CN117015531A - Tead抑制剂及其用途 - Google Patents

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M·伯克
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Ekina Oncology
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Abstract

本发明提供了化合物、其组合物及其使用方法。

Description

TEAD抑制剂及其用途
序列表
本申请含有序列表，该序列表已经按ASCII格式以电子方式提交，并且特此以引用的方式整体并入。所述ASCII副本创建于2021年11月30日，名称为187446_SL.txt，并且大小为23,551字节。
技术领域
本发明涉及可用于抑制转录增强子相关结构域(TEAD)的化合物和方法。本发明还提供包含本发明的化合物的药学上可接受的组合物以及使用所述组合物治疗如本文所述的各种疾病、病症和疾患的方法。
背景技术
Yes相关蛋白(YAP)和具有PDZ结合基序(TAZ)的转录共激活因子是Hippo途径网络的转录共激活因子，并且调控细胞增殖、迁移和凋亡。Hippo途径的抑制促进YAP/TAZ易位至细胞核，其中YAP/TAZ与TEAD转录因子相互作用，共同激活靶基因的表达并促进细胞增殖。YAP和TAZ的过度激活和/或Hippo途径网络的一个或多个成员的突变已经牵涉到许多癌症。
发明内容
Hippo信号传导级联是癌症生物发生和肿瘤维持的重要途径。Hippo途径通过基因如NF2的功能突变的丧失而在许多癌症适应症中发生严重突变。这些促肿瘤突变导致下游转录共激活因子YAP和TAZ的组成型激活，其通过与TEAD蛋白家族成员的基本相互作用驱动许多促存活和增殖基因的表达。此外，这种不受限制的转录程序驱动肿瘤微环境中增强的免疫抑制。如本文所述，为了靶向此致癌途径，确认了新型小分子抑制剂，它们与TEAD选择性地结合，并且破坏它们与YAP和TAZ的相互作用，从而下调YAP和TAZ依赖性转录。如本文所示，这些TEAD阻止TEAD棕榈酰化，这对于YAP与TEAD之间的相互作用至关重要。此外，本文所述的TEAD抑制剂抑制YAP依赖性(即，Hippo途径缺陷型)癌细胞系、但不抑制Hippo途径野生型癌细胞系的体外增殖。重要的是，如本文所示，本发明的TEAD抑制剂化合物不影响分化的小鼠足细胞细胞系的存活或损害小鼠肾脏组织学。随后的体内实验证明本文所述的TEAD抑制剂在口服给药后下调人肿瘤异种移植物中的YAP依赖性基因。此外，本文所述的TEAD抑制剂在耐受性良好的口服剂量下对小鼠中的人肿瘤异种移植物表现出单剂肿瘤生长抑制。本文所述的数据证明了本文提供的小分子TEAD抑制剂靶向癌症中的Hippo途径的能力。
现已发现，本发明的化合物及其药学上可接受的组合物作为TEAD抑制剂是有效的。一方面，本发明提供式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个变量独立地如本文所定义和如本文的实施方案中所描述。
本发明的化合物及其药学上可接受的盐和组合物可用于治疗与TEAD相关的多种疾病、病症或疾患。这类疾病、病症或疾患包括细胞增殖性病症(例如，如本文所述的癌症)。
附图说明
图1描绘Hippo途径信号传导的示意图。
具体实施方式
1.本发明的某些实施方案的一般描述：
本发明的化合物及其药用盐和组合物可用作TEAD的抑制剂。不希望受任何特定理论的束缚，据信本发明的化合物及其药物组合物抑制TEAD的活性，并因此治疗与TEAD相关的疾病、病症或疾患，如癌症。
一方面，本发明提供式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
L1是共价键或C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选地被-N(R)-、-O-或-C(O)-置换；
环A选自
其中的每一者任选被取代；
环B选自
每个Rw独立地选自
每个R2独立地选自-OR、-C(O)NR2、任选取代的-C1-6脂族基、
每个Y独立地为N或CR5；
每个R3独立地为H或任选取代的-C1-6脂族基；
每个R4独立地为-S(O)2NR2、-S(O)2R、-C(O)NR2、-C(O)R或任选取代的-C1-6脂族基；
每个R5独立地为R、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元杂芳基；
每个m独立地为0、1或2；
p是0、1或2；且
每个R独立地为H、任选取代的-C1-6脂族基、任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环基或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环基。
2.化合物和定义：
本发明的化合物包括本文一般描述的那些，并通过本文公开的类别、亚类和种类进一步说明。如本文所用，除另指出外，以下定义将适用。出于本发明的目的，根据CAS版本的元素周期表，Handbook of Chemistry and Physics，第75版确认化学元素。另外，以下文献中描述了有机化学的一般原理：“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，UniversityScience Books，Sausalito:1999，以及“March’s Advanced Organic Chemistry”，第5版，Smith,M.B.和March,J.编著，John Wiley&Sons，New York:2001，上述文献的全部内容特此以引用的方式并入。
如本文所用的术语“脂族基”或“脂族基团”意指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的直链(即，非支链)或支链取代或未取代的烃链，或完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不是芳族的单环烃或双环烃(在本文中也称为“碳环”、“脂环基”或“环烷基”)，其与分子的其余部分具有单个连接点。除另有说明外，脂族基团含有1-6个脂族碳原子。在一些实施方案中，脂族基团含有1-5个脂族碳原子。在其它实施方案中，脂族基团含有1-4个脂族碳原子。还在其它实施方案中，脂族基团含有1-3个脂族碳原子，并且又在其它实施方案中，脂族基团含有1-2个脂族碳原子。在一些实施方案中，“脂环基”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不是芳族的单环C3-C6烃，其与分子的其余部分具有单个连接点。合适的脂族基团包括但不限于直链或支链的取代或未取代的烷基、烯基、炔基及其杂合基，如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
如本文所用，术语“双环状环”或“双环状环体系”是指任何双环状环体系，即碳环的或杂环的、饱和的或具有一个或多个不饱和单元，在环体系的两个环之间具有一个或多个共同原子。因此，该术语包括任何允许的环稠合，如邻位稠合的或螺环的。如本文所用，术语“杂双环”是“双环”的子集，其要求在双环的一个或两个环中存在一个或多个杂原子。这类杂原子可存在于环连接处，且任选被取代，并且可选自氮(包括N-氧化物)、氧、硫(包括氧化的形式，如砜和磺酸酯)、磷(包括氧化的形式，如磷酸酯)、硼等。在一些实施方案中，双环基团具有7-12个环成员和0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。如本文所用，术语“桥接双环”是指具有至少一个桥的任何双环状环体系，即碳环或杂环饱和或部分不饱和的。如IUPAC所定义，“桥”是连接两个桥头的非支链的原子链或原子或价键，其中“桥头”是环体系的与三个或更多个骨架原子(不包括氢)键合的任何骨架原子。在一些实施方案中，桥接双环基团具有7-12个环成员和0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。这类桥接双环基团是本领域中熟知的，并且包括下面列出的那些基团，其中每个基团在任何可取代的碳或氮原子处与分子的其余部分连接。除另有说明外，桥接双环基团任选被一个或多个如针对脂族基团所列出的取代基取代。另外或者替代地，桥接双环基团的任何可取代的氮任选被取代。示例性双环状环包括：
示例性桥接双环包括：
术语“低级烷基”是指C1-4直链或支链烷基。示例性低级烷基有甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。
术语“低级卤代烷基”是指被一个或多个卤素原子取代的C1-4直链或支链烷基。
术语“杂原子”意指氧、硫、氮、磷或硅中的一者或多者(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化的形式；任何碱性氮的季铵化形式，或；杂环状环的可取代氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR+(如在N-取代的吡咯烷基中))。
如本文所用的术语“不饱和”意指部分具有一个或多个不饱和单元。
如本文所用，术语“二价C1-8(或C1-6)饱和或不饱和的直链或支链烃链”是指如本文所定义的直链或支链的二价亚烷基、亚烯基和亚炔基链。
术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基链”是聚亚甲基，即–(CH2)n–，其中n是正整数，优选为1至6、1至4、1至3、1至2或2至3。取代的亚烷基链是其中一个或多个亚甲基氢原子被取代基置换的聚亚甲基。合适的取代基包括下文针对取代的脂族基团所述的那些。
术语“亚烯基”是指二价烯基。取代的亚烯基链是含有至少一个双键的聚亚甲基，其中一个或多个氢原子被取代基置换。合适的取代基包括下文针对取代的脂族基团所述的那些。
如本文所用，术语“亚环丙基”是指具有以下结构的二价环丙基：
术语“卤素”意指F、Cl、Br或I。
单独或作为更大部分的一部分(如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中)使用的术语“芳基”是指具有总共五至十四个环成员的单环或双环状环体系，其中所述体系中的至少一个环是芳族的，且其中所述体系中的每个环含有3至7个环成员。术语“芳基”可与术语“芳基环”互换使用。在本发明的某些实施方案中，“芳基”是指芳族环体系，其包括但不限于可带有一个或多个取代基的苯基、联苯基、萘基、蒽基等。如在本文中所用的术语“芳基”的范围内还包括其中芳族环与一个或多个非芳族环稠合的基团，如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘亚胺基、菲啶基或四氢萘基等。
单独或作为更大部分的一部分(例如，“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”)使用的术语“杂芳基”和“杂芳–”是指具有5至10个环原子，优选5、6或9个环原子；在环状阵列中共享有6、10或14个π电子；且除了碳原子之外还具有一至五个杂原子的基团。术语“杂原子”是指氮、氧或硫，并且包括氮或硫的任何氧化形式以及碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。如本文所用的术语“杂芳基”和“杂芳–”还包括其中杂芳族环与一个或多个芳基、脂环族或杂环基环稠合的基团，其中连接基或点在杂芳族环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H–喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3–b]–1,4–噁嗪–3(4H)–酮。杂芳基可以是单环或双环的。术语“杂芳基”可与术语“杂芳基环”、“杂芳基基团”或“杂芳族”互换使用，这些术语中的任一者包括任选被取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基，其中所述烷基和杂芳基部分独立地任选被取代。
如本文所用，术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基团”和“杂环状环”可互换使用，并且是指稳定的5至7元单环或7-10元双环杂环部分，其是饱和的或部分不饱和的，并且除了碳原子之外还具有一个或多个(优选一至四个)如上所定义的杂原子。当用于指代杂环的环原子时，术语“氮”包括取代的氮。作为实例，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮可以是N(如在3,4–二氢–2H–吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或+NR(如在N–取代的吡咯烷基中)。
杂环可以在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处与其侧基连接，并且任何环原子均可任选被取代。这类饱和或部分不饱和的杂环基团的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢苯硫基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二噁烷基、二氧戊环基、二氮杂基、氧氮杂/>基、硫氮杂/>基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基环”、“杂环基团(group)”、“杂环部分”和“杂环基团(radical)”在本文中可互换使用，并且还包括其中杂环基环与一个或多个芳基、杂芳基或脂环族环稠合的基团，如吲哚啉基、3H–吲哚基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基。杂环基可以是单环或双环的。术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基，其中所述烷基和杂环基部分独立地任选被取代。
如本文所用，术语“部分不饱和”是指包括至少一个双键或三键的环部分。术语“部分不饱和”旨在涵盖具有多个不饱和位点的环，但不旨在包括如本文所定义的芳基或杂芳基部分。
如本文所述，本发明的化合物可含有“任选取代的”部分。一般来说，无论前面是否有术语“任选”，术语“取代的”均意指指定部分的一个或多个氢被合适的取代基置换。除另指出外，“任选取代的”基团可以在所述基团的每个可取代的位置处具有合适的取代基，并且当在任何给定结构中有多于一个位置可以被多于一个选自指定组的取代基取代时，在每个位置的取代基可以相同或不同。本发明设想的取代基的组合优选为导致形成稳定的或化学上可行的化合物的那些。如本文所用的术语“稳定的”是指当经受允许其生产、检测以及在某些实施方案中其回收、纯化和用于本文公开的一项或多项用途的条件时基本上不改变的化合物。
可取代碳上的每个任选的取代基是独立地选自以下的单价取代基：卤素；–(CH2)0–4Ro；–(CH2)0–4ORo；-O(CH2)0-4Ro、–O–(CH2)0–4C(O)ORo；–(CH2)0–4CH(ORo)2；–(CH2)0–4SRo；可以被Ro取代的–(CH2)0–4Ph；可以被Ro取代的–(CH2)0–4O(CH2)0–1Ph；可以被Ro取代的–CH＝CHPh；可以被Ro取代的–(CH2)0–4O(CH2)0–1-吡啶基；–NO2；–CN；–N3；-(CH2)0–4N(Ro)2；–(CH2)0–4N(Ro)C(O)Ro；–N(Ro)C(S)Ro；–(CH2)0–4N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)C(S)NRo 2；–(CH2)0–4N(Ro)C(O)ORo；–N(Ro)N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)N(Ro)C(O)ORo；–(CH2)0–4C(O)Ro；–C(S)Ro；–(CH2)0–4C(O)ORo；–(CH2)0–4C(O)SRo；-(CH2)0–4C(O)OSiRo 3；–(CH2)0–4OC(O)Ro；–OC(O)(CH2)0–4SR–、SC(S)SRo；–(CH2)0–4SC(O)Ro；–(CH2)0–4C(O)NRo 2；–C(S)NRo 2；–C(S)SRo；–SC(S)SRo、-(CH2)0–4OC(O)NRo 2；-C(O)N(ORo)Ro；–C(O)C(O)Ro；–C(O)CH2C(O)Ro；–C(NORo)Ro；-(CH2)0–4SSRo；–(CH2)0–4S(O)2Ro；–(CH2)0–4S(O)2ORo；–(CH2)0–4OS(O)2Ro；–S(O)2NRo 2；–S(O)(NRo)Ro；–S(O)2N＝C(NRo 2)2；-(CH2)0–4S(O)Ro；-N(Ro)S(O)2NRo 2；–N(Ro)S(O)2Ro；–N(ORo)Ro；–C(NH)NRo 2；–P(O)2Ro；-P(O)Ro 2；-OP(O)Ro 2；–OP(O)(ORo)2；SiRo 3；–(C1–4直链或支链亚烷基)O–N(Ro)2；或–(C1–4直链或支链亚烷基)C(O)O–N(Ro)2。
每个Ro独立地为氢、C1–6脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph、-CH2-(5-6元杂芳基环)或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环，或者尽管有上述定义，但两个独立出现的Ro与它们的居间原子合起来形成具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3–12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环状环，其可以被Ro的饱和碳原子上的选自＝O和＝S的二价取代基取代；或者每个Ro任选被独立地选自以下的单价取代基取代：卤素、–(CH2)0–2R·、–(卤代R·)、–(CH2)0–2OH、–(CH2)0–2OR·、–(CH2)0–2CH(OR·)2；-O(卤代R·)、–CN、–N3、–(CH2)0–2C(O)R·、–(CH2)0–2C(O)OH、–(CH2)0–2C(O)OR·、–(CH2)0–2SR·、–(CH2)0– 2SH、–(CH2)0–2NH2、–(CH2)0–2NHR·、–(CH2)0–2NR· 2、–NO2、–SiR· 3、–OSiR· 3、-C(O)SR·、–(C1–4直链或支链亚烷基)C(O)OR·或–SSR·。
每个R·独立地选自C1–4脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环，且其中每个R·是未取代的，或者在前面有卤代的情况下仅被一个或多个卤素取代；或其中饱和碳上任选的取代基是独立地选自＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、–O(C(R* 2))2–3O–或–S(C(R* 2))2–3S–的二价取代基，或与“任选取代的”基团的邻位可取代碳结合的二价取代基是–O(CR* 2)2–3O–，其中每个独立出现的R*选自氢、C1–6脂族基或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环。
当R*是C1–6脂族基时，R*任选被卤素、–R·、-(卤代R·)、-OH、–OR·、–O(卤代R·)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR·、–NH2、–NHR·、–NR· 2或–NO2取代，其中每个R·独立地选自C1–4脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环，且其中每个R·是未取代的，或者在前面有卤代的情况下仅被一个或多个卤素取代。
可取代氮上任选的取代基独立地为 或/>其中每个/>独立地为氢、C1–6脂族基、未取代的–OPh或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环，或者两个独立出现的/>与它们的居间原子合起来形成具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的3–12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环状环；其中当是C1–6脂族基时，/>任选被卤素、–R·、-(卤代R·)、-OH、–OR·、–O(卤代R·)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR·、–NH2、–NHR·、–NR· 2或–NO2取代，其中每个R·独立地选自C1–4脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环，且其中每个R·是未取代的，或者在前面有卤代的情况下仅被一个或多个卤素取代。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适合与人和低等动物的组织接触使用而没有过度的毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的益处/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域中熟知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences,1977,66,1–19中详细描述了药学上可接受的盐，该文献以引用的方式并入本文。本发明的化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机和有机酸和碱的盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例有氨基与无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或与有机酸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸形成的盐，或通过采用本领域中采用的其它方法如离子交换形成的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2–羟基–乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2–萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3–苯基丙酸盐、磷酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。
衍生自适当碱的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N+(C1–4烷基)4盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。进一步的药学上可接受的盐在适当时包括使用抗衡离子如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。
除另有说明外，本文描述的结构还意在包括所述结构的所有异构体(例如，对映异构、非对映异构和几何(或构象))形式；例如，对于每个不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体以及Z和E构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何(或构象)混合物均在本发明的范围内。除另有说明外，本发明的化合物的所有互变异构形式均在本发明的范围内。另外，除另有说明外，本文描述的结构还意在包括不同之处仅在于存在一个或多个同位素富集的原子的化合物。例如，具有本发明结构且氢用氘或氚置换或碳用13C或14C富集的碳置换的化合物都在本发明的范围内。这类化合物例如可用作分析工具、生物测定中的探针或根据本发明的治疗剂。在某些实施方案中，所提供的化合物的弹头部分包含一个或多个氘原子。
如本文所用，术语“抑制剂”或“TEAD抑制剂”或“TEAD拮抗剂”被定义为以可测量的亲和力与TEAD结合和/或抑制TEAD的化合物。在一些实施方案中，在抑制剂的存在下以剂量依赖性方式观察到抑制。在一些实施方案中，测得的信号(例如，信号传导活性或生物活性)比在可比较的条件下用阴性对照测得的信号低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或至少约100％。抑制剂的效力通常由其IC50值(半最大抑制浓度或抑制50％的激动剂反应所需的浓度)定义。IC50值越低，拮抗剂的效力就越大，且抑制最大生物反应所需的浓度就越低。在某些实施方案中，抑制剂的IC50和/或结合常数小于约100μM、小于约50μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、小于约10nM或小于约1nM。
如本文所用的术语“可测量的亲和力”和“可测量地抑制”意指包含本发明的化合物或其组合物和TEAD的样品与包含TEAD但不存在所述化合物或其组合物的等效样品之间TEAD活性的可测量的变化或抑制。
3.示例性实施方案的描述：
一方面，本发明提供式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
L1是共价键或C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选地被-N(R)-、-O-或-C(O)-置换；
环A选自
其中的每一者任选被取代；
环B选自
每个Rw独立地选自
每个R2独立地选自-OR、-C(O)NR2、任选取代的-C1-6脂族基、
每个Y独立地为N或CR5；
每个R3独立地为H或任选取代的-C1-6脂族基；
每个R4独立地为-S(O)2NR2、-S(O)2R、-C(O)NR2、-C(O)R或任选取代的-C1-6脂族基；
每个R5独立地为R、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元杂芳基；
每个m独立地为0、1或2；
p是0、1或2，且
每个R独立地为H、任选取代的-C1-6脂族基、任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环基或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环基。
如上文一般所定义，L1是共价键或C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-N(R)-、-O-或-C(O)-置换。
在一些实施方案中，L1是共价键。
在一些实施方案中，L1是C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-N(R)-置换。
在一些实施方案中，L1是C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-置换。
在一些实施方案中，L1是C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-C(O)-置换。
在一些实施方案中，L1是-NH-。在一些实施方案中，L1是-NH-CH2-。在一些实施方案中，L1是-NH-CH2-CH2-。在一些实施方案中，L1是–CH2-。在一些实施方案中，L1是在一些实施方案中，L1是/>在一些实施方案中，L1是/>在一些实施方案中，L1是/>在一些实施方案中，L1是-CH＝CH-。在一些实施方案中，L1是/>在一些实施方案中，L1是/>在一些实施方案中，L1是-NH-C(O)-。
在一些实施方案中，L1选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，环A选自
其中的每一者任选被取代。在一些实施方案中，环A是任选取代的/>在一些实施方案中，环A是任选取代的/>在一些实施方案中，环A是任选取代的/>在一些实施方案中，环A是任选取代的/>在一些实施方案中，环A是任选取代的/>在一些实施方案中，环A是任选取代的/>在一些实施方案中，环A是任选取代的/>在一些实施方案中，环A是任选取代的在一些实施方案中，环A是任选取代的/>在一些实施方案中，环A是任选取代的/>
在一些实施方案中，环A是任选取代的
在一些实施方案中，环A是任选取代的
在一些实施方案中，环A选自 />其中每个R1独立地为R、卤素、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2、-OR、-SR、-S(O)2NR2或-S(O)2R，且每个n独立地为0、1、2或3，其中每个R独立地如本文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，R1是R。在一些实施方案中，R1是卤素。在一些实施方案中，R1是-CN。在一些实施方案中，R1是-C(O)R。在一些实施方案中，R1是-C(O)NR2。在一些实施方案中，R1是-OR。在一些实施方案中，R1是-SR。在一些实施方案中，R1是-S(O)2NR2。在一些实施方案中，R1是-S(O)2R。
在一些实施方案中，每个R1独立地为H、卤素、任选被1-6个卤素取代的-C1-6脂族基、任选被1-6个卤素取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环基或任选被1-6个卤素取代的具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环基。
在一些实施方案中，每个R1独立地为H、-CF3、-C(O)NH2、-CH3、-CH2CH3、-OCH3、-CHF2、-OCF3、-OCHF2、-SCF3、-Cl、-S(O)2-NH2、-OCH2CH3、-F、-C(O)NHCH3、-CN、-S(O)2-CH3、-OCH(CH3)2、-CH(CH3)2、-C(CH3)3、-CH2OH、
在一些实施方案中，每个R1独立地选自下表1中描述的那些。
在一些实施方案中，n是0。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。
在一些实施方案中，环A选自 其中R1中的每一者单独和组合地如上文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，环A选自 其中每个R1单独和组合地如上文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，环A是 />
/>
在一些实施方案中，环A选自
在一些实施方案中，环A选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，环B选自 其中R2、R3、Rw、p和R4中的每一者单独和组合地如本文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，环B是其中R2和Rw中的每一者单独和组合地如本文所定义和本文的实施方案中所描述。/>
在一些实施方案中，环B是其中R4和Rw中的每一者单独和组合地如本文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，环B是其中R2和Rw中的每一者单独和组合地如本文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，环B是其中R2和Rw中的每一者单独和组合地如本文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，环B是其中R4和Rw中的每一者单独和组合地如本文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，环B是其中R2和Rw中的每一者单独和组合地如本文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，环B是其中R3和p中的每一者单独和组合地如本文所定义和本文的实施方案中所描述。在一些实施方案中，环B是
在一些实施方案中，环B是其中Rw如本文所定义和本文的实施方案中所描述。在一些实施方案中，环B是/>其中Rw如本文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，环B选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，Rw选自
在一些实施方案中，Rw是在一些实施方案中，Rw是/>在一些实施方案中，Rw是/>在一些实施方案中，Rw是/>在一些实施方案中，Rw是在一些实施方案中，Rw是/>在一些实施方案中，Rw是/>
在一些实施方案中，Rw选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，每个R2独立地选自-OR、-C(O)NR2、任选取代的-C1-6脂族基、 其中Y、m和R5中的每一者单独和组合地如本文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，R2是-OR。在一些实施方案中，R2是-C(O)NR2。在一些实施方案中，R2是任选取代的-C1-6脂族基。在一些实施方案中，R2是在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>
在一些实施方案中，R2是在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>在一些实施方案中，R2是/>/>
在一些实施方案中，R2选自： -CH3、-CH2CH3、/> -OCH3、/>/>
在一些实施方案中，R2选自 和-OCH3。
在一些实施方案中，R2选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，每个Y独立地为N或CR5。
在一些实施方案中，Y是N。在一些实施方案中，Y是CR5。在一些实施方案中，Y是CH。
在一些实施方案中，两个Y都是N。在一些实施方案中，两个Y都是CR5。在一些实施方案中，一个Y是N，且另一个Y是CR5。在一些实施方案中，两个Y都是CH。在一些实施方案中，一个Y是N，且另一个Y是CH。
在一些实施方案中，Y选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，每个R3独立地为H、-C(O)R或任选取代的-C1-6脂族基，其中R如本文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，R3是H。
在一些实施方案中，R3是-C(O)R。
在一些实施方案中，R3是任选取代的-C1-6脂族基。
在一些实施方案中，R3选自H、-CH3、-CH2CH3、-C(O)CH3和
在一些实施方案中，R3选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，每个R4独立地为-S(O)2NR2、-S(O)2R、-C(O)NR2、-C(O)R或任选取代的-C1-6脂族基，其中每个R独立地如本文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，R4是-S(O)2NR2。
在一些实施方案中，R4是-S(O)2R。
在一些实施方案中，R4是-C(O)NR2。
在一些实施方案中，R4是-C(O)R。
在一些实施方案中，R4是任选取代的-C1-6脂族基。
在一些实施方案中，R4选自
在一些实施方案中，R4选自：
在一些实施方案中，R4选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，每个R5独立地为R、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元杂芳基，其中每个R独立地如本文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，R5是R。
在一些实施方案中，R5是-CN。
在一些实施方案中，R5是-C(O)R。
在一些实施方案中，R5是-C(O)NR2。
在一些实施方案中，R5是具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元杂芳基。
在一些实施方案中，每个R5独立地选自：H、-CH3、-CD3、
-CN、/>-CH2CH3、-C(O)CH3、-CH2C(O)NHCH3、
在一些实施方案中，每个R5独立地选自：-CH3、-CH2CH2OCH3、-CH2CF3、-CH2CH2Cl、
在一些实施方案中，R5选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，每个m独立地为0、1或2。
在一些实施方案中，m是0。在一些实施方案中，m是1。在一些实施方案中，m是2。
在一些实施方案中，m选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，p是0、1或2。
在一些实施方案中，p是0。在一些实施方案中，p是1。在一些实施方案中，p是2。
在一些实施方案中，p选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，每个R独立地为H、任选取代的-C1-6脂族基、任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环基或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环基。
在一些实施方案中，R是H。
在一些实施方案中，R是任选取代的-C1-6脂族基。在一些实施方案中，R是未取代的-C1-6脂族基。在一些实施方案中，R是被-卤素、-CN或–NO2取代1、2、3、4、5或6次的-C1-6脂族基。在一些实施方案中，R是被–F取代1、2、3、4、5或6次的-C1-6脂族基。在一些实施方案中，R是被–F取代1、2、3、4、5或6次的-C1-3脂族基。在一些实施方案中，R是–CH3。在一些实施方案中，R是–CH2CH3。在一些实施方案中，R是–CF3。在一些实施方案中，R是–CHF2。
在一些实施方案中，R是任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环基。在一些实施方案中，R是未取代的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环碳环基。在一些实施方案中，R是被-卤素、-CN、–NO2或-C1-6脂族基取代1、2、3、4、5或6次的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环碳环基，其中所述-C1-6脂族基任选被-卤素、-CN或–NO2取代1、2、3、4、5或6次。在一些实施方案中，R是被–卤素取代1、2、3、4、5或6次的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环碳环基。在一些实施方案中，R是被-C1-6脂族基取代1、2、3、4、5或6次的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环碳环基，其中所述-C1-6脂族基任选被-卤素取代1、2、3、4、5或6次。在一些实施方案中，R是被–F取代1、2、3、4、5或6次的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环碳环基。在一些实施方案中，R是被-C1-6脂族基取代1、2、3、4、5或6次的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环碳环基，其中所述-C1-6脂族基任选被-F取代1、2、3、4、5或6次。
在一些实施方案中，R是具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环基。在一些实施方案中，R是具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环杂环基。在一些实施方案中，R是具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环杂环基，其被-卤素、-CN、–NO2或-C1-6脂族基取代1、2、3、4、5或6次，其中所述-C1-6脂族基任选被-卤素、-CN或–NO2取代1、2、3、4、5或6次。在一些实施方案中，R是被–卤素取代1、2、3、4、5或6次的具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环杂环基。在一些实施方案中，R是被-C1-6脂族基取代1、2、3、4、5或6次的具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环杂环基，其中所述-C1-6脂族基任选被-卤素取代1、2、3、4、5或6次。在一些实施方案中，R是被–F取代1、2、3、4、5或6次的具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环杂环基。在一些实施方案中，R是被-C1-6脂族基取代1、2、3、4、5或6次的具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3、4、5、6、7或8元饱和或部分不饱和单环杂环基，其中所述-C1-6脂族基任选被-F取代1、2、3、4、5或6次。
在一些实施方案中，R选自 -CH3、-CD3、-CH2CH3、-CH2C(O)NHCH3、 -CH2CH2Cl、/>
在一些实施方案中，R选自下表1中描述的那些。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R1、L1、Rw、Y、m、n和R5中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R1、L1、Rw、Y、n和R5中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R1、L1、Rw、n和R5中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R1、Rw、L1和R5中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R、R1、L1、Rw和n中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R、R1、L1、Rw和n中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R1、L1、Rw和n中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R1、L1、Rw、Y、m、n和R5中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R1、L1、Rw、Y、n和R5中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R1、L1、Rw、n和R5中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供下式的化合物：
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或其药学上可接受的盐，其中R1、L1、Rw和R5中的每一者单独和组合地如上文所定义和如本文的实施方案中所描述。
不希望受任何特定理论的束缚，本文提供的化合物能够与存在于靶蛋白例如TEAD的结合袋中的氨基酸残基(如半胱氨酸、赖氨酸、组氨酸或能够被共价修饰的其它残基)共价结合，从而不可逆地抑制所述蛋白质。在一些实施方案中，弹头基团能够与半胱氨酸共价结合。在一些实施方案中，弹头基团能够与丝氨酸共价结合。在一些实施方案中，弹头基团能够与赖氨酸共价结合。在一些实施方案中，弹头基团能够与hTEAD1的Cys359、hTEAD1的Cys405、hTEAD2的Cys380、hTEAD3的Cys368和/或hTEAD4的Cys367共价结合。在一些实施方案中，弹头基团能够与hTEAD1的Ser356、hTEAD2的Ser345和/或Ser377、hTEAD3的Ser365和/或hTEAD4的Ser364共价结合。在一些实施方案中，弹头基团能够与hTEAD1的Lys336、hTEAD2的Lys357、hTEAD3的Lys345和/或hTEAD4的Lys344共价结合。人TEAD1、人TEAD2、人TEAD3和人TEAD4的代表性参考氨基酸序列分别包括UniProt KB ID P28347-1(SEQ ID NO:1)、UniProtKB ID Q15562(SEQ ID NO:2)、UniProtKB ID Q99594(SEQ ID NO:3)和UniProtKBID Q15561(SEQ ID NO:4)。下面是TEAD共激活因子结合结构域的序列比对，其示于“Targeting Transcriptional Enhanced Associate Domains(TEADs)”，J.Med.Chem.2018，61，5057-5072的表1中，该文献以全文引用的方式并入本文。
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本发明的示例性化合物列于下表1中。
表1：示例性化合物
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在一些实施方案中，本发明提供上表1中列出的化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明的化合物不是选自以下的化合物：
本发明的化合物一般来说可以通过本领域技术人员已知的类似化合物的合成和/或半合成方法以及通过本文实施例中详细描述的方法制备或分离。在一些实施方案中，本发明提供实施例中描述的中间体化合物或其盐。
4.用途、制剂和施用：
药学上可接受的组合物
根据另一实施方案，本发明提供包含本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物的药物组合物。本发明的组合物中的化合物的量是有效地以可测量的方式抑制生物样品中或患者中的TEAD或其变体或突变体的量。在某些实施方案中，本发明的组合物中的化合物的量是有效地以可测量的方式抑制生物样品中或患者中的TEAD或其变体或突变体的量。在某些实施方案中，本发明的组合物被配制成用于对需要这种组合物的患者施用。在一些实施方案中，本发明的组合物被配制成用于对患者口服施用。
如本文所用的术语“患者”或“受试者”意指动物，优选哺乳动物，最优选人。
术语“药学上可接受的载体、佐剂或媒介物”是指不破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载体、佐剂或媒介物。本发明的组合物中可以使用的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
“药学上可接受的衍生物”意指本发明的化合物的任何无毒盐、酯、酯的盐或其它衍生物，其一旦施用于接受者就能够直接或间接地提供本发明的化合物或其抑制的活性代谢物或残留物。
如本文所用，术语“其抑制的活性代谢物或残留物”意指其代谢物或残留物也是TEAD或其变体或突变体的抑制剂。
本发明的组合物可以口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入的储库施用。如本文所用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，口服、腹膜内或静脉内施用组合物。本发明的组合物的无菌可注射形式可以是水性或油质悬浮液。可以根据本领域中已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制这些悬浮液。无菌可注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。在可以使用的可接受的媒介物和溶剂当中有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发油常规用作溶剂或悬浮介质。
为此目的，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，比如天然的药学上可接受的油，如橄榄油或蓖麻油，特别是它们的聚氧乙基化形式。这些油溶液或悬浮液也可含有长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或常用于配制药学上可接受的剂型(包括乳液和悬浮液)的类似分散剂。其它常用的表面活性剂也可用于配制的目的，如吐温、司盘及其它乳化剂或生物利用度增强剂，它们常用于制备药学上可接受的固体、液体或其它剂型。
本发明的药学上可接受的组合物可以以任何口服可接受的剂型口服施用，包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于口服使用的片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，如硬脂酸镁。对于以胶囊形式口服施用，有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当口服使用需要水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂合并。如果需要，还可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
或者，可以以用于直肠施用的栓剂形式施用本发明的药学上可接受的组合物。这些可以通过将药剂与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此将在直肠中融化以释放药物。这类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
也可以局部施用本发明的药学上可接受的组合物，特别是当治疗目标包括易于通过局部应用可及的区域或器官时，包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病。对于这些区域或器官中的每一者，很容易制备合适的局部制剂。
可以以直肠栓剂制剂(参见上文)或以合适的灌肠剂制剂实现用于下肠道的局部应用。也可以使用局部透皮贴剂。
对于局部应用，可以将所提供的药学上可接受的组合物配制在合适的油膏中，所述油膏含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分。用于局部施用本发明的化合物的载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，可将所提供的药学上可接受的组合物配制在合适的洗剂或乳膏中，所述洗剂或乳膏含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分。合适的载体包括但不限于矿物油、失水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
对于眼科用途，可以将所提供的药学上可接受的组合物配制为在等渗、pH经调节的无菌盐水中的微粉化悬浮液，或者优选配制为在等渗、pH经调节的无菌盐水中的溶液，有或没有防腐剂，如苯扎氯铵。或者，对于眼科用途，可以将药学上可接受的组合物配制在油膏如凡士林中。
也可以通过鼻用气雾剂或吸入施用本发明的药学上可接受的组合物。这类组合物根据药物制剂领域中熟知的技术制备，并且可以使用苄醇或其它合适的防腐剂、吸收促进剂(以提高生物利用度)、碳氟化合物和/或其它常规的增溶剂或分散剂制备成在盐水中的溶液。
最优选地，将本发明的药学上可接受的组合物配制成用于口服施用。这类制剂可以与或不与食物一起施用。在一些实施方案中，不与食物一起施用本发明的药学上可接受的组合物。在其它实施方案中，与食物一起施用本发明的药学上可接受的组合物。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的组合物的本发明的化合物的量根据所治疗的宿主、特定的施用方式而变化。优选地，应配制所提供的组合物，使得可以将0.01-100mg/kg体重/天之间剂量的抑制剂施用给接受这些组合物的患者。
还应当理解的是，对于任何特定患者的具体剂量和治疗方案取决于多种因素，包括所使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄速率、药物组合以及治疗医生的判断和所治疗的特定疾病的严重程度。组合物中本发明的化合物的量还取决于组合物中的特定化合物。
化合物和药学上可接受的组合物的用途
Hippo信号传导网络
Hippo信号传导网络(也称为Salvador/Warts/Hippo(SWH)途径)是细胞增殖、死亡和分化的主要调控因子。在一些实施方案中，Hippo信号传导途径的主要功能是负向调控转录共激活因子Yes相关蛋白(YAP)及其旁系同源物，即具有PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ；也称为WWTR1)。Hippo激酶级联通过如下方式磷酸化并抑制YAP/TAZ，即促进其细胞质滞留和降解，从而抑制在YAP/TAZ控制下受调控的生长促进功能。在未磷酸化/去磷酸化状态下，YAP(也称为YAP1或YAP65)与TAZ一起被转运到细胞核中，它们在那里与TEAD家族的转录因子相互作用以上调促进增殖和迁移并抑制凋亡的基因。在一些情况下，参与增殖、迁移和抗凋亡的这些基因的不受调控的上调导致癌症的发展。在一些情况下，YAP/TAZ的过表达与癌症相关。
Hippo信号传导途径的另外的核心成员分别包括丝氨酸/苏氨酸激酶MST1/2(果蝇中的Hippo/Hpo的同源物)、Lats1/2(Warts/Wts的同源物)以及它们的衔接蛋白Sav1(Salvador/Sav的同源物)和Mob(MOBKL1A和MOBKL1B；Mats的同源物)。一般来说，MST1/2激酶与支架蛋白Sav1复合，这进而磷酸化并激活Lats1/2激酶。Lats1/2也被支架蛋白Mob激活。激活的Lats1/2然后磷酸化并失活YAP或其旁系同源物TAZ。YAP/TAZ的磷酸化导致它们的核输出、在细胞质内滞留和被泛素蛋白酶体系统降解。
在一些情况下，Lats1/2在[HXRXXS](SEQ ID NO:9)共有基序处磷酸化YAP。YAP包含五个[HXRXXS](SEQ ID NO:9)共有基序，其中X表示任何氨基酸残基。在一些情况下，Lats1/2在共有基序中的一者或多者处磷酸化YAP。在一些情况下，Lats1/2在所有五个共有基序处磷酸化YAP。在一些情况下，Lats1/2在S127氨基酸位置处磷酸化。YAP S127的磷酸化促进14-3-3蛋白结合，并导致YAP的细胞质隔离。YAP在S127位置的突变因此破坏其与14-3-3的相互作用，并随后促进核转位。
另外的磷酸化发生在YAP中的S381氨基酸位置。YAP在S381位置和TAZ中的相应位点上的磷酸化通过降解基序中的CK1δ/ε引发两种蛋白质的进一步磷酸化事件，其然后发出与β-TRCP E3泛素连接酶相互作用的信号，导致YAP的多泛素化和降解。
在一些情况下，Lats1/2在[HXRXXS](SEQ ID NO:9)共有基序处磷酸化TAZ。TAZ包含四个[HXRXXS](SEQ ID NO:9)共有基序，其中X表示任何氨基酸残基。在一些情况下，Lats1/2在共有基序中的一者或多者处磷酸化TAZ。在一些情况下，Lats1/2在所有四个共有基序处磷酸化TAZ。在一些情况下，Lats1/2在S89氨基酸位置处磷酸化。TAZ S89的磷酸化促进14-3-3蛋白结合，并导致TAZ的细胞质隔离。TAZ在S89位置的突变因此破坏其与14-3-3的相互作用，并随后促进核转位。
在一些实施方案中，磷酸化的YAP/TAZ在细胞质中积累，并经历SCFβ-TRCP介导的泛素化和随后的蛋白酶体降解。在一些情况下，含有Skp、Cullin、F-box的复合物(SCF复合物)是包含F-box家族成员蛋白(例如，Cdc4)、Skp1、桥接蛋白和RBX1的多蛋白E3泛素连接酶复合物，其含有与E2-泛素缀合酶相互作用的小RING指结构域。在一些情况下，F-box家族包括多于40个成员，其中示例性成员包括含有F-box/WD重复序列的蛋白1A(FBXW1A、βTrCP1、Fbxwl、hsSlimb、plkappaBalpha-E3受体亚基)和S期激酶相关蛋白2(SKP2)。在一些实施方案中，SCF复合物(例如，SCFβTrCP1)与E1泛素激活酶和E2泛素缀合酶相互作用以催化泛素向YAP/TAZ底物的转移。示例性E1泛素激活酶包括由以下基因编码的那些：UBA1、UBA2、UBA3、UBA5、UBA5、UBA7、ATG7、NAE1和SAE1。示例性E2泛素缀合酶包括由以下基因编码的那些：UBE2A、UBE2B、UBE2C、UBE2D1、UBE2D2、UBE2D3、UBE2E1、UBE2E2、UBE2E3、UBE2F、UBE2G1、UBE2G2、UBE2H、UBE2I、UBE2J1、UBE2J2、UBE2K、UBE2L3、UBE2L6、UBE2M、UBE2N、UBE20、UBE2Q1、UBE2Q2、UBE2R1、UBE2R2、UBE2S、UBE2T、UBE2U、UBE2V1、UBE2V2、UBE2Z、ATG2、BIRC5和UFC1。在一些实施方案中，泛素化的YAP/TAZ通过26S蛋白酶体进一步经历降解过程。
在一些实施方案中，Hippo途径在上游由若干不同家族的调控因子调控。在一些情况下，Hippo途径由G蛋白及其偶联受体、Crumbs复合物、MST激酶上游的调控因子和粘附连接调控。
YAP/TAZ与TEAD的相互作用
在一些实施方案中，未磷酸化和/或去磷酸化的YAP/TAZ在细胞核中积累。在细胞核内，YAP/TAZ与TEAD家族的转录因子(例如，人TEAD1(UniProt KB ID P28347-1(SEQ IDNO:1))、人TEAD2(UniProtKB ID Q15562(SEQ ID NO:2))、人TEAD3(UniProtKB ID Q99594(SEQ ID NO:3))和人TEAD4(UniProtKB ID Q15561(SEQ ID NO:4))相互作用，以激活参与抗凋亡和增殖的基因，举例如CTFG、Cyr61和FGF1。
蛋白质组学和生物化学研究显示，TEAD(TEA结构域)转录因子在进化上保守的半胱氨酸残基处被棕榈酰化。在人TEAD1(C53S、C327S和C359S)中发现三个半胱氨酸残基在进化上是保守的并突变为丝氨酸，以测试突变是否影响TEAD1棕榈酰化。C359S突变体显示出棕榈酰化的最大损失，且C327S和C53S也显示出棕榈酰化减少。这些结果表明C359在TEAD1棕榈酰化中起关键作用。此外，所有三个半胱氨酸残基C53/327/359S(3CS)的组合突变完全消除了TEAD1棕榈酰化，表明这些残基参与了TEAD1棕榈酰化。已经发现，在棕榈酰1-CoA的生理浓度下，TEAD经历不依赖于PAT的自棕榈酰化。此外，自棕榈酰化在调控TEAD-YAP缔合以及它们的体外和体内生理功能中起关键作用。Chan等人，Nature Chem.Biol.12，第282-289页(2016)；Noland等人，Structure，24，1–8(2016)；Gibault等人，J.Med.Chem.61，5057-5072(2018)。因此，TEAD的棕榈酰化在调控Hippo途径转录复合物中起重要作用。
在一些实施方案中，本文公开的化合物调节YAP/TAZ与TEAD之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD、YAP或TAZ结合，并阻止YAP/TAZ与TEAD之间的相互作用。
在一些实施方案中，本文所述的化合物不可逆地抑制TEAD转录因子。在一些实施方案中，转录因子是TEAD1。在一些实施方案中，转录因子是TEAD2。在一些实施方案中，转录因子是TEAD3。在一些实施方案中，转录因子是TEAD4。在一些实施方案中，本文所述的化合物与TEAD转录因子(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3或TEAD4)共价结合。在一些实施方案中，本文所述的化合物不可逆地抑制TEAD转录因子(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3或TEAD4)的活性。在一些实施方案中，本文所述的化合物共价抑制TEAD转录因子(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)的活性。
在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD2结合，并破坏或抑制YAP与TEAD2之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD3结合，并破坏或抑制YAP与TEAD3之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD4结合，并破坏或抑制YAP与TEAD4之间的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C53处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C327处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C405处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359和C327处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359和C53处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C53和C327处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359和C405处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C53和C405处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C327和C405处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C327和C53处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C327和C405处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C353和C405处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C327、C53和C405处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C327、C53和C405处与TEAD1结合，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD结合，阻止TEAD棕榈酰化，并破坏或抑制YAP与TEAD之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C53处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C327处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C405处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359和C327处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359和C53处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C53和C327处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359和C405处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C53和C405处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C327和C405处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C327和C53处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C327和C405处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C353和C405处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C327、C53和C405处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C327、C53和C405处与TEAD1结合，并阻止TEAD1棕榈酰化。
在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD1结合，阻止TEAD1棕榈酰化，并破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C53处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C327处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C405处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359和C327处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359和C53处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C53和C327处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359和C405处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C53和C405处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C327和C405处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C327和C53处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C327和C405处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C353和C405处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C327、C53和C405处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C359、C327、C53和C405处与TEAD1结合并阻止TEAD1棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD1之间的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的化合物在C380处与TEAD2结合，并破坏或抑制YAP与TEAD2之间的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD2结合，并阻止TEAD2棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C380处与TEAD2结合，并阻止TEAD2棕榈酰化。
在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD2结合，阻止TEAD2棕榈酰化，并破坏或抑制YAP与TEAD2之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C380处与TEAD2结合并阻止TEAD2棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD2之间的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的化合物在C371处与TEAD3结合，并破坏或抑制YAP与TEAD3之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C368处与TEAD3结合，并破坏或抑制YAP与TEAD3之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C371和C368处与TEAD3结合，并破坏或抑制YAP与TEAD3之间的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD3结合，并阻止TEAD3棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C371处与TEAD3结合，并阻止TEAD3棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C368处与TEAD3结合，并阻止TEAD3棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C368和C371处与TEAD3结合，并阻止TEAD3棕榈酰化。
在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD3结合，阻止TEAD3棕榈酰化，并破坏或抑制YAP与TEAD3之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C371处与TEAD3结合并阻止TEAD3棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD3之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C368处与TEAD3结合并阻止TEAD3棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD3之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C371和C368处与TEAD3结合并阻止TEAD3棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD3之间的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的化合物在C367处与TEAD4结合，并破坏或抑制YAP与TEAD4之间的相互作用。
在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD4结合，并阻止TEAD4棕榈酰化。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C367处与TEAD4结合，并阻止TEAD4棕榈酰化。
在一些实施方案中，本文公开的化合物与TEAD4结合，阻止TEAD4棕榈酰化，并破坏或抑制YAP与TEAD4之间的相互作用。在一些实施方案中，本文公开的化合物在C367处与TEAD4结合并阻止TEAD4棕榈酰化，并且破坏或抑制YAP与TEAD4之间的相互作用。
由G蛋白/GPCR介导的YAP/TAZ调控
在一些实施方案中，Hippo途径受G蛋白偶联受体(GPCR)和G蛋白(也称为鸟嘌呤核苷酸结合蛋白)家族的蛋白质调控。G蛋白是通过GPCR将细胞外刺激传送到细胞里的分子开关。在一些情况下，有两类G蛋白：单体小GTP酶和异三聚体G蛋白复合物。在一些情况下，后一类复合物由α(Gα)、β(Gβ)和γ(Gγ)亚基组成。在一些情况下，有若干类Gα亚基：Gq/11α、G12/13α、Gi/oα(G抑制性、G其它)和Gsα(G刺激性)。
在一些情况下，Giα(G抑制性)、Goα(G其它)、Gq/11α和G12/13α偶联的GPCR激活YAP/TAZ并促进核转位。在其它情况下，Gsα(G刺激性)偶联的GPCR抑制YAP/TAZ活性，导致YAP/TAZ降解。
在一些情况下，Giα(G抑制性)、Goα(G其它)、Gq/11α和G12/13α偶联的GPCR通过抑制Lats1/2活性激活YAP/TAZ。相比之下，Gsα在一些实施方案中诱导Lats1/2活性，从而促进YAP/TAZ降解。
Gq家族
Gqα(也称为Gq/11蛋白)通过激活磷脂酶C(PLC)参与三磷酸肌醇(IP3)信号转导途径和钙(Ca2+)从细胞内储存中的释放。激活的PLC将4,5-二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)水解为二酰基甘油(DAG)和IP3。在一些情况下，IP3然后穿过细胞质扩散到ER中或在肌细胞的情况下扩散到肌浆网(SR)中，然后与作为Ca2+通道的三磷酸肌醇受体(InsP3R)结合。在一些情况下，所述结合触发Ca2+通道打开，从而增加Ca2+向细胞质中的释放。
在一些实施方案中，与Gqα相互作用的GPCR包括但不限于5-羟色胺受体(5-HT受体)类型5-HT2和5-HT3；α-1肾上腺素能受体；加压素1型受体1A和1B；血管紧张素II受体1型；降钙素受体；组胺H1受体；代谢型谷氨酸受体，I组；毒蕈碱受体M1、M3和M5；以及微量胺相关受体1。
在一些情况下，有若干类型的Gqα：Gq、Gq/11、Gq/14和Gq/15。Gq蛋白由GNAQ编码。Gq/11由GNA11编码。Gq/14由GNA14编码。Gq/15由GNA15编码。
在一些情况下，Gqα基因的突变或修饰与癌症相关。事实上，研究显示Gqα的突变促进葡萄膜黑色素瘤(UM)肿瘤发生。在一些情况下，已检测到约80％的UM病例含有GNAQ和/或GNA11的突变。
在一些情况下，Gqα基因的突变或修饰与先天性疾病相关。在一些情况下，已在先天性疾病如葡萄酒色斑和/或Sturge-Weber综合征中观察到Gqα的突变。在一些情况下，约92％的葡萄酒色斑病例携带GNAQ的突变。在一些情况下，约88％的Sturge-Weber综合征携带GNAQ的突变。
G12/13家族
G12/13α通过鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)调节细胞中的肌动蛋白细胞骨架重塑，并调控细胞过程。GEF参与在多种细胞内信号传导途径中充当分子开关的小GTP酶的激活。小GTP酶的实例包括Ras相关的GTP酶超家族(例如Rho家族，如Cdc42)，其参与细胞分化、增殖、细胞骨架组织、囊泡运输和核转运。
在一些实施方案中，与G12/13α相互作用的GPCR包括但不限于嘌呤能受体(例如，P2Y1、P2Y2、P2Y4、P2Y6)；毒蕈碱乙酰胆碱受体M1和M3；凝血酶的受体[蛋白酶激活受体(PAR)-1、PAR-2]；血栓素(TXA2)；1-磷酸鞘氨醇(例如，S1P2、S1P3、S1P4和S1P5)；溶血磷脂酸(例如，LPA1、LPA2、LPA3)；血管紧张素II(AT1)；血清素(5-HT2c和5-HT4)；生长抑素(sst5)；内皮素(ETA和ETB)；缩胆囊素(CCK1)；V1a加压素受体；D5多巴胺受体；fMLP甲酰肽受体；GAL2甘丙肽受体；EP3前列腺素类受体；A1腺苷受体；α1肾上腺素能受体；BB2铃蟾肽受体；B2缓激肽受体；钙敏感受体；KSHV-ORF74趋化因子受体；NK1速激肽受体；和促甲状腺激素(TSH)受体。
在一些情况下，G12/13α进一步细分成分别由GNA12和GNA13编码的G12和G13类型。
Gi/o家族
Gi/oα(G抑制性、G其它)(也称为Gi/Go或Gi蛋白)通过抑制将ATP转化为cAMP的腺苷酸环化酶活性来抑制由三磷酸腺苷(ATP)产生3’,5’-环状AMP(cAMP)。
在一些实施方案中，与Giα相互作用的GPCR包括但不限于5-羟色胺受体(5-HT受体)类型5-HT1和5-HT5；毒蕈碱乙酰胆碱受体，如M2和M4；腺苷受体，如A1和A3；肾上腺素能受体，如α2A、α2B和α2c；阿培林(apelin)受体；钙敏感受体；大麻素受体CB1和CB2；趋化因子CXCR4受体；多巴胺D2、D3和D4；GABAB受体；谷氨酸受体，如代谢型谷氨酸受体2(mGluR2)、代谢型谷氨酸受体3(mGluR3)、代谢型谷氨酸受体4(mGluR4)、代谢型谷氨酸受体6(mGluR6)、代谢型谷氨酸受体7(mGluR7)和代谢型谷氨酸受体8(mGluR8)；组胺受体，如H3和H4受体；褪黑素受体，如褪黑素受体1型(MT1)、褪黑素受体2型(MT2)和褪黑素受体3型(MT3)；烟酸受体，如NIACR1和NIACR2；阿片受体，如δ、κ、μ和痛敏肽受体；前列腺素受体，如前列腺素E受体1(EP1)、前列腺素E受体3(EP3)、前列腺素F受体(FP)和血栓素受体(TP)；生长抑素受体sst1、sst2、sst3、sst4和sst5；以及微量胺相关受体8。
在一些情况下，有若干类型的Giα：Giα1、Giα2、Giα3、Giα4、Goα、Gt、Ggust和Gz。Giα1由GNAI1编码。Giα2由GNAI2编码。Giα3由GNAI3编码。Goα，即αo亚基，由GNAO1编码。Gt由GNAT1和GNAT2编码。Ggust由GNAT3编码。Gz由GNAZ编码。
Gs家族
Gsα(G刺激性、Gsα亚基或Gs蛋白)通过激活将三磷酸腺苷(ATP)转化为3',5'-环状AMP(cAMP)和焦磷酸盐的腺苷酸环化酶而激活cAMP依赖性途径。在一些实施方案中，与Gsα相互作用的GPCR包括但不限于5-羟色胺受体(5-HT受体)类型5-HT4、5-HT6和5-HT7；促肾上腺皮质激素受体(ACTH受体)(也称为黑皮质素受体2或MC2R)；腺苷受体类型A2a和A2b；精氨酸加压素受体2(AVPR2)；β-肾上腺素能受体β1、β2和β3；降钙素受体；降钙素基因相关肽受体；促肾上腺皮质素释放激素受体；多巴胺受体D1样家族受体，如D1和D5；促卵泡激素受体(FSH-受体)；胃抑制性多肽受体；胰高血糖素受体；组胺H2受体；黄体生成激素/绒毛膜促性腺激素受体；黑皮质素受体，如MC1R、MC2R、MC3R、MC4R和MC5R；甲状旁腺激素受体1；前列腺素受体类型D2和I2；分泌素受体；促甲状腺素受体；微量胺相关受体1；和箱型水母视蛋白。
在一些情况下，有两种类型的Gsα：Gs和Golf。Gs由GNAS编码。Golf由GNAL编码。
Hippo信号传导网络的另外的调控因子
在一些实施方案中，Hippo信号传导途径的另外的调控因子是Crumbs(Crb)复合物。Crumbs复合物是细胞极性和细胞形状的关键调控因子。在一些情况下，Crumbs复合物包含跨膜CRB蛋白，其组装在细胞极性方面起作用的多蛋白复合物。在一些情况下，CRB复合物募集与Hippo途径组分相互作用的衔接蛋白的血管动蛋白(AMOT)家族的成员。在一些情况下，研究显示，AMOT直接与YAP结合，促进YAP磷酸化并抑制其核定位。
在一些情况下，Hippo信号传导途径的另外的调控因子包括MST激酶家族的调控因子。MST激酶监测肌动蛋白细胞骨架完整性。在一些情况下，调控因子包括TAO激酶和细胞极性激酶PAR-1。
在一些情况下，Hippo信号传导途径的另外的调控因子包括粘附连接的分子。在一些情况下，E-钙粘蛋白(E-cad)通过调控MST活性来抑制YAP核定位和活性。在一些实施方案中，E-cad相关蛋白a-连环蛋白通过在细胞质中隔离YAP/14-3-3复合物来调控YAP。在其它情况下，Ajuba蛋白家族成员与Lats1/2激酶活性相互作用，从而阻止YAP/TAZ的失活。
在一些实施方案中，直接或间接与YAP/TAZ相互作用的另外的蛋白质包括但不限于梅林蛋白(Merlin)、原钙粘蛋白Fat 1、MASK1/2、HIPK2、PTPN14、RASSF、PP2A、盐诱导型激酶(SIK)、Scribble(SCRIB)、Scribble相关蛋白Discs large(Dlg)、KIBRA、PTPN14、NPHP3、LKB1、Ajuba和ZO1/2。
在一些实施方案中，本文所述的化合物是具有PDZ结合基序的转录共激活因子/Yes相关蛋白转录共激活因子(TAZ/YAP)的抑制剂。在一些实施方案中，本文所述的化合物增加具有PDZ结合基序的转录共激活因子/Yes相关蛋白转录共激活因子(TAZ/YAP)的磷酸化，或减少具有PDZ结合基序的转录共激活因子/Yes相关蛋白转录共激活因子(TAZ/YAP)的去磷酸化。在一些实施方案中，所述化合物增加具有PDZ结合基序的转录共激活因子/Yes相关蛋白转录共激活因子(TAZ/YAP)的泛素化，或减少具有PDZ结合基序的转录共激活因子/Yes相关蛋白转录共激活因子(TAZ/YAP)的去泛素化。
在一些实施方案中，本文公开的化合物是Hippo途径所涵盖或与Hippo途径相关的蛋白质中的一者或多者的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是G蛋白和/或其偶联GPCR的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是G蛋白的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是以下的抑制剂：Gqα家族蛋白，如Gq、Gq/11、Gq/14和Gq/15；G12/13α家族的蛋白质，如G12和G13；或Giα家族的蛋白质，如Giα1、Giα2、Giα3、Giα4、Goα、Gt、Ggust和Gz。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Gq的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Gq/11的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Gq/14的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Gq/15的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是G12的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是G13的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Giα1的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Giα2的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Giα3的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Giα4的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Goα的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Gt的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Ggust的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Gz的抑制剂。
在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Hippo途径的核心蛋白的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Sav1的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Mob的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是YAP的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是TAZ的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是TEAD的抑制剂。
在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是与泛素化和蛋白酶体降解途径相关的蛋白质的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是蛋白酶体降解途径蛋白(例如，26S蛋白酶体)的抑制剂。
在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是蛋白质的Ras超家族的蛋白质的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是蛋白质的Rho家族的蛋白质的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是Cdc42的抑制剂。
Cdc42是小GTP酶的Ras超家族的成员。具体地，Cdc42属于GTP酶的Rho家族，其中该家族成员参与多种且关键的细胞过程，如基因转录、细胞-细胞粘附和细胞周期进程。Cdc42参与细胞生长和极性，并且在一些情况下，Cdc42由鸟嘌呤核苷酸交换因子(GEF)激活。在一些情况下，Cdc42的抑制剂是本文公开的化合物。
在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是去泛素化酶的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是半胱氨酸蛋白酶或金属蛋白酶的抑制剂。在一些实施方案中，Hippo途径的抑制剂是泛素特异性蛋白酶的抑制剂。USP47是半胱氨酸蛋白酶的泛素特异性蛋白酶(USP/UBP)超家族的成员。在一些实施方案中，本文公开的化合物是USP47的抑制剂。
在一些实施方案中，本发明提供化合物或其药用盐或组合物用于治疗一种或多种病症、疾病和/或疾患的用途，其中所述病症、疾病或疾患包括但不限于细胞增殖性病症。
可以在体外、在体内或在细胞系中测定在本发明中用作TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)或其变体或突变体的抑制剂的化合物的活性。体外测定包括确定TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)或其变体或突变体的抑制的测定。替代的体外测定对抑制剂与TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)或其变体或突变体结合的能力进行定量。用于测定在本发明中用作TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)或其变体或突变体的抑制剂的化合物的详细条件列于下面的实施例中。参见例如实施例2和5。
如本文所用，术语“治疗(treatment/treat/treating)”是指逆转、缓解如本文所述的疾病或病症或其一种或多种症状、延迟其发作或抑制其进展。在一些实施方案中，可以在一种或多种症状已经出现后施用治疗。在其它实施方案中，可以在没有症状的情况下施用治疗。例如，可以在症状发作之前对易感个体施用治疗(例如，考虑症状史和/或考虑遗传或其它易感因素)。症状已经消退后也可以继续治疗，例如以预防或延迟其复发。
所提供的化合物是TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)的抑制剂，因此可用于治疗与TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)的活性相关的一种或多种病症。因此，在某些方面和实施方案中，本发明提供了治疗TEAD介导的病症的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效的本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
如本文所用，术语“TEAD介导的”病症、疾病和/或疾患如本文所用意指其中已知TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)或其变体或突变体起作用的任何疾病或其它有害疾患。因此，本发明的另一方面或实施方案涉及治疗其中已知TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)或其变体或突变体起作用的一种或多种疾病或减轻其严重程度。
如本文所用，术语“治疗有效量的”是指TEAD抑制剂或其药学上可接受的盐的量，其有效降低或减弱TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)或其变体或突变体的生物活性，在疾患的治疗中提供治疗益处，或延迟或最小化与生物样品中或患者中的疾患相关的一种或多种症状。在一些实施方案中，“治疗有效量的”是指TEAD抑制剂或其药学上可接受的盐的量，其可测量地减少TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)或其变体或突变体的结合或信号传导活性或任何TEAD介导的活性。术语“治疗有效量”在一些实施方案中可涵盖改善总体治疗、减少或避免疾患的症状、体征或病因和/或增强另一种治疗剂的治疗功效的量。在某些实施方案中，治疗有效量是足以抑制TEAD转录因子的量。在某些实施方案中，治疗有效量是足以治疗增殖性疾病的量。
在一些方面和实施方案中，本文提供了治疗疾病或病症或疾病或病症的一种或多种症状、降低其严重程度、延迟其发作或抑制其进展的方法，所述疾病或病症以增加的TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)表达和/或增加的TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)活性为特征或与之相关，包括对有需要的患者施用治疗有效的本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。在一些方面和实施方案中，本文提供了治疗其中抑制或拮抗TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)活性是有益的疾病或病症或疾病或病症的一种或多种症状、降低其严重程度、延迟其发作或抑制其进展的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效的本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。在一些方面和实施方案中，本文提供了治疗其中抑制或拮抗Hippo途径是有益的疾病或病症或疾病或病症的一种或多种症状、降低其严重程度、延迟其发作或抑制其进展的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效的本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
在一些方面和实施方案中，本发明提供了治疗一种或多种病症、疾病和/或疾患的方法，其中所述病症、疾病或疾患包括但不限于细胞增殖性病症，包括对有需要的患者施用如本文所述的TEAD抑制剂化合物或其药用盐或组合物。在一些实施方案中，细胞增殖性病症是癌症。在一些实施方案中，所述癌症以增加的TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)表达和/或增加的TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)活性为特征。
如本文所用，术语“增加的”、“升高的”或“增强的”可互换使用，并且涵盖生物功能和/或生物活性和/或浓度的任何可测量的增加。例如，相对于对照或功能或活性或浓度的基线量，增加可以为至少约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约100％、约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约6倍、约7倍、约8倍、约9倍、约10倍、约20倍、约25倍、约50倍、约100倍或更高。
如本文所用，术语样品或癌症或患者中的物质(如TEAD)的“增加的表达”和/或“增加的活性”是指如通过本领域中已知的技术所确定，相对于一个或多个对照样品如未罹患疾病或病症(例如，癌症)的个体或个体组或内部对照中的所述物质(如TEAD)的量，所述物质(如TEAD)的量增加约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约100％、约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约6倍、约7倍、约8倍、约9倍、约10倍、约20倍、约25倍、约50倍、约100倍或更高。如果相对于对照组样品或基线组样品或患者样品的回顾性分析中的TEAD的平均值(平均)或中值量，TEAD的表达和/或活性增加一个标准差、两个标准差、三个标准差、四个标准差、五个标准差或更多，则也可以确定受试者的TEAD的“表达增加”或“活性增加”。如本领域中所实践的那样，这类对照或基线表达水平可以在先前确定，或者在样品或癌症或受试者中进行测量之前测量，或者可得自这类对照样品的数据库。
如本文所用，“增殖性疾病”是指由于通过细胞倍增引起的异常生长或扩增而发生的疾病(Walker，Cambridge Dictionary of Biology，Cambridge University Press：Cambridge，UK，1990)。增殖性疾病可能与以下相关：1)正常静止细胞的病理性增殖；2)细胞自其正常位置的病理性迁移(例如，肿瘤细胞的转移)；3)蛋白水解酶如基质金属蛋白酶(例如，胶原酶、明胶酶和弹性蛋白酶)的病理性表达；或4)病理性血管生成，如在增殖性视网膜病变和肿瘤转移中。示例性增殖性疾病包括癌症(即，“恶性肿瘤”)、良性肿瘤、血管生成、炎性疾病和自身免疫性疾病。
癌症
要利用本文所述的化合物和方法及用途治疗的癌症或增殖性病症或肿瘤包括但不限于血液学癌症、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、神经系统癌症、皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、肺癌、头颈癌、胃肠癌、肝癌、胰腺癌、泌尿生殖系统癌、骨癌、肾癌和血管癌。
在本文所述的方法和用途的一些实施方案中，癌症由具有PDZ结合基序的转录共激活因子/Yes相关蛋白转录共激活因子(TAZ/YAP)的激活介导。在本文所述的方法和用途的一些实施方案中，癌症由YAP/TAZ与TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)的相互作用的调节介导。在本文所述的方法和用途的一些实施方案中，所述癌症以增加的TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)表达和/或增加的TEAD(例如，TEAD1、TEAD2、TEAD3和/或TEAD4)活性为特征或与之相关。在本文所述的方法和用途的一些实施方案中，所述癌症是其中YAP定位于癌细胞的细胞核中的癌症。
在本文所述的方法和用途的一些实施方案中，所述癌症以一个或多个Hippo途径基因的基因改变为特征或与之相关。如本文所用，术语“一个或多个Hippo途径基因的基因改变”是指样品如肿瘤样品中一定百分比的细胞的一个或多个Hippo途径基因具有可检测量的基因改变。如本文所用，基因(如Hippo途径基因)的基因改变可例如指基因的功能丧失突变(包括例如移码、无义突变和剪接突变)、基因拷贝数的变化(包括例如拷贝增加、扩增、拷贝丢失或缺失)或所述基因与另一个基因的融合，举例如TAZ-CAMTA1融合或YAP1-TFE3融合。在一些实施方案中，Hippo途径基因的基因改变是指样品中约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％的细胞(如肿瘤细胞)具有至少约三个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约四个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约五个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约六个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约七个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约八个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约九个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约十个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约十一个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约十二个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约九个拷贝的基因改变的河马途径基因、至少约十个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约十一个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约十二个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约十三个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约十四个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约十五个拷贝的基因改变的Hippo途径基因、至少约二十个拷贝的基因改变的Hippo途径基因或更多。在一些实施方案中，Hippo途径基因的基因改变是指样品中约10％肿瘤细胞具有至少约15个拷贝的基因改变的Hippo途径基因。在一些实施方案中，Hippo途径基因的基因改变是指样品中约40％肿瘤细胞具有至少约4个拷贝的基因改变的Hippo途径基因。在一些实施方案中，Hippo途径基因的基因改变是指样品中约10％肿瘤细胞具有至少约四个拷贝的基因改变的Hippo途径基因。在一些实施方案中，Hippo途径基因是NF2。在一些实施方案中，一个或多个Hippo途径基因的基因改变是NF2缺陷。在一些实施方案中，NF2缺陷是指NF2功能丧失突变。在一些实施方案中，NF2缺陷是指NF2拷贝丢失或缺失。在一些实施方案中，NF2缺陷是指NF2 mRNA表达不存在或非常低。在一些实施方案中，Hippo途径基因是YAP1。在一些实施方案中，一个或多个Hippo途径基因的基因改变是YAP1扩增。在一些实施方案中，一个或多个Hippo途径基因的基因改变是YAP1融合，如YAP1-TFE3融合。在一些实施方案中，Hippo途径基因是TAZ。在一些实施方案中，一个或多个Hippo途径基因的基因改变是TAZ扩增。在一些实施方案中，一个或多个Hippo途径基因的基因改变是TAZ融合，如TAZ-CAMTA1融合。在一些实施方案中，Hippo途径基因是LATS 1/2。在一些实施方案中，一个或多个Hippo途径基因的基因改变是LATS 1/2拷贝数丢失或缺失。在一些实施方案中，Hippo途径基因是MST1/2。在一些实施方案中，Hippo途径基因是BAP1。
在一些实施方案中，癌症以突变型Gα-蛋白为特征。在一些实施方案中，突变型Gα-蛋白选自G12、G13、Gq、G11、Gi、Go和Gs。在一些实施方案中，突变型Gα-蛋白是G12。在一些实施方案中，突变型Gα-蛋白是G13。在一些实施方案中，突变型Gα-蛋白是Gq。在一些实施方案中，突变型Gα-蛋白是G11。在一些实施方案中，突变型Gα-蛋白是Gi。在一些实施方案中，突变型Gα-蛋白是Go。在一些实施方案中，突变型Gα-蛋白是Gs。
在本文所述的方法和用途的一些实施方案中，通过抑制或减小或减少或阻止癌症或肿瘤的进一步生长或扩散来治疗癌症。在本文所述的方法和用途的一些实施方案中，通过抑制癌症或肿瘤或相对于治疗之前癌症或肿瘤的大小将癌症或肿瘤的大小(例如，体积或质量)减小至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％来治疗癌症。在本文所述的方法和用途的一些实施方案中，通过相对于治疗之前癌症或肿瘤的数量将患者体内癌症或肿瘤的数量减少至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％来治疗癌症。
在一些实施方案中，采用本文所述的方法或用途治疗的患者在治疗开始后表现出至少约一个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、至少约一年、至少约十八个月、至少约两年、至少约三年、至少约四年或至少约五年的无进展生存期。在一些实施方案中，采用本文所述的方法或用途治疗的患者在治疗开始后表现出至少约一个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、至少约一年、至少约14个月、至少约16个月、至少约18个月、至少约20个月、至少约22个月、至少约两年、至少约三年、至少约四年或至少约五年的总生存期。
在一些实施方案中，采用本文所述的方法或用途治疗的患者表现出至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或约100％的客观反应率(ORR)。
在本文所述的方法和用途的一些实施方案中，所述癌症是肺癌、甲状腺癌、卵巢癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、食道癌、肝癌、乳腺癌、皮肤癌或间皮瘤。在一些实施方案中，所述癌症是肺癌、甲状腺癌、卵巢癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、食道癌、肝癌、乳腺癌、皮肤癌或间皮瘤、肉瘤或上皮样血管内皮瘤(EHE)。在一些实施方案中，所述癌症是间皮瘤，如恶性间皮瘤。在一些实施方案中，所述癌症是EHE。
在一些实施方案中，癌症包括但不限于白血病(例如，急性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性成髓细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性髓单核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤(例如，霍奇金病或非霍奇金病)、华氏巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、重链病和实体肿瘤如肉瘤和癌瘤(例如，纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏肿瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、威尔姆斯肿瘤、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(GBM，也称为成胶质细胞瘤)、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、神经纤维肉瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤和成视网膜细胞瘤)。
在一些实施方案中，所述癌症是神经胶质瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(GBM，也称为成胶质细胞瘤)、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、神经纤维肉瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤或成视网膜细胞瘤。
在一些实施方案中，所述癌症是听神经瘤、星形细胞瘤(例如，I级-毛细胞性星形细胞瘤、II级-低级星形细胞瘤、III级-间变性星形细胞瘤或IV级-成胶质细胞瘤(GBM))、脊索瘤、CNS淋巴瘤、颅咽管瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、混合神经胶质瘤、视神经胶质瘤、室管膜下瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、转移性脑肿瘤、少突神经胶质瘤、垂体肿瘤、原发性神经外胚层(PNET)肿瘤或神经鞘瘤。在一些实施方案中，所述癌症是在儿童中比在成人中更常见的类型，如脑干神经胶质瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、幼年毛细胞型星形细胞瘤(JPA)、成神经管细胞瘤、视神经胶质瘤、松果体肿瘤、原始神经外胚层肿瘤(PNET)或横纹肌样瘤。在一些实施方案中，患者是成年人。在一些实施方案中，患者是儿童或儿科患者。
在另一实施方案中，癌症包括但不限于间皮瘤、肝胆管(肝和胆管)癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、胃肠(胃、结直肠和十二指肠)癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食管癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、睾丸癌、慢性或急性白血病、慢性髓性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、非霍奇金淋巴瘤、脊柱轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、肾上腺皮质癌、胆囊癌、多发性骨髓瘤、胆管癌、纤维肉瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤或上述癌症中的一者或多者的组合。
在一些实施方案中，所述癌症选自肝细胞癌、卵巢癌、卵巢上皮癌或输卵管癌；乳头状浆液性囊腺癌或子宫乳头状浆液性癌(UPSC)；前列腺癌；睾丸癌；胆囊癌；肝胆管癌；软组织和骨滑膜肉瘤；横纹肌肉瘤；骨肉瘤；软骨肉瘤；尤文肉瘤；间变性甲状腺癌；肾上腺皮质腺瘤；胰腺癌；胰管癌或胰腺腺癌；胃肠/胃(GIST)癌；淋巴瘤；头颈鳞状细胞癌(SCCHN)；唾液腺癌；神经胶质瘤或脑癌；神经纤维瘤病-1相关恶性周围神经鞘肿瘤(MPNST)；华氏巨球蛋白血症；或成神经管细胞瘤。
在一些实施方案中，所述癌症选自肝细胞癌(HCC)、肝母细胞瘤、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、输卵管癌、乳头状浆液性囊腺癌、子宫乳头状浆液性癌(UPSC)、肝胆管癌、软组织和骨滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、间变性甲状腺癌、肾上腺皮质腺瘤、胰腺癌、胰管癌、胰腺腺癌、神经胶质瘤、神经纤维瘤病-1相关恶性周围神经鞘肿瘤(MPNST)、华氏巨球蛋白血症或成神经管细胞瘤。
在一些实施方案中，癌症是实体肿瘤，如肉瘤、癌瘤或淋巴瘤。实体肿瘤通常包含异常的组织肿块，其通常不包括囊肿或液体区域。在一些实施方案中，所述癌症选自肾细胞癌或肾癌；肝细胞癌(HCC)或肝母细胞瘤或肝癌；黑素瘤；乳腺癌；结直肠癌瘤或结直肠癌；结肠癌；直肠癌；肛门癌；肺癌，如非小细胞肺癌(NSCLC)或小细胞肺癌(SCLC)；卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢癌瘤或输卵管癌；乳头状浆液性囊腺癌或子宫乳头状浆液性癌(UPSC)；前列腺癌；睾丸癌；胆囊癌；肝胆管癌；软组织和骨滑膜肉瘤；横纹肌肉瘤；骨肉瘤；软骨肉瘤；尤文肉瘤；间变性甲状腺癌；肾上腺皮质癌；胰腺癌；胰管癌或胰腺腺癌；胃肠/胃(GIST)癌；淋巴瘤；头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)；唾液腺癌；神经胶质瘤或脑癌；神经纤维瘤病-1相关恶性周围神经鞘肿瘤(MPNST)；华氏巨球蛋白血症；或成神经管细胞瘤。
在一些实施方案中，所述癌症选自肾细胞癌、肝细胞癌(HCC)、肝母细胞瘤、结直肠癌瘤、结直肠癌、结肠癌、直肠癌、肛门癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢癌瘤、输卵管癌、乳头状浆液性囊腺癌、子宫乳头状浆液性癌(UPSC)、肝胆管癌、软组织和骨滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、间变性甲状腺癌、肾上腺皮质癌、胰腺癌、胰管癌、胰腺腺癌、神经胶质瘤、脑癌、神经纤维瘤病-1相关恶性周围神经鞘肿瘤(MPNST)、华氏巨球蛋白血症或成神经管细胞瘤。
在一些实施方案中，所述癌症选自肝细胞癌(HCC)、肝母细胞瘤、结肠癌、直肠癌、卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢癌瘤、输卵管癌、乳头状浆液性囊腺癌、子宫乳头状浆液性癌(UPSC)、肝胆管癌、软组织和骨滑膜肉瘤、横纹肌肉瘤、骨肉瘤、间变性甲状腺癌、肾上腺皮质癌、胰腺癌、胰管癌、胰腺腺癌、神经胶质瘤、神经纤维瘤病-1相关恶性周围神经鞘肿瘤(MPNST)、华氏巨球蛋白血症或成神经管细胞瘤。
在一些实施方案中，所述癌症是肝细胞癌(HCC)。在一些实施方案中，所述癌症是肝母细胞瘤。在一些实施方案中，所述癌症是结肠癌。在一些实施方案中，所述癌症是直肠癌。在一些实施方案中，所述癌症是卵巢癌或卵巢癌瘤。在一些实施方案中，所述癌症是卵巢上皮癌。在一些实施方案中，所述癌症是输卵管癌。在一些实施方案中，所述癌症是乳头状浆液性囊腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是子宫乳头状浆液性癌(UPSC)。在一些实施方案中，所述癌症是肝胆管癌。在一些实施方案中，所述癌症是软组织和骨滑膜肉瘤。在一些实施方案中，所述癌症是横纹肌肉瘤。在一些实施方案中，所述癌症是骨肉瘤。在一些实施方案中，所述癌症是间变性甲状腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是肾上腺皮质癌。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌或胰管癌。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是神经胶质瘤。在一些实施方案中，所述癌症是恶性周围神经鞘肿瘤(MPNST)。在一些实施方案中，所述癌症是神经纤维瘤病-1相关MPNST。在一些实施方案中，所述癌症是华氏巨球蛋白血症。在一些实施方案中，所述癌症是成神经管细胞瘤。
在一些实施方案中，癌症是病毒相关癌症，包括人类免疫缺陷病毒(HIV)相关实体肿瘤、人乳头瘤病毒(HPV)-16阳性不可治愈的实体肿瘤和成人T细胞白血病，后者由人T细胞白血病病毒类型I(HTL V-I)引起，并且是以白血病细胞中的HTLV-I的克隆整合为特征的CD4+T细胞白血病的高度侵袭形式(参见https://clinicaltrials.gov/ct2/sh ow/study/NCT02631746)；以及胃癌、鼻咽癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、头颈部鳞状细胞癌和默克尔细胞癌中的病毒相关肿瘤。(参见https://clinicaltrials.gov/ct2/show/study/NCT02488759；还参见https://cli nicaltrials.gov/ct2/show/study/NCT0240886；https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02426892)
在一些实施方案中，癌症是黑素瘤癌。在一些实施方案中，癌症是乳腺癌。在一些实施方案中，癌症是肺癌。在一些实施方案中，癌症是小细胞肺癌(SCLC)。在一些实施方案中，癌症是非小细胞肺癌(NSCLC)。
可以采用有效治疗或减轻癌症或肿瘤的严重程度的任何量和任何施用途径来施用根据本发明的方法的化合物和组合物。所需的确切量因受试者而异，取决于受试者的种类、年龄和一般状况、疾病或疾患的严重程度、特定的药剂、其施用方式等。优选将本发明的化合物配制成容易施用和剂量均匀的剂量单位形式。如本文所用的表述“剂量单位形式”是指适合于要治疗的患者的药剂的物理离散单位。然而，将要理解的是，本发明的化合物和组合物的每日总用量由主治医生在合理的医学判断范围内决定。任何特定患者或生物体的具体有效剂量水平取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所用具体化合物的活性；所用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所用具体化合物的施用时间、施用途径和排泄速率；治疗的持续时间；与所用具体化合物组合或同时使用的药物，以及医学领域中熟知的类似因素。如本文所用的术语“患者”或“受试者”意指动物，优选哺乳动物，最优选人。
可以对人及其他动物口服、经直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉末、油膏或滴剂)、经颊、作为口腔或鼻腔喷雾剂等施用本发明的药学上可接受的组合物，这取决于所治疗的疾病或病症的严重程度。在某些实施方案中，可以一天一次或多次以每天约0.01mg/kg至约50mg/kg且优选约1mg/kg至约25mg/kg受试者体重的剂量水平口服或肠胃外施用本发明的化合物，以获得所需的治疗效果。
用于口服施用的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还可含有本领域中常用的惰性稀释剂，举例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，及其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可以包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可以根据已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶剂当中有水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发油常规用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，在注射剂的制备中使用脂肪酸，如油酸。
可以将可注射制剂灭菌，例如通过经细菌截留过滤器过滤，或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂，其可以在使用之前溶解或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中。
为了延长本发明的化合物的作用，经常希望减缓来自皮下或肌内注射的化合物的吸收。这可以通过使用水溶性差的结晶或非晶材料的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，而后者可取决于晶粒大小和结晶形式。或者，肠胃外施用的化合物形式的延迟吸收是通过将化合物溶解或悬浮在油媒介物中实现的。通过在可生物降解的聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微囊基质制成可注射储库形式。根据化合物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物释放的速率。其它可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还可以通过将化合物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储库型可注射制剂。
用于直肠或阴道施用的组合物优选为栓剂，其可以通过将本发明的化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，这些赋形剂或载体在环境温度下为固体，但在体温下为液体，因此在直肠或阴道腔中融化，并释放活性化合物。
用于口服施用的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉末和颗粒。在这类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性药学上可接受的赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘结剂，举例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂，如甘油；d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，如石蜡，f)吸收促进剂，如季铵化合物，g)润湿剂，举例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，如高岭土和膨润土，和i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。
在使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中也可以使用相似类型的固体组合物作为填充剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可制成有包衣和壳，如肠溶包衣和药物配制领域中熟知的其它包衣。它们可任选含有遮光剂，并且也可以是这样的组合物，即它们仅或优先在肠道的某一部分中任选以延迟的方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。在使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中也可以使用相似类型的固体组合物作为填充剂。
活性化合物也可以是具有一种或多种如上所述的赋形剂的微囊化形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可制成有包衣和壳，如肠溶包衣、控释包衣和药物配制领域中熟知的其它包衣。在这类固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂如蔗糖、乳糖或淀粉混合。按通常的实践，这类剂型还可以包含除惰性稀释剂之外的另外的物质，例如压片润滑剂及其它压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。它们可任选含有遮光剂，并且也可以是这样的组合物，即它们仅或优先在肠道的某一部分中任选以延迟的方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。
用于局部或透皮施用本发明的化合物的剂型包括油膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、粉末、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。活性成分在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂或可能需要的缓冲剂混合。预期眼科制剂、滴耳剂和滴眼剂也在本发明的范围内。另外，本发明考虑了使用透皮贴剂，其附加的优点是向身体提供化合物的受控递送。可以通过将化合物溶解或分散在适当的介质中制成这类剂型。吸收增强剂也可用于增加化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。
与一种或多种其它治疗剂共同施用
根据要治疗的特定疾患或疾病，本发明的组合物中也可存在通常施用以治疗该疾患的另外的治疗剂。如本文所用，通常施用以治疗特定疾病或疾患的另外的治疗剂被称为“适合于所治疗的疾病或疾患”。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗所公开的疾病或疾患的方法，包括对有需要的患者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐，并同时或依次共同施用有效量的一种或多种另外的治疗剂，如本文所述的那些。在一些实施方案中，所述方法包括共同施用一种另外的治疗剂。在一些实施方案中，所述方法包括共同施用两种另外的治疗剂。在一些实施方案中，所公开的化合物和一种或多种另外的治疗剂的组合协同作用。
本发明的化合物也可以与已知的治疗过程组合使用，例如施用激素或辐射。在某些实施方案中，所提供的化合物用作放射增敏剂，特别是用于治疗对放射疗法表现的敏感性差的肿瘤。
本发明的化合物可单独施用或与一种或多种其它治疗化合物组合施用，可能的组合疗法采取固定组合的形式，或者本发明的化合物和一种或多种其它治疗化合物的施用交错或彼此独立地给予，或者组合施用固定的组合和一种或多种其它治疗化合物。而且或者另外，本发明的化合物可以与化学疗法、放射疗法、免疫疗法、光疗法、手术干预或这些的组合组合施用，特别是用于肿瘤治疗。长期疗法同样是可能的，正如在如上所述的其它治疗策略的背景下的辅助疗法一样。其它可能的治疗有在肿瘤消退后维持患者状态的疗法，或者甚至是化学预防疗法，例如对有风险的患者。
作为多剂量方案的一部分，一种或多种其它治疗剂可以与本发明的化合物或组合物分开施用。或者，一种或多种其它治疗剂可以是单一剂型的一部分，与本发明的化合物一起混合在单一组合物中。如果以多剂量方案施用，则一种或多种其它治疗剂和本发明的化合物或组合物可以彼此同时、依次或在间隔一段时间内施用，例如彼此间隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、18、20、21、22、23或24小时内。在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂和本发明的化合物或组合物以多剂量方案在间隔大于24小时内施用。
如本文所用，术语“组合”、“组合的”及相关术语是指根据本发明同时或依次施用治疗剂。例如，本发明的化合物可以与一种或多种其它治疗剂以单独的单位剂型同时或依次施用或者以单一的单位剂型一起施用。因此，本发明提供了包含本发明的化合物、一种或多种其它治疗剂和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物的单一单位剂型。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的本发明的化合物和一种或多种其它治疗剂的量(在包含如上所述另外的治疗剂的那些组合物中)将根据所治疗的宿主和特定的施用方式而有所不同。优选地，应配制本发明的组合物，使得可以施用0.01-100mg/kg体重/天之间的本发明的化合物的剂量。
在包含一种或多种其它治疗剂的那些组合物中，一种或多种其它治疗剂和本发明的化合物可以协同作用。因此，这类组合物中一种或多种其它治疗剂的量可少于仅利用该治疗剂的单一疗法中所需的量。在这类组合物中，可以施用0.01-1,000μg/kg体重/天之间的一种或多种其它治疗剂的剂量。
本发明的组合物中存在的一种或多种其它治疗剂的量可以不超过通常在包含该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中施用的量。优选本发明公开的组合物中的一种或多种其它治疗剂的量将在包含该药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中通常存在的量的约50％至100％的范围内。在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂以该药剂的通常施用量的约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％的剂量施用。如本文所用，短语“通常施用”意指经FDA批准的治疗剂被批准按照FDA标签插页给药的量。
也可以将本发明的化合物或其药物组合物掺入到用于涂覆可植入的医疗装置如假体、人造瓣膜、血管移植物、支架和导管的组合物中。血管支架例如已被用于克服再狭窄(受伤后血管壁再次变窄)。然而，使用支架或其它可植入装置的患者存在凝块形成或血小板激活的风险。可通过用包含激酶抑制剂的药学上可接受的组合物预涂覆所述装置来防止或减轻这些不利的作用。涂有本发明的化合物的可植入装置是本发明的另一实施方案。
示例性其它治疗剂
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂。在一些实施方案中，PARP抑制剂选自奥拉帕尼(AstraZeneca)；卢卡帕尼(Clovis Oncology)；尼拉帕尼(/>Tesaro)；他拉唑帕尼(MDV3800/BMN 673/LT00673,Medivation/Pfizer/Biomarin)；维利帕尼(ABT-888，AbbVie)；和BGB-290(BeiGene，Inc.)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂。在一些实施方案中，HDAC抑制剂选自伏立诺他(Merck)；罗米地辛(Celgene)；帕比司他(/>Novartis)；贝利司他(Spectrum Pharmaceuticals)；恩替司他(SNDX-275，SyndaxPharmaceuticals)(NCT00866333)；和西达本胺(/>HBI-8000，ChipscreenBiosciences，China)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是CDK抑制剂，如CDK4/CDK6抑制剂。在一些实施方案中，CDK 4/6抑制剂选自帕博西尼(Pfizer)；瑞博西尼(Novartis)；阿贝西利(Ly2835219，Eli Lilly)；和曲拉西利(G1T28，G1Therapeutics)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂。在一些实施方案中，PI3K抑制剂选自艾代拉里斯(ZYGilead)、阿培利司(BYL719，Novartis)、塔西利司(taselisi b)(GDC-0032，Genentech/Roche)；匹替利司(pictilisib)(GDC-0941，Genentech/Roche)；库潘尼西(copanlisib)(BAY806946，Bayer)；杜韦利西布(duvelisib)(先前称为IPI-145，Infinity Pharmaceuticals)；PQR 309(PiqurTherapeutics，Switzerland)和TGR1202(先前称为RP5230，TG Therapeutics)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是基于铂的治疗药物，也称为铂类化合物(platins)。铂类化合物引起DNA的交联，使得它们主要在快速复制的细胞如癌细胞中抑制DNA修复和/或DNA合成。
在一些实施方案中，基于铂的治疗药物选自顺铂(Bristol-MyersSquibb)；卡铂(/>Bristol-Myers Squibb；还有Teva；Pfizer)；奥沙利铂(Sanofi-Aventis)；奈达铂(/>Shionogi)、吡铂(PoniardPharmaceuticals)；和赛特铂(JM-216，Agennix)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是紫杉烷化合物，其引起微管的破坏，这是细胞分裂所必需的。在一些实施方案中，紫杉烷化合物选自紫杉醇(Bristol-Myers Squibb)、多西他赛(/>Sanofi-Aventis；/>Sun Pharmaceutical)、白蛋白结合紫杉醇(/>Abraxis/Celgene)、卡巴他赛(/>Sanofi-Aventis)和SID530(SK Chemicals，Co.)(NCT00931008)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是核苷抑制剂或干扰正常DNA合成、蛋白质合成、细胞复制或将以其它方式抑制快速增殖细胞的治疗剂。
在一些实施方案中，核苷抑制剂选自曲贝替定(胍烷化剂，Janssen Oncology)、甲氮芥(烷化剂，/>Aktelion Pharmaceuticals)；长春新碱(/>Eli Lilly；/>Teva Pharmaceuticals；Talon Therapeutics)；替莫唑胺(烷化剂5-(3-甲基三氮烯-1-基)-咪唑-4-甲酰胺(MTIC)的前药，/>Merck)；阿糖胞苷注射剂(ara-C，抗代谢胞苷类似物，Pfizer)；洛莫司汀(烷化剂，/>Bristol-Myers Squibb；/>NextSource Biotechnology)；阿扎胞苷(胞苷的嘧啶核苷类似物，/>Celgene)；奥马西汀高三尖杉酯碱(三尖杉碱酯)(蛋白质合成抑制剂，/>TevaPharmaceuticals)；菊欧文菌天冬酰胺酶(用于消耗天冬酰胺的酶，/>Lundbeck；/>EUSA Pharma)；甲磺酸艾日布林(微管抑制剂，基于微管蛋白的抗有丝分裂剂，/>Eisai)；卡巴他赛(微管抑制剂，基于微管蛋白的抗有丝分裂剂，/>Sanofi-Aventis)；卡培他滨(capacetrine)(胸苷酸合成酶抑制剂，Genentech)；苯达莫司汀(双功能甲氮芥衍生物，据信形成链间DNA交联，Cephalon/Teva)；伊沙匹隆(埃博霉素B的半合成类似物，微管抑制剂，基于微管蛋白的抗有丝分裂剂，/>Bristol-Myers Squibb)；尼拉拉滨(脱氧鸟苷类似物的前药，核苷代谢抑制剂，/>Novartis)；氯法拉滨(核糖核苷酸还原酶抑制剂的前药，脱氧胞苷的竞争性抑制剂，/>Sanofi-Aventis)；以及曲氟尿苷和替匹嘧啶(基于胸苷的核苷类似物和胸苷磷酸化酶抑制剂，/>TaihoOncology)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是激酶抑制剂或VE GF-R拮抗剂。在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是MEK抑制剂。如本文所用，“MEK抑制剂”是指结合和/或抑制丝裂原激活蛋白激酶MEK1和/或MEK2的任何抑制剂或阻断剂或拮抗剂。在一些实施方案中，MEK抑制剂选自如Cheng等人，“Current Developm ent Status of MEKInhibitors,”Molecules 2017，22，1551中所述的那些，该文献的内容以全文引用的方式并入本文。在某些实施方案中，MEK抑制剂选自贝美替尼(MEK162，ARRY-438162，ARRAY BIOPHARMA INC.)、考比替尼(Exelexis/Genentech/Roche)、瑞法替尼(BAY 86–9766，RDEA119；Bayer AG)、司美替尼(AZD6244，ARRY-142886；ASTRAZENECA)、曲美替尼(No vartis)、米达美替尼(PD-0325901，Spring Works Therapeutics)、匹马司替(AS703026，MSC1936369B，Merck KGaA)或任何前述物质的药学上可接受的盐和/或溶剂合物。在某些实施方案中，第二抗癌剂是贝美替尼、考比替尼、司美替尼、曲美替尼、米达美替尼、匹马替尼或任何前述物质的药学上可接受的盐和/或溶剂合物。在本文所述的方法和用途中用作其它治疗剂的MEK抑制剂的其它实例包括但不限于E6201(Eisai Co Ltd./Strategia Theraputics)、GDC-0623(RG 7421，Genentech,Inc.)、CH5126766(RO5126766，Chugai 232Pharmace utical Co.，Roche)、HL-085(Shanghai Kechow Pharma，Inc.)、SHR7390(HENGRUI MEDICINE)、TQ-B3234(CHIATAI TIANQING)、CS-3006(CSTONEPharmaceuticals)、FCN-159(FosunPharmaceutical s)、VS-6766(Verastem Oncology)和IMM-1-104(Immuneering Cor p.)。在本文所述的方法和用途中用作第二抗癌剂的MEK抑制剂的其它实例包括但不限于WO2005/121142、WO2014/169843、WO2016/035008、WO2016/168704、WO2020/125747、WO2021/142144、WO2021/142345、WO2021/149776中描述的那些，上述专利文献中的每一者的内容以全文引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是EGFR抑制剂。如本文所用，“EGFR抑制剂”是指结合和/或抑制表皮生长因子受体(EGFR)的任何抑制剂或阻断剂或拮抗剂。在一些实施方案中，EGFR抑制剂选自如Ayati等人，“A review on progression of epidermalgrowth factor receptor(EGFR)inhibitors as an efficient approach in cancertargeted therapy”，Bioorganic Chemistry 2020，99:103811中所述的那些，该文献的内容以全文引用的方式并入本文。EGFR抑制剂选自西妥昔单抗、耐昔妥珠单抗、帕尼单抗、扎芦木单抗、尼妥珠单抗和马妥珠单抗。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是西妥昔单抗。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是耐昔妥珠单抗。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是帕尼单抗。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是扎芦木单抗。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是尼妥珠单抗。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是马妥珠单抗。
在一些实施方案中，EGFR抑制剂选自奥希替尼、吉非替尼、厄洛替尼、拉帕替尼、来那替尼、凡德他尼、阿法替尼、布加替尼、达克替尼和埃克替尼。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是奥希替尼。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是吉非替尼。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是厄洛替尼。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是拉帕替尼。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是来那替尼。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是阿法替尼。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是布加替尼。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是达克替尼。在一些实施方案中，EGFR抑制剂是埃克替尼。
在一些实施方案中，EGFR抑制剂是“第1代EGFR酪氨酸激酶抑制剂”(第1代TKI)。第1代TKI是指可逆的EGFR抑制剂，如吉非替尼和厄洛替尼，其在携带EGFR激活突变如外显子19和外显子21缺失L858R突变的NSCLC的一线治疗中是有效的。
在一些实施方案中，EGFR抑制剂是“第2代EGFR酪氨酸激酶抑制剂”(第2代TKI)。第2代TKI是指共价不可逆EGFR抑制剂，如阿法替尼和达克替尼，其在携带EGFR激活突变如外显子19和外显子21缺失L858R突变的NSCLC的一线治疗中是有效的。
在一些实施方案中，EGFR抑制剂是“第3代EGFR酪氨酸激酶抑制剂”(第3代TKI)。第3代TKI是指共价不可逆EGFR抑制剂，如奥希替尼和拉泽替尼，其对EGFR激活突变如外显子19和外显子21缺失L858R单独或与T790M突变组合具有选择性，并且针对野生型EGFR具有较低的抑制活性。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂选自经批准的VEGF抑制剂，并且可用于本发明的激酶抑制剂包括：贝伐单抗( Genentech/Roche)，一种抗VEGF单克隆抗体；雷莫芦单抗(/> Eli Lilly)，一种抗VEGFR-2抗体，和ziv-阿柏西普，也称为VEGF Trap(/>Regeneron/Sanofi)。VEGFR抑制剂，如瑞戈非尼(Bayer)；凡德他尼(/>AstraZ eneca)；阿西替尼(Pfizer)；和乐伐替尼(/>Ei sai)；Raf抑制剂，如索拉非尼(Bayer AG和Onyx)；达拉非尼(/>Novartis)；和维莫非尼(Gen entech/Roche)；MEK抑制剂，如考比替尼(/>Exelexis/Genentech/Roche)；曲美替尼(/>Novartis)；Bcr-Abl酪胺酸激酶抑制剂，如伊马替尼(/>Novartis)；尼洛替尼(/> Novartis)；达沙替尼(BristolMyersSquibb)；博舒替尼(/>Pfizer)；和帕纳替尼(Ariad Pharma ceuticals)；Her2和EGFR抑制剂，如吉非替尼(/>AstraZene ca)；厄洛替尼(/>Genentech/Roche/Astellas)；拉帕替尼(/> Novartis)；阿法替尼(/>Boehringer Ingelheim)；奥希替尼(靶向激活的EGFR，/>AstraZeneca)；和布加替尼(/>AriadPharmaceuticals)；c-Met和VEGFR2抑制剂，如卡博替尼(/>Exelexis)；和多重激酶抑制剂，如舒尼替尼(/>Pfizer)；帕唑帕尼(/>Novartis)；ALK抑制剂，如克唑替尼(/>Pfizer)；色瑞替尼(/>Novartis)；和艾乐替尼(/>Genentech/Roche)；布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂，如依鲁替尼(Pharmacyclics/Janssen)；和Flt3受体抑制剂，如米哚妥林(Novartis)。
正在开发中并且可用于本发明的其它激酶抑制剂和VEGF-R拮抗剂包括替沃扎尼(Aveo Pharmaecuticals)；瓦他拉尼(Bayer/Novartis)；德立替尼(lucitanib)(ClovisOncology)；多韦替尼(TKI258，Novartis)；西奥罗尼(Chiauanib)(ChipscreenBiosciences)；CEP-11981(Cephalon)；立尼法尼(linifanib)(Abbott Laboratories)；来那替尼(HKI-272，Puma Biotechnology)；拉多替尼(radotinib)(IY5511，Il-Yang Pharmaceuticals，S.Korea)；鲁索替尼(/>Incyte Corporation)；PTC299(PTC Therapeutics)；CP-547,632(Pfizer)；弗雷替尼(foretinib)(Exelexis，GlaxoSmithKline)；奎扎替尼(Daiichi Sankyo)和莫替沙尼(motesanib)(Amgen/Takeda)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是mTOR抑制剂，其抑制细胞增殖、血管生成和葡萄糖摄取。在一些实施方案中，mTOR抑制剂是依维莫司(Novartis)；替西罗莫司(/>Pfizer)；和西罗莫司(/>Pfizer)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是蛋白酶体抑制剂。可用于本发明的经批准的蛋白酶体抑制剂包括硼替佐米(Takeda)；卡非佐米(Amgen)；和伊沙佐米(/>Takeda)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是生长因子拮抗剂，如血小板源性生长因子(PDGF)或表皮生长因子(EGF)或其受体(EGFR)的拮抗剂。可用于本发明的经批准的PDGF拮抗剂包括奥拉单抗(Eli Lilly)。可用于本发明的经批准的EGFR拮抗剂包括西妥昔单抗(/>Eli Lilly)；耐昔妥珠单抗(/>EliLilly)、帕尼单抗(/>Amgen)；和奥希替尼(靶向激活的EGFR，/>AstraZeneca)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是芳香酶抑制剂。在一些实施方案中，芳香酶抑制剂选自依西美坦(Pfizer)；阿那曲唑(/>AstraZeneca)和来曲唑(/>Novartis)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是刺猬途径的拮抗剂。可用于本发明的经批准的刺猬途径抑制剂包括索尼得吉(Sun Pharmaceuticals)；和维莫德吉(/>Genentech)，两者均用于治疗基底细胞癌。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是叶酸抑制剂。可用于本发明的经批准的叶酸抑制剂包括培美曲塞(Eli Lilly)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是CC趋化因子受体4(CCR4)抑制剂。正在研究的可用于本发明的CCR4抑制剂包括莫格利珠单抗(Kyowa HakkoKirin，Japan)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是异柠檬酸脱氢酶(IDH)抑制剂。正在研究的可用于本发明的IDH抑制剂包括AG120(Celgene；NCT02677922)；AG221(Celgene，NCT02677922；NCT02577406)；BAY1436032(Bayer，NCT02746081)；IDH305(Novartis，NCT02987010)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是精氨酸酶抑制剂。正在研究的可用于本发明的精氨酸酶抑制剂包括：AEB1102(聚乙二醇化重组精氨酸酶，AegleaBiotherapeutics)，正在针对急性髓性白血病和骨髓增生异常综合征(NCT02732184)及实体肿瘤(NCT02561234)对其进行1期临床试验研究；和CB-1158(Calithera Biosciences)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是谷氨酰胺酶抑制剂。正在研究的可用于本发明的谷氨酰胺酶抑制剂包括CB-839(Calithera Biosciences)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是与肿瘤抗原结合的抗体，即在肿瘤细胞的细胞表面上表达的蛋白质。可用于本发明的经批准的与肿瘤抗原结合的抗体包括利妥昔单抗(Genent ech/BiogenIdec)；奥法木单抗(抗CD20，/>GlaxoSmithKl ine)；奥比妥珠单抗(抗CD20，/>Genentech)、替伊莫单抗(抗CD20和钇-90，/>Spectrum Pharmaceuticals)；达雷木单抗(抗CD38，Janssen Biotech)、达妥昔单抗(抗糖脂GD2，/>UnitedTherapeutics)；曲妥珠单抗(抗HER2，/>Genentech)；恩美曲妥珠单抗(ado-trastuzumab emtan sine)(抗HER2，与美坦新融合，/>Genentech)；和帕妥珠单抗(抗HER2，/>Genentech)；以及本妥昔单抗维多汀(抗CD30-药物缀合物，/>Seattle Genetics)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是拓扑异构酶抑制剂。可用于本发明的经批准的拓扑异构酶抑制剂包括伊立替康(MerrimackPharmaceuticals)；拓扑替康(/>GlaxoSmithKline)。正在研究的可用于本发明的拓扑异构酶抑制剂包括匹克生琼(/>CTI Biopharma)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是抗凋亡蛋白如BCL-2的抑制剂。可用于本发明的经批准的抗凋亡药物包括维奈托克(AbbVie/Genentech)；和博纳吐单抗(/>Amgen)。已经过临床测试并且可用于本发明的靶向凋亡蛋白的其它治疗剂包括纳维托克(navitoclax)(ABT-263,Abbott)，其是一种BCL-2抑制剂(NCT02079740)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是雄激素受体抑制剂。可用于本发明的经批准的雄激素受体抑制剂包括恩杂鲁胺(Astellas/Medivation)；经批准的雄激素合成的抑制剂包括阿比特龙(/>Centocor/Ortho)；经批准的促性腺素释放激素(GnRH)受体的拮抗剂(地加瑞克，/>FerringPharmaceuticals)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是选择性雌激素受体调节剂(SERM)，其干扰雌激素的合成或活性。可用于本发明的经批准的SERM包括雷洛昔芬(Eli Lilly)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是骨再吸收的抑制剂。一种经批准的抑制骨再吸收的治疗药物是狄诺塞麦(Amgen)，这是一种与RANKL结合的抗体，阻止与其受体RANK的结合，RANK见于破骨细胞、它们的前体和破骨细胞样巨细胞的表面上，其介导具有骨质转移的实体肿瘤中的骨病理学。其它经批准的抑制骨再吸收的治疗药物包括双膦酸盐，如唑来膦酸(/>Novartis)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是两种主要的p53抑制蛋白MDMX与MDM2之间相互作用的抑制剂。正在研究的可用于本发明的p53抑制蛋白的抑制剂包括ALRN-6924(Aileron)，这是一种均等地与MDMX和MDM2结合并破坏MDMX和MDM2与p53的相互作用的订书肽。目前在临床试验中正在评估ALRN-6924用于治疗AML、晚期骨髓增生异常综合征(MDS)和外周T细胞淋巴瘤(PTCL)(NCT02909972；NCT02264613)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是转化生长因子-beta(TGF-beta或TGF-β)的抑制剂。正在研究的可用于本发明的TGF-β蛋白的抑制剂包括NIS793(Novartis)，这是一种抗TGF-β抗体，正在临床测试用于治疗各种癌症，包括乳腺癌、肺癌、肝细胞癌、结直肠癌、胰腺癌、前列腺癌和肾癌(NCT 02947165)。在一些实施方案中，TGF-β蛋白的抑制剂是非苏木单抗(GC1008；Sanofi-Genzyme)，其正被研究用于黑素瘤(NCT00923169)；肾细胞癌(NCT00356460)；和非小细胞肺癌(NCT02581787)。另外，在一些实施方案中，另外的治疗剂是如Connolly等人，(2012)Int’l J.Biological Sciences 8:964-978中所述的TGF-β捕集剂。目前临床试验用于治疗实体肿瘤的一种治疗化合物是M7824(Merck KgaA-以前的MSB0011459X)，其是一种双特异性抗PD-L1/TGF-β捕集化合物(NCT02699515)；和(NCT02517398)。M7824由与充当TGF-β“捕集剂”的人TGF-β受体II的细胞外结构域融合的针对PD-L1的完全人IgG1抗体组成。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂选自格巴妥木单抗维多汀-单甲基奥瑞他汀E(MMAE)(Celldex)，其是与细胞毒性MMAE连接的抗糖蛋白NMB(gpNMB)抗体(CR011)。gpNMB是由与癌细胞转移的能力相关的多种肿瘤类型过表达的蛋白质。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是抗增殖化合物。这类抗增殖化合物包括但不限于芳香酶抑制剂；抗雌激素；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；微管活性化合物；烷基化化合物；组蛋白脱乙酰酶抑制剂；诱导细胞分化过程的化合物；环氧合酶抑制剂；MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗肿瘤抗代谢物；铂类化合物；靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性的化合物和进一步的抗血管生成化合物；靶向蛋白质或脂质磷酸酶、降低或抑制其活性的化合物；戈那瑞林激动剂；抗雄激素；甲硫氨酸氨肽酶抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；双膦酸盐；生物反应调节剂；抗增殖抗体；类肝素酶抑制剂；Ras致癌同种型的抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；用于治疗血液恶性肿瘤的化合物；靶向Flt-3、降低或抑制其活性的化合物；Hsp90抑制剂，如17-AAG(17-烯丙基氨基格尔德霉素，NSC330507)、17-DMAG(17-二甲基氨基乙基氨基-17-去甲氧基-格尔德霉素，NSC707545)、IPI-504、CNF1010、CNF2024、来自Conforma Therapeutics的CNF1010；替莫唑胺纺锤体驱动蛋白抑制剂，如来自GlaxoSmithKline的SB715992或SB743921或来自CombinatoRx的喷他脒/氯丙嗪；MEK抑制剂，如来自Array BioPharma的ARRY142886、来自AstraZeneca的AZd6244、来自Pfizer的PD181461和亚叶酸。
如本文所用的术语“芳香酶抑制剂”涉及抑制雌激素产生的化合物，例如抑制底物雄烯二酮和睾酮分别转化为雌酮和雌二醇。该术语包括但不限于类固醇，特别是阿他美坦、依西美坦和福美坦，特别是非类固醇，特别是氨鲁米特、洛太米特(roglethimide)、吡鲁米特(pyridoglutethimide)、曲洛司坦、睾内酯、酮康唑(ketokonazole)、伏罗唑、法屈唑、阿那曲唑和来曲唑。依西美坦以商品名AROMASINTM销售。福美坦以商品名LENTARONTM销售。法屈唑以商品名AFEMATM销售。阿那曲唑以商品名ARIMIDEXTM销售。来曲唑以商品名FEMARATM或FEMArTM销售。氨鲁米特以商品名ORIMETENTM销售。包含作为芳香酶抑制剂的化学治疗剂的本发明的组合特别可用于治疗激素受体阳性肿瘤，如乳腺肿瘤。
如本文所用的术语“抗雌激素”涉及在雌激素受体水平上拮抗雌激素的作用的化合物。该术语包括但不限于他莫昔芬、氟维司群、雷洛昔芬和盐酸雷洛昔芬。他莫昔芬以商品名NOLVADEXTM销售。盐酸雷洛昔芬以商品名EVISTATM销售。氟维司群可以商品名FASLODEXTM施用。氟维司群可以商品名FaslodexTM施用。包含作为抗雌激素的化学治疗剂的本发明的组合特别可用于治疗雌激素受体阳性肿瘤，如乳腺肿瘤。
如本文所用的术语“抗雄激素”涉及能够抑制雄激素的生物作用的任何物质，包括但不限于比卡鲁胺(CASODEXTM)。如本文所用的术语“戈那瑞林激动剂”包括但不限于阿巴瑞克、戈舍瑞林和乙酸戈舍瑞林。戈舍瑞林可以商品名ZOLADEXTM施用。
如本文所用的术语“拓扑异构酶I抑制剂”包括但不限于拓扑替康、吉马替康、伊立替康、喜树碱及其类似物、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱缀合物PNU-166148。伊立替康可例如以其销售的形式施用，例如以商标CAMPTOSARTM销售。拓扑替康以商品名HYCAMPTINTM销售。
如本文所用的术语“拓扑异构酶II抑制剂”包括但不限于蒽环类药物，如多柔比星(包括脂质体制剂，如CAELYXTM)、道诺霉素、表柔比星、伊达比星和奈莫柔比星；蒽醌类药物米托蒽醌和洛索蒽醌；以及鬼臼毒素类药物依托泊苷和替尼泊苷。依托泊苷以商品名ETOPOPHOSTM销售。替尼泊苷以商品名VM 26-Bristol销售。多柔比星以商品名ACRIBLASTINTM或ADRIAMYCINTM销售。表柔比星以商品名FARMORUBICINTM销售。伊达比星以商品名ZAVEDOSTM销售。米托蒽醌以商品名NOVANTRONTM销售。
术语“微管活性剂”涉及微管稳定化合物、微管去稳定化合物和微管蛋白聚合抑制剂，包括但不限于紫杉烷类，如紫杉醇和多西他赛；长春花生物碱，如长春碱或硫酸长春碱、长春新碱或硫酸长春新碱以及长春瑞滨；圆皮海绵内酯；秋水仙素和埃博霉素及其衍生物。紫杉醇以商品名TAXOLTM销售。多西他赛以商品名TAXOTERETM销售。硫酸长春碱以商品名VINBLASTIN R.PTM销售。硫酸长春新碱以商品名FARMISTINTM销售。
如本文所用的术语“烷化剂”包括但不限于环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑或亚硝基脲(BCNU或Gliadel)。环磷酰胺以商品名CYCLOSTINTM销售。异环磷酰胺以商品名HOLOXANTM销售。
术语“组蛋白脱乙酰酶抑制剂”或“HDAC抑制剂”涉及抑制组蛋白脱乙酰酶并具有抗增殖活性的化合物。这包括但不限于辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。
术语“抗肿瘤抗代谢物”包括但不限于5-氟尿嘧啶或5-FU、卡培他滨、吉西他滨、DNA去甲基化化合物如5-氮杂胞苷和地西他滨、甲氨蝶呤和依达曲沙，以及叶酸拮抗剂如培美曲塞。卡培他滨以商品名XELODATM销售。吉西他滨以商品名GEMZARTM销售。
如本文所用的术语“铂类化合物”包括但不限于卡铂、顺铂(cis-platin/cisplatinum)和奥沙利铂。卡铂可例如以其销售的形式施用，例如以商标CARBOPLATTM销售。奥沙利铂可例如以其销售的形式施用，例如以商标ELOXATINTM销售。
如本文所用的术语“靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性；或蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物；或进一步的抗血管生成化合物”包括但不限于蛋白酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，如a)靶向血小板源性生长因子受体(PDGFR)、降低或抑制其活性的化合物，如靶向PDGFR、降低或抑制其活性的化合物，特别是抑制PDGF受体的化合物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼、SU101、SU6668和GFB-111；b)靶向成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、降低或抑制其活性的化合物；c)靶向胰岛素样生长因子受体I(IGF-IR)、降低或抑制其活性的化合物，如靶向IGF-IR、降低或抑制其活性的化合物，特别是抑制IGF-I受体的激酶活性的化合物，或靶向IGF-I受体或其生长因子的细胞外结构域的抗体；d)靶向Trk受体酪氨酸激酶家族、降低或抑制其活性的化合物，或肝配蛋白B4抑制剂；e)靶向AxI受体酪氨酸激酶家族、降低或抑制其活性的化合物；f)靶向Ret受体酪氨酸激酶、降低或抑制其活性的化合物；g)靶向Kit/SCFR受体酪氨酸激酶、降低或抑制其活性的化合物，如伊马替尼；h)靶向作为PDGFR家族的一部分的C-kit受体酪氨酸激酶、降低或抑制其活性的化合物，如靶向c-Kit受体酪氨酸激酶家族、降低或抑制其活性的化合物，特别是抑制c-Kit受体的化合物，如伊马替尼；i)靶向c-Abl家族的成员、其基因融合产物(例如，BCR-Abl激酶)和突变体、降低或抑制其活性的化合物，如靶向c-Abl家族成员及其基因融合产物、降低或抑制其活性的化合物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼或尼洛替尼(AMN107)；PD180970；AG957；NSC 680410；来自ParkeDavis的PD173955；或达沙替尼(BMS-354825)；j)靶向蛋白激酶C(PKC)和丝氨酸/苏氨酸激酶的Raf家族的成员、MEK、SRC、JAK/泛JAK、FAK、PDK1、PKB/Akt、Ras/MAPK、PI3K、SYK、TYK2、BTK和TEC家族的成员和/或细胞周期蛋白依赖性激酶家族(CDK)的成员、降低或抑制其活性的化合物，包括星形孢菌素衍生物，如米哚妥林；进一步的化合物的实例包括UCN-01、沙芬戈、BAY 43-9006、苔藓抑素1、哌立福新；伊莫福新；RO 318220和RO 320432；GO 6976；lsis 3521；LY333531/LY379196；异喹啉化合物；FTI；PD184352或QAN697(P13K抑制剂)或AT7519(CDK抑制剂)；k)靶向蛋白-酪氨酸激酶抑制剂、降低或抑制其活性的化合物，如靶向蛋白-酪氨酸激酶抑制剂、降低或抑制其活性的化合物包括甲磺酸伊马替尼(GLEEVECTM)或酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostin)，如酪氨酸磷酸化抑制剂A23/RG-50810；AG 99；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 213；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 1748；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 490；酪氨酸磷酸化抑制剂B44；酪氨酸磷酸化抑制剂B44(+)对映异构体；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 555；AG 494；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 556、AG957和阿达斯汀(4-{[(2,5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷基酯；NSC 680410，阿达斯汀)；l)靶向受体酪氨酸激酶的表皮生长因子家族(作为同二聚体或异二聚体的EGFR1ErbB2、ErbB3、ErbB4)及其突变体、降低或抑制其活性的化合物，如靶向表皮生长因子受体家族、降低或抑制其活性的化合物特别有抑制EGF受体酪氨酸激酶家族的成员如EGF受体ErbB2、ErbB3和ErbB4或与EGF或EGF相关配体结合的化合物、蛋白质或抗体、CP 358774、ZD1839、ZM 105180；曲妥珠单抗(HERCEPTINTM)、西妥昔单抗(ERBITUXTM)、易瑞沙、特罗凯、OSI-774、Cl-1033、EKB-569、GW-2016、E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3或E7.6.3，和7H-吡咯并-[2,3-d]嘧啶衍生物；m)靶向c-Met受体、降低或抑制其活性的化合物，如靶向c-Met、降低或抑制其活性的化合物，特别是抑制c-Met受体的激酶活性的化合物，或靶向c-Met的细胞外结构域或与HGF结合的抗体；n)靶向一个或多个JAK家族成员(JAK1/JAK2/JAK3/TYK2和/或泛JAK)、降低或抑制其激酶活性的化合物，包括但不限于PRT-062070、SB-1578、巴瑞替尼、帕克替尼、莫罗替尼、VX-509、AZD-1480、TG-101348、托法替尼和鲁索替尼；o)靶向PI3激酶(PI3K)、降低或抑制其激酶活性的化合物，包括但不限于ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕昔布(buparlisib)、皮特里昔布(pictrelisib)、PF-4691502、BYL-719、达妥昔布(dactolisib)、XL-147、XL-765和艾代拉里斯(idelalisib)；和；和q)靶向刺猬蛋白(Hh)或平滑受体(SMO)途径、降低或抑制其信号传导效应的化合物，包括但不限于环巴胺、维莫德吉、伊曲康唑、伊莫德吉(erismodegib)和IPI-926(萨瑞德吉)。
如本文所用的术语“PI3K抑制剂”包括但不限于针对磷脂酰肌醇-3-激酶家族中的一种或多种酶具有抑制活性的化合物，所述酶包括但不限于PI3Kα、PI3Kγ、PI3Kδ、PI3Kβ、PI3K-C2α、PI3K-C2β、PI3K-C2γ、Vps34、p110-α、p110-β、p110-γ、p110-δ、p85-α、p85-β、p55-γ、p150、p101和p87。可用于本发明的PI3K抑制剂的实例包括但不限于ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕昔布、皮特里昔布、PF-4691502、BYL-719、达妥昔布、XL-147、XL-765和艾代拉里斯。
如本文所用的术语“Bcl-2抑制剂”包括但不限于针对B细胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)具有抑制活性的化合物，包括但不限于ABT-199、ABT-731、ABT-737、阿朴棉子酚、Ascenta的泛Bcl-2抑制剂、姜黄素(及其类似物)、双重Bcl-2/Bcl-xL抑制剂(InfinityPharmaceuticals/Nov artis Pharmaceuticals)、Genasense(G3139)、HA14-1(及其类似物；WO2008118802)、纳维托克(及其类似物，参见US7390799)、NH-1(ShenayngPharmaceutical University)、奥巴克拉(及其类似物，参见WO2004106328)、S-001(GloriaPharmaceuticals)、TW系列化合物(Uni v.of Michigan)和维奈托克。在一些实施方案中，Bcl-2抑制剂是小分子治疗药物。在一些实施方案中，Bcl-2抑制剂是模拟肽。
如本文所用的术语“BTK抑制剂”包括但不限于针对布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)具有抑制活性的化合物，包括但不限于AVL-292和依鲁替尼。
如本文所用的术语“SYK抑制剂”包括但不限于针对脾酪氨酸激酶(SYK)具有抑制活性的化合物，包括但不限于PRT-062070、R-343、R-333、艾塞莱尔(Excellair)、PRT-062607和福他替尼(fostamatinib)。
BTK抑制化合物和可由这类化合物与本发明的化合物组合治疗的疾患的进一步的实例可见于WO2008039218和WO2011090760中，上述专利文献的全部内容以引用的方式并入本文。
SYK抑制化合物和可由这类化合物与本发明的化合物组合治疗的疾患的进一步的实例可见于WO2003063794、WO2005007623和WO2006078846中，上述专利文献的全部内容以引用的方式并入本文。
PI3K抑制化合物和可由这类化合物与本发明的化合物组合治疗的疾患的进一步的实例可见于WO2004019973、WO2004089925、WO2007016176、US8138347、WO2002088112、WO2007084786、WO2007129161、WO2006122806、WO2005113554和WO2007044729中，上述专利文献的全部内容以引用的方式并入本文。
JAK抑制化合物和可由这类化合物与本发明的化合物组合治疗的疾患的进一步的实例可见于WO2009114512、WO2008109943、WO2007053452、WO2000142246和WO2007070514中，上述专利文献的全部内容以引用的方式并入本文。
进一步的抗血管生成化合物包括具有另一种活性机制的化合物，例如与蛋白质或脂质激酶抑制无关，例如沙利度胺(THALOMIDTM)和TNP-470。
可用于与本发明的化合物组合使用的蛋白酶体抑制剂的实例包括但不限于硼替佐米、双硫仑、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)、盐孢菌胺A、卡非佐米、ONX-0912、CEP-18770和MLN9708。
靶向蛋白质或脂质磷酸酶、降低或抑制其活性的化合物有例如磷酸酶1、磷酸酶2A或CDC25的抑制剂，如奥卡达酸(okadaic acid)或其衍生物。
诱导细胞分化过程的化合物包括但不限于视黄酸、α-γ-或δ-生育酚或α-γ-或δ-生育三烯酚。
如本文所用的术语环氧合酶抑制剂包括但不限于Cox-2抑制剂、5-烷基取代的2-芳基氨基苯乙酸和衍生物，如塞来昔布(
CELEBREXTM)、罗非昔布(VIOXXTM)、依托昔布、伐地昔布或5-烷基-2-芳基氨基苯乙酸，如5-甲基-2-(2'-氯-6'-氟苯胺基)苯乙酸，即罗美昔布。
如本文所用的术语“双膦酸盐”包括但不限于依曲膦酸、氯膦酸、替鲁膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑来膦酸。依曲膦酸以商品名DIDRONELTM销售。氯膦酸以商品名BONEFOSTM销售。替鲁膦酸以商品名SkelidTM销售。帕米膦酸以商品名AREDIATM销售。阿仑膦酸以商品名FOSAMAXTM销售。伊班膦酸以商品名BONDRANATTM销售。利塞膦酸以商品名ACTONELTM销售。唑来膦酸以商品名ZOMETATM销售。术语“mTOR抑制剂”涉及抑制哺乳动物的雷帕霉素靶标(mTOR)并具有抗增殖活性的化合物，如西罗莫司依维莫司(CERTICANTM)、CCI-779和ABT578。
如本文所用的术语“类肝素酶抑制剂”是指靶向硫酸肝素、减少或抑制其降解的化合物。该术语包括但不限于PI-88。如本文所用的术语“生物反应调节剂”是指淋巴因子或干扰素。
如本文所用的术语“Ras致癌同种型的抑制剂”如H-Ras、K-Ras或N-Ras是指靶向Ras、降低或抑制其致癌活性的化合物；例如“法尼基转移酶抑制剂”，如L-744832、DK8G557或R115777(ZARNESTRATM)。如本文所用的术语“端粒酶抑制剂”是指靶向端粒酶、降低或抑制其活性的化合物。靶向端粒酶、降低或抑制其活性的化合物特别是抑制端粒酶受体的化合物，如端粒他汀。
如本文所用的术语“甲硫氨酸氨肽酶抑制剂”是指靶向甲硫氨酸氨肽酶、降低或抑制其活性的化合物。靶向甲硫氨酸氨肽酶、降低或抑制其活性的化合物包括但不限于苯胍麦(bengamide)或其衍生物。
如本文所用的术语“蛋白酶体抑制剂”是指靶向蛋白酶体、降低或抑制其活性的化合物。靶向蛋白酶体、降低或抑制其活性的化合物包括但不限于硼替佐米(VELCADETM)和MLN341。
如本文所用的术语“基质金属蛋白酶抑制剂”或(“MMP”抑制剂)包括但不限于胶原模拟肽和非模拟肽抑制剂、四环素衍生物，例如异羟肟酸模拟肽抑制剂巴马司他及其口服生物可利用的类似物马立马司他(BB-2516)、普马司他(AG3340)、美他司他(NSC 683551)、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MMI270B或AAJ996。
如本文所用的术语“用于治疗血液恶性肿瘤的化合物”包括但不限于FMS样酪氨酸激酶抑制剂，其是靶向FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)、降低或抑制其活性的化合物；干扰素、1-β-D-阿糖呋喃胞嘧啶(ara-c)和白消安；以及ALK抑制剂，其是靶向、减少或抑制间变性淋巴瘤激酶的化合物。
靶向FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)、降低或抑制其活性的化合物特别有抑制Flt-3R受体激酶家族的成员的化合物、蛋白质或抗体，如PKC412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、SU11248和MLN518。
如本文所用的术语“HSP90抑制剂”包括但不限于靶向HSP90、降低或抑制其固有ATP酶活性；经由泛素蛋白酶体途径降解、靶向、减少或抑制HSP90客户蛋白的化合物。靶向HSP90、降低或抑制其固有ATP酶活性的化合物特别有抑制HSP90的ATP酶活性的化合物、蛋白质或抗体，如17-烯丙基氨基、17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)，这是一种格尔德霉素衍生物；其它格尔德霉素相关化合物；根赤壳菌素和HDAC抑制剂。
如本文所用的术语“抗增殖抗体”包括但不限于曲妥珠单抗(HERCEPTINTM)、曲妥珠单抗-DM1、爱必妥、贝伐单抗(AVASTINTM)、利妥昔单抗PRO64553(抗CD40)和2C4抗体。所谓抗体意指完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少2个完整抗体形成的多特异性抗体和抗体片段，只要它们表现出所需的生物活性即可。
对于急性髓性白血病(AML)的治疗，可以将本发明的化合物与标准白血病疗法组合使用，特别是与用于治疗AML的疗法组合使用。特别地，本发明的化合物可以与例如法尼基转移酶抑制剂和/或可用于治疗AML的其它药物如道诺霉素、阿霉素、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡铂和PKC412组合施用。
其它抗白血病化合物包括例如嘧啶类似物Ara-C，其是脱氧胞苷的2'-α-羟基核糖(阿拉伯糖苷)衍生物。还包括嘌呤类似物次黄嘌呤、6-巯基嘌呤(6-MP)和磷酸氟达拉滨。靶向组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂如丁酸钠和辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)、降低或抑制其活性的化合物抑制被称为组蛋白脱乙酰酶的酶的活性。具体的HDAC抑制剂包括MS275、SAHA、FK228(以前的FR901228)、曲古抑菌素A和US 6,552,065中公开的化合物，包括但不限于N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐和N-羟基-3-[4-[(2-羟乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐，特别是乳酸盐。如本文所用的生长抑素受体拮抗剂是指靶向、处理或抑制生长抑素受体的化合物，如奥曲肽和SOM230。肿瘤细胞破坏方法是指诸如电离辐射的方法。上文和下文中所提到的术语“电离辐射”意指以电磁射线(如X射线和γ射线)或粒子(如α和β粒子)形式出现的电离辐射。电离辐射提供于但不限于放射疗法中，并且是本领域中已知的。参见Hellman，Principles of Radiation Therapy,Cancer,in Principles and Practice of Oncology，Devita等人编著，第4版,第1卷,第248-275页(1993)。
还包括EDG结合剂和核糖核苷酸还原酶抑制剂。如本文所用的术语“EDG结合剂”是指调节淋巴细胞再循环的一类免疫抑制剂，如FTY720。术语“核糖核苷酸还原酶抑制剂”是指嘧啶或嘌呤核苷类似物，包括但不限于氟达拉滨和/或阿糖胞苷(ara-C)、6-硫鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉屈滨、6-巯基嘌呤(特别是针对ALL与ara-C组合)和/或喷司他丁。核糖核苷酸还原酶抑制剂特别有羟基脲或2-羟基-1H-异吲哚-1,3-二酮衍生物。
还特别包括VEGF的那些化合物、蛋白质或单克隆抗体，如1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其药学上可接受的盐、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪琥珀酸盐；ANGIOSTATINTM；ENDOSTATINTM；邻氨基苯甲酸酰胺；ZD4190；Zd6474；SU5416；SU6668；贝伐单抗；或抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体，如rhuMAb和RHUFab，VEGF适体如Macugon；FLT-4抑制剂、FLT-3抑制剂、VEGFR-2IgGI抗体、Angiozyme(RPI 4610)和贝伐单抗(AVASTINTM)。
如本文所用的光动力疗法是指使用被称为光敏化合物的某些化学物质来治疗或预防癌症的疗法。光动力疗法的实例包括用诸如VISUDYNETM和卟吩姆钠的化合物治疗。
如本文所用的血管生成抑制性类固醇是指阻断或抑制血管生成的化合物，举例如阿奈可他、去炎松、氢化可的松、11-α-表氢皮质醇、皮甾酮、17α-羟孕酮、皮质酮、去氧皮质酮、睾酮、雌酮和地塞米松。
含有皮质类固醇的植入物是指诸如氟轻松(fluocinolone)和地塞米松的化合物。
其它化学治疗化合物包括但不限于植物生物碱、激素化合物和拮抗剂；生物反应调节剂，优选淋巴因子或干扰素；反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物；shRNA或siRNA；或杂化合物或具有其它或未知作用机制的化合物。
由代码号、通用或商品名标识的活性化合物的结构可取自标准概要“默克索引”的现行版或取自数据库，例如Patents International(例如，IMS World Publications)。
示例性免疫肿瘤学药剂
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是免疫肿瘤学药剂。如本文所用，术语“免疫肿瘤学药剂”是指有效增强、刺激和/或上调受试者的免疫反应的药剂。在一些实施方案中，与本发明的化合物一起施用免疫肿瘤学药剂在治疗癌症方面具有协同作用。
免疫肿瘤学药剂可以是例如小分子药物、抗体或生物制剂或小分子。生物学免疫肿瘤学药剂的实例包括但不限于癌症疫苗、抗体和细胞因子。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，单克隆抗体是人源化的或人的。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是(i)刺激(包括共刺激)受体的激动剂或(ii)T细胞上的抑制(包括共抑制)信号的拮抗剂，两者均导致放大抗原特异性T细胞反应。
某些刺激性和抑制性分子是免疫球蛋白超家族(IgSF)的成员。与共刺激或共抑制受体结合的膜结合配体的一个重要家族是B7家族，其包括B7-1、B7-2、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)和B7-H6。与共刺激或共抑制受体结合的膜结合配体的另一家族是与同源TNF受体家族成员结合的TNF家族的分子，其包括CD40和CD40L、OX-40、OX-40L、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDAR、EDA1、XEDAR、EDA2、TNFR1、淋巴毒素α/TNFβ、TNFR2、TNFα、LTβR、淋巴毒素α1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY、NGFR。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是抑制T细胞激活的细胞因子(例如，IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF及其它免疫抑制细胞因子)或刺激T细胞激活以刺激免疫反应的细胞因子。
在一些实施方案中，本发明的化合物和免疫肿瘤学药剂的组合可刺激T细胞反应。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是：(i)抑制T细胞激活的蛋白质的拮抗剂(例如，免疫检查点抑制剂)，如CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG-3、TIM-3、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳糖凝集素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1和TIM-4；或(ii)刺激T细胞激活的蛋白质的激动剂，如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27、CD40、DR3和CD28H。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是NK细胞上的抑制性受体的拮抗剂或NK细胞上的激活受体的激动剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是KIR的拮抗剂，如利瑞鲁单抗。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是抑制或消耗巨噬细胞或单核细胞的药剂，包括但不限于CSF-1R拮抗剂，如CSF-1R拮抗性抗体，包括RG7155(WO11/70024、WO11/107553、WO11/131407、WO13/87699、WO13/119716、WO13/132044)或FPA-008(WO11/140249；WO13169264；WO14/036357)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自连接正共刺激受体的激动剂、通过抑制性受体减弱信号传导的阻断剂、拮抗剂和一种或多种全身性增加抗肿瘤T细胞频率的药剂、克服肿瘤微环境内的不同免疫抑制途径(例如，阻断抑制性受体接合(例如，PD-L1/PD-1相互作用)、消耗或抑制Treg(例如，使用抗CD25单克隆抗体(例如，达利珠单抗)或通过离体抗CD25珠消耗)、抑制代谢酶如IDO或逆转/防止T细胞能量或耗尽的药剂)；和在肿瘤部位触发先天免疫激活和/或炎症的药剂。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CTLA-4拮抗剂。在一些实施方案中，CTLA-4拮抗剂是拮抗性CTLA-4抗体。在一些实施方案中，拮抗性CTLA-4抗体是YERVOY(伊匹单抗)或曲美木单抗。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是PD-1拮抗剂。在一些实施方案中，PD-1拮抗剂通过输注施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是与程序性死亡-1(PD-1)受体特异性结合并抑制PD-1活性的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，PD-1拮抗剂是拮抗性PD-1抗体。在一些实施方案中，拮抗性PD-1抗体是OPDIVO(纳武单抗)、KEYTRUDA(派姆单抗)或MEDI-0680(AMP-514；WO2012/145493)。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂可以是匹地利珠单抗(CT-011)。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是由PD-L2的细胞外结构域(B7-DC)与IgG1的Fc部分融合组成的重组蛋白，称为AMP-224。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是PD-L1拮抗剂。在一些实施方案中，PD-L1拮抗剂是拮抗性PD-L1抗体。在一些实施方案中，PD-L1抗体是MPDL3280A(RG7446；WO2010/077634)、德瓦鲁单抗(MEDI4736)、BMS-936559(WO2007/005874)和MSB0010718C(WO2013/79174)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是LAG-3拮抗剂。在一些实施方案中，LAG-3拮抗剂是拮抗性LAG-3抗体。在一些实施方案中，LAG3抗体是BMS-986016(WO10/19570、WO14/08218)或IMP-731或IMP-321(WO08/132601、WO009/44273)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CD137(4-1BB)激动剂。在一些实施方案中，CD137(4-1BB)激动剂是激动性CD137抗体。在一些实施方案中，CD137抗体是乌瑞芦单抗或PF-05082566(WO12/32433)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是GITR激动剂。在一些实施方案中，GITR激动剂是激动性GITR抗体。在一些实施方案中，GITR抗体是BMS-986153、BMS-986156、TRX-518(WO006/105021、WO009/009116)或MK-4166(WO11/028683)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是吲哚胺(2,3)-双氧合酶(ID O)拮抗剂。在一些实施方案中，IDO拮抗剂选自艾卡哚司他(INCB024360，Incyte)；因多莫得(NLG-8189，NewLink Genetics Corporation)；卡马替尼(INC280，Novartis)；GDC-0919(Genentech/Roche)；PF-06840003(Pfizer)；BMS:F001287(Bristol-Myers Squibb)；Phy906/KD108(Phytoceutica)；分解犬尿氨酸的酶(Kynase，Ikena Oncology，以前的KynTherapeutics)；和NLG-919(WO09/73620、WO009/1156652、WO11/56652、WO12/142237)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是OX40激动剂。在一些实施方案中，OX40激动剂是激动性OX40抗体。在一些实施方案中，OX40抗体是MEDI-6383或MEDI-6469。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是OX40L拮抗剂。在一些实施方案中，OX40L拮抗剂是拮抗性OX40抗体。在一些实施方案中，OX40L拮抗剂是RG-7888(WO06/029879)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CD40激动剂。在一些实施方案中，CD40激动剂是激动性CD40抗体。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CD40拮抗剂。在一些实施方案中，CD40拮抗剂是拮抗性CD40抗体。在一些实施方案中，CD40抗体是卢卡木单抗或达西组单抗。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CD27激动剂。在一些实施方案中，CD27激动剂是激动性CD27抗体。在一些实施方案中，CD27抗体是伐立鲁单抗。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是MGA271(对于B7H3)(WO11/109400)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是阿巴伏单抗、阿德木单抗、阿夫妥珠单抗、阿仑单抗、马安那莫单抗、阿泊珠单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、博纳吐单抗、BMS-936559、卡妥索单抗、德瓦鲁单抗、艾卡哚司他、依帕珠单抗、因多莫得、奥英妥珠单抗、英妥木单抗、伊匹单抗、伊莎妥昔单抗、拉立珠单抗(lambrolizumab)、MED14736、MPDL3280A、纳武单抗、奥比妥珠单抗、奥卡妥珠单抗、奥法木单抗、奥拉他单抗(olatatumab)、帕博利珠单抗、匹地利珠单抗、利妥昔单抗、替西木单、沙马组单抗或曲美木单抗。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是免疫刺激剂。例如，阻断PD-1和PD-L1抑制轴的抗体可释放激活的肿瘤反应性T细胞，并且已在临床试验中显示出在越来越多的肿瘤组织学中诱导持久的抗肿瘤反应，包括一些在常规上不被认为对免疫疗法敏感的肿瘤类型。参见例如Okazaki,T.等人，(2013)Nat.Immunol.14,1212–1218；Zou等人，(2016)Sci.Transl.Med.8。抗PD-1抗体纳武单抗(Bristol-Myers Squibb，也称为ONO-4538、MDX1106和BMS-936558)已显示出改善在先前的抗血管生成疗法期间或之后经历疾病进展的RCC患者的总存活期的潜力。
在一些实施方案中，免疫调节治疗药物特异性诱导肿瘤细胞的凋亡。可用于本发明的经批准的免疫调节治疗药物包括泊马度胺(Celgene)；来那度胺(Celgene)；巨大戟醇甲基丁烯酸酯(/>LEO Pharma)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是癌症疫苗。在一些实施方案中，癌症疫苗选自西普鲁塞-T(Dendreon/Valeant Pharmaceuticals)，其已被批准用于治疗无症状或症状轻微的转移性去势抵抗性(激素难治性)前列腺癌；和talimogenelaherparepvec(/>BioVex/Amgen，以前的T-VEC)，是被批准用于治疗黑素瘤中不可切除的皮肤、皮下和结节病变的经基因修饰的溶瘤病毒疗法。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自溶瘤病毒疗法，如pexastimogene devacirepvec(PexaVec/JX-594，SillaJen/以前的Jennerex Biotherapeutics)、针对肝细胞癌(NCT02562755)和黑素瘤(NCT00429312)被工程化以表达GM-CSF的胸苷激酶-(TK-)缺陷型痘苗病毒；派拉瑞普(pelareorep)(/>Oncolytics Biotech)，一种呼吸道肠道孤儿病毒(呼肠孤病毒)的变体，其在许多癌症中不会在非RAS激活的细胞中复制，包括结直肠癌(NCT01622543)；前列腺癌(NCT01619813)；头颈部鳞状细胞癌(NCT01166542)；胰腺腺癌(NCT00998322)；和非小细胞肺癌(NSCLC)(NCT 00861627)；恩那希瑞(enadenotucirev)(NG-348，PsiOxus，以前的ColoAd1)，一种被工程化以在卵巢癌(NCT02028117)；转移性或晚期上皮肿瘤如结直肠癌、膀胱癌、头颈部鳞状细胞癌和唾液腺癌(NCT02636036)中表达全长CD80和对T细胞受体CD3蛋白特异性的抗体片段的腺病毒；ONCOS-102(Targovax/以前的Oncos)，一种被工程化以在黑素瘤(NCT03003676)；和腹膜疾病、结直肠癌或卵巢癌(NCT02963831)中表达GM-CSF的腺病毒；GL-ONC1(GLV-1h68/GLV-1h153，Genelux GmbH)，分别在腹膜癌病(NCT01443260)；输卵管癌、卵巢癌(NCT 02759588)中研究的被工程化以表达β-半乳糖苷酶(β-gal)/β-葡萄糖醛酸酶或β-gal/人碘化钠同向转运蛋白(hNIS)的痘苗病毒；或CG0070(Cold Genesys)，一种被工程化以在膀胱癌(NCT02365818)中表达GM-CSF的腺病毒。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自JX-929(SillaJen/以前的JennerexBiotherapeutics)，一种被工程化以表达胞嘧啶脱氨酶的TK-和痘苗生长因子缺陷型痘苗病毒，其能够将前药5-氟胞嘧啶转化为细胞毒性药物5-氟尿嘧啶；TG01和TG02(Targovax/以前的Oncos)，靶向难以治疗的RAS突变的基于肽的免疫治疗剂；和TILT-123(TI LTBiotherapeutics)，一种工程化的腺病毒，命名为：Ad5/3-E2F-δ24-hTNFα-IRES-hIL20；以及VSV-GP(ViraTherapeutics)，一种被工程化以表达淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)的糖蛋白(GP)的水泡性口炎病毒(VSV)，其可以被进一步工程化以表达设计成产生抗原特异性CD8+T细胞反应的抗原。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是被工程化以表达嵌合抗原受体或CAR的T细胞。被工程化以表达这种嵌合抗原受体的T细胞被称为CAR-T细胞。
已构建的CAR由可来源于天然配体的结合结构域、来源于对细胞表面抗原具有特异性的单克隆抗体的单链可变片段(scFv)组成，与能够在T淋巴细胞中产生激活信号的作为T细胞受体(TCR)的功能端的胞内结构域(如来自TCR的CD3-ζ信号传导结构域)融合。在抗原结合后，这类CAR与效应细胞中的内源性信号传导途径连接，并产生类似于由TCR复合物启动的激活信号。
例如，在一些实施方案中，CAR-T细胞是美国专利8,906,682(June等人；特此以引用的方式全文并入)中所描述的细胞中的一种，该专利文献公开了被工程化以包含具有抗原结合结构域的细胞外结构域(如与CD19结合的结构域)的CAR-T细胞，与T细胞抗原受体复合物ζ链(如CD3ζ)的细胞内信号传导结构域融合。当在T细胞中表达时，CAR能够基于抗原结合特异性重新引导抗原识别。在CD19的情况下，抗原在恶性B细胞上表达。目前在广泛的适应症范围内正在进展的有超过200项临床试验使用CAR-T。[https://clinicaltrials.gov/ct2/results？term＝chimeric+antigen+receptors&pg＝1]。
在一些实施方案中，免疫刺激剂是视黄酸受体相关孤儿受体γ(RORγt)的激活剂。RORγt是在CD4+(Th17)和CD8+(Tc17)T细胞的17型效应子亚型的分化和维持以及表达IL-17的先天免疫细胞亚群如NK细胞的分化中具有关键作用的转录因子。在一些实施方案中，RORγt的激活剂是LYC-55716(Lycera)，目前正在对治疗实体肿瘤(NCT02929862)的临床试验中对其进行评价。
在一些实施方案中，免疫刺激剂是toll样受体(TLR)的激动剂或激活剂。TLR的合适激活剂包括TLR9的激动剂或激活剂，如SD-101(Dynavax)。SD-101是免疫刺激性CpG，正在针对B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤及其它淋巴瘤(NCT02254772)对其进行研究。可用于本发明的TLR8的激动剂或激活剂包括正在针对头颈部鳞状细胞癌(NCT02124850)和卵巢癌(NCT02431559)对其进行研究的莫托莫特(motolimod)(VTX-2337,VentiRxPharmaceuticals)。
可用于本发明的其它免疫肿瘤学药剂包括乌瑞芦单抗(BMS-663513，Bristol-Myers Squibb)，一种抗CD137单克隆抗体；伐立鲁单抗(CDX-1127，CelldexTherapeutics)，一种抗CD27单克隆抗体；BMS-986178(Bristol-Myers Squibb)，一种抗OX40单克隆抗体；利瑞鲁单抗(IPH2102/BMS-986015,Innate Pharma,Bristol-MyersSquibb)，一种抗KIR单克隆抗体；莫那利珠单抗(IPH2201，Innate Pharma，AstraZeneca)，一种抗NKG2A单克隆抗体；安德利昔单抗(GS-5745，Gilead Sciences)，一种抗MMP9抗体；MK-4166(Merck&Co.)，一种抗GITR单克隆抗体。
在一些实施方案中，免疫刺激剂选自埃罗妥珠单抗、米伐木肽、toll样受体的激动剂或激活剂和RORγt的激活剂。
在一些实施方案中，免疫刺激治疗药物是重组人白介素15(rhIL-15)。rhIL-15已经在临床上作为黑素瘤和肾细胞癌(NCT01021059和NCT01369888)及白血病(NCT02689453)的疗法进行了测试。在一些实施方案中，免疫刺激剂是重组人白介素12(rhIL-12)。在一些实施方案中，基于IL-15的免疫治疗药物是异二聚IL-15(hetIL-15，Novartis/Admune)，其是由内源性IL-15的合成形式与可溶性IL-15结合蛋白IL-15受体α链复合组成的融合复合物(IL15:sIL-15RA)，已在黑素瘤、肾细胞癌、非小细胞肺癌和头颈部鳞状细胞癌(NCT02452268)的1期临床试验中进行了测试。在一些实施方案中，重组人白介素12(rhIL-12)是NM-IL-12(Neumedicines,Inc.)、NCT02544724或NCT02542124。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自Jerry L.Adams等人，“Bigopportunities for small molecules in immuno-oncology”，Cancer Therapy 2015，第14卷,第603-622页中所述的那些，该文献的内容以全文引用的方式并入本文。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自Jerry L.Adams等人的表1中描述的实例。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是靶向选自Jerry L.Adams等人的表2中所列的那些的免疫肿瘤学靶标的小分子。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是选自Jerry L.Adams等人的表2中所列的那些的小分子药剂。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自Peter L.Toogood，“Small moleculeimmuno-oncology therapeutic agents”，Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters2018，第28卷，第319-329页中所述的小分子免疫肿瘤学药剂，该文献的内容以全文引用的方式并入本文。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是靶向如Peter L.Toogood描述的途径的药剂。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自Sandra L.Ross等人，“Bispecific Tcell engagerantibody constructs can mediate bystander tumor cellkilling”，PLoS ONE 12(8):e0183390中描述的那些，该文献的内容以全文引用的方式并入本文。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是双特异性T细胞接合子/>抗体构建体。在一些实施方案中，双特异性T细胞接合子/>抗体构建体是CD19/CD3双特异性抗体构建体。在一些实施方案中，双特异性T细胞接合子/>抗体构建体是EGFR/CD3双特异性抗体构建体。在一些实施方案中，双特异性T细胞接合子/>抗体构建体激活T细胞。在一些实施方案中，双特异性T细胞接合子/>抗体构建体激活T细胞，T细胞释放诱导旁观者细胞上的细胞间粘附分子1(ICAM-1)和FAS上调的细胞因子。在一些实施方案中，双特异性T细胞接合子/>抗体构建体激活T细胞，这导致诱导的旁观者细胞溶解。在一些实施方案中，旁观者细胞在实体肿瘤中。在一些实施方案中，被溶解的旁观者细胞靠近/>激活的T细胞。在一些实施方案中，旁观者细胞包括肿瘤相关抗原(TAA)阴性癌细胞。在一些实施方案中，旁观者细胞包括EGFR阴性癌细胞。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是阻断PD-L1/PD1轴和/或CTLA4的抗体。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是离体扩增的肿瘤浸润T细胞。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是将T细胞与肿瘤相关表面抗原(TAA)直接连接的双特异性抗体构建体或嵌合抗原受体(CAR)。
示例性免疫检查点抑制剂
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是如本文所述的免疫检查点抑制剂。
如本文所用的术语“检查点抑制剂”涉及可用于防止癌细胞躲避患者的免疫系统的药剂。抗肿瘤免疫颠覆的主要机制之一被称为“T细胞耗竭”，其是由于长期暴露于已导致抑制性受体上调的抗原所致。这些抑制性受体充当免疫检查点，以便防止不受控制的免疫反应。
PD-1和共抑制受体如细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)、B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA；CD272)、T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域3(Tim-3)、淋巴细胞激活基因-3(Lag-3；CD223)等等经常被称为检查点调控剂。它们充当分子“守门员”，其允许细胞外信息决定细胞周期进程及其它细胞内信号传导过程是否应继续进行。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-1的抗体。PD-1与程序性细胞死亡1受体(PD-1)结合，以阻止该受体与抑制性配体PDL-1结合，从而压制肿瘤抑制宿主抗肿瘤免疫反应的能力。
一方面，检查点抑制剂是生物学治疗药物或小分子。另一方面，检查点抑制剂是单克隆抗体、人源化抗体、完全人抗体、融合蛋白或其组合。在进一步的方面中，检查点抑制剂抑制选自CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配体或其组合的检查点蛋白。在另外的方面中，检查点抑制剂与选自CTLA-4、PDL1、PDL2、PDl、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配体或其组合的检查点蛋白的配体相互作用。一方面，检查点抑制剂是免疫刺激剂、T细胞生长因子、白介素、抗体、疫苗或其组合。在进一步的方面中，白介素是IL-7或IL-15。在具体方面，白介素是糖基化IL-7。在另外的方面中，疫苗是树突细胞(DC)疫苗。
检查点抑制剂包括以统计学显著的方式阻断或抑制免疫系统的抑制途径的任何药剂。这类抑制剂可包括小分子抑制剂，或者可包括结合并阻断或抑制免疫检查点受体的抗体或其抗原结合片段或结合并阻断或抑制免疫检查点受体配体的抗体。可以被靶向用于阻断或抑制的例示性检查点分子包括但不限于CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、LAG3、TIM3、VISTA、KIR、2B4(属于CD2家族的分子，并且在所有NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也称为BY55)、CGEN-15049、CHK 1和CHK2激酶、A2aR和各种B-7家族配体。B7家族配体包括但不限于B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7。检查点抑制剂包括结合CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD 160和CGEN-15049中的一者或多者并阻断或抑制其活性的抗体或其抗原结合片段、其它结合蛋白、生物学治疗药物或小分子。例示性免疫检查点抑制剂包括但不限于曲美木单抗(CTLA-4阻断抗体)、抗OX40、PD-Ll单克隆抗体(抗B7-Hl；MEDI4736)、MK-3475(PD-1阻断剂)、纳武单抗(抗PD1抗体)、CT-011(抗PD1抗体)、BY55单克隆抗体、AMP224(抗PDL1抗体)、BMS-936559(抗PDL1抗体)、MPLDL3280A(抗PDL1抗体)、MSB0010718C(抗PDL1抗体)和伊匹单抗(抗CTLA-4检查点抑制剂)。检查点蛋白质配体包括但不限于PD-L1、PD-L2、B7-H3、B7-H4、CD28、CD86和TIM-3。
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自PD-1拮抗剂、PD-L1拮抗剂和CTLA-4拮抗剂。在一些实施方案中，检查点抑制剂选自由纳武单抗
伊匹单抗/>和帕博利珠单抗/>组成的组。在一些实施方案中，检查点抑制剂选自纳武单抗(抗PD-1抗体，/>Bristol-Myers Squibb)；帕博利珠单抗(抗PD-1抗体，/>Merck)；伊匹单抗(抗CTLA-4抗体，/>Bristol-Myers Squibb)；德瓦鲁单抗(抗PD-L1抗体，AstraZeneca)；和阿特珠单抗(抗PD-L1抗体，/>Genentech)。
在一些实施方案中，检查点抑制剂选自由以下组成的组：拉立珠单抗(MK-3475)、纳武单抗(BMS-936558)、匹地利珠单抗(CT-011)、AMP-224、MDX-1105、MEDI4736、MPDL3280A、BMS-936559、伊匹单抗、利瑞鲁单抗、IPH2101、帕博利珠单抗和曲美木单抗。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是REGN2810(Regeneron)，一种在患有基底细胞癌(NCT03132636)、NSCLC(NCT03088540)、皮肤鳞状细胞癌(NCT02760498)、淋巴瘤(NCT02651662)和黑素瘤(NCT03002376)的患者中测试的抗PD-1抗体；匹地利珠单抗(CureTech)，也称为CT-011，一种与PD-1结合的抗体，正在进行弥漫性大B细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤的临床试验；阿维鲁单抗(Pfizer/Merck KGaA)，也称为MSB0010718C)，一种完全人IgG1抗PD-L1抗体，正在进行非小细胞肺癌、默克尔细胞癌、间皮瘤、实体肿瘤、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、头颈癌和胃癌的临床试验；或PDR001(Novartis)，一种与PD-1结合的抑制性抗体，正在进行非小细胞肺癌、黑素瘤、三阴性乳腺癌和晚期或转移性实体肿瘤的临床试验。曲美木单抗(CP-675,206；Astrazeneca)是一种针对CTLA-4的完全人单克隆抗体，已在临床试验中针对多种适应症进行了研究，包括：间皮瘤、结直肠癌、肾癌、乳腺癌、肺癌和非小细胞肺癌、胰管腺癌、胰腺癌、生殖细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、前列腺癌、子宫内膜癌、肝转移癌、肝癌、大B细胞淋巴瘤、卵巢癌、宫颈癌、转移性间变性甲状腺癌、尿道上皮癌、输卵管癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、软组织肉瘤和黑素瘤。AGEN-1884(Agenus)是一种抗CTLA4抗体，正在1期临床试验中针对晚期实体肿瘤(NCT02694822)进行研究。
在一些实施方案中，检查点抑制剂是含有蛋白-3的T细胞免疫球蛋白粘蛋白(TIM-3)的抑制剂。可用于本发明的TIM-3抑制剂包括TSR-022、LY3321367和MBG453。TSR-022(Tesaro)是一种抗TIM-3抗体，其正在针对实体肿瘤(NCT02817633)进行研究。LY3321367(Eli Lilly)是一种抗TIM-3抗体，其正在针对实体肿瘤(NCT03099109)进行研究。MBG453(Novartis)是一种抗TIM-3抗体，其正在针对晚期恶性肿瘤(NCT02608268)进行研究。
在一些实施方案中，检查点抑制剂是具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体或TIGIT(某些T细胞和NK细胞上的免疫受体)的抑制剂。可用于本发明的TIGIT抑制剂包括BMS-986207(Bristol-Myers Squibb)，一种抗TIGIT单克隆抗体(NCT02913313)；OMP-313M32(Oncomed)；和抗TIGIT单克隆抗体(NCT03119428)。
在一些实施方案中，检查点抑制剂是淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)的抑制剂。可用于本发明的LAG-3抑制剂包括BMS-986016和REGN3767及IMP321。BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)是一种抗LAG-3抗体，正在针对成胶质细胞瘤和神经胶质肉瘤(NCT02658981)进行研究。REGN3767(Regeneron)也是一种抗LAG-3抗体，正在针对恶性肿瘤(NCT03005782)进行研究。IMP321(Immutep S.A.)是一种LAG-3-Ig融合蛋白，正在针对黑素瘤(NCT02676869)；腺癌(NCT02614833)；和转移性乳腺癌(NCT00349934)进行研究。
可用于本发明的检查点抑制剂包括OX40激动剂。正在进行临床试验研究的OX40激动剂包括：PF-04518600/PF-8600(Pfizer)，一种用于转移性肾癌(NCT03092856)以及晚期癌症和肿瘤(NCT02554812；NCT05082566)的激动性抗OX40抗体；GSK3174998(Merck)，一种处于1期癌症试验(NCT02528357)的激动性抗OX40抗体；MEDI0562(Medimmune/AstraZeneca)，一种用于晚期实体肿瘤(NCT02318394和NCT02705482)的激动性抗OX40抗体；MEDI6469，一种用于结直肠癌(NCT02559024)、乳腺癌(NCT01862900)、头颈癌(NCT02274155)和转移性前列腺癌(NCT01303705)患者的激动性抗OX40抗体(Medimmune/AstraZeneca)；和BMS-986178(Bristol-Myers Squibb)，一种用于晚期癌症(NCT02737475)的激动性抗OX40抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括CD137(也称为4-1BB)激动剂。正在进行临床试验研究的CD137激动剂包括乌图木单抗(PF-05082566，Pfizer)，一种用于弥漫性大B细胞淋巴瘤(NCT02951156)以及晚期癌症和肿瘤(NCT02554812和NCT05082566)的激动性抗CD137抗体；乌瑞芦单抗(BMS-663513，Bristol-Myers Squibb)，一种用于黑素瘤和皮肤癌(NCT02652455)以及成胶质细胞瘤和神经胶质肉瘤(NCT02658981)的激动性抗CD137抗体；和CTX-471(Compass Therapeutics)，一种用于转移性或局部晚期恶性肿瘤(NCT03881488)的激动性抗CD137抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括CD27激动剂。正在进行临床试验研究的CD27激动剂包括伐立鲁单抗(CDX-1127，Celldex Therapeutics)，一种用于头颈部鳞状细胞癌、卵巢癌、结直肠癌、肾细胞癌和成胶质细胞瘤(NCT02335918)；淋巴瘤(NCT01460134)；以及神经胶质瘤和星形细胞瘤(NCT02924038)的激动性抗CD27抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)激动剂。正在进行临床试验研究的GITR激动剂包括TRX518(Leap Therapeutics)，一种用于恶性黑素瘤及其它恶性实体肿瘤(NCT01239134和NCT02628574)的激动性抗GITR抗体；GWN323(Novartis)，一种用于实体肿瘤和淋巴瘤(NCT02740270)的激动性抗GITR抗体；INCAGN01876(Incyte/Agenus)，一种用于晚期癌症(NCT02697591和NCT03126110)的激动性抗GITR抗体；MK-4166(Merck)，一种用于实体肿瘤(NCT02132754)的激动性抗GITR抗体；和MEDI1873(Medimmune/AstraZeneca)，一种用于晚期实体肿瘤(NCT02583165)的具有人IgG1Fc结构域的激动性六聚GITR-配体分子。
可用于本发明的检查点抑制剂包括诱导型T细胞共刺激剂(ICOS，也称为CD278)激动剂。正在进行临床试验研究的ICOS激动剂包括MEDI-570(Medimmune)，一种用于淋巴瘤(NCT02520791)的激动性抗ICOS抗体；GSK3359609(Merck)，一种处于1期(NCT02723955)的激动性抗ICOS抗体；JTX-2011(Jounce Therapeutics)，一种处于1期(NCT02904226)的激动性抗ICOS抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括杀伤IgG样受体(KIR)抑制剂。正在进行临床试验研究的KIR抑制剂包括利瑞鲁单抗(IPH2102/BMS-986015,Innate Pharma/Bristol-Myers Squibb)，一种用于白血病(NCT01687387、NCT02399917、NCT02481297、NCT02599649)、多发性骨髓瘤(NCT02252263)和淋巴瘤(NCT01592370)的抗KIR抗体；IPH2101(1-7F9,Innate Pharma)，其针对骨髓瘤(NCT01222286和NC T01217203)；和IPH4102(Innate Pharma)，一种用于淋巴瘤(NCT02593045)的与长细胞质尾部(KIR3DL2)的三个结构域结合的抗KIR抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括CD47与信号调控蛋白α(SIRPa)之间的相互作用的CD47抑制剂。正在进行临床试验研究的CD47/SIRPa抑制剂包括ALX-148(AlexoTherapeutics)，一种处于1期(NCT03013218)的与CD47结合并阻止CD47/SIRPa介导的信号传导的(SIRPa)的拮抗性变体；TTI-621(SIRPa-Fc，Trillium Therapeutics)，一种处于1期临床试验(NCT02890368和NCT02663518)的通过连接SIRPa的N-末端CD47结合结构域与人IgG1的Fc结构域产生的可溶性重组融合蛋白，通过结合人CD47起作用，并阻止其向巨噬细胞递送其“不许吞噬(do not eat)”信号；CC-90002(Celgene)，一种用于白血病(NCT02641002)的抗CD47抗体；和Hu5F9-G4(Forty Seven，Inc.)，其针对结直肠肿瘤和实体肿瘤(NCT02953782)、急性髓性白血病(NCT02678338)和淋巴瘤(NCT02953509)。
可用于本发明的检查点抑制剂包括CD73抑制剂。正在进行临床试验研究的CD73抑制剂包括MEDI9447(Medimmune)，一种用于实体肿瘤(NCT02503774)的抗CD73抗体；和BMS-986179(Bristol-Myers Squibb)，一种用于实体肿瘤(NCT02754141)的抗CD73抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括干扰素基因蛋白的刺激剂(STING，也称为跨膜蛋白173或TMEM173)的激动剂。正在进行临床试验研究的STING的激动剂包括MK-1454(Merck)，一种用于淋巴瘤(NCT03010176)的激动性合成环状二核苷酸；和ADU-S100(MIW815，Aduro Biotech/Novartis)，一种处于1期(NCT02675439和NCT03172936)的激动性合成环状二核苷酸。
可用于本发明的检查点抑制剂包括CSF1R抑制剂。正在进行临床试验研究的CSF1R抑制剂包括培西达替尼(PLX3397,Plexxikon)，一种用于结直肠癌、胰腺癌、转移性和晚期癌症(NCT02777710)以及黑素瘤、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、胃肠间质肿瘤(GIST)和卵巢癌(NCT02452424)的CSF1R小分子抑制剂；和IMC-CS4(LY3022855，Lilly)，一种用于胰腺癌(NCT03153410)、黑素瘤(NCT03101254)和实体肿瘤(NCT02718911)的抗CSF-1R抗体；以及BLZ945(4-[2((1R,2R)-2-羟基环己基氨基)-苯并噻唑-6-基氧基]-吡啶-2-甲酸甲基酰胺，Novartis)，一种用于晚期实体肿瘤(NCT02829723)的可口服的CSF1R的抑制剂。
可用于本发明的检查点抑制剂包括NKG2A受体抑制剂。正在进行临床试验研究的NKG2A受体抑制剂包括莫那利珠单抗(IPH2201,Innate Pharma)，一种用于头颈部肿瘤(NCT02643550)和慢性淋巴细胞性白血病(NCT02557516)的抗NKG2A抗体
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自纳武单抗、帕博利珠单抗、伊匹单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、阿特珠单抗或匹地利珠单抗。
范例
以下实施例旨在说明本发明，而不应被解释为对其进行限制。除另有说明外，可以原位制备和/或分离下文描述的实施例的化合物的一种或多种互变异构形式。下文描述的实施例的化合物的所有互变异构形式都应被认为是公开的。温度以摄氏度给出。如果没有另外提及，所有蒸发都在减压下进行，优选在约15mm Hg与100mm Hg之间(＝20-133毫巴)。最终产物、中间体和起始材料的结构通过标准分析方法确认，所述标准分析方法例如微量分析和光谱特征，例如MS、IR、NMR。使用本领域中常规的缩写。
用于合成本发明的化合物的所有起始材料、结构单元、试剂、酸、碱、脱水剂、溶剂和催化剂均为市售的，或者可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备。进一步地，可以通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法制备本发明的化合物，如以下实施例中所示。
实施例1：示例性化合物的合成
按照以下方案制备某些示例性化合物。
I-1
步骤1：[3-(三氟甲基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]甲醇
在0℃下向LiAlH4(84.28mg，2.22mmol，2当量)在THF(5mL)中的溶液中添加3-(三氟甲基)双环[1.1.1]戊烷-1-甲酸(200mg，1.11mmol，1当量)，并在25℃下搅拌2h。TLC(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.60)指示起始材料被完全消耗，并且形成一个新的斑点。将混合物通过10％的NaOH水溶液(0.5mL)淬灭，过滤沉淀的固体并浓缩滤液，得到[3-(三氟甲基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]甲醇(180mg，975.08μmol，87.8％收率，90％纯度)，为无色油状物，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 3.67(s,2H),1.92(s,6H)。
步骤2：甲磺酸[3-(三氟甲基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]甲酯
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在0℃下向[3-(三氟甲基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]甲醇(180mg，975.08μmol，90％纯度,1当量)和Et3N(197.33mg，1.95mmol，271.44μL，2当量)在DCM(3mL)中的溶液中滴加MsCl(170mg，1.48mmol，114.86μL，1.52当量)，并将混合物在25℃下搅拌2h。TLC(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.67)指示起始材料被完全消耗，并且形成一个新的斑点。将混合物用饱和NaHCO3水溶液(10mL)淬灭，并用DCM(15mL x2)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到甲磺酸[3-(三氟甲基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]甲酯(230mg，894.65μmol，91.8％收率，95.0％纯度)，为无色胶状物，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 4.25(s,2H),3.02(s,3H),2.02(s,6H)。
步骤3：N-[(1S,5R)-3-[[3-(三氟甲基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基]丙-2-烯酰胺
向N-[(1S,5R)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基]丙-2-烯酰胺(120mg，360.61μmol，80％纯度，1当量，TFA)和甲磺酸[3-(三氟甲基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]甲酯(92.71mg，360.61μmol，95％纯度，1当量)在ACN(3mL)中的溶液中添加K2CO3(149.52mg，1.08mmol，3当量)和KI(5.99mg，36.06μmol，0.1当量)。将混合物在60℃下搅拌16h。移除溶剂，得到残留物，将其通过制备型HPLC(柱：Welch Xtimate C18150*25mm*5um；流动相：[水(10mMNH4HCO3)-ACN]；B％：48％-78％，10min)纯化，接着冻干，得到N-[(1S,5R)-3-[[3-(三氟甲基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基]丙-2-烯酰胺(18.28mg，60.87μmol，16.9％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1HNMR(500MHz,CDCl3)δppm 6.26(d,J＝16.9Hz,1H),6.01(dd,J＝10.4,16.9Hz,1H),5.61(d,J＝10.2Hz,1H),5.54(br s,1H),3.17(d,J＝8.9Hz,2H),3.02(d,J＝2.0Hz,1H),2.51(s,2H),2.37(d,J＝8.4Hz,2H),1.86(s,6H),1.61(s,2H)；ES-LCMS m/z 301.2[M+H]+。
I-8
步骤1：[4-(三氟甲基)-1-双环[2.2.2]辛烷基]甲醇
在25℃下向4-(三氟甲基)双环[2.2.2]辛烷-1-甲酸(300mg，1.35mmol，1当量)在THF(5mL)中的溶液中添加LiAlH4(102.49mg，2.70mmol，2当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。TLC(PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.59)指示起始材料被完全消耗，并且形成一个新的斑点。将混合物通过10％的NaOH水溶液(0.5mL)淬灭，过滤沉淀的固体并浓缩滤液，得到[4-(三氟甲基)-1-双环[2.2.2]辛烷基]甲醇(280mg，1.28mmol，94.6％收率，95.0％纯度)，为无色胶状物，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 3.30(s,2H),1.76-1.65(m,6H),1.51-1.41(m,6H)。
步骤2：4-(三氟甲基)双环[2.2.2]辛烷-1-甲醛
向[4-(三氟甲基)-1-双环[2.2.2]辛烷基]甲醇(50mg，228.12μmol，95％纯度，1当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加PCC(98.35mg，456.25μmol，2当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。TLC(PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.75)指示起始材料被完全消耗，并且形成一个新的斑点。移除溶剂，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝2/1，TLC：PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.75)纯化，得到4-(三氟甲基)双环[2.2.2]辛烷-1-甲醛(50mg，223.08μmol，97.8％收率，92.0％纯度)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 9.47(s,1H),1.76-1.69(m,12H)。
步骤3：N-[(1R,5S)-3-[[4-(三氟甲基)-1-双环[2.2.2]辛烷基]甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基]丙-2-烯酰胺
向N-[(1S,5R)-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基]丙-2-烯酰胺(120mg，360.61μmol，80％纯度，1当量，TFA)和TEA(36.49mg，360.61μmol，50.19μL，1当量)在MeOH(10mL)中的溶液中添加4-(三氟甲基)双环[2.2.2]辛烷-1-甲醛(47.43mg，211.62μmol，92％纯度)。将混合物在25℃下搅拌2h。添加NaBH3CN(67.98mg，1.08mmol，3当量)，并将混合物在25℃下搅拌16h。移除溶剂，得到残留物，将其通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150*25mm*5um；流动相：[水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：51％-81％，10min)纯化，接着冻干，得到N-[(1R,5S)-3-[[4-(三氟甲基)-1-双环[2.2.2]辛烷基]甲基]-3-氮杂双环[3.1.0]己烷-6-基]丙-2-烯酰胺(24.64mg，71.96μmol，20.0％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 6.31-6.22(m,1H),6.01(dd,J＝10.3,17.1Hz,1H),5.61(dd,J＝1.1,10.1Hz,1H),5.49(br s,1H),3.13(d,J＝8.8Hz,2H),3.02(d,J＝1.7Hz,1H),2.48(d,J＝8.3Hz,2H),2.13(s,2H),1.68-1.59(m,6H),1.49(s,2H),1.43-1.32(m,6H)；ES-LCMS m/z 343.2[M+H]+。
I-9
步骤1：(2-溴-4-硝基苯基)(4-(三氟甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
向2-溴-4-硝基-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]苯胺(1.10g，2.67mmol，91.1％纯度，1当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加(Boc)2O(1.75g，8.00mmol，1.84mL，3当量)和DMAP(325.66mg，2.67mmol，1当量)。将混合物在25℃下搅拌12h。将反应混合物浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至10/1，TLC：PE/EtOAc＝10/1，Rf＝0.51)纯化，得到N-(2-溴-4-硝基-苯基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(1.15g，2.40mmol，89.9％收率，98.7％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.49(br s,1H),8.06(d,J＝7.8Hz,1H),7.57(d,J＝7.4Hz,2H),7.36(d,J＝8.2Hz,2H),5.20(d,J＝14.1Hz,1H),4.39(d,J＝15.7Hz,1H),1.57-1.40(m,9H)；ES-LCMS m/z 375.3[M-Boc+H]+。
步骤2：(4-氨基-2-溴苯基)(4-(三氟甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
向N-(2-溴-4-硝基-苯基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(1.11g，2.31mmol，98.7％，1当量)在EtOH(5mL)和H2O(5mL)中的溶液中添加Fe(646.28mg，11.57mmol，5当量)和NH4Cl(1.24g，23.15mmol，10当量)。将混合物在80℃下搅拌1h。通过添加水(40mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到N-(4-氨基-2-溴-苯基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(1.01g，2.06mmol，89.1％收率，91.0％纯度)，为黄色固体，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.54(d,J＝7.8Hz,2H),7.39(s,2H),6.95-6.88(m,1H),6.58(d,J＝8.6Hz,1H),6.50-6.39(m,1H),5.20(d,J＝14.9Hz,1H),4.27-4.20(m,1H),3.72(s,2H),1.38(s,9H)；ES-LCMS m/z 391.0[M-Boc+H]+。
步骤3：(4-丙烯酰氨基-2-溴苯基)(4-(三氟甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
向N-(4-氨基-2-溴-苯基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(250mg，539.00μmol，96％纯度，1当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加丙烯酰氯(73.18mg，808.49μmol，65.92μL，1.5当量)和DIEA(139.32mg，1.08mmol，187.77μL，2当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。通过添加水(50mL)淬灭反应混合物，并用DCM(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至3/1，TLC：PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.43)纯化，得到N-[2-溴-4-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(243mg，486.66μmol，90.2％收率，100％纯度)，为无色油状物。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.60-7.53(m,2H),7.40-7.29(m,3H),7.26-7.18(m,1H),6.92-6.75(m,1H),6.46(d,J＝16.8Hz,1H),6.21(dd,J＝10.6,16.8Hz,1H),5.84-5.74(m,1H),5.21(d,J＝15.3Hz,1H),4.30(s,1H),4.26(s,1H),4.13(q,J＝7.2Hz,1H),2.06(s,1H),1.63-1.52(m,9H),1.33-1.25(m,2H)；ES-LCMSm/z 521.1[M+H]+。
步骤4：(4-丙烯酰氨基-2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)苯基)(4-(三氟甲基)苄基)氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-溴-4-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，400.54μmol，100％，1当量)和三丁基-(1-甲基咪唑-4-基)锡烷(234.73mg，600.82μmol，95％，1.5当量)在DMF(7mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(29.31mg，40.05μmol，0.1当量)。将混合物在N2气氛和130℃下搅拌1h。通过添加水(50mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至4/5，TLC：PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.20)纯化，得到N-[2-(1-甲基咪唑-4-基)-4-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，199.80μmol，49.8％收率，100.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.86(s,1H),7.55-7.43(m,4H),7.34(d,J＝7.8Hz,3H),6.88(br s,1H),6.73(d,J＝7.0Hz,1H),6.45-6.35(m,1H),6.25-6.14(m,1H),5.76(d,J＝10.6Hz,1H),5.18(d,J＝14.5Hz,1H),4.18-4.07(m,1H),4.11(d,J＝13.7Hz,1H),3.67(s,3H),1.26(s,9H)；ES-LCMS m/z501.2[M+H]+。
步骤5：N-(3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-4-((4-(三氟甲基)苄基)氨基)苯基)丙烯酰胺
向N-[2-(1-甲基咪唑-4-基)-4-(丙-2-烯酰基氨基)苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(100mg，199.80μmol，100％，1当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(3.08g，27.01mmol，2.00mL，135.20当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。通过添加水(30mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShellC18 150*25mm*5μm；流动相：[水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)纯化，接着冻干，得到N-[3-(1-甲基咪唑-4-基)-4-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基氨基]苯基]丙-2-烯酰胺(10.48mg，26.17μmol，13.1％收率，100.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.35(br s,1H),7.92(s,1H),7.57-7.45(m,5H),7.24(br s,1H),7.08-6.94(m,2H),6.47-6.36(m,2H),6.26-6.14(m,1H),5.71(d,J＝11.3Hz,1H),4.53(s,2H),3.74(s,3H)；ES-LCMS m/z 401.2[M+H]+。
I-10和I-11(I-25的异构体)
步骤1：N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-3-乙烯基-苯磺酰胺
向3-溴-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]苯磺酰胺(600mg，1.13mmol，1当量)和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(348.48mg，2.26mmol，383.79μL，2当量)在1,4-二噁烷(10mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加Cs2CO3(737.21mg，2.26mmol，2当量)和Pd(dppf)Cl2(82.78mg，113.13μmol，0.1当量)。将混合物在N2气氛和100℃下搅拌12h。通过添加水(50mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(50mLx3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至2/1，TLC：PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.59)纯化，得到N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-3-乙烯基-苯磺酰胺(500mg，1.04mmol，91.6％收率，98.9％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.53(s,1H),7.98-7.90(m,2H),7.76(dt,J＝2.2,8.9Hz,2H),7.25(d,J＝8.6Hz,2H),6.93-6.82(m,5H),5.83(d,J＝17.6Hz,1H),5.58(d,J＝11.0Hz,1H),4.13(s,2H),3.81(s,3H),2.63(s,3H)；ES-LCMS m/z478.6[M+H]+。
步骤2：N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-3-乙烯基-苯磺酰胺
向N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-3-乙烯基-苯磺酰胺(500mg，1.04mmol，98.9％纯度，1当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(1.52g，13.37mmol，989.70μL，12.90当量)。将混合物在25℃下搅拌2h。通过添加水(50mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至2/1，TLC：PE/EtOAc＝2/1，Rf＝0.49)纯化，得到N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-3-乙烯基-苯磺酰胺(300mg，805.09μmol，77.7％收率，95.9％纯度)，为无色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.50(s,1H),7.97(d,J＝2.0Hz,1H),7.89(d,J＝8.6Hz,1H),7.77(dt,J＝2.1,8.5Hz,2H),6.94(s,1H),6.90-6.80(m,2H),5.83(d,J＝17.4Hz,1H),5.56(d,J＝11.2Hz,1H),4.51(q,J＝5.1Hz,1H),2.72(d,J＝5.4Hz,3H)；ES-LCMS m/z 358.1[M+H]+。
步骤3：3-[(5S)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]苯磺酰胺和3-[(5R)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]苯磺酰胺
向N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-3-乙烯基-苯磺酰胺(270mg，724.58μmol，95.9％，1当量)和二溴甲酮肟(293.94mg，1.45mmol，2当量)在EtOAc(10mL)中的搅拌溶液中添加NaHCO3(608.70mg，7.25mmol，281.80μL，10当量)。将反应混合物在25℃下搅拌2h。通过添加水(50mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型HPLC纯化(柱：Agela DuraShell C18 150*25mm*5μm；流动相：[水(0.05％NH3·H2O+10mMNH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)，接着冻干，得到混合物，将其通过手性SFC柱分离：DAICEL CHIRALPAK IG(250mm*30mm，10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O MEOH]；B％：40％-40％)，得到峰1和峰2。峰1在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(10mL)和H2O(20mL)中并冻干，得到3-[(5S)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]苯磺酰胺(44.51mg，92.87μmol，12.8％收率，100.0％纯度，SFC：Rt＝1.658，ee＝100％，[α]31.4 D＝-44.4(CH3OH，c＝0.054g/100mL))，为黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.51(s,1H),8.19(d,J＝8.6Hz,1H),7.88(dd,J＝2.1,8.7Hz,1H),7.84-7.76(m,2H),7.40(s,1H),6.81(d,J＝8.8Hz,1H),5.81(t,J＝11.1Hz,1H),4.41(s,1H),3.62-3.52(m,1H),3.49-3.38(m,1H),2.71(d,J＝5.4Hz,3H)；ES-LCMS m/z 479.0 481.0[M+H]+。峰2在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(10mL)和H2O(20mL)中并冻干，得到3-[(5R)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]苯磺酰胺(48.81mg，101.84μmol，14.1％收率，100.0％纯度，SFC：Rt＝1.982，ee＝100％，[α]31.4 D＝+40.0(CH3OH，c＝0.050g/100mL))，为黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm8.51(s,1H),8.20(d,J＝8.6Hz,1H),7.89(dd,J＝2.2,8.6Hz,1H),7.83-7.76(m,2H),7.39(s,1H),6.81(d,J＝8.8Hz,1H),5.81(t,J＝11.1Hz,1H),4.35(d,J＝4.9Hz,1H),3.62-3.51(m,1H),3.49-3.39(m,1H),2.71(d,J＝5.4Hz,3H)；ES-LCMS m/z 479.1,481.1[M+H]+。
I-12和I-13(I-26的异构体)
步骤1：5-溴-2-碘-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]苯胺
向5-溴-2-碘-苯胺(2.5g，8.39mmol，1当量)和4-(三氟甲基)苯甲醛(4.38g，25.17mmol，3.37mL，3当量)在MeOH(25mL)中的溶液中添加AcOH(50.39mg，839.16μmol，47.99μL，0.1当量)。将混合物在60℃下搅拌4h。在25℃下添加NaBH3CN(2.64g，41.96mmol，5当量)。将混合物在60℃下搅拌12h。移除溶剂，通过添加水(200mL)淬灭残留物，并用EtOAc(100mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至5/1，TLC：PE/EtOAc＝5/1，Rf＝0.70)纯化，得到5-溴-2-碘-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]苯胺(1.88g，3.67mmol，43.7％收率，89.0％纯度)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.64(d,J＝8.1Hz,2H),7.52(d,J＝8.3Hz,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,2H),6.64-6.58(m,2H),4.72(s,1H),4.47(d,J＝5.6Hz,2H)；ES-LCMS m/z 455.9,457.9[M+H]+。
步骤2：N-(5-溴-2-碘-苯基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯
向5-溴-2-碘-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]苯胺(1.88g，3.67mmol，89％，1当量)在THF(20mL)中的溶液中添加DMAP(448.24mg，3.67mmol，1当量)和Boc2O(2.40g，11.01mmol，2.53mL，3当量)。将混合物在20℃下搅拌12h。移除溶剂，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至10/1，TLC：PE/EtOAc＝10/1，Rf＝0.8)纯化，得到N-(5-溴-2-碘-苯基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(2.23g，粗)，为绿色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.71(d,J＝8.3Hz,1H),7.59(d,J＝7.3Hz,2H),7.38(d,J＝7.8Hz,2H),7.12(d,J＝7.8Hz,1H),6.97(s,1H),5.16(d,J＝15.2Hz,1H),4.27(d,J＝14.9Hz,1H),1.57(s,9H)；ES-LCMS m/z 499.9,421.9[M-t-Bu+H]+。
步骤3：N-[5-溴-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯
将N-(5-溴-2-碘-苯基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(1g，1.73mmol，96.3％纯度，1当量)、三丁基-(1-甲基咪唑-4-基)锡烷(662.53mg，1.73mmol，97％纯度，1当量)和Pd(dppf)Cl2(126.70mg，173.15μmol，0.1当量)在DMF(10mL)中的混合物脱气，用N2吹扫3次，并将混合物在N2气氛和120℃下搅拌4h。通过添加水(100mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至3/1，TLC：PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.40)纯化，得到N-[5-溴-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(530mg，934.66μmol，54.0％收率，90.0％纯度)，为黑褐色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.97(d,J＝7.6Hz,1H),7.55(d,J＝8.1Hz,2H),7.46(s,2H),7.35(d,J＝6.8Hz,2H),6.94(s,1H),6.82(s,1H),5.15(d,J＝14.4Hz,1H),4.18(d,J＝14.9Hz,1H),3.66(s,3H),1.26(s,9H)；ES-LCMS m/z 510.1,512.1[M+H]+。
步骤4：N-[2-(1-甲基咪唑-4-基)-5-乙烯基-苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯
将N-[5-溴-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(530mg，934.66μmol，90％，1当量)、4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(287.90mg，1.87mmol，317.07μL，2当量)、Pd(dppf)Cl2(68.39mg，93.47μmol，0.1当量)、Cs2CO3(761.33mg，2.34mmol，2.5当量)在1,4-二噁烷(4.5mL)和H2O(1.5mL)中的混合物脱气，用N2吹扫3次，并将混合物在N2气氛和100℃下搅拌12h。通过添加水(50mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至3/1，TLC：PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.40)纯化，得到N-[2-(1-甲基咪唑-4-基)-5-乙烯基-苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(219mg，464.34μmol，49.7％收率，97.0％纯度)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.05(d,J＝8.1Hz,1H),7.54(d,J＝7.8Hz,3H),7.47(s,1H),7.38(d,J＝7.3Hz,3H),6.85(s,1H),6.74(s,1H),6.57(dd,J＝10.9,17.5Hz,1H),5.55(d,J＝17.4Hz,1H),5.18(d,J＝10.8Hz,1H),5.22-5.15(m,1H),3.67(s,3H),1.25(s,9H)；ES-LCMS m/z 458.1[M+H]+。
步骤5：N-[2-(1-甲基咪唑-4-基)-5-乙烯基-苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯
向N-[2-(1-甲基咪唑-4-基)-5-乙烯基-苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(169mg，358.33μmol，97％，1当量)和二溴甲酮肟(109.02mg，537.49μmol，1.5当量)在EtOAc(3mL)中的溶液中添加NaHCO3(301.02mg，3.58mmol，10当量)。将混合物在25℃下搅拌4h。通过添加水(50mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到N-[5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(248mg，粗)，为黄色固体，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.10(s,1H),7.64(s,2H),7.60(d,J＝8.3Hz,2H),7.51-7.47(m,1H),6.95-6.82(m,2H),6.68(s,1H),5.54(d,J＝8.8Hz,1H),5.30-5.08(m,2H),3.71(s,3H),3.59-3.45(m,2H),1.54(s,9H)。
步骤6：(S)-5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-N-(4-(三氟甲基)苄基)苯胺和(R)-5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-N-(4-(三氟甲基)苄基)苯胺
向N-[5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯基]-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(248mg，428.02μmol，1当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(184.80mg，1.62mmol，120μL，3.79当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。通过添加水(100mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(60mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝100/1至3/1，TLC：PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.05)纯化，得到化合物，将其通过SFC(柱：DAICELCHIRALPAK AD(250mm*30mm，10μm)；流动相：[0.1％NH3H2O ETOH]；B％：50％-50％)分离，得到峰1和峰2。峰1通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150*25mm*5μm；流动相：[水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：52％-82％，10min)纯化并冻干，得到(S)-5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-N-(4-(三氟甲基)苄基)苯胺(10.44mg，21.35μmol，5.0％收率，98.5％纯度，SFC：Rt＝2.143，ee＝98.2％，[α]32.0 D＝+180.0(MeOH，c＝0.02g/100mL))，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm8.52(s,1H),7.60-7.56(m,2H),7.54-7.50(m,2H),7.47(s,1H),7.39(d,J＝7.8Hz,1H),7.18(s,1H),6.61(d,J＝7.8Hz,1H),6.47(s,1H),5.57-5.47(m,1H),4.55(s,2H),3.77(s,3H),3.50(dd,J＝10.9,17.2Hz,1H),3.07(dd,J＝8.9,17.2Hz,1H)；ES-LCMS m/z 478.8,480.8[M+H]+。峰2通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18150*25mm*5μm；流动相：[水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：51％-81％，10min)纯化并冻干，得到(R)-5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-N-(4-(三氟甲基)苄基)苯胺(9.5mg，18.99μmol，4.4％收率，95.9％纯度，SFC：Rt＝2.482，ee＝98.8％，ee＝98.8％，[α]32.0 D＝-187.5(MeOH，c＝0.016g/100mL))，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.52(s,1H),7.60-7.56(m,2H),7.53-7.50(m,2H),7.47(s,1H),7.39(d,J＝7.8Hz,1H),7.18(d,J＝1.2Hz,1H),6.61(d,J＝7.8Hz,1H),6.47(s,1H),5.52(dd,J＝8.9,10.9Hz,1H),4.55(s,2H),3.77(s,3H),3.50(dd,J＝10.9,17.2Hz,1H),3.07(dd,J＝8.8,17.1Hz,1H)；ES-LCMS m/z 479.0,481.0[M+H]+。
I-14
步骤1：N-(2-溴-4-硝基苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺
在0℃下向5-(三氟甲基)吡啶-2-胺(1.84g，11.36mmol，1当量)在THF(30mL)中的溶液中添加NaH(1.36g，34.09mmol，60％，3当量)。将混合物搅拌30分钟。在0℃下添加2-溴-1-氟-4-硝基-苯(2.5g，11.36mmol，1当量)，并将混合物在25℃搅拌12h。用水(50mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝100/1至10/1，TLC:PE/EtOAc＝5/1，Rf＝0.65)纯化，得到N-(2-溴-4-硝基-苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺(850mg，2.00mmol，17.6％收率，85.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.76(d,J＝9.3Hz,1H),8.63(s,1H),8.52(d,J＝2.4Hz,1H),8.24(dd,J＝2.4,9.3Hz,1H),7.87(dd,J＝2.2,8.8Hz,1H),7.54(s,1H),7.00(d,J＝8.8Hz,1H)；ES-LCMS m/z 363.9[M+H]+。
步骤2：2-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-N1-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)苯-1,4-二胺
在N2气氛下向N-(2-溴-4-硝基-苯基)-5-(三氟甲基)吡啶-2-胺(700mg，1.93mmol，1当量)和三丁基-(1-甲基咪唑-4-基)锡烷(1.58g，3.87mmol，91％，2当量)在DMF(15mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(70.73mg，96.66μmol，0.05当量)。将混合物在N2气氛和130℃下搅拌12h。将反应混合物在水(50mL)与EtOAc(100mL x3)之间分配。将有机相分离，用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过硅胶柱色谱法(从纯PE至PE/EtOAc＝0/1，TLC：PE/EtOAc＝0/1，Rf＝0.34)纯化，得到2-(1-甲基咪唑-4-基)-N1-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]苯-1,4-二胺(300mg，648.04μmol，33.5％收率，72.1％纯度)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 9.41(s,1H),8.40(s,1H),7.72(d,J＝8.6Hz,1H),7.59-7.43(m,2H),7.27(s,1H),7.18-7.01(m,2H),6.74-6.57(m,2H),3.71(s,3H)；ES-LCMS m/z 334.3[M+H]+。
步骤3：N-(3-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)-4-((5-(三氟甲基)吡啶-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺
在N2气氛和0℃下向2-(1-甲基咪唑-4-基)-N1-[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]苯-1,4-二胺(230mg，496.83μmol，72％，1当量)和Et3N(150.82mg，1.49mmol，207.46μL，3当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加丙-2-烯酰氯(58.46mg，645.88μmol，52.66μL，1.3当量)。将混合物在25℃下搅拌2h。将反应混合物在水(30mL)与EtOAc(50mL x3)之间分配。将有机相分离，用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型HPLC(柱：Agela DuraShell C18 150*25mm*5μm；流动相：[水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：38％-68％，10min)纯化，得到N-[3-(1-甲基咪唑-4-基)-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]苯基]丙-2-烯酰胺(85.15mg，215.43μmol，43.4％收率，98.2％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 11.30(s,1H),8.44(s,1H),8.38(d,J＝8.9Hz,1H),8.17(d,J＝2.0Hz,1H),7.74(s,1H),7.60(dd,J＝2.0,8.9Hz,1H),7.47(s,1H),7.18(s,2H),6.82(d,J＝8.7Hz,1H),6.49-6.40(m,1H),6.35-6.24(m,1H),5.75(d,J＝10.4Hz,1H),3.68(s,3H)；ES-LCMS m/z388.2[M+H]+。
I-15和I-16(I-27的异构体)
步骤1：3-[(5S)-3-氯-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]苯磺酰胺
向3-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]苯磺酰胺(900mg，723.35μmol，38.5％纯度，1当量)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中添加HCl水溶液(2mL)。将混合物在40℃下搅拌12h。通过添加饱和NaHCO3(100mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(50mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型HPLC纯化(柱：Agela DuraShell C18 150*25mm*5μm；流动相：[水(0.05％NH3·H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)，接着冻干，得到混合物，将其通过手性SFC(柱：DAICEL CHIRALPAK AS(250mm*30mm,10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O EtOH]；B％：25％-20％)分离，得到峰1和峰2。峰1在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(10mL)和H2O(20mL)中，然后冻干，得到3-[(5S)-3-氯-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-4-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]苯磺酰胺(48.36mg，111.22μmol，15.4％收率，100.0％纯度，SFC：Rt＝1.382，ee＝99.84％，[α]31.4 D＝-46.15(CH3OH，c＝0.052g/100mL))，为白色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.51(s,1H),8.19(d,J＝8.8Hz,1H),7.89(dd,J＝2.1,8.7Hz,1H),7.82-7.77(m,2H),7.42(s,1H),6.82(d,J＝8.8Hz,1H),5.88(t,J＝11.1Hz,1H),4.46-4.33(m,1H),3.56-3.37(m,2H),2.71(d,J＝5.1Hz,3H)；ES-LCMS m/z435.1,437.1[M+H]+。
I-17和I-18(I-28的异构体)
步骤1：5-溴-6-氯-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-吡啶-3-磺酰胺
向5-溴-6-氯-吡啶-3-磺酰氯(1.0g，3.44mmol，1当量)和Et3N(695.58mg，6.87mmol，956.78μL，2当量)在THF(10mL)中的溶液中添加1-(4-甲氧基苯基)-N-甲基-甲胺(571.67mg，3.78mmol，1.1当量)。将混合物在-30℃下搅拌1h。TLC(PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.56)指示起始材料被完全消耗，并且形成一个新的斑点。将混合物倒入水(50mL)中，过滤沉淀的固体并干燥，得到5-溴-6-氯-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-吡啶-3-磺酰胺(1.1g，2.49mmol，72.6％收率，92.0％纯度)，为浅黄色固体，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.71(d,J＝2.1Hz,1H),8.23(d,J＝2.1Hz,1H),7.21(d,J＝8.7Hz,2H),6.90-6.85(m,2H),4.18(s,2H),3.81(s,3H),2.70(s,3H)；ES-LCMS m/z 405.0,407.0[M+H]+。
步骤2：6-氨基-5-溴-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-吡啶-3-磺酰胺
向5-溴-6-氯-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-吡啶-3-磺酰胺(950mg，2.15mmol，92％纯度，1当量)在THF(5mL)中的溶液中添加NH3.H2O(1.48mL，28％纯度，5当量)。将混合物在微波和100℃下搅拌12h。TLC(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.31)指示起始材料被完全消耗，并且形成一个新的斑点。移除溶剂，得到6-氨基-5-溴-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-吡啶-3-磺酰胺(860mg，2.12mmol，98.2％收率，95.0％纯度)，为黄色固体，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 8.33(d,J＝2.0Hz,1H),7.99(d,J＝2.0Hz,1H),7.31(br s,2H),7.23(d,J＝8.4Hz,3H),6.92(d,J＝8.5Hz,2H),3.75(s,3H)。
步骤3：5-溴-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]吡啶-3-磺酰胺
向6-氨基-5-溴-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-吡啶-3-磺酰胺(510mg，1.25mmol，95％纯度，1当量)和1-碘-4-(三氟甲基)苯(409.42mg，1.51mmol，221.31μL，1.2当量)在苯甲醚(20mL)中的溶液中添加Pd(OAc)2(42.24mg，188.15μmol，0.15当量)、xantphos(72.58mg，125.43μmol，0.1当量)和Cs2CO3(613.02mg，1.88mmol，1.5当量)。将混合物在N2气氛和130℃下搅拌16h。移除溶剂，并用EtOAc(30mL)处理残留物。将混合物过滤并浓缩滤液，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至3/1，TLC：PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.57)纯化，得到5-溴-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]吡啶-3-磺酰胺(587mg，1.05mmol，83.8％收率，95.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.61(d,J＝1.8Hz,1H),8.12(d,J＝1.8Hz,1H),7.81(d,J＝8.5Hz,2H),7.64(d,J＝8.4Hz,2H),7.51(s,1H),7.23(d,J＝8.5Hz,2H),6.88(d,J＝8.5Hz,2H),4.14(s,2H),3.81(s,3H),2.65(s,3H)；ES-LCMS m/z 530.0,532.0[M+H]+。
步骤4：N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺
向5-溴-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]吡啶-3-磺酰胺(587mg，1.05mmol，95％纯度，1当量)和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(323.88mg，2.10mmol，356.70μL，2当量)在1,4-二噁烷(18mL)和H2O(3mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(76.94mg，105.15μmol，0.1当量)和Cs2CO3(685.17mg，2.10mmol，2当量)。将混合物在N2气氛和90℃下搅拌16h。移除溶剂，并用EtOAc(20mL)处理残留物。将混合物过滤并浓缩滤液，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至3/1，TLC：PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.49)纯化，得到N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺(350mg，732.99μmol，69.7％收率，100.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.62(d,J＝2.3Hz,1H),7.89(d,J＝2.3Hz,1H),7.75(d,J＝8.5Hz,2H),7.61(d,J＝8.5Hz,2H),7.23(d,J＝8.5Hz,2H),6.87(d,J＝8.5Hz,3H),6.75(dd,J＝11.1,17.3Hz,1H),5.84(d,J＝17.2Hz,1H),5.71(d,J＝11.1Hz,1H),4.13(s,2H),3.80(s,3H),2.63(s,3H)；ES-LCMS m/z 478.2[M+H]+。
步骤5：N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺
向N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺(300mg，628.27μmol，100％纯度，1当量)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(1.5mL)。将混合物在25℃下搅拌16h。TLC(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.58)指示起始材料被完全消耗，并且形成一个新的斑点。将混合物浓缩，得到N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺(330mg，616.07μmol，98.1％收率，88.0％纯度，TFA)，为灰白色固体，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz,CD3OD)δppm 8.50(d,J＝2.3Hz,1H),8.09(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(d,J＝8.5Hz,2H),7.62(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(dd,J＝10.9,17.2Hz,1H),5.91(d,J＝17.1Hz,1H),5.62(d,J＝11.0Hz,1H),2.59(s,3H)。
步骤6：5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]吡啶-3-磺酰胺
向N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺(330mg，616.07μmol，88％纯度，1当量，TFA)和二溴甲酮肟(249.92mg，1.23mmol，2当量)在EtOAc(20mL)中的溶液中添加NaHCO3(517.54mg，6.16mmol，10当量)。将混合物在25℃下搅拌3h。TLC(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.78)指示起始材料被完全消耗，并且形成一个新的斑点。将混合物过滤并浓缩滤液，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至2/1，TLC：PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.78)纯化，得到5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]吡啶-3-磺酰胺(290mg，574.83μmol，93.3％收率，95.0％纯度)，为黄色固体。1HNMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.71(d,J＝2.2Hz,1H),7.85(d,J＝2.0Hz,1H),7.74-7.66(m,2H),7.64-7.57(m,2H),5.77(t,J＝11.2Hz,1H),4.39(q,J＝5.4Hz,1H),4.12(q,J＝7.1Hz,1H),3.56(dd,J＝1.8,11.4Hz,2H),2.71(d,J＝5.4Hz,3H)；ES-LCMS m/z 479.0,481.0[M+H]+。
步骤7：(S)-5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-N-甲基-6-((4-(三氟甲基)苯基)氨基)吡啶-3-磺酰胺
将化合物5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]吡啶-3-磺酰胺(100mg，198.22μmol，95％纯度，1当量)通过手性SFC(柱：DAICEL CHIRALPAKAD(250mm*30mm，10um)；流动相：[0.1％NH3H2O EtOH]；B％：30％-30％)分离，得到峰1和峰2。峰1在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(10mL)和H2O(20mL)中并冻干，得到(S)-5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-N-甲基-6-((4-(三氟甲基)苯基)氨基)吡啶-3-磺酰胺(32.79mg，68.42μmol，34.5％收率，100.0％纯度，SFC：Rt＝1.372，ee＝100％，[α]28.6 D＝-5.00(MeOH，c＝0.08g/100mL)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.71(d,J＝2.1Hz,1H),7.85(d,J＝2.1Hz,1H),7.72-7.65(m,3H),7.64-7.58(m,2H),5.77(t,J＝11.2Hz,1H),4.44(q,J＝5.2Hz,1H),3.62-3.51(m,2H),2.71(d,J＝5.3Hz,3H)；ES-LCMS m/z 478.9,480.9[M+H]+，并将峰2在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(10mL)和H2O(20mL)中并冻干，得到(R)-5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-N-甲基-6-((4-(三氟甲基)苯基)氨基)吡啶-3-磺酰胺(31.64mg，66.02μmol，33.3％收率，100.0％纯度，SFC：Rt＝1.596，ee＝100％，[α]28.8 D＝+6.67(MeOH，c＝0.09g/100mL)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.70(d,J＝2.3Hz,1H),7.86(d,J＝2.1Hz,1H),7.72-7.65(m,3H),7.63-7.59(m,2H),5.77(t,J＝11.1Hz,1H),4.48(q,J＝5.3Hz,1H),3.62-3.51(m,2H),2.70(d,J＝5.3Hz,3H)；ES-LCMSm/z 479.0,481.0[M+H]+。
I-19和I-20(I-29的异构体)
步骤1：4-溴-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯胺
向4-溴-2-碘-苯胺(2g，6.71mmol，1当量)和三丁基-(1-甲基咪唑-4-基)锡烷(2.72g，6.71mmol，91.5％，1当量)在DMF(20mL)中的混合物中添加Pd(dppf)Cl2(491.22mg，671.32μmol，0.1当量)。将混合物在N2气氛和130℃下搅拌12h。将混合物用水(100mL)稀释，并用EtOAc(100mL x3)萃取。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝100/1至0/1，TLC：PE/EtOAc＝0/1，Rf＝0.30)纯化，得到4-溴-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯胺(1g，3.25mmol，48.5％收率，82.0％纯度)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm7.47-7.42(m,2H),7.13-7.06(m,2H),6.58(d,J＝8.6Hz,1H),5.72-5.34(m,2H),3.72(s,3H)；ES-LCMS m/z 252.0,254.0[M+H]+。
步骤2：2-(1-甲基咪唑-4-基)-4-乙烯基-苯胺
向4-溴-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯胺(1g，3.25mmol，82.0％，1当量)和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.00g，6.51mmol，1.10mL，2当量)在1,4-二噁烷(30mL)和H2O(6mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(237.99mg，325.25μmol，0.1当量)和Cs2CO3(3.18g，9.76mmol，3当量)。将混合物在N2气氛和100℃下搅拌2h。将混合物用水(100mL)稀释，并用EtOAc(100mL x3)萃取。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝100/1至0/1，TLC：PE/EtOAc＝0/1，Rf＝0.35)纯化，得到2-(1-甲基咪唑-4-基)-4-乙烯基-苯胺(500mg，2.16mmol，66.4％收率，86.0％纯度)，为棕色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 7.68(s,1H),7.56(d,J＝1.2Hz,1H),7.46(d,J＝2.0Hz,1H),7.06(dd,J＝2.0,8.2Hz,1H),6.62(d,J＝8.2Hz,1H),6.55(dd,J＝11.0,17.6Hz,1H),6.43(s,2H),5.53(dd,J＝1.2,17.6Hz,1H),4.94(dd,J＝1.0,10.8Hz,1H),3.70(s,3H)；ES-LCMS m/z 200.3[M+H]+。
步骤3：4-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯胺
向2-(1-甲基咪唑-4-基)-4-乙烯基-苯胺(500mg，2.16mmol，86.0％，1当量)在EtOAc(10mL)中的溶液中添加NaHCO3(1.81g，21.58mmol，839.35μL，10当量)和二溴甲酮肟(656.59mg，3.24mmol，1.5当量)。将混合物在25℃下搅拌12h。将反应混合物过滤，并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC(PE/EtOAc＝0/1，TLC：PE/EtOAc＝0/1，Rf＝0.20)纯化，得到4-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯胺(150mg，434.35μmol，20.1％收率，93.0％纯度)，为黄色油状物。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.47(s,1H),7.34(d,J＝1.8Hz,1H),7.17(s,1H),7.01-6.99(m,1H),6.71(d,J＝8.2Hz,1H),5.57(t,J＝10.2Hz,2H),3.80-3.71(m,3H),3.51(dd,J＝10.8,17.3Hz,1H),3.23(dd,J＝9.8,17.3Hz,1H),2.98-1.99(m,1H)；ES-LCMS m/z 321.1,323.1[M+H]+。
步骤4：4-[(5S)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-2-(1-甲基咪唑-4-基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]苯胺和4-[(5R)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-2-(1-甲基咪唑-4-基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]苯胺
向4-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-2-(1-甲基咪唑-4-基)苯胺(120mg，347.48μmol，93.0％，1当量)在THF(5mL)中的溶液中添加DIEA(134.73mg，1.04mmol，181.57μL，3当量)和1-(溴甲基)-4-(三氟甲基)苯(166.12mg，694.95μmol，107.17μL，2当量)。将混合物在25℃下搅拌12h。将混合物用水(30mL)稀释，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物，将其通过制备型HPLC(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％NH3·H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：60％-90％，10min)纯化，接着冻干，得到产物。通过SFC分离产物(柱：DAICELCHIRALPAK IG(250mm*50mm，10μm)；流动相：[0.1％NH3·H2O EtOH]；B％：60％-60％)，得到峰1和峰2。峰1在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(20mL)和H2O(40mL)中并冻干，得到4-[(5S)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-2-(1-甲基咪唑-4-基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]苯胺(24.61mg，50.72μmol，14.6％收率，98.8％纯度，SFC：Rt＝2.248，ee＝100％，[α]26.8 D＝+140.000(MeOH，c＝0.180g/100mL))，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm8.52(s,1H),7.57(d,J＝8.1Hz,2H),7.49(d,J＝10.2Hz,3H),7.39(d,J＝2.0Hz,1H),7.23(s,1H),7.00(dd,J＝2.1,8.5Hz,1H),6.49(d,J＝8.4Hz,1H),5.57(t,J＝10.2Hz,1H),4.56(s,2H),3.77(s,3H),3.50(dd,J＝10.7,17.4Hz,1H),3.23(dd,J＝9.8,17.3Hz,1H)；ES-LCMS m/z 478.9,480.9[M+H]+。峰2在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(20mL)和H2O(40mL)中并冻干，得到4-[(5R)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-2-(1-甲基咪唑-4-基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]苯胺(24.58mg，50.61μmol，14.6％收率，98.7％纯度，SFC：Rt＝3.301，ee＝100％，[α]26.8 D＝-198.71(MeOH，c＝0.155g/100mL))，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.54(s,1H),7.58-7.55(m,2H),7.49(d,J＝9.2Hz,3H),7.39(d,J＝2.0Hz,1H),7.23(s,1H),7.00(dd,J＝2.0,8.4Hz,1H),6.49(d,J＝8.5Hz,1H),5.57(t,J＝10.3Hz,1H),4.56(s,2H),3.77(s,3H),3.50(dd,J＝10.8,17.3Hz,1H),3.23(dd,J＝9.8,17.3Hz,1H)；ES-LCMS m/z 478.9,480.9[M+H]+。
I-21和I-22(I-30的异构体)
步骤1：(S)-5-(3-氯-4,5-二氢异噁唑-5-基)-N-甲基-6-((4-(三氟甲基)苯基)氨基)吡啶-3-磺酰胺
向5-(3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基)-N-甲基-6-[4-(三氟甲基)苯胺基]吡啶-3-磺酰胺(185mg，366.70μmol，95％纯度，1当量)在1,4-二噁烷(10mL)中的溶液中添加HCl(4M，0.5mL)。将混合物在40℃下搅拌16h。移除溶剂，并将残留物用水(10mL)处理，用饱和NaHCO3水溶液调节至pH 8，并用EtOAc(20mL x2)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.71)纯化，得到产物，将其通过手性SFC(柱：DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*30mm，10um)；流动相：[0.1％NH3H2O EtOH]；B％：35％-35％)分离，得到峰1和峰2。峰1在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(10mL)和H2O(20mL)中并冻干，得到(S)-5-(3-氯-4,5-二氢异噁唑-5-基)-N-甲基-6-((4-(三氟甲基)苯基)氨基)吡啶-3-磺酰胺(43.65mg，97.09μmol，26.5％收率，96.7％纯度，SFC：Rt＝1.279，ee＝99.4％，[α]24.4 D＝-24.24(MeOH，c＝0.0825g/100mL)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 8.71(d,J＝2.4Hz,1H),7.85(d,J＝2.3Hz,1H),7.70-7.68(m,3H),7.64-7.58(m,2H),5.84(t,J＝11.2Hz,1H),4.41(br s,1H),3.62-3.41(m,2H),2.71(d,J＝5.3Hz,3H)；ES-LCMS m/z435.0[M+H]+。
I-23和I-24(I-31的异构体)
步骤1：5-溴-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]吡啶-3-磺酰胺
向5-(三氟甲基)吡啶-2-胺(91.11mg，562.00μmol，1.5当量)在DMF(3mL)中的溶液中添加NaH(59.94mg，1.50mmol，60％纯度，4当量)，并将混合物在0℃下搅拌0.5h。添加5-溴-6-氯-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-吡啶-3-磺酰胺(160mg，374.67μmol，95％纯度，1当量)，并将混合物在25℃下搅拌3h。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，并用EtOAc(40mLx3)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物。向残留物中添加MeOH(5mL)，并将混合物在25℃下搅拌2h。过滤浆料，并用MeOH(3mL x2)冲洗滤饼。收集固体并真空干燥，得到5-溴-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]吡啶-3-磺酰胺(160mg，301.12μmol，80.8％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 9.21(s,1H),8.72(s,1H),8.68(d,J＝2.2Hz,1H),8.41(d,J＝2.2Hz,1H),8.28-8.19(m,2H),7.24(d,J＝8.6Hz,2H),6.93(d,J＝8.6Hz,2H),4.16(s,2H),3.74(s,3H),2.60(s,3H)；ES-LCMS m/z 533.0[M+H]+。
步骤2：N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺
向5-溴-N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]吡啶-3-磺酰胺(260mg，489.32μmol，100％纯度，1当量)在1,4-二噁烷(6mL)和H2O(1mL)中的溶液中添加4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(301.45mg，1.96mmol，331.99μL，4当量)、Pd(dppf)Cl2(35.80mg，48.93μmol，0.1当量)和Cs2CO3(318.86mg，978.64μmol，2当量)。将混合物在N2气氛和90℃下搅拌12h。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，并用EtOAc(40mL x3)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至5/1，TLC：PE/EtOAc＝5/1，Rf＝0.35)纯化，得到N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺(200mg，409.62μmol，83.7％收率，98.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.69(d,J＝2.3Hz,1H),8.64(d,J＝8.8Hz,1H),8.55(s,1H),8.01-7.91(m,2H),7.79(s,1H),7.24(d,J＝8.8Hz,2H),6.95-6.86(m,2H),6.82(dd,J＝11.0,17.3Hz,1H),5.86(d,J＝17.3Hz,1H),5.74(d,J＝11.0Hz,1H),4.16(s,2H),3.81(s,3H),2.66(s,3H)；ES-LCMS m/z 479.6[M+H]+。
步骤3：N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺
向N-[(4-甲氧基苯基)甲基]-N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺(200mg，409.62μmol，98％纯度，1当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加TFA(1.51g，13.24mmol，980.00μL，32.31当量)。将混合物在25℃下搅拌3h。移除溶剂，得到N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺(140mg，粗)，为黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 8.71(d,J＝2.0Hz,1H),8.52(s,1H),8.37(d,J＝8.8Hz,1H),8.28(s,1H),8.19(d,J＝7.1Hz,1H),6.75(s,1H),6.61(s,1H),5.94(d,J＝16.9Hz,1H),5.78(d,J＝11.0Hz,1H),3.99(s,3H)；ES-LCMS m/z 359.2[M+H]+。
步骤4：5-[(5S)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]吡啶-3-磺酰胺和5-[(5R)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]吡啶-3-磺酰胺
向N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]-5-乙烯基-吡啶-3-磺酰胺(140mg，390.69μmol，1当量)在EtOAc(10mL)中的溶液中添加NaHCO3(328.22mg，3.91mmol，151.95μL，10当量)和二溴甲酮肟(158.49mg，781.38μmol，2当量)。将混合物在25℃下搅拌6h。将混合物过滤并浓缩滤液，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝1/0至1/1，TLC：PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.32)纯化，得到产物，将其通过手性SFC(柱：DAICELCHIRALPAK AD(250mm*30mm，10um)；流动相：[0.1％NH3H2O MeOH]；B％：55％-55％)分离，得到峰1和峰2。峰2在减压下浓缩，得到5-[(5R)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-6-[[5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]吡啶-3-磺酰胺(39.4mg，81.48μmol，20.9％收率，99.3％纯度，SFC：Rt＝4.427，ee＝99.9％，[α]24.5 D＝+39.22(MeOH，c＝0.051g/100mL)，为白色固体。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δppm 9.73(s,1H),8.68-8.55(m,2H),8.14-8.07(m,1H),8.06-7.98(m,2H),7.63(q,J＝4.8Hz,1H),6.19(dd,J＝7.9,11.0Hz,1H),3.92(dd,J＝11.0,17.5Hz,1H),3.43-3.39(m,1H),2.45(d,J＝4.9Hz,3H)；ES-LCMS m/z 480.1[M+H]+。
I-33和I-34(I-32的异构体)
步骤1：3-溴-N-甲基-4-[[4-(三氟甲基)环己基]氨基]苯磺酰胺
向4-(三氟甲基)环己胺(748.24mg，4.48mmol，1.5当量)在DMSO(25mL)中的溶液中添加3-溴-4-氟-N-甲基-苯磺酰胺(800mg，2.98mmol，100.0％纯度，1当量)。将反应混合物在N2气氛和140℃下搅拌3h。将反应混合物用H2O(30mL)稀释，并用EtOAc(60mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝100/1至3/1，TLC：PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.36)纯化，得到粗产物，将其通过制备型HPLC(柱：Boston Green ODS 150*30mm*5μm；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：53％-83％，10min)进一步纯化，得到3-溴-N-甲基-4-[[4-(三氟甲基)环己基]氨基]苯磺酰胺(250mg，571.92μmol，19.2％收率，95.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz,CDCl3)δppm 7.92(d,J＝2.1Hz,1H),7.65(dd,J＝2.1,8.7Hz,1H),6.65(d,J＝8.7Hz,1H),4.68(s,1H),4.20(s,1H),3.38-3.34(m,1H),2.71-2.58(m,3H),2.27(d,J＝11.0Hz,2H),2.15-2.03(m,3H),1.55-1.47(m,2H),1.34-1.25(m,2H)；ES-LCMS m/z 415.2,417.2[M+H]+。
步骤2：N-甲基-4-[[4-(三氟甲基)环己基]氨基]-3-乙烯基-苯磺酰胺
向3-溴-N-甲基-4-[[4-(三氟甲基)环己基]氨基]苯磺酰胺(210mg，441.64μmol，1当量，HCl)和4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(102.03mg，662.45μmol，112.36μL，1.5当量)在1,4-二噁烷(6mL)和H2O(2mL)中的溶液中添加Pd(dppf)Cl2(32.31mg，44.16μmol，0.1当量)和Cs2CO3(359.73mg，1.10mmol，2.5当量)。将混合物在N2气氛和100℃下搅拌2h。将混合物用水(30mL)稀释，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将有机层用盐水(30mLx2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC：PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.60)纯化，得到N-甲基-4-[[4-(三氟甲基)环己基]氨基]-3-乙烯基-苯磺酰胺(160mg，435.75μmol，98.7％收率，98.7％纯度)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.72-7.56(m,2H),6.71-6.54(m,2H),5.67(d,J＝17.4Hz,1H),5.44(d,J＝11.0Hz,1H),4.20-4.14(m,1H),4.12(d,J＝7.1Hz,1H),3.35(m,J＝4.0,7.4,11.2Hz,1H),2.64(d,J＝5.4Hz,3H),2.26(d,J＝12.0Hz,2H),2.08(s,1H),2.04(s,2H),1.54-1.42(m,2H),1.26-1.22(m,2H)；ES-LCMS m/z 363.2[M+H]+。
步骤3：3-[(5S)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-4-[[4-(三氟甲基)环己基]氨基]苯磺酰胺
向N-甲基-4-[[4-(三氟甲基)环己基]氨基]-3-乙烯基-苯磺酰胺(110mg，297.45μmol，1当量)在EtOAc(5mL)中的溶液中添加二溴甲酮肟(90.50mg，446.18μmol，1.5当量)和NaHCO3(249.88mg，2.97mmol，10当量)。将混合物在40℃下搅拌12h。TLC(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.72)显示起始材料被完全消耗，并且检测到一个新的斑点。将混合物用水(50mL)稀释，并用EtOAc(50mL x3)萃取。将有机层用盐水(50mL x2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法(从PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC：PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.60)和通过制备型SFC(柱：DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*30mm，10um)；流动相：[0.1％NH3·H2OETOH]；B％：25％-25％)纯化，得到峰1和峰2。峰1在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(20mL)和H2O(20mL)中并冻干，得到3-[(5S)-3-溴-4,5-二氢异噁唑-5-基]-N-甲基-4-[[4-(三氟甲基)环己基]氨基]苯磺酰胺(60mg，122.40μmol，41.1％收率，98.8％纯度，SFC：Rt＝1.414，ee＝100％，[α]24.4 D＝-23.07(MeOH，c＝0.026g/100mL))，为黄色固体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 7.71(d,J＝8.6Hz,1H),7.55(s,1H),6.75(d,J＝8.8Hz,1H),5.66(t,J＝11.2Hz,1H),4.60(d,J＝7.1Hz,1H),4.22(q,J＝4.9Hz,1H),3.55-3.40(m,2H),3.38-3.29(m,1H),2.66-2.61(m,3H),2.24(s,2H),2.07(d,J＝12.5Hz,3H),1.53-1.44(m,2H),1.29-1.17(m,2H)；ES-LCMS m/z 486.0[M+H]+。
实施例2.TEAD抑制测定
可以使用Hippo途径报告子–MCF7细胞系(BPS Bioscience，目录号：60618)来测定TEAD抑制。
背景
Hippo途径调控细胞增殖和细胞死亡。其被高细胞密度和细胞应激激活，以停止细胞增殖并诱导凋亡。哺乳动物Hippo途径包括MST激酶和LATS激酶。当Hippo途径被激活时，MST激酶将LATS激酶磷酸化，后者将转录共激活因子YAP和TAZ磷酸化。未磷酸化的YAP和TAZ可易位至细胞核，并与TEAD/TEF转录因子相互作用以启动细胞周期促进基因转录。然而，当被磷酸化时，YAP和TAZ被从细胞核募集至胞质溶胶，从而YAP和TAZ依赖性基因转录被关闭。在人类癌症中经常检测到Hippo途径的功能障碍，并且其下调与癌细胞的侵袭特性和不良预后相关。
描述
TEAD报告子–MCF7细胞系含有稳定地整合到人乳腺癌细胞系MCF7中的TEAD应答元件控制下的萤火虫荧光素酶基因。在细胞内部，基础未磷酸化的YAP/TAZ保留在细胞核中，并且诱导荧光素酶报告子的组成型表达。细胞系通过Hippo途径的激活剂验证对荧光素酶报告子的表达的抑制。
应用
●监测Hippo途径活性。
●筛选Hippo途径的激活剂或抑制剂。
格式
每个小瓶在1ml的10％DMSO中含有～1.5X 106个细胞。
储存
接收后立即储存在液氮中。
一般培养条件
解冻培养基1(BPS Bioscience#60187)+10μg/ml胰岛素(Sigma-Aldrich#I0516)：补充有10％FBS(Invitrogen#26140-079)、1％非必需氨基酸(Hyclone#SH30238.01)、1mM丙酮酸钠(Hyclone#SH30239.01)、1％青霉素/链霉素(Hyclone SV30010.01)加上10μg/ml胰岛素(Sigma-Aldrich#I0516)的MEM培养基(Hyclone#SH30024.01)
生长培养基1B(BPS Bioscience#79531)+10μg/ml胰岛素(Sigma-Aldrich#I0516)：解冻培养基1(BPS目录号60187)+10μg/ml胰岛素(Sigma-Aldrich#I0516)和400μg/ml遗传霉素(Invitrogen#11811031)。
细胞应在37℃和5％CO2条件下使用含10μg/ml胰岛素的生长培养基1B生长。可能需要根据基础培养基中的NaHCO3水平来调节温育箱中的CO2百分比。
为了解冻细胞，建议将来自液氮的冷冻细胞在37℃水浴中快速解冻，转移到含有10ml解冻培养基1+胰岛素(无遗传霉素)的管中，将细胞离心沉降，将细胞重悬于预热的解冻培养基1+胰岛素(无遗传霉素)中，将重悬的细胞转移到T25烧瓶中，并在37℃的CO2温育箱中培养过夜。第二天，将培养基用新鲜的解冻培养基1+胰岛素(无遗传霉素)更换，并在37℃的CO2温育箱中继续生长培养，直到细胞准备分裂。在第一次传代时，切换到生长培养基1B+10μg/ml胰岛素(包括解冻培养基1、胰岛素和遗传霉素)。细胞应在其达到完全汇合之前分裂。
为了使细胞传代，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)冲洗细胞，并用0.25％胰蛋白酶/EDTA使细胞脱离培养容器。添加生长培养基1B+10μg/ml胰岛素(包括解冻培养基1、胰岛素和遗传霉素)并转移到管中，将细胞离心沉降，然后重悬细胞，并将细胞悬浮液的适当等分试样接种到新的培养容器中。继代培养配比：每周1:5至1:10。
为了冻结细胞，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)冲洗细胞，并用胰蛋白酶/EDTA使细胞脱离培养容器。添加生长培养基1B+10μg/ml胰岛素(包括解冻培养基1、胰岛素和遗传霉素)并转移到管中，将细胞离心沉降，并重悬于冷冻培养基(10％DMSO+90％FBS)中。在-80℃下放置过夜，并且第二天置于液氮中。或者，可以将小瓶直接置于液氮中。
功能验证和测定性能
以下测定是设计用于96孔格式的。为了以不同组织培养格式进行测定，应按比例适当地调整细胞数量和试剂体积。
细胞培养所需但未提供的材料
·解冻培养基1(BPS Bioscience#60187)+10μg/ml胰岛素
·生长培养基1B(BPS Bioscience#79531)+10μg/ml胰岛素
·来自牛胰脏的胰岛素溶液(Sigma-Aldrich#:I0516)
细胞测定所需但未提供的材料
·H2O2：Hippo途径的激活剂(激活MST激酶)
·胰岛素
·测定培养基：解冻培养基1(BPS目录号60187)+10μg/ml胰岛素
·来自牛胰脏的胰岛素溶液(Sigma-Aldrich目录号：I0516)
·奥卡达酸(BPS bioscience#27047)：Hippo途径的激活剂(激活MST激酶)。制备在DMSO中的10mM储备液。
·96孔组织培养板或96孔组织培养物处理的白色透明底测定板
·ONE-StepTM荧光素酶测定系统(BPS，目录号60690)
·光度计
支原体测试
已经使用基于PCR的VenorGeM支原体检测试剂盒(Sigma-Aldrich)筛选细胞系，以确认不存在支原体物种。
在TEAD报告子-MCF7细胞中Hippo途径的激活剂对TEAD报告子活性的抑制
1)自生长培养基中的培养物收获TEAD报告子–MCF7细胞，并以每孔35,000个细胞的密度将细胞接种在白色透明底96孔微孔板中的45μl测定培养基中。
2)将细胞在37℃的CO2温育箱中温育过夜。
3)在测定培养基中稀释激活剂(H2O2或奥卡达酸)储备液。向孔中添加5μl稀释的激活剂。测定培养基中DMSO的最终浓度为0.1％。
4)将含相同浓度的DMSO且不含激活剂的5μl测定培养基添加到对照孔中。
5)将50μl含DMSO的测定培养基添加到无细胞对照孔中(用于测定背景发光)。
6)每个处理至少一式三份设置。
7)在37℃的CO2温育箱中温育细胞5-6小时。
8)使用ONE-StepTM荧光素酶测定系统按照所提供的方案进行荧光素酶测定：每孔添加100μl的ONE-StepTM荧光素酶试剂，并在室温下摇动～15分钟。使用光度计测量发光。
9)数据分析：通过从所有孔的发光读数中减去平均背景发光(无细胞对照孔)获得减去背景的发光。
在TEAD报告子测定中以及在H226和H28中测试了某些化合物。数据列于下表2中。A：EC50<0.1uM；B：0.1uM≤EC50≤0.5uM；C：EC50>0.5uM。
表2.某些示例性化合物的体外数据。
I# H226 EC50(uM) TEAD报告子测定EC50(uM)
1 C B
2 C C
3 C C
4 C C
5 C C
6 C C
7 C C
8 A A
9 A A
I-25的异构体1 A C
I-25的异构体2 C C
I-26的异构体1 A A
I-26的异构体2 B C
14 A A
I-27的异构体1 B C
I-27的异构体2 C C
I-28的异构体1 B C
I-28的异构体2 C C
I-29的异构体1 A B
I-29的异构体2 B B
I-30的异构体1 A C
I-30的异构体2 C C
I-31的异构体1 C C
I-31的异构体2 B C
I-32的异构体1 C A
I-32的异构体2 B C
实施例3：小鼠药代动力学研究
对BALB/c小鼠静脉内或经由强饲法口服施用配制的化合物。通常，在给药后0.167、0.5、1、2、4、6、12和24小时收集血液，通过离心处理成血浆，并在-80℃下储存，直到进行分析。在用乙腈或TCA进行蛋白质沉淀之前，将内标添加到每个样品中。通过滤板过滤沉淀物，并通过LC/MS/MS分析样品。以通常1.0 ng/mL至3000ng/mL的血浆准备标准曲线，并以与样品相同的方式进行处理。通常在配备有分析型UPLC柱的合适的LC/MS/MS系统上进行样品分析，并用30-95％的在ACN中0.1％甲酸(v/v):在水中0.1％甲酸(v/v)的梯度自分析型柱洗脱化合物。通过以正模式的MRM进行测试化合物和内标的质谱检测。经由非隔室分析通过Phoenix WinNonlin软件(Pharsight，St.Louis，MO)分析每种化合物的药代动力学。
实施例4.CTGF数据分析
NU/NU裸雌性小鼠获自Charles River Laboratories，并皮下注射NCI-H226(ATCC)人间皮瘤细胞。一旦肿瘤生长到平均大小为350-400mm3，将小鼠随机分配到每个处理组。通过口服强饲媒介物(5％DMSO/95％PEG 400)或TEAD抑制剂处理NCI-H226荷瘤小鼠，总共施用3次。第三次施用后4小时，将小鼠安乐死，并收集肿瘤以分离RNA用于药效动力学(PD)分析。
利用QIAZOL(Qiagen)溶解试剂从肿瘤中提取RNA，然后使用TissueLyser II(Qiagen)将组织均化10分钟。一旦样品破碎和消化完成，将氯仿添加到每个样品中，通过离心将匀浆分离成水相和有机相。
然后使用KingFisher Flex自动提取系统和MagMAX mirvana总RNA分离试剂盒从样品中分离RNA。按照制造商推荐的从组织样品中高通量分离RNA的方案进行RNA提取。
使用TaqMan基因表达主混合物和TaqMan探针通过qRT-PCR分析定量编码CTFG(结缔组织生长因子)的YAP/TEAD调控基因CCN2和管家基因人甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的表达。测定肿瘤cDNA样品的CTGF和GAPDH循环阈值(Ct)，并将CTGF表达相对于作为内部对照的GAPDH标准化。
将来自肿瘤组织的每个处理组的相对CTGF mRNA表达水平相对于媒介物对照组标准化。对于媒介物对照组与TEAD抑制剂处理组之间的比较，采用独立样品t检验进行统计分析。
实施例5.抗增殖测定
单独的细胞系根据供应商的说明在培养基中生长，并以确保在72-96小时内对数生长的密度接种到96孔板中。将TEAD抑制剂化合物以10μm的最高浓度施用给细胞，随后进行10点3倍连续稀释。72-96小时后，使用Cell TITERGLOTM(Promega,Inc.)对增殖进行定量，并与媒介物对照进行比较。使用Prism或XLFit曲线拟合软件生成IC50和EC50值。
实施例6.肿瘤生长的体内抑制
NCI-H226体内功效研究
给6-8周龄的nu/nu裸小鼠(CRL)右侧皮下接种5x106个NCI-H226人间皮瘤肿瘤细胞。使用游标卡尺每周两次监测肿瘤生长，并使用公式V＝W2 x L/2计算平均肿瘤体积(MTV)。
当MTV达到大约150-200mm3时，将动物随机分配到处理组(n＝8-10只/组)，并用媒介物(5％DMSO+95％PEG 400)或TEAD抑制剂以每天一次(QD)经口(PO)方案给药27-40天。
随机化和处理在第0天开始，并在研究的最后一天(当对照MTV达到最大可允许的肿瘤体积时)计算％肿瘤生长抑制，并进行以下计算。
％TGI＝100–[处理的MTV/对照MTV]x100
每周两次测量肿瘤生长和体重变化。
对于媒介物对照组与TEAD抑制剂处理组之间的比较，采用独立样品t检验进行统计分析。
MSTO-211H体内功效研究
给6-8周龄的SCID小鼠(CRL)右侧皮下接种5x106个MSTO-211H人间皮瘤肿瘤细胞。使用游标卡尺每周两次监测肿瘤生长，并使用公式V＝W2 x L/2计算平均肿瘤体积(MTV)。
当MTV达到大约150-200mm3时，将动物随机分配到处理组(n＝6-8只/组)中，并用媒介物(5％DMSO+95％PEG 400)或TEAD抑制剂以每天一次(QD)经口(PO)方案给药22-25天。
随机化和处理在第0天开始，并在研究的最后一天(当对照MTV达到最大可允许的肿瘤体积时)计算％肿瘤生长抑制，进行以下计算。
％TGI＝100–[处理的MTV/对照MTV]x100
每周两次测量肿瘤生长和体重变化。
对于媒介物对照组与TEAD抑制剂处理组之间的比较，采用独立样品t检验进行统计分析。
实施例7.TEAD选择性测定
可以通过本文提供的任何示例性测定法来确定本文所述的TEAD抑制剂化合物的TEAD靶向选择性概况，本文提供的测定法被设计用于监测TEAD同种型或变体例如人TEAD1(UniProt KB ID P28347-1(SEQ ID NO:1))、人TEAD2(UniProtKB ID Q15562(SEQ ID NO:2))、人TEAD3(UniProtKB ID Q99594(SEQ ID NO:3))和人TEAD4(UniProtKB ID Q15561(SEQ ID NO:4)与YAP1或TAZ的相互作用。虽然免疫共沉淀技术可用于监测蛋白质-蛋白质相互作用，但很难根据所需的基本方法增加通量。因此，采用替代但互补的测定法来监测不同的TEAD同种型或变体例如人TEAD1(UniProt KB ID P28347-1(SEQ ID NO:1))、人TEAD2(UniProtKB ID Q15562(SEQ ID NO:2))、人TEAD3(UniProtKB ID Q99594(SEQ ID NO:3))和人TEAD4(UniProtKB ID Q15561(SEQ ID NO:4)与YAP1(或TAZ)的相互作用。
第一示例性测定法是使用单独的TEAD同种型的重组表达并纯化的YAP结合结构域和来源于YAP1的一级序列的荧光标记肽的体外生物化学荧光偏振测定法。(Bum-Erdene等人，Cell Chem Biol.2019年3月21日；26(3):378-389.e13，该文献的内容以全文引用的方式并入本文)。将化合物与单独TEAD同种型蛋白和荧光肽一起温育，并通过定量肽的置换来确定效力。
第二示例性测定法是使用分裂荧光素酶报告子系统的基于细胞的测定法(Hall等人，ACS Chem.Biol.2012，7，11，1848-1857，该文献的内容以全文引用的方式并入本文)。简言之，在HEK293细胞中，每个TEAD同种型的YAP结合结构域与TEAD结合结构域或YAP1或TAZ瞬时共表达，并通过荧光素酶活性监测两种嵌合基因融合产物的接近(Nouri等人，Cancers(Basel).2019年10月19日；11(10)，该文献的内容以全文引用的方式并入本文)。相对于媒介物处理的对照，干扰TEAD同种型与YAP1(或TAZ)相互作用的化合物降低了所得荧光素酶活性。与荧光偏振测定法的过程类似，这些嵌合基因融合物在细菌或昆虫细胞中重组表达，并用作具有与基于细胞的测定法类似的荧光素酶读数的体外生物化学测定法。
另一种示例性测定法是硫醇缀合测定法，其监测小分子对荧光开启探针与TEAD同种型的中心口袋中的半胱氨酸共价结合的阻止，如Karatas等人，“Discovery of CovalentInhibitors Targeting the Trans criptional Enhanced Associate Domain(TEAD)Central Pocket”，J.Med.Chem.2020中所述，该文献的内容以全文引用的方式并入本文。简言之，使用硫醇反应性促荧光探针N-(4-(7-二乙基氨基-4-甲基香豆素-3-基)苯基)马来酰亚胺(CPM)。CPM中的荧光由于苯基上的马来酰亚胺取代而淬灭，该取代调节香豆素羰基与7-氨基之间的共振。然而，在与硫醇反应后，CPM荧光强烈增加。CPM可用于研究TEA D抑制，因为TEAD中心口袋中的游离半胱氨酸残基的反应产生荧光信号，使得以明显的效力与TEAD中心口袋结合的小分子阻止CPM共价标记半胱氨酸。因此，在硫醇缀合测定法中，添加新鲜制备的TEAD蛋白质溶液，并在室温下与测试化合物一起在测定缓冲液中温育，接着添加CPM溶液并测量荧光(Ex/Em：380/470nm)。相对于不结合TEAD中心口袋的化合物，以明显效力结合TEAD中心口袋的任何测试化合物显示出较少的荧光或荧光的抑制。
实施例8.恶性间皮瘤肿瘤细胞生长的抑制
在携带NF2突变的NCI-H2052间皮瘤细胞系中评价本文所述的TEAD抑制剂的肿瘤细胞生长抑制活性。该细胞系的选择部分是基于其突变状态以及siRNA针对YAP、TAZ或TEAD1-TEAD4抑制细胞增殖的能力。也考虑了YAP在汇合处的核定位。将10,000个细胞/孔铺在96孔黑色板中，该黑色板具有在含血清的常规培养基中的透明平底TC处理的成像板，次日更换为含1％血清的饥饿培养基。在饥饿培养基中生长一天后，将细胞与TEAD抑制剂化合物一起温育。起始浓度为30μM，并在DMSO和培养基中连续稀释直到0.1μM，以达到0.5％的最终DMSO浓度。然后使细胞生长3天，然后在每个孔中添加最终浓度为10mM的EdU(Invitrogen，Molecular Probe)，并使细胞再返回温育箱24h。移除饥饿培养基，并在每个孔中添加100μl含有Hoechst染料的PFA 4％以固定细胞。然后将板在室温下温育15分钟，用PBS洗涤两次，并通过每孔添加100μl含有0.3％BSA的triton-100来透化细胞。20分钟后，用PBS洗涤细胞，并根据制造商的说明进行EdU检测。例如使用ImageXpress Micro进行图像获取，并使用MetaXpress软件(Molecular Device)进行分析。
虽然我们已经描述了本发明的多个实施方案，但显然我们可以改变基础实施例以提供利用本发明的化合物和方法的其它实施方案。因此，将要了解的是，本发明的范围由本申请和所附权利要求限定，而不是由借助于实施例给出的具体实施方案限定。
序列表
<110> 医肯纳肿瘤学公司(IKENA ONCOLOGY, INC.)
<120> TEAD抑制剂及其用途
<130> 396661-017WO (187446)
<140> 待分配
<141> 2021-12-02
<150> 63/120,441
<151> 2020-12-02
<160> 9
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 426
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Glu Pro Ser Ser Trp Ser Gly Ser Glu Ser Pro Ala Glu Asn Met
1 5 10 15
Glu Arg Met Ser Asp Ser Ala Asp Lys Pro Ile Asp Asn Asp Ala Glu
20 25 30
Gly Val Trp Ser Pro Asp Ile Glu Gln Ser Phe Gln Glu Ala Leu Ala
35 40 45
Ile Tyr Pro Pro Cys Gly Arg Arg Lys Ile Ile Leu Ser Asp Glu Gly
50 55 60
Lys Met Tyr Gly Arg Asn Glu Leu Ile Ala Arg Tyr Ile Lys Leu Arg
65 70 75 80
Thr Gly Lys Thr Arg Thr Arg Lys Gln Val Ser Ser His Ile Gln Val
85 90 95
Leu Ala Arg Arg Lys Ser Arg Asp Phe His Ser Lys Leu Lys Asp Gln
100 105 110
Thr Ala Lys Asp Lys Ala Leu Gln His Met Ala Ala Met Ser Ser Ala
115 120 125
Gln Ile Val Ser Ala Thr Ala Ile His Asn Lys Leu Gly Leu Pro Gly
130 135 140
Ile Pro Arg Pro Thr Phe Pro Gly Ala Pro Gly Phe Trp Pro Gly Met
145 150 155 160
Ile Gln Thr Gly Gln Pro Gly Ser Ser Gln Asp Val Lys Pro Phe Val
165 170 175
Gln Gln Ala Tyr Pro Ile Gln Pro Ala Val Thr Ala Pro Ile Pro Gly
180 185 190
Phe Glu Pro Ala Ser Ala Pro Ala Pro Ser Val Pro Ala Trp Gln Gly
195 200 205
Arg Ser Ile Gly Thr Thr Lys Leu Arg Leu Val Glu Phe Ser Ala Phe
210 215 220
Leu Glu Gln Gln Arg Asp Pro Asp Ser Tyr Asn Lys His Leu Phe Val
225 230 235 240
His Ile Gly His Ala Asn His Ser Tyr Ser Asp Pro Leu Leu Glu Ser
245 250 255
Val Asp Ile Arg Gln Ile Tyr Asp Lys Phe Pro Glu Lys Lys Gly Gly
260 265 270
Leu Lys Glu Leu Phe Gly Lys Gly Pro Gln Asn Ala Phe Phe Leu Val
275 280 285
Lys Phe Trp Ala Asp Leu Asn Cys Asn Ile Gln Asp Asp Ala Gly Ala
290 295 300
Phe Tyr Gly Val Thr Ser Gln Tyr Glu Ser Ser Glu Asn Met Thr Val
305 310 315 320
Thr Cys Ser Thr Lys Val Cys Ser Phe Gly Lys Gln Val Val Glu Lys
325 330 335
Val Glu Thr Glu Tyr Ala Arg Phe Glu Asn Gly Arg Phe Val Tyr Arg
340 345 350
Ile Asn Arg Ser Pro Met Cys Glu Tyr Met Ile Asn Phe Ile His Lys
355 360 365
Leu Lys His Leu Pro Glu Lys Tyr Met Met Asn Ser Val Leu Glu Asn
370 375 380
Phe Thr Ile Leu Leu Val Val Thr Asn Arg Asp Thr Gln Glu Thr Leu
385 390 395 400
Leu Cys Met Ala Cys Val Phe Glu Val Ser Asn Ser Glu His Gly Ala
405 410 415
Gln His His Ile Tyr Arg Leu Val Lys Asp
420 425
<210> 2
<211> 447
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Met Gly Glu Pro Arg Ala Gly Ala Ala Leu Asp Asp Gly Ser Gly Trp
1 5 10 15
Thr Gly Ser Glu Glu Gly Ser Glu Glu Gly Thr Gly Gly Ser Glu Gly
20 25 30
Ala Gly Gly Asp Gly Gly Pro Asp Ala Glu Gly Val Trp Ser Pro Asp
35 40 45
Ile Glu Gln Ser Phe Gln Glu Ala Leu Ala Ile Tyr Pro Pro Cys Gly
50 55 60
Arg Arg Lys Ile Ile Leu Ser Asp Glu Gly Lys Met Tyr Gly Arg Asn
65 70 75 80
Glu Leu Ile Ala Arg Tyr Ile Lys Leu Arg Thr Gly Lys Thr Arg Thr
85 90 95
Arg Lys Gln Val Ser Ser His Ile Gln Val Leu Ala Arg Arg Lys Ser
100 105 110
Arg Glu Ile Gln Ser Lys Leu Lys Asp Gln Val Ser Lys Asp Lys Ala
115 120 125
Phe Gln Thr Met Ala Thr Met Ser Ser Ala Gln Leu Ile Ser Ala Pro
130 135 140
Ser Leu Gln Ala Lys Leu Gly Pro Thr Gly Pro Gln Ala Ser Glu Leu
145 150 155 160
Phe Gln Phe Trp Ser Gly Gly Ser Gly Pro Pro Trp Asn Val Pro Asp
165 170 175
Val Lys Pro Phe Ser Gln Thr Pro Phe Thr Leu Ser Leu Thr Pro Pro
180 185 190
Ser Thr Asp Leu Pro Gly Tyr Glu Pro Pro Gln Ala Leu Ser Pro Leu
195 200 205
Pro Pro Pro Thr Pro Ser Pro Pro Ala Trp Gln Ala Arg Gly Leu Gly
210 215 220
Thr Ala Arg Leu Gln Leu Val Glu Phe Ser Ala Phe Val Glu Pro Pro
225 230 235 240
Asp Ala Val Asp Ser Tyr Gln Arg His Leu Phe Val His Ile Ser Gln
245 250 255
His Cys Pro Ser Pro Gly Ala Pro Pro Leu Glu Ser Val Asp Val Arg
260 265 270
Gln Ile Tyr Asp Lys Phe Pro Glu Lys Lys Gly Gly Leu Arg Glu Leu
275 280 285
Tyr Asp Arg Gly Pro Pro His Ala Phe Phe Leu Val Lys Phe Trp Ala
290 295 300
Asp Leu Asn Trp Gly Pro Ser Gly Glu Glu Ala Gly Ala Gly Gly Ser
305 310 315 320
Ile Ser Ser Gly Gly Phe Tyr Gly Val Ser Ser Gln Tyr Glu Ser Leu
325 330 335
Glu His Met Thr Leu Thr Cys Ser Ser Lys Val Cys Ser Phe Gly Lys
340 345 350
Gln Val Val Glu Lys Val Glu Thr Glu Arg Ala Gln Leu Glu Asp Gly
355 360 365
Arg Phe Val Tyr Arg Leu Leu Arg Ser Pro Met Cys Glu Tyr Leu Val
370 375 380
Asn Phe Leu His Lys Leu Arg Gln Leu Pro Glu Arg Tyr Met Met Asn
385 390 395 400
Ser Val Leu Glu Asn Phe Thr Ile Leu Gln Val Val Thr Asn Arg Asp
405 410 415
Thr Gln Glu Leu Leu Leu Cys Thr Ala Tyr Val Phe Glu Val Ser Thr
420 425 430
Ser Glu Arg Gly Ala Gln His His Ile Tyr Arg Leu Val Arg Asp
435 440 445
<210> 3
<211> 435
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
Met Ala Ser Asn Ser Trp Asn Ala Ser Ser Ser Pro Gly Glu Ala Arg
1 5 10 15
Glu Asp Gly Pro Glu Gly Leu Asp Lys Gly Leu Asp Asn Asp Ala Glu
20 25 30
Gly Val Trp Ser Pro Asp Ile Glu Gln Ser Phe Gln Glu Ala Leu Ala
35 40 45
Ile Tyr Pro Pro Cys Gly Arg Arg Lys Ile Ile Leu Ser Asp Glu Gly
50 55 60
Lys Met Tyr Gly Arg Asn Glu Leu Ile Ala Arg Tyr Ile Lys Leu Arg
65 70 75 80
Thr Gly Lys Thr Arg Thr Arg Lys Gln Val Ser Ser His Ile Gln Val
85 90 95
Leu Ala Arg Lys Lys Val Arg Glu Tyr Gln Val Gly Ile Lys Ala Met
100 105 110
Asn Leu Asp Gln Val Ser Lys Asp Lys Ala Leu Gln Ser Met Ala Ser
115 120 125
Met Ser Ser Ala Gln Ile Val Ser Ala Ser Val Leu Gln Asn Lys Phe
130 135 140
Ser Pro Pro Ser Pro Leu Pro Gln Ala Val Phe Ser Thr Ser Ser Arg
145 150 155 160
Phe Trp Ser Ser Pro Pro Leu Leu Gly Gln Gln Pro Gly Pro Ser Gln
165 170 175
Asp Ile Lys Pro Phe Ala Gln Pro Ala Tyr Pro Ile Gln Pro Pro Leu
180 185 190
Pro Pro Thr Leu Ser Ser Tyr Glu Pro Leu Ala Pro Leu Pro Ser Ala
195 200 205
Ala Ala Ser Val Pro Val Trp Gln Asp Arg Thr Ile Ala Ser Ser Arg
210 215 220
Leu Arg Leu Leu Glu Tyr Ser Ala Phe Met Glu Val Gln Arg Asp Pro
225 230 235 240
Asp Thr Tyr Ser Lys His Leu Phe Val His Ile Gly Gln Thr Asn Pro
245 250 255
Ala Phe Ser Asp Pro Pro Leu Glu Ala Val Asp Val Arg Gln Ile Tyr
260 265 270
Asp Lys Phe Pro Glu Lys Lys Gly Gly Leu Lys Glu Leu Tyr Glu Lys
275 280 285
Gly Pro Pro Asn Ala Phe Phe Leu Val Lys Phe Trp Ala Asp Leu Asn
290 295 300
Ser Thr Ile Gln Glu Gly Pro Gly Ala Phe Tyr Gly Val Ser Ser Gln
305 310 315 320
Tyr Ser Ser Ala Asp Ser Met Thr Ile Ser Val Ser Thr Lys Val Cys
325 330 335
Ser Phe Gly Lys Gln Val Val Glu Lys Val Glu Thr Glu Tyr Ala Arg
340 345 350
Leu Glu Asn Gly Arg Phe Val Tyr Arg Ile His Arg Ser Pro Met Cys
355 360 365
Glu Tyr Met Ile Asn Phe Ile His Lys Leu Lys His Leu Pro Glu Lys
370 375 380
Tyr Met Met Asn Ser Val Leu Glu Asn Phe Thr Ile Leu Gln Val Val
385 390 395 400
Thr Ser Arg Asp Ser Gln Glu Thr Leu Leu Val Ile Ala Phe Val Phe
405 410 415
Glu Val Ser Thr Ser Glu His Gly Ala Gln His His Val Tyr Lys Leu
420 425 430
Val Lys Asp
435
<210> 4
<211> 434
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
Met Glu Gly Thr Ala Gly Thr Ile Thr Ser Asn Glu Trp Ser Ser Pro
1 5 10 15
Thr Ser Pro Glu Gly Ser Thr Ala Ser Gly Gly Ser Gln Ala Leu Asp
20 25 30
Lys Pro Ile Asp Asn Asp Ala Glu Gly Val Trp Ser Pro Asp Ile Glu
35 40 45
Gln Ser Phe Gln Glu Ala Leu Ala Ile Tyr Pro Pro Cys Gly Arg Arg
50 55 60
Lys Ile Ile Leu Ser Asp Glu Gly Lys Met Tyr Gly Arg Asn Glu Leu
65 70 75 80
Ile Ala Arg Tyr Ile Lys Leu Arg Thr Gly Lys Thr Arg Thr Arg Lys
85 90 95
Gln Val Ser Ser His Ile Gln Val Leu Ala Arg Arg Lys Ala Arg Glu
100 105 110
Ile Gln Ala Lys Leu Lys Asp Gln Ala Ala Lys Asp Lys Ala Leu Gln
115 120 125
Ser Met Ala Ala Met Ser Ser Ala Gln Ile Ile Ser Ala Thr Ala Phe
130 135 140
His Ser Ser Met Ala Leu Ala Arg Gly Pro Gly Arg Pro Ala Val Ser
145 150 155 160
Gly Phe Trp Gln Gly Ala Leu Pro Gly Gln Ala Gly Thr Ser His Asp
165 170 175
Val Lys Pro Phe Ser Gln Gln Thr Tyr Ala Val Gln Pro Pro Leu Pro
180 185 190
Leu Pro Gly Phe Glu Ser Pro Ala Gly Pro Ala Pro Ser Pro Ser Ala
195 200 205
Pro Pro Ala Pro Pro Trp Gln Gly Arg Ser Val Ala Ser Ser Lys Leu
210 215 220
Trp Met Leu Glu Phe Ser Ala Phe Leu Glu Gln Gln Gln Asp Pro Asp
225 230 235 240
Thr Tyr Asn Lys His Leu Phe Val His Ile Gly Gln Ser Ser Pro Ser
245 250 255
Tyr Ser Asp Pro Tyr Leu Glu Ala Val Asp Ile Arg Gln Ile Tyr Asp
260 265 270
Lys Phe Pro Glu Lys Lys Gly Gly Leu Lys Asp Leu Phe Glu Arg Gly
275 280 285
Pro Ser Asn Ala Phe Phe Leu Val Lys Phe Trp Ala Asp Leu Asn Thr
290 295 300
Asn Ile Glu Asp Glu Gly Ser Ser Phe Tyr Gly Val Ser Ser Gln Tyr
305 310 315 320
Glu Ser Pro Glu Asn Met Ile Ile Thr Cys Ser Thr Lys Val Cys Ser
325 330 335
Phe Gly Lys Gln Val Val Glu Lys Val Glu Thr Glu Tyr Ala Arg Tyr
340 345 350
Glu Asn Gly His Tyr Ser Tyr Arg Ile His Arg Ser Pro Leu Cys Glu
355 360 365
Tyr Met Ile Asn Phe Ile His Lys Leu Lys His Leu Pro Glu Lys Tyr
370 375 380
Met Met Asn Ser Val Leu Glu Asn Phe Thr Ile Leu Gln Val Val Thr
385 390 395 400
Asn Arg Asp Thr Gln Glu Thr Leu Leu Cys Ile Ala Tyr Val Phe Glu
405 410 415
Val Ser Ala Ser Glu His Gly Ala Gln His His Ile Tyr Arg Leu Val
420 425 430
Lys Glu
<210> 5
<211> 221
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
Trp Gln Gly Arg Ser Ile Gly Thr Thr Lys Leu Arg Leu Val Glu Phe
1 5 10 15
Ser Ala Phe Leu Glu Gln Gln Arg Asp Pro Asp Ser Tyr Asn Lys His
20 25 30
Leu Phe Val His Ile Gly His Ala Asn His Ser Tyr Ser Asp Pro Leu
35 40 45
Leu Glu Ser Val Asp Ile Arg Gln Ile Tyr Asp Lys Phe Pro Glu Lys
50 55 60
Lys Gly Gly Leu Lys Glu Leu Phe Gly Lys Gly Pro Gln Asn Ala Phe
65 70 75 80
Phe Leu Val Lys Phe Trp Ala Asp Leu Asn Cys Asn Ile Gln Asp Asp
85 90 95
Ala Gly Ala Phe Tyr Gly Val Thr Ser Gln Tyr Glu Ser Ser Glu Asn
100 105 110
Met Thr Val Thr Cys Ser Thr Lys Val Cys Ser Phe Gly Lys Gln Val
115 120 125
Val Glu Lys Val Glu Thr Glu Tyr Ala Arg Phe Glu Asn Gly Arg Phe
130 135 140
Val Tyr Arg Ile Asn Arg Ser Pro Met Cys Glu Tyr Met Ile Asn Phe
145 150 155 160
Ile His Lys Leu Lys His Leu Pro Glu Lys Tyr Met Met Asn Ser Val
165 170 175
Leu Glu Asn Phe Thr Ile Leu Leu Val Val Thr Asn Arg Asp Thr Gln
180 185 190
Glu Thr Leu Leu Cys Met Ala Cys Val Phe Glu Val Ser Asn Ser Glu
195 200 205
His Gly Ala Gln His His Ile Tyr Arg Leu Val Lys Asp
210 215 220
<210> 6
<211> 230
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
Trp Gln Ala Arg Gly Leu Gly Thr Ala Arg Leu Gln Leu Val Glu Phe
1 5 10 15
Ser Ala Phe Val Glu Pro Pro Asp Ala Val Asp Ser Tyr Gln Arg His
20 25 30
Leu Phe Val His Ile Ser Gln His Cys Pro Ser Pro Gly Ala Pro Pro
35 40 45
Leu Glu Ser Val Asp Val Arg Gln Ile Tyr Asp Lys Phe Pro Glu Lys
50 55 60
Lys Gly Gly Leu Arg Glu Leu Tyr Asp Arg Gly Pro Pro His Ala Phe
65 70 75 80
Phe Leu Val Lys Phe Trp Ala Asp Leu Asn Trp Gly Pro Ser Gly Glu
85 90 95
Glu Ala Gly Ala Gly Gly Ser Ile Ser Ser Gly Gly Phe Tyr Gly Val
100 105 110
Ser Ser Gln Tyr Glu Ser Leu Glu His Met Thr Leu Thr Cys Ser Ser
115 120 125
Lys Val Cys Ser Phe Gly Lys Gln Val Val Glu Lys Val Glu Thr Glu
130 135 140
Arg Ala Gln Leu Glu Asp Gly Arg Phe Val Tyr Arg Leu Leu Arg Ser
145 150 155 160
Pro Met Cys Glu Tyr Leu Val Asn Phe Leu His Lys Leu Arg Gln Leu
165 170 175
Pro Glu Arg Tyr Met Met Asn Ser Val Leu Glu Asn Phe Thr Ile Leu
180 185 190
Gln Val Val Thr Asn Arg Asp Thr Gln Glu Leu Leu Leu Cys Thr Ala
195 200 205
Tyr Val Phe Glu Val Ser Thr Ser Glu Arg Gly Ala Gln His His Ile
210 215 220
Tyr Arg Leu Val Arg Asp
225 230
<210> 7
<211> 221
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 7
Trp Gln Asp Arg Thr Ile Ala Ser Ser Arg Leu Arg Leu Leu Glu Tyr
1 5 10 15
Ser Ala Phe Met Glu Val Gln Arg Asp Pro Asp Thr Tyr Ser Lys His
20 25 30
Leu Phe Val His Ile Gly Gln Thr Asn Pro Ala Phe Ser Asp Pro Pro
35 40 45
Leu Glu Ala Val Asp Val Arg Gln Ile Tyr Asp Lys Phe Pro Glu Lys
50 55 60
Lys Gly Gly Leu Lys Glu Leu Tyr Glu Lys Gly Pro Pro Asn Ala Phe
65 70 75 80
Phe Leu Val Lys Phe Trp Ala Asp Leu Asn Ser Thr Ile Gln Glu Gly
85 90 95
Pro Gly Ala Phe Tyr Gly Val Ser Ser Gln Tyr Ser Ser Ala Asp Ser
100 105 110
Met Thr Ile Ser Val Ser Thr Lys Val Cys Ser Phe Gly Lys Gln Val
115 120 125
Val Glu Lys Val Glu Thr Glu Tyr Ala Arg Leu Glu Asn Gly Arg Phe
130 135 140
Val Tyr Arg Ile His Arg Ser Pro Met Cys Glu Tyr Met Ile Asn Phe
145 150 155 160
Ile His Lys Leu Lys His Leu Pro Glu Lys Tyr Met Met Asn Ser Val
165 170 175
Leu Glu Asn Phe Thr Ile Leu Gln Val Val Thr Ser Arg Asp Ser Gln
180 185 190
Glu Thr Leu Leu Val Ile Ala Phe Val Phe Glu Val Ser Thr Ser Glu
195 200 205
His Gly Ala Gln His His Val Tyr Lys Leu Val Lys Asp
210 215 220
<210> 8
<211> 221
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
Trp Gln Gly Arg Ser Val Ala Ser Ser Lys Leu Trp Met Leu Glu Phe
1 5 10 15
Ser Ala Phe Leu Glu Gln Gln Gln Asp Pro Asp Thr Tyr Asn Lys His
20 25 30
Leu Phe Val His Ile Gly Gln Ser Ser Pro Ser Tyr Ser Asp Pro Tyr
35 40 45
Leu Glu Ala Val Asp Ile Arg Gln Ile Tyr Asp Lys Phe Pro Glu Lys
50 55 60
Lys Gly Gly Leu Lys Asp Leu Phe Glu Arg Gly Pro Ser Asn Ala Phe
65 70 75 80
Phe Leu Val Lys Phe Trp Ala Asp Leu Asn Thr Asn Ile Glu Asp Glu
85 90 95
Gly Ser Ser Phe Tyr Gly Val Ser Ser Gln Tyr Glu Ser Pro Glu Asn
100 105 110
Met Ile Ile Thr Cys Ser Thr Lys Val Cys Ser Phe Gly Lys Gln Val
115 120 125
Val Glu Lys Val Glu Thr Glu Tyr Ala Arg Tyr Glu Asn Gly His Tyr
130 135 140
Ser Tyr Arg Ile His Arg Ser Pro Leu Cys Glu Tyr Met Ile Asn Phe
145 150 155 160
Ile His Lys Leu Lys His Leu Pro Glu Lys Tyr Met Met Asn Ser Val
165 170 175
Leu Glu Asn Phe Thr Ile Leu Gln Val Val Thr Asn Arg Asp Thr Gln
180 185 190
Glu Thr Leu Leu Cys Ile Ala Tyr Val Phe Glu Val Ser Ala Ser Glu
195 200 205
His Gly Ala Gln His His Ile Tyr Arg Leu Val Lys Glu
210 215 220
<210> 9
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述：合成
肽"
<220>
<221> MOD_RES
<222> (2)..(2)
<223> 任何氨基酸
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(5)
<223> 任何氨基酸
<400> 9
His Xaa Arg Xaa Xaa Ser
1 5

Claims (53)

1.一种式I的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
L1是共价键或C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选地被-N(R)-、-O-或-C(O)-置换；
环A选自 其中的每一者任选被取代；
环B选自
每个Rw独立地选自
每个R2独立地选自-OR、-C(O)NR2、任选取代的-C1-6脂族基、
每个Y独立地为N或CR5；
每个R3独立地为H或任选取代的-C1-6脂族基；
每个R4独立地为-S(O)2NR2、-S(O)2R、-C(O)NR2、-C(O)R或任选取代的-C1-6脂族基；
每个R5独立地为R、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的5-6元杂芳基；
每个m独立地为0、1或2；
p是0、1或2；且
每个R独立地为H、任选取代的-C1-6脂族基、任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环碳环基或具有1-2个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的任选取代的3-8元饱和或部分不饱和单环杂环基。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L1是C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元被-N(R)-置换。
3.如权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A是任选被取代的
4.如权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A是任选被取代的
5.如权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A是任选被取代的
6.如权利要求1或2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环A是任选被取代的
7.如权利要求1-6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中环B是
8.如权利要求1-7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中每个Rw独立地为
9.如权利要求1所述的化合物，其是下式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个R1独立地为R、卤素、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2、-OR、-SR、-S(O)2NR2或-S(O)2R，且每个n独立地为0、1、2或3。
10.如权利要求1所述的化合物，其是下式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个R1独立地为R、卤素、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2、-OR、-SR、-S(O)2NR2或-S(O)2R，且每个n独立地为0、1、2或3。
11.如权利要求1所述的化合物，其是下式的化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中每个R1独立地为R、卤素、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2、-OR、-SR、-S(O)2NR2或-S(O)2R，且每个n独立地为0、1、2或3。
12.如权利要求1所述的化合物，其是下式的化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中每个R1独立地为R、卤素、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2、-OR、-SR、-S(O)2NR2或-S(O)2R。
13.如权利要求1所述的化合物，其是下式的化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中每个R1独立地为R、卤素、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2、-OR、-SR、-S(O)2NR2或-S(O)2R，且每个n独立地为0、1、2或3。
14.如权利要求1所述的化合物，其是下式的化合物：
/>
/>
或其药学上可接受的盐，其中每个R1独立地为R、卤素、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2、-OR、-SR、-S(O)2NR2或-S(O)2R，且每个n独立地为0、1、2或3。
15.如权利要求1所述的化合物，其是下式的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个R1独立地为R、卤素、-CN、-C(O)R、-C(O)NR2、-OR、-SR、-S(O)2NR2或-S(O)2R，且每个n独立地为0、1、2或3。
16.如前述权利要求中任一项所述的化合物，其选自表1的化合物，或其药学上可接受的盐。
17.一种药物组合物，其包含前述权利要求中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物。
18.一种治疗患者的癌症的方法，包括对所述患者施用权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物。
19.如权利要求18所述的方法，其中所述癌症与增加的TEAD表达相关。
20.如权利要求18或19所述的方法，其中所述癌症与增加的TEAD活性相关。
21.一种抑制患者的癌症进展的方法，包括对所述患者施用权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物。
22.如权利要求21所述的方法，其中所述癌症与增加的TEAD表达相关。
23.如权利要求21或22所述的方法，其中所述癌症与增加的TEAD活性相关。
24.一种治疗患有与增加的TEAD表达相关的疾病或病症的患者的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物的步骤。
25.一种治疗患有与增加的TEAD活性相关的疾病或病症的患者的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物的步骤。
26.一种治疗其中抑制TEAD活性是有益的疾病或病症的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物的步骤。
27.一种治疗其中Hippo途径抑制是有益的疾病或病症的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效量的权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物的步骤。
28.如权利要求24-27中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是细胞增殖病症。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述细胞增殖病症是癌症。
30.如权利要求18-23和29中任一项所述的方法，其中所述癌症是其中YAP定位在所述癌症的细胞核中的癌症。
31.如权利要求19、20和22-25中任一项所述的方法，其中所述增加的TEAD表达或增加的TEAD活性是增加的TEAD1表达或增加的TEAD1活性。
32.如权利要求19、20和22-25中任一项所述的方法，其中所述增加的TEAD表达或增加的TEAD活性是增加的TEAD2表达或增加的TEAD2活性。
33.如权利要求19、20和22-25中任一项所述的方法，其中所述增加的TEAD表达或增加的TEAD活性是增加的TEAD3表达或增加的TEAD3活性。
34.如权利要求19、20和22-25中任一项所述的方法，其中所述增加的TEAD表达或增加的TEAD活性是增加的TEAD4表达或增加的TEAD4活性。
35.如权利要求19、20和22-25中任一项所述的方法，其中所述增加的TEAD表达或增加的TEAD活性是增加的TEAD1表达或增加的TEAD1活性；增加的TEAD2表达或增加的TEAD2活性；增加的TEAD3表达或增加的TEAD3活性；增加的TEAD4表达或增加的TEAD4活性；或其任何组合。
36.权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物用于治疗患者的癌症的用途。
37.如权利要求36所述的用途，其中所述癌症与增加的TEAD表达相关。
38.如权利要求36或37所述的用途，其中所述癌症与增加的TEAD活性相关。
39.权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物用于抑制患者的癌症进展的用途。
40.如权利要求39所述的用途，其中所述癌症与增加的TEAD表达相关。
41.如权利要求39或40所述的用途，其中所述癌症与增加的TEAD活性相关。
42.权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物用于治疗与增加的TEAD表达相关的疾病或病症的用途。
43.权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物用于治疗与增加的TEAD活性相关的疾病或病症的用途。
44.权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物用于治疗其中抑制TEAD活性是有益的疾病或病症的用途。
45.权利要求1-16中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求17所述的药物组合物用于治疗其中Hippo途径抑制是有益的疾病或病症的用途。
46.如权利要求42-45中任一项所述的用途，其中所述疾病或病症是细胞增殖病症。
47.如权利要求46所述的用途，其中所述细胞增殖病症是癌症。
48.如权利要求36-41和47中任一项所述的用途，其中所述癌症是其中YAP定位在所述癌症的细胞核中的癌症。
49.如权利要求37、38和40-43中任一项所述的用途，其中所述增加的TEAD表达或增加的TEAD活性是增加的TEAD1表达或增加的TEAD1活性。
50.如权利要求37、38和40-43中任一项所述的用途，其中所述增加的TEAD表达或增加的TEAD活性是增加的TEAD2表达或增加的TEAD2活性。
51.如权利要求37、38和40-43中任一项所述的用途，其中所述增加的TEAD表达或增加的TEAD活性是增加的TEAD3表达或增加的TEAD3活性。
52.如权利要求37、38和40-43中任一项所述的用途，其中所述增加的TEAD表达或增加的TEAD活性是增加的TEAD4表达或增加的TEAD4活性。
53.如权利要求37、38和40-43中任一项所述的用途，其中所述增加的TEAD表达或增加的TEAD活性是增加的TEAD1表达或增加的TEAD1活性；增加的TEAD2表达或增加的TEAD2活性；增加的TEAD3表达或增加的TEAD3活性；增加的TEAD4表达或增加的TEAD4活性；或其任何组合。
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