA有很多成簇的稀有密码子,这会对核糖体的运动速度造成负面影响,大大降低蛋白表达水平。在此对基因序列进行密码子优化,适用于大肠杆菌表达,可以提高蛋白表达效率。
本发明的第三方面提供一种表达载体,其包括本发明第二方面所述的基因。
在本发明的一些实施方案中,所述表达载体为pET30a,其具有卡那霉素抗性,表达的融合蛋白具有组氨酸(His)标签。
本发明的第四方面提供一种宿主细胞,其含有本发明第三方面所述的表达载体。
进一步地,所述宿主细胞为真核宿主细胞或原核宿主细胞。
在本发明的一些实施方案中,所述宿主细胞为原核宿主细胞。优选地,所述宿主细胞为大肠杆菌,更优选地,大肠杆菌为BL21。利用大肠杆菌进行表达具有周期短、费用低、表达量大等优点。
本发明的第五方面提供一种制备本发明第一方面所述重组蛋白的方法,包括诱导本发明第四方面所述宿主细胞进行蛋白表达的步骤。
进一步地,所述宿主细胞为真核宿主细胞或原核宿主细胞。
在本发明的一些实施方案中,所述宿主细胞为原核宿主细胞。优选地,所述宿主细胞为大肠杆菌,更优选地,大肠杆菌为BL21。利用大肠杆菌进行表达具有周期短、成本低、表达量大等优点。
在本发明的一些具体实施方案中,诱导大肠杆菌进行蛋白表达的步骤为:
S1,用含50μg/mL卡那霉素的LB培养基37℃培养所述大肠杆菌,
S2,当大肠杆菌培养液OD600至0.5-0.7时,用终浓度为1mM的IPTG进行诱导表达,诱导条件为:25℃,转速200rpm,4h;利用该诱导条件,能够使得重组蛋白更加缓慢地表达,有充分的时间进行空间构象的形成,这对重组蛋白发挥功能具有非常重要的作用。
S3,将培养液于4℃,7000rpm离心10min,收集菌体;
S4,用缓冲液Binding Buffer破碎菌体;
S5,超声破碎菌体,条件为:600w,超声2s,间隔5s,共80-120次;
S6,4℃,12000rpm离心30min收集上清,所述重组蛋白在上清中。
优选地,步骤S2中在大肠杆菌培养液OD600至0.6时进行诱导。
优选地,步骤S5中,超声破碎100次。采用本发明的破碎方法,避免了破碎过于剧烈,造成重组蛋白损失的情况。
在本发明的一些实施方案中,进一步包括对重组蛋白进行纯化的步骤。重组蛋白的纯化方式可以有多种,例如离子交换层析,凝胶过滤层析和亲和层析等方法。在本发明的一些实施方案中,选择亲和层析的方法,由于重组蛋白中加入了His标签,一步纯化能够达到较高的纯度。
在本发明的一些具体实施方案中,将包含重组蛋白的上清过Ni柱,然后用洗脱缓冲液Elution Buffer洗脱得到目的蛋白。
优选地,所述洗脱缓冲液Elution Buffer的配方为:50mM Tris,0.2M Nacl,0.5MImidazole,pH8.0。
本发明的第六方面提供本发明第一方面所述的重组蛋白在制备用于检测猫疱疹病毒I型抗体的试剂盒中的应用。
本发明的第七方面提供一种用于检测猫疱疹病毒I型抗体的试剂盒,包括本发明第一方面所述的重组蛋白。
进一步地,所述试剂盒还包括鼠IgG和羊抗鼠IgG。
在本发明的一些实施方案中,利用双抗原夹心金标法检测猫疱疹病毒I型抗体。
在本发明的一些具体实施方案中,所述试剂盒包括双抗原夹心金标法检测条,所述检测条的试剂方法如下:
S1,分别制备重组蛋白胶体金复合物和鼠IgG胶体金复合物;
S2,将所述重组蛋白胶体金复合物和鼠IgG胶体金复合物混合,制备金标垫;
S3,利用重组蛋白作为检测线,利用羊抗鼠IgG作为质控线,划在硝酸纤维素膜上;
S4,将滤纸、含有硝酸纤维素膜的聚酯板、金标垫和样本垫安装在底板上,其中滤纸叠加一部分压在聚酯板上,聚酯板叠加一部分压在金标垫上,金标垫叠加一部分压在样本垫上,在聚酯板上分别有测试区和质控区,测试区有检测线(T线),质控区有质控线(C线),检测线靠近金标垫,质控线靠近滤纸,即制备得到检测条。
在使用时,滴加生物样本至样本垫处,室温放置10min后判定检测结果,判定标准如下:
①两条带出现,其中一条位于质控区,另一条位于测试区,为阳性;
②仅质控线出现一条带,在测试区内无条带出现,为阴性;
③质控线未出现条带,表明此测试条已损坏,无论检测线是否出现条带,均应当更换新试纸条重新测试。
在本发明的一些实施方案中,猫疱疹病毒I型抗体检测结果呈阳性,代表猫生物样本中含有猫疱疹病毒I型抗体,意味着猫具有猫疱疹病毒I型感染或曾被猫疱疹病毒I型感染。
在本发明的一些实施方案中,所述生物样本为血清或血浆,或任何其他可能包含抗体的体液。
本发明的有益效果
相对于现有技术,本发明具有以下有益效果:
gB和gD蛋白是猫疱疹病毒主要的免疫原性抗原且高度保守,可诱发和启动机体免疫系统产生免疫应答,诱导宿主细胞产生中和抗体,因此将gB和gD蛋白主要抗原表位融合在一起表达,不仅能够提高诊断的灵敏度,还能减少与其他病原体的交叉反应,特异性强,具有巨大的临床意义和和广泛的应用前景。
通常大多数猫在感染猫疱疹病毒三周时体内抗体水平最高,随后机体内抗体水平快速下降,因此,利用血清学试验检测FHV-1感染急性期和康复之后的双份血清的中和抗体效价,具有回顾性诊断意义。
本发明采用的胶体金标记免疫分析法是一种新型分析技术,具有快捷简便、成本低、无污染且无需培训的特点,与传统方法相比更为适合现场检测,具有显色时间短、无需昂贵仪器等优点,有广阔的市场前景和应用价值。
附图说明
图1示出了猫疱疹病毒I型gB-gD融合蛋白纯化的凝胶电泳结果。1:细胞破碎后上样;2:流穿;3:50mM Imidazole洗脱;4:0.5M Imidazole洗脱。
图2示出了本发明一个实施例的检测试纸条的试剂图。1:样本垫;2:金标垫;3:NC膜;31:检测线(T线);32:质控线(C线);4:滤纸;5:底板。
图3示出了本发明的一个实施例利用试纸条进行检测的结果示意图。T:检测线,C:质控线。
图4示出了本发明的一个实施例利用试剂条的临床样本检测结果。S:样本垫,T:检测线,C:质控线,FHV:猫疱疹病毒I型。
图5示出了利用本发明的试纸条对临床猫血清样本进行检测的总体结果。
具体实施方式
为了使本发明所解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。
实施例
以下例子在此用于示范本发明的优选实施方案。本领域内的技术人员会明白,下述例子中披露的技术代表发明人发现的可以用于实施本发明的技术,因此可以视为实施本发明的优选方案。但是本领域内的技术人员根据本说明书应该明白,这里所公开的特定实施例可以做很多修改,仍然能得到相同的或者类似的结果,而非背离本发明的精神或范围。
除非另有定义,所有在此使用的技术和科学的术语,和本发明所属领域内的技术人员所通常理解的意思相同,在此公开引用及他们引用的材料都将以引用的方式被并入。
那些本领域内的技术人员将意识到或者通过常规试验就能了解许多这里所描述的发明的特定实施方案的许多等同技术。这些等同将被包含在权利要求书中。
下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的仪器设备,如无特殊说明,均为实验室常规仪器设备;下述实施例中所用的试验材料,如无特殊说明,均为自常规生化试剂商店购买得到的。
实施例1猫疱疹病毒I型gB-gD融合蛋白基因表达载体的构建
猫疱疹病毒I型gB基因是根据NCBI Gene bank:YP_003331552.2的蛋白序列设计的。根据对蛋白亲疏水性(https://web.expasy.org/protscale/)分析后,在预测亲水含量较高区域选取了gB(1-100aa)序列进行融合。gD基因是根据NCBI Gene bank:YP_003331589.1的蛋白序列设计的。根据对蛋白亲疏水性(https://web.expasy.org/ protscale/)分析后,在预测亲水含量较高区域选取了gD(275-374aa)序列进行融合。
gB-gD重组蛋融合白的氨基酸序列序列如下(SEQ ID NO.1):
MSTRGDLGKRRRGSRWQGHSGYFRQRCFFPSLLGIAATGSRHGNGSSGLTRLARYVSFIWIVLFLVGPRPVEGQSGSTSEQPRRTVATPEVGGTPPKPTTSGSEDSKRSNDSRGESSGPNWIDIENYTPKNNVPIIISDDDVPTAPPKGMNNQSVVIPAIVLSCLIIALILGVIYYILRVKRSRSTAYQQLPIIHTTHHP
由于不同物种对同义密码子的使用频率是不同的,而这种密码子偏好性对翻译过程有影响。如果一条mRNA有很多成簇的稀有密码子,这会对核糖体的运动速度造成负面影响,大大降低蛋白表达水平。
本发明利用大肠杆菌作为表达系统,为了获得更高的表达效率和更高的表达量,在进行外源蛋白表达时进行了密码子优化,反翻译成核苷酸序列,得到的核苷酸序列如下(SEQ ID NO.2):
ATGTCCACCCGTGGCGATCTGGGCAAACGTCGTCGTGGCTCCCGTTGGCAGGGCCATTCCGGCTATTTTCGTCAGCGTTGCTTTTTTCCGTCCCTGCTGGGCATTGCGGCGACCGGCTCCCGTCATGGCAATGGCTCCTCCGGCCTGACCCGTCTGGCGCGTTATGTGTCCTTTATTTGGATTGTGCTGTTTCTGGTGGGCCCGCGTCCGGTGGAAGGCCAGTCCGGCTCCACCTCCGAACAGCCGCGTCGTACCGTGGCGACCCCGGAAGTGGGCGGCACCCCGCCGAAACCGACCACCTCCGGCTCCGAAGATTCCAAACGTTCCAATGATTCCCGTGGCGAATCCTCCGGCCCGAATTGGATTGATATTGAAAATTATACCCCGAAAAATAATGTGCCGATTATTATTTCCGATGATGATGTGCCGACCGCGCCGCCGAAAGGCATGAATAATCAGTCCGTGGTGATTCCGGCGATTGTGCTGTCCTGCCTGATTATTGCGCTGATTCTGGGCGTGATTTATTATATTCTGCGTGTGAAACGTTCCCGTTCCACCGCGTATCAGCAGCTGCCGATTATTCATACCACCCATCATCCG
由生工生物工程(上海)股份有限公司合成重组基因序列,并与pET30a质粒连接,形成重组表达载体。
实施例2猫疱疹病毒I型gB-gD融合蛋白的表达
将猫疱疹病毒I型gB-gD融合基因质粒转化至大肠杆菌BL21中,涂布于含50μg/mL卡那霉素(上海生工,货号:K0408)的LB平板上,37℃过夜培养,挑取单克隆菌落,用含有相同浓度的卡那霉素的300mL LB培养基37℃培养至OD600达0.6左右,用终浓度为1mM的IPTG(上海生工,货号:IB0168)进行诱导表达,诱导条件为:25℃,转速200rpm,4h。诱导之后,将培养液4℃,转速7000rpm,离心10min,收集菌体。
实施例3猫疱疹病毒I型gB-gD融合蛋白的纯化及复性
用50mL上样缓冲液Binding Buffer(50mM Tris,0.2M Nacl,pH8.0)50mL破碎菌体;然后超声破碎,条件为600w,超声2s,间隔5s,共100次;最后12000rpm,30min,4℃离心收集上清,目的蛋白在上清中。接着过Ni柱一步纯化,用洗脱缓冲液Elution Buffer(50mMTris,0.2M Nacl,0.5M Imidazole,pH8.0)洗脱目的蛋白。利用PAGE凝胶电泳检测目的蛋白,结果如图1所示。
由图1可知,纯化后的融合蛋白纯度很高,将纯化后的重组蛋白用透析缓冲液(50mM Tris,0.2M Nacl,pH8.0)透析,每隔12h换一次透析液,共3次。取出透析后的蛋白液,经0.22μm滤器过滤后,用BCA法测定浓度后,于-20℃保存备用。
实施例4双抗原夹心金标法检测猫疱疹病毒I型抗体
1双抗原夹心金标法检测条的制备
1.1胶体金的烧制
在三角烧瓶中加入1000mL超纯水,在磁力加热搅拌器上加热至沸腾,然后加入10%氯金酸(sigma)4mL,再加入10%柠檬酸三钠溶液6mL,继续加热沸腾5min,然后冷却至室温后用0.22μm过滤器过滤胶体金后放置4℃备用。
1.2重组猫疱疹病毒I型gB-gD融合蛋白的标记
取胶体金溶液100mL放入烧杯中,搅拌加入0.2M K2CO3调节金水pH至9.5,搅拌后加入2mg纯化后的重组猫疱疹病毒I型gB-gD融合蛋白,室温搅拌15min,加入1mL 10%BSA溶液,室温搅拌15min后12000rpm离心10min,将上清小心吸出弃去,沉淀用金标稀释液(20mMTris,1%BSA,0.03% Proclin300,pH8.0)定容至1mL,此为标记好的重组猫疱疹病毒I型gB-gD融合蛋白胶体金复合物。
1.3鼠IgG标记
取胶体金溶液100mL放入烧杯中,搅拌加入0.2M K2CO3调节金水pH至7.0,搅拌后加入1mg鼠IgG(杭州隆基生物技术有限公司,货号:AS00901),室温搅拌15min,加入1mL 10%BSA溶液,室温搅拌15min后12000rpm离心10min,将上清小心吸出弃去,沉淀用金标稀释液(20mM Tris,1%BSA,0.03%Proclin300,pH8.0)定容至1mL,此为标记好的鼠IgG胶体金复合物。
将上述金标复合物用金标稀释液稀释100倍后与1.2步骤中稀释后的猫疱疹病毒I型gB-gD融合蛋白胶体金复合物混合后浸泡玻璃纤维,37℃烘干4h后即制成金标垫。
1.4重组猫疱疹病毒I型gB-gD融合蛋白的点膜
用点膜稀释液(50mM Tris,2%蔗糖,pH8.5)稀释纯化后gB-gD融合蛋白至0.9mg/mL做为胶体金试纸条的检测线(Test-Line,T线),用相同稀释液稀释羊抗鼠IgG(杭州隆基生物技术有限公司,货号:PS00901)至0.3mg/mL做为胶体金试纸条的质控线(Control-Line,C线),将上述两种稀释之后的溶液划线至硝酸纤维素膜上,37℃烘干过夜。
1.5双抗原夹心金标法检测猫疱疹病毒I型抗体试纸条的组装
将以上金标垫、包被好原料至硝酸纤维素膜(NC膜)的聚酯板及滤纸、样本垫等安装底板上,组装成猫疱疹病毒I型抗体双抗原夹心法检测试纸条。具体安装方式如图2所示:分别将样本垫1、金标垫2、NC膜3和滤纸4安装在底板5上。其中样本垫1叠加一部分压在金标垫2上,金标垫2叠加一部分压在NC膜3上,滤纸4叠加一部分压在NC膜3上。其中NC膜3分为测试区和质控区,测试区设置检测线31(T线),质控区设置质控线32(C线),检测线31靠近金标垫2,质控线32靠近滤纸4。
进一步,将组装好的试纸条用切条机切割成3mm条子,然后装入特别制定的塑料卡中,即成为成熟的检测试剂卡。
2双抗原夹心金标法检测猫疱疹病毒I型抗体试纸条/卡的检测
加入90μL待检测样本(猫血清、血浆)至样本加样处(S),室温放置10min后判定结果,结果判定标准如下(如图3所示):
①两条带出现,其中一条位于质控区,另一条位于测试区,为阳性;
②仅质控线出现一条带,在测试区内无条带出现,为阴性;
③质控线未出现条带,表明此测试条已损坏,无论检测线是否出现条带,均应当更换新试纸条重新测试。
3双抗原夹心金标法检测猫疱疹病毒I型抗体试纸条/卡的检测结果
一共检测20份猫疱疹病毒I型感染阳性猫血清(样本编号1~20),及50份正常未患病且未经免疫的猫血清(样本编号21~70),部分检测结果如图4所示,其中T线和C线两条线的表示检测结果为阳性,只有C线一条线的表示检测结果为阴性。
检测结果如表1所示:20份阳性血清中检测出阳性19例,漏检1例(7号样本7),在50份阴性血清中出现假阳1例(37号样本)。
表1猫疱疹病毒I型抗体检测结果
由此可知,样本检测的灵敏度和特异性分别为95%和98%,整体符合率为97.1%,如图5所示。
以上结果表明,利用本发明的重组猫疱疹病毒I型gB-gD融合蛋白检测猫疱疹病毒I型,具有非常高的的灵敏度和特异性,可以作为制作猫疱疹病毒I型抗体检测试纸条的原料,并可以在临床检测中广泛应用。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考,就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解,在阅读了本发明的上述讲授内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (9)
1.一种用于检测猫疱疹病毒I型抗体的试剂盒,其特征在于,包括猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白、鼠IgG和羊抗鼠IgG,所述猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白由SEQ ID NO.1所示氨基酸序列组成。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,双抗原夹心金标法检测猫疱疹病毒I型抗体。
3.根据权利要求2所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括双抗原夹心金标法检测条,所述检测条的制备方法如下:
S1,分别制备猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白胶体金复合物和鼠IgG胶体金复合物;
S2,将所述猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白胶体金复合物和鼠IgG胶体金复合物混合,制备金标垫;
S3,利用猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白作为检测线,利用羊抗鼠IgG作为质控线,划在硝酸纤维素膜上;
S4,将滤纸、含有硝酸纤维素膜的聚酯板、金标垫和样本垫安装在底板上,其中滤纸叠加一部分压在聚酯板上,聚酯板叠加一部分压在金标垫上,金标垫叠加一部分压在样本垫上,在聚酯板上分别有测试区和质控区,测试区有检测线,质控区有质控线,检测线靠近金标垫,质控线靠近滤纸,即制备得到检测条。
4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白胶体金复合物的制备方法如下:
取胶体金溶液100mL放入烧杯中,搅拌加入0.2M K2CO3调节金水pH至6.5,搅拌后加入2mg纯化后的猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白,室温搅拌15min,加入1mL 10%BSA溶液,室温搅拌15min后12000rpm离心10min,将上清小心吸出弃去,沉淀用金标稀释液定容至1mL,所述金标稀释液包括20mM Tris,1%BSA,0.03%Proclin300,pH8.0。
5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述胶体金溶液的制备方法如下:
在三角烧瓶中加入1000mL超纯水,在磁力加热搅拌器上加热至沸腾,然后加入10%氯金酸4mL,再加入10%柠檬酸三钠溶液6mL,继续加热沸腾5min,然后冷却至室温后用0.22μm过滤器过滤后放置4℃备用。
6.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述纯化是指将所述猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白过Ni柱,用洗脱缓冲液洗脱,所述洗脱缓冲液包括50mM Tris,0.2M Nacl,0.5MImidazole,pH8.0。
7.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述鼠IgG胶体金复合物的制备方法如下:
取胶体金溶液100mL放入烧杯中,搅拌加入0.2M K2CO3调节金水pH至6.5,搅拌后加入1mg鼠IgG,室温搅拌15min,加入1mL 10%BSA溶液,室温搅拌15min后12000rpm离心10min,将上清小心吸出弃去,沉淀用金标稀释液定容至1mL,所述金标稀释液包括20mM Tris,1%BSA,0.03%Proclin300,pH8.0。
8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,将所述鼠IgG胶体金复合物用金标稀释液稀释100倍后与所述猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白胶体金复合物混合后浸泡玻璃纤维,37℃烘干4h后即制成金标垫。
9.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,用点膜稀释液稀释纯化后所述猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白至0.9mg/mL做为胶体金试纸条的检测线,用相同稀释液稀释羊抗鼠IgG至0.3mg/mL做为胶体金试纸条的质控线,将上述两种稀释之后的溶液划线至硝酸纤维素膜上,37℃烘干过夜。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311051152.XA CN117054650A (zh) | 2020-12-11 | 2020-12-11 | 一种用于检测猫疱疹病毒i型抗体的试剂盒 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311051152.XA CN117054650A (zh) | 2020-12-11 | 2020-12-11 | 一种用于检测猫疱疹病毒i型抗体的试剂盒 |
CN202011459756.4A CN112457414B (zh) | 2020-12-11 | 2020-12-11 | 一种猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白及其制备方法和应用 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011459756.4A Division CN112457414B (zh) | 2020-12-11 | 2020-12-11 | 一种猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白及其制备方法和应用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN117054650A true CN117054650A (zh) | 2023-11-14 |
Family
ID=74803530
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011459756.4A Active CN112457414B (zh) | 2020-12-11 | 2020-12-11 | 一种猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白及其制备方法和应用 |
CN202311051152.XA Pending CN117054650A (zh) | 2020-12-11 | 2020-12-11 | 一种用于检测猫疱疹病毒i型抗体的试剂盒 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011459756.4A Active CN112457414B (zh) | 2020-12-11 | 2020-12-11 | 一种猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (2) | CN112457414B (zh) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN113845576B (zh) * | 2021-08-18 | 2022-05-31 | 苏州米迪生物技术有限公司 | 重组猫疱疹病毒1型gB-gD蛋白及其应用 |
CN113943354B (zh) * | 2021-10-11 | 2022-09-06 | 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心) | 一种重组猫疱疹病毒gB蛋白抗原及其在抗体诊断和疫苗制备中的应用 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6010703A (en) * | 1993-07-26 | 2000-01-04 | Board Of Trustees Operating Michigan State University | Recombinant poxvirus vaccine against feline rhinotracheitis |
CN108841998A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-11-20 | 苏州点晶生物科技有限公司 | 检测猫疱疹病毒i型核酸的引物探针组、快速检测试剂盒及方法 |
CN109679970B (zh) * | 2018-11-20 | 2020-12-08 | 杭州贤至生物科技有限公司 | 猫疱疹i型病毒快速检测的制备方法 |
-
2020
- 2020-12-11 CN CN202011459756.4A patent/CN112457414B/zh active Active
- 2020-12-11 CN CN202311051152.XA patent/CN117054650A/zh active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN112457414A (zh) | 2021-03-09 |
CN112457414B (zh) | 2023-09-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP1894005B1 (en) | Methods and compositions for detecting herpes simplex virus type 2 | |
CN112457414B (zh) | 一种猫疱疹病毒I型gB-gD重组蛋白及其制备方法和应用 | |
CN111443199B (zh) | 磁性纳米颗粒免疫层析快速检测新冠病毒抗体的试剂及其制备方法 | |
CN112321722A (zh) | 一种猫杯状病毒vp1-vp2重组蛋白及其制备方法和应用 | |
CN112538119A (zh) | 一种犬嗜吞噬细胞无形体p44重组蛋白及其制备方法和应用 | |
CN112521462B (zh) | 一种马传染性贫血病毒p26-gp90重组蛋白及其制备方法和应用 | |
CN111647055B (zh) | 一种用于新型冠状病毒检测的n蛋白及其制备与应用 | |
KR101347288B1 (ko) | 융합 폴리펩타이드 hpv 항원을 이용한 hpv 항체 스크리닝 키트 | |
CN112852840A (zh) | 一种牛纽布病毒重组vp1基因、重组蛋白及其应用 | |
CN109679970B (zh) | 猫疱疹i型病毒快速检测的制备方法 | |
CN114778852B (zh) | 一种检测prrsv plp2抗体的间接elisa方法 | |
CN112442133A (zh) | 一种犬巴贝斯虫BcMSA1-BcSA1重组蛋白及其制备方法和应用 | |
KR101419791B1 (ko) | 쯔쯔가무시 균 특이 항체를 검출하기 위한 조성물 및 키트 | |
US6120989A (en) | Isolated human cytomegalovirus polypeptides and uses thereof | |
CN112521463B (zh) | 一种犬埃里希体MAP2-P30-gp19重组蛋白及其制备方法和应用 | |
US20120009624A1 (en) | Protein particles | |
WO2008144817A1 (en) | Fluorescent protein particles | |
CN117285653A (zh) | 一种MysB-A27L重组蛋白及其制备方法和应用 | |
CN112480269A (zh) | 一种兔病毒性出血症病毒vp10-vp60重组蛋白及其制备方法和应用 | |
JP5211041B2 (ja) | プロテインgとアビジン類との融合タンパク質 | |
CN118010992A (zh) | 新孢子虫融合蛋白作为新孢子虫检测抗原中的应用 | |
CN118010991A (zh) | 鸡球虫棒状体蛋白家族中的rop35蛋白作为鸡球虫抗体检测中的应用 | |
CN117736275A (zh) | 一种基于lsdv噬菌体展示文库筛选的蛋白质及其应用 | |
CN116970043A (zh) | 一种hpv16重组蛋白及其表达与纯化方法 | |
CN115785282A (zh) | 犬源性利什曼原虫重组蛋白及其编码基因、制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |