KR101419791B1 - 쯔쯔가무시 균 특이 항체를 검출하기 위한 조성물 및 키트 - Google Patents

Abstract

본 발명은 쯔쯔가무시 균 특이 항체를 검출하기 위한 조성물 및 키트에 관한 것이다. 본 발명의 쯔쯔가무시 균 특이 항체를 검출하기 위한 조성물 및 키트는 구체적으로는 쯔쯔가무시 균 유래의 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체를 검출하기 위한 것으로, 본 발명의 조성물 및 키트는 쯔쯔가무시 균의 감염자와 비감염자를 구분하기 위한 용도, 특히 쯔쯔가무시병의 발병 위험 기간 동안 쯔쯔가무시병과 동일·유사한 증상을 보이는 환자가 쯔쯔가무시 균의 감염자인지 또는 비감염자인지를 구분하기 위한 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

쯔쯔가무시 균 특이 항체를 검출하기 위한 조성물 및 키트{A Composition and a Kit for Detecting Specific Antibodies for Orientia tsutsugamushi}

본 발명은 쯔쯔가무시 균 특이 항체를 검출하기 위한 조성물 및 키트에 관한 것이다.

쯔쯔가무시병(scrub typhus)은 진드기 유충을 매개로 한 쯔쯔가무시 균(Orientia tsutsugamushi)의 인체 감염으로 인하여 일어난다. 주로 러시아 동부, 일본, 중국, 말레이시아, 태국, 베트남 등의 아시아-태평양 지역에서 발병하는 급성 열성병의 한 종류이며 10억 명에 달하는 인구가 이 병의 잠재적인 위험군에 속한다.

매해 백만 명 정도가 발병하는데 1-2주간의 잠복기를 지니며 발혈, 오한, 발진, 가피 생성, 근육통, 림프절 종대 등의 증상을 나타낸다. 감기와 유사한 약한 증상에서 끝나기도 하나 생명에 치명적인 상태까지 이를 수 있다. 초기의 진단을 통해 독시사이클린, 클로람페니콜 등의 적절한 항생제 처리로 쉽게 치료될 수 있으나 여러 종류의 균주(strain)들에 의한 재감염의 위험도 높은 편이다.

현재 쯔쯔가무시병을 확진하기 위한 가장 우수한 테스트 기법으로 면역형광염색법이 있으나 이 방법을 사용하기 위해서는 균 배양을 위한 생물안전시설(biosafety level 3)이 필요하며 연구자의 숙련 정도에 따라 결과의 차이가 존재한다. 또한 진단에 사용되는 혈청학적 방법이나 PCR 증폭에 기반한 방법은 사용되는 균의 항원이 지역이나 유행 시기별로 다양할 수 있어 한계가 존재한다. 주로 사용되고 있는 PCR 타겟인 TSA56 유전자의 민감도는 50%보다 낮으며 특이성은 높으나염기서열의 다양성으로 인해 프라이머(primer)의 어닐링(annealing) 시간이 달라지거나 검사 시의 민감도가 더 낮아질 수 있다.

쯔쯔가무시병을 진단하기 위하여 면역크로마토법과 유전자증폭법을 함께 이용하는 복합 진단 방법이 증가하는 추세이다. 이러한 방법을 통하여 민감도는 증가시키고 특이성 감소는 최소화하는 방향을 추구하고 있으나 현존하는 방법의 민감도는 아직 70% 미만이다. 현재 사용하는 면역크로마토법과 유전자증폭법은 TSA56 이라는 한 개의 유전자에 기대어 발전하였다.

최근 논문에서 균이 진핵세포에 침입하는 과정에서 fibronectin에 결합하는 autotransporter 단백질인 ScaC가 발견되었다. ScaC 유전자의 서열은 여러 다른 변종 간에도 높은 수준으로 보존되어 있으며 ScaC 단백질에 대한 항체가 환자의 혈청에서 발견되었다(Infect Immun 79:1718-27, 2011).

쯔쯔가무시 균의 Sca를 새로운 진단 타겟으로 사용하기 위하여 본 발명자는 쯔쯔가무시병 환자의 혈청에서 나타나는 다양한 Sca 단백질에 대한 항체 반응을 확인하였고 이들 단백질의 진단력을 확인하였다. 본 발명에서와 같이 Sca 항원 단백질을 이용한 방법은 쯔쯔가무시병의 기존의 진단 방법과 병용될 경우 신속하고 정확한 확인과 비용 절감에 이룰 수 있을 것이다.

본 발명의 목적은 쯔쯔가무시 균 특이 항체를 검출하기 위한 조성물 및 키트를 제공하는 데 있다.

본 발명의 다른 목적이나 구체적인 목적은 이하에서 제시될 것이다.

본 발명자들은 아래의 실시예 및 실험예에서 확인되는 바와 같이, 쯔쯔가무시병의 발병 위험 기간 동안 급성 열성병 환자로부터 수집한 시료를 쯔쯔가무시 균과 반응시켜 면역형광염색법(immunofluorescence assay)으로 쯔쯔가무시병에 대한 양성 시료와 음성 시료로 구분한 후, 쯔쯔가무시 균 유래 TSA56, 47kD 단백질, ScaA, ScaB, ScaC 및 ScaE 항원을 이용하여 효소면역측정법(ELISA, enzyme-linked immunosorbent assay)에 의하여 상기 양성 시료와 음성 시료에 대해 상기 항원들의 반응 정도로 측정하였을 때, 정상인의 시료로부터 설정된 기준값에 대해서 TSA56, 47kD, ScaA, ScaB, ScaC 및 ScaE 항원의 민감도가 각각 100%, 77%, 100%, 63%, 100% 및 80%를 나타내고, 특이도는 각각 100%, 93%, 73%, 87%, 67% 및 100%를 나타냄을 확인할 수 있었다. 여기서 TSA56, 47kD 단백질 및 ScaC는 쯔쯔가무시병의 혈청학적 진단에서 유용하게 사용될 수 있음이 공지된 단백질로서(Clin Vaccine Immunol 18:1021-7, 2011; , Am J Trop Med Hyg 82:368-70, 2010; Infect Immun 79:1718-27, 2011), 본 발명에서는 ScaA, ScaB 및 ScaE 항원에 대한 대조군으로 사용되었다.

본 발명은 전술한 바의 실험 결과에 기초하여 제공되는 것으로서, 본 발명의 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 조성물은 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자(molecule)를 포함함을 특징으로 한다.

본 발명의 조성물은 생체 시료 중의 쯔쯔가무시 균의 특이 항체, 구체적으로는 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체를 검출하기 위한 것으로, 본 발명의 조성물은 생체 시료와 접촉하여 그 반응 정도를 측정함으로써 쯔쯔가무시 균의 감염자와 비감염자를 구분하기 위한 용도로 사용될 수 있다. 특히 쯔쯔가무시병의 발병 위험 기간 동안 쯔쯔가무시병과 동일·유사한 증상을 보이는 환자가 쯔쯔가무시 균의 감염자인지 또는 비감염자인지를 구분하기 위한 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

본 명세서에서, 상기 "ScaA"는 그 전장(full-length)의 서열이 GenBank accession no. CAM79168.1에서 확인되는 단백질을 말하고, 상기 "ScaB"는 그 전장의 서열이 GenBank accession no. CAM79930.1에서 확인되는 단백질을 말하며, "ScaE"는 그 전장의 서열이 GenBank accession no. CAM81221.1에서 확인되는 단백질을 말한다. 이들 각 항원 단백질의 유전자 서열도 ScaA의 경우 GenBank accession no. CAM79168.1, ScaB의 경우 GenBank accession no. CAM79930.1 및 ScaE의 경우 GenBank accession no. CAM81221.1에서 확인할 수 있다.

또 본 명세서에서, "ScaA에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자"란 바람직하게는 전장의 서열을 가진 ScaA 항원과, 나아가 ScaA 항원에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaA 항원의 단편을 포함하는 의미이다. ScaA 항원의 단편은 특히 아래의 실시예에서 [표 1]의 프라이머를 사용하여 얻어진 증폭 유전자로부터 발현된 단백질 산물로서 ScaA 항원의 전장의 서열에서 791번째 아미노산에서 1185번째까지의 아미노산(서열번호 1)으로 구성된 단백질이 바람직하다.

또 본 명세서에서, "ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자"도 상기 "ScaA에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자"와 동일한 관점에서 정의될 수 있으며, 따라서 전장의 서열을 가진 ScaB 또는 ScaE 항원과, 그 특이적 결합능을 보유한 이들 항원의 단편을 포함하는 의미이며, 바람직하게는 상기 단편 단백질은 아래의 실시예에서 [표 1]의 프라이머를 사용하여 얻어진 증폭 유전자로부터 발현된 단백질 산물로서 ScaB 항원의 경우 그 전장의 서열에서 24번째 아미노산에서 372번째까지의 아미노산(서열번호 2)으로 구성된 단백질을 말하며, ScaE 항원의 경우는 그 전장의 서열에서 34번째 아미노산에서 477번째까지의 아미노산(서열번호 3)으로 구성된 단백질을 말한다.

또 본 명세서에서, "특이적 결합"이란 상기 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자가 그 항체와만 결합하고 다른 단백질과는 실질적으로 결합하지 않는 경우를 의미한다. 여기서 "실질적으로"란 정도는 낮지만 비특이적인 결합체는 형성될 수 있다는 것을 의미하는데, 이러한 비특이적 결합은 후술하는 바와 같이 특이적 결합의 검출 이전에 세척 용액에 의하여 세척·제거될 수 있다.

또 본 명세서에서, "생체 시료"는 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체가 존재할 수 있는 시료로서 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 눈물, 점액, 콧물, 질 분비물 등을 포함하며, 바람직하게는 혈청이다. 그것은 항체는 혈청 중에 높은 농도로 존재한다는 것이 당업계에 알려져 있기 때문이다.

본 발명에서 상기 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 DNA 재조합 기술에 대해 당업계에 공지된 방법으로 제조할 수 있다. 이러한 방법은 (i) 상기 분자를 암호화하는 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조하고 (ii) 이 발현벡터를 숙주세포에 형질전환시키고 (iii) 형질전환된 숙주세포를 배양하고, 마지막으로 (iv) 그 배양물로부터 원하는 분자를 분리·정제하는 단계를 포함한다.

상기 분자를 암호화하는 유전자는 그 유전자 서열(전술한 바의 GenBank accession no.에서 확인할 수 있음)를 이용하여 쯔쯔가무시 균으로부터 얻을 수 있다. 예컨대 그 균의 게놈 DNA를 확보한 후 그 유전자 서열에 기초하여 제작된 프라이머로 증폭하여 얻을 수 있다.

상기 발현벡터는 플라스미드 또는 바이러스로부터 유래된 것일 수 있으며, 직접 제작하여 사용하거나 생명공학 회사 예컨대 노바겐(Novagen) 사, 다까라슈죠 사, 키아겐(Qiagen)사, 스트라타진(Stratagene) 사, 프로메가(Promega) 사, 로슈 다이아그노스틱스(Roche Diagnositics) 사, 인비트로겐(Invitrogen) 사, 제네틱스 인스티튜트(Genetics Institute)사 등으로부터 상업적으로 입수하여 사용할 수 있다.

발현벡터는 원하는 분자(즉 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자임, 이하 "목적 단백질")를 암호화하는 유전자(이하 "목적 유전자")를 포함하고 그 목적 유전자의 발현을 유도하는 서열을 포함하여 구성된다. 여기서 목적 유전자의 발현을 유도하는 서열은 프로모터 서열, 폴리아데닐화 서열 등을 말한다. 여기서 프로모터는 목적 유전자의 전사를 유도할 수 있는 서열로서, 사이토메갈로 바이러스의 즉시 초기형 프로모터, SV40의 프로모터(SV 40 후기형 프로모터 및 SV 40 초기형 프로모터), HSV(herpes simplex virus)의 tk 프로모터, 아데노바이러스 2 주요 후기형 프로모터(Adeno 2 major late promoter PAdml), 아데노 바이러스 2 초기형 프로모터(PAdE2) 등이 예시될 수 있으며, 또한 여기서 폴리아데닐화 서열은 전사 종결 서열로서 소성장 호르몬 터미네이터(Gimmi, E. R., et al., Nucleic Acids Res. 17:6983-6998(1989)), SV40 유래 폴리 아데닐화 서열(Schek, N, et al., Mol. Cell Biol. 12:5386-5393(1992)), HIV-1 polyA(Klasens, B. I. F., et al., Nucleic Acids Res. 26:1870-1876(1998)), β-글로빈 polyA(Gil, A., et al, Cell 49:399-406(1987)) 등이 예시될 수 있다.

또한 상기 발현벡터는 선택적으로 리포터(예: 루시퍼라아제, β-글루쿠로니다아제) 유전자나 선택 표지 유전자로서 항생제(예: 네오마이신, 카베니실린, 카나마이신, 스펙티노마이신, 하이그로마이신 등) 내성 유전자 등을 포함할 수 있으며, 또한 선택적으로 발현 효율을 향상시키기 위하여 인핸서 분자를 포함할 수 있다.

형질전환될 수 있는 숙주세포로는 세균 등의 원핵 세포(예를 들면 대장균, 고초균)나, 효모(예를 들면 사카로미세스 세레비시아(Saccharomyces cerevisiae)), 곤충 세포(예를 들면 Sf 세포), 포유 동물 세포(예를 들면 COS, CHO, BHK) 등의 진핵 세포를 사용할 수 있다.

형질전환 방법은 당업계에 공지된 임의의 방법을 사용할 수 있으며, 그러한 방법으로서 예컨대 미세 주입법(Capecchi, M.R., Cell, 22:479(1980)), 칼슘 포스페이트 침전법(Graham, F.L. et al., Virology, 52:456(1973)), 전기 천공법(Neumann, E. et al., EMBO J., 1:841(1982)), 리포좀-매개 형질감염법(Wong, T.K. et al., Gene, 10:87(1980)), DEAE-덱스트란 처리법(Gopal, Mol. Cell Biol., 5:1188-1190(1985)), 유전자 밤바드먼트(Yang et al., Proc.Natl. Acad. Sci., 87:9568-9572(1990)), 초산-리튬 DMSO법(Hill et al., Nucleic Acid Res., 19, 5791(1991)) 등을 들 수 있다.

형질전환된 숙주세포의 배양도 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용할 수 있다.

세포 배양에 사용되는 배지는 형질전환된 숙주세포가 효율적으로 이용할 수 있는 탄소원, 질소원, 무기염 등을 포함한다면 천연 배지와 합성 배지 모두를 사용할 수 있다. 만일 숙주세포로서 동물세포를 사용할 경우, 예컨대 Eagles's MEM (Eagle's minimum essential medium, Eagle, H. Science 130:432(1959)), α-MEM (Stanner, C.P. et al., Nat. New Biol. 230:52(1971)), Iscove's MEM (Iscove, N. et al., J. Exp.Med.147:923(1978)), DMEM (Dulbecco's modification of Eagle's medium, Dulbecco, R. et al., Virology 8:396(1959)) 등을 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 배지에 대해서 구체적인 것은 문헌 [R. Ian Freshney, Culture of Animal Cells, A Manual of Basic Technique, Alan R. Liss, Inc., New York]를 참조할 수 있다.

목적 단백질의 분리·정제 방법도 당업계에 공지되어 있으며, 공지된 임의의 방법을 이용할 수 있다. 예컨대 한외 여과, 겔 여과, 이온 교환 크로마토그래피, 친화도 크로마토그래피(표지 펩티드가 결합된 경우), HPLC, 소수성 크로마토그래피, 등전점 크로마토그래피 등의 방법이나 이들을 조합하는 방법이 사용될 수 있다.

DNA 재조합 기술에 의한 본 발명의 목적 단백질의 생산에 대해서는 본 명세서의 기재 내용 이외에 문헌[Sambrook 등, Molecular Cloning A Laboratory Mannual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, US(1989)], 문헌[Ausubel 등, Current Protocols in Molecular Biology, Jon Willey & Sons, US(1993)], 문헌[Sambrook, J. ＆ Russel, D. 저, Molecular Cloning, A LABORATORY MANUAL, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001년 1월 15일 발행의 제1권 7.42 내지 7.45, 제2권 8.9 내지 8.17] 등을 참조할 수 있다. 이들 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주 된다.

본 발명의 조성물은 그 분자가 가용성 용액 예컨대 탄산염 완충용액 또는 중탄산염 완충용액에 용해된 형태이거나 동결건조된 형태일 수 있다.

한편 본 발명의 조성물은 지지체에 고정되어 사용될 수 있으며, 사용될 수 있는 고체 지지체로는 예컨대 입자(수지 비드, 자기 비드, 금속 미립자, 금 콜로이드 등), 기판(마이크로 타이터 플레이트, 유리 기판, 실리콘 기판, 수지제 기판, 전극 기판, 막 등) 등을 들 수 있으나 이에 한정되는 것은 않는다. 지지체의 재료로서는 (i) 유리, 석영 유리, 알루미나, 사파이어, 포스테라이트(forsterite), 산화규소 등의 무기 재료나 (ii) 폴리에틸렌, 폴리비닐아세탈, 아크릴 수지, 폴리카보네이트, 페놀 수지, 우레아 수지, 에폭시 수지, 멜라민 수지, 실리콘 수지, 폴리페닐렌옥시드, 폴리술폰, 폴리에틸렌글리콜, 아가로스, 아크릴아미드, 니트로셀룰로오스, 나일론, 라텍스 등의 유기 재료가 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물을 지지체에 고정하는 방법은 흡착(예컨대 코팅)에 의해서 직접적으로 고정될 수 있으며, 단백질과 지지체 모두에 결합하는 링커 등을 사용하여 간접적으로 고정될 수도 있다.

본 발명의 조성물을 지지체에 흡착시켜 사용할 경우, 이러한 흡착은 예컨대 pH 9.5인 0.06M 탄산염 완충용액 또는 중탄산염 완충용액으로 본 발명의 조성물을 희석하고 그 희석액을 지지체에 일정온도에서 일정시간 접촉시킴으로써 이루어질 수 있다. 여기서 흡착에 필요한 시간과 온도는 충분한 흡착이 이루어지는 한 특별한 제한이 없는데, 예컨대 4℃에서 흡착이 이루어질 경우 72시간 동안 수행될 수 있으며, 또한 예컨대 37℃에서 흡착이 이루어질 경우 2시간 동안 수행될 수 있다. 흡착된 후에는 증류수나 에탄올 등으로 세척할 수 있으며, PBS 등의 용액에 함유된 소 혈청 알부민(BSA) 등의 차단제로 코팅할 수도 있다. 차단제로 코팅한 후에는 증류수나 차단제를 함유하지 아니한 완충용액 등으로 세척할 수도 있다.

지지체에 흡착된 본 발명의 조성물(구체적으로 그 조성물에 포함된 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자를 말함)은 지지체에 생체 시료를 처리할 경우 그 생체 시료 중의 ScaA 등에 대한 특이 항체와 결합체를 형성하게 된다. 결합체를 형성을 유도한 후에는 비특이적으로 결합된 항체 등을 제거하거나 오염물질 등을 제거하기 위하여 Tween 20과 같은 세척 완충액이나 증류수 등의 세척제로 세척하는 것이 바람직할 수 있다.

상기 결합체는 다양한 방법을 통하여 검출함으로써 생체 시료 중의 ScaA 등에 대한 특이 항체 존재 유무 및/또는 존재 정도를 정성적·정량적으로 확인할 수 있다. 이는 결과적으로 피검자가 쯔쯔가무시 균에 감염되었는지에 대해 유용한 정보를 제공하게 될 것이다.

상기 결합체는 검출제를 사용하여 검출할 수 있는데, 검출제는 예컨대 ScaA 등에 대한 특이 항체와 결합하는 2차 항체일 수 있다. 2차 항체의 예로서는 항체(일차 항체)의 Fc 부분을 인식하는 것일 수 있으며, 이러한 2차 항체는 Fc 부분을 조류(예를 들면, 닭 등), 포유 동물(예를 들면, 토끼, 염소, 말, 양, 쥐 등) 등의 동물에 면역화시켜 그 동물의 혈액으로부터 분리·정제하여 얻어질 수 있다.

2차 항체는 검출 시그널을 제공하는 표지(label)나 효소와 접합됨으로써 검출을 편리하게 할 수 있다.

표지 접합은 검출 시그널을 제공할 수 있는 임의의 표지를 항체에 결합시키는 것이다. 그러한 표지로서는 트리티움, 요오드(¹³¹I,¹²⁵I,¹²³I,¹²¹I), 인(³²P), 황(³⁵S), 금속류(예를 들면, ⁶⁸Ga, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ge, ⁵⁴Mn, ⁹⁹Mo, ⁹⁹Tc, ¹³³Xe 등) 등의 방사성 동위원소, 플루오레세인이소티오시아네이트, 테트라메틸로다민이소티오시아네이트, 치환 로다민이소티오시아네이트, 디클로로트리아진이소티오시아네이트, 알렉사(Alexa) 또는 알렉사플루오로(AlexaFluoro) 등의 형광성 물질 또는 형광단 등을 들 수 있다.

효소 접합은 항체에 퍼옥시다제(POD), 알칼리포스파타제, β-갈락토시다제, 우레아제, 카탈라제, 글루코스옥시다제, 락트산 탈수소 효소, 아밀라제 또는 비오틴-아비딘 복합체 등의 효소 등을 결합시키는 것으로, 이들 효소는 특정 기질과 반응할 경우 특정 검출 시그널을 제공한다. 예컨대 퍼옥시다제는 아미노살리실산과 과산화수소 또는 p-페닐렌디아민과 과산화수소와 반응하는 경우 자주색을 나타내며, 알칼리성 포스파타제는 디니트로페닐포스페이트와 반응하는 경우 황색을 나타내고, β-갈락토시다제는 O-니트로페닐-베타-D-갈락토피라노사이드와 반응하여 자주색을 나타낸다.

상기 표지나 효소는 바람직하게는 항체와 공유결합된다.

이들 2차 항체 등의 검출제를 사용하여 검출할 경우, 이들 2차 항체의 상기 결합체와의 반응 정도를 효소 면역 측정법, 형광 면역 측정법, 방사 면역 측정법, 발광 면역 측정법 등 다양한 당업계의 공지·관용된 면역학적 측정 방법을 사용하여 측정할 수 있다. 바람직하게는 효소 면역 측정법, 가장 바람직하게는 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)를 사용하는 경우이다.

본 발명은 다른 측면에 있어서, 쯔쯔가무시 균 특이 항체의 검출용 키트에 관한 것이다.

본 발명의 쯔쯔가무시 균 특이 항체의 검출용 키트는 ScaA 등에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자를 포함함을 특징으로 한다.

본 발명의 키트에 포함되는 ScaA 등에 대한 특이 항체에 특이적로 결합하는 분자는 지지체 결합되어 있거나 유리된 형태일 수 있으며, 가용성 용액에 용해된 형태이거나 동결건조된 형태일 수 있다.

본 발명의 키트에 포함되는 ScaA 등에 대한 특이 항체에 특이적로 결합하는 분자는 전장의 ScaA 등의 항원이거나, 전술한 바와 같이 ScaA 등에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaA 등의 항원 단편일 수 있다.

본 발명의 키트는 생체 시료 중의 ScaA 등에 대한 특이 항체와 이 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자의 결합체를 검출하기 위한 검출제를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 검출제는 전술한 바의 표지 또는 효소와 결합된 2차 항체일 수 있다.

또한 본 발명의 키트는 담체, 세정 버퍼, 시료 희석액, 효소 기질, 반응 정지액 등을 추가로 포함할 수도 있으며, 결과의 해석 방법 등을 포함한 사용 방법을 교시하는 설명서를 추가로 포함할 수도 있다.

본 발명의 또 다른 측면에 있어서, 생체 시료 중에 있는 쯔쯔가무시 균 특이 항체의 검출 방법에 관한 것이다.

본 발명의 방법은 (a) 생체 시료와, ScaA 등에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자를 포함하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 조성물과 결합시켜, 생체 시료 중의 ScaA 등에 대한 특이 항체와 이 특이 항체에 특이적으로 결합하는 상기 분자의 결합체를 형성시키는 단계, 및 (b) 그 결합체를 검출하는 단계를 포함하여 구성된다.

본 발명의 방법에서 상기 (a) 단계의 생체 시료는 전술한 바의 이유에서 바람직하게는 혈청이다.

또 본 발명의 방법에서 상기 (a) 단계의 ScaA 등에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaA 등의 항원이거나 ScaA 등에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaA 등의 항원 단편일 수 있다.

또 본 발명의 방법에서, 상기 (b) 단계의 결합체를 검출하는 단계는 검출 시그널을 제공할 수 있는 표지나 효소로 접합된 이차 항체를 상기 결합체와 반응시키는 단계 및 상기 결합체와의 반응 정도를 측정하는 단계를 포함하여 구성된다. 여기서 2차 항체의 결합체와의 반응 정도는 전술한 바와 같이 효소 면역 측정법, 형광 면역 측정법, 방사 면역 측정법, 발광 면역 측정법 등에 의하여 가능하며, 바람직하게는 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)를 사용하는 경우이다.

본 발명의 또 다른 측면에 있어서, 쯔쯔가무시 균 감염 여부 진단에 유용한 정보를 제공하기 위한 방법에 관한 것이다.

본 발명의 방법은 전술한 바의 생체 시료 중에 있는 쯔쯔가무시 균 특이 항체의 검출 방법과 동일한 단계를 포함하여 구성되며, 따라서 그 검출 방법에 대한 설명이 본 발명의 방법에 그대로 유효하다.

전술한 바와 같이, 본 발명에 따르면 본 발명의 목적은 쯔쯔가무시 균 특이 항체를 검출하기 위한 조성물 및 키트를 제공할 수 있다.

본 발명의 쯔쯔가무시 균 특이 항체를 검출하기 위한 조성물 및 키트는 단독으로 또는 공지된 쯔쯔가무시병의 진단 방법 등과 조합되어 쯔쯔가무시 균의 감염 여부를 확인하기 위한 용도로 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 순수 분리·정제된 ScaA 등의 항원 단백질을 SDS PAGE와 쿠마지 블루 염색을 통해서 확인한 결과이다.
도 2는 순수 분리·정제된 ScaA 등의 항원 단백질의 아미노산 서열의 위치를 그 각 전장의 단백질에 대해 모식도로 나타낸 것이다.
도 3은 음성 환자의 시료 및 양성 환자의 시료에 대해 ScaA 항원 등의 반응 정도를 효소면역측정법에 의하여 측정한 결과이다.

이하 본 발명을 실시예를 참조하여 설명한다. 그러나 본 발명의 범위가 이러한 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 시료의 준비

쯔쯔가무시병에 특이적인 Sca의 항체를 확인하기 위하여, 정상인 10명의 혈청과 쯔쯔가무시병의 발병 위험기간 동안 발생한 급성 열성병 환자 100명의 혈청을 채취하여 실험에 사용하였다.

< 실시예 2> 면역형광법에 의한 쯔쯔가무시병 양성 시료 및 음성 시료의 확인

오리엔티아 쯔쯔가무시 균에 대한 항체의 적정 농도(항체가; titer)를 측정하기 위해 면역형광법(Immunofluorescence assay)을 사용하였다.

균을 감염시킨 L929 세포(마우스 섬유아세포주; ATCC NTCT929)를 수거한 후 phosphate-buffered saline (PBS, pH 7.2)로 씻어내고 Teflon-coated spot 슬라이드에 스포팅하고 냉각 아세톤을 10분 동안 처리하여 균을 고정하였다. 균을 고정한 슬라이드는 사용 전까지 -70℃에 보관하였다. PBS로 2배씩 순차적으로 희석한(1:40 내지 1:1280) 환자의 혈청을 항원(균)이 코팅된 슬라이드 스팟에 뿌리고 습도를 높인 상자에 넣어 상온에서 30분간 배양하였다. 2차 항체로 인간의 IgG에 대한 염소의 항체에 Alexa Fluor 488을 결합시킨 제품(Molecular Probes)을 PBS로 1:1000으로 희석하여 사용하였다. 염색된 슬라이드는 Olympus FV1000 공초점 레이져주사현미경(Olympus, Tokyo, Japan)을 이용하여 확인하였다. 이러한 방법을 통하여 쯔쯔가무시병 양성 시료 및 음성 시료를 구분하여 후속 면역 반응 실험을 진행하였다.

< 실시예 3> Sca 항원 등의 제조

실험에 사용할 TSA56, 47kD, ScaA, ScaB, ScaC 및 ScaE 항원은 보령(Boryong) 균주로부터 획득하였다.

SA56, 47kD, ScaA, ScaB, ScaC 및 ScaE 항원을 제조하기 위하여 먼저 보령 균주로 감염된 L929 세포(마우스 섬유아세포주; ATCC NTCT929) 내에서 증식시켜 유전체 DNA를 확보하였다. 구체적으로 감염 3-4일 후 간접면역형광기술을 수행하여 감염률을 확인하고 감염률이 90% 이상이 되면 세포를 600xg의 속도에 20분 동안 원심 분리하여 펠렛을 모은 후 6.5ml의 Tris-sucrose(TS) 완충액(33 mMTris-Cl[pH 7.4] and 0.25 M sucrose)에 현탁시켰다. 현탁된 세포를 Polytron homogenizer (Wheaton Inc. Millville, NJ)를 이용하여(10stroke) 균질화한 후 5분 동안 200xg로 원심분리하였다. 원심분리 후 상층액을 TS 완충액에 들어있는 40% Percoll (Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Sweden)과 섞은 후 2500xg에서 60분 동안 원심분리하고 원심분리 후 나타나는 균 층을 모은 후 다시 7700xg로 30분 동안 원심분리하였다. 최종적으로 쯔쯔가무시 균이 수집되면 RBC Genomic DNA extraction kit(RBC Bioscience Co., Taipei City, Taiwan)를 이용하여 균의 유전체 DNA를 확보하였다.

상기에 얻은 유전체 DNA를 이용하여 아래 [표 1]의 프라이머로 TSA56, 47kD, ScaA, ScaB, ScaC 및 ScaE 항원의 유전자의 일부 서열(passenger domain)을 증폭한 후 pET28a vector에 삽입하고 이 벡터를 Escherichia coli BL21(DE3) (Novagen, Darmstadt, Germany)에 도입한 후 앰피실린(100㎍/ml)를 함유한 LB broth에서 배양하였다.

0.4mM isopropyl β-D-thiogalactoside(IPTG; Duchefa, Zwijndrecht, Netherlands)를 37℃서 4시간 동안 처리하여 단백질의 발현을 유도하였으며 이후 균을 10분 동안 1,000xg의 속도로 원심분리 한 후 1mg/ml의 리소자임을 포함하는 결합 완충액(300 mMNaCl, 50 mM sodium phosphate buffer, 10 mM imidazole)에 현탁시켜 4℃에서 30분 동안 배양하였다. 이후 얼음 위에서 4분간 음파처리를 하였으며 이를 통해 얻어진 용해물을 1,600xg의 속도로 4℃에서 20분간 원심분리하였다. 상층액을 수거하고 결합 완충액으로 미리 평형화시킨 Ni-nitrilotriacetic acid (NTA) His-결합 레진(Novagen)에 적용한 후 용리 완충액(300 mMNaCl, 50 mM sodium phosphate buffer, 250 mM imidazole)를 부어 단백질을 얻어냈다. 자유 이미다졸을 제거하기 위하여 순차적인 투석을 진행하였으며 정제된 단백질은 면역 반응을 이용한 실험에 사용하였다. 순수 정제된 단백질은 [도 1]에서와 같이 SDS PAGE와 쿠마지 블루 염색을 통해서 확인하였으며, 각 얻어진 단백질의 아미노산 서열의 위치는 [도 2]에 그 각 전장의 단백질에 대해 모식도로 나타내었다([도 2]에서 실선으로 표시된 부분임). 참고로 [도 2]에서 SP는 signal peptide, RPT는 internal repeat sequence, TM은 transmembrane, AT는 autotransporter domain, AA는 아미노산을 가리킨다.

< 실시예 4> Sca 항원 등의 쯔쯔가무시병에 대한 진단력 평가

Sca 항원 등의 쯔쯔가무시병에 대한 진단력을 평가하기 위하여 효소면역측정법(ELISA; enzyme-linked immunosorbent assay)을 사용하였다.

상기 <실시예 3>에서 순수 정제 된 His-tagged Sca 항원 등을 각 1㎍/㎖의 농도로 0.05 M bicarbonate 완충액(pH 9.5)에 희석하여 플레이트(96-웰 플레이트; Nunc, Rochester, NY)에 하룻밤 동안 흡착시켰다. 3% 소혈청 알부민(bovine serum albumin; BSA)으로 상온에서 1시간 동안 블로킹한 후 환자와 정상인의 혈청 시료를 3% BSA와 0.1% Tween 20를 포함하는 PBS에 희석하여 웰에 첨가하도록 하였다. 37℃에서 1시간 동안 배양한 후에 0.05% Tween 20을 함유하는 PBS로 6회 세척하였다. anti-human IgG-HRP conjugate (Promega)를 3% 소혈청 알부민과 0.1% Tween 20을 포함하는 PBS에 1:10,000로 희석한 후 1시간 동안 배양하였다. 발색시키기 위하여 TMB microwell peroxidase substrate solution (KPL, Gaithersburg, MD)를 7분 동안 첨가한 후 1M MH₃PO₄ 용액을 이용하여 반응을 중지시켰다. 흡광도는 enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) plate reader (Beckman)를 이용하여 450nm에서 확인하였다.

시료는 상기 <실시예 2>의 면역형광법에 의해 음성을 나타내는 환자의 시료 10개, 양성을 나타내는 환자의 시료 10개(항체가 ≥ 1280) 및 정상인의 시료 10개를 희석하여 사용하였으며, 기준값(cutoff values)을 정상인의 시료를 기준으로 설정하였다.

결과를 [도 3]에 나타내었고, 실험에 사용된 Sca 항원 등의 민감도 및 특이도를 아래의 [표 2]에 정리하였다. [도 3]에서 흑색 원은 양성 환자 시료, 백색 원은 음성 환자 시료를 가리키며, 적색 선은 정상인의 시료로부터 산정한 기준값이다(Mean + 2 x S.D.)

[도 3] 및 [표 2]를 참조하여 보면, TSA56, ScaA 및 ScaC에서 100%의 민감도를 보였으며, TSA56 및 ScaE에서 100%의 특이성을 보임을 알 수 있다.

민감도 및 특이도

구분	민감도(%)	특이도(%)
TSA56	100	100
47kD	77	93
ScaA	100	73
ScaB	63	87
ScaC	100	67
ScaE	80	100

<110> Seoul National University R&DB Foundation <120> A Composition and a Kit for Detecting Specific Antibodies for Orientia tsutsugamushi <130> PP12-000-00 <160> 15 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 395 <212> PRT <213> Orientia tsutsugamushi <400> 1 Ser Ser Ala Arg Gly Glu Met Ala Leu Leu Gly Asp Tyr Thr Val Thr 1 5 10 15 Ala Gln Thr Ser Asp Gly Ser Gly Asn Ile Asn Val Gly Asn Ala Ser 20 25 30 Ile Asn Leu Gly Ile Asn Thr Leu Ala Leu Phe Gly Asp Asn Ile Ile 35 40 45 Ile Leu Gly His Lys Ser Asn Lys Gly Ser Ser Thr Asn Pro Lys Lys 50 55 60 Phe Asp Lys Lys Pro Val Thr Val Phe Ser Ile Gly Tyr Thr Thr Asn 65 70 75 80 Ser Asp Gly Thr Val Lys Thr Gln Gly Lys Leu Lys Leu Ser Lys His 85 90 95 Tyr Asp Pro Ser Asn Lys Ile Val Leu Asn Val Val His Gln Gly Asp 100 105 110 Ser Arg Asp Leu Ser Lys His Gly Pro Gln Thr Ile Ile Gln Pro Val 115 120 125 Asp Ile Ala Asp Thr Gly Asn Leu Asp Val Ser Gly Leu Ile Tyr Val 130 135 140 Cys Asp Gly Lys Cys Lys Trp Gln Pro Val Pro Gly Ser Asp Gly Gln 145 150 155 160 Leu Ala Phe Ala Gly Leu Val Asp Lys Lys Lys Lys Asp Lys Gly Asp 165 170 175 Asp Gly Ala Ser Ser Ser Ser Gly Ser Ser Ser Ile Ala Pro Ser Ala 180 185 190 Arg Val Ser Pro Glu Val Ser Asp Gly Glu Glu Gly Gly Lys Asp Glu 195 200 205 Asp Ile Gln Ala Ser Ala Ala Ser His Leu His Ser Lys Asp Ser Ala 210 215 220 His Ser Lys Gln Ser Gln Asp Lys Asp His Thr Glu Asp Pro Glu Asn 225 230 235 240 Pro Glu Asp Thr Thr Glu Ala Ala Ile Glu Glu Leu Ala Arg Arg Leu 245 250 255 Asp Asp Pro Ile Leu Ser Arg Arg Ala Ala Glu Gln Pro Gln Pro Asp 260 265 270 Pro Ala Glu Gln Ala Gln Pro Val Val Ala Gln Pro Leu Ala Ala Gly 275 280 285 Ala Gly Met Gln Arg Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln 290 295 300 Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln His Ile Ser Ser Gly Val 305 310 315 320 Gln Pro Gln Gln His Leu Ser Ser Pro Tyr Ser Asp Asp Gln Glu Gln 325 330 335 Ser Ser Glu Gln Ala Val Ala Leu Gln Pro Ile Leu Gln Arg Thr Ala 340 345 350 Ser Asp Ala Pro Leu Lys Gly Gly Val Asn Ile Thr Val Ala Ala Ile 355 360 365 Ser Ser Ile Val Glu Ser Arg Ala Ser Asn Asn Lys Ser Val Ser Asp 370 375 380 Ile Val Ser Ser Gly Ser Asn Ile Asn Lys Gln 385 390 395 <210> 2 <211> 349 <212> PRT <213> Orientia tsutsugamushi <400> 2 Ser Thr Thr Gln Arg Ile Leu Gly Met Asn Leu Leu Leu Asp Leu Glu 1 5 10 15 Thr Lys Gln Ser Lys Phe Lys Thr Leu Asp Gln Asp Lys Ile His Leu 20 25 30 Thr Arg Asn Ile Gly Asn Leu Glu Arg Gln Val Ser Glu Phe Ile Ala 35 40 45 Asn Gln Thr Asn Leu Gln Gln Gly Ile Gln Asp Leu His Gly Met Arg 50 55 60 Gln Ser Val Thr Gln Leu Asn Gln Val Leu Arg Asn Leu Leu Val Asn 65 70 75 80 Ala Lys Ala Phe Asp Phe Ile Lys Asn Leu Arg Val Gln Arg Val Asn 85 90 95 Thr Asn Asp Asn Asn Glu Val Gln Gln Arg Ala Ala Glu Leu Arg Gln 100 105 110 Gln Tyr Asp Lys Val Asn Asp Cys Lys Gln Leu Val Glu Gly Phe Tyr 115 120 125 His Asp Ile Asn Gln Val Gly Ser Glu Glu Val Leu Lys Gly Leu Arg 130 135 140 Gly Tyr Gln Phe Asp Lys Phe Val Gly Val Val Arg Val Val Lys Tyr 145 150 155 160 Asp Leu Gln Asp Ala Leu Ala Ser Leu Glu Tyr Ala Cys Leu Ala Met 165 170 175 Arg Asp Ala Ile Ile Leu Met Asn Ile Gln Pro Tyr Ala Ala Lys Asp 180 185 190 Ile Asn Asp Lys Ile Gln Leu Val Asn Thr Leu Ile His Ala Leu Gln 195 200 205 Asp Thr Pro Leu Ile Lys Ala Arg Arg Lys Ile Lys Pro Leu Ser Asn 210 215 220 Asn Thr Leu Gln Lys Ile Asp Met Phe Val Asn Gln Leu Val Gln Glu 225 230 235 240 Leu Arg Val Glu Ile Ala Glu Leu Asn Cys Gln Ile Ala Glu Leu Asn 245 250 255 Gln Glu Ile Ile Lys Ala Asp Gln Lys Val Lys Ala Ile Asn Ser Lys 260 265 270 Leu Asp Asp Leu Asp Asn Thr Lys Pro Asp Ala Ser Val Ile Glu His 275 280 285 Val Ile Arg Glu Asp Lys Thr Leu Glu Glu Ala Val Lys Asn His Asp 290 295 300 Ser Ala Val Thr Gly Ala Met Asn Met Asn Ile Asn Thr Ala Val Ser 305 310 315 320 Gly Val Thr Ser Ser Met Gly Asn Ile Val Ser Gly Gln Gly Asn Gln 325 330 335 Thr Asn Ile Ile Ser Ser Gly Ser Asn Ile Cys Ser Ser 340 345 <210> 3 <211> 444 <212> PRT <213> Orientia tsutsugamushi <400> 3 Asn Val Asn Ala Gln Pro Asn Ser Thr Lys Gln Asn Gln Leu Asn Asn 1 5 10 15 Lys Ile Asn Gln Ile Asp Ala Arg Lys Ser Gln Leu Leu Leu Gln Gln 20 25 30 Gln Asn Leu Glu Gln Asp Arg Asp Lys Ile Tyr Asn Ser Ile Arg Asp 35 40 45 Lys Ile Tyr Asn Gly Ile Asn Leu Glu Asp Ile Lys Ser Tyr Ser Asp 50 55 60 Val Cys Arg Lys Leu Leu Leu His Pro Ser Asp Gln Val Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Asp Glu His Asp Gln Tyr Asp Thr His Asn Leu Arg Pro Arg Ser 85 90 95 Asn Met Leu Tyr Arg His Ile Asn Glu Thr Ala Asn Phe Ile Asn Asn 100 105 110 Met Leu Gly Leu Ile Asp Ile Asp Ile Val Pro Asn Tyr Thr Asn Arg 115 120 125 Ser Ala Thr Leu Ala Glu Met Lys Asp Tyr Glu Lys Gln Leu Ser Asp 130 135 140 Lys Val Asn Arg Phe Gly Asn Arg Ile His Gly Gly Val Asn Asn Ala 145 150 155 160 Lys Gln Arg Tyr Arg Ala Val Thr Ile Glu Ile Asp Glu Leu Asn Gln 165 170 175 Asn Gln Glu Leu Arg Gln Phe His Thr Ala Leu Arg Asp Val Gln Ala 180 185 190 Lys Ile Gln Ala Leu Ser Leu Ala Ser Leu Asn Asp Leu Ser Thr Glu 195 200 205 Ala Arg Asn Leu His Leu Asp Ile Ala Asn Gln Leu Val Ala Ile Asp 210 215 220 Gln Ser Ile Gln Ala Cys Glu Arg Gly Ser Asn Ser Met Leu Asn Leu 225 230 235 240 Asp Gln Gln Tyr Glu Gln Trp Leu Asp Asn Leu Tyr Ser Thr Ser Glu 245 250 255 Glu Ile Val Leu Ile Leu Gln Thr His Val Gln Ala Gly Ala Gln Ala 260 265 270 Ile Pro Gln Asp Glu Leu Asn Gln Met His Lys Gln Met Gln Asp Ile 275 280 285 Lys Lys Leu Met Pro Lys Phe Lys Gln Asp Leu Ser Met Leu Ala Thr 290 295 300 Gln Leu Arg Asn Ile Ser Asn Leu Ile Ala Thr Phe Asp His Arg Ala 305 310 315 320 Glu Ile Lys Pro Asp Glu Asn Gly Pro Val Gln Pro Gly Leu Ser Asp 325 330 335 Asn Ile Arg Glu Ile Ile Asn Asp Phe Pro Gln Ala Leu Gln Gln Tyr 340 345 350 Lys Asn Asn Leu Glu Asn Asn Leu Lys Ser Ile Asn His Lys Ile Ala 355 360 365 Asn Ile Asp Gln Leu Val Ser Tyr Leu Asn Gln Gln Leu Asp Thr Leu 370 375 380 Gln Gln Gln Gln Leu Leu Gly Asp Gln Ile Ala Pro Thr Lys Ala Asn 385 390 395 400 Ala Ser Phe Glu Lys Gln Gln Leu Leu Tyr Gln Ala Gln Asn Asn Ala 405 410 415 Met Leu Ala Asn Ala Ile Ser Phe Thr Ala Asp Thr Ala Val Asn Ala 420 425 430 Thr Thr Ser Ile Leu Ser Lys Ile Ala Thr Val Gln 435 440 <210> 4 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 4 ggcggatccc caggatttag agcagag 27 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 5 cggtcgacga agttatagcg caca 24 <210> 6 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 6 cgggatccat tagtgtaaat agtttatcc 29 <210> 7 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 7 cggtcgacct tattaatatt aggtaaagc 29 <210> 8 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 8 cgggatcctc atctgctaga ggtgagatg 29 <210> 9 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 9 cgctcgagtt gtttattgat attagatcc 29 <210> 10 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 10 ggcggatcca gtacaactca aaggatatta gg 32 <210> 11 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 11 cggtcgacac tactacaaat gtttgatcc 29 <210> 12 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 12 ggcggatcca aaagtataac tccagaaaag tg 32 <210> 13 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 13 cggtcgacgt ttaatttagc acgatttat 29 <210> 14 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 14 ggcggatcca atgtaaatgc acagcccaat ag 32 <210> 15 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 15 cggtcgacct gtactgttgc tattttaga 29

Claims (16)

1. ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자(molecule)를 포함하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 ScaA에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaA 항원 또는 ScaA에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaA 항원의 단편으로서 ScaA 항원의 전장의 서열에서 791번째 아미노산에서 1185번째까지의 아미노산으로 구성된 단백질이고,
   상기 ScaB에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaB 항원 또는 ScaB에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaB 항원의 단편으로서 ScaB 항원의 전장의 서열에서 24번째 아미노산에서 372번째까지의 아미노산으로 구성된 단백질이며,
   상기 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaE 항원 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaE 항원의 단편으로서 ScaE 항원의 전장의 서열에서 34번째 아미노산에서 477번째까지의 아미노산으로 구성된 단백질인 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 조성물은 생체 시료로서 혈청과 접촉되어 사용되는 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 조성물.
   
4. ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자(molecule)를 포함하는 쯔쯔가무시 균 특이 항체의 검출용 키트.
   
5. 제4항에 있어서,
   상기 ScaA에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaA 항원 또는 ScaA에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaA 항원의 단편으로서 서열번호 1의 아미노산으로 구성된 단백질이고,
   상기 ScaB에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaB 항원 또는 ScaB에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaB 항원의 단편으로서 서열번호 2의 아미노산으로 구성된 단백질이며,
   상기 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaE 항원 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaE 항원의 단편으로서 서열번호 3의 아미노산으로 구성된 단백질인 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 키트.
   
6. 제4항에 있어서,
   상기 키트는 생체 시료 중의 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체와 이 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자의 결합체를 검출하기 위한 검출제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 키트.
   
7. 제6항에 있어서,
   상기 검출제는 표지 또는 효소와 결합된 2차 항체인 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 키트.
   
8. 제4항에 있어서,
   상기 키트는 담체, 세정 버퍼, 시료 희석액, 효소 기질, 반응 정지액 및 사용 방법을 교시하는 설명서 중에서 하나 이상을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 키트.
   
9. (a) 생체 시료와, ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자를 포함하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 조성물과 결합시켜, 생체 시료 중의 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체와 이 특이 항체에 특이적으로 결합하는 상기 분자의 결합체를 형성시키는 단계, 및 (b) 그 결합체를 검출하는 단계를 포함하는
   생체 시료 중에 있는 쯔쯔가무시 균 특이 항체의 검출 방법.
   
10. 제9항에 있어서,
    상기 생체 시료는 혈청인 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균 특이 항체의 검출 방법.
    
11. 제9항에 있어서,
    상기 ScaA에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaA 항원 또는 ScaA에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaA 항원의 단편으로서 ScaA 항원의 전장의 서열에서 791번째 아미노산에서 1185번째까지의 아미노산으로 구성된 단백질이고,
    상기 ScaB에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaB 항원 또는 ScaB에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaB 항원의 단편으로서 ScaB 항원의 전장의 서열에서 24번째 아미노산에서 372번째까지의 아미노산으로 구성된 단백질이며,
    상기 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaE 항원 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaE 항원의 단편으로서 ScaE 항원의 전장의 서열에서 34번째 아미노산에서 477번째까지의 아미노산으로 구성된 단백질인 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체의 검출 방법.
    
12. 제9항에 있어서,
    상기 (b) 단계의 결합체를 검출하는 단계는 검출 시그널을 제공할 수 있는 표지나 효소로 접합된 이차 항체를 상기 결합체와 반응시키는 단계 및 상기 결합체와의 반응 정도를 측정하는 단계를 포함하여 구성되는 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체의 검출 방법.
    
13. (a) 생체 시료와, ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자를 포함하는 쯔쯔가무시 균의 특이 항체 검출용 조성물과 결합시켜, 생체 시료 중의 ScaA, ScaB 또는 ScaE에 대한 특이 항체와 이 특이 항체에 특이적으로 결합하는 상기 분자의 결합체를 형성시키는 단계, 및 (b) 그 결합체를 검출하는 단계를 포함하는
    쯔쯔가무시 균 감염 여부 진단에 유용한 정보를 제공하기 위한 방법.
    
14. 제13항에 있어서,
    상기 생체 시료는 혈청인 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균 감염 여부 진단에 유용한 정보를 제공하기 위한 방법.
    
15. 제13항에 있어서,
    상기 ScaA에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaA 항원 또는 ScaA에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaA 항원의 단편으로서 ScaA 항원의 전장의 서열에서 791번째 아미노산에서 1185번째까지의 아미노산으로 구성된 단백질이고,
    상기 ScaB에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaB 항원 또는 ScaB에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaB 항원의 단편으로서 ScaB 항원의 전장의 서열에서 24번째 아미노산에서 372번째까지의 아미노산으로 구성된 단백질이며,
    상기 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적으로 결합하는 분자는 전장의 ScaE 항원 또는 ScaE에 대한 특이 항체에 특이적인 결합능을 보유한 ScaE 항원의 단편으로서 ScaE 항원의 전장의 서열에서 34번째 아미노산에서 477번째까지의 아미노산으로 구성된 단백질인 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균 감염 여부 진단에 유용한 정보를 제공하기 위한 방법.
    
16. 제13항에 있어서,
    상기 (b) 단계의 결합체를 검출하는 단계는 검출 시그널을 제공할 수 있는 표지나 효소로 접합된 이차 항체를 상기 결합체와 반응시키는 단계 및 상기 결합체와의 반응 정도를 측정하는 단계를 포함하여 구성되는 것을 특징으로 하는 쯔쯔가무시 균 감염 여부 진단에 유용한 정보를 제공하기 위한 방법.

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