CN117580835A - Mek抑制剂及其用途 - Google Patents

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CN117580835A
CN117580835A CN202280035517.7A CN202280035517A CN117580835A CN 117580835 A CN117580835 A CN 117580835A CN 202280035517 A CN202280035517 A CN 202280035517A CN 117580835 A CN117580835 A CN 117580835A
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CN202280035517.7A
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A·C·卡斯特罗
M·J·布尔克
J·普劳德富特
S·K·吕佩尔
T·A·温
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Ekina Oncology
Original Assignee
Ekina Oncology
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Abstract

本发明提供式(I’)的MEK抑制剂、其组合物及其使用方法。

Description

MEK抑制剂及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2021年4月16日提交的第63/175,837号美国临时申请和2021年10月5日提交的第63/262,093号美国临时申请的优先权，上述美国临时申请中的每一者特此以引用的方式全文并入。
技术领域
本发明涉及可用于抑制丝裂原激活的蛋白激酶/细胞外信号调控的激酶激酶(MEK)的化合物和方法。本发明还提供包含本发明的化合物的药学上可接受的组合物以及使用所述组合物治疗增殖性病症如癌症的方法。
背景技术
包含丝裂原激活的蛋白激酶/细胞外信号调控的激酶(ERK)激酶(MEK)-ERK的p42/44MAPK信号传导通路的激活与各种癌症的发病机制和进展有关。MEK-ERK通路往往由上游因子BRAF或Ras的突变或者由组成型激活的细胞表面受体的信号激活。MEK的抑制可能是控制肿瘤(例如与MEK通路信号传导相关的肿瘤)的生长的有前途的策略。
发明内容
现已发现，本发明的化合物及其药学上可接受的组合物作为MEK抑制剂是有效的。
一方面，本发明提供了式(I’)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个变量如本文所定义和描述。
一方面，本发明提供了式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个变量如本文所定义和描述。
本发明的另一方面提供了治疗受试者由MEK介导的病症的方法。所述方法包括对有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的化合物，以治疗由MEK介导的病症，如具体实施方式中所进一步描述。
本发明的另一方面提供了抑制MEK活性的方法。所述方法包括使MEK或KSR-MEK复合物或RAF-MEK复合物与有效量的本文所述的化合物接触，如具体实施方式中进一步描述。在一些实施方案中，本文提供的方法包括使MEK-KSR-RAF复合物与有效量的本文所述的化合物接触，如具体实施方式中进一步描述。
在一些方面，本发明的化合物及其药学上可接受的组合物可用于治疗增殖性病症，如本文所述的癌症。
具体实施方式
1.本发明的某些实施方案的一般描述：
本发明的化合物及其药物组合物可用作MEK抑制剂。不希望受任何特定理论的束缚，据信本发明的化合物可以在MEK界面处直接接合蛋白质的RAF家族的成员，并且RAF家族成员，具体而言BRAF或CRAF，可重塑RAF-MEK复合物中的MEK抑制剂的原型变构袋。不希望受任何特定理论的束缚，据信本发明的化合物可结合RAF-MEK复合物，并且可以破坏相关的RAF-MEK复合物。
一方面，本发明提供式(I’)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A选自：
每个独立地代表单键或双键；
每个R1独立地为H、卤素、-CN或任选取代的C1-6脂族基；
X是C、CH或N；
Y是CR6、C(O)或N；
L’是共价键、-O-、-C(R9)2-或-NR8-；
R2、R5和R8中的每一者独立地为H或任选取代的C1-6脂族基；
R3、R4、R6和R9中的每一者独立地为H、卤素或任选取代的C1-6脂族基；
环B是选自以下的任选取代的环：3-8元单环碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-8元单环杂环状环；5-11元双环碳环状环；具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的5-11元双环杂环状环；苯基环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元单环杂芳族环；8-11元双环芳族环；和具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的8-11元双环杂芳族环；
L是共价键或C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-(CH2-CH2-O)1-10-、-S(O)-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-S(O)2-、-C(O)-N(R)-、-S(O)2-N(R)-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换；
每个-Cy-独立地为选自以下的任选取代的环：3-7元碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-7元杂环状环；苯基环；和具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环；
R7是R、-CN、-S(O)2-N(R)2、-NR-S(O)2-R、-P(O)(OR)-N(R)2、-C(＝N-R)-N(R)2、-C(＝N-OR)-N(R)2、-C(O)-R、-S(O)-R、-N(R)2、-OR、-SR或
每个R独立地为H、-CN或任选取代的C1-6脂族基；且
n是0、1、2、3、4或5。
一方面，本发明提供式(I’)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A选自：
每个独立地代表单键或双键；
每个R1独立地为H、卤素、-CN或任选取代的C1-6脂族基；
X是C、CH或N；
Y是CR6、C(O)或N；
L’是共价键、-O-、-C(R9)2-或-NR8-；
R2、R3、R4、R5、R6、R8和R9中的每一者独立地为H或任选取代的C1-6脂族基；
环B是选自以下的任选取代的环：3-8元单环碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-8元单环杂环状环；5-11元双环碳环状环；具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的5-11元双环杂环状环；苯基环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元单环杂芳族环；8-11元双环芳族环；和具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的8-11元双环杂芳族环；
L是共价键或C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-(CH2-CH2-O)1-10-、-S(O)-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-S(O)2-、-C(O)-N(R)-、-S(O)2-N(R)-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换；
每个-Cy-独立地为选自以下的任选取代的环：3-7元碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-7元杂环状环；苯基环；和具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环；
R7是R、-CN、-S(O)2-N(R)2、-NR-S(O)2-R、-P(O)(OR)-N(R)2、-C(＝N-R)-N(R)2、-C(＝N-OR)-N(R)2、-C(O)-R、-S(O)-R、-N(R)2、-OR、-SR或
每个R独立地为H、-CN或任选取代的C1-6脂族基；且
n是0、1、2、3、4或5。
一方面，本发明提供式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A选自：
每个独立地代表单键或双键；
每个R1独立地为H、卤素、-CN或任选取代的C1-6脂族基；
X是C或N；
Y是CR6、C(O)或N；
R2、R3、R4、R5和R6中的每一者独立地为H或任选取代的C1-6脂族基；
环B是选自以下的任选取代的环：苯基环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环；8-10元双环芳族环；和具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的8-10元双环杂芳族环；
L是共价键或C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换；
每个-Cy-独立地为选自以下的任选取代的环：3-7元碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-7元杂环状环；苯基环；和具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环；
R7是-CN、-S(O)2-N(R)2、-NR-S(O)2-R、-P(O)(OR)-N(R)2、-C(＝N-R)-N(R)2、-C(＝N-OR)-N(R)2、-C(O)-R、-N(R)2、-OR、-SR或
每个R独立地为H、-CN或任选取代的C1-6脂族基；且
n是0、1、2、3、4或5。
2.化合物和定义：
本发明的化合物包括本文一般描述的那些，并通过本文公开的类别、亚类和种类进一步说明。如本文所用，除另指出外，以下定义将适用。出于本发明的目的，根据CAS版本的元素周期表，Handbook of Chemistry and Physics，第75版确认化学元素。另外，以下文献中描述了有机化学的一般原理：“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，UniversityScience Books，Sausalito:1999，以及“March’s Advanced Organic Chemistry”，第5版，Smith，M.B.和March，J.编著，John Wiley&Sons，New York:2001，上述文献的全部内容特此以引用的方式并入。
如本文所用的术语“脂族基”或“脂族基团”意指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元的直链(即，非支链)或支链取代或未取代的烃链，或完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不是芳族的单环烃或双环烃(在本文中也称为“碳环”、“脂环基”或“环烷基”)，其与分子的其余部分具有单个连接点。除另有说明外，脂族基团含有1-6个脂族碳原子。在一些实施方案中，脂族基团含有1-5个脂族碳原子。在其它实施方案中，脂族基团含有1-4个脂族碳原子。还在其它实施方案中，脂族基团含有1-3个脂族碳原子，并且又在其它实施方案中，脂族基团含有1-2个脂族碳原子。在一些实施方案中，“脂环基”(或“碳环”或“环烷基”)是指完全饱和或含有一个或多个不饱和单元但不是芳族的单环C3-C6烃，其与分子的其余部分具有单个连接点。合适的脂族基团包括但不限于直链或支链的取代或未取代的烷基、烯基、炔基及其杂合基，如(环烷基)烷基、(环烯基)烷基或(环烷基)烯基。
如本文所用，术语“双环状环”或“双环状环体系”是指任何双环状环体系，即碳环的或杂环的、饱和的或具有一个或多个不饱和单元，在环体系的两个环之间具有一个或多个共同原子。因此，该术语包括任何允许的环稠合，如邻位稠合的或螺环的。如本文所用，术语“杂双环”是“双环”的子集，其要求在双环的一个或两个环中存在一个或多个杂原子。这类杂原子可存在于环连接处，且任选被取代，并且可选自氮(包括N-氧化物)、氧、硫(包括氧化的形式，如砜和磺酸酯)、磷(包括氧化的形式，如磷酸酯)、硼等。在一些实施方案中，双环基团具有7-12个环成员和0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。如本文所用，术语“桥接双环”是指具有至少一个桥的任何双环状环体系，即碳环或杂环饱和或部分不饱和的。如IUPAC所定义，“桥”是连接两个桥头的非支链的原子链或原子或价键，其中“桥头”是环体系的与三个或更多个骨架原子(不包括氢)键合的任何骨架原子。在一些实施方案中，桥接双环基团具有7-12个环成员和0-4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子。这类桥接双环基团是本领域中熟知的，并且包括下面列出的那些基团，其中每个基团在任何可取代的碳或氮原子处与分子的其余部分连接。除另有说明外，桥接双环基团任选被一个或多个如针对脂族基团所列出的取代基取代。另外或者替代地，桥接双环基团的任何可取代的氮任选被取代。示例性双环状环包括：
示例性桥接双环包括：
术语“低级烷基”是指C1-4直链或支链烷基。示例性低级烷基有甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。
术语“低级卤代烷基”是指被一个或多个卤素原子取代的C1-4直链或支链烷基。
术语“杂原子”意指氧、硫、氮、磷或硅中的一者或多者(包括氮、硫、磷或硅的任何氧化的形式；任何碱性氮的季铵化形式，或；杂环状环的可取代氮，例如N(如在3,4-二氢-2H-吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或NR+(如在N-取代的吡咯烷基中))。
如本文所用的术语“不饱和”意指部分具有一个或多个不饱和单元。
如本文所用，术语“二价C1-8(或C1-6)饱和或不饱和的直链或支链烃链”是指如本文所定义的直链或支链的二价亚烷基、亚烯基和亚炔基链。
术语“亚烷基”是指二价烷基。“亚烷基链”是聚亚甲基，即–(CH2)n–，其中n是正整数，优选为1至6、1至4、1至3、1至2或2至3。取代的亚烷基链是其中一个或多个亚甲基氢原子被取代基置换的聚亚甲基。合适的取代基包括下文针对取代的脂族基团所述的那些。
术语“亚烯基”是指二价烯基。取代的亚烯基链是含有至少一个双键的聚亚甲基，其中一个或多个氢原子被取代基置换。合适的取代基包括下文针对取代的脂族基团所述的那些。
如本文所用，术语“亚环丙基”是指具有以下结构的二价环丙基：
术语“卤素”意指F、Cl、Br或I。
单独或作为更大部分的一部分(如在“芳烷基”、“芳烷氧基”或“芳氧基烷基”中)使用的术语“芳基”是指具有总共五至十四个环成员的单环或双环状环体系，其中所述体系中的至少一个环是芳族的，且其中所述体系中的每个环含有3至7个环成员。术语“芳基”可与术语“芳基环”互换使用。在本发明的某些实施方案中，“芳基”是指芳族环体系，其包括但不限于可带有一个或多个取代基的苯基、联苯基、萘基、蒽基等。如在本文中所用的术语“芳基”的范围内还包括其中芳族环与一个或多个非芳族环稠合的基团，如茚满基、邻苯二甲酰亚胺基、萘亚胺基、菲啶基或四氢萘基等。
单独或作为更大部分的一部分(例如，“杂芳烷基”或“杂芳烷氧基”)使用的术语“杂芳基”和“杂芳–”是指具有5至10个环原子，优选5、6或9个环原子；在环状阵列中共享有6、10或14个电子；且除了碳原子之外还具有一至五个杂原子的基团。术语“杂原子”是指氮、氧或硫，并且包括氮或硫的任何氧化形式以及碱性氮的任何季铵化形式。杂芳基包括但不限于噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。如本文所用的术语“杂芳基”和“杂芳–”还包括其中杂芳族环与一个或多个芳基、脂环族或杂环基环稠合的基团，其中连接基或点在杂芳族环上。非限制性实例包括吲哚基、异吲哚基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、二苯并呋喃基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、4H–喹嗪基、咔唑基、吖啶基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁嗪基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基和吡啶并[2,3–b]–1,4–噁嗪–3(4H)–酮。杂芳基可以是单环或双环的。术语“杂芳基”可与术语“杂芳基环”、“杂芳基基团”或“杂芳族”互换使用，这些术语中的任一者包括任选被取代的环。术语“杂芳烷基”是指被杂芳基取代的烷基，其中所述烷基和杂芳基部分独立地任选被取代。
如本文所用，术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基团”和“杂环状环”可互换使用，并且是指稳定的5至7元单环或7-10元双环杂环部分，其是饱和的或部分不饱和的，并且除了碳原子之外还具有一个或多个(优选一至四个)如上所定义的杂原子。当用于指代杂环的环原子时，术语“氮”包括取代的氮。作为实例，在具有0-3个选自氧、硫或氮的杂原子的饱和或部分不饱和环中，氮可以是N(如在3,4–二氢–2H–吡咯基中)、NH(如在吡咯烷基中)或+NR(如在N–取代的吡咯烷基中)。
杂环可以在产生稳定结构的任何杂原子或碳原子处与其侧基连接，并且任何环原子均可任选被取代。这类饱和或部分不饱和的杂环基团的实例包括但不限于四氢呋喃基、四氢苯硫基、吡咯烷基、哌啶基、吡咯啉基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、噁唑烷基、哌嗪基、二噁烷基、二氧戊环基、二氮杂基、氧氮杂/>基、硫氮杂/>基、吗啉基和奎宁环基。术语“杂环”、“杂环基”、“杂环基环”、“杂环基团(group)”、“杂环部分”和“杂环基团(radical)”在本文中可互换使用，并且还包括其中杂环基环与一个或多个芳基、杂芳基或脂环族环稠合的基团，如吲哚啉基、3H–吲哚基、色满基、菲啶基或四氢喹啉基。杂环基可以是单环或双环的。术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基，其中所述烷基和杂环基部分独立地任选被取代。
如本文所用，术语“部分不饱和”是指包括至少一个双键或三键的环部分。术语“部分不饱和”旨在涵盖具有多个不饱和位点的环，但不旨在包括如本文所定义的芳基或杂芳基部分。
如本文所述，本发明的化合物可含有“任选取代的”部分。一般来说，无论前面是否有术语“任选”，术语“取代的”均意指指定部分的一个或多个氢被合适的取代基置换。除另指出外，“任选取代的”基团可以在所述基团的每个可取代的位置处具有合适的取代基，并且当在任何给定结构中有多于一个位置可以被多于一个选自指定组的取代基取代时，在每个位置的取代基可以相同或不同。本发明设想的取代基的组合优选为导致形成稳定的或化学上可行的化合物的那些。如本文所用的术语“稳定的”是指当经受允许其生产、检测以及在某些实施方案中其回收、纯化和用于本文公开的一项或多项用途的条件时基本上不改变的化合物。
可取代碳上的每个任选的取代基是独立地选自以下的单价取代基：卤素；–(CH2)0–4Ro；–(CH2)0–4ORo；-O(CH2)0-4Ro、–O–(CH2)0–4C(O)ORo；–(CH2)0–4CH(ORo)2；–(CH2)0–4SRo；可以被Ro取代的–(CH2)0–4Ph；可以被Ro取代的–(CH2)0–4O(CH2)0–1Ph；可以被Ro取代的–CH＝CHPh；可以被Ro取代的–(CH2)0–4O(CH2)0–1-吡啶基；–NO2；–CN；–N3；-(CH2)0–4N(Ro)2；–(CH2)0–4N(Ro)C(O)Ro；–N(Ro)C(S)Ro；–(CH2)0–4N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)C(S)NRo 2；–(CH2)0–4N(Ro)C(O)ORo；–N(Ro)N(Ro)C(O)Ro；-N(Ro)N(Ro)C(O)NRo 2；-N(Ro)N(Ro)C(O)ORo；–(CH2)0–4C(O)Ro；–C(S)Ro；–(CH2)0–4C(O)ORo；–(CH2)0–4C(O)SRo；-(CH2)0–4C(O)OSiRo 3；–(CH2)0–4OC(O)Ro；–OC(O)(CH2)0–4SR–、SC(S)SRo；–(CH2)0–4SC(O)Ro；–(CH2)0–4C(O)NRo 2；–C(S)NRo 2；–C(S)SRo；–SC(S)SRo、-(CH2)0–4OC(O)NRo 2；-C(O)N(ORo)Ro；–C(O)C(O)Ro；–C(O)CH2C(O)Ro；–C(NORo)Ro；-(CH2)0–4SSRo；–(CH2)0–4S(O)2Ro；–(CH2)0–4S(O)2ORo；–(CH2)0–4OS(O)2Ro；–S(O)2NRo 2；–S(O)(NRo)Ro；–S(O)2N＝C(NRo 2)2；-(CH2)0–4S(O)Ro；-N(Ro)S(O)2NRo 2；–N(Ro)S(O)2Ro；–N(ORo)Ro；–C(NH)NRo 2；–P(O)2Ro；-P(O)Ro 2；-OP(O)Ro 2；–OP(O)(ORo)2；SiRo 3；–(C1–4直链或支链亚烷基)O–N(Ro)2；或–(C1–4直链或支链亚烷基)C(O)O–N(Ro)2。
每个Ro独立地为氢、C1–6脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph、-CH2-(5-6元杂芳基环)或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环，或者尽管有上述定义，但两个独立出现的Ro与它们的居间原子合起来形成具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的3–12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环状环，其可以被Ro的饱和碳原子上的选自＝O和＝S的二价取代基取代；或者每个Ro任选被独立地选自以下的单价取代基取代：卤素、–(CH2)0–2R·、–(卤代R·)、–(CH2)0–2OH、–(CH2)0–2OR·、–(CH2)0–2CH(OR·)2；-O(卤代R·)、–CN、–N3、–(CH2)0–2C(O)R·、–(CH2)0–2C(O)OH、–(CH2)0–2C(O)OR·、–(CH2)0–2SR·、–(CH2)0– 2SH、–(CH2)0–2NH2、–(CH2)0–2NHR·、–(CH2)0–2NR· 2、–NO2、–SiR· 3、–OSiR· 3、-C(O)SR·、–(C1–4直链或支链亚烷基)C(O)OR·或–SSR·。
每个R·独立地选自C1–4脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环，且其中每个R·是未取代的，或者在前面有卤代的情况下仅被一个或多个卤素取代；或其中饱和碳上任选的取代基是独立地选自＝O、＝S、＝NNR* 2、＝NNHC(O)R*、＝NNHC(O)OR*、＝NNHS(O)2R*、＝NR*、＝NOR*、–O(C(R* 2))2–3O–或–S(C(R* 2))2–3S–的二价取代基，或与“任选取代的”基团的邻位可取代碳结合的二价取代基是–O(CR* 2)2–3O–，其中每个独立出现的R*选自氢、C1–6脂族基或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环。
当R*是C1–6脂族基时，R*任选被卤素、–R·、-(卤代R·)、-OH、–OR·、–O(卤代R·)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR·、–NH2、–NHR·、–NR· 2或–NO2取代，其中每个R·独立地选自C1–4脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环，且其中每个R·是未取代的，或者在前面有卤代的情况下仅被一个或多个卤素取代。
可取代氮上任选的取代基独立地为 或其中每个/>独立地为氢、C1–6脂族基、未取代的–OPh或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环，或者两个独立出现的/>与它们的居间原子合起来形成具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的未取代的3–12元饱和、部分不饱和或芳基单环或双环状环；其中当/>是C1–6脂族基时，/>任选被卤素、–R·、-(卤代R·)、-OH、–OR·、–O(卤代R·)、–CN、–C(O)OH、–C(O)OR·、–NH2、–NHR·、–NR· 2或–NO2取代，其中每个R·独立地选自C1–4脂族基、–CH2Ph、–O(CH2)0–1Ph或具有0–4个独立地选自氮、氧或硫的杂原子的5–6元饱和、部分不饱和或芳基环，且其中每个R·是未取代的，或者在前面有卤代的情况下仅被一个或多个卤素取代。
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指在合理的医学判断范围内适合与人和低等动物的组织接触使用而没有过度的毒性、刺激、过敏反应等并且与合理的益处/风险比相称的那些盐。药学上可接受的盐是本领域中熟知的。例如，S.M.Berge等人在J.Pharmaceutical Sciences，1977，66，1–19中详细描述了药学上可接受的盐，该文献以引用的方式并入本文。本发明的化合物的药学上可接受的盐包括衍生自合适的无机和有机酸和碱的盐。药学上可接受的无毒酸加成盐的实例有氨基与无机酸如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸或与有机酸如乙酸、草酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸或丙二酸形成的盐，或通过采用本领域中采用的其它方法如离子交换形成的盐。其它药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2–羟基–乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2–萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3–苯基丙酸盐、磷酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。
衍生自适当碱的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N+(C1–4烷基)4盐。代表性的碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等。进一步的药学上可接受的盐在适当时包括使用抗衡离子如卤离子、氢氧根、羧酸根、硫酸根、磷酸根、硝酸根、低级烷基磺酸根和芳基磺酸根形成的无毒铵、季铵和胺阳离子。
除另有说明外，本文描述的结构还意在包括所述结构的所有异构体(例如，对映异构、非对映异构和几何(或构象))形式；例如，对于每个不对称中心的R和S构型、Z和E双键异构体以及Z和E构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构、非对映异构和几何(或构象)混合物均在本发明的范围内。除另有说明外，本发明的化合物的所有互变异构形式均在本发明的范围内。另外，除另有说明外，本文描述的结构还意在包括不同之处仅在于存在一个或多个同位素富集的原子的化合物。例如，具有本发明结构且氢用氘或氚置换或碳用13C或14C富集的碳置换的化合物都在本发明的范围内。这类化合物例如可用作分析工具、生物测定中的探针或根据本发明的治疗剂。
如本文所用，术语“提供的化合物”是指本文阐述的任何MEK抑制剂属、亚属和/或种类。
如本文所用，术语“抑制剂”或“MEK抑制剂”或“MEK拮抗剂”被定义为以可测量的亲和力与MEK结合和/或抑制MEK的化合物。在一些实施方案中，以剂量依赖性方式观察到在MEK抑制剂或MEK拮抗剂存在下的抑制。在一些实施方案中，测得的信号(例如，信号传导活性或生物活性)比在可比较的条件下用阴性对照测得的信号低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或至少约100％。抑制剂的效力通常由其IC50值(半最大抑制浓度或抑制50％的激动剂反应所需的浓度)定义。IC50值越低，拮抗剂的效力就越大，且抑制最大生物反应所需的浓度就越低。在某些实施方案中，抑制剂的IC50和/或结合常数小于约100μM、小于约50μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、小于约10nM或小于约1nM。
如本文所用的术语“可测量的亲和力”和“可测量地抑制”意指包含本发明的化合物或其组合物和MEK的样品与包含MEK但不存在所述化合物或其组合物的等效样品之间MEK活性的可测量的变化或抑制。
如本文所用，术语“有效量”是指足以实现有益或所需结果(例如，治疗、改善、抑制或预防结果)的化合物的量。可以按一次或多次施用、一次或多次施加或一个或多个剂量施用有效量，并且不旨在限于特定制剂或施用途径。
如本文所用，术语“治疗”包括导致病状、疾病、病症等的改善或减轻其症状的任何效果，例如减弱、减少、调节、减轻或消除。在一些实施方案中，可以在一种或多种症状已经出现后施用治疗。在其它实施方案中，可以在没有症状的情况下施用治疗。例如，可以在症状发作之前对易感个体施用治疗(例如，考虑症状史和/或考虑遗传或其它易感因素)。症状已经消退后也可以继续治疗，例如以预防或延迟其复发。
如本文所用的短语“由MEK介导的病症”或“由MEK介导的疾病”或“MEK相关疾病或病症”是指与MEK或MEK活性相关或由MEK或MEK活性介导的疾病或病症。MEK相关疾病或病症的非限制性实例有MEK相关癌症。
如本文所用，术语“药物组合物”是指活性剂与惰性或活性载体的组合，使所述组合物特别适合体内或离体的诊断或治疗用途。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指任何标准药物载体，如磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(例如，如油/水或水/油乳液)以及各种类型的润湿剂。组合物还可以包括稳定剂和防腐剂。关于载体、稳定剂和佐剂的实例，参见例如Martin，Remington’sPharmaceutical Sciences，第15版，Mack Publ.Co.，Easton，PA[1975]。
如本文所用,“非ATP竞争性”或“ATP非竞争性”MEK抑制剂是指这样的MEK的抑制剂，其不在MEK的ATP袋中结合，或不从MEK活性位点置换ATP，并且当与MEK-ATP复合物共结合时可形成直接接触。本发明的化合物的非ATP竞争性抑制可通过本领域公认的方法来证实，如酶学研究、竞争测定、生物物理方法，包括X射线共结晶术。本发明的示例性非ATP竞争性抑制剂以约1nM至约50μM的IC50抑制重组MEK1或MEK2。在一些实施方案中，本发明的示例性非ATP竞争性抑制剂以约1nM至约1000nM、约1μM至约50μM、约1μM至约25μM、约1μM至约10μM、约500nM至约5μM或约10nM至约500nM的IC50抑制重组MEKl或MEK2。
如本文所用的“抑制剂袋”是指在MEK与KSR或BRAF或CRAF之间相互作用的界面处形成的结构，本发明的抑制剂与其接合。
如本文所用，当化合物在活性位点之外(包括例如在激酶的ATP结合位点之外或附近)结合时，本发明的化合物“变构结合抑制剂袋”。
如本文所用，“抑制剂-抑制剂袋复合物”描述这样的物质，其中本发明的抑制剂变构结合在与MEK与KSR之间的生理复合物中的ATP相邻的人MEK(MEK1或MEK2)与Ras的人激酶抑制剂(KSR1、KSR2或KSR同系物BRAF或CRAF)之间的相互作用界面处形成的抑制剂袋。
如本文所用，当抑制剂上的部分“接合”抑制剂袋中的MEK和/或KSR和/或BRAF或CRAF的氨基酸残基时，此相互作用可通过X射线结晶学或类似的结构方法检测到，如冷冻电子显微镜法、NMR或计算机对接(silico docking)，包括片段结合和计算模拟，其表明限定接合的相互作用是抑制剂部分与不超过约(包括例如约/>至约/>或约/>至约/>)的氨基酸残基之间的分离。本文提供的距离允许隐式包含氢原子；然而，氢原子不包括在本发明的结晶学模型中，这是适当的，除非晶体衍射到非常高的分辨率即(即，好于1.5埃)。对蛋白质数据库中所有结构的药物-受体原子对的文献调查使用4-5埃的距离截止值(PMID29308120、26517868、19221587)来评估合理的小分子疏水键合相互作用，并且发现类似于曲美替尼-KSR接触的分子间碳-碳相互作用是蛋白质数据库内代表性最高的药物-受体原子对。关于本发明的抑制剂与MEK-KSR和/或BRAF或CRAF复合物之间的相互作用，基于曲美替尼-KSR相互作用的性质和已知药物-受体复合物的优先性，4埃的接触是合理的。此接触在如由若干独立组(PMID 29308120、26517868、19221587)定义的已知接触的范围内。
3.示例性实施方案的描述：
一方面，本发明提供式(I’)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A选自：
/>
每个独立地代表单键或双键；
每个R1独立地为H、卤素、-CN或任选取代的C1-6脂族基；
X是C、CH或N；
Y是CR6、C(O)或N；
L’是共价键、-O-、-C(R9)2-或-NR8-；
R2、R5和R8中的每一者独立地为H或任选取代的C1-6脂族基；
R3、R4、R6和R9中的每一者独立地为H、卤素或任选取代的C1-6脂族基；
环B是选自以下的任选取代的环：3-8元单环碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-8元单环杂环状环；5-11元双环碳环状环；具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的5-11元双环杂环状环；苯基环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元单环杂芳族环；8-11元双环芳族环；和具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的8-11元双环杂芳族环；
L是共价键或C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-(CH2-CH2-O)1-10-、-S(O)-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-S(O)2-、-C(O)-N(R)-、-S(O)2-N(R)-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换；
每个-Cy-独立地为选自以下的任选取代的环：3-7元碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-7元杂环状环；苯基环；和具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环；
R7是R、-CN、-S(O)2-N(R)2、-NR-S(O)2-R、-P(O)(OR)-N(R)2、-C(＝N-R)-N(R)2、-C(＝N-OR)-N(R)2、-C(O)-R、-S(O)-R、-N(R)2、-OR、-SR或
每个R独立地为H、-CN或任选取代的C1-6脂族基；且
n是0、1、2、3、4或5。
一方面，本发明提供式(I’)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A选自：
每个独立地代表单键或双键；/>
每个R1独立地为H、卤素、-CN或任选取代的C1-6脂族基；
X是C、CH或N；
Y是CR6、C(O)或N；
R2、R3、R4、R5、R6和R8中的每一者独立地为H或任选取代的C1-6脂族基；
环B是选自以下的任选取代的环：3-8元单环碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-8元单环杂环状环；5-11元双环碳环状环；具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的5-11元双环杂环状环；苯基环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元单环杂芳族环；8-11元双环芳族环；和具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的8-11元双环杂芳族环；
L是共价键或C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-(CH2-CH2-O)1-10-、-S(O)-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-S(O)2-、-C(O)-N(R)-、-S(O)2-N(R)-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换；
每个-Cy-独立地为选自以下的任选取代的环：3-7元碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-7元杂环状环；苯基环；和具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环；
R7是R、-CN、-S(O)2-N(R)2、-NR-S(O)2-R、-P(O)(OR)-N(R)2、-C(＝N-R)-N(R)2、-C(＝N-OR)-N(R)2、-C(O)-R、-S(O)-R、-N(R)2、-OR、-SR、或荧光探针；
每个R独立地为H、-CN或任选取代的C1-6脂族基；且
n是0、1、2、3、4或5。
一方面，本发明提供式(I)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A选自：
每个独立地代表单键或双键；
每个R1独立地为H、卤素、-CN或任选取代的C1-6脂族基；
X是C或N；
Y是CR6、C(O)或N；
R2、R3、R4、R5和R6中的每一者独立地为H或任选取代的C1-6脂族基；
环B是选自以下的任选取代的环：苯基环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环；8-10元双环芳族环；和具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的8-10元双环杂芳族环；
L是共价键或C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换；
每个-Cy-独立地为选自以下的任选取代的环：3-7元碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-7元杂环状环；苯基环；和具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环；
R7是-CN、-S(O)2-N(R)2、-NR-S(O)2-R、-P(O)(OR)-N(R)2、-C(＝N-R)-N(R)2、-C(＝N-OR)-N(R)2、-C(O)-R、-N(R)2、-OR、-SR或
每个R独立地为H、-CN或任选取代的C1-6脂族基；且
n是0、1、2、3、4或5。
如上文一般所定义，环A是选自以下的任选取代的6元环：其中R3和R4中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。
在一些实施方案中，环A是选自以下的任选取代的6元环：其中R3和R4中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。
在一些实施方案中，环A是选自以下的任选取代的6元环：其中R3和R4中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。
在一些实施方案中，环A是其中R3和R4中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，环A是/>/>
在一些实施方案中，环A是其中R3和R4中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，环A是/>
在一些实施方案中，环A是其中R3如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，环A是/>
在一些实施方案中，环A是
在一些实施方案中，环A是其中R3和R4中的每一者如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，环A是/>
在一些实施方案中，环A选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，每个独立地代表单键或双键；
在一些实施方案中，代表单键。在一些实施方案中，/>代表双键。
在一些实施方案中，选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，R1是H、卤素、-CN或任选取代的C1-6脂族基。
在一些实施方案中，R1是H。
在一些实施方案中，R1是卤素。在一些实施方案中，R1是F。在一些实施方案中，R1是Cl。在一些实施方案中，R1是Br。在一些实施方案中，R1是I。
在一些实施方案中，R1是-CN。
在一些实施方案中，R1是任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R1是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R1是被卤素取代1-6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R1是被卤素取代1-6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R1是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，R1是环丙基。在一些实施方案中，R1是-CH＝CH。在一些实施方案中，R1是-C≡CH。在一些实施方案中，R1是-C≡C-CH3。在一些实施方案中，R1是-CH2F、-CHF2或-CF3。
在一些实施方案中，R1选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，X是C或N。
在一些实施方案中，X是C。在一些实施方案中，X是CH。在一些实施方案中，X是N。
在一些实施方案中，X选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，Y是CR6、C(O)或N。
在一些实施方案中，Y是CR6，其中R6如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，Y是C(O)。在一些实施方案中，Y是N。
在一些实施方案中，Y选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，L’是共价键、-O-、-C(R9)2-或-NR8-，其中R8如本文的实施方案中所定义和描述。
在一些实施方案中，L’是共价键。在一些实施方案中，L’是-O-。在一些实施方案中，L’是-C(R9)2-。在一些实施方案中，L’是-CH2-。在一些实施方案中，L’是-NR8-。在一些实施方案中，L’是-NH-。
在一些实施方案中，L’选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，R2、R3、R4、R5和R6中的每一者独立地为H或任选取代的C1-6脂族基。
在一些实施方案中，R2是H或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R2是H。在一些实施方案中，R2是任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R2是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R2是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R2是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R2是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R2是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R2是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，R2是环丙基。在一些实施方案中，R2是-CH＝CH2。在一些实施方案中，R2是-C≡CH。在一些实施方案中，R2是-C≡C-CH3。在一些实施方案中，R2是-CH2F、-CHF2或-CF3。
在一些实施方案中，R3是H、卤素或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R3是H或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R3是H。在一些实施方案中，R3是卤素。在一些实施方案中，R3是-F。在一些实施方案中，R3是-Cl。在一些实施方案中，R3是-I。在一些实施方案中，R3是任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R3是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R3是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R3是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R3是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R3是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R3是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，R3是环丙基。在一些实施方案中，R3是-CH＝CH2。在一些实施方案中，R3是-C≡CH。在一些实施方案中，R3是-C≡C-CH3。在一些实施方案中，R3是-CH2F、-CHF2或-CF3。
在一些实施方案中，R4是H、卤素或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R4是H或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R4是H。在一些实施方案中，R4是卤素。在一些实施方案中，R4是-F。在一些实施方案中，R4是-Cl。在一些实施方案中，R4是-I。在一些实施方案中，R4是任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R4是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R4是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R4是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R4是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R4是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R4是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，R4是环丙基。在一些实施方案中，R4是-CH＝CH2。在一些实施方案中，R4是-C≡CH。在一些实施方案中，R4是-C≡C-CH3。在一些实施方案中，R4是-CH2F、-CHF2或-CF3。
在一些实施方案中，R5是H或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R5是H。在一些实施方案中，R5是任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R5是任选取代的3、4、5或6元饱和或不饱和碳环基。在一些实施方案中，R5是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R5是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R5是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R5是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R5是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R5是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，R5是环丙基。在一些实施方案中，R5是-CH＝CH2。在一些实施方案中，R5是-C≡CH。在一些实施方案中，R5是-C≡C-CH3。在一些实施方案中，R5是-CH2F、-CHF2或-CF3。在一些实施方案中，R5是在一些实施方案中，R5是
在一些实施方案中，R6是H、卤素或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R6是H或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R6是H。在一些实施方案中，R6是卤素。在一些实施方案中，R6是-F。在一些实施方案中，R6是-Cl。在一些实施方案中，R6是-I。在一些实施方案中，R6是任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R6是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R6是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R6是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R6是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R6是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R6是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，R6是环丙基。在一些实施方案中，R6是-CH＝CH2。在一些实施方案中，R6是-C≡CH。在一些实施方案中，R6是-C≡C-CH3。在一些实施方案中，R6是-CH2F、-CHF2或-CF3。
在一些实施方案中，R8是H或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R8是H。在一些实施方案中，R8是任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R8是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R8是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R8是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R8是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R8是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R8是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，R8是环丙基。在一些实施方案中，R8是-CH＝CH2。在一些实施方案中，R8是-C≡CH。在一些实施方案中，R8是-C≡C-CH3。在一些实施方案中，R8是-CH2F、-CHF2或-CF3。在一些实施方案中，R8选自下表1中描述的那些。
在一些实施方案中，R9是H、卤素或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R9是H或任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R9是H。在一些实施方案中，R9是卤素。在一些实施方案中，R9是-F。在一些实施方案中，R9是-Cl。在一些实施方案中，R9是-I。在一些实施方案中，R9是任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R9是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R9是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R9是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R9是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R9是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R9是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，R9是环丙基。在一些实施方案中，R9是-CH＝CH2。在一些实施方案中，R9是-C≡CH。在一些实施方案中，R9是-C≡C-CH3。在一些实施方案中，R9是-CH2F、-CHF2或-CF3。在一些实施方案中，R9选自下表1中描述的那些。
在一些实施方案中，R2、R3、R4、R5和R6中的每一者独立地选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，环B是选自以下的任选取代的环：苯基环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环；8-10元双环芳族环；和具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的8-10元双环杂芳族环。
在一些实施方案中，环B是选自以下的任选取代的环：3-8元单环碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-8元单环杂环状环；5-11元双环碳环状环；具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的5-11元双环杂环状环；苯基环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元单环杂芳族环；8-11元双环芳族环；和具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的8-11元双环杂芳族环。
在一些实施方案中，环B是任选取代的苯基环。
在一些实施方案中，环B是具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的5-6元杂芳族环。在一些实施方案中，环B是具有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的5元杂芳族环。在一些实施方案中，环B是选自的任选取代的5元杂芳族环。在一些实施方案中，环B选自被甲基取代的/>在一些实施方案中，环B是选自/>的任选取代的5元杂芳族环。在一些实施方案中，环B是具有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的6元杂芳族环。在一些实施方案中，环B是选自/> 的任选取代的6元杂芳族环。
在一些实施方案中，环B是任选取代的8、9或10元双环芳族环。在一些实施方案中，环B是任选取代的11元双环芳族环。
在一些实施方案中，环B是具有1、2、3、4或5个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的8、9或10元双环杂芳族环。在一些实施方案中，环B是具有1、2、3、4或5个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的11元双环杂芳族环。在一些实施方案中，环B是具有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的9元双环杂芳族环。在一些实施方案中，环B是具有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的11元双环杂芳族环。
在一些实施方案中，环B是选自/>
的任选取代的9元双环杂芳族环。在一些实施方案中，环B是选自
的任选取代的9元双环杂芳族环。在一些实施方案中，环B是选自
的任选取代的9元双环杂芳族环。在一些实施方案中，环B是选自
的任选取代的9元双环杂芳族环。在一些实施方案中，环B是选自/> 的任选取代的11元双环杂芳族环。
在一些实施方案中，环B是任选取代的3、4、5、6、7或8元单环碳环状环。在一些实施方案中，环B是
在一些实施方案中，环B是具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的3、4、5、6、7或8元单环杂环状环。在一些实施方案中，环B是
在一些实施方案中，环B是任选取代的5、6、7、8、9、10或11元双环碳环状环。在一些实施方案中，环B是
在一些实施方案中，环B是具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的5、6、7、8、9、10或11元双环杂环状环。在一些实施方案中，环B是
在一些实施方案中，环B被卤素取代1-2次。在一些实施方案中，环B被R取代1-2次，其中每个R独立地如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，R是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R是被卤素取代1-6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R是被卤素取代1-6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，R是环丙基。在一些实施方案中，R是-CH＝CH2。在一些实施方案中，R是-C≡CH。在一些实施方案中，R是-C≡C-CH3。在一些实施方案中，R是-CH2F、-CHF2或-CF3。
在一些实施方案中，环B选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，L是共价键或C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换，其中R和-Cy-中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。
在一些实施方案中，L是共价键或C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-(CH2-CH2-O)1-10-、-S(O)-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-S(O)2-、-C(O)-N(R)-、-S(O)2-N(R)-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换。
在一些实施方案中，L是共价键。
在一些实施方案中，L是C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换，其中R和-Cy-中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，L是C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-N(R)-、-CH(R)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换，其中R和-Cy-中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，R是氢。在一些实施方案中，R是甲基。在一些实施方案中，R是-CN。在一些实施方案中，L是C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-(CH2-CH2-O)1-10-、-S(O)-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-S(O)2-、-C(O)-N(R)-、-S(O)2-N(R)-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换，其中R和-Cy-中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，L是C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-N(R)-、-CH(R)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-(CH2-CH2-O)1-10-、-S(O)-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-S(O)2-、-C(O)-N(R)-、-S(O)2-N(R)-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换，其中R和-Cy-中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。部分-(CH2-CH2-O)1-10-可以是-CH2-CH2-O-、-(CH2-CH2-O)2-、-(CH2-CH2-O)3-、-(CH2-CH2-O)4-、-(CH2-CH2-O)5-、-(CH2-CH2-O)6-、-(CH2-CH2-O)7-、-(CH2-CH2-O)8-、-(CH2-CH2-O)9-或-(CH2-CH2-O)10-。
在一些实施方案中，L是C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换，其中R和-Cy-中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，L是C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-N(R)-、-CH(R)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换，其中R和-Cy-中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，R是氢。在一些实施方案中，R是甲基。在一些实施方案中，R是-CN。在一些实施方案中，L是C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-(CH2-CH2-O)1-10-、-S(O)-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-S(O)2-、-C(O)-N(R)-、-S(O)2-N(R)-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换，其中R和-Cy-中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。在一些实施方案中，L是C1-6二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-N(R)-、-CH(R)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-(CH2-CH2-O)1-10-、-S(O)-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-S(O)2-、-C(O)-N(R)-、-S(O)2-N(R)-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换，其中R和-Cy-中的每一者独立地如本文的实施方案中所定义和描述。
在一些实施方案中，L选自-CH2-、-NH-、-S(O)2-、-NH-S(O)2-、-CH2-S(O)2-、-CH2-P(O)(OH)-、-CH(CF3)-、-CH(CF3)-S(O)2-、-NH-C(O)-NH-、-NH-C(O)-、-O-、-O-S(O)2-、
在一些实施方案中，L选自-NH-S(O)-、-N(CH3)-、/>
在一些实施方案中，L选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，每个-Cy-独立地为选自以下的任选取代的环：3-7元碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-7元杂环状环；苯基环；和具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环。
在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的3、4、5、6或7元碳环状环。
在一些实施方案中，-Cy-是具有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的3、4、5、6或7元杂环状环。在一些实施方案中，-Cy-是 在一些实施方案中，-Cy-是/>
在一些实施方案中，-Cy-是任选取代的苯基环。
在一些实施方案中，-Cy-是具有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的5或6元杂芳族环。在一些实施方案中，-Cy-是
在一些实施方案中，-Cy-选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，R7是-CN、-S(O)2-N(R)2、-NR-S(O)2-R、-P(O)(OR)-N(R)2、-C(＝N-R)-N(R)2、-C(＝N-OR)-N(R)2、-C(O)-R、-N(R)2、-OR、-SR或其中每个R独立地如本文的实施方案中所定义和描述。
在一些实施方案中，R7是R、-CN、-S(O)2-N(R)2、-NR-S(O)2-R、-P(O)(OR)-N(R)2、-C(＝N-R)-N(R)2、-C(＝N-OR)-N(R)2、-C(O)-R、-S(O)-R、-N(R)2、-OR、-SR或
在一些实施方案中，R7是如本文的实施方案中所定义和描述的R。在一些实施方案中，R7是-CN。在一些实施方案中，R7是-S(O)2-N(R)2。在一些实施方案中，R7是-S(O)2-NHR。在一些实施方案中，R7是-NR-S(O)2-R。在一些实施方案中，R7是-NH-S(O)2-R。在一些实施方案中，R7是-P(O)(OR)-N(R)2。在一些实施方案中，R7是-P(O)(OH)-N(R)2。在一些实施方案中，R7是-P(O)(OR)-NHR。在一些实施方案中，R7是-P(O)(OH)-NHR。在一些实施方案中，R7是-C(＝N-R)-N(R)2。在一些实施方案中，R7是-C(＝N-R)-NHR。在一些实施方案中，R7是-C(＝N-H)-N(R)2。在一些实施方案中，R7是-C(＝N-CN)-N(R)2。在一些实施方案中，R7是-C(＝N-H)-NHR。在一些实施方案中，R7是-C(＝N-CN)-NHR。在一些实施方案中，R7是-C(＝N-OR)-N(R)2。在一些实施方案中，R7是-C(＝N-OR)-NHR。在一些实施方案中，R7是-C(＝N-OH)-NHR。在一些实施方案中，R7是-C(O)-R。在一些实施方案中，R7是-S(O)-R。在一些实施方案中，R7是-N(R)2。在一些实施方案中，R7是-NHR。在一些实施方案中，R7是-OR。在一些实施方案中，R7是-SR。在一些实施方案中，R7是在一些实施方案中，R7是/>在一些实施方案中，R7是/>在一些实施方案中，R是氢。在一些实施方案中，R是甲基。在一些实施方案中，R是-CN。
在一些实施方案中，R7选自-CN、-NH2、-OH、-NHCH3、 -C(O)-CH3、 在一些实施方案中，R7是-S(O)-CH3、-O-C(CH3)3、/>在一些实施方案中，R7是在一些实施方案中，R7是/> 在一些实施方案中，R7是/>在一些实施方案中，R7是荧光探针，包括例如/>
在一些实施方案中，R7选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，每个R独立地为H、-CN或任选取代的C1-6脂族基。
在一些实施方案中，R是H。在一些实施方案中，R是-CN。
在一些实施方案中，R是任选取代的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R是任选取代的C1-6烷基。在一些实施方案中，R是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R是被卤素取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6脂族基。在一些实施方案中，R是被-OH取代1、2、3、4、5或6次的C1-6烷基。在一些实施方案中，R是甲基、乙基、丙基或异丙基。在一些实施方案中，R是环丙基。在一些实施方案中，R是-CH＝CH2。在一些实施方案中，R是-C≡CH。在一些实施方案中，R是-C≡C-CH3。在一些实施方案中，R是-CH2F、-CHF2或-CF3。
在一些实施方案中，R选自下表1中描述的那些。
如上文一般所定义，n是0、1、2、3、4或5。
在一些实施方案中，n是0。在一些实施方案中，n是1。在一些实施方案中，n是2。在一些实施方案中，n是3。在一些实施方案中，n是4。在一些实施方案中，n是5。
在一些实施方案中，R选自下表1中描述的那些。
在一些实施方案中，本发明提供式(II)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个变量单独和组合地如上文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供选自式(II-a)至(II-o)的化合物：
/>
或其药学上可接受的盐，其中每个变量单独和组合地如上文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供式(III)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个变量单独和组合地如上文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供选自式(III-a)至(III-e)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个变量单独和组合地如上文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供式(IV)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个变量单独和组合地如上文所定义和本文的实施方案中所描述。
在一些实施方案中，本发明提供选自式(IV-a)至(IV-e)的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中每个变量单独和组合地如上文所定义和本文的实施方案中所描述。
表1：示例性化合物。
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在一些实施方案中，本发明提供上表1中列出的化合物或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，本发明提供选自如本文的实施例中所述的原料、中间体和产物的化合物或其盐。
4.提供本发明化合物的一般方法：
本发明的化合物一般来说可以通过本领域技术人员已知的类似化合物的合成和/或半合成方法以及通过本文实施例中详细描述的方法制备或分离。
在下面的方案中，在描述了特定的保护基团(“PG”)、离去基团(“LG”)或转化条件的情况下，本领域普通技术人员将会了解，其它保护基团、离去基团和转化条件也是合适的，并且被考虑。以下文献中详细描述了这类基团和转化：March's Advanced OrganicChemistry:Reactions，Mechanisms，and Structure，M.B.Smith和J.March，第5版，JohnWiley&Sons，2001；Comprehensive Organic Transformations，R.C.Larock，第2版，JohnWiley&Sons，1999；和Protecting Groups in Organic Synthesis，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，第3版，John Wiley&Sons，1999，上述文献中的每一者的全部内容特此以引用的方式并入本文。
如本文所用，短语“离去基团”(LG)包括但不限于卤素(例如，氟化物、氯化物、溴化物、碘化物)、磺酸酯(例如，甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、苯磺酸酯、对溴苯磺酸酯、对硝基苯磺酸酯、三氟甲磺酸酯)、重氮鎓等。
如本文所用，短语“氧保护基团”包括例如羰基保护基团、羟基保护基团等。羟基保护基团是本领域中熟知的，并且包括以下文献中详述的那些：Protecting Groups inOrganic Synthesis，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，第3版，John Wiley&Sons，1999；和PhilipKocienski，“Protecting Groups”，Georg Thieme Verlag Stuttgart，New York，1994，上述文献的全部内容以引用的方式并入本文。合适的羟基保护基团的实例包括但不限于酯、烯丙基醚、醚、甲硅烷基醚、烷基醚、芳基烷基醚和烷氧基烷基醚。这类酯的实例包括甲酸酯、乙酸酯、碳酸酯和磺酸酯。具体实例包括甲酸酯、甲酸苯甲酰酯、氯乙酸酯、三氟乙酸酯、甲氧基乙酸酯、三苯基甲氧基乙酸酯、对氯苯氧基乙酸酯、3-苯基丙酸酯、4-氧代戊酸酯、4,4-(亚乙基二硫代)戊酸酯、新戊酸酯(三甲基乙酰基)、巴豆酸酯、4-甲氧基-巴豆酸酯、苯甲酸酯、对苄基苯甲酸酯、2,4,6-三甲基苯甲酸酯、碳酸酯如甲基、9-芴基甲基、乙基、2,2,2-三氯乙基、2-(三甲基甲硅烷基)乙基、2-(苯基磺酰基)乙基、乙烯基、烯丙基和对硝基苄基。这类甲硅烷基醚的实例包括三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基及其它三烷基甲硅烷基醚。烷基醚包括甲基、苄基、对甲氧基苄基、3,4-二甲氧基苄基、三苯甲基、叔丁基、烯丙基和烯丙氧基羰基醚或衍生物。烷氧基烷基醚包括缩醛，如甲氧基甲基、甲硫基甲基、(2-甲氧基乙氧基)甲基、苄氧基甲基、β-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基和四氢吡喃基醚。芳基烷基醚的实例包括苄基、对甲氧基苄基(MPM)、3,4-二甲氧基苄基、O-硝基苄基、对硝基苄基、对卤代苄基、2,6-二氯苄基、对氰基苄基以及2-和4-吡啶甲基。
氨基保护基团是本领域中熟知的，并且包括以下文献中详述的那些：ProtectingGroups in Organic Synthesis，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，第3版，John Wiley&Sons，1999；和Philip Kocienski，“Protecting Groups”，Georg Thieme Verlag Stuttgart，NewYork，1994，上述文献的全部内容以引用的方式并入本文。合适的氨基保护基团包括但不限于芳烷基胺、氨基甲酸酯、环状酰亚胺、烯丙胺、酰胺等。这类基团的实例包括叔丁氧基羰基(BOC)、乙氧基羰基、甲氧基羰基、三氯乙氧基羰基、烯丙氧基羰基(Alloc)、苄基氧代羰基(CBZ)、烯丙基、邻苯二甲酰亚胺、苄基(Bn)、芴基甲基羰基(Fmoc)、甲酰基、乙酰基、氯乙酰基、二氯乙酰基、三氯乙酰基、苯基乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基等。
本领域技术人员将了解，本发明的化合物中存在的各种官能团如脂族基团、醇、羧酸、酯、酰胺、醛、卤素和腈可通过本领域中熟知的技术相互转化，包括但不限于还原、氧化、酯化、水解、部分氧化、部分还原、卤化、脱水、部分水合和水合。参见例如“March’sAdvanced Organic Chemistry”，第5版，编辑：Smith，M.B.和March，J.,，John Wiley&Sons，New York:2001，该文献的全部内容以引用的方式并入本文。这类相互转化可能需要一种或多种前述技术，并且下文描述了合成本发明的化合物的某些方法。
一方面，通常根据下面列出的方案1来制备本发明的某些式I的化合物或其盐：
方案1.
在上面的方案1中，LG是离去基团，并且例如R1、R2、R3、R4、R5、R7、L、n和环B的变量中的每一者单独和组合地如上文所定义和本文的实施方案中所描述。
一般如方案1中所示，例如通过与三光气和R5-NH2反应将原料化合物A转化为化合物B。然后将化合物B转化为化合物C，例如通过与和乙酸酐缩合形成环。化合物C例如通过与POCl3和R3NH2反应被还原为化合物D。化合物D可例如通过如下方式转化为化合物E：与/>反应，接着活化所得醇以形成离去基团，例如通过使所得醇与TsCl和碱反应。化合物E然后例如通过与/>的偶联反应被转化为化合物F。化合物F可例如在碱性条件下经历重排，得到化合物G。化合物G然后例如通过与L-R7反应被转化为化合物H。
在一些实施方案中，本发明提供如上述方案1中描述的合成方法。在一些实施方案中，本发明提供如上述方案1中描述的由化合物A制备化合物B的方法。在一些实施方案中，本发明提供如上述方案1中描述的由化合物B制备化合物C的方法。在一些实施方案中，本发明提供如上述方案1中描述的由化合物C制备化合物D的方法。在一些实施方案中，本发明提供如上述方案1中描述的由化合物D制备化合物E的方法。在一些实施方案中，本发明提供如上述方案1中描述的由化合物E制备化合物F的方法。在一些实施方案中，本发明提供如上述方案1中描述的由化合物F制备化合物G的方法。在一些实施方案中，本发明提供如上述方案1中描述的由化合物G制备化合物H的方法。
在一些实施方案中，本发明提供选自化合物A、化合物B、化合物C、化合物D、化合物E、化合物F、化合物G和化合物H的化合物，其中每个变量单独和组合地如上文所定义和本文的实施方案中所描述。
5.用途、制剂和施用：
药学上可接受的组合物
根据另一实施方案，本发明提供包含本发明的化合物或其药学上可接受的衍生物和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物的药物组合物。本发明的组合物中的化合物的量是有效地以可测量的方式抑制生物样品中或患者中的MEK或其变体或突变体的量。在某些实施方案中，本发明的组合物中的化合物的量是有效地以可测量的方式抑制生物样品中或患者中的MEK或其变体或突变体的量。在某些实施方案中，本发明的组合物被配制成用于对需要这种组合物的患者施用。在一些实施方案中，本发明的组合物被配制成用于对患者口服施用。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”可互换使用，并且是指要通过本发明的方法治疗的生物体。这类生物体优选包括但不限于哺乳动物(例如，鼠科动物、猿类、马科动物、牛科动物、猪科动物、犬科动物、猫科动物等)，并且最优选人类。
术语“药学上可接受的载体、佐剂或媒介物”是指不破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载体、佐剂或媒介物。本发明的组合物中可以使用的药学上可接受的载体、佐剂或媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白如人血清白蛋白、缓冲物质如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。
“药学上可接受的衍生物”意指本发明的化合物的任何无毒盐、酯、酯的盐或其它衍生物，其一旦施用于接受者就能够直接或间接地提供本发明的化合物或其活性代谢物或残留物。
如本文所用，术语“其活性代谢物或残留物”意指其代谢物或残留物也抑制MEK或其变体或突变体。
本发明的组合物可以口服、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入的储库施用。如本文所用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，口服、腹膜内或静脉内施用组合物。本发明的组合物的无菌可注射形式可以是水性或油质悬浮液。可以根据本领域中已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制这些悬浮液。无菌可注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。在可以使用的可接受的媒介物和溶剂当中有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发油常规用作溶剂或悬浮介质。
为此目的，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，比如天然的药学上可接受的油，如橄榄油或蓖麻油，特别是它们的聚氧乙基化形式。这些油溶液或悬浮液也可含有长链醇稀释剂或分散剂，如羧甲基纤维素或常用于配制药学上可接受的剂型(包括乳液和悬浮液)的类似分散剂。其他通常使用的表面活性剂，如Tween、Span和通常用于制造药学上可接受的固体、液体或其他剂型的其他乳化剂或生物利用度增强剂也可用于达成制剂的目的。
本发明的药学上可接受的组合物可以以任何口服可接受的剂型口服施用，包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于口服使用的片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，如硬脂酸镁。对于以胶囊形式口服施用，有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当口服使用需要水性悬浮液时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂合并。如果需要，还可以添加某些甜味剂、调味剂或着色剂。
或者，可以以用于直肠施用的栓剂形式施用本发明的药学上可接受的组合物。这些可以通过将药剂与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体，但在直肠温度下为液体，因此将在直肠中融化以释放药物。这类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
也可以局部施用本发明的药学上可接受的组合物，特别是当治疗目标包括易于通过局部应用可及的区域或器官时，包括眼睛、皮肤或下肠道的疾病。对于这些区域或器官中的每一者，很容易制备合适的局部制剂。
可以以直肠栓剂制剂(参见上文)或以合适的灌肠剂制剂实现用于下肠道的局部应用。也可以使用局部透皮贴剂。
对于局部应用，可以将所提供的药学上可接受的组合物配制在合适的油膏中，所述油膏含有悬浮或溶解在一种或多种载体中的活性组分。用于局部施用本发明的化合物的载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，可将所提供的药学上可接受的组合物配制在合适的洗剂或乳膏中，所述洗剂或乳膏含有悬浮或溶解在一种或多种药学上可接受的载体中的活性组分。合适的载体包括但不限于矿物油、失水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苄醇和水。
对于眼科用途，可以将所提供的药学上可接受的组合物配制为在等渗、pH经调节的无菌盐水中的微粉化悬浮液，或者优选配制为在等渗、pH经调节的无菌盐水中的溶液，有或没有防腐剂，如苯扎氯铵。或者，对于眼科用途，可以将药学上可接受的组合物配制在油膏如凡士林中。
也可以通过鼻用气雾剂或吸入施用本发明的药学上可接受的组合物。这类组合物根据药物制剂领域中熟知的技术制备，并且可以使用苄醇或其它合适的防腐剂、吸收促进剂(以提高生物利用度)、碳氟化合物和/或其它常规的增溶剂或分散剂制备成在盐水中的溶液。
最优选地，将本发明的药学上可接受的组合物配制成用于口服施用。这类制剂可以与或不与食物一起施用。在一些实施方案中，不与食物一起施用本发明的药学上可接受的组合物。在其它实施方案中，与食物一起施用本发明的药学上可接受的组合物。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的组合物的本发明的化合物的量将根据所治疗的宿主、特定的施用方式而变化。优选地，应配制所提供的组合物，使得可以将0.01-100mg/kg体重/天之间剂量的抑制剂施用给接受这些组合物的患者。
还应当理解的是，对于任何特定患者的具体剂量和治疗方案取决于多种因素，包括所使用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄速率、药物组合以及治疗医生的判断和所治疗的特定疾病的严重程度。组合物中本发明的化合物的量还取决于组合物中的特定化合物。
化合物和药学上可接受的组合物的用途
在一些实施方案中，本发明提供使用如本文所述的化合物来治疗与MEK相关的疾病或病症的方法。在一些实施方案中，与MEK相关的疾病或病症是增殖性病症。在一些实施方案中，与MEK相关的疾病或病症是癌症。在一些实施方案中，与MEK相关的疾病或病症是如本文所述的癌症。
在一些方面和实施方案中，本文提供了治疗疾病或病症或疾病或病症的一种或多种症状、降低其严重程度、延迟其发作或抑制其进展的方法，所述疾病或病症以增加的MEK表达和/或增加的MEK活性为特征或与之相关，包括对有需要的患者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。在一些方面和实施方案中，本文提供了治疗其中抑制或拮抗MEK活性是有益的疾病或病症或疾病或病症的一种或多种症状、降低其严重程度、延迟其发作或抑制其进展的方法，包括对有需要的患者施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。
在一些实施方案中，如本文所述的化合物是“ATP非竞争性MEK抑制剂”，其稳定或“粘贴”MEK与KSR之间形成的复合物和/或BRAF/CRAF。在一些实施方案中，如本文所述的化合物变构结合在与MEK与KSR之间的生理复合物(或BRAF或CRAF)中的ATP相邻的人MEK(MEK1或MEK2)与Ras的人激酶抑制剂(KSR1或KSR2或KSR同系物BRAF或CRAF)之间的相互作用界面处形成的“抑制剂袋”，从而形成抑制剂-抑制剂袋复合物。在一些实施方案中，如本文所述的化合物是ATP非竞争性激酶抑制剂。在一些实施方案中，如本文所述的化合物具有这样的结构，使得当与抑制剂-抑制剂袋复合物结合时，所述复合物包含如下结构元件：(a)抑制剂的接合hKSR1的A825或hKSR2的P878或BRAF的R662或CRAF的R554的至少一个部分，(b)至少一个接合hMEK1的R234或hMEK2的R238的部分，其中R234距离hKSR1或hKSR2或BRAF或CRAF的任何原子在约至约/>以内。本文所述的复合物(包括例如MEK和KSR(或BRAF或CRAF)复合物和抑制剂-抑制剂袋复合物)的结构可见于WO 2021142345，该专利文献的内容以引用的方式整体并入本文。人MEK1、人MEK2、人KSR1、人KSR2、人BRAF和人CRAF的参考Uniprot序列分别为Uniprot ID Q02750、Uniprot ID P36507、Uniprot ID Q8IVT5、Uniprot IDQ6VAB6、Uniprot ID P15056和Uniprot ID P04049。
在一些实施方案中，如本文所述的化合物不接合hMEK1中的I216或hMEK2中的I220和KSR1中的A825或KSR2中的P878中的一者或多者。在一些实施方案中，如本文所述的化合物包含根据如上段中所述的(a)的结构元件，其是H-键受体，尤其是氧或氮原子或连接于芳族环的氟原子，或者是H键供体。在一些实施方案中，如本文所述的化合物包含根据如上段中所述的(a)的结构元件，其是接头的直接或通过水介导的接触接合hKSR1的A825或hKSR2的P878或hBRAF的R662或CRAF的R554的主链的部分。
在一些实施方案中，如本文所述的化合物包含以下中的一者或多者：
(c)至少一个接合hMEK1的M230或hMEK2的M234的部分，其中M230或M234距离KSR1的A825的末端原子(CB)或hKSR2的P878的(CG)或hBRAF的(CG)N661或CRAF的N553在约至约/>以内；
(d)至少一个部分是通过水介导的接触接合hKSR1的N823或hKSR2的T876的主链羰基或直接接合hBRAF的R662或hCRAF的R554的主链氨基的H-键受体或供体；
(e)至少一个接合hKSR1的Q824或hKSR2的Q877或hBRAF的Q664或hCRAF的Q556的部分；
(f)至少一个接合hKSR1的A826或hKSR2的A879或BRAF的R662或CRAF的R554的侧链原子的部分；
(g)至少一个部分是接合hMEK1的M143或hMEK2的M147的杂芳基；
(h)至少一个部分是接合hMEK1的F209或hMEK2的F213的杂芳基；
(i)至少一个部分(尤其是H-键受体)接合hMEK1的S212或hMEK2的S216的主链氨基；
(j)至少一个接合hMEK1的L215或hMEK2的L219的部分；
(k)至少一个接合hMEK1的I216或hMEK2的I220的部分；和
(l)至少一个接合hMEK1的M219或hMEK2的M223的部分，其中hMEK1残基215-219采取螺旋构象。
在一些实施方案中，对应于如上所述的(c)的部分选自取代或未取代的烷基或环烷基。
在一些实施方案中，如本文所述的化合物的主链CO残基与hKSR2的T876或hKSR1的N823接合。
在一些实施方案中，如本文所述的化合物与结合袋接合，所述结合袋以hMEK1残基R234和M230或hMEK2残基R238和M234以及KSR2的P877或KSR1的A825或BRAF的R662或CRAF的R554为内衬。
在一些实施方案中，如本文所述的化合物经由多个氢键接触与结合袋接合，包括通过水介导的与hMEK1中的Arg189和Arg234或hMEK2的ARG193和A238的H-键，以及与BRAF的Arg662或CRAF的ARG 554的前螺旋αG环-NH-的主链的直接H-键。
在一些实施方案中，如本文所述的化合物接合hKSR1的A825或hKSR2的P878或BRAF的R662或CRAF的R554。在一些实施方案中，如本文所述的化合物与选自hKSR1的A825、hKSR2的P878以及BRAF的R662和CRAF的R554的至少一个部分的距离小于或等于约至约/>
因此，在一些方面和实施方案中，本发明提供了治疗一种或多种病症、疾病和/或疾患的方法，其中所述病症、疾病或疾患包括但不限于细胞增殖性病症，包括对有需要的患者施用如本文所述的MEK抑制剂化合物或其药用盐或组合物。在一些实施方案中，所述细胞增殖性病症是癌症。在一些实施方案中，所述癌症的特征在于MEK表达增加和/或MEK活性增加，即“激活的MEK增加”。
如本文所用，术语“增加的”、“升高的”或“增强的”可互换使用，并且涵盖生物功能和/或生物活性和/或浓度的任何可测量的增加。例如，相对于对照或功能或活性或浓度的基线量，增加可以为至少约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约100％、约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约6倍、约7倍、约8倍、约9倍、约10倍、约20倍、约25倍、约50倍、约100倍或更高。
如本文所用，术语样品或癌症或患者中的物质(如MEK)的“增加的表达”和/或“增加的活性”是指如通过本领域中已知的技术所确定，相对于一个或多个对照样品如未罹患疾病或病症(例如，癌症)的个体或个体组或内部对照中的所述物质(如MEK)的量，所述物质(如MEK)的量增加约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约100％、约2倍、约3倍、约4倍、约5倍、约6倍、约7倍、约8倍、约9倍、约10倍、约20倍、约25倍、约50倍、约100倍或更高。如果相对于对照组样品或基线组样品或患者样品的回顾性分析中的MEK的平均值(平均)或中值量，MEK的表达和/或活性增加一个标准差、两个标准差、三个标准差、四个标准差、五个标准差或更多，则也可以确定受试者的MEK的“表达增加”或“活性增加”。如本领域中所实践的那样，这类对照或基线表达水平可以在先前确定，或者在样品或癌症或受试者中进行测量之前测量，或者可得自这类对照样品的数据库。
癌症
在一些实施方案中，本发明提供治疗或预防患者的癌症或降低患者的癌症风险的方法，包括对患者施用本发明的化合物或其药学上可接受的盐或其药物组合物。
如本文所用的“癌症”是指以体内异常细胞不受控制的生长为特征的一大类各种疾病。不受调控的细胞分裂以及生长分裂和生长导致恶性肿瘤的形成，所述恶性肿瘤侵入邻近组织，并且还可能通过淋巴系统或血流转移到身体的远处部位。
要利用本文所述的化合物和方法及用途治疗的癌症或增殖性病症或肿瘤包括但不限于血液学癌症、淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、神经系统癌症、皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、肺癌、头颈癌、胃肠癌、肝癌、胰腺癌、泌尿生殖系统癌、骨癌、肾癌和血管癌。在一些实施方案中，肺癌选自由非小细胞肺癌、小细胞肺癌和肺类癌肿瘤组成的组。
在一些实施方案中，所述癌症是K-Ras突变型癌症。在一些实施方案中，K-Ras突变型癌症是K-Ras G12突变型癌症。在一些实施方案中，K-Ras突变型G12癌症是K-Ras G12D突变型癌症、K-Ras G12V突变型癌症、K-Ras G12C突变型癌症、K-Ras G12R突变型癌症或K-Ras G12S突变型癌症。在一些实施方案中，K-Ras突变型癌症是K-Ras G12D突变型癌症。在一些实施方案中，K-Ras突变型癌症是K-Ras G12V突变型癌症。在一些实施方案中，K-Ras突变型癌症是K-Ras G12C突变型癌症。在一些实施方案中，所述癌症是突变型B-Raf癌症，如B-Raf V600E突变型癌症。在一些实施方案中，K-Ras突变型癌症是K-Ras G13突变型癌症。在一些实施方案中，K-Ras突变型癌症是K-Ras G13D突变型癌症。在一些实施方案中，K-Ras突变型癌症是K-Ras G12R突变型癌症。在一些实施方案中，K-Ras突变型癌症是K-Ras G12S突变型癌症。
在本文所述的方法和用途的一些实施方案中，所述癌症是肺癌、甲状腺癌、卵巢癌、结直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、食道癌、肝癌、乳腺癌、皮肤癌或间皮瘤。在一些实施方案中，所述癌症是间皮瘤，如恶性间皮瘤。在一些实施方案中，癌症包括但不限于白血病(例如，急性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性成髓细胞白血病、急性早幼粒细胞白血病、急性髓单核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红白血病、慢性白血病、慢性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤(例如，霍奇金病或非霍奇金病)、华氏巨球蛋白血症、多发性骨髓瘤、重链病和实体肿瘤如肉瘤和癌瘤(例如，纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏肿瘤(Ewing's tumor)、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎癌、威尔姆斯肿瘤、宫颈癌、子宫癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神经胶质瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(GBM，也称为成胶质细胞瘤)、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、神经纤维肉瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤和成视网膜细胞瘤)。
在一些实施方案中，癌症是神经胶质瘤、星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤(GBM，也称为成胶质细胞瘤)、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、神经鞘瘤、神经纤维肉瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤或成视网膜细胞瘤。
在一些实施方案中，癌症是听神经瘤、星形细胞瘤(例如I级-毛细胞性星形细胞瘤、II级-低级星形细胞瘤、III级-间变性星形细胞瘤或IV级-成胶质细胞瘤(GBM))、脊索瘤、CNS淋巴瘤、颅咽管瘤、脑干神经胶质瘤、室管膜瘤、混合神经胶质瘤、视神经胶质瘤、室管膜下瘤、成神经管细胞瘤、脑膜瘤、转移性脑肿瘤、少突神经胶质瘤、垂体肿瘤、原始神经外胚层(PNET)肿瘤或神经鞘瘤。在一些实施方案中，所述癌症是在儿童中比在成人中更常见的类型，如脑干神经胶质瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、幼年毛细胞型星形细胞瘤(JPA)、成神经管细胞瘤、视神经胶质瘤、松果体肿瘤、原始神经外胚层肿瘤(PNET)或横纹肌样瘤。在一些实施方案中，患者是成年人。在一些实施方案中，患者是儿童或儿科患者。
在另一实施方案中，癌症包括但不限于间皮瘤、肝胆管(肝和胆管)癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、卵巢癌、结肠癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、胃肠(胃、结直肠和十二指肠)癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、霍奇金病、食管癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、前列腺癌、睾丸癌、慢性或急性白血病、慢性髓性白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾癌或输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、非霍奇金淋巴瘤、脊柱轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、肾上腺皮质癌、胆囊癌、多发性骨髓瘤、胆管癌、纤维肉瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤或上述癌症中的一者或多者的组合。
在一些实施方案中，癌症是实体肿瘤，如肉瘤、癌瘤或淋巴瘤。实体肿瘤通常包含异常的组织肿块，其通常不包括囊肿或液体区域。在一些实施方案中，所述癌症选自肾细胞癌或肾癌；肝细胞癌(HCC)或肝母细胞瘤或肝癌；黑素瘤；乳腺癌；结直肠癌瘤或结直肠癌；结肠癌；直肠癌；肛门癌；肺癌，如非小细胞肺癌(NSCLC)或小细胞肺癌(SCLC)；卵巢癌、卵巢上皮癌、卵巢癌瘤或输卵管癌；乳头状浆液性囊腺癌或子宫乳头状浆液性癌(UPSC)；前列腺癌；睾丸癌；胆囊癌；肝胆管癌；软组织和骨滑膜肉瘤；横纹肌肉瘤；骨肉瘤；软骨肉瘤；尤文肉瘤；间变性甲状腺癌；肾上腺皮质癌；胰腺癌；胰管癌或胰腺腺癌；胃肠/胃(GIST)癌；淋巴瘤；头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)；唾液腺癌；神经胶质瘤或脑癌；神经纤维瘤病-1相关恶性周围神经鞘肿瘤(MPNST)；华氏巨球蛋白血症；或成神经管细胞瘤。
在一些实施方案中，癌症是肝细胞癌(HCC)。在一些实施方案中，所述癌症是肝母细胞瘤。在一些实施方案中，所述癌症是结肠癌。在一些实施方案中，所述癌症是直肠癌。在一些实施方案中，所述癌症是卵巢癌或卵巢癌瘤。在一些实施方案中，所述癌症是卵巢上皮癌。在一些实施方案中，所述癌症是输卵管癌。在一些实施方案中，所述癌症是乳头状浆液性囊腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是子宫乳头状浆液性癌(UPSC)。在一些实施方案中，所述癌症是肝胆管癌。在一些实施方案中，所述癌症是软组织和骨滑膜肉瘤。在一些实施方案中，所述癌症是横纹肌肉瘤。在一些实施方案中，所述癌症是骨肉瘤。在一些实施方案中，所述癌症是间变性甲状腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是肾上腺皮质癌。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺癌或胰管癌。在一些实施方案中，所述癌症是胰腺腺癌。在一些实施方案中，所述癌症是神经胶质瘤。在一些实施方案中，所述癌症是恶性周围神经鞘肿瘤(MPNST)。在一些实施方案中，所述癌症是神经纤维瘤病-1相关MPNST。在一些实施方案中，所述癌症是华氏巨球蛋白血症。在一些实施方案中，所述癌症是成神经管细胞瘤。
在一些实施方案中，癌症是病毒相关癌症，包括人类免疫缺陷病毒(HIV)相关实体肿瘤、人乳头瘤病毒(HPV)-16阳性不可治愈的实体肿瘤和成人T细胞白血病，后者由人T细胞白血病病毒类型I(HTL V-I)引起，并且是以白血病细胞中的HTLV-I的克隆整合为特征的CD 4+T细胞白血病的高度侵袭形式(参见https://clinicaltrials.gov/ct2/sho w/study/NCT02631746)；以及胃癌、鼻咽癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、头颈部鳞状细胞癌和默克尔细胞癌中的病毒相关肿瘤。(参见https://clinicaltrials.gov/ct2/show/study/NCT02488759；还参见https://cli nicaltrials.gov/ct2/show/study/NCT0240886；https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02426892)
在一些实施方案中，本文所述的方法或用途抑制或减少或阻止或减轻癌症或肿瘤的生长或扩散。在一些实施方案中，通过阻止、减少或抑制癌症或肿瘤的进一步生长来治疗肿瘤。在一些实施方案中，本文所述的方法或用途增加或增强或激活一种或多种免疫反应，以抑制或减少或阻止或减轻癌症或肿瘤的生长或扩散。在一些实施方案中，通过相对于治疗之前癌症或肿瘤的大小将癌症或肿瘤的大小(例如，体积或质量)减小至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％来治疗癌症或肿瘤。在一些实施方案中，通过相对于治疗之前癌症或肿瘤的数量将患者体内癌症或肿瘤的数量减少至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少75％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％来治疗癌症或肿瘤。
在一些实施方案中，采用本文所述的方法或用途治疗的患者在治疗开始后表现出至少约一个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、至少约一年、至少约十八个月、至少约两年、至少约三年、至少约四年或至少约五年的无进展生存期。在一些实施方案中，采用本文所述的方法或用途治疗的患者在治疗开始后表现出至少约一个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、至少约一年、至少约14个月、至少约16个月、至少约18个月、至少约20个月、至少约22个月、至少约两年、至少约三年、至少约四年或至少约五年的总生存期。
在一些实施方案中，采用本文所述的方法或用途治疗的患者表现出至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或约100％的客观反应率(ORR)。
根据本发明的方法的化合物和组合物可采用有效抑制MEK和治疗疾病或减轻其严重程度的任何量和任何施用途径来施用，例如，如本文所述的那些。所需的确切量将因受试者而异，取决于受试者的种类、年龄和一般状况、疾病或疾患的严重程度、特定的药剂、其施用方式等。优选将本发明的化合物配制成容易施用和剂量均匀的剂量单位形式。如本文所用的表述“剂量单位形式”是指适合于要治疗的患者的药剂的物理离散单位。然而，将要理解的是，本发明的化合物和组合物的每日总用量将由主治医生在合理的医学判断范围内决定。任何特定患者或生物体的具体有效剂量水平将取决于多种因素，包括所治疗的病症和病症的严重程度；所用具体化合物的活性；所用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所用具体化合物的施用时间、施用途径和排泄速率；治疗的持续时间；与所用具体化合物组合或同时使用的药物，以及医学领域中熟知的类似因素。如本文所用的术语“患者”意指动物，优选哺乳动物，最优选人。
可以对人及其他动物口服、经直肠、肠胃外、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉末、油膏或滴剂)、经颊、作为口腔或鼻腔喷雾剂等施用本发明的药学上可接受的组合物，这取决于所治疗的疾病或病症的严重程度。在某些实施方案中，可以一天一次或多次以每天约0.01mg/kg至约50mg/kg且优选约1mg/kg至约25mg/kg受试者体重的剂量水平口服或肠胃外施用本发明的化合物，以获得所需的治疗效果。
用于口服施用的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还可含有本领域中常用的惰性稀释剂，举例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(特别是，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，及其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可以包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
可以根据已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液或乳液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶剂当中有水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发油常规用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的不挥发油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。此外，在注射剂的制备中使用脂肪酸，如油酸。
可以将可注射制剂灭菌，例如通过经细菌截留过滤器过滤，或通过掺入无菌固体组合物形式的灭菌剂，其可以在使用之前溶解或分散在无菌水或其它无菌可注射介质中。
为了延长本发明的化合物的作用，经常希望减缓来自皮下或肌内注射的化合物的吸收。这可以通过使用水溶性差的结晶或非晶材料的液体悬浮液来实现。化合物的吸收速率则取决于其溶解速率，而后者可取决于晶粒大小和结晶形式。或者，肠胃外施用的化合物形式的延迟吸收是通过将化合物溶解或悬浮在油媒介物中实现的。通过在可生物降解的聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成化合物的微囊基质制成可注射储库形式。根据化合物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可以控制化合物释放的速率。其它可生物降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。还可以通过将化合物包埋在与身体组织相容的脂质体或微乳液中来制备储库型可注射制剂。
用于直肠或阴道施用的组合物优选为栓剂，其可以通过将本发明的化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，这些赋形剂或载体在环境温度下为固体，但在体温下为液体，因此在直肠或阴道腔中融化，并释放活性化合物。
用于口服施用的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉末和颗粒。在这类固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性药学上可接受的赋形剂或载体如柠檬酸钠或磷酸二钙和/或以下物质混合：a)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和硅酸；b)粘结剂，举例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶，c)保湿剂，如甘油；d)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，如石蜡，f)吸收促进剂，如季铵化合物，g)润湿剂，举例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯，h)吸收剂，如高岭土和膨润土，和i)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。
在使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中也可以使用相似类型的固体组合物作为填充剂。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可制成有包衣和壳，如肠溶包衣和药物配制领域中熟知的其它包衣。它们可任选含有遮光剂，并且也可以是这样的组合物，即它们仅或优先在肠道的某一部分中任选以延迟的方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。在使用诸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的赋形剂的软和硬填充明胶胶囊中也可以使用相似类型的固体组合物作为填充剂。
活性化合物也可以是具有一种或多种如上所述的赋形剂的微囊化形式。片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒的固体剂型可制成有包衣和壳，如肠溶包衣、控释包衣和药物配制领域中熟知的其它包衣。在这类固体剂型中，活性化合物可以与至少一种惰性稀释剂如蔗糖、乳糖或淀粉混合。按通常的实践，这类剂型还可以包含除惰性稀释剂之外的另外的物质，例如压片润滑剂及其它压片助剂，如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可以包含缓冲剂。它们可任选含有遮光剂，并且也可以是这样的组合物，即它们仅或优先在肠道的某一部分中任选以延迟的方式释放活性成分。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。
用于局部或透皮施用本发明的化合物的剂型包括油膏、糊剂、乳膏、洗剂、凝胶、粉末、溶液、喷雾剂、吸入剂或贴剂。活性成分在无菌条件下与药学上可接受的载体和任何需要的防腐剂或可能需要的缓冲剂混合。预期眼科制剂、滴耳剂和滴眼剂也在本发明的范围内。另外，本发明考虑了使用透皮贴剂，其附加的优点是向身体提供化合物的受控递送。可以通过将化合物溶解或分散在适当的介质中制成这类剂型。吸收增强剂也可用于增加化合物穿过皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜或通过将化合物分散在聚合物基质或凝胶中来控制速率。
与一种或多种其它治疗剂共同施用
根据要治疗的特定疾患或疾病，本发明的组合物中也可存在通常施用以治疗该疾患的另外的治疗剂。如本文所用，通常施用以治疗特定疾病或疾患的另外的治疗剂被称为“适合于所治疗的疾病或疾患”。
在一些实施方案中，本发明提供了治疗所公开的疾病或疾患的方法，包括对有需要的患者施用有效量的本文公开的化合物或其药学上可接受的盐，并同时或依次共同施用有效量的一种或多种另外的治疗剂，如本文所述的那些。在一些实施方案中，所述方法包括共同施用一种另外的治疗剂。在一些实施方案中，所述方法包括共同施用两种另外的治疗剂。在一些实施方案中，所公开的化合物和一种或多种另外的治疗剂的组合协同作用。
本发明的化合物可单独施用或与一种或多种其它治疗化合物组合施用，可能的组合疗法采取固定组合的形式，或者本发明的化合物和一种或多种其它治疗化合物的施用交错或彼此独立地给予，或者组合施用固定的组合和一种或多种其它治疗化合物。
作为多剂量方案的一部分，一种或多种其它治疗剂可以与本发明的化合物或组合物分开施用。或者，一种或多种其它治疗剂可以是单一剂型的一部分，与本发明的化合物一起混合在单一组合物中。如果以多剂量方案施用，则一种或多种其它治疗剂和本发明的化合物或组合物可以彼此同时、依次或在间隔一段时间内施用，例如彼此间隔1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24小时内。在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂和本发明的化合物或组合物以多剂量方案在间隔大于24小时内施用。
如本文所用，术语“组合”、“组合的”及相关术语是指根据本发明同时或依次施用治疗剂。例如，本发明的化合物可以与一种或多种其它治疗剂以单独的单位剂型同时或依次施用或者以单一的单位剂型一起施用。因此，本发明提供了包含本发明的化合物、一种或多种其它治疗剂和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物的单一单位剂型。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的本发明的化合物和一种或多种其它治疗剂的量(在包含如上所述另外的治疗剂的那些组合物中)根据所治疗的宿主和特定的施用方式而有所不同。优选地，应配制本发明的组合物，使得可以施用0.01-100mg/kg体重/天之间的本发明的化合物的剂量。
在包含一种或多种其它治疗剂的那些组合物中，一种或多种其它治疗剂和本发明的化合物可以协同作用。因此，这类组合物中一种或多种其它治疗剂的量可少于仅利用该治疗剂的单一疗法中所需的量。在这类组合物中，可以施用0.01-1,000g/kg体重/天之间的一种或多种其它治疗剂的剂量。
本发明的组合物中存在的一种或多种其它治疗剂的量可以不超过通常在包含该治疗剂作为唯一活性剂的组合物中施用的量。优选本发明公开的组合物中的一种或多种其它治疗剂的量在包含该药剂作为唯一治疗活性剂的组合物中通常存在的量的约50％至100％的范围内。在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂以该药剂的通常施用量的约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％的剂量施用。如本文所用，短语“通常施用”意指经FDA批准的治疗剂被批准按照FDA标签插页给药的量。
也可以将本发明的化合物或其药物组合物掺入到用于涂覆可植入的医疗装置如假体、人造瓣膜、血管移植物、支架和导管的组合物中。血管支架例如已被用于克服再狭窄(受伤后血管壁再次变窄)。然而，使用支架或其它可植入装置的患者存在凝块形成或血小板激活的风险。可通过用包含激酶抑制剂的药学上可接受的组合物预涂覆所述装置来防止或减轻这些不利的作用。涂有本发明的化合物的可植入装置是本发明的另一实施方案。
示例性的其它治疗剂
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是TEAD抑制剂。在某些实施方案中，TEAD抑制剂选自WO 2020/243415中描述的那些，该专利文献的内容以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，TEAD抑制剂选自WO 2020/243423中描述的那些，该专利文献的内容以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，TEAD抑制剂选自第11,247,082号美国专利中描述的那些，该专利文献的内容以引用的方式整体并入本文。
可通过本领域普通技术人员已知的有机合成方法来制备TEAD抑制剂。另外，某些TEAD抑制剂可如以下文献中所述来制备：Pobbati等人，“Targeting the Central Pocketin Human Transcription Factor TEAD as a Potential Cancer TherapeuticStrategy”，Structure 2015，23，2076-2086；Gibault等人，“Targeting TranscriptionalEnhanced Associate Domains(TEADs)”，J.Med.Chem.2018，61，5057-5072；Bum-Erdene等人，“Small-Molecule Covalent Modification of Conserved Cysteine Leads toAllosteric Inhibition of the TEADoYap Protein-Protein Interaction”，CellChemical Biology 2019，26，1-12；Holden等人，“Small Molecule Dysregulation ofTEAD Lipidation Induces aDominant-Negative Inhibition of HippoPathwaySignaling”，Cell Reports2020，31，107809；WO 2017/053706、WO 2017/111076、WO 2018/204532、WO 2018/235926、US20190010136、WO 2019/040380、WO 2019/113236、WO 2019/222431、WO 2019/232216、WO 2020/051099、WO 2020/081572、WO 2020/097389、WO 2020/190774、WO 2020/214734、PCT/US2020/35098和PCT/US2020/35111，上述文献中的每一者的内容以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是ERK5抑制剂。在某些实施方案中，ERK5抑制剂选自WO 2022/051567中描述的那些，该专利文献的内容以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，ERK5抑制剂选自WO 2022/051565中描述的那些，该专利文献的内容以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，ERK5抑制剂选自WO 2022/051569中描述的那些，该专利文献的内容以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，ERK5抑制剂选自WO 2022/051568中描述的那些，该专利文献的内容以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂。在一些实施方案中，PARP抑制剂选自奥拉帕尼( AstraZeneca)；卢卡帕尼(Clovis Oncology)；尼拉帕尼(/>Tesaro)；他拉唑帕尼(MDV3800/BMN673/LT00673，Medivation/Pfizer/Biomarin)；维利帕尼(ABT-888，Abb Vie)；和BGB-290(BeiGene，Inc.)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂。在一些实施方案中，HDAC抑制剂选自伏立诺他(Merck)；罗米地辛(/>Celgene)；帕比司他(/>Novartis)；贝利司他(/>SpectrumPharmaceuticals)；恩替司他(SNDX-275，Syndax Pharmaceuticals)(NCT00866333)；和西达本胺(/>HBI-8000，Chipscreen Biosciences，China)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是CDK抑制剂，如CDK4/CDK6抑制剂。在一些实施方案中，CDK 4/6抑制剂选自帕博西尼(Pfizer)；瑞博西尼(Novartis)；阿贝西利(Ly2835219，Eli Lilly)；和曲拉西利(G1T28，G1Therapeutics)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂。在一些实施方案中，PI3K抑制剂选自艾代拉里斯(Gilead)、阿培利司(BYL719，Novartis)、塔西利司(taselisib)(GDC-0032，Genentech/Roche)；匹替利司(pictilisib)(GDC-0941，Genentech/Roche)；库潘尼西(copanlisib)(BAY806946，Bayer)；杜韦利西布(duvelisib)(先前称为IPI-145，Infinity Pharmaceuticals)；PQR309(PiqurTherapeutics，Switzerland)和TGR1202(先前称为RP5230，TG Therapeutics)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是基于铂的治疗药物，也称为铂类化合物(platins)。铂类化合物引起DNA的交联，使得它们主要在快速复制的细胞如癌细胞中抑制DNA修复和/或DNA合成。
在一些实施方案中，基于铂的治疗药物选自顺铂(Bristol-MyersSquibb)；卡铂(/>Bristol-Myers Squibb；还有Teva；Pfizer)；奥沙利铂(Sanofi-Aventis)；奈达铂(/>Shionogi)、吡铂(PoniardPharmaceuticals)；和赛特铂(JM-216，Agennix)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是紫杉烷化合物，其引起微管的破坏，这是细胞分裂所必需的。在一些实施方案中，紫杉烷化合物选自紫杉醇(Bristol-Myers Squibb)、多西他赛(/>Sanofi-Aventis；/>SunPharmaceutical)、白蛋白结合紫杉醇(/>Abraxis/Celgene)、卡巴他赛(Sanofi-Aventis)和SID530(SK Chemicals，Co.)(NCT00931008)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是核苷抑制剂或干扰正常DNA合成、蛋白质合成、细胞复制或将以其它方式抑制快速增殖细胞的治疗剂。
在一些实施方案中，核苷抑制剂选自曲贝替定(胍烷化剂，JanssenOncology)、甲氮芥(烷化剂，/>Aktelion Pharmaceuticals)；长春新碱(Eli Lilly；/>Teva Pharmaceuticals；/>TalonTherapeutics)；替莫唑胺(烷化剂5-(3-甲基三氮烯-1-基)-咪唑-4-甲酰胺(MTIC)的前药，Merck)；阿糖胞苷注射剂(ara-C，抗代谢胞苷类似物，Pfizer)；洛莫司汀(烷化剂，/>Bristol-Myers Squibb；/>NextSource Biotechnology)；阿扎胞苷(胞苷的嘧啶核苷类似物，/>Celgene)；奥马西汀高三尖杉酯碱(三尖杉碱酯)(蛋白质合成抑制剂，/>Teva Pharmaceuticals)；菊欧文菌天冬酰胺酶(用于消耗天冬酰胺的酶，/>Lundbeck；/>EUSA Pharma)；甲磺酸艾日布林(微管抑制剂，基于微管蛋白的抗有丝分裂剂，/>Eisai)；卡巴他赛(微管抑制剂，基于微管蛋白的抗有丝分裂剂，/>Sanofi-Aventis)；卡培他滨(capacetrine)(胸苷酸合成酶抑制剂，/>Genentech)；苯达莫司汀(双功能甲氮芥衍生物，据信形成链间DNA交联，/>Cephalon/Teva)；伊沙匹隆(埃博霉素B的半合成类似物，微管抑制剂，基于微管蛋白的抗有丝分裂剂，/>Bristol-Myers Squibb)；尼拉拉滨(脱氧鸟苷类似物的前药，核苷代谢抑制剂，/>Novartis)；氯法拉滨(核糖核苷酸还原酶抑制剂的前药，脱氧胞苷的竞争性抑制剂，/>Sanofi-Aventis)；以及曲氟尿苷和替匹嘧啶(基于胸苷的核苷类似物和胸苷磷酸化酶抑制剂，/>TaihoOncology)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是激酶抑制剂或VEGF-R拮抗剂。批准可用于本发明的VEGF抑制剂和激酶抑制剂包括：贝伐单抗(Genentech/Roche)，一种抗VEGF单克隆抗体；雷莫芦单抗(/>Eli Lilly)，一种抗VEGFR-2抗体，和ziv-阿柏西普，也称为VEGF Trap(/>Regeneron/Sanofi)。VEGFR抑制剂，如瑞戈非尼(/>Bayer)；凡德他尼(/>AstraZeneca)；阿西替尼(/>Pfizer)；和乐伐替尼(/>Eisai)；Raf抑制剂，如索拉非尼(/>Bayer AG和Onyx)；达拉非尼(/>Novartis)；和维莫非尼(/>Genentech/Roche)；MEK抑制剂，如考比替尼(/>Exelexis/Genentech/Roche)；曲美替尼(/>Novartis)；Bcr-Abl酪胺酸激酶抑制剂，如伊马替尼(/>Novartis)；尼洛替尼(/>Novartis)；达沙替尼(/>BristolMyersSquibb)；博舒替尼(Pfizer)；和帕纳替尼(/>Ariad Pharmaceuticals)；Her2和EGFR抑制剂，如吉非替尼(/>AstraZeneca)；厄洛替尼(/>Genentech/Roche/Astellas)；拉帕替尼(/>Novartis)；阿法替尼(/>BoehringerIngelheim)；奥希替尼(靶向激活的EGFR，/>AstraZeneca)；和布加替尼(Ariad Pharmaceuticals)；c-Met和VEGFR2抑制剂，如卡博替尼(Exelexis)；和多重激酶抑制剂，如舒尼替尼(/>Pfizer)；帕唑帕尼(Novartis)；ALK抑制剂，如克唑替尼(/>Pfizer)；色瑞替尼(Novartis)；和艾乐替尼(/>Genentech/Roche)；布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂，如依鲁替尼(/>Pharmacyclics/Janssen)；和Flt3受体抑制剂，如米哚妥林(/>Novartis)。
正在开发中并且可用于本发明的其它激酶抑制剂和VEGF-R拮抗剂包括替沃扎尼(Aveo Pharmaecuticals)；瓦他拉尼(Bayer/Novartis)；德立替尼(lucitanib)(ClovisOncology)；多韦替尼(TKI258，Novartis)；西奥罗尼(Chiauanib)(ChipscreenBiosciences)；CEP-11981(Cephalon)；立尼法尼(linifanib)(Abbott Laboratories)；来那替尼(HKI-272，Puma Biotechnology)；拉多替尼(radotinib)(IY5511，Il-Yang Pharmaceuticals，S.Korea)；鲁索替尼(/>Incyte Corporation)；PTC299(PTC Therapeutics)；CP-547,632(Pfizer)；弗雷替尼(foretinib)(Exelexis，GlaxoSmithKline)；奎扎替尼(Daiichi Sankyo)和莫替沙尼(motesanib)(Amgen/Takeda)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是mTOR抑制剂，其抑制细胞增殖、血管生成和葡萄糖摄取。在一些实施方案中，mTOR抑制剂是依维莫司(Novartis)；替西罗莫司(/>Pfizer)；和西罗莫司(/>Pfizer)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是蛋白酶体抑制剂。可用于本发明的经批准的蛋白酶体抑制剂包括硼替佐米(Takeda)；卡非佐米(/>Amgen)；和伊沙佐米(/>Takeda)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是生长因子拮抗剂，如血小板源性生长因子(PDGF)或表皮生长因子(EGF)或其受体(EGFR)的拮抗剂。可用于本发明的经批准的PDGF拮抗剂包括奥拉单抗(Eli Lilly)。可用于本发明的经批准的EGFR拮抗剂包括西妥昔单抗(/>Eli Lilly)；耐昔妥珠单抗(/>Eli Lilly)、帕尼单抗(/>Amgen)；和奥希替尼(靶向激活的EGFR，/>AstraZeneca)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是芳香酶抑制剂。在一些实施方案中，芳香酶抑制剂选自依西美坦(Pfizer)；阿那曲唑(/>AstraZeneca)和来曲唑(/>Novartis)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是刺猬途径的拮抗剂。可用于本发明的经批准的刺猬途径抑制剂包括索尼得吉(Sun Pharmaceuticals)；和维莫德吉(/>Genentech)，两者均用于治疗基底细胞癌。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是叶酸抑制剂。可用于本发明的经批准的叶酸抑制剂包括培美曲塞(Eli Lilly)。/>
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是CC趋化因子受体4(CCR4)抑制剂。正在研究的可用于本发明的CCR4抑制剂包括莫格利珠单抗(Kyowa HakkoKirin，Japan)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是异柠檬酸脱氢酶(IDH)抑制剂。正在研究的可用于本发明的IDH抑制剂包括AG120(Celgene；NCT02677922)；AG221(Celgene，NCT02677922；NCT02577406)；BAY1436032(Bayer，NCT02746081)；IDH305(Novartis，NCT02987010)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是精氨酸酶抑制剂。正在研究的可用于本发明的精氨酸酶抑制剂包括：AEB1102(聚乙二醇化重组精氨酸酶，AegleaBiotherapeutics)，正在针对急性髓性白血病和骨髓增生异常综合征(NCT02732184)及实体肿瘤(NCT02561234)对其进行1期临床试验研究；和CB-1158(Calithera Biosciences)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是谷氨酰胺酶抑制剂。正在研究的可用于本发明的谷氨酰胺酶抑制剂包括CB-839(Calithera Biosciences)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是与肿瘤抗原结合的抗体，即在肿瘤细胞的细胞表面上表达的蛋白质。可用于本发明的经批准的与肿瘤抗原结合的抗体包括利妥昔单抗(Genentech/BiogenIdec)；奥法木单抗(抗CD20，/>GlaxoSmithKline)；奥比妥珠单抗(抗CD20，/>Genentech)、替伊莫单抗(抗CD20和钇-90，/>Spectrum Pharmaceuticals)；达雷木单抗(抗CD38，/>Janssen Biotech)、达妥昔单抗(抗糖脂GD2，/>United Therapeutics)；曲妥珠单抗(抗HER2，/>Genentech)；恩美曲妥珠单抗(ado-trastuzumab emtansine)(抗HER2，与美坦新融合，/>Genentech)；和帕妥珠单抗(抗HER2，/>Genentech)；以及本妥昔单抗维多汀(抗CD30-药物缀合物，/>SeattleGenetics)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是拓扑异构酶抑制剂。可用于本发明的经批准的拓扑异构酶抑制剂包括伊立替康(Merrimack Pharmaceuticals)；拓扑替康(/>GlaxoSmithKline)。正在研究的可用于本发明的拓扑异构酶抑制剂包括匹克生琼(/>CTI Biopharma)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是抗凋亡蛋白如BCL-2的抑制剂。可用于本发明的经批准的抗凋亡药物包括维奈托克(AbbVie/Genentech)；和博纳吐单抗(/>Amgen)。已经过临床测试并且可用于本发明的靶向凋亡蛋白的其它治疗剂包括纳维托克(navitoclax)(ABT-263，Abbott)，其是一种BCL-2抑制剂(NCT02079740)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是雄激素受体抑制剂。可用于本发明的经批准的雄激素受体抑制剂包括恩杂鲁胺(Astellas/Medivation)；经批准的雄激素合成的抑制剂包括阿比特龙(/>Centocor/Ortho)；经批准的促性腺素释放激素(GnRH)受体的拮抗剂(地加瑞克，/>Ferring Pharmaceuticals)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是选择性雌激素受体调节剂(SERM)，其干扰雌激素的合成或活性。可用于本发明的经批准的SERM包括雷洛昔芬(EliLilly)。/>
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是骨再吸收的抑制剂。一种经批准的抑制骨再吸收的治疗药物是狄诺塞麦(Amgen)，这是一种与RANKL结合的抗体，阻止与其受体RANK的结合，RANK见于破骨细胞、它们的前体和破骨细胞样巨细胞的表面上，其介导具有骨质转移的实体肿瘤中的骨病理学。其它经批准的抑制骨再吸收的治疗药物包括双膦酸盐，如唑来膦酸(/>Novartis)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是两种主要的p53抑制蛋白MDMX与MDM2之间相互作用的抑制剂。正在研究的可用于本发明的p53抑制蛋白的抑制剂包括ALRN-6924(Aileron)，这是一种均等地与MDMX和MDM2结合并破坏MDMX和MDM2与p53的相互作用的订书肽。目前在临床试验中正在评估ALRN-6924用于治疗AML、晚期骨髓增生异常综合征(MDS)和外周T细胞淋巴瘤(PTCL)(NCT02909972；NCT02264613)。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是转化生长因子-beta(TGF-beta或TGF-β)的抑制剂。正在研究的可用于本发明的TGF-β蛋白的抑制剂包括NIS793(Novartis)，这是一种抗TGF-β抗体，正在临床测试用于治疗各种癌症，包括乳腺癌、肺癌、肝细胞癌、结直肠癌、胰腺癌、前列腺癌和肾癌(NCT 02947165)。在一些实施方案中，TGF-β蛋白的抑制剂是非苏木单抗(GC1008；Sanofi-Genzyme)，其正被研究用于黑素瘤(NCT00923169)；肾细胞癌(NCT00356460)；和非小细胞肺癌(NCT02581787)。另外，在一些实施方案中，另外的治疗剂是如Connolly等人，(2012)Int’l J.Biological Sciences 8:964-978中所述的TGF-β捕集剂。目前临床试验用于治疗实体肿瘤的一种治疗化合物是M7824(Merck KgaA-以前的MSB0011459X)，其是一种双特异性抗PD-L1/TGF-β捕集化合物(NCT02699515)；和(NCT02517398)。M7824由与充当TGF-β“捕集剂”的人TGF-β受体II的细胞外结构域融合的针对PD-L1的完全人IgG1抗体组成。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂选自格巴妥木单抗维多汀-单甲基奥瑞他汀E(MMAE)(Celldex)，其是与细胞毒性MMAE连接的抗糖蛋白NMB(gpNMB)抗体(CR011)。gpNMB是由与癌细胞转移的能力相关的多种肿瘤类型过表达的蛋白质。
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是抗增殖化合物。这类抗增殖化合物包括但不限于芳香酶抑制剂；抗雌激素；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；微管活性化合物；烷基化化合物；组蛋白脱乙酰酶抑制剂；诱导细胞分化过程的化合物；环氧合酶抑制剂；MMP抑制剂；mTOR抑制剂；抗肿瘤抗代谢物；铂类化合物；靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性的化合物和进一步的抗血管生成化合物；靶向蛋白质或脂质磷酸酶、降低或抑制其活性的化合物；戈那瑞林激动剂；抗雄激素；甲硫氨酸氨肽酶抑制剂；基质金属蛋白酶抑制剂；双膦酸盐；生物反应调节剂；抗增殖抗体；类肝素酶抑制剂；Ras致癌同种型的抑制剂；端粒酶抑制剂；蛋白酶体抑制剂；用于治疗血液恶性肿瘤的化合物；靶向Flt-3、降低或抑制其活性的化合物；Hsp90抑制剂，如17-AAG(17-烯丙基氨基格尔德霉素，NSC330507)、17-DMAG(17-二甲基氨基乙基氨基-17-去甲氧基-格尔德霉素，NSC707545)、IPI-504、CNF1010、CNF2024、来自Conforma Therapeutics的CNF1010；替莫唑胺纺锤体驱动蛋白抑制剂，如来自GlaxoSmithKline的SB715992或SB743921或来自CombinatoRx的喷他脒/氯丙嗪；MEK抑制剂，如来自Array BioPharma的ARRY142886、来自AstraZeneca的AZd6244、来自Pfizer的PD181461和亚叶酸。
如本文所用的术语“芳香酶抑制剂”涉及抑制雌激素产生的化合物，例如抑制底物雄烯二酮和睾酮分别转化为雌酮和雌二醇。该术语包括但不限于类固醇，特别是阿他美坦、依西美坦和福美坦，特别是非类固醇，特别是氨鲁米特、洛太米特(roglethimide)、吡鲁米特(pyridoglutethimide)、曲洛司坦、睾内酯、酮康唑(ketokonazole)、伏罗唑、法屈唑、阿那曲唑和来曲唑。依西美坦以商品名AROMASINTM销售。福美坦以商品名LENTARONTM销售。法屈唑以商品名AFEMATM销售。阿那曲唑以商品名ARIMIDEXTM销售。来曲唑以商品名FEMARATM或FEMArTM销售。氨鲁米特以商品名ORIMETENTM销售。包含作为芳香酶抑制剂的化学治疗剂的本发明的组合特别可用于治疗激素受体阳性肿瘤，如乳腺肿瘤。
如本文所用的术语“抗雌激素”涉及在雌激素受体水平上拮抗雌激素的作用的化合物。该术语包括但不限于他莫昔芬、氟维司群、雷洛昔芬和盐酸雷洛昔芬。他莫昔芬以商品名NOLVADEXTM销售。盐酸雷洛昔芬以商品名EVISTATM销售。氟维司群可以商品名FASLODEXTM施用。氟维司群可以商品名FaslodexTM施用。包含作为抗雌激素的化学治疗剂的本发明的组合特别可用于治疗雌激素受体阳性肿瘤，如乳腺肿瘤。
如本文所用的术语“抗雄激素”涉及能够抑制雄激素的生物作用的任何物质，包括但不限于比卡鲁胺(CASODEXTM)。如本文所用的术语“戈那瑞林激动剂”包括但不限于阿巴瑞克、戈舍瑞林和乙酸戈舍瑞林。戈舍瑞林可以商品名ZOLADEXTM施用。
如本文所用的术语“拓扑异构酶I抑制剂”包括但不限于拓扑替康、吉马替康、伊立替康、喜树碱及其类似物、9-硝基喜树碱和大分子喜树碱缀合物PNU-166148。伊立替康可例如以其销售的形式施用，例如以商标CAMPTOSARTM销售。拓扑替康以商品名HYCAMPTINTM销售。
如本文所用的术语“拓扑异构酶II抑制剂”包括但不限于蒽环类药物，如多柔比星(包括脂质体制剂，如CAELYXTM)、道诺霉素、表柔比星、伊达比星和奈莫柔比星；蒽醌类药物米托蒽醌和洛索蒽醌；以及鬼臼毒素类药物依托泊苷和替尼泊苷。依托泊苷以商品名ETOPOPHOSTM销售。替尼泊苷以商品名VM 26-Bristol销售。多柔比星以商品名ACRIBLASTINTM或ADRIAMYCINTM销售。表柔比星以商品名FARMORUBICINTM销售。伊达比星以商品名ZAVEDOSTM销售。米托蒽醌以商品名NOVANTRONTM销售。
术语“微管活性剂”涉及微管稳定化合物、微管去稳定化合物和微管蛋白聚合抑制剂，包括但不限于紫杉烷类，如紫杉醇和多西他赛；长春花生物碱，如长春碱或硫酸长春碱、长春新碱或硫酸长春新碱以及长春瑞滨；圆皮海绵内酯；秋水仙素和埃博霉素及其衍生物。紫杉醇以商品名TAXOLTM销售。多西他赛以商品名TAXOTERETM销售。硫酸长春碱以商品名VINBLASTIN R.PTM销售。硫酸长春新碱以商品名FARMISTINTM销售。
如本文所用的术语“烷化剂”包括但不限于环磷酰胺、异环磷酰胺、美法仑或亚硝基脲(BCNU或Gliadel)。环磷酰胺以商品名CYCLOSTINTM销售。异环磷酰胺以商品名HOLOXANTM销售。
术语“组蛋白脱乙酰酶抑制剂”或“HDAC抑制剂”涉及抑制组蛋白脱乙酰酶并具有抗增殖活性的化合物。这包括但不限于辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)。
术语“抗肿瘤抗代谢物”包括但不限于5-氟尿嘧啶或5-FU、卡培他滨、吉西他滨、DNA去甲基化化合物如5-氮杂胞苷和地西他滨、甲氨蝶呤和依达曲沙，以及叶酸拮抗剂如培美曲塞。卡培他滨以商品名XELODATM销售。吉西他滨以商品名GEMZARTM销售。
如本文所用的术语“铂类化合物”包括但不限于卡铂、顺铂(cis-platin/cisplatinum)和奥沙利铂。卡铂可例如以其销售的形式施用，例如以商标CARBOPLATTM销售。奥沙利铂可例如以其销售的形式施用，例如以商标ELOXATINTM销售。
如本文所用的术语“靶向/降低蛋白质或脂质激酶活性；或蛋白质或脂质磷酸酶活性的化合物；或进一步的抗血管生成化合物”包括但不限于蛋白酪氨酸激酶和/或丝氨酸和/或苏氨酸激酶抑制剂或脂质激酶抑制剂，如a)靶向血小板源性生长因子受体(PDGFR)、降低或抑制其活性的化合物，如靶向PDGFR、降低或抑制其活性的化合物，特别是抑制PDGF受体的化合物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼、SU101、SU6668和GFB-111；b)靶向成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、降低或抑制其活性的化合物；c)靶向胰岛素样生长因子受体I(IGF-IR)、降低或抑制其活性的化合物，如靶向IGF-IR、降低或抑制其活性的化合物，特别是抑制IGF-I受体的激酶活性的化合物，或靶向IGF-I受体或其生长因子的细胞外结构域的抗体；d)靶向Trk受体酪氨酸激酶家族、降低或抑制其活性的化合物，或肝配蛋白B4抑制剂；e)靶向AxI受体酪氨酸激酶家族、降低或抑制其活性的化合物；f)靶向Ret受体酪氨酸激酶、降低或抑制其活性的化合物；g)靶向Kit/SCFR受体酪氨酸激酶、降低或抑制其活性的化合物，如伊马替尼；h)靶向作为PDGFR家族的一部分的C-kit受体酪氨酸激酶、降低或抑制其活性的化合物，如靶向c-Kit受体酪氨酸激酶家族、降低或抑制其活性的化合物，特别是抑制c-Kit受体的化合物，如伊马替尼；i)靶向c-Abl家族的成员、其基因融合产物(例如，BCR-Abl激酶)和突变体、降低或抑制其活性的化合物，如靶向c-Abl家族成员及其基因融合产物、降低或抑制其活性的化合物，如N-苯基-2-嘧啶-胺衍生物，如伊马替尼或尼洛替尼(AMN107)；PD180970；AG957；NSC 680410；来自ParkeDavis的PD173955；或达沙替尼(BMS-354825)；j)靶向蛋白激酶C(PKC)和丝氨酸/苏氨酸激酶的Raf家族的成员、MEK、SRC、JAK/泛JAK、FAK、PDK1、PKB/Akt、Ras/MAPK、PI3K、SYK、TYK2、BTK和TEC家族的成员和/或细胞周期蛋白依赖性激酶家族(CDK)的成员、降低或抑制其活性的化合物，包括星形孢菌素衍生物，如米哚妥林；进一步的化合物的实例包括UCN-01、沙芬戈、BAY 43-9006、苔藓抑素1、哌立福新；伊莫福新；RO 318220和RO 320432；GO 6976；lsis 3521；LY333531/LY379196；异喹啉化合物；FTI；PD184352或QAN697(P13K抑制剂)或AT7519(CDK抑制剂)；k)靶向蛋白-酪氨酸激酶抑制剂、降低或抑制其活性的化合物，如靶向蛋白-酪氨酸激酶抑制剂、降低或抑制其活性的化合物包括甲磺酸伊马替尼(GLEEVECTM)或酪氨酸磷酸化抑制剂(tyrphostin)，如酪氨酸磷酸化抑制剂A23/RG-50810；AG 99；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 213；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 1748；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 490；酪氨酸磷酸化抑制剂B44；酪氨酸磷酸化抑制剂B44(+)对映异构体；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 555；AG 494；酪氨酸磷酸化抑制剂AG 556、AG957和阿达斯汀(4-{[(2,5-二羟基苯基)甲基]氨基}-苯甲酸金刚烷基酯；NSC 680410，阿达斯汀)；l)靶向受体酪氨酸激酶的表皮生长因子家族(作为同二聚体或异二聚体的EGFR1ErbB2、ErbB3、ErbB4)及其突变体、降低或抑制其活性的化合物，如靶向表皮生长因子受体家族、降低或抑制其活性的化合物特别有抑制EGF受体酪氨酸激酶家族的成员如EGF受体ErbB2、ErbB3和ErbB4或与EGF或EGF相关配体结合的化合物、蛋白质或抗体、CP 358774、ZD1839、ZM 105180；曲妥珠单抗(HERCEPTINTM)、西妥昔单抗(ERBITUXTM)、易瑞沙、特罗凯、OSI-774、Cl-1033、EKB-569、GW-2016、E1.1、E2.4、E2.5、E6.2、E6.4、E2.11、E6.3或E7.6.3，和7H-吡咯并-[2,3-d]嘧啶衍生物；m)靶向c-Met受体、降低或抑制其活性的化合物，如靶向c-Met、降低或抑制其活性的化合物，特别是抑制c-Met受体的激酶活性的化合物，或靶向c-Met的细胞外结构域或与HGF结合的抗体；n)靶向一个或多个JAK家族成员(JAK1/JAK2/JAK3/TYK2和/或泛JAK)、降低或抑制其激酶活性的化合物，包括但不限于PRT-062070、SB-1578、巴瑞替尼、帕克替尼、莫罗替尼、VX-509、AZD-1480、TG-101348、托法替尼和鲁索替尼；o)靶向PI3激酶(PI3K)、降低或抑制其激酶活性的化合物，包括但不限于ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕昔布(buparlisib)、皮特里昔布(pictrelisib)、PF-4691502、BYL-719、达妥昔布(dactolisib)、XL-147、XL-765和艾代拉里斯(idelalisib)；和；和q)靶向刺猬蛋白(Hh)或平滑受体(SMO)途径、降低或抑制其信号传导效应的化合物，包括但不限于环巴胺、维莫德吉、伊曲康唑、伊莫德吉(erismodegib)和IPI-926(萨瑞德吉)。
如本文所用的术语“PI3K抑制剂”包括但不限于针对磷脂酰肌醇-3-激酶家族中的一种或多种酶具有抑制活性的化合物，所述酶包括但不限于PI3Kα、PI3Kγ、PI3Kδ、PI3Kβ、PI3K-C2α、PI3K-C2β、PI3K-C2γ、Vps34、p110-α、p110-β、p110-γ、p110-δ、p85-α、p85-β、p55-γ、p150、p101和p87。可用于本发明的PI3K抑制剂的实例包括但不限于ATU-027、SF-1126、DS-7423、PBI-05204、GSK-2126458、ZSTK-474、布帕昔布、皮特里昔布、PF-4691502、BYL-719、达妥昔布、XL-147、XL-765和艾代拉里斯。
如本文所用的术语“Bcl-2抑制剂”包括但不限于针对B细胞淋巴瘤2蛋白(Bcl-2)具有抑制活性的化合物，包括但不限于ABT-199、ABT-731、ABT-737、阿朴棉子酚、Ascenta的泛Bcl-2抑制剂、姜黄素(及其类似物)、双重Bcl-2/Bcl-xL抑制剂(InfinityPharmaceuticals/Nov artis Pharmaceuticals)、Genasense(G3139)、HA14-1(及其类似物；WO2008118802)、纳维托克(及其类似物，参见US7390799)、NH-1(ShenayngPharmaceutical University)、奥巴克拉(及其类似物，参见WO2004106328)、S-001(GloriaPharmaceuticals)、TW系列化合物(Univ.of Michigan)和维奈托克。在一些实施方案中，Bcl-2抑制剂是小分子治疗药物。在一些实施方案中，Bcl-2抑制剂是模拟肽。
如本文所用的术语“BTK抑制剂”包括但不限于针对布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)具有抑制活性的化合物，包括但不限于AVL-292和依鲁替尼。
如本文所用的术语“SYK抑制剂”包括但不限于针对脾酪氨酸激酶(SYK)具有抑制活性的化合物，包括但不限于PRT-062070、R-343、R-333、艾塞莱尔(Excellair)、PRT-062607和福他替尼(fostamatinib)。
BTK抑制化合物和可由这类化合物与本发明的化合物组合治疗的疾患的进一步的实例可见于WO2008039218和WO2011090760中，上述专利文献的全部内容以引用的方式并入本文。
SYK抑制化合物和可由这类化合物与本发明的化合物组合治疗的疾患的进一步的实例可见于WO2003063794、WO2005007623和WO2006078846中，上述专利文献的全部内容以引用的方式并入本文。
PI3K抑制化合物和可由这类化合物与本发明的化合物组合治疗的疾患的进一步的实例可见于WO2004019973、WO2004089925、WO2007016176、US8138347、WO2002088112、WO2007084786、WO2007129161、WO2006122806、WO2005113554和WO2007044729中，上述专利文献的全部内容以引用的方式并入本文。
JAK抑制化合物和可由这类化合物与本发明的化合物组合治疗的疾患的进一步的实例可见于WO2009114512、WO2008109943、WO2007053452、WO2000142246和WO2007070514中，上述专利文献的全部内容以引用的方式并入本文。
进一步的抗血管生成化合物包括具有另一种活性机制的化合物，例如与蛋白质或脂质激酶抑制无关，例如沙利度胺(THALOMIDTM)和TNP-470。
可用于与本发明的化合物组合使用的蛋白酶体抑制剂的实例包括但不限于硼替佐米、双硫仑、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCG)、盐孢菌胺A、卡非佐米、ONX-0912、CEP-18770和MLN9708。
靶向蛋白质或脂质磷酸酶、降低或抑制其活性的化合物有例如磷酸酶1、磷酸酶2A或CDC25的抑制剂，如奥卡达酸(okadaic acid)或其衍生物。
诱导细胞分化过程的化合物包括但不限于视黄酸、α-γ-或δ-生育酚或α-γ-或δ-生育三烯酚。
如本文所用的术语环氧合酶抑制剂包括但不限于Cox-2抑制剂、5-烷基取代的2-芳基氨基苯乙酸和衍生物，如塞来昔布(
CELEBREXTM)、罗非昔布(VIOXXTM)、依托昔布、伐地昔布或5-烷基-2-芳基氨基苯乙酸，如5-甲基-2-(2'-氯-6'-氟苯胺基)苯乙酸，即罗美昔布。
如本文所用的术语“双膦酸盐”包括但不限于依曲膦酸、氯膦酸、替鲁膦酸、帕米膦酸、阿仑膦酸、伊班膦酸、利塞膦酸和唑来膦酸。依曲膦酸以商品名DIDRONELTM销售。氯膦酸以商品名BONEFOSTM销售。替鲁膦酸以商品名SkelidTM销售。帕米膦酸以商品名AREDIATM销售。阿仑膦酸以商品名FOSAMAXTM销售。伊班膦酸以商品名BONDRANATTM销售。利塞膦酸以商品名ACTONELTM销售。唑来膦酸以商品名ZOMETATM销售。术语“mTOR抑制剂”涉及抑制哺乳动物的雷帕霉素靶标(mTOR)并具有抗增殖活性的化合物，如西罗莫司依维莫司(CERTICANTM)、CCI-779和ABT578。
如本文所用的术语“类肝素酶抑制剂”是指靶向硫酸肝素、减少或抑制其降解的化合物。该术语包括但不限于PI-88。如本文所用的术语“生物反应调节剂”是指淋巴因子或干扰素。
如本文所用的术语“Ras致癌同种型的抑制剂”如H-Ras、K-Ras或N-Ras是指靶向Ras、降低或抑制其致癌活性的化合物；例如“法尼基转移酶抑制剂”，如L-744832、DK8G557或R115777(ZARNESTRATM)。如本文所用的术语“端粒酶抑制剂”是指靶向端粒酶、降低或抑制其活性的化合物。靶向端粒酶、降低或抑制其活性的化合物特别是抑制端粒酶受体的化合物，如端粒他汀。
如本文所用的术语“甲硫氨酸氨肽酶抑制剂”是指靶向甲硫氨酸氨肽酶、降低或抑制其活性的化合物。靶向甲硫氨酸氨肽酶、降低或抑制其活性的化合物包括但不限于苯胍麦(bengamide)或其衍生物。
如本文所用的术语“蛋白酶体抑制剂”是指靶向蛋白酶体、降低或抑制其活性的化合物。靶向蛋白酶体、降低或抑制其活性的化合物包括但不限于硼替佐米(VELCADETM)和MLN341。
如本文所用的术语“基质金属蛋白酶抑制剂”或(“MMP”抑制剂)包括但不限于胶原模拟肽和非模拟肽抑制剂、四环素衍生物，例如异羟肟酸模拟肽抑制剂巴马司他及其口服生物可利用的类似物马立马司他(BB-2516)、普马司他(AG3340)、美他司他(NSC 683551)、BMS-279251、BAY 12-9566、TAA211、MMI270B或AAJ996。
如本文所用的术语“用于治疗血液恶性肿瘤的化合物”包括但不限于FMS样酪氨酸激酶抑制剂，其是靶向FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)、降低或抑制其活性的化合物；干扰素、1-β-D-阿糖呋喃胞嘧啶(ara-c)和白消安；以及ALK抑制剂，其是靶向、减少或抑制间变性淋巴瘤激酶的化合物。
靶向FMS样酪氨酸激酶受体(Flt-3R)、降低或抑制其活性的化合物特别有抑制Flt-3R受体激酶家族的成员的化合物、蛋白质或抗体，如PKC412、米哚妥林、星形孢菌素衍生物、SU11248和MLN518。
如本文所用的术语“HSP90抑制剂”包括但不限于靶向HSP90、降低或抑制其固有ATP酶活性；经由泛素蛋白酶体途径降解、靶向、减少或抑制HSP90客户蛋白的化合物。靶向HSP90、降低或抑制其固有ATP酶活性的化合物特别有抑制HSP90的ATP酶活性的化合物、蛋白质或抗体，如17-烯丙基氨基、17-去甲氧基格尔德霉素(17AAG)，这是一种格尔德霉素衍生物；其它格尔德霉素相关化合物；根赤壳菌素和HDAC抑制剂。
如本文所用的术语“抗增殖抗体”包括但不限于曲妥珠单抗(HERCEPTINTM)、曲妥珠单抗-DM1、爱必妥、贝伐单抗(AVASTINTM)、利妥昔单抗PRO64553(抗CD40)和2C4抗体。所谓抗体意指完整的单克隆抗体、多克隆抗体、由至少2个完整抗体形成的多特异性抗体和抗体片段，只要它们表现出所需的生物活性即可。
对于急性髓性白血病(AML)的治疗，可以将本发明的化合物与标准白血病疗法组合使用，特别是与用于治疗AML的疗法组合使用。特别地，本发明的化合物可以与例如法尼基转移酶抑制剂和/或可用于治疗AML的其它药物如道诺霉素、阿霉素、Ara-C、VP-16、替尼泊苷、米托蒽醌、伊达比星、卡铂和PKC412组合施用。
其它抗白血病化合物包括例如嘧啶类似物Ara-C，其是脱氧胞苷的2'-α-羟基核糖(阿拉伯糖苷)衍生物。还包括嘌呤类似物次黄嘌呤、6-巯基嘌呤(6-MP)和磷酸氟达拉滨。靶向组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂如丁酸钠和辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)、降低或抑制其活性的化合物抑制被称为组蛋白脱乙酰酶的酶的活性。具体的HDAC抑制剂包括MS275、SAHA、FK228(以前的FR901228)、曲古抑菌素A和US 6,552,065中公开的化合物，包括但不限于N-羟基-3-[4-[[[2-(2-甲基-1H-吲哚-3-基)-乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐和N-羟基-3-[4-[(2-羟乙基){2-(1H-吲哚-3-基)乙基]-氨基]甲基]苯基]-2E-2-丙烯酰胺或其药学上可接受的盐，特别是乳酸盐。如本文所用的生长抑素受体拮抗剂是指靶向、处理或抑制生长抑素受体的化合物，如奥曲肽和SOM230。肿瘤细胞破坏方法是指诸如电离辐射的方法。上文和下文中所提到的术语“电离辐射”意指以电磁射线(如X射线和γ射线)或粒子(如α和β粒子)形式出现的电离辐射。电离辐射提供于但不限于放射疗法中，并且是本领域中已知的。参见Hellman，Principles of Radiation Therapy，Cancer，inPrinciples and Practice of Oncology，Devita等人编著，第4版，第1卷，第248-275页(1993)。
还包括EDG结合剂和核糖核苷酸还原酶抑制剂。如本文所用的术语“EDG结合剂”是指调节淋巴细胞再循环的一类免疫抑制剂，如FTY720。术语“核糖核苷酸还原酶抑制剂”是指嘧啶或嘌呤核苷类似物，包括但不限于氟达拉滨和/或阿糖胞苷(ara-C)、6-硫鸟嘌呤、5-氟尿嘧啶、克拉屈滨、6-巯基嘌呤(特别是针对ALL与ara-C组合)和/或喷司他丁。核糖核苷酸还原酶抑制剂特别有羟基脲或2-羟基-1H-异吲哚-1,3-二酮衍生物。
还特别包括VEGF的那些化合物、蛋白质或单克隆抗体，如1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪或其药学上可接受的盐、1-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪琥珀酸盐；ANGIOSTATINTM；ENDOSTATINTM；邻氨基苯甲酸酰胺；ZD4190；Zd6474；SU5416；SU6668；贝伐单抗；或抗VEGF抗体或抗VEGF受体抗体，如rhuMAb和RHUFab，VEGF适体如Macugon；FLT-4抑制剂、FLT-3抑制剂、VEGFR-2IgGI抗体、Angiozyme(RPI 4610)和贝伐单抗(AVASTINTM)。
如本文所用的光动力疗法是指使用被称为光敏化合物的某些化学物质来治疗或预防癌症的疗法。光动力疗法的实例包括用诸如VISUDYNETM和卟吩姆钠的化合物治疗。
如本文所用的血管生成抑制性类固醇是指阻断或抑制血管生成的化合物，举例如阿奈可他、去炎松、氢化可的松、11-α-表氢皮质醇、皮甾酮、17α-羟孕酮、皮质酮、去氧皮质酮、睾酮、雌酮和地塞米松。
含有皮质类固醇的植入物是指诸如氟轻松(fluocinolone)和地塞米松的化合物。
其它化学治疗化合物包括但不限于植物生物碱、激素化合物和拮抗剂；生物反应调节剂，优选淋巴因子或干扰素；反义寡核苷酸或寡核苷酸衍生物；shRNA或siRNA；或杂化合物或具有其它或未知作用机制的化合物。
由代码号、通用或商品名标识的活性化合物的结构可取自标准概要“默克索引”的现行版或取自数据库，例如Patents International(例如，IMS World Publications)。
示例性免疫肿瘤学药剂
在一些实施方案中，一种或多种其它治疗剂是免疫肿瘤学药剂。如本文所用，术语“免疫肿瘤学药剂”是指有效增强、刺激和/或上调受试者的免疫反应的药剂。在一些实施方案中，与本发明的化合物一起施用免疫肿瘤学药剂在治疗癌症方面具有协同作用。
免疫肿瘤学药剂可以是例如小分子药物、抗体或生物制剂或小分子。生物学免疫肿瘤学药剂的实例包括但不限于癌症疫苗、抗体和细胞因子。在一些实施方案中，抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，单克隆抗体是人源化的或人的。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是(i)刺激(包括共刺激)受体的激动剂或(ii)T细胞上的抑制(包括共抑制)信号的拮抗剂，两者均导致放大抗原特异性T细胞反应。
某些刺激性和抑制性分子是免疫球蛋白超家族(IgSF)的成员。与共刺激或共抑制受体结合的膜结合配体的一个重要家族是B7家族，其包括B7-1、B7-2、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)和B7-H6。与共刺激或共抑制受体结合的膜结合配体的另一家族是与同源TNF受体家族成员结合的TNF家族的分子，其包括CD40和CD40L、OX-40、OX-40L、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDAR、EDA1、XEDAR、EDA2、TNFR1、淋巴毒素α/TNFβ、TNFR2、TNFα、LTβR、淋巴毒素α1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY、NGFR。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是抑制T细胞激活的细胞因子(例如，IL-6、IL-10、TGF-β、VEGF及其它免疫抑制细胞因子)或刺激T细胞激活以刺激免疫反应的细胞因子。
在一些实施方案中，本发明的化合物和免疫肿瘤学药剂的组合可刺激T细胞反应。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是：(i)抑制T细胞激活的蛋白质的拮抗剂(例如，免疫检查点抑制剂)，如CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG-3、TIM-3、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳糖凝集素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1和TIM-4；或(ii)刺激T细胞激活的蛋白质的激动剂，如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27、CD40、DR3和CD28H。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是NK细胞上的抑制性受体的拮抗剂或NK细胞上的激活受体的激动剂。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是KIR的拮抗剂，如利瑞鲁单抗。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是抑制或消耗巨噬细胞或单核细胞的药剂，包括但不限于CSF-1R拮抗剂，如CSF-1R拮抗性抗体，包括RG7155(WO11/70024、WO11/107553、WO11/131407、WO13/87699、WO13/119716、WO13/132044)或FPA-008(WO11/140249；WO13169264；WO14/036357)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自连接正共刺激受体的激动剂、通过抑制性受体减弱信号传导的阻断剂、拮抗剂和一种或多种全身性增加抗肿瘤T细胞频率的药剂、克服肿瘤微环境内的不同免疫抑制途径(例如，阻断抑制性受体接合(例如，PD-L1/PD-1相互作用)、消耗或抑制Treg(例如，使用抗CD25单克隆抗体(例如，达利珠单抗)或通过离体抗CD25珠消耗)、抑制代谢酶如IDO或逆转/防止T细胞能量或耗尽的药剂)；和在肿瘤部位触发先天免疫激活和/或炎症的药剂。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CTLA-4拮抗剂。在一些实施方案中，CTLA-4拮抗剂是拮抗性CTLA-4抗体。在一些实施方案中，拮抗性CTLA-4抗体是YERVOY(伊匹单抗)或曲美木单抗。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是PD-1拮抗剂。在一些实施方案中，PD-1拮抗剂通过输注施用。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是与程序性死亡-1(PD-1)受体特异性结合并抑制PD-1活性的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，PD-1拮抗剂是拮抗性PD-1抗体。在一些实施方案中，拮抗性PD-1抗体是OPDIVO(纳武单抗)、KEYTRUDA(帕博利珠单抗)或MEDI-0680(AMP-514；WO2012/145493)。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂可以是匹地利珠单抗(CT-011)。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是由PD-L2的细胞外结构域(B7-DC)与IgG1的Fc部分融合组成的重组蛋白，称为AMP-224。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是PD-L1拮抗剂。在一些实施方案中，PD-L1拮抗剂是拮抗性PD-L1抗体。在一些实施方案中，PD-L1抗体是MPDL3280A(RG7446；WO2010/077634)、德瓦鲁单抗(MEDI4736)、BMS-936559(WO2007/005874)和MSB0010718C(WO2013/79174)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是LAG-3拮抗剂。在一些实施方案中，LAG-3拮抗剂是拮抗性LAG-3抗体。在一些实施方案中，LAG3抗体是BMS-986016(WO10/19570、WO14/08218)或IMP-731或IMP-321(WO08/132601、WO009/44273)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CD137(4-1BB)激动剂。在一些实施方案中，CD137(4-1BB)激动剂是激动性CD137抗体。在一些实施方案中，CD137抗体是乌瑞芦单抗或PF-05082566(WO12/32433)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是GITR激动剂。在一些实施方案中，GITR激动剂是激动性GITR抗体。在一些实施方案中，GITR抗体是BMS-986153、BMS-986156、TRX-518(WO006/105021、WO009/009116)或MK-4166(WO11/028683)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是吲哚胺(2,3)-双氧合酶(ID O)拮抗剂。在一些实施方案中，IDO拮抗剂选自艾卡哚司他(INCB024360，Incyte)；因多莫得(NLG-8189，NewLink Genetics Corporation)；卡马替尼(INC280，Novartis)；GDC-0919(Genentech/Roche)；PF-06840003(Pfizer)；BMS:F001287(Bristol-Myers Squibb)；Phy906/KD108(Phytoceutica)；分解犬尿氨酸的酶(Kynase，Ikena Oncology，以前的KynTherapeutics)；和NLG-919(WO09/73620、WO009/1156652、WO11/56652、WO12/142237)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是OX40激动剂。在一些实施方案中，OX40激动剂是激动性OX40抗体。在一些实施方案中，OX40抗体是MEDI-6383或MEDI-6469。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是OX40L拮抗剂。在一些实施方案中，OX40L拮抗剂是拮抗性OX40抗体。在一些实施方案中，OX40L拮抗剂是RG-7888(WO06/029879)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CD40激动剂。在一些实施方案中，CD40激动剂是激动性CD40抗体。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CD40拮抗剂。在一些实施方案中，CD40拮抗剂是拮抗性CD40抗体。在一些实施方案中，CD40抗体是卢卡木单抗或达西组单抗。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CD27激动剂。在一些实施方案中，CD27激动剂是激动性CD27抗体。在一些实施方案中，CD27抗体是伐立鲁单抗。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是MGA271(对于B7H3)(WO11/109400)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是阿巴伏单抗、阿德木单抗、阿夫妥珠单抗、阿仑单抗、马安那莫单抗、阿泊珠单抗、阿特珠单抗、阿维鲁单抗、博纳吐单抗、BMS-936559、卡妥索单抗、德瓦鲁单抗、艾卡哚司他、依帕珠单抗、因多莫得、奥英妥珠单抗、英妥木单抗、伊匹单抗、伊莎妥昔单抗、拉立珠单抗(lambrolizumab)、MED14736、MPDL3280A、纳武单抗、奥比妥珠单抗、奥卡妥珠单抗、奥法木单抗、奥拉他单抗(olatatumab)、帕博利珠单抗、匹地利珠单抗、利妥昔单抗、替西木单抗、沙马组单抗或曲美木单抗。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是免疫刺激剂。例如，阻断PD-1和PD-L1抑制轴的抗体可释放激活的肿瘤反应性T细胞，并且已在临床试验中显示出在越来越多的肿瘤组织学中诱导持久的抗肿瘤反应，包括一些在常规上不被认为对免疫疗法敏感的肿瘤类型。参见例如Okazaki，T.等人，(2013)Nat.Immunol.14，1212–1218；Zou等人，(2016)Sci.Transl.Med.8。抗PD-1抗体纳武单抗(Bristol-Myers Squibb，也称为ONO-4538、MDX1106和BMS-936558)已显示出改善在先前的抗血管生成疗法期间或之后经历疾病进展的RCC患者的总存活期的潜力。
在一些实施方案中，免疫调节治疗药物特异性诱导肿瘤细胞的凋亡。可用于本发明的经批准的免疫调节治疗药物包括泊马度胺(Celgene)；来那度胺(Celgene)；巨大戟醇甲基丁烯酸酯(/>LEO Pharma)。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是癌症疫苗。在一些实施方案中，癌症疫苗选自西普鲁塞-T(Dendreon/Valeant Pharmaceuticals)，其已被批准用于治疗无症状或症状轻微的转移性去势抵抗性(激素难治性)前列腺癌；和talimogenelaherparepvec(/>BioVex/Amgen，以前的T-VEC)，是被批准用于治疗黑素瘤中不可切除的皮肤、皮下和结节病变的经基因修饰的溶瘤病毒疗法。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自溶瘤病毒疗法，如pexastimogene devacirepvec(PexaVec/JX-594，SillaJen/以前的Jennerex Biotherapeutics)、针对肝细胞癌(NCT02562755)和黑素瘤(NCT00429312)被工程化以表达GM-CSF的胸苷激酶-(TK-)缺陷型痘苗病毒；派拉瑞普(pelareorep)(/>Oncolytics Biotech)，一种呼吸道肠道孤儿病毒(呼肠孤病毒)的变体，其在许多癌症中不会在非RAS激活的细胞中复制，包括结直肠癌(NCT01622543)；前列腺癌(NCT01619813)；头颈部鳞状细胞癌(NCT01166542)；胰腺腺癌(NCT00998322)；和非小细胞肺癌(NSCLC)(NCT 00861627)；恩那希瑞(enadenotucirev)(NG-348，PsiOxus，以前的ColoAd1)，一种被工程化以在卵巢癌(NCT02028117)；转移性或晚期上皮肿瘤如结直肠癌、膀胱癌、头颈部鳞状细胞癌和唾液腺癌(NCT02636036)中表达全长CD80和对T细胞受体CD3蛋白特异性的抗体片段的腺病毒；ONCOS-102(Targovax/以前的Oncos)，一种被工程化以在黑素瘤(NCT03003676)；和腹膜疾病、结直肠癌或卵巢癌(NCT02963831)中表达GM-CSF的腺病毒；GL-ONC1(GLV-1h68/GLV-1h153，Genelux GmbH)，分别在腹膜癌病(NCT01443260)；输卵管癌、卵巢癌(NCT 02759588)中研究的被工程化以表达β-半乳糖苷酶(β-gal)/β-葡萄糖醛酸酶或β-gal/人碘化钠同向转运蛋白(hNIS)的痘苗病毒；或CG0070(Cold Genesys)，一种被工程化以在膀胱癌(NCT02365818)中表达GM-CSF的腺病毒。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自JX-929(SillaJen/以前的JennerexBiotherapeutics)，一种被工程化以表达胞嘧啶脱氨酶的TK-和痘苗生长因子缺陷型痘苗病毒，其能够将前药5-氟胞嘧啶转化为细胞毒性药物5-氟尿嘧啶；TG01和TG02(Targovax/以前的Oncos)，靶向难以治疗的RAS突变的基于肽的免疫治疗剂；和TILT-123(TIL TBiotherapeutics)，一种工程化的腺病毒，命名为：Ad5/3-E2F-δ24-hTNFα-IRES-hIL20；以及VSV-GP(ViraTherapeutics)，一种被工程化以表达淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)的糖蛋白(GP)的水疱性口炎病毒(VSV)，其可以被进一步工程化以表达设计成产生抗原特异性CD8+T细胞反应的抗原。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是被工程化以表达嵌合抗原受体或CAR的T细胞。被工程化以表达这种嵌合抗原受体的T细胞被称为CAR-T细胞。
已构建的CAR由可来源于天然配体的结合结构域、来源于对细胞表面抗原具有特异性的单克隆抗体的单链可变片段(scFv)组成，与能够在T淋巴细胞中产生激活信号的作为T细胞受体(TCR)的功能端的胞内结构域(如来自TCR的CD3-ζ信号传导结构域)融合。在抗原结合后，这类CAR与效应细胞中的内源性信号传导途径连接，并产生类似于由TCR复合物启动的激活信号。
例如，在一些实施方案中，CAR-T细胞是美国专利8,906,682(June等人；特此以引用的方式全文并入)中所描述的细胞中的一种，该专利文献公开了被工程化以包含具有抗原结合结构域的细胞外结构域(如与CD19结合的结构域)的CAR-T细胞，与T细胞抗原受体复合物ζ链(如CD3ζ)的细胞内信号传导结构域融合。当在T细胞中表达时，CAR能够基于抗原结合特异性重新引导抗原识别。在CD19的情况下，抗原在恶性B细胞上表达。目前在广泛的适应症范围内正在进展的有超过200项临床试验使用CAR-T。[https://clinicaltrials.gov/ct2/results？term＝chimeric+antigen+receptors&pg＝1]。
在一些实施方案中，免疫刺激剂是视黄酸受体相关孤儿受体γ(RORγt)的激活剂。RORγt是在CD4+(Th17)和CD8+(Tc17)T细胞的17型效应子亚型的分化和维持以及表达IL-17的先天免疫细胞亚群如NK细胞的分化中具有关键作用的转录因子。在一些实施方案中，RORγt的激活剂是LYC-55716(Lycera)，目前正在对治疗实体肿瘤(NCT02929862)的临床试验中对其进行评价。
在一些实施方案中，免疫刺激剂是toll样受体(TLR)的激动剂或激活剂。TLR的合适激活剂包括TLR9的激动剂或激活剂，如SD-101(Dynavax)。SD-101是免疫刺激性CpG，正在针对B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤及其它淋巴瘤(NCT02254772)对其进行研究。可用于本发明的TLR8的激动剂或激活剂包括正在针对头颈部鳞状细胞癌(NCT02124850)和卵巢癌(NCT02431559)对其进行研究的莫托莫特(motolimod)(VTX-2337，VentiRxPharmaceuticals)。
可用于本发明的其它免疫肿瘤学药剂包括乌瑞芦单抗(BMS-663513，Bristol-Myers Squibb)，一种抗CD137单克隆抗体；伐立鲁单抗(CDX-1127，CelldexTherapeutics)，一种抗CD27单克隆抗体；BMS-986178(Bristol-Myers Squibb)，一种抗OX40单克隆抗体；利瑞鲁单抗(IPH2102/BMS-986015，Innate Pharma，Bristol-MyersSquibb)，一种抗KIR单克隆抗体；莫那利珠单抗(IPH2201，Innate Pharma，AstraZeneca)，一种抗NKG2A单克隆抗体；安德利昔单抗(GS-5745，Gilead Sciences)，一种抗MMP9抗体；MK-4166(Merck&Co.)，一种抗GITR单克隆抗体。
在一些实施方案中，免疫刺激剂选自埃罗妥珠单抗、米伐木肽、toll样受体的激动剂或激活剂和RORγt的激活剂。
在一些实施方案中，免疫刺激治疗药物是重组人白介素15(rhIL-15)。rhIL-15已经在临床上作为黑素瘤和肾细胞癌(NCT01021059和NCT01369888)及白血病(NCT02689453)的疗法进行了测试。在一些实施方案中，免疫刺激剂是重组人白介素12(rhIL-12)。在一些实施方案中，基于IL-15的免疫治疗药物是异二聚IL-15(hetIL-15，Novartis/Admune)，其是由内源性IL-15的合成形式与可溶性IL-15结合蛋白IL-15受体α链复合组成的融合复合物(IL15:sIL-15RA)，已在黑素瘤、肾细胞癌、非小细胞肺癌和头颈部鳞状细胞癌(NCT02452268)的1期临床试验中进行了测试。在一些实施方案中，重组人白介素12(rhIL-12)是NM-IL-12(Neumedicines,Inc.)、NCT02544724或NCT02542124。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自Jerry L.Adams等人，“Bigopportunities for small molecules in immuno-oncology”，Cancer Therapy 2015，第14卷，第603-622页中所述的那些，该文献的内容以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自Jerry L.Adams等人的表1中描述的实例。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是靶向选自Jerry L.Adams等人的表2中所列的那些的免疫肿瘤学靶标的小分子。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是选自Jerry L.Adams等人的表2中所列的那些的小分子药剂。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自Peter L.Toogood，“Small moleculeimmuno-oncology therapeutic agents”，Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters2018，第28卷，第319-329页中所述的小分子免疫肿瘤学药剂，该文献的内容以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是靶向如Peter L.Toogood描述的途径的药剂。
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂选自Sandra L.Ross等人，“Bispecific Tcell engagerantibody constructs can mediate bystander tumor cellkilling”，PLoS ONE 12(8):e0183390中描述的那些，该文献的内容以引用的方式整体并入本文。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是双特异性T细胞衔接子/>抗体构建体。在一些实施方案中，双特异性T细胞衔接子/>抗体构建体是CD19/CD3双特异性抗体构建体。在一些实施方案中，双特异性T细胞衔接子/>抗体构建体是EGFR/CD3双特异性抗体构建体。在一些实施方案中，双特异性T细胞衔接子/>抗体构建体激活T细胞。在一些实施方案中，双特异性T细胞衔接子/>抗体构建体激活T细胞，T细胞释放诱导旁观者细胞上的细胞间粘附分子1(ICAM-1)和FAS上调的细胞因子。在一些实施方案中，双特异性T细胞衔接子/>抗体构建体激活T细胞，这导致诱导的旁观者细胞溶解。在一些实施方案中，旁观者细胞在实体肿瘤中。在一些实施方案中，被溶解的旁观者细胞靠近/>激活的T细胞。在一些实施方案中，旁观者细胞包括肿瘤相关抗原(TAA)阴性癌细胞。在一些实施方案中，旁观者细胞包括EGFR阴性癌细胞。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是阻断PD-L1/PD1轴和/或CTLA4的抗体。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是离体扩增的肿瘤浸润T细胞。在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是将T细胞与肿瘤相关表面抗原(TAA)直接连接的双特异性抗体构建体或嵌合抗原受体(CAR)。
示例性免疫检查点抑制剂
在一些实施方案中，免疫肿瘤学药剂是如本文所述的免疫检查点抑制剂。
如本文所用的术语“检查点抑制剂”涉及可用于防止癌细胞躲避患者的免疫系统的药剂。抗肿瘤免疫颠覆的主要机制之一被称为“T细胞耗竭”，其是由于长期暴露于已导致抑制性受体上调的抗原所致。这些抑制性受体充当免疫检查点，以便防止不受控制的免疫反应。
PD-1和共抑制受体如细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)、B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA；CD272)、T细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域3(Tim-3)、淋巴细胞激活基因-3(Lag-3；CD223)等等经常被称为检查点调控剂。它们充当分子“守门员”，其允许细胞外信息决定细胞周期进程及其它细胞内信号传导过程是否应继续进行。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是针对PD-1的抗体。PD-1与程序性细胞死亡1受体(PD-1)结合，以阻止该受体与抑制性配体PDL-1结合，从而压制肿瘤抑制宿主抗肿瘤免疫反应的能力。
一方面，检查点抑制剂是生物学治疗药物或小分子。另一方面，检查点抑制剂是单克隆抗体、人源化抗体、完全人抗体、融合蛋白或其组合。在进一步的方面中，检查点抑制剂抑制选自CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配体或其组合的检查点蛋白。在另外的方面中，检查点抑制剂与选自CTLA-4、PDL1、PDL2、PDl、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD160、CGEN-15049、CHK 1、CHK2、A2aR、B-7家族配体或其组合的检查点蛋白的配体相互作用。一方面，检查点抑制剂是免疫刺激剂、T细胞生长因子、白介素、抗体、疫苗或其组合。在进一步的方面中，白介素是IL-7或IL-15。在具体方面，白介素是糖基化IL-7。在另外的方面中，疫苗是树突细胞(DC)疫苗。
检查点抑制剂包括以统计学显著的方式阻断或抑制免疫系统的抑制途径的任何药剂。这类抑制剂可包括小分子抑制剂，或者可包括结合并阻断或抑制免疫检查点受体的抗体或其抗原结合片段或结合并阻断或抑制免疫检查点受体配体的抗体。可以被靶向用于阻断或抑制的例示性检查点分子包括但不限于CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、LAG3、TIM3、VISTA、KIR、2B4(属于CD2家族的分子，并且在所有NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也称为BY55)、CGEN-15049、CHK 1和CHK2激酶、A2aR和各种B-7家族配体。B7家族配体包括但不限于B7-1、B7-2、B7-DC、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-H5、B7-H6和B7-H7。检查点抑制剂包括结合CTLA-4、PDL1、PDL2、PD1、BTLA、HVEM、TIM3、GAL9、LAG3、VISTA、KIR、2B4、CD 160和CGEN-15049中的一者或多者并阻断或抑制其活性的抗体或其抗原结合片段、其它结合蛋白、生物学治疗药物或小分子。例示性免疫检查点抑制剂包括但不限于曲美木单抗(CTLA-4阻断抗体)、抗OX40、PD-L1单克隆抗体(抗B7-Hl；MEDI4736)、MK-3475(PD-1阻断剂)、纳武单抗(抗PD1抗体)、CT-011(抗PD1抗体)、BY55单克隆抗体、AMP224(抗PDL1抗体)、BMS-936559(抗PDL1抗体)、MPLDL3280A(抗PDL1抗体)、MSB0010718C(抗PDL1抗体)和伊匹单抗(抗CTLA-4检查点抑制剂)。检查点蛋白质配体包括但不限于PD-L1、PD-L2、B7-H3、B7-H4、CD28、CD86和TIM-3。
在某些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自PD-1拮抗剂、PD-L1拮抗剂和CTLA-4拮抗剂。在一些实施方案中，检查点抑制剂选自由纳武单抗伊匹单抗/>和帕博利珠单抗/>组成的组。在一些实施方案中，检查点抑制剂选自纳武单抗(抗PD-1抗体，/>Bristol-Myers Squibb)；帕博利珠单抗(抗PD-1抗体，Merck)；伊匹单抗(抗CTLA-4抗体，/>Bristol-Myers Squibb)；德瓦鲁单抗(抗PD-L1抗体，/>AstraZeneca)；和阿特珠单抗(抗PD-L1抗体，Genentech)。
在一些实施方案中，检查点抑制剂选自由以下组成的组：拉立珠单抗(MK-3475)、纳武单抗(BMS-936558)、匹地利珠单抗(CT-011)、AMP-224、MDX-1105、MEDI4736、MPDL3280A、BMS-936559、伊匹单抗、利瑞鲁单抗、IPH2101、帕博利珠单抗和曲美木单抗。
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂是REGN2810(Regeneron)，一种在患有基底细胞癌(NCT03132636)、NSCLC(NCT03088540)、皮肤鳞状细胞癌(NCT02760498)、淋巴瘤(NCT02651662)和黑素瘤(NCT03002376)的患者中测试的抗PD-1抗体；匹地利珠单抗(CureTech)，也称为CT-011，一种与PD-1结合的抗体，正在进行弥漫性大B细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤的临床试验；阿维鲁单抗(Pfizer/Merck KGaA)，也称为MSB0010718C)，一种完全人IgG1抗PD-L1抗体，正在进行非小细胞肺癌、默克尔细胞癌、间皮瘤、实体肿瘤、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、头颈癌和胃癌的临床试验；或PDR001(Novartis)，一种与PD-1结合的抑制性抗体，正在进行非小细胞肺癌、黑素瘤、三阴性乳腺癌和晚期或转移性实体肿瘤的临床试验。曲美木单抗(CP-675,206；Astrazeneca)是一种针对CTLA-4的完全人单克隆抗体，已在临床试验中针对多种适应症进行了研究，包括：间皮瘤、结直肠癌、肾癌、乳腺癌、肺癌和非小细胞肺癌、胰腺导管腺癌、胰腺癌、生殖细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、肝细胞癌、前列腺癌、子宫内膜癌、肝转移癌、肝癌、大B细胞淋巴瘤、卵巢癌、宫颈癌、转移性间变性甲状腺癌、尿道上皮癌、输卵管癌、多发性骨髓瘤、膀胱癌、软组织肉瘤和黑素瘤。AGEN-1884(Agenus)是一种抗CTLA4抗体，正在1期临床试验中针对晚期实体肿瘤(NCT02694822)进行研究。
在一些实施方案中，检查点抑制剂是含有蛋白-3的T细胞免疫球蛋白粘蛋白(TIM-3)的抑制剂。可用于本发明的TIM-3抑制剂包括TSR-022、LY3321367和MBG453。TSR-022(Tesaro)是一种抗TIM-3抗体，其正在针对实体肿瘤(NCT02817633)进行研究。LY3321367(Eli Lilly)是一种抗TIM-3抗体，其正在针对实体肿瘤(NCT03099109)进行研究。MBG453(Novartis)是一种抗TIM-3抗体，其正在针对晚期恶性肿瘤(NCT02608268)进行研究。
在一些实施方案中，检查点抑制剂是具有Ig和ITIM结构域的T细胞免疫受体或TIGIT(某些T细胞和NK细胞上的免疫受体)的抑制剂。可用于本发明的TIGIT抑制剂包括BMS-986207(Bristol-Myers Squibb)，一种抗TIGIT单克隆抗体(NCT02913313)；OMP-313M32(Oncomed)；和抗TIGIT单克隆抗体(NCT03119428)。
在一些实施方案中，检查点抑制剂是淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)的抑制剂。可用于本发明的LAG-3抑制剂包括BMS-986016和REGN3767及IMP321。BMS-986016(Bristol-Myers Squibb)是一种抗LAG-3抗体，正在针对成胶质细胞瘤和神经胶质肉瘤(NCT02658981)进行研究。REGN3767(Regeneron)也是一种抗LAG-3抗体，正在针对恶性肿瘤(NCT03005782)进行研究。IMP321(Immutep S.A.)是一种LAG-3-Ig融合蛋白，正在针对黑素瘤(NCT02676869)；腺癌(NCT02614833)；和转移性乳腺癌(NCT00349934)进行研究。
可用于本发明的检查点抑制剂包括OX40激动剂。正在进行临床试验研究的OX40激动剂包括：PF-04518600/PF-8600(Pfizer)，一种用于转移性肾癌(NCT03092856)以及晚期癌症和肿瘤(NCT02554812；NCT05082566)的激动性抗OX40抗体；GSK3174998(Merck)，一种处于1期癌症试验(NCT02528357)的激动性抗OX40抗体；MEDI0562(Medimmune/AstraZeneca)，一种用于晚期实体肿瘤(NCT02318394和NCT02705482)的激动性抗OX40抗体；MEDI6469，一种用于结直肠癌(NCT02559024)、乳腺癌(NCT01862900)、头颈癌(NCT02274155)和转移性前列腺癌(NCT01303705)患者的激动性抗OX40抗体(Medimmune/AstraZeneca)；和BMS-986178(Bristol-Myers Squibb)，一种用于晚期癌症(NCT02737475)的激动性抗OX40抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括CD137(也称为4-1BB)激动剂。正在进行临床试验研究的CD137激动剂包括乌图木单抗(PF-05082566，Pfizer)，一种用于弥漫性大B细胞淋巴瘤(NCT02951156)以及晚期癌症和肿瘤(NCT02554812和NCT05082566)的激动性抗CD137抗体；乌瑞芦单抗(BMS-663513，Bristol-Myers Squibb)，一种用于黑素瘤和皮肤癌(NCT02652455)以及成胶质细胞瘤和神经胶质肉瘤(NCT02658981)的激动性抗CD137抗体；和CTX-471(Compass Therapeutics)，一种用于转移性或局部晚期恶性肿瘤(NCT03881488)的激动性抗CD137抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括CD27激动剂。正在进行临床试验研究的CD27激动剂包括伐立鲁单抗(CDX-1127，Celldex Therapeutics)，一种用于头颈部鳞状细胞癌、卵巢癌、结直肠癌、肾细胞癌和成胶质细胞瘤(NCT02335918)；淋巴瘤(NCT01460134)；以及神经胶质瘤和星形细胞瘤(NCT02924038)的激动性抗CD27抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)激动剂。正在进行临床试验研究的GITR激动剂包括TRX518(Leap Therapeutics)，一种用于恶性黑素瘤及其它恶性实体肿瘤(NCT01239134和NCT02628574)的激动性抗GITR抗体；GWN323(Novartis)，一种用于实体肿瘤和淋巴瘤(NCT 02740270)的激动性抗GITR抗体；INCAGN01876(Incyte/Agenus)，一种用于晚期癌症(NCT02697591和NCT03126110)的激动性抗GITR抗体；MK-4166(Merck)，一种用于实体肿瘤(NCT02132754)的激动性抗GITR抗体；和MEDI1873(Medimmune/AstraZeneca)，一种用于晚期实体肿瘤(NCT02583165)的具有人IgG1Fc结构域的激动性六聚GITR-配体分子。
可用于本发明的检查点抑制剂包括诱导型T细胞共刺激剂(ICOS，也称为CD278)激动剂。正在进行临床试验研究的ICOS激动剂包括MEDI-570(Medimmune)，一种用于淋巴瘤(NCT02520791)的激动性抗ICOS抗体；GSK3359609(Merck)，一种处于1期(NCT02723955)的激动性抗ICOS抗体；JTX-2011(Jounce Therapeutics)，一种处于1期(NCT02904226)的激动性抗ICOS抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括杀伤IgG样受体(KIR)抑制剂。正在进行临床试验研究的KIR抑制剂包括利瑞鲁单抗(IPH2102/BMS-986015，Innate Pharma/Bristol-Myers Squibb)，一种用于白血病(NCT01687387、NCT02399917、NCT02481297、NCT02599649)、多发性骨髓瘤(NCT02252263)和淋巴瘤(NCT01592370)的抗KIR抗体；IPH2101(1-7F9，Innate Pharma)，其针对骨髓瘤(NCT01222286和NCT01217203)；和IPH4102(Innate Pharma)，一种用于淋巴瘤(NCT02593045)的与长细胞质尾部(KIR3DL2)的三个结构域结合的抗KIR抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括CD47与信号调控蛋白α(SIRPa)之间的相互作用的CD47抑制剂。正在进行临床试验研究的CD47/SIRPa抑制剂包括ALX-148(AlexoTherapeutics)，一种处于1期(NCT03013218)的与CD47结合并阻止CD47/SIRPa介导的信号传导的(SIRPa)的拮抗性变体；TTI-621(SIRPa-Fc，Trillium Therapeutics)，一种处于1期临床试验(NCT02890368和NCT02663518)的通过连接SIRPa的N-末端CD47结合结构域与人IgG1的Fc结构域产生的可溶性重组融合蛋白，通过结合人CD47起作用，并阻止其向巨噬细胞递送其“不许吞噬(do not eat)”信号；CC-90002(Celgene)，一种用于白血病(NCT02641002)的抗CD47抗体；和Hu5F9-G4(Forty Seven，Inc.)，其针对结直肠肿瘤和实体肿瘤(NCT02953782)、急性髓性白血病(NCT02678338)和淋巴瘤(NCT02953509)。
可用于本发明的检查点抑制剂包括CD73抑制剂。正在进行临床试验研究的CD73抑制剂包括MEDI9447(Medimmune)，一种用于实体肿瘤(NCT02503774)的抗CD73抗体；和BMS-986179(Bristol-Myers Squibb)，一种用于实体肿瘤(NCT02754141)的抗CD73抗体。
可用于本发明的检查点抑制剂包括干扰素基因蛋白的刺激剂(STING，也称为跨膜蛋白173或TMEM173)的激动剂。正在进行临床试验研究的STING的激动剂包括MK-1454(Merck)，一种用于淋巴瘤(NCT03010176)的激动性合成环状二核苷酸；和ADU-S100(MIW815，Aduro Biotech/Novartis)，一种处于1期(NCT02675439和NCT03172936)的激动性合成环状二核苷酸。
可用于本发明的检查点抑制剂包括CSF1R抑制剂。正在进行临床试验研究的CSF1R抑制剂包括培西达替尼(PLX3397，Plexxikon)，一种用于结直肠癌、胰腺癌、转移性和晚期癌症(NCT02777710)以及黑素瘤、非小细胞肺癌、头颈部鳞状细胞癌、胃肠间质肿瘤(GIST)和卵巢癌(NCT02452424)的CSF1R小分子抑制剂；和IMC-CS4(LY3022855，Lilly)，一种用于胰腺癌(NCT03153410)、黑素瘤(NCT03101254)和实体肿瘤(NCT02718911)的抗CSF-1R抗体；以及BLZ945(4-[2((1R,2R)-2-羟基环己基氨基)-苯并噻唑-6-基氧基]-吡啶-2-甲酸甲基酰胺，Novartis)，一种用于晚期实体肿瘤(NCT02829723)的可口服的CSF1R的抑制剂。
可用于本发明的检查点抑制剂包括NKG2A受体抑制剂。正在进行临床试验研究的NKG2A受体抑制剂包括莫那利珠单抗(IPH2201，Innate Pharma)，一种用于头颈部肿瘤(NCT02643550)和慢性淋巴细胞性白血病(NCT02557516)的抗NKG2A抗体
在一些实施方案中，免疫检查点抑制剂选自纳武单抗、帕博利珠单抗、伊匹单抗、阿维鲁单抗、德瓦鲁单抗、阿特珠单抗或匹地利珠单抗。
范例
以下实施例旨在说明本发明，而不应被解释为对其进行限制。
实施例1：SPR测定
MEK-RAF结合测定
通过表面等离子共振(SPR)与单循环动力学分析来跟踪化合物对MEK与BRAF或CRAF的结合亲和力的影响。将GST-BRAF或GST-CRAF固定到芯片上面，并使浓度增加的His标记的MEK1流过传感器芯片。将500mM ATP添加到流动的缓冲液中。在化合物存在和不存在的情况下计算MEK1与BRAF或CRAF结合的解离常数。仪器测量在BIACORE 8K仪器上进行。传感图经过双参考和DMSO校正。数据符合单循环动力学模型。
MEK-KSR结合测定
通过表面等离子共振(SPR)与单循环动力学分析来跟踪化合物对MEK与KSR1或KSR2的结合亲和力的影响。将GST-KSR1或GST-KSR2固定到芯片上面，并使浓度增加的His标记的MEK1流过传感器芯片。将500mM ATP添加到流动的缓冲液中。在化合物存在和不存在的情况下计算MEK1与BRAF或CRAF结合的解离常数。仪器测量在BIACORE 8K仪器上进行。传感图经过双参考和DMSO校正。数据符合单循环动力学模型。
MEK1/CRAF稳定化
通过胺偶联(来自Cytiva的GST捕获试剂盒)将抗GST抗体固定于CM5芯片上。将1μg/mL的GST-CRAF蛋白(AA 306-548，N末端GST融合体，Carna Biosciences，Inc)捕获在此表面上，接触时间为200秒，流速为5μL/min。捕获缓冲液是1xPBS pH 7.4、10mM MgCl2、1mMDTT、0.01％ Tween-20和500μM ATP。CRAF的捕获水平为大约50个共振单位(RU)。
在含有10mM HEPES pH 7.4、150mM NaCl、10mM MgCl2、1mM DTT、0.01％ Tween-20、500μM ATP和1％ DMSO的缓冲液中稀释His标记的MEK1(±化合物)。流动的缓冲液为1xPBS、10mM MgCl2、1mM DTT、0.01％ Tween-20、500μM ATP和1％ DMSO。用总共5个剂量的3μM化合物溶液将MEK1从200nM的最高剂量进行三倍连续稀释。在每个循环中，缔合时间为60秒，且解离时间为600秒，用50％ DMSO额外洗涤。在15℃下收集分析物结合，流速为30μL/min。
KD比率定义为(CRAF-MEK1二元复合物的KD)/(三元复合物的KD)。
实施例2：免疫沉淀测定
通过在6孔板中每孔铺板约450,000个HCT116细胞来进行免疫沉淀实验。将细胞铺板48h，以便在转染前达到大约70％的汇合。然后，在转染后24h，将细胞用媒介物(0.1％DMSO)或化合物(约200nM)处理1h。将细胞在冷PBS中洗涤两次，然后转移到装有0.6ml的PBS溶液的预冷冻管中。将细胞在冷离心机中以1,800g旋转10min，并吸出上清液。为了裂解细胞，将沉淀重悬于补充有蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(Thermo Fisher，78440)的NP-40缓冲液(50mM Tris pH 7.8、100mM NaCl、0.5％(v/v)NP-40、10％(v/v)甘油、1mM EDTA)中，并在冰上温育30分钟。将裂解物以2,100g离心20min并收集上清液。使用BCA试剂(Pierce，23225)以BSA为标准对澄清的裂解物进行定量。将5微克兔抗MEK1抗体(Millipore-Sigma，07-641)或兔IgG(Millipore Sigma，12-370)固定在50μl的琼脂糖蛋白A树脂(ThermoFisher，53139)上，并在开始进行免疫沉淀前在300μl NP-40缓冲液中洗涤三次。
接下来，对于MEK1免疫沉淀，将总体积为0.6ml的250μg总细胞裂解物与同蛋白A树脂预缀合的预固定化抗MEK1抗体混合。将样品在4℃下在颠倒旋转器上温育4h，接着在0.6ml体积的NP-40缓冲液中洗涤三次。接下来，通过添加80μl体积的1×SDS样品缓冲液使蛋白质变性，并从树脂中释放出来。将样品在90℃下煮沸2min，旋转，然后施加于在MOPS-SDS缓冲液(Thermo Fisher，NP0001)中在150V下运行60min的4–12％的bis-tris甘氨酸凝胶(Bio-Rad，3450125)。然后将凝胶转移到在Tris-甘氨酸缓冲液(95V，250A)中的20％甲醇中的硝化纤维素上。使用丽春红确认转移，然后通过蛋白质印迹进行分析。通过ChemDocXRS+成像系统(Biorad)上增强的化学发光来检测MEK、Flag标记的蛋白质、BRAF和GAPDH的信号。
实施例3：抑制小鼠异种移植物肿瘤生长的生物学测定
可以单独或与第二种抗癌剂如TEAD抑制剂或ERK5抑制剂组合测试具有MEK抑制活性的示例性化合物在胰腺癌和肺癌的患者来源的小鼠异种移植物模型中抑制肿瘤生长的能力。测定程序如下所述。
患者来源的小鼠异种移植物(PDX)肿瘤生长测定的程序
在Balb/c小鼠(6-8周龄)的右侧皮下接种原代人肿瘤异种移植物模型肿瘤片段(直径2-3mm3)用于肿瘤发展。在一项研究中，用携带BRAF突变(LU6424)的人肺腺癌肿瘤模型(MSCLC，ADC模型LU6424)接种小鼠；在第二项研究中，用具有K-Ras G12D突变(PA6258)的人胰腺肿瘤模型(腺鳞癌模型PA6258)接种小鼠。当平均肿瘤体积达到大约150-200mm3时，将动物随机分配到适当的治疗组。用以下物质之一处理小鼠：(1)媒介物对照，(2)单独的示例性MEK抑制剂，(3)单独的第二种抗癌剂，或(4)MEK抑制剂和第二种抗癌剂的组合。使用卡尺每周测量肿瘤两次。
实施例4：生物学测定
pERK HTRF测定
测定原理：
将人AsPc-1细胞或HCT-116细胞接种在384孔培养板中并生长过夜。将细胞用化合物(10-pt滴定)预处理4小时。然后，制备细胞裂解物，并采用均相TR-FRET测定法测定磷酸化ERK1/2的水平。
3D CTG活力测定
测定原理：
CellTiter-Glo 3D细胞活力测定旨在确定3D细胞球体中的细胞活力。测定试剂穿透大的球体，并具有增加的裂解能力。其测量ATP作为活力的指标，并生成发光读数。使用Cell Titer-Glo 3D细胞活力测定试剂盒Promega G9683。
NANOBRET的通用方案
采用NANOBRET测定法(Promega，Inc.Madison，Wisconsin)评估MEK1和BRAF、MEK1和CRAF、MEK1和KSR1以及MEK1和KSR2的蛋白质:蛋白质相互作用。每个基因对的全长开放阅读框在N末端或C末端与或/>编码序列的开放阅读框融合。一旦合成了载体，则每对的标签位置的经验评估确定了最佳信号窗口。将适当的/>和嵌合基因融合物转染到HEK293细胞(或其它细胞系)中，并在适合组织培养和信号评估的白色96或384孔板中培养。将Ikena化合物与必要的阳性和阴性对照一起分配到转染的活细胞中。在不连续的时间添加NANOBRETTM/>底物，并在EnvisionMultimode(或其它有能力的仪器)上测量供体和受体信号。通过从实验样品中减去对照样品的NANOBRETTM比率来计算NANOBRETTM比率，由此评估蛋白质:蛋白质相互作用。另外，这些嵌合基因融合物在哺乳动物、细菌或酵母蛋白质表达系统中的表达可产生可用于体外生化测定的重组蛋白质。
MEK1激酶方案
测定原理：
它是包括通过MEK1使无活性的ERK激活和ULIGHT-MBP底物的磷酸化的偶联测定。被Eu抗磷酸底物抗体捕获的磷酸化底物使Eu螯合物供体和ULIGHT受体染料紧密接近。在340nm下激发时，Eu螯合物将其能量转移给ULIGHT染料，导致在665nm下的荧光发射。
HCT116 ERK/pERK细胞内蛋白质印迹测定
细胞内蛋白质印迹(ICW)测定是在微孔板(针对96或384孔格式优化)中进行的定量免疫荧光测定，其将蛋白质印迹的特异性与ELISA的可重复性和通量相结合。
细胞内蛋白质印迹测定也称为细胞印迹、基于细胞的ELISA、细胞内ELISA(ICE)和FACE(基于快速激活细胞的ELISA)。采用细胞内蛋白质测定，您可以：
·使用靶特异性一抗和二抗检测固定和透化的培养细胞中的蛋白质
·使用光谱上不同的红外染料缀合物在700nm和800nm下定量两个靶标
·快速、准确地测量许多样品中的相对蛋白质水平
·在相关细胞环境中原位检测蛋白质
表2和3显示了上述测定中选定化合物的活性。化合物编号对应于表1中的化合物编号。活性被分类为A-D，其中A代表IC50<100nM；B代表100nM≤IC50<1uM；C代表1≤IC50<10uM；且D代表IC50≥10uM。
表2.
表3.
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表4显示了上述测定中选定化合物的活性。化合物编号对应于表1中的化合物编号。活性被分类为A-D，其中A代表IC50<100nM；B代表100nM≤IC50<1uM；C代表1≤IC50<10uM；且D代表IC50≥10uM。CRaf/MEK SPR:KD比率归类为A-D，其中A代表KD比率<0.5；B代表0.5≤KD比率<1；C代表1≤KD比率<5；且D代表KD比率≥5。
表4.
实施例5：某些化合物的合成
一般合成方案
上文提供了如本文所述的化合物的一般合成方案。另外，下面提供了某些示例性化合物的合成程序。
I-21
步骤1：N-[2-(二甲氨基)乙基]氨磺酰氯
在N2气氛和-40～-50℃下向硫酰氯(1.53g，11.34mmol，1.13mL，1当量)在DCM(50mL)中的溶液中滴加N',N'-二甲基乙烷-1,2-二胺(1g，11.34mmol，1.24mL，1当量)和Et3N(1.15g，11.34mmol，1.58mL，1当量)在DCM(5mL)中的溶液。将混合物在N2气氛和-50℃下搅拌5分钟，得到N-[2-(二甲氨基)乙基]氨磺酰氯(75g，粗)，为白色悬浮液体，其不经进一步纯化用于下一步。
步骤2：3-环丙基-1-[3-[2-(二甲氨基)乙基氨磺酰氨基]苯基]-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
在15℃下向1-(3-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(60mg，104.65μmol，100％纯度，1当量)和Et3N(72.70mg，718.46μmol，0.1mL，6.87当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加N-[2-(二甲氨基)乙基]氨磺酰氯(6g，32.14mmol，N/A纯度，307.17当量)。将混合物在15℃下搅拌5分钟。将反应混合物在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：48％-78％，10min)，并冻干，得到3-环丙基-1-[3-[2-(二甲氨基)乙基氨磺酰氨基]苯基]-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(14.69mg，19.82μmol，18.9％收率，97.6％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.68(dd，J＝1.8，10.1Hz，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz，1H)，7.45-7.38(m，1H)，7.26-7.20(m，2H)，7.08(d，J＝7.8Hz，1H)，6.88(t，J＝8.5Hz，1H)，3.22(s，3H)，3.12(t，J＝6.9Hz，2H)，2.73(tt，J＝3.8，7.2Hz，1H)，2.51(t，J＝6.9Hz，2H)，2.28(s，6H)，1.42(s，3H)，1.10-1.05(m，2H)，0.80-0.75(m，2H)；ES-LCMS m/z 724.0[M+H]+。
I-41和I-42
步骤1：N-[2-(氯磺酰基氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯
在N2气氛和-40～-50℃下向硫酰氯(850mg，6.30mmol，629.63μL，1.01当量)和Et3N(1.89g，18.73mmol，2.61mL，3当量)在DCM(50mL)中的溶液中滴加N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(1g，6.24mmol，980.39μL，1当量)在DCM(5mL)中的溶液。将混合物在N2气氛和-40～-50℃下搅拌5分钟，得到N-[2-(氯磺酰基氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(75g，粗)，为无色液体，其不经进一步纯化用于下一步。
步骤2：N-[2-[[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]氨磺酰氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯
向1-(3-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(90mg，156.97μmol，100％纯度，1当量)和Et3N(145.40mg，1.44mmol，0.2mL，9.15当量)在DCM(20mL)中的溶液中添加N-[2-(氯磺酰基氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(10g，38.65mmol，N/A纯度，246.23当量)。将混合物在15℃下搅拌10分钟。将反应混合物在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC:PE/EtOAc＝3/4，Rf＝0.48)，得到所需化合物(100mg)。将所需化合物(100mg)中的50mg通过制备型HPLC纯化(柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：50％-80％，10min)并冻干，得到N-[2-[[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]氨磺酰氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(16.07mg，20.07μmol，12.8％收率，99.4％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.58(dd，J＝1.8，10.1Hz，1H)，7.49(d，J＝8.2Hz，1H)，7.31(t，J＝8.1Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.13(dd，J＝1.4，8.1Hz，1H)，7.00-6.95(m，1H)，6.78(t，J＝8.5Hz，1H)，3.13(s，3H)，3.03-2.98(m，2H)，2.97-2.92(m，2H)，2.64(tt，J＝3.8，7.2Hz，1H)，1.33(s，9H)，1.32(s，3H)，1.02-0.96(m，2H)，0.71-0.66(m，2H)；ES-LCMS m/z 796.1[M+H]+。
步骤3：1-[3-(2-氨基乙基氨磺酰氨基)苯基]-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向N-[2-[[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]氨磺酰氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(50mg，62.84μmol，N/A纯度，1当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(3.08g，27.01mmol，2mL，429.83当量)。将混合物在20℃下搅拌1h。将反应混合物在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-75％，10min)并冻干，得到1-[3-(2-氨基乙基氨磺酰氨基)苯基]-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(16.78mg，23.94umol，38.09％收率，99.223％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.68(dd，J＝1.8，10.1Hz，1H)，7.59(d，J＝8.4Hz，1H)，7.41(t，J＝8.0Hz，1H)，7.28-7.25(m，1H)，7.25-7.22(m，1H)，7.08-7.04(m，1H)，6.88(t，J＝8.5Hz，1H)，3.22(s，3H)，3.06(t，J＝6.1Hz，2H)，2.76-2.70(m，3H)，1.41(s，3H)，1.10-1.05(m，2H)，0.80-0.76(m，2H)；ES-LCMS m/z 696.0[M+H]+。
I-24
步骤1：3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-(3-羟苯基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮
在0℃下将NaNO2(9.63mg，139.53μmol，2当量)在H2O(1mL)中的水溶液添加到1-(3-氨基苯基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(40mg，69.76μmol，100.0％纯度，1当量)在H2SO4(0.25mL)和H2O(0.5mL)中的溶液中。将反应混合物搅拌30分钟。添加AcOH(2mL)。将反应混合物在100℃下搅拌2h。将反应混合物在减压下浓缩以移除大部分乙酸。向残留物添加饱和NaHCO3水溶液直至pH 7，并用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.4)，得到3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-(3-羟苯基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(35mg，55.45μmol，79.5％收率，91.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 11.30(s，1H)，7.53(d，J＝9.3Hz，1H)，7.46(d，J＝8.4Hz，1H)，7.29(s，1H)，6.84(d，J＝7.8Hz，2H)，6.80(s，1H)，6.70(t，J＝8.0Hz，1H)，5.59(s，1H)，3.21(s，3H)，2.75(s，1H)，1.44(s，3H)，1.16-1.10(m，2H)，0.86(d，J＝16.8Hz，2H)；ES-LCMS m/z 574.8[M+H]+。
步骤2：甲基氨基磺酸3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯酯
向3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-(3-羟苯基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(25mg，55.45μmol，79.5％收率，91.0％纯度，1当量)在DCM(1mL)中的溶液中添加N-甲基氨磺酰氯(4.62mg，35.65μmol，0.9当量)和Et3N(12.02mg，118.83μmol，16.54μL，3当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物通过添加0.1N HCl酸化，并用EtOAc(20mL x 3)萃取。将有机层用盐水(20mL x 2)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质通过制备型HPLC纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(0.05％ NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：55％-85％,，10min)并冻干，得到所需化合物(20mg，纯度60.0％)，为白色固体，将其通过制备型TLC进一步纯化(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.38)，得到甲基氨基磺酸3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯酯(8.34mg，12.50μmol，31.6％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 11.28(s，1H)，7.53(dd，J＝1.7，9.6Hz，1H)，7.49-7.45(m，2H)，7.34-7.29(m，2H)，7.25(d，J＝2.3Hz，1H)，6.72(t，J＝8.3Hz，1H)，4.80(s，1H)，3.21(s，3H)，2.96-2.91(m，3H)，2.80-2.71(m，1H)，1.40(s，3H)，1.16-1.11(m，2H)，0.83-0.77(m，2H)；ES-LCMS m/z 668.0[M+H]+。
I-25
步骤1：2-甲基苯-1,3-二胺
在Ar2气氛下向2-甲基-1,3-二硝基-苯(2g，10.98mmol，1当量)在MeOH(15mL)中的溶液中添加Pd/C(1g，10.98mmol，10.0％纯度，1.00当量)。将悬浮液在真空下脱气，并用H2吹扫数次。将混合物在H2(30psi)和25℃下搅拌1h。将反应混合物过滤，并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.37)，得到2-甲基苯-1,3-二胺(800mg，6.35mmol，57.9％收率，97.0％纯度)，为灰色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.67-7.15(m，1H)，6.89-6.81(m，2H)，6.22(d，J＝7.8Hz，4H)，1.99(s，3H)。
步骤2：4-甲基苯磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯
向3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-5-羟基-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(800mg，1.66mmol，100.0％纯度，1当量)在MeCN(35mL)中的溶液中添加4-甲基苯磺酰氯(479.74mg，2.52mmol，1.52当量)和Et3N(581.30mg，5.74mmol，799.58μL，3.47当量)。将混合物在N2气氛和15℃下搅拌2h。将反应混合物在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC:PE/EtOAc＝2/1，Rf＝0.3)，得到4-甲基苯磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(620mg，924.04μmol，55.8％收率，95.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 11.28(s，1H)，7.53(d，J＝9.0Hz，1H)，7.47(s，2H)，7.37-7.29(m，2H)，7.26-7.23(m，1H)，6.72(t，J＝7.2Hz，1H)，4.95(s，1H)，3.21(s，3H)，2.93(s，3H)，2.74(s，1H)，1.40(s，3H)，1.27(s，2H)，1.14(d，J＝6.1Hz，2H)；ES-LCMS m/z638.0[M+H]+。
步骤3：5-(3-氨基-2-甲基-苯胺基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向4-甲基苯磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(220mg，327.89μmol，95.0％纯度，1当量)在DMA(2mL)中的溶液中添加2-甲基苯-1,3-二胺(123.89mg，983.66μmol，97.0％纯度，3当量)和2,6-二甲基吡啶(105.40mg，983.66μmol，114.56μL，3当量)。将混合物在微波和180℃下搅拌2h。将混合物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：46％-76％，10min)并冻干，得到5-(3-氨基-2-甲基-苯胺基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(58mg，88.65μmol，27.0％收率，95.4％纯度，HCl)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 10.16(s，1H)，7.70-7.59(m，2H)，7.14(d，J＝7.8Hz，2H)，7.08-6.77(m，1H)，6.67(d，J＝6.1Hz，1H)，2.97(s，3H)，2.78(s，1H)，2.55(s，3H)，1.60(s，3H)，1.18(d，J＝5.6Hz，2H)，0.83(s，2H)；ES-LCMS m/z 588.1[M+H]+。
步骤4：3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-5-[2-甲基-3-(甲基氨磺酰氨基)苯胺基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向5-(3-氨基-2-甲基-苯胺基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(50mg，76.42μmol，95.4％纯度，1当量，HCl)在DCM(1mL)中的溶液中添加N-甲基氨磺酰氯(8.91mg，68.78μmol，0.9当量)和TEA(38.66mg，382.11μmol，53.18μL，5当量)。将混合物在N2气氛和5℃下搅拌1h。向残留物添加NaHCO3饱和水溶液直至pH 7，并用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型TLC将其纯化(SiO2，PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.38)，得到3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-5-[2-甲基-3-(甲基氨磺酰氨基)苯胺基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(50mg，70.19μmol，91.9％收率，95.5％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 10.11(s，1H)，7.63(d，J＝9.5Hz，1H)，7.22(d，J＝8.1Hz，1H)，7.12(t，J＝7.7Hz，1H)，6.95(s，1H)，6.67(d，J＝7.6Hz，1H)，6.25(s，1H)，4.50(s，1H)，4.12(s，1H)，2.96(s，3H)，2.85(s，1H)，2.79(s，3H)，2.74(d，J＝4.6Hz，3H)，1.54(s，3H)，1.18(d，J＝6.1Hz，2H)，0.83(d，J＝5.4Hz，2H)；ES-LCMS m/z 681.0[M+H]+。
步骤5：3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[2-甲基-3-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-5-[2-甲基-3-(甲基氨磺酰氨基)苯胺基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(30mg，42.11μmol，95.5％纯度，1当量)在THF(1mL)中的溶液中添加一滴NaOMe/MeOH(28重量％，42.11μmol，1当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。向残留物添加AcOH直至pH到7，并用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗物质通过制备型HPLC纯化(柱：Boston GreenODS150*30mm*5um；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：50％-70％，10min)并冻干，得到产物，向其添加饱和NaHCO3水溶液直至pH＝7，并用EtOAc(20mL x 3)萃取，然后将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[2-甲基-3-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(10.19mg，14.66μmol，34.8％收率，97.9％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm7.70-7.63(m，1H)，7.55(J＝8.4，12.8Hz，2H)，7.28(J＝7.8Hz，1H)，7.06(d，J＝7.1Hz，1H)，6.86(t，J＝8.6Hz，1H)，3.20(s，3H)，2.74-2.69(m，1H)，2.67(s，3H)，2.24(s，3H)，1.27(s，3H)，1.07(d，J＝7.1Hz，2H)，0.89-0.76(m，2H)；ES-LCMS m/z 681.0[M+H]+。
I-29
/>
步骤1：1-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]-3-(甲基氨磺酰基)脲
在N2气氛和-60℃下向1-(3-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(200mg，348.82μmol，1当量)在THF(20mL)中的溶液中添加N-(氧代亚甲基)氨磺酰氯(100mg，706.55μmol，61.35μL，2.03当量)。将混合物在N2气氛和-60～-20℃下搅拌0.5h。添加MeNH2(235mg，3.48mmol，100％纯度，9.98当量，HCl)和Et3N(352.97mg，3.49mmol，485.52μL，10当量)。将混合物缓慢升温至25℃，并在25℃下搅拌1h。将反应混合物在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：BostonGreen ODS150*30mm*5um；流动相：[水(0.05％HCl)-ACN]；B％：50％-70％，10min)并冻干。通过制备型HPLC纯化残留物(柱：Boston Prime C18150*30mm*5um；流动相：[水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：25％-55％，10min)并冻干，得到1-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]-3-(甲基氨磺酰基)脲(18.94mg，25.86μmol，7.4％收率，96.9％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm7.70-7.52(m，3H)，7.40(d，J＝4.6Hz，2H)，7.08(d，J＝3.2Hz，1H)，6.86(t，J＝8.6Hz，1H)，3.20(s，3H)，2.75-2.65(m，4H)，1.40(s，3H)，1.10-1.00(m，2H)，0.80-0.70(m，2H)；ES-LCMS m/z 710.0[M+H]+。
I-44
步骤1：N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-3,7-二甲基-2,5-二氧代-吡喃并[3,2-c]吡啶-8-基]-2-甲基-苯基]乙酰胺
向8-(3-氨基-2-甲基-苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-3,7-二甲基-吡喃并[3,2-c]吡啶-2,5-二酮(20mg，31.50μmol，90.0％纯度，1当量)和TEA(9.56mg，94.51μmol，13.15μL，3当量)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加乙酰氯(4.95mg，63.01μmol，4.50μL，2当量)。将反应混合物在0℃和N2气氛下搅拌1h。通过在0℃下添加饱和NaHCO3水溶液(15mL)淬灭反应混合物，并用DCM(20mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝0/1，TLC:PE/EtOAc＝0/1，Rf＝0.45)，接着冻干，得到N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-3,7-二甲基-2,5-二氧代-吡喃并[3,2-c]吡啶-8-基]-2-甲基-苯基]乙酰胺(13.71mg，22.31μmol，70.8％收率，99.8％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 11.32(s，1H)，9.40(s，1H)，7.72(d，J＝10.3Hz，1H)，7.52(d，J＝8.3Hz，2H)，7.26(t，J＝7.6Hz，1H)，7.01(d，J＝7.6Hz，1H)，6.88(t，J＝8.7Hz，1H)，3.04(d，J＝4.2Hz，1H)，2.24(s，3H)，2.08(s，3H)，1.95(s，3H)，1.45(s，3H)，1.21(d，J＝8.1Hz，2H)，0.97-0.88(m，2H)；ES-LCMS m/z 614.0[M+H]+。
I-45
步骤1：2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸
在0℃下向2-氧代-2-苯基-乙酸(51g，339.70mmol，1当量)在H2SO4(80mL)中的溶液中添加KNO3(41.21g，407.64mmol，1.2当量)。将混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入冰水(1.6L)中，并用EtOAc(400mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(300mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸(66g，粗)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.70(t，J＝1.8Hz，1H)，8.56(td，J＝1.2，8.2Hz，1H)，8.41-8.37(m，1H)，7.89(t，J＝8.0Hz，1H)。
步骤2：2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸乙酯
向2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸(66g，338.24mmol，1当量)在DMF(700mL)中的溶液中添加K2CO3(121.54g，879.42mmol，2.6当量)。在20℃下搅拌2h后，滴加碘乙烷(263.77g，1.69mol，135.26mL，5当量)。将混合物在20℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(800mL)中，用EtOAc(500mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/0至10/1，TLC:PE/EtOAc＝5/1，Rf＝0.45)，得到2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸乙酯(35.5g，143.16mmol，42.3％收率，90.0％纯度)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.90(s，1H)，8.54-8.47(m，1H)，8.40(d，J＝7.8Hz，1H)，7.75(t，J＝7.9Hz，1H)，4.50(q，J＝7.2Hz，2H)，1.46(t，J＝7.1Hz，3H).。
步骤3：3-[(2E)-2-[2-乙氧基-1-(3-硝基苯基)-2-氧代-亚乙基]肼基]-3-氧代-丙酸乙酯
向2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸乙酯(22.5g，90.73mmol，1当量)在EtOH(120mL)中的溶液中添加H2SO4(2.29g，23.33mmol，1.24mL，0.25当量)和3-肼基-3-氧代-丙酸乙酯(13.79g，94.36mmol，1.04当量)。将混合物在90℃下搅拌2h。移除溶剂，得到残留物，将其用水(200mL)稀释，并用EtOAc(300mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到3-[(2E)-2-[2-乙氧基-1-(3-硝基苯基)-2-氧代-亚乙基]肼基]-3-氧代-丙酸乙酯(30g，粗，E/Z混合物)，为黄色油状物。ES-LCMS m/z 352.2[M+H]+。
步骤4：4-羟基-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯
向3-[(2E)-2-[2-乙氧基-1-(3-硝基苯基)-2-氧代-亚乙基]肼基]-3-氧代-丙酸乙酯(30g，85.39mmol，E/Z混合物，1当量)在DMF(300mL)中的溶液中添加K2CO3(6.49g，46.97mmol，0.55当量)。将混合物在80℃下搅拌3h。将混合物冷却到环境温度，并倒入3NHCl(600mL)中。通过过滤收集沉淀的固体，得到残留物，将其添加到MeOH(50mL)中，并在15℃下搅拌2h。过滤浆料，并用MeOH(3x3mL)冲洗滤饼。收集固体并真空干燥，得到4-羟基-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯(8.3g，24.47mmol，28.7％收率，90.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 13.23(s，1H)，8.58-8.53(m，1H)，8.30(td，J＝1.2，7.2Hz，1H)，8.15(d，J＝8.1Hz，1H)，7.76(t，J＝8.1Hz，1H)，4.32(q，J＝7.1Hz，2H)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-LCMS m/z 306.1[M+H]+。
步骤5：2-烯丙基-5-羟基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯
向4-羟基-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯(3g，8.85mmol，1当量)在DMF(40mL)中的溶液中添加NaH(707.63mg，17.69mmol，60.0％纯度，2当量)，并在20℃下搅拌30分钟。将溶液冷却到-10℃，滴加3-溴丙-1-烯(1.12g，9.29mmol，1.05当量)。将反应温度缓慢升温至20℃，并在20℃下搅拌1h。通过添加水(60mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(80mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到2-烯丙基-5-羟基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(3g，7.82mmol，88.4％收率，90.0％纯度)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.57(s，1H)，8.30(d，J＝1.5，8.3Hz，1H)，8.16(d，J＝7.8Hz，1H)，7.76(t，J＝8.1Hz，1H)，5.98(td，J＝5.5，10.9，16.8Hz，1H)，5.24-5.15(m，2H)，4.70(d，J＝5.6Hz，2H)，4.30(q，J＝7.1Hz，2H)，1.28(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-LCMS m/z 346.0[M+H]+。
步骤6：2-烯丙基-5-氯-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯
向2-烯丙基-5-羟基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(3g，7.82mmol，1当量)在DCM(40mL)中的溶液中添加(COCl)2(9.92g，78.19mmol，6.84mL，10当量)。将混合物在35℃下搅拌3h。移除溶剂，得到2-烯丙基-5-氯-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(3g，粗)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.46(t，J＝1.8Hz，1H)，8.37-8.33(m，1H)，7.91(d，J＝1.0，7.8Hz，1H)，7.68(t，J＝7.9Hz，1H)，6.01(td，J＝6.2，10.3，16.9Hz，1H)，5.41-5.27(m，2H)，4.82(d，J＝6.4Hz，2H)，4.49(q，J＝7.2Hz，2H)，1.42(t，J＝7.2Hz，3H)；ES-LCMS m/z 364.1，366.1[M+H]+。
步骤7：2-烯丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯
在0℃下向2-烯丙基-5-氯-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(3g，6.60mmol，1当量)在DCM(30mL)中的溶液中添加MeNH2(13.66g，131.96mmol，30.0％纯度，20当量)。将混合物在0℃下搅拌5h。通过添加水(50mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(60mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.24)，得到2-烯丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(2.2g，5.53mmol，83.7％收率，90.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm8.38-8.32(m，1H)，8.29(t，J＝1.7Hz，1H)，7.90(d，J＝7.8Hz，1H)，7.83-7.76(m，1H)，6.24(d，J＝5.1Hz，1H)，5.98-5.84(m，1H)，5.21-5.07(m，2H)，4.56(d，J＝5.6Hz，2H)，4.24(q，J＝7.1Hz，2H)，2.66(d，J＝5.1Hz，3H)，1.28(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-LCMS m/z 359.1[M+H]+。
步骤8：2-烯丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)哒嗪-3-酮
向2-烯丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(1.5g，3.77mmol，1当量)在DMSO(20mL)中的溶液中添加LiCl(3.19g，75.35mmol，20当量)。将混合物在180℃下搅拌6h。将混合物用水(40mL)稀释，并用EtOAc(60mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/0至1/2，TLC:PE/EtOAc＝1/2，Rf＝0.25)，得到2-烯丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)哒嗪-3-酮(1.2g，3.35mmol，89.0％收率，80.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.38(d，J＝1.7Hz，1H)，8.34-8.29(m，1H)，7.85(d，J＝7.6Hz，1H)，7.70(t，J＝7.9Hz，1H)，6.09-5.94(m，1H)，5.86(s，1H)，5.28-5.17(m，2H)，4.73(d，J＝4.6Hz，2H)，4.29(s，1H)，2.85-2.79(m，3H)；ES-LCMS m/z 287.1[M+H]+。
步骤9：6-烯丙基-4-羟基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
向2-烯丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)哒嗪-3-酮(1.2g，3.35mmol，1当量)在Ac2O(20mL)中的溶液中添加2-甲基丙二酸(1.19g，10.06mmol，3当量)。将混合物在110℃下搅拌2h。移除溶剂，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝1/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.40)，接着冻干，得到6-烯丙基-4-羟基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(1.1g，2.45mmol，73.0％收率，82.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.50-8.27(m，2H)，7.83-7.60(m，2H)，6.10-5.92(m，1H)，5.39-5.31(m，2H)，4.86(d，J＝6.1Hz，2H)，3.08(s，3H)，2.15(s，3H)；ES-LCMS m/z369.1[M+H]+。
步骤10：4-甲基苯磺酸[6-烯丙基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基]酯
向6-烯丙基-4-羟基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(1.1g，2.45mmol，1当量)在ACN(20mL)中的溶液中添加DIEA(1.58g，12.24mmol，2.13mL，5当量)和4-甲基苯磺酰氯(933.71mg，4.90mmol，2当量)。将混合物在60℃下搅拌1h。将混合物用水(50mL)稀释，并用EtOAc(60mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/0至1/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.35)，得到4-甲基苯磺酸[6-烯丙基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基]酯(1.2g，1.88mmol，76.9％收率，82.0％纯度)，为棕色固体。1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.41-8.30(m，2H)，7.97(d，J＝8.3Hz，2H)，7.79-7.66(m，2H)，7.41(d，J＝8.3Hz，2H)，6.10-5.94(m，1H)，5.40-5.22(m，2H)，4.84(d，J＝6.1Hz，2H)，3.09(s，3H)，2.50(s，3H)，1.89(s，3H)；ES-LCMS m/z 523.1[M+H]+。
步骤11：6-烯丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
向2-氟-4-碘-苯胺(647.80mg，2.73mmol，2.49当量)在THF(10mL)中的溶液中添加NaH(175.74mg，4.39mmol，60.0％纯度，4当量)，并在0℃下搅拌30分钟，在0℃下添加4-甲基苯磺酸[6-烯丙基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基]酯(700mg，1.10mmol，1当量)。将反应温度缓慢升温至25℃，并在25℃下搅拌3h。通过添加水(30mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(40mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至3/1，TLC:PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.43)，得到6-烯丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(150mg，217.08μmol，19.7％收率，85.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 10.72(s，1H)，8.42-8.39(m，1H)，8.36(td，J＝1.8，7.8Hz，1H)，7.77-7.66(m，2H)，7.46(dd，J＝1.8，10.0Hz，1H)，7.38(d，J＝8.7Hz，1H)，6.57(t，J＝8.5Hz，1H)，6.04(td，J＝6.1，10.4，16.9Hz，1H)，5.39-5.28(m，2H)，4.86(d，J＝6.0Hz，2H)，3.08(s，3H)，1.82(s，3H)；ES-LCMS m/z 588.0[M+H]+。
步骤10：6-烯丙基-8-(3-氨基苯基)-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
向6-烯丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(130mg，188.14μmol，1当量)在EtOH(1.5mL)和H2O(1.5mL)中的溶液中添加NH4Cl(100.64mg，1.88mmol，10当量)和Fe(52.53mg，940.68μmol，5当量)。将混合物在90℃下搅拌3h。过滤反应混合物以移除不溶物。将滤液在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：AgNO3_二氧化硅，150*25mm*15um；流动相：[庚烷-EtOH(0.1％NH3H2O)]；B％：0％-80％，9min)，接着冻干，得到6-烯丙基-8-(3-氨基苯基)-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(80.27mg，144.02μmol，76.6％收率，100.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 10.81(s，1H)，7.44(d，J＝1.8，10.1Hz，1H)，7.35(d，J＝8.6Hz，1H)，7.24(d，J＝7.6Hz，1H)，6.84-6.70(m，3H)，6.53(t，J＝8.5Hz，1H)，6.04(td，J＝6.0，10.5，17.0Hz，1H)，5.37-5.24(m，2H)，4.85(d，J＝4.9Hz，2H)，3.83(s，2H)，3.16(s，3H)，1.81(s，3H)；ES-LCMS m/z 557.9[M+H]+。
I-46
步骤1：4-甲基苯磺酸酯N-甲基-1-(3-硝基苯基)甲磺酰胺
向(3-硝基苯基)甲磺酰氯(500mg，2.12mmol，1当量)在THF(1mL)中的溶液中添加DIEA(548.47mg，4.24mmol，739.17μL，2当量)和MeNH2.EtOH(197.69mg，6.37mmol，212.18μL，3当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。将混合物用水(30mL)淬灭，并用DCM(30mL x 3)萃取。将合并的有机相用NaHCO3(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC:PE/EtOAc＝2/1，Rf＝0.4)，得到4-甲基苯磺酸酯N-甲基-1-(3-硝基苯基)甲磺酰胺(200mg，861.19μmol，40.6％收率，99.1％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.32-8.20(m，2H)，7.79(d，J＝7.6Hz，1H)，7.64-7.58(m，1H)，4.35(s，2H)，4.27-4.13(m，1H)，2.79(d，J＝5.4Hz，3H)。
步骤2：1-(3-氨基苯基)-N-甲基甲磺酰胺
在N2气氛下向4-甲基苯磺酸酯N-甲基-1-(3-硝基苯基)甲磺酰胺(200mg，861.19μmol，99.1％，1当量)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(200mg，861.19μmol，10.0％，1当量)。将悬浮液在真空下脱气，并用H2吹扫数次。将混合物在H2(15psi)和25℃下搅拌1h。将反应混合物过滤，并在减压下浓缩，得到1-(3-氨基苯基)-N-甲基-甲磺酰胺(180mg，853.90μmol，99.2％收率，95.0％纯度)，为黄色固体，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm7.22-7.17(m，1H)，7.17-7.14(m，1H)，6.75-6.73(m，2H)，6.71-6.67(m，2H)，6.66-6.57(m，1H)，4.18(s，2H)，2.02(s，3H)。
步骤3：1-(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺
向1-(3-氨基苯基)-N-甲基-甲磺酰胺(150mg，711.58μmol，95.0％，1.91当量)在DMA(3mL)中的溶液中添加2,6-二甲基吡啶(119.77mg，1.12mmol，130.19μL，3当量)和4-甲基苯磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(250mg，372.60μmol，90.0％，1当量)。将混合物在微波(2巴)和140℃下搅拌3h。将混合物用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：46％-66％，10min)并冻干，得到产物，向其添加饱和NaHCO3水溶液直至pH＝7，并用EtOAc(20mL x 3)萃取，然后将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到1-(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺(45mg，58.55μmol，15.7％收率，86.6％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.85(dd，J＝1.8，9.5Hz，1H)，7.76(d，J＝8.2Hz，1H)，7.37(t，J＝7.8Hz，1H)，7.22-7.14(m，2H)，7.08-6.99(m，2H)，4.33(s，2H)，2.95(s，3H)，2.82-2.76(m，1H)，2.69(s，3H)，1.67(s，3H)，1.16-1.09(m，2H)，0.81(d，J＝2.6Hz，2H)；ES-LCMS m/z 666.0[M+H]+。
步骤4：1-(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺
向1-(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺(45mg，58.15μmol，86.0％，1当量)在THF(1mL)中的溶液中添加一滴NaOMe/MeOH(20重量％，58.15μmol，1当量)。将混合物在N2气氛和25℃下搅拌1h。向残留物添加AcOH直至pH＝7，并用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：53％-83％，10min)并冻干，得到1-(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺(10.01mg，14.96μmol，25.7％收率，99.4％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm7.66(dd，J＝1.7，10.3Hz，1H)，7.57(d，J＝8.3Hz，1H)，7.51-7.47(m，2H)，7.43(s，1H)，7.39(dd，J＝3.2，5.6Hz，1H)，6.86(t，J＝8.4Hz，1H)，4.37(s，2H)，3.20(s，3H)，2.76-2.69(m，1H)，2.67(s，3H)，1.34(s，3H)，1.08-1.03(m，2H)，0.81-0.74(m，2H)；ES-LCMS m/z 666.1[M+H]+。
I-33
步骤1：6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-3,7-二甲基-8-[2-甲基-3-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡喃并[3,2-c]吡啶-2,5-二酮
在0℃下向8-(3-氨基-2-甲基-苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-3,7-二甲基-吡喃并[3,2-c]吡啶-2,5-二酮(50mg，70.01μmol，80％纯度，1当量)和TEA(28.34mg，280.02μmol，38.98μL，4当量)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加N-甲基氨磺酰氯(18.14mg，140.01μmol，N/A纯度，2当量)。将反应混合物在0℃和N2气氛下搅拌5h。通过在0℃下添加饱和NaHCO3水溶液(30mL)淬灭反应混合物，并用DCM(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：53％-83％，10min)，接着冻干，得到6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-3,7-二甲基-8-[2-甲基-3-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡喃并[3,2-c]吡啶-2,5-二酮(6.22mg，9.36μmol，13.4％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm11.30(s，1H)，8.82(s，1H)，7.71(d，J＝1.7，10.3Hz，1H)，7.51(d，J＝8.3Hz，1H)，7.40(d，J＝7.8Hz，1H)，7.27(t，J＝7.7Hz，1H)，7.14(q，J＝4.9Hz，1H)，7.01(d，J＝7.6Hz，1H)，6.87(t，J＝8.7Hz，1H)，3.03(s，1H)，2.55(d，J＝5.1Hz，3H)，2.20(s，3H)，2.03(s，3H)，1.43(s，3H)，1.23-1.17(m，2H)，0.96-0.84(m，2H)；ES-LCMS m/z 665.0[M+H]+。
I-47和I-48
步骤1：甲亚磺酰氯
在N2气氛和-20℃下向(甲基二硫烷基)甲烷(5.07g，53.82mmol，4.83mL，1当量)和AcOH(6.46g，107.64mmol，6.16mL，2当量)的混合物中滴加硫酰氯(21.79g，161.47mmol，16.14mL，3当量)。将混合物在N2气氛和-20℃下搅拌2h。将混合物缓慢升温至20℃，并在N2气氛和20℃下搅拌1h，在35℃下搅拌1h。将混合物在减压下浓缩，得到甲亚磺酰氯(10.6g，粗)，为无色油状物，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 3.38(s，3H)。
步骤2：(S)-N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺和(R)-N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺
向1-(3-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(200mg，348.82μmol，100％纯度，1当量)和Et3N(363.50mg，3.59mmol，0.5mL，10.30当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加甲亚磺酰氯(200mg，2.03mmol，N/A纯度，5.82当量)。将混合物在25℃下搅拌0.5h。TLC(PE/EtOAc＝2/3，Rf＝0.15)显示原料几乎耗尽。将反应混合物在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至0/1，TLC:PE/EtOAc＝2/3，Rf＝0.15)，得到N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺(200mg，91.9％纯度)，为白色固体。将产物(160mg)通过制备型HPLC纯化(柱：Welch Xtimate C18150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)，得到所需化合物，为白色固体，通过SFC将其进一步分离(柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H(250mm*30mm，5um)；流动相：[0.1％ NH3H2O EtOH]；B％：45％-45％)，得到峰1和峰2。将峰1在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：43％-73％，11min)，接着冻干，得到(S)-N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺(13.75mg，20.91μmol，9.0％收率，96.6％纯度，SFC：Rt＝4.554，ee＝100％，[α]27.8 D＝-36.364(MeOH，c＝0.011g/100mL))，为白色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.66(dd，J＝1.8，10.1Hz，1H)，7.59-7.54(m，1H)，7.39(t，J＝8.1Hz，1H)，7.17-7.08(m，2H)，7.05-7.00(m，1H)，6.86(t，J＝8.5Hz，1H)，3.20(s，3H)，2.84(s，3H)，2.71(tt，J＝3.8，7.2Hz，1H)，1.40(s，3H)，1.10-1.00(m，2H)，0.79-0.70(m，2H)；ES-LCMS m/z 636.1[M+H]+。将峰2在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)，得到所需化合物，为白色固体，通过SFC将其进一步分离(柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H(250mm*30mm,5um)；流动相：[0.1％ NH3H2O ETOH]；B％：45％-45％，min)，接着冻干，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：WelchXtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，11min)，接着冻干，得到(R)-N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺(12.41mg，19.05μmol，8.2％收率，97.6％纯度，SFC：Rt＝4.991，ee＝89.18％，[α]27.7 D＝+107.692(MeOH，c＝0.013g/100mL))，为白色固体。1HNMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.66(dd，J＝1.8，10.2Hz，1H)，7.56(d，J＝8.4Hz，1H)，7.39(t，J＝8.0Hz，1H)，7.17-7.10(m，2H)，7.02(dd，J＝1.1，8.0Hz，1H)，6.86(t，J＝8.5Hz，1H)，3.20(s，3H)，2.84(s，3H)，2.71(tt，J＝3.7，7.2Hz，1H)，1.40(s，3H)，1.08-1.03(m，2H)，0.78-0.73(m，2H)；ES-LCMS m/z 636.0[M+H]+。
I-49
步骤1：4-氯-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯
向4-羟基-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯(2.5g，7.37mmol，1当量)在DCM(30mL)中的溶液中添加(COCl)2(935.60mg，7.37mmol，645.24μL，1当量)。将混合物在35℃下搅拌3h。通过添加水(30mL)淬灭反应混合物，并用DCM(40mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，向其添加MeOH(5mL)，并在25℃下搅拌2h。过滤浆料，并用PE(2x3mL)冲洗滤饼。收集固体并真空干燥，得到4-氯-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯(1.9g，5.69mmol，77.2％收率，97.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 11.67(s，1H)，8.48(s，1H)，8.38(d，J＝8.1Hz，1H)，7.92(d，J＝7.8Hz，1H)，7.74-7.66(m，1H)，4.51(q，J＝7.1Hz，2H)，1.43(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-LCMS m/z 324.0，326.0[M+H]+。
步骤2：5-氯-2-环丙基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯
将4-氯-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯(1.4g，4.20mmol，1当量)、环丙基硼酸(720.75mg，8.39mmol，2当量)、2-(2-吡啶基)吡啶(1.64g，10.49mmol，2.5当量)、Na2CO3(533.60mg，5.03mmol，1.2当量)和Cu(OAc)2(914.43mg，5.03mmol，1.2当量)在DCE(20mL)中的混合物脱气，并用N2吹扫3次，并将混合物在70℃和N2气氛下搅拌24h。将反应混合物用水(100mL)稀释，并用DCM(60mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/0至3/1，TLC:PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.43)，得到5-氯-2-环丙基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(400mg，989.69μmol，23.6％收率，90.0％纯度)，为黄色胶状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 8.42(d，J＝1.8Hz，1H)，8.35(td，J＝1.1，8.3Hz，1H)，7.87(d，J＝7.6Hz，1H)，7.70-7.65(m，1H)，4.51(q，J＝7.1Hz，2H)，4.22(t，J＝4.0，7.6Hz，1H)，1.43(t，J＝7.2Hz，3H)，1.22-1.16(m，2H)，1.13-1.06(m，2H)；ES-LCMS m/z 364.0，366.0[M+H]+。
步骤3：2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯
在0℃下向5-氯-2-环丙基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(400mg，989.69μmol，1当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加MeNH2(1.02g，9.90mmol，30.0％纯度，10当量)。将混合物在20℃下搅拌2h。移除溶剂，得到2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(300mg，669.74μmol，67.7％收率，80.0％纯度)，为黄色固体。1HNMR(500MHz，CDCl3)δppm 8.33-8.30(m，2H)，7.79(d，J＝7.6Hz，1H)，7.70-7.66(m，1H)，4.43(q，J＝7.1Hz，2H)，4.02-3.95(m，1H)，2.69(d，J＝5.3Hz，3H)，1.44(t，J＝7.1Hz，2H)，1.46-1.42(m，1H)，1.03-0.94(m，4H)；ES-LCMS m/z 359.1[M+H]+。
步骤4：2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)哒嗪-3-酮
向2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(300mg，669.74μmol，1当量)在DMSO(5mL)中的溶液中添加LiCl(283.93mg，6.70mmol，10当量)。将混合物在150℃下搅拌8h。将反应混合物用水(30mL)稀释，并用EtOAc(40mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/0至0/1，TLC:PE/EtOAc＝0/1，Rf＝0.15)，得到2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)哒嗪-3-酮(200mg，628.74μmol，93.9％收率，90.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.38-8.27(m，2H)，7.83(d，J＝7.6Hz，1H)，7.73-7.66(m，1H)，5.92(s，1H)，4.03(t，J＝3.9，7.5Hz，1H)，2.83(d，J＝3.4Hz，3H)，1.09-0.93(m，4H)；ES-LCMS m/z 287.1[M+H]+。
步骤5：6-环丙基-4-羟基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
向2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)哒嗪-3-酮(200mg，628.74μmol，1当量)在Ac2O(3mL)中的溶液中添加2-甲基丙二酸(222.74mg，1.89mmol，152.56μL，3当量)。将混合物在110℃下搅拌2h。移除溶剂，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAC＝3/1，TLC:PE/EtOAC＝3/1，Rf＝0.24)，得到6-环丙基-4-羟基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(200mg，434.38μmol，69.1％收率，80.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 12.80(s，1H)，8.37(td，J＝2.2，7.0Hz，1H)，8.33(d，J＝1.5Hz，1H)，7.72-7.68(m，2H)，4.16-4.09(m，1H)，3.06(s，3H)，2.16(s，3H)，1.20-1.15(m，2H)，1.15-1.09(m，2H)；ES-LCMS m/z 369.0[M+H]+。
步骤6：4-甲基苯磺酸[6-环丙基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基]酯
向6-环丙基-4-羟基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(200mg，434.38μmol，1当量)在DCM(8mL)中的溶液中添加DIEA(561.40mg，4.34mmol，756.61μL，10当量)和4-甲基苯磺酰氯(414.06mg，2.17mmol，5当量)。将混合物在50℃下搅拌12h。移除溶剂，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAC＝3/1，TLC:PE/EtOAC＝3/1，Rf＝0.24)，得到4-甲基苯磺酸[6-环丙基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基]酯(200mg，371.27μmol，85.5％收率，97.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.38-8.30(m，2H)，7.98(d，J＝8.3Hz，2H)，7.77-7.63(m，2H)，7.41(d，J＝8.0Hz，2H)，4.22-4.06(m，1H)，3.08(s，3H)，2.49(s，3H)，1.85(s，3H)，1.12-1.01(m，4H)；ES-LCMS m/z 523.1[M+H]+。
步骤7：6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
向2-氟-4-碘-苯胺(263.99mg，1.11mmol，3当量)在THF(3mL)中的溶液中添加NaH(89.10mg，2.23mmol，60.0％纯度，6当量)，并在0℃下搅拌30分钟，然后在0℃下添加4-甲基苯磺酸[6-环丙基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基]酯(200mg，371.27μmol，1当量)。将反应温度缓慢升温至25℃，并在25℃下搅拌1h。通过添加水(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAC＝1/1，TLC:PE/EtOAC＝1/1，Rf＝0.35)，得到6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(100mg，156.64μmol，42.2％收率，92.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 10.78(s，1H)，8.44-8.27(m，2H)，7.75-7.65(m，2H)，7.46(d，J＝1.8，10.0Hz，1H)，7.37(d，J＝8.5Hz，1H)，6.56(t，J＝8.5Hz，1H)，4.10-4.01(m，1H)，3.07(s，3H)，1.82(s，3H)，1.19-1.07(m，4H)；ES-LCMS m/z 588.0[M+H]+。
步骤8：8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
向6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(100mg，156.64μmol，1当量)在EtOH(1.5mL)、H2O(1.5mL)和THF(1.5mL)中的溶液中添加NH4Cl(83.79mg，1.57mmol，10当量)和Fe(43.74mg，783.19μmol，5当量)。将混合物在90℃下搅拌3h。过滤反应混合物以移除不溶物。将滤液在减压下浓缩，得到残留物。将残留物通过制备型HPLC纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：64％-94％，10min)，接着冻干，得到8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(55.23mg，99.09μmol，63.3％收率，100.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.55(d，J＝1.8，10.3Hz，1H)，7.45(d，J＝8.5Hz，1H)，7.21(t，J＝7.7Hz，1H)，6.82(d，J＝1.5，8.0Hz，1H)，6.79-6.76(m，1H)，6.71(d，J＝7.7Hz，1H)，6.64(t，J＝8.6Hz，1H)，4.04(t，J＝3.9，7.5Hz，1H)，3.13(s，3H)，1.76(s，3H)，1.17-1.11(m，2H)，1.07-0.99(m，2H)；ES-LCMS m/z 558.0[M+H]+。
I-50
步骤1：N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]乙酰胺
向8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(20mg，35.88μmol，1当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加乙酰氯(5.63mg，71.77μmol，5.12μL，2当量)和TEA(14.52mg，143.53μmol，19.98μL，4当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。移除溶剂，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：55％-85％，10min)，接着冻干，得到N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]乙酰胺(7.96mg，13.28μmol，37.0％收率，100.0纯度)，为黄色固体。1HNMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.76(s，1H)，7.62(d，J＝8.1Hz，1H)，7.55(d，J＝1.7，10.3Hz，1H)，7.49-7.40(m，2H)，7.20(d，J＝7.6Hz，1H)，6.64(t，J＝8.6Hz，1H)，4.05(t，J＝3.8，7.5Hz，1H)，3.09(s，3H)，2.14(s，3H)，1.76(s，3H)，1.17-1.09(m，2H)，1.09-1.00(m，2H)；ES-LCMSm/z 600.0[M+H]+。
I-20
步骤1：6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-[3-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
向8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(20mg，35.88μmol，1当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加TEA(3.63mg，35.88μmol，4.99μL，1当量)和N-甲基氨磺酰氯(9.30mg，71.77μmol，2当量)。将混合物在0℃下搅拌1h。移除溶剂，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：51％-81％，10min)，接着冻干，得到6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-[3-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(7.62mg，11.46μmol，31.9％收率，97.9％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.55(d，J＝1.8，10.3Hz，1H)，7.49-7.40(m，2H)，7.33-7.26(m，2H)，7.18(d，J＝7.6Hz，1H)，6.65(t，J＝8.6Hz，1H)，4.05(t，J＝3.9，7.5Hz，1H)，3.09(s，3H)，2.61(s，3H)，1.77(s，3H)，1.18-1.10(m，2H)，1.09-0.99(m，2H)；ES-LCMS m/z 651.0[M+H]+。
I-31
步骤1：5-((1H-吲哚-4-基)氨基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮
将4-甲基苯磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(400mg，564.78μmol，90.0％，1当量)、1H-吲哚-4-胺(111.96mg，847.17μmol，1.5当量)、Xphos Pd G2(24.30mg，28.24μmol，0.05当量)和Xphos(29.62mg，62.13μmol，0.11当量)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物脱气，并用N2吹扫3次，然后将混合物在N2气氛和130℃下搅拌6h。将混合物用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。将合并的有机相真空浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.26)，得到5-((1H-吲哚-4-基)氨基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮(230mg，346.51μmol，61.4％收率，90.0％纯度)，为绿色固体。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 11.21(s，1H)，10.45(s，1H)，7.95(dd，J＝1.8，9.5Hz，1H)，7.74(dd，J＝1.7，8.4Hz，1H)，7.34(t，J＝2.7Hz，1H)，7.28(t，J＝8.1Hz，1H)，7.13(d，J＝8.1Hz，1H)，7.02(t，J＝7.8Hz，1H)，6.46-6.38(m，2H)，2.75(s，3H)，2.70-2.65(m，1H)，2.07(s，3H)，1.02-0.98(m，2H)，0.69-0.64(m，2H)；ES-LCMSm/z 598.0[M+H]+。
步骤2：3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-(1H-吲哚-4-基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮
向5-((1H-吲哚-4-基)氨基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮(100mg，150.66μmol，90.0％，1当量)的溶液中添加一滴在THF(2mL)中的NaOMe/MeOH(20重量％，58.15μmol，1当量)。将混合物在25℃下搅拌2h。向残留物添加AcOH直至pH 7，并用EtOAc(20mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.3)，得到3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-(1H-吲哚-4-基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(40mg，56.92μmol，37.8％收率，85.0％)，为绿色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 11.29(s，1H)，11.12(s，1H)，7.84-7.73(m，1H)，7.55(d，J＝8.6Hz，1H)，7.45(d，J＝8.1Hz，1H)，7.38(t，J＝2.6Hz，1H)，7.12(t，J＝7.8Hz，1H)，7.01-6.88(m，2H)，6.22(s，1H)，3.07(s，3H)，2.68-2.62(m，1H)，2.07(s，3H)，0.96-0.93(m，2H)，0.75-0.64(m，2H)；ES-LCMS m/z 598.0[M+H]+。
步骤3：1-(1-乙酰基-1H-吲哚-4-基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮
向3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-(1H-吲哚-4-基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(20mg，28.46μmol，85.0％，1当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加Ac2O(2.91mg，28.46μmol，2.67μL，1当量)和DMAP(10.43mg，85.37μmol，3当量)。将混合物在0℃下搅拌1h。将反应混合物在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型HPLC纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：55％-85％，10min)，并冻干，得到1-(1-乙酰基-1H-吲哚-4-基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(9.66mg，15.03μmol，52.8％收率，99.5％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 8.48(d，J＝8.3Hz，1H)，7.79(d，J＝3.9Hz，1H)，7.66(d，J＝10.3Hz，1H)，7.58(d，J＝8.3Hz，1H)，7.40(t，J＝8.2Hz，1H)，7.22(d，J＝7.6Hz，1H)，6.88(t，J＝8.6Hz，1H)，6.55(d，J＝3.9Hz，1H)，3.20(s，3H)，2.73(s，1H)，2.69(s，3H)，1.11(s，3H)，1.07(d，J＝5.6Hz，2H)，0.80(d，J＝3.9Hz，2H)；ES-LCMS m/z 640.1[M+H]+。
I-51和I-52
步骤1：(S)-N'-(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯基)-N-甲基甲磺酰亚胺酰胺和(R)-N'-(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯基)-N-甲基甲磺酰亚胺酰胺
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在N2气氛和25℃下向N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺(100mg，135.81μmol，86.3％纯度，1当量)、MeNH2(32mg，473.95μmol，100％纯度，3.49当量，HCl)和t-BuOK(1M，1mL，7.36当量)在MeCN(20mL)中的溶液中添加NCS(25mg，187.22μmol，1.38当量)。将混合物在N2气氛和25℃下搅拌12h。将反应混合物用H2O(50mL)稀释，并用EtOAc(50mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至0/1，TLC:PE/EtOAc＝1/2，Rf＝0.20)。在减压下浓缩所需级分，得到残留物，将其通过SFC分离(柱：(s,s)WHELK-O1(250mm*30mm，5um)；流动相：[0.1％NH3H2O/MeOH]；B％：60％-60％)，得到峰1和峰2。将峰1在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(10mL)和水(10mL)中并冻干，得到(S)-N'-(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯基)-N-甲基甲磺酰亚胺酰胺(5.32mg，8.01μmol，5.9％收率，100.0％纯度，SFC：Rt＝5.680，ee＝100％，[α]29.3 D＝-5.26(MeOH，c＝0.114g/100mL))。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.67(dd，J＝1.8，10.1Hz，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz，1H)，7.30(t，J＝8.0Hz，1H)，7.14(d，J＝7.8Hz，1H)，7.06(s，1H)，6.98(d，J＝7.8Hz，1H)，6.87(t，J＝8.5Hz，1H)，3.22(s，3H)，3.12(s，3H)，2.74-2.72(m，1H)，2.70(s，3H)，1.43(s，3H)，1.10-1.05(m，2H)，0.79-0.75(m，2H)；ES-LCMS m/z 665.1[M+H]+。将峰2在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(10mL)和水(10mL)中并冻干，得到(R)-N'-(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯基)-N-甲基甲磺酰亚胺酰胺(5.85mg，8.80μmol，6.5％收率，100.0％纯度，SFC：Rt＝6.804，ee＝100％，[α]29.4 D＝+18.28(MeOH，c＝0.186g/100mL))，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.67(dd，J＝1.8，10.1Hz，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz，1H)，7.33-7.28(m，1H)，7.14(d，J＝7.8Hz，1H)，7.06(s，1H)，6.98(d，J＝7.8Hz，1H)，6.87(t，J＝8.5Hz，1H)，3.22(s，3H)，3.12(s，3H)，2.75-2.72(m，1H)，2.70(s，3H)，1.43(s，3H)，1.10-1.05(m，2H)，0.79-0.75(m，2H)；ES-LCMS m/z 665.0[M+H]+。
I-54
步骤1：3-环丙基-1-(1,1-二氧化-3-氧代-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮
向4-甲基苯磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(200mg，307.49μmol，98.0％，1当量)在DMF(3mL)中的溶液中添加Cs2CO3(200.37mg，614.98μmol，2.5当量)和6-氨基-1,1-二氧代-1,2-苯并噻唑-3-酮(121.89mg，614.98μmol，2当量)。将混合物在130℃下搅拌6h。将混合物通过制备型HPLC纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：44％-64％，10min)并冻干，得到3-环丙基-1-(1,1-二氧化-3-氧代-2,3-二氢苯并[d]异噻唑-6-基)-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(6.74mg，9.69μmol，3.15％收率，95.4％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 11.42(s，1H)，8.00(s，1H)，7.67(s，1H)，7.60(s，2H)，7.44-7.35(m，2H)，7.01(s，1H)，3.41(s，3H)，2.84-2.75(m，1H)，1.53(s，3H)，1.31-1.12(m，2H)，0.91-0.79(m，2H)；ES-LCMS m/z 664.0[M+H]+。
I-22
步骤1：1-(5-氨基吡啶-3-基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮
向4-甲基苯磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(250mg，384.36μmol，98.0％，1当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加吡啶-3,5-二胺(50.33mg，461.24μmol，1.2当量)和2,6-二甲基吡啶(102.96mg，960.91μmol，111.91μL，2.5当量)。将混合物在N2气氛和140℃下搅拌6h。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，用DCM:IPA(3:1，30ml)萃取，并将有机层在减压下浓缩，得到1-(5-氨基吡啶-3-基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(150mg，261.17μmol，68.0％收率，100.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.08-7.93(m，1H)，7.78(d，J＝8.6Hz，1H)，7.26(d，J＝18.1Hz，2H)，7.19-7.09(m，1H)，6.85(s，1H)，6.51(s，1H)，6.48(s，1H)，4.89(s，1H)，2.83(s，3H)，2.37-2.25(m，1H)，1.79(s，3H)，0.96(s，2H)，0.57(d，J＝14.7Hz，2H)；ES-LCMS m/z575.1[M+H]+。
步骤2：3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[5-(甲基氨磺酰氨基)-3-吡啶基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向1-(5-氨基吡啶-3-基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(95mg，165.41μmol，100.0％，1当量)在DCM(5mL)中的溶液中添加N-甲基氨磺酰氯(32.15mg，248.11μmol，N/A，1.5当量)和TEA(50.21mg，496.22μmol，69.07μL，3当量)。将混合物在N2气氛和0℃下搅拌3h。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，用DCM(30mL x 3)萃取，并将有机层在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：20％-50％，10min)并冻干，得到3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[5-(甲基氨磺酰氨基)-3-吡啶基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(16.52mg，24.67μmol，14.9％收率，99.7％纯度)，为白色固体。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.99(ddd，J＝1.6，4.9，9.3Hz，1H)，7.76(d，J＝8.3Hz，1H)，7.38-7.26(m，2H)，7.18-7.04(m，2H)，6.05(d，J＝15.5Hz，2H)，5.47(s，1H)，2.82(d，J＝2.1Hz，3H)，2.39-2.35(m，3H)，2.33(d，J＝1.8Hz，1H)，1.77(d，J＝1.9Hz，3H)，1.00-0.91(m，2H)，0.58(s，2H)；ES-LCMS m/z 668.0[M+H]+。
I-41和I-42
步骤1：N-[2-(氯磺酰基氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯
在N2气氛和-40～-50℃下向硫酰氯(850mg，6.30mmol，629.63μL，1.01当量)和Et3N(1.89g，18.73mmol，2.61mL，3当量)在DCM(50mL)中的溶液中滴加N-(2-氨基乙基)氨基甲酸叔丁酯(1g，6.24mmol，980.39μL，1当量)在DCM(5mL)中的溶液。将混合物在N2气氛和-40～-50℃下搅拌5分钟，得到N-[2-(氯磺酰基氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(75g，粗)，为无色液体，其不经进一步纯化用于下一步。
步骤2：N-[2-[[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]氨磺酰氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯
向1-(3-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(90mg，156.97μmol，100％纯度，1当量)和Et3N(145.40mg，1.44mmol，0.2mL，9.15当量)在DCM(20mL)中的溶液中添加N-[2-(氯磺酰基氨基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(10g，38.65mmol，N/A纯度，246.23当量)。将混合物在15℃下搅拌10分钟。将反应混合物在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC:PE/EtOAc＝3/4，Rf＝0.48)，得到所需化合物(100mg)。将所需化合物(100mg)中的50mg通过制备型HPLC纯化(柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：50％-80％，10min)并冻干，得到N-[2-[[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]氨磺酰氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(16.07mg，20.07μmol，12.8％收率，99.4％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.58(dd，J＝1.8，10.1Hz，1H)，7.49(d，J＝8.2Hz，1H)，7.31(t，J＝8.1Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.13(dd，J＝1.4，8.1Hz，1H)，7.00-6.95(m，1H)，6.78(t，J＝8.5Hz，1H)，3.13(s，3H)，3.03-2.98(m，2H)，2.97-2.92(m，2H)，2.64(tt，J＝3.8，7.2Hz，1H)，1.33(s，9H)，1.32(s，3H)，1.02-0.96(m，2H)，0.71-0.66(m，2H)；ES-LCMS m/z 796.1[M+H]+。
步骤3：1-[3-(2-氨基乙基氨磺酰氨基)苯基]-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向N-[2-[[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]氨磺酰氨基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(50mg，62.84μmol，N/A纯度，1当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(3.08g，27.01mmol，2mL，429.83当量)。将混合物在20℃下搅拌1h。将反应混合物在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(0.05％NH3H2O+10mM NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-75％，10min)并冻干，得到1-[3-(2-氨基乙基氨磺酰氨基)苯基]-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(16.78mg，23.94umol，38.09％收率，99.223％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.68(dd，J＝1.8，10.1Hz，1H)，7.59(d，J＝8.4Hz，1H)，7.41(t，J＝8.0Hz，1H)，7.28-7.25(m，1H)，7.25-7.22(m，1H)，7.08-7.04(m，1H)，6.88(t，J＝8.5Hz，1H)，3.22(s，3H)，3.06(t，J＝6.1Hz，2H)，2.76-2.70(m，3H)，1.41(s，3H)，1.10-1.05(m，2H)，0.80-0.76(m，2H)；ES-LCMS m/z 696.0[M+H]+。
I-47和I-48
步骤1：甲亚磺酰氯
在N2气氛和-20℃下向(甲基二硫烷基)甲烷(5.07g，53.82mmol，4.83mL，1当量)和AcOH(6.46g，107.64mmol，6.16mL，2当量)的混合物中滴加硫酰氯(21.79g，161.47mmol，16.14mL，3当量)。将混合物在N2气氛和-20℃下搅拌2h。将混合物缓慢升温至20℃，并在N2气氛和20℃下搅拌1h，在35℃下搅拌1h。将混合物在减压下浓缩，得到甲亚磺酰氯(10.6g，粗)，为无色油状物，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 3.38(s，3H)。
步骤2：(S)-N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺和(R)-N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺
向1-(3-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(200mg，348.82μmol，100％纯度，1当量)和Et3N(363.50mg，3.59mmol，0.5mL，10.30当量)在DCM(10mL)中的溶液中添加甲亚磺酰氯(200mg，2.03mmol，N/A纯度，5.82当量)。将混合物在25℃下搅拌0.5h。TLC(PE/EtOAc＝2/3，Rf＝0.15)显示原料几乎耗尽。将反应混合物在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至0/1，TLC:PE/EtOAc＝2/3，Rf＝0.15)，得到N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺(200mg，91.9％纯度)，为白色固体。将产物(160mg)通过制备型HPLC纯化(柱：Welch Xtimate C18150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)，得到所需化合物，为白色固体，通过SFC将其进一步分离(柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H(250mm*30mm，5um)；流动相：[0.1％ NH3H2O EtOH]；B％：45％-45％)，得到峰1和峰2。将峰1在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：43％-73％，11min)，接着冻干，得到(S)-N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺(13.75mg，20.91μmol，9.0％收率，96.6％纯度，SFC：Rt＝4.554，ee＝100％，[α]27.8 D＝-36.364(MeOH，c＝0.011g/100mL))，为白色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.66(dd，J＝1.8，10.1Hz，1H)，7.59-7.54(m，1H)，7.39(t，J＝8.1Hz，1H)，7.17-7.08(m，2H)，7.05-7.00(m，1H)，6.86(t，J＝8.5Hz，1H)，3.20(s，3H)，2.84(s，3H)，2.71(tt，J＝3.8，7.2Hz，1H)，1.40(s，3H)，1.10-1.00(m，2H)，0.79-0.70(m，2H)；ES-LCMS m/z 636.1[M+H]+。将峰2在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)，得到所需化合物，为白色固体，通过SFC将其进一步分离(柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H(250mm*30mm,5um)；流动相：[0.1％ NH3H2O ETOH]；B％：45％-45％，min)，接着冻干，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：WelchXtimate C18 150*25mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，11min)，接着冻干，得到(R)-N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]苯基]甲亚磺酰胺(12.41mg，19.05μmol，8.2％收率，97.6％纯度，SFC：Rt＝4.991，ee＝89.18％，[α]27.7 D＝+107.692(MeOH，c＝0.013g/100mL))，为白色固体。1HNMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.66(dd，J＝1.8，10.2Hz，1H)，7.56(d，J＝8.4Hz，1H)，7.39(t，J＝8.0Hz，1H)，7.17-7.10(m，2H)，7.02(dd，J＝1.1，8.0Hz，1H)，6.86(t，J＝8.5Hz，1H)，3.20(s，3H)，2.84(s，3H)，2.71(tt，J＝3.7，7.2Hz，1H)，1.40(s，3H)，1.08-1.03(m，2H)，0.78-0.73(m，2H)；ES-LCMS m/z 636.0[M+H]+。
I-55
步骤1：3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向1-(3-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(100mg，174.41μmol，100％纯度，1当量)在THF(5mL)中的溶液中添加NaH(40mg，1.00mmol，60％纯度，5.73当量)。将混合物在25℃下搅拌0.5h。添加MeI(30mg，211.36μmol，13.16μL，1.21当量)。将混合物在25℃下搅拌12h。将反应混合物用H2O(20mL)淬灭，并用EtOAc(20mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：49％-69％，10min)并冻干，得到3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(6mg，9.87μmol，5.7％收率，96.6％纯度)，为灰白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.68(dd，J＝1.8，10.2Hz，1H)，7.66-7.62(m，1H)，7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50(t，J＝1.9Hz，1H)，7.47-7.40(m，2H)，6.90(t，J＝8.5Hz，1H)，3.22(s，3H)，3.10(s，3H)，2.74(tt，J＝3.7，7.2Hz，1H)，1.37(s，3H)，1.11-1.06(m，2H)，0.81-0.76(m，2H)；ES-LCMS m/z 588.1[M+H]+。
步骤2：3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-[甲基(甲基氨磺酰基)氨基]苯基]-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶
在0℃下向3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(5mg，8.22μmol，96.6％纯度，1当量)和DIEA(22.26mg，172.23μmol，30μL，20.95当量)在DCM(5mL)中的溶液中添加N-甲基氨磺酰氯(10mg，77.18μmol，9.39当量)。将混合物在0℃下搅拌10分钟。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，并用DCM(30mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：54％-74％，10min)并冻干，得到3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-[甲基(甲基氨磺酰基)氨基]苯基]-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶(1.58mg，2.28μmol，27.8％收率，98.3％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 11.24(s，1H)，7.68(dd，J＝1.3，10.3Hz，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz，1H)，7.53-7.48(m，2H)，7.48-7.44(m，1H)，7.34-7.25(m，1H)，6.88(dt，J＝2.5，8.5Hz，1H)，3.27(s，3H)，3.22(d，J＝2.9Hz，3H)，2.73(tt，J＝3.7，7.2Hz，1H)，2.65(s，3H)，1.39(s，3H)，1.13-1.02(m，2H)，0.83-0.75(m，2H)；ES-LCMS m/z680.9[M+H]+。
I-82
步骤1：叔丁基5-(4-氨基苯胺基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向三氟甲磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(300mg，482.70μmol，99.0％，1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加2,6-二甲基吡啶(155.17mg，1.45mmol，168.66μL，3当量)和苯-1,4-二胺(78.30mg，724.05μmol，1.5当量)。将混合物在60℃下搅拌2h。通过添加H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝2/1，TLC:PE/EtOAc＝2/1，Rf＝0.20)，得到叔丁基5-(4-氨基苯胺基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(200mg，327.89μmol，67.9％收率，94.0％纯度)，为棕色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm10.16-10.03(m，1H)，8.04-7.87(m，1H)，7.77-7.60(m，1H)，7.32-7.13(m，1H)，6.85-6.65(m，2H)，6.63-6.45(m，2H)，5.24-4.99(m，2H)，2.73-2.67(m，3H)，1.51-1.34(m，3H)，1.09-0.89(m，2H)，0.76-0.56(m，2H)；ES-LCMS m/z 574.1[M+H]+。
步骤2：叔丁基1-(4-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
将5-(4-氨基苯胺基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(100mg，163.95μmol，1当量)和NaOMe/MeOH(163.95μmol，11μL，30.0％，1当量)在THF(0.3mL)中的混合物脱气，并用N2吹扫3次，然后将混合物在25℃和N2气氛下搅拌1h。通过添加AcOH(0.1mL)淬灭反应混合物，然后用H2O(20mL)稀释，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(DCM/MeOH＝10/1，TLC:DCM/MeOH＝10/1，Rf＝0.80)，得到叔丁基1-(4-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(90mg，67.50μmol，41.2％收率，43.0％纯度)，为黄色固体。ES-LCMS m/z 574.0[M+H]+。
步骤3：叔丁基3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[4-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向1-(4-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(43.00mg，75.00μmol，1当量)在DCM(1mL)中的溶液中添加TEA(15.18mg，149.99μmol，20.88μL，2当量)和N-甲基氨磺酰氯(9.72mg，75.00μmol，1当量)。将混合物在0℃下搅拌1h。通过添加H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：56％-76％，12min)，接着冻干，得到叔丁基3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[4-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(8.77mg，13.16μmol，17.6％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 11.23-10.93(m，1H)，10.00-9.81(m，1H)，7.90-7.70(m，1H)，7.59-7.52(m，1H)，7.50-7.44(m，1H)，7.29-7.23(m，2H)，7.22-7.15(m，2H)，6.99-6.82(m，1H)，3.12-3.01(m，3H)，2.63-2.57(m，1H)，2.47-2.44(m，3H)，1.22(s，3H)，0.99-0.91(m，2H)，0.72-0.57(m，2H)；ES-LCMS m/z 667.0[M+H]+。
I-83
步骤1：三氟甲磺酸3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基酯
在0℃下经30分钟向3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-5-羟基-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(3.2g，6.62mmol，1当量)和2,6-二甲基吡啶(1.21g，11.26mmol，1.31mL，1.7当量)在DCM(20mL)中的溶液中滴加三氟甲磺酸三氟甲基磺酰酯(3.74g，13.24mmol，2.19mL，2当量)。然后，将混合物在25℃和N2气氛下搅拌12h。反应混合物依次添加饱和NaHCO3水溶液(40mL x 3)、1N HCl(40mL x 3)，并用DCM(50mL x 3)萃取。将有机层用盐水(50mL x 3)洗涤，并经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(EtOAc/DCM＝100/1to 8/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.3)，得到三氟甲磺酸3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基酯(4g，6.43mmol，97.1％收率，98.9％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.95(dd，J＝1.8，9.4Hz，1H)，7.72(dd，J＝1.3，8.4Hz，1H)，7.30(t，J＝8.1Hz，1H)，2.76(s，3H)，2.71-2.65(m，1H)，2.01(s，3H)，1.08-0.98(m，2H)，0.68-0.58(m，2H)；ES-LCMS m/z 615.9[M+H]+。
步骤2：2-氯磺酰基-5-硝基-苯甲酸甲酯
在0℃下向2-氨基-5-硝基-苯甲酸甲酯(5g，25.49mmol，1当量)在HCl(12M，80mL，37.66当量)中的溶液中滴加NaNO2(1.76g，25.49mmol，1当量)在H2O(5mL)中的溶液。将混合物在0℃下搅拌15分钟，并在0℃下添加NaHSO3(23.9g，229.67mmol，9.01当量)在H2O(50mL)中的溶液，接着添加CuSO4(406.83mg，2.55mmol，0.1当量)，将混合物在0℃下搅拌45分钟。将混合物用水(100mL)稀释，并用EtOAc(80mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至5/1，TLC:PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.51)，得到2-氯磺酰基-5-硝基-苯甲酸甲酯(5.6g，18.02mmol，70.7％收率，90.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 8.58(d，J＝2.3Hz，1H)，8.54(d，J＝2.3，8.7Hz，1H)，8.40(d，J＝8.7Hz，1H)，4.06(s，3H)。
步骤3：5-硝基-1,1-二氧代-1,2-苯并噻唑-3-酮
将2-氯磺酰基-5-硝基-苯甲酸甲酯(5.6g，18.02mmol，90.0％，1当量)在NH3·H2O(54.60g，436.23mmol，60mL，28.0％纯度，24.21当量)中的混合物在25℃下搅拌16h。TLC(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.04)指示原料完全消耗，并且形成一个新点。将混合物用HCl(12M)调节pH至2，用水(150mL)稀释，并用EtOAc(100mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到5-硝基-1,1-二氧代-1,2-苯并噻唑-3-酮(3.7g，14.59mmol，80.9％收率，90.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm8.88(d，J＝2.0Hz，1H)，8.76(d，J＝2.0，8.4Hz，1H)，8.15(d，J＝8.4Hz，1H)。
步骤4：5-氨基-1,1-二氧代-1,2-苯并噻唑-3-酮
在N2下向Pd/C(3g，14.59mmol，10％纯度，1当量)在THF(50mL)中的溶液中添加5-硝基-1,1-二氧代-1,2-苯并噻唑-3-酮(3.7g，14.59mmol，90.0％，1当量)。将悬浮液在真空下脱气，并用H2吹扫数次。将混合物在H2(15psi)和25℃下搅拌12h。将反应混合物过滤，并将滤液浓缩，得到残留物，将其添加到EtOAc/MeOH(10/1，10mL)中，并在25℃下搅拌2h。过滤浆料，并用EtOAc(2x3mL)冲洗滤饼。收集固体并真空干燥，得到5-氨基-1,1-二氧代-1,2-苯并噻唑-3-酮(2.8g，13.42mmol，91.9％收率，95.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 7.67(d，J＝8.4Hz，1H)，7.02-6.90(m，2H)。
步骤5：3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-5-[(1,1,3-三氧代-1,2-苯并噻唑-5-基)氨基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向5-氨基-1,1-二氧代-1,2-苯并噻唑-3-酮(134.81mg，646.16μmol，95.0％，2.01当量)在DMF(3mL)中的溶液中添加NaH(51.44mg，1.29mmol，60.0％纯度，4当量)，并在0℃下搅拌30分钟，在0℃下添加三氟甲磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(200mg，321.47μmol，98.9％，1当量)。将反应温度缓慢升温至25℃，并在25℃下搅拌3h。通过添加水(40mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mLx 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：28％-58％，10min)，接着冻干，得到3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-5-[(1,1,3-三氧代-1,2-苯并噻唑-5-基)氨基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(25mg，37.68μmol，11.7％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm7.93(d，J＝8.1Hz，1H)，7.84(s，1H)，7.79(d，J＝8.1Hz，1H)，7.66(d，J＝10.2Hz，1H)，7.57(d，J＝8.5Hz，1H)，6.89(t，J＝8.5Hz，1H)，3.21(s，3H)，2.76-2.68(m，1H)，1.34(s，3H)，1.10-1.01(m，2H)，0.81-0.73(m，2H)；ES-LCMS m/z 663.9[M+H]+。
步骤6：3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-(1,1,3-三氧代-1,2-苯并噻唑-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-5-[(1,1,3-三氧代-1,2-苯并噻唑-5-基)氨基]吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(20mg，30.15μmol，1当量)在THF(0.5mL)中的溶液中添加NaOMe(5.82mg，30.15μmol，28.0％纯度，1当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物用水(20mL)稀释，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：29％-59％，10min)，接着冻干，得到3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-(1,1,3-三氧代-1,2-苯并噻唑-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(2.99mg，4.46μmol，14.8％收率，99.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 11.06(s，1H)，7.80(d，J＝7.9Hz，1H)，7.73(s，1H)，7.60(d，J＝8.1Hz，1H)，7.47(d，J＝10.4Hz，1H)，7.42(d，J＝8.5Hz，1H)，6.70(t，J＝8.3Hz，1H)，3.07(s，3H)，2.64(s，1H)，1.18(s，3H)，1.02(d，J＝6.1Hz，2H)，0.70(s，2H)；ES-LCMS m/z 663.9[M+H]+。
I-102
步骤1：N-[3-[[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]氨基]-1-双环[1.1.1]戊烷基]氨基甲酸叔丁酯
向三氟甲磺酸N-[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(300mg，482.70μmol，99.0％，1当量)在DMF(8mL)中的溶液中添加2,6-二甲基吡啶(155.17mg，1.45mmol，168.66μL，3当量)和N-(3-氨基-1-双环[1.1.1]戊烷基)氨基甲酸叔丁酯(143.55mg，724.05μmol，1.5)。将混合物在60℃下搅拌2h。通过添加H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝2/1，TLC:PE/EtOAc＝2/1，Rf＝0.20)，得到N-[3-[[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]氨基]-1-双环[1.1.1]戊烷基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，292.4μmol，60.6％收率，97.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 8.64(s，1H)，8.02-7.87(m，1H)，7.76-7.63(m，1H)，7.54(s，1H)，7.25-7.13(m，1H)，2.74-2.67(m，3H)，2.67-2.61(m，1H)，2.18-2.07(m，6H)，1.99-1.93(m，3H)，1.43-1.31(m，9H)，1.08-0.94(m，2H)，0.73-0.59(m，2H)；ES-LCMS m/z 664.5[M+H]+。
步骤2：N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-双环[1.1.1]戊烷基]氨基甲酸叔丁酯
将氨基甲酸N-[3-[[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]氨基]-1-双环[1.1.1]戊烷基]酯(100mg，146.20μmol，97.0％，1当量)和NaOMe/MeOH(19.40mg，20μL，30.0％，1.00当量)在THF(3mL)中的混合物脱气，并用N2吹扫3次，然后将混合物在25℃和N2气氛下搅拌1h。通过添加CH3COOH(0.1mL)淬灭反应混合物，然后用H2O(20mL)稀释，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝3/1，TLC:PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.30)，得到N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-双环[1.1.1]戊烷基]氨基甲酸叔丁酯(50mg，67.8μmol，46.4％收率，90.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm10.36-10.16(m，1H)，7.83-7.68(m，1H)，7.65-7.55(m，1H)，7.54-7.48(m，1H)，6.96-6.82(m，1H)，3.08-3.06(m，3H)，2.59-2.54(m，3H)，2.44-2.39(m，2H)，2.23-2.18(m，2H)，2.03-2.01(m，3H)，1.39-1.35(m，9H)，0.93-0.84(m，2H)，0.63-0.39(m，2H)；ES-LCMS m/z664.0[M+H]+。
步骤3：叔丁基1-(3-氨基-1-双环[1.1.1]戊烷基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向叔丁基1-(3-氨基-1-双环[1.1.1]戊烷基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(50mg，67.82μmol，90.0％，1当量)在DCM(1mL)中的溶液中添加TFA(462.00mg，4.05mmol，0.3mL，59.74当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物浓缩以产生残留压力，得到叔丁基1-(3-氨基-1-双环[1.1.1]戊烷基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(30mg，44.29μmol，65.3％收率，100.0％纯度，TFA)，为白色固体，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 10.31(s，1H)，8.69(s，2H)，7.76(dd，J＝1.8，10.2Hz，1H)，7.53(d，J＝8.5Hz，1H)，6.90(t，J＝8.5Hz，1H)，3.06(s，3H)，2.65-2.62(m，1H)，2.52-2.51(m，6H)，2.01(s，3H)，0.94-0.85(m，2H)，0.67-0.34(m，2H)；ES-LCMS m/z 564.1[M+H]+。
步骤3：叔丁基3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨磺酰氨基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向1-(3-氨基-1-双环[1.1.1]戊烷基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(30mg，44.29μmol，100.0％，1当量，TFA)在DCM(4mL)中的溶液中添加TEA(10.78mg，106.50μmol，14.82μL，2当量)和N-甲基氨磺酰氯(6.90mg，53.25μmol，1当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物浓缩以产生残留压力，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：51％-71％，12min)，接着冻干，得到产物，接着冻干，得到叔丁基3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨磺酰氨基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(12.23mg，18.63μmol，42.1％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 10.26(s，1H)，7.85(s，1H)，7.76(dd，J＝1.8，10.3Hz，1H)，7.52(d，J＝8.6Hz，1H)，6.88(t，J＝8.6Hz，1H)，6.76(q，J＝5.0Hz，1H)，3.06(s，3H)，2.57-2.54(m，1H)，2.52(s，1H)，2.42(d，J＝5.0Hz，6H)，2.23(s，3H)，2.02(s，3H)，0.88(s，2H)，0.67-0.32(m，2H)；ES-LCMS m/z 657.0[M+H]+。
I-103
步骤1：3-[[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]氨基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
向三氟甲磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(400mg，642.95μmol，98.9％纯度，1当量)和3-氨基氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(221.46mg，1.29mmol，2当量)在1,4-二噁烷(8mL)中的溶液中添加Cs2CO3(628.45mg，1.93mmol，3当量)。将混合物在40℃下搅拌3h。TLC(石油醚:EtOAc＝1:1，Rf＝0.4)显示形成新点，并且原料完全消耗。通过添加H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝1/1.5，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.40)，得到3-[[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]氨基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(150mg，223.55μmol，34.8％收率，95.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 9.19(d，J＝6.4Hz，1H)，7.61(dd，J＝8.8，15.6Hz，2H)，6.89(t，J＝8.0Hz，1H)，4.56-4.46(m，1H)，4.27(td，J＝8.4，13.2Hz，2H)，3.92(dt，J＝5.2，9.2Hz，2H)，2.89(s，3H)，2.79-2.71(m，1H)，2.04(s，3H)，1.46(s，9H)，1.22-1.15(m，2H)，0.86-0.78(m，2H)；ES-LCMS m/z 638.0[M+H]+。
步骤2：3-[[3-(环丙基氨基甲酰基)-2-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,5-二甲基-6-氧代-4-吡啶基]氨基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯和3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在0℃下向NaOMe(13.42mg，74.52μmol，0.5mL，30％纯度，1当量)在THF(30mL)中的溶液中添加3-[[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]氨基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(50mg，74.52μmol，95％纯度，1当量)。将混合物在0℃下搅拌1h。TLC(石油醚:EtOAc＝3:1，Rf＝0.7)显示形成新点，并且原料完全消耗。通过添加AcOH(1mL)淬灭反应混合物，并在0℃下搅拌10分钟。通过添加H2O(20mL)淬灭混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物。将残留物通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝2/1，TLC:PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.70)，得到3-[[3-(环丙基氨基甲酰基)-2-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,5-二甲基-6-氧代-4-吡啶基]氨基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(20mg，31.07μmol，41.7％收率，95.0％纯度)和3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(20mg，29.81μmol，40.0％收率，95.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 10.87(s，1H)，7.50(dd，J＝1.5，9.5Hz，1H)，7.44(d，J＝8.5Hz，1H)，6.68(t，J＝8.5Hz，1H)，4.75(quin，J＝6.5Hz，1H)，4.26-4.15(m，4H)，3.19-3.12(m，3H)，2.71(tt，J＝4.0，7.0Hz，1H)，2.03(s，3H)，1.43(s，9H)，1.10(q，J＝7.0Hz，2H)，0.73-0.67(m，2H)；1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 8.83(s，1H)，7.42(dd，J＝2.0，10.0Hz，1H)，7.30(d，J＝8.5Hz，1H)，7.14(d，J＝2.0Hz，1H)，6.35(t，J＝8.5Hz，1H)，4.61(d，J＝10.0Hz，1H)，4.21(dd，J＝8.0，9.0Hz，2H)，3.73(dd，J＝5.0，9.5Hz，2H)，3.25(s，3H)，2.74(dt，J＝3.5，7.0Hz，1H)，2.08(s，3H)，2.04(s，3H)，1.44(s，9H)，0.80-0.75(m，2H)，0.38-0.32(m，2H)；ES-LCMS m/z 612.1[M+H]+；ES-LCMS m/z 638.0[M+H]+。
步骤3：1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(20mg，29.81μmol，95.0％纯度，1当量)在DCM(5mL)中的溶液中添加TFA(1.54g，13.51mmol，1mL)。将混合物在25℃下搅拌1h。将混合物浓缩，得到1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(16mg，28.29μmol，94.9％收率，95.0％纯度)，为白色固体，其不经进一步纯化直接用于下一步。ES-LCMS m/z 538.0[M+H]+。
步骤4：3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]-N-甲基-氮杂环丁烷-1-磺酰胺
在N2气氛和0℃下向1-(氮杂环丁烷-3-基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(16mg，28.29μmol，95％纯度，1当量)在DCM(5mL)中的溶液中添加Et3N(8.59mg，84.86μmol，11.81μL，3当量)和N-甲基氨磺酰氯(3.67mg，28.29μmol，1当量)。将混合物在0℃下搅拌1h。通过添加H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Welch Xtimate C18 150*25mm*5μm；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：36％-66％，11min)，得到3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]-N-甲基-氮杂环丁烷-1-磺酰胺(6.76mg，10.47μmol，37.0％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.64(d，J＝10.0Hz，1H)，7.55(d，J＝8.5Hz，1H)，6.84(t，J＝8.5Hz，1H)，4.95(d，J＝7.5Hz，1H)，4.08(quin，J＝8.0Hz，4H)，3.18(s，3H)，2.72-2.67(m，4H)，2.05(s，3H)，1.03(q，J＝7.0Hz，2H)，0.68-0.62(m，2H)；ES-LCMS m/z 630.9[M+H]+。
I-109
步骤1：三氟甲磺酸3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基酯
在0℃下经30分钟向3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-5-羟基-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(5g，10.35mmol，1当量)和2,6-二甲基吡啶(1.88g，17.59mmol，2.05mL，1.7当量)在DCM(35mL)中的溶液中滴加三氟甲磺酸三氟甲基磺酰酯(5.84g，20.69mmol，3.41mL，2当量)。将混合物在25℃和N2气氛下搅拌12h。将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液(40mL x 3)淬灭，用DCM(50mL x 3)萃取。将有机层用1N HCl(40mL x 3)和盐水(50mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(EtOAc/DCM＝100/1至8/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.3)，得到三氟甲磺酸3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基酯(4g，6.43mmol，97.1％收率，98.9％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm7.95(dd，J＝1.2，9.5Hz，1H)，7.72(d，J＝8.6Hz，1H)，7.30(t，J＝8.1Hz，1H)，2.76(s，3H)，2.70-2.66(m，1H)，2.01(s，3H)，1.08-0.98(m，2H)，0.62(t，J＝11.9Hz，2H)；ES-LCMS m/z 615.9[M+H]+。
步骤2：(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯
将三氟甲磺酸3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基酯(350mg，563.15μmol，99.0％，1当量)、N-(3-氨基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(115.38mg，619.46μmol，1.1当量)和Cs2CO3(550.45mg，1.69mmol，3当量)在DMF(5mL)中的混合物在40℃下搅拌1h，然后将混合物在N2气氛和25℃下搅拌4h。将反应混合物用H2O(30mL)稀释，用EtOAc(40mL x 3)萃取，并用盐水(40mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型TLC将其纯化(SiO2，PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.3)，得到(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，255.42μmol，45.4％收率，83.2％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.07(d，J＝6.6Hz，1H)，7.88(d，J＝9.3Hz，1H)，7.66(d，J＝8.3Hz，1H)，7.28(d，J＝7.8Hz，1H)，7.16-7.11(m，1H)，4.27(d，J＝6.4Hz，1H)，3.87-3.41(m，1H)，2.62(s，3H)，2.35-2.09(m，4H)，1.95(s，3H)，1.93(s，1H)，1.34(s，9H)，0.99(s，2H)，0.65(s，2H)；ES-LCMS m/z 652.1[M+H]+。
步骤3：(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃和N2气氛下向(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，191.57μmol，83.2％，1当量)在THF(30mL)中的溶液中添加NaOMe/MeOH(191.57μmol，0.25mL，30％，1当量)。将混合物在N2气氛和25℃下搅拌0.5h。向残留物添加CH3COOH至pH＝7，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型TLC将其纯化(SiO2，PE/EtOAc＝1:1，Rf1＝0.3)，得到(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，32.56μmol，17.0％收率，70.7％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm10.99-10.67(m，1H)，7.51(d，J＝9.6Hz，1H)，7.45-7.41(m，1H)，6.68-6.61(m，1H)，4.09-3.93(m，1H)，3.76(s，3H)，3.53-3.41(m，1H)，3.17(s，3H)，3.12-2.99(m，1H)，2.79-2.70(m，2H)，2.48-2.24(m，2H)，1.45(s，9H)，1.18-1.07(m，2H)，0.92-0.86(m，2H)；ES-LCMS m/z 652.1[M+H]+。
步骤4：1-(3-氨基环丁基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮
向(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，32.56μmol，70.7％，1当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(616.00mg，5.40mmol，0.4mL，165.94当量)。将混合物在25℃下搅拌0.5h。将反应混合物用H2O(10mL)稀释，用DCM(30mL x 3)萃取，并用盐水(30mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到1-(3-氨基环丁基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(30mg，31.56μmol，96.9％收率，70.0％纯度，TFA)，为黄色油状物，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.62(d，J＝10.5Hz，1H)，7.52(d，J＝7.9Hz，1H)，6.87-6.74(m，1H)，5.33(s，2H)，4.16(d，J＝7.0Hz，1H)，3.43(d，J＝1.5Hz，1H)，3.16(s，3H)，2.72(s，2H)，2.64(s，1H)，2.28-2.18(m，2H)，1.27(s，3H)，1.04-0.99(m，2H)，0.90-0.88(m，2H)；ES-LCMS m/z 552.1[M+H]+。
步骤5：3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨磺酰氨基)环丁基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向1-(3-氨基环丁基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(30mg，31.56μmol，70.0％，1当量，TFA)在DCM(2mL)中的溶液中添加TEA(9.58mg，94.68μmol，13.18μL，3当量)和N-甲基氨磺酰氯(4.50mg，34.72μmol，1.1当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，用DCM(20mL x3)萃取。将有机层在减压下浓缩，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-70％，11min)并冻干，得到3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨磺酰氨基)环丁基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(3.13mg，4.81μmol，15.3％收率，99.1％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.64(dd，J＝1.8，10.0Hz，1H)，7.54(d，J＝8.1Hz，1H)，6.82(t，J＝8.5Hz，1H)，4.29-4.20(m，1H)，3.51-3.47(m，1H)，3.18(s，3H)，2.87-2.82(m，2H)，2.67(td，J＝3.4，7.1Hz，1H)，2.58(s，3H)，2.44-2.37(m，2H)，2.08(s，3H)，1.05-0.98(m，2H)，0.66-0.62(m，2H)；ES-LCMS m/z 645.0[M+H]+。
I-111
步骤1：3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-5-((1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮
向三氟甲磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(200mg，321.80μmol，99.0％，1当量)在DMF(3mL)中的溶液中添加5-氨基异吲哚啉-1-酮(47.68mg，321.80μmol，1当量)和Cs2CO3(314.54mg，965.39μmol，3当量)。将混合物在60℃下搅拌3h。将反应混合物用H2O(30mL)稀释，用DCM(40mL x 3)萃取，并将有机层在减压下浓缩，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)并冻干，得到3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-5-((1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮(120mg，193.09μmol，60.0％收率，98.7％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 7.90-7.83(m，1H)，7.73-7.63(m，1H)，7.45(d，J＝8.9Hz，1H)，6.79-6.62(m，2H)，6.06(d，J＝6.6Hz，2H)，4.70-4.56(m，2H)，4.46(d，J＝15.9Hz，1H)，3.38(s，3H)，2.52(s，1H)，2.50(s，3H)，2.07(d，J＝1.5Hz，1H)，0.94-0.83(m，2H)，0.67-0.45(m，2H)；ES-LCMS m/z 614.0[M+H]+。
步骤2：3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-1-(1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮
在0℃和N2气氛下向3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-5-((1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮(30mg，48.27μmol，98.7％，1当量)在THF(30mL)中的溶液中添加MeONa/MeOH(48.27μmol，0.1mL，30％，1当量)。将所得混合物在N2气氛和25℃下搅拌20分钟。向残留物添加CH3COOH至pH＝7，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：38％-58％，12min)并冻干，得到3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-1-(1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(3.84mg，6.26μmol，13.0％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 11.01(s，1H)，8.46(s，1H)，7.87(dd，J＝1.5，9.4Hz，1H)，7.70-7.63(m，2H)，7.27-7.22(m，1H)，7.21-7.17(m，2H)，4.34(s，2H)，3.11(s，3H)，2.33(d，J＝1.8Hz，1H)，1.29(s，3H)，0.95(d，J＝7.0Hz，2H)，0.67-0.57(m，2H)；ES-LCMS m/z 613.9[M+H]+。
3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-[甲基(甲基氨磺酰基)氨基]苯基]-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶(I-55)的合成
步骤1：3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向1-(3-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(100mg，174.41μmol，100％纯度，1当量)在THF(5mL)中的溶液中添加NaH(40mg，1.00mmol，60％纯度，5.73当量)。将混合物在25℃下搅拌0.5h。添加MeI(30mg，211.36μmol，13.16μL，1.21当量)。将混合物在25℃下搅拌12h。将反应混合物用H2O(20mL)淬灭，并用EtOAc(20mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：49％-69％，10min)并冻干，得到3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(6mg，9.87μmol，5.7％收率，96.6％纯度)，为灰白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.68(dd，J＝1.8，10.2Hz，1H)，7.66-7.62(m，1H)，7.60(d，J＝8.4Hz，1H)，7.50(t，J＝1.9Hz，1H)，7.47-7.40(m，2H)，6.90(t，J＝8.5Hz，1H)，3.22(s，3H)，3.10(s，3H)，2.74(tt，J＝3.7，7.2Hz，1H)，1.37(s，3H)，1.11-1.06(m，2H)，0.81-0.76(m，2H)；ES-LCMS m/z 588.1[M+H]+。
步骤2：3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-[甲基(甲基氨磺酰基)氨基]苯基]-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶
在0℃下向3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(5mg，8.22μmol，96.6％纯度，1当量)和DIEA(22.26mg，172.23μmol，30μL，20.95当量)在DCM(5mL)中的溶液中添加N-甲基氨磺酰氯(10mg，77.18μmol，9.39当量)。将混合物在0℃下搅拌10分钟。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，并用DCM(30mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：54％-74％，10min)并冻干，得到3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-[甲基(甲基氨磺酰基)氨基]苯基]-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶(1.58mg，2.28μmol，27.8％收率，98.3％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 11.24(s，1H)，7.68(dd，J＝1.3，10.3Hz，1H)，7.58(d，J＝8.4Hz，1H)，7.53-7.48(m，2H)，7.48-7.44(m，1H)，7.34-7.25(m，1H)，6.88(dt，J＝2.5，8.5Hz，1H)，3.27(s，3H)，3.22(d，J＝2.9Hz，3H)，2.73(tt，J＝3.7，7.2Hz，1H)，2.65(s，3H)，1.39(s，3H)，1.13-1.02(m，2H)，0.83-0.75(m，2H)；ES-LCMS m/z680.9[M+H]+。
叔丁基3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨磺酰氨基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(I-102)的合成
步骤1：N-[3-[[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]氨基]-1-双环[1.1.1]戊烷基]氨基甲酸叔丁酯
向三氟甲磺酸N-[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(300mg，482.70μmol，99.0％，1当量)在DMF(8mL)中的溶液中添加2,6-二甲基吡啶(155.17mg，1.45mmol，168.66μL，3当量)和N-(3-氨基-1-双环[1.1.1]戊烷基)氨基甲酸叔丁酯(143.55mg，724.05μmol，1.5)。将混合物在60℃下搅拌2h。通过添加H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝2/1，TLC:PE/EtOAc＝2/1，Rf＝0.20)，得到N-[3-[[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]氨基]-1-双环[1.1.1]戊烷基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，292.4μmol，60.6％收率，97.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 8.64(s，1H)，8.02-7.87(m，1H)，7.76-7.63(m，1H)，7.54(s，1H)，7.25-7.13(m，1H)，2.74-2.67(m，3H)，2.67-2.61(m，1H)，2.18-2.07(m，6H)，1.99-1.93(m，3H)，1.43-1.31(m，9H)，1.08-0.94(m，2H)，0.73-0.59(m，2H)；ES-LCMS m/z 664.5[M+H]+。
步骤2：N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-双环[1.1.1]戊烷基]氨基甲酸叔丁酯
将氨基甲酸N-[3-[[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]氨基]-1-双环[1.1.1]戊烷基]酯(100mg，146.20μmol，97.0％，1当量)和NaOMe/MeOH(19.40mg，20μL，30.0％，1.00当量)在THF(3mL)中的混合物脱气，并用N2吹扫3次，然后将混合物在25℃和N2气氛下搅拌1h。通过添加CH3COOH(0.1mL)淬灭反应混合物，然后用H2O(20mL)稀释，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝3/1，TLC:PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.30)，得到N-[3-[3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[4,3-d]嘧啶-1-基]-1-双环[1.1.1]戊烷基]氨基甲酸叔丁酯(50mg，67.8μmol，46.4％收率，90.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm10.36-10.16(m，1H)，7.83-7.68(m，1H)，7.65-7.55(m，1H)，7.54-7.48(m，1H)，6.96-6.82(m，1H)，3.08-3.06(m，3H)，2.59-2.54(m，3H)，2.44-2.39(m，2H)，2.23-2.18(m，2H)，2.03-2.01(m，3H)，1.39-1.35(m，9H)，0.93-0.84(m，2H)，0.63-0.39(m，2H)；ES-LCMS m/z664.0[M+H]+。
步骤3：叔丁基1-(3-氨基-1-双环[1.1.1]戊烷基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
/>
向叔丁基1-(3-氨基-1-双环[1.1.1]戊烷基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(50mg，67.82μmol，90.0％，1当量)在DCM(1mL)中的溶液中添加TFA(462.00mg，4.05mmol，0.3mL，59.74当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物浓缩以产生残留压力，得到叔丁基1-(3-氨基-1-双环[1.1.1]戊烷基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(30mg，44.29μmol，65.3％收率，100.0％纯度，TFA)，为白色固体，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 10.31(s，1H)，8.69(s，2H)，7.76(dd，J＝1.8，10.2Hz，1H)，7.53(d，J＝8.5Hz，1H)，6.90(t，J＝8.5Hz，1H)，3.06(s，3H)，2.65-2.62(m，1H)，2.52-2.51(m，6H)，2.01(s，3H)，0.94-0.85(m，2H)，0.67-0.34(m，2H)；ES-LCMS m/z 564.1[M+H]+。
步骤3：叔丁基3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨磺酰氨基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向1-(3-氨基-1-双环[1.1.1]戊烷基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(30mg，44.29μmol，100.0％，1当量，TFA)在DCM(4mL)中的溶液中添加TEA(10.78mg，106.50μmol，14.82μL，2当量)和N-甲基氨磺酰氯(6.90mg，53.25μmol，1当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物浓缩以产生残留压力，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：51％-71％，12min)，接着冻干，得到产物，接着冻干，得到叔丁基3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨磺酰氨基)-1-双环[1.1.1]戊烷基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(12.23mg，18.63μmol，42.1％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 10.26(s，1H)，7.85(s，1H)，7.76(dd，J＝1.8，10.3Hz，1H)，7.52(d，J＝8.6Hz，1H)，6.88(t，J＝8.6Hz，1H)，6.76(q，J＝5.0Hz，1H)，3.06(s，3H)，2.57-2.54(m，1H)，2.52(s，1H)，2.42(d，J＝5.0Hz，6H)，2.23(s，3H)，2.02(s，3H)，0.88(s，2H)，0.67-0.32(m，2H)；ES-LCMS m/z 657.0[M+H]+。
3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨磺酰氨基)环丁基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(I-109)的合成
步骤1：三氟甲磺酸3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基酯
在0℃下经30分钟向3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-5-羟基-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(5g，10.35mmol，1当量)和2,6-二甲基吡啶(1.88g，17.59mmol，2.05mL，1.7当量)在DCM(35mL)中的溶液中滴加三氟甲磺酸三氟甲基磺酰酯(5.84g，20.69mmol，3.41mL，2当量)。将混合物在25℃和N2气氛下搅拌12h。将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液(40mL x 3)淬灭，用DCM(50mL x 3)萃取。将有机层用1N HCl(40mL x 3)和盐水(50mL x 3)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(EtOAc/DCM＝100/1至8/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.3)，得到三氟甲磺酸3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基酯(4g，6.43mmol，97.1％收率，98.9％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm7.95(dd，J＝1.2，9.5Hz，1H)，7.72(d，J＝8.6Hz，1H)，7.30(t，J＝8.1Hz，1H)，2.76(s，3H)，2.70-2.66(m，1H)，2.01(s，3H)，1.08-0.98(m，2H)，0.62(t，J＝11.9Hz，2H)；ES-LCMS m/z 615.9[M+H]+。
步骤2：(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯
将三氟甲磺酸3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基酯(350mg，563.15μmol，99.0％，1当量)、N-(3-氨基环丁基)氨基甲酸叔丁酯(115.38mg，619.46μmol，1.1当量)和Cs2CO3(550.45mg，1.69mmol，3当量)在DMF(5mL)中的混合物在40℃下搅拌1h，然后将混合物在N2气氛和25℃下搅拌4h。将反应混合物用H2O(30mL)稀释，用EtOAc(40mL x 3)萃取，并用盐水(40mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型TLC将其纯化(SiO2，PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.3)，得到(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，255.42μmol，45.4％收率，83.2％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 9.07(d，J＝6.6Hz，1H)，7.88(d，J＝9.3Hz，1H)，7.66(d，J＝8.3Hz，1H)，7.28(d，J＝7.8Hz，1H)，7.16-7.11(m，1H)，4.27(d，J＝6.4Hz，1H)，3.87-3.41(m，1H)，2.62(s，3H)，2.35-2.09(m，4H)，1.95(s，3H)，1.93(s，1H)，1.34(s，9H)，0.99(s，2H)，0.65(s，2H)；ES-LCMS m/z 652.1[M+H]+。
步骤3：(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯
在0℃和N2气氛下向(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(150mg，191.57μmol，83.2％，1当量)在THF(30mL)中的溶液中添加NaOMe/MeOH(191.57μmol，0.25mL，30％，1当量)。将混合物在N2气氛和25℃下搅拌0.5h。向残留物添加CH3COOH至pH＝7，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型TLC将其纯化(SiO2，PE/EtOAc＝1:1，Rf1＝0.3)，得到(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，32.56μmol，17.0％收率，70.7％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm10.99-10.67(m，1H)，7.51(d，J＝9.6Hz，1H)，7.45-7.41(m，1H)，6.68-6.61(m，1H)，4.09-3.93(m，1H)，3.76(s，3H)，3.53-3.41(m，1H)，3.17(s，3H)，3.12-2.99(m，1H)，2.79-2.70(m，2H)，2.48-2.24(m，2H)，1.45(s，9H)，1.18-1.07(m，2H)，0.92-0.86(m，2H)；ES-LCMS m/z 652.1[M+H]+。
步骤4：1-(3-氨基环丁基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮
向(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)环丁基)氨基甲酸叔丁酯(30mg，32.56μmol，70.7％，1当量)在DCM(2mL)中的溶液中添加TFA(616.00mg，5.40mmol，0.4mL，165.94当量)。将混合物在25℃下搅拌0.5h。将反应混合物用H2O(10mL)稀释，用DCM(30mL x 3)萃取，并用盐水(30mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到1-(3-氨基环丁基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(30mg，31.56μmol，96.9％收率，70.0％纯度，TFA)，为黄色油状物，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.62(d，J＝10.5Hz，1H)，7.52(d，J＝7.9Hz，1H)，6.87-6.74(m，1H)，5.33(s，2H)，4.16(d，J＝7.0Hz，1H)，3.43(d，J＝1.5Hz，1H)，3.16(s，3H)，2.72(s，2H)，2.64(s，1H)，2.28-2.18(m，2H)，1.27(s，3H)，1.04-0.99(m，2H)，0.90-0.88(m，2H)；ES-LCMS m/z 552.1[M+H]+。
步骤5：3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨磺酰氨基)环丁基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向1-(3-氨基环丁基)-3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(30mg，31.56μmol，70.0％，1当量，TFA)在DCM(2mL)中的溶液中添加TEA(9.58mg，94.68μmol，13.18μL，3当量)和N-甲基氨磺酰氯(4.50mg，34.72μmol，1.1当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物用H2O(20mL)稀释，用DCM(20mL x3)萃取。将有机层在减压下浓缩，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(NH4HCO3)-ACN]；B％：45％-70％，11min)并冻干，得到3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[3-(甲基氨磺酰氨基)环丁基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(3.13mg，4.81μmol，15.3％收率，99.1％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.64(dd，J＝1.8，10.0Hz，1H)，7.54(d，J＝8.1Hz，1H)，6.82(t，J＝8.5Hz，1H)，4.29-4.20(m，1H)，3.51-3.47(m，1H)，3.18(s，3H)，2.87-2.82(m，2H)，2.67(td，J＝3.4，7.1Hz，1H)，2.58(s，3H)，2.44-2.37(m，2H)，2.08(s，3H)，1.05-0.98(m，2H)，0.66-0.62(m，2H)；ES-LCMS m/z 645.0[M+H]+。
3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-1-(1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(I-116)的合成
步骤1：3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-5-((1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮
向三氟甲磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(200mg，321.80μmol，99.0％，1当量)在DMF(3mL)中的溶液中添加5-氨基异吲哚啉-1-酮(47.68mg，321.80μmol，1当量)和Cs2CO3(314.54mg，965.39μmol，3当量)。将混合物在60℃下搅拌3h。将反应混合物用H2O(30mL)稀释，用DCM(40mL x 3)萃取，并将有机层在减压下浓缩，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：40％-70％，10min)并冻干，得到3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-5-((1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮(120mg，193.09μmol，60.0％收率，98.7％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 7.90-7.83(m，1H)，7.73-7.63(m，1H)，7.45(d，J＝8.9Hz，1H)，6.79-6.62(m，2H)，6.06(d，J＝6.6Hz，2H)，4.70-4.56(m，2H)，4.46(d，J＝15.9Hz，1H)，3.38(s，3H)，2.52(s，1H)，2.50(s，3H)，2.07(d，J＝1.5Hz，1H)，0.94-0.83(m，2H)，0.67-0.45(m，2H)；ES-LCMS m/z 614.0[M+H]+。
步骤2：3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-1-(1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮
在0℃和N2气氛下向3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-5-((1-氧代异吲哚啉-5-基)氨基)吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮(30mg，48.27μmol，98.7％，1当量)在THF(30mL)中的溶液中添加MeONa/MeOH(48.27μmol，0.1mL，30％，1当量)。将所得混合物在N2气氛和25℃下搅拌20分钟。向残留物添加CH3COOH至pH＝7，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(TFA)-ACN]；B％：38％-58％，12min)并冻干，得到3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-1-(1-氧代异吲哚啉-5-基)吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(3.84mg，6.26μmol，13.0％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 11.01(s，1H)，8.46(s，1H)，7.87(dd，J＝1.5，9.4Hz，1H)，7.70-7.63(m，2H)，7.27-7.22(m，1H)，7.21-7.17(m，2H)，4.34(s，2H)，3.11(s，3H)，2.33(d，J＝1.8Hz，1H)，1.29(s，3H)，0.95(d，J＝7.0Hz，2H)，0.67-0.57(m，2H)；ES-LCMS m/z613.9[M+H]+。
1-(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺(I-46)的合成
步骤1：4-甲基苯磺酸酯N-甲基-1-(3-硝基苯基)甲磺酰胺
/>
向(3-硝基苯基)甲磺酰氯(500mg，2.12mmol，1当量)在THF(1mL)中的溶液中添加DIEA(548.47mg，4.24mmol，739.17μL，2当量)和MeNH2.EtOH(197.69mg，6.37mmol，212.18μL，3当量)。将混合物在25℃下搅拌1h。将混合物用水(30mL)淬灭，并用DCM(30mL x 3)萃取。将合并的有机相用NaHCO3(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC:PE/EtOAc＝2/1，Rf＝0.4)，得到4-甲基苯磺酸酯N-甲基-1-(3-硝基苯基)甲磺酰胺(200mg，861.19μmol，40.6％收率，99.1％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.32-8.20(m，2H)，7.79(d，J＝7.6Hz，1H)，7.64-7.58(m，1H)，4.35(s，2H)，4.27-4.13(m，1H)，2.79(d，J＝5.4Hz，3H)。
步骤2：1-(3-氨基苯基)-N-甲基甲磺酰胺
在N2气氛下向4-甲基苯磺酸酯N-甲基-1-(3-硝基苯基)甲磺酰胺(200mg，861.19μmol，99.1％，1当量)在MeOH(2mL)中的溶液中添加Pd/C(200mg，861.19μmol，10.0％，1当量)。将悬浮液在真空下脱气，并用H2吹扫数次。将混合物在H2(15psi)和25℃下搅拌1h。将反应混合物过滤，并在减压下浓缩，得到1-(3-氨基苯基)-N-甲基-甲磺酰胺(180mg，853.90μmol，99.2％收率，95.0％纯度)，为黄色固体，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 7.22-7.17(m，1H)，7.17-7.14(m，1H)，6.75-6.73(m，2H)，6.71-6.67(m，2H)，6.66-6.57(m，1H)，4.18(s，2H)，2.02(s，3H)。
步骤3：1-(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺
向1-(3-氨基苯基)-N-甲基-甲磺酰胺(150mg，711.58μmol，95.0％，1.91当量)在DMA(3mL)中的溶液中添加2,6-二甲基吡啶(119.77mg，1.12mmol，130.19μL，3当量)和4-甲基苯磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(250mg，372.60μmol，90.0％，1当量)。将混合物在微波(2巴)和140℃下搅拌3h。将混合物用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：46％-66％，10min)并冻干，得到产物，向其添加饱和NaHCO3水溶液直至pH＝7，并用EtOAc(20mL x 3)萃取，然后将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到1-(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺(45mg，58.55μmol，15.7％收率，86.6％纯度)，为黄色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.85(dd，J＝1.8，9.5Hz，1H)，7.76(d，J＝8.2Hz，1H)，7.37(t，J＝7.8Hz，1H)，7.22-7.14(m，2H)，7.08-6.99(m，2H)，4.33(s，2H)，2.95(s，3H)，2.82-2.76(m，1H)，2.69(s，3H)，1.67(s，3H)，1.16-1.09(m，2H)，0.81(d，J＝2.6Hz，2H)；ES-LCMS m/z 666.0[M+H]+。
步骤4：1-(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺
向1-(3-((3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-1,2,3,4,7,8-六氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基)氨基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺(45mg，58.15μmol，86.0％，1当量)在THF(1mL)中的溶液中添加一滴NaOMe/MeOH(20重量％，58.15μmol，1当量)。将混合物在N2气氛和25℃下搅拌1h。向残留物添加AcOH直至pH＝7，并用EtOAc(20mL x3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：53％-83％，10min)并冻干，得到1-(3-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)苯基)-N-甲基甲磺酰胺(10.01mg，14.96μmol，25.7％收率，99.4％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm7.66(dd，J＝1.7，10.3Hz，1H)，7.57(d，J＝8.3Hz，1H)，7.51-7.47(m，2H)，7.43(s，1H)，7.39(dd，J＝3.2，5.6Hz，1H)，6.86(t，J＝8.4Hz，1H)，4.37(s，2H)，3.20(s，3H)，2.76-2.69(m，1H)，2.67(s，3H)，1.34(s，3H)，1.08-1.03(m，2H)，0.81-0.74(m，2H)；ES-LCMS m/z 666.1[M+H]+。
6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-3,7-二甲基-8-[2-甲基-3-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡喃并[3,2-c]吡啶-2,5-二酮(I-33)的合成
步骤1：6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-3,7-二甲基-8-[2-甲基-3-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡喃并[3,2-c]吡啶-2,5-二酮
在0℃下向8-(3-氨基-2-甲基-苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-3,7-二甲基-吡喃并[3,2-c]吡啶-2,5-二酮(50mg，70.01μmol，80％纯度，1当量)和TEA(28.34mg，280.02μmol，38.98μL，4当量)在DCM(2mL)中的搅拌溶液中添加N-甲基氨磺酰氯(18.14mg，140.01μmol，N/A纯度，2当量)。将反应混合物在0℃和N2气氛下搅拌5h。通过在0℃下添加饱和NaHCO3水溶液(30mL)淬灭反应混合物，并用DCM(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：53％-83％，10min)，接着冻干，得到6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-3,7-二甲基-8-[2-甲基-3-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡喃并[3,2-c]吡啶-2,5-二酮(6.22mg，9.36μmol，13.4％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm11.30(s，1H)，8.82(s，1H)，7.71(d，J＝1.7，10.3Hz，1H)，7.51(d，J＝8.3Hz，1H)，7.40(d，J＝7.8Hz，1H)，7.27(t，J＝7.7Hz，1H)，7.14(q，J＝4.9Hz，1H)，7.01(d，J＝7.6Hz，1H)，6.87(t，J＝8.7Hz，1H)，3.03(s，1H)，2.55(d，J＝5.1Hz，3H)，2.20(s，3H)，2.03(s，3H)，1.43(s，3H)，1.23-1.17(m，2H)，0.96-0.84(m，2H)；ES-LCMS m/z 665.0[M+H]+。
叔丁基3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[4-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(I-82)的合成
步骤1：叔丁基5-(4-氨基苯胺基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向三氟甲磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(300mg，482.70μmol，99.0％，1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加2,6-二甲基吡啶(155.17mg，1.45mmol，168.66μL，3当量)和苯-1,4-二胺(78.30mg，724.05μmol，1.5当量)。将混合物在60℃下搅拌2h。通过添加H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝2/1，TLC:PE/EtOAc＝2/1，Rf＝0.20)，得到叔丁基5-(4-氨基苯胺基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(200mg，327.89μmol，67.9％收率，94.0％纯度)，为棕色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm10.16-10.03(m，1H)，8.04-7.87(m，1H)，7.77-7.60(m，1H)，7.32-7.13(m，1H)，6.85-6.65(m，2H)，6.63-6.45(m，2H)，5.24-4.99(m，2H)，2.73-2.67(m，3H)，1.51-1.34(m，3H)，1.09-0.89(m，2H)，0.76-0.56(m，2H)；ES-LCMS m/z 574.1[M+H]+。
步骤2：叔丁基1-(4-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
将5-(4-氨基苯胺基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(100mg，163.95μmol，1当量)和NaOMe/MeOH(163.95μmol，11μL，30.0％，1当量)在THF(0.3mL)中的混合物脱气，并用N2吹扫3次，然后将混合物在25℃和N2气氛下搅拌1h。通过添加AcOH(0.1mL)淬灭反应混合物，然后用H2O(20mL)稀释，并用EtOAc(30mL x3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(DCM/MeOH＝10/1，TLC:DCM/MeOH＝10/1，Rf＝0.80)，得到叔丁基1-(4-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(90mg，67.50μmol，41.2％收率，43.0％纯度)，为黄色固体。ES-LCMS m/z 574.0[M+H]+。
步骤3：叔丁基3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[4-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮
向1-(4-氨基苯基)-3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(43.00mg，75.00μmol，1当量)在DCM(1mL)中的溶液中添加TEA(15.18mg，149.99μmol，20.88μL，2当量)和N-甲基氨磺酰氯(9.72mg，75.00μmol，1当量)。将混合物在0℃下搅拌1h。通过添加H2O(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：56％-76％，12min)，接着冻干，得到叔丁基3-环丙基-5-(2-氟-4-碘-苯胺基)-6,8-二甲基-1-[4-(甲基氨磺酰氨基)苯基]吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7-三酮(8.77mg，13.16μmol，17.6％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 11.23-10.93(m，1H)，10.00-9.81(m，1H)，7.90-7.70(m，1H)，7.59-7.52(m，1H)，7.50-7.44(m，1H)，7.29-7.23(m，2H)，7.22-7.15(m，2H)，6.99-6.82(m，1H)，3.12-3.01(m，3H)，2.63-2.57(m，1H)，2.47-2.44(m，3H)，1.22(s，3H)，0.99-0.91(m，2H)，0.72-0.57(m，2H)；ES-LCMS m/z 667.0[M+H]+。
4-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-N-甲基-1H-吲哚-1-磺酰胺(I-28)的合成
步骤1：5-((1H-吲哚-4-基)氨基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮
向三氟甲磺酸[3-环丙基-1-(2-氟-4-碘-苯基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-吡啶并[2,3-d]嘧啶-5-基]酯(1.2g，1.92mmol，98.6％，1当量)在DMF(5mL)中的溶液中添加1H-吲哚-4-胺(254.15mg，1.92mmol，1当量)和2,6-二甲基吡啶(618.14mg，5.77mmol，671.90μL，3当量)。将混合物在微波和60℃下搅拌8h。将反应混合物用H2O(30mL)稀释，用EtOAc(50mL x 3)萃取，并用盐水(40mL)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝100/1至1/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.2)，得到5-((1H-吲哚-4-基)氨基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮(900mg，1.40mmol，72.9％收率，93.0％纯度)，为灰绿色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 11.22(s，1H)，10.46(s，1H)，7.95(d，J＝9.4Hz，1H)，7.74(d，J＝8.2Hz，1H)，7.58-7.49(m，1H)，7.34(d，J＝2.5Hz，1H)，7.13(d，J＝8.0Hz，1H)，7.03-7.00(m，2H)，6.40(d，J＝7.4Hz，1H)，2.75(s，3H)，2.67(dd，J＝3.3，6.8Hz，1H)，1.45(s，3H)，0.99(d，J＝6.7Hz，2H)，0.67(m，2H)；ES-LCMS m/z 598.0[M+H]+。
步骤2：3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-(1H-吲哚-4-基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮
向5-((1H-吲哚-4-基)氨基)-3-环丙基-1-(2-氟-4-碘苯基)-6,8-二甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,8H)-三酮(500mg，701.82μmol，83.9％，1当量)在THF(30mL)中的溶液中添加NaOMe/MeOH(701.82μmol，0.1mL，30.0％，1当量)。将混合物在N2气氛和25℃下搅拌0.5h。向残留物添加CH3COOH至pH＝7，并用EtOAc(40mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAc＝1/1，TLC:PE/EtOAC＝1/1，Rf＝0.3)，得到3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-(1H-吲哚-4-基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(330mg，469.55μmol，66.9％收率，85.0％纯度)，为灰绿色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 11.29(s，1H)，11.12(s，1H)，7.79(dd，J＝1.7，10.4Hz，1H)，7.59-7.52(m，1H)，7.45(d，J＝8.1Hz，1H)，7.38(t，J＝2.7Hz，1H)，7.12(t，J＝7.8Hz，1H)，6.98-6.89(m，2H)，6.22(s，1H)，3.07(s，3H)，2.68-2.59(m，1H)，0.96(s，3H)，0.95-0.88(m，2H)，0.70(d，J＝4.1Hz，2H)；ES-LCMS m/z 598.0[M+H]+。
步骤3：4-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1H-吲哚-1-磺酰氟
向3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1-(1H-吲哚-4-基)-6,8-二甲基吡啶并[4,3-d]嘧啶-2,4,7(1H,3H,6H)-三酮(100mg，142.29μmol，85.0％，1当量)在DCM(4mL)中的溶液中添加DIEA(110.34mg，853.73μmol，148.70μL，6当量)。将悬浮液在真空下脱气，并用N2吹扫数次。将混合物在F2O2S(15Psi)和25℃下搅拌24h。将混合物在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：70％-90％，10min)并冻干，得到4-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1H-吲哚-1-磺酰氟(20mg，29.44μmol，20.7％收率，N/A纯度)，为白色固体。ES-LCMS m/z 679.9[M+H]+。
步骤4：4-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-N-甲基-1H-吲哚-1-磺酰胺
向4-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-1H-吲哚-1-磺酰氟(20mg，29.44μmol，N/A，1当量)在DMF(2mL)中的溶液中添加DIEA(49.46mg，382.67μmol，66.65μL，13当量)和甲胺盐酸盐(39.75mg，588.73μmol，20当量)。将混合物在80℃下搅拌12h。将反应混合物通过制备型HPLC纯化(柱：Boston Green ODS150*30mm*5um；流动相：[水(HCl)-ACN]；B％：60％-80％，10min)并冻干，得到4-(3-环丙基-5-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-6,8-二甲基-2,4,7-三氧代-3,4,6,7-四氢吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基)-N-甲基-1H-吲哚-1-磺酰胺(2.51mg，3.64μmol，12.4％收率，100.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm11.37(s，1H)，7.91(d，J＝8.2Hz，1H)，7.56-7.51(m，2H)，7.47(d，J＝8.7Hz，1H)，7.38(t，J＝8.0Hz，1H)，7.19(d，J＝7.6Hz，1H)，6.72(t，J＝8.2Hz，1H)，6.46-6.31(m，1H)，4.88(d，J＝5.0Hz，1H)，3.21(s，3H)，2.83-2.70(m，1H)，2.64(d，J＝5.3Hz，3H)，1.27(d，J＝6.1Hz，2H)，1.15(s，3H)，0.89-0.83(m，2H)；ES-LCMS m/z 691.0[M+H]+。
(S)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N-甲基甲磺酰亚胺酰胺和(R)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N-甲基甲磺酰亚胺酰胺(I-119和I-120)的合成
步骤1：2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸
在0℃下向2-氧代-2-苯基-乙酸(51g，339.70mmol，1当量)在H2SO4(80mL)中的溶液中添加KNO3(41.21g，407.64mmol，1.2当量)。将混合物在25℃下搅拌16h。将反应混合物倒入冰水(1.6L)中，并用EtOAc(400mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(300mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸(66g，粗)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.70(t，J＝1.8Hz，1H)，8.56(td，J＝1.2，8.2Hz，1H)，8.41-8.37(m，1H)，7.89(t，J＝8.0Hz，1H)。
步骤2：2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸乙酯
向2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸(66g，338.24mmol，1当量)在DMF(700mL)中的溶液中添加K2CO3(121.54g，879.42mmol，2.6当量)。在20℃下搅拌2h后，滴加碘乙烷(263.77g，1.69mol，135.26mL，5当量)。将混合物在20℃下搅拌16h。将反应混合物倒入水(800mL)中，用EtOAc(500mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(500mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/0至10/1，TLC:PE/EtOAc＝5/1，Rf＝0.45)，得到2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸乙酯(35.5g，143.16mmol，42.3％收率，90.0％纯度)，为黄色油状物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.90(s，1H)，8.54-8.47(m，1H)，8.40(d，J＝7.8Hz，1H)，7.75(t，J＝7.9Hz，1H)，4.50(q，J＝7.2Hz，2H)，1.46(t，J＝7.1Hz，3H)。
步骤3：3-[(2E)-2-[2-乙氧基-1-(3-硝基苯基)-2-氧代-亚乙基]肼基]-3-氧代-丙酸乙酯
向2-(3-硝基苯基)-2-氧代-乙酸乙酯(22.5g，90.73mmol，1当量)在EtOH(120mL)中的溶液中添加H2SO4(2.29g，23.33mmol，1.24mL，0.25当量)和3-肼基-3-氧代-丙酸乙酯(13.79g，94.36mmol，1.04当量)。将混合物在90℃下搅拌2h。移除溶剂，得到残留物，将其用水(200mL)稀释，并用EtOAc(300mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到3-[(2E)-2-[2-乙氧基-1-(3-硝基苯基)-2-氧代-亚乙基]肼基]-3-氧代-丙酸乙酯(30g，粗，E/Z混合物)，为黄色油状物。ES-LCMS m/z 352.2[M+H]+。
步骤4：4-羟基-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯
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向3-[(2E)-2-[2-乙氧基-1-(3-硝基苯基)-2-氧代-亚乙基]肼基]-3-氧代-丙酸乙酯(30g，85.39mmol，E/Z混合物，1当量)在DMF(300mL)中的溶液中添加K2CO3(6.49g，46.97mmol，0.55当量)。将混合物在80℃下搅拌3h。将混合物冷却到环境温度，并倒入3NHCl(600mL)中。通过过滤收集沉淀的固体，得到残留物，将其添加到MeOH(50mL)中，并在15℃下搅拌2h。过滤浆料，并用MeOH(3x3mL)冲洗滤饼。收集固体并真空干燥，得到4-羟基-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯(8.3g，24.47mmol，28.7％收率，90.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 13.23(s，1H)，8.58-8.53(m，1H)，8.30(td，J＝1.2，7.2Hz，1H)，8.15(d，J＝8.1Hz，1H)，7.76(t，J＝8.1Hz，1H)，4.32(q，J＝7.1Hz，2H)，1.29(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-LCMS m/z 306.1[M+H]+。
步骤5：4-氯-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯
向4-羟基-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯(2.5g，7.37mmol，1当量)在DCM(30mL)中的溶液中添加(COCl)2(935.60mg，7.37mmol，645.24μL，1当量)。将混合物在35℃下搅拌3h。通过添加水(30mL)淬灭反应混合物，并用DCM(40mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，向其添加MeOH(5mL)，并在25℃下搅拌2h。过滤浆料，并用PE(2x3mL)冲洗滤饼。收集固体并真空干燥，得到4-氯-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯(1.9g，5.69mmol，77.2％收率，97.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 11.67(s，1H)，8.48(s，1H)，8.38(d，J＝8.1Hz，1H)，7.92(d，J＝7.8Hz，1H)，7.74-7.66(m，1H)，4.51(q，J＝7.1Hz，2H)，1.43(t，J＝7.1Hz，3H)；ES-LCMS m/z 324.0，326.0[M+H]+。
步骤6：5-氯-2-环丙基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯
将4-氯-3-(3-硝基苯基)-6-氧代-1H-哒嗪-5-甲酸乙酯(1.4g，4.20mmol，1当量)、环丙基硼酸(720.75mg，8.39mmol，2当量)、2-(2-吡啶基)吡啶(1.64g，10.49mmol，2.5当量)、Na2CO3(533.60mg，5.03mmol，1.2当量)和Cu(OAc)2(914.43mg，5.03mmol，1.2当量)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物脱气，并用N2吹扫3次，并将混合物在70℃和N2气氛下搅拌24h。将反应混合物用水(100mL)稀释，并用DCM(60mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/0至3/1，TLC:PE/EtOAc＝3/1，Rf＝0.43)，得到5-氯-2-环丙基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(400mg，989.69μmol，23.6％收率，90.0％纯度)，为黄色胶状物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 8.42(d，J＝1.8Hz，1H)，8.35(td，J＝1.1，8.3Hz，1H)，7.87(d，J＝7.6Hz，1H)，7.70-7.65(m，1H)，4.51(q，J＝7.1Hz，2H)，4.22(t，J＝4.0，7.6Hz，1H)，1.43(t，J＝7.2Hz，3H)，1.22-1.16(m，2H)，1.13-1.06(m，2H)；ES-LCMS m/z 364.0，366.0[M+H]+。
步骤7：2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯
在0℃下向5-氯-2-环丙基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(400mg，989.69μmol，1当量)在DCM(3mL)中的溶液中添加MeNH2(1.02g，9.90mmol，30.0％纯度，10当量)。将混合物在20℃下搅拌2h。移除溶剂，得到2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(300mg，669.74μmol，67.7％收率，80.0％纯度)，为黄色固体。1HNMR(500MHz，CDCl3)δppm 8.33-8.30(m，2H)，7.79(d，J＝7.6Hz，1H)，7.70-7.66(m，1H)，4.43(q，J＝7.1Hz，2H)，4.02-3.95(m，1H)，2.69(d，J＝5.3Hz，3H)，1.44(t，J＝7.1Hz，2H)，1.46-1.42(m，1H)，1.03-0.94(m，4H)；ES-LCMS m/z 359.1[M+H]+。
步骤8：2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)哒嗪-3-酮
向2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代-哒嗪-4-甲酸乙酯(300mg，669.74μmol，1当量)在DMSO(5mL)中的溶液中添加LiCl(283.93mg，6.70mmol，10当量)。将混合物在150℃下搅拌8h。将反应混合物用水(30mL)稀释，并用EtOAc(40mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/0至0/1，TLC:PE/EtOAc＝0/1，Rf＝0.15)，得到2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)哒嗪-3-酮(200mg，628.74μmol，93.9％收率，90.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.38-8.27(m，2H)，7.83(d，J＝7.6Hz，1H)，7.73-7.66(m，1H)，5.92(s，1H)，4.03(t，J＝3.9，7.5Hz，1H)，2.83(d，J＝3.4Hz，3H)，1.09-0.93(m，4H)；ES-LCMS m/z 287.1[M+H]+。
步骤9：6-环丙基-4-羟基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
向2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)哒嗪-3-酮(200mg，628.74μmol，1当量)在Ac2O(3mL)中的溶液中添加2-甲基丙二酸(222.74mg，1.89mmol，152.56μL，3当量)。将混合物在110℃下搅拌2h。移除溶剂，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAC＝3/1，TLC:PE/EtOAC＝3/1，Rf＝0.24)，得到6-环丙基-4-羟基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(200mg，434.38μmol，69.1％收率，80.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 12.80(s，1H)，8.37(td，J＝2.2，7.0Hz，1H)，8.33(d，J＝1.5Hz，1H)，7.72-7.68(m，2H)，4.16-4.09(m，1H)，3.06(s，3H)，2.16(s，3H)，1.20-1.15(m，2H)，1.15-1.09(m，2H)；ES-LCMS m/z 369.0[M+H]+。
步骤10：4-甲基苯磺酸[6-环丙基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基]酯
向6-环丙基-4-羟基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(200mg，434.38μmol，1当量)在DCM(8mL)中的溶液中添加DIEA(561.40mg，4.34mmol，756.61μL，10当量)和4-甲基苯磺酰氯(414.06mg，2.17mmol，5当量)。将混合物在50℃下搅拌12h。移除溶剂，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAC＝3/1，TLC:PE/EtOAC＝3/1，Rf＝0.24)，得到4-甲基苯磺酸[6-环丙基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基]酯(200mg，371.27μmol，85.5％收率，97.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 8.38-8.30(m，2H)，7.98(d，J＝8.3Hz，2H)，7.77-7.63(m，2H)，7.41(d，J＝8.0Hz，2H)，4.22-4.06(m，1H)，3.08(s，3H)，2.49(s，3H)，1.85(s，3H)，1.12-1.01(m，4H)；ES-LCMS m/z 523.1[M+H]+。
步骤11：6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
向2-氟-4-碘-苯胺(263.99mg，1.11mmol，3当量)在THF(3mL)中的溶液中添加NaH(89.10mg，2.23mmol，60.0％纯度，6当量)，并在0℃下搅拌30分钟，然后在0℃下添加4-甲基苯磺酸[6-环丙基-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基]酯(200mg，371.27μmol，1当量)。将反应温度缓慢升温至25℃，并在25℃下搅拌1h。通过添加水(20mL)淬灭反应混合物，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(PE/EtOAC＝1/1，TLC:PE/EtOAC＝1/1，Rf＝0.35)，得到6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(100mg，156.64μmol，42.2％收率，92.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 10.78(s，1H)，8.44-8.27(m，2H)，7.75-7.65(m，2H)，7.46(d，J＝1.8，10.0Hz，1H)，7.37(d，J＝8.5Hz，1H)，6.56(t，J＝8.5Hz，1H)，4.10-4.01(m，1H)，3.07(s，3H)，1.82(s，3H)，1.19-1.07(m，4H)；ES-LCMS m/z 588.0[M+H]+。
步骤12：8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
向6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(100mg，156.64μmol，1当量)在EtOH(1.5mL)、H2O(1.5mL)和THF(1.5mL)中的溶液中添加NH4Cl(83.79mg，1.57mmol，10当量)和Fe(43.74mg，783.19μmol，5当量)。将混合物在90℃下搅拌3h。过滤反应混合物以移除不溶物。将滤液在减压下浓缩，得到残留物。将残留物通过制备型HPLC纯化(柱：Boston Prime C18 150*30mm*5um；流动相：[水(NH3H2O+NH4HCO3)-ACN]；B％：64％-94％，10min)，接着冻干，得到8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(55.23mg，99.09μmol，63.3％收率，100.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δppm 7.55(d，J＝1.8，10.3Hz，1H)，7.45(d，J＝8.5Hz，1H)，7.21(t，J＝7.7Hz，1H)，6.82(d，J＝1.5，8.0Hz，1H)，6.79-6.76(m，1H)，6.71(d，J＝7.7Hz，1H)，6.64(t，J＝8.6Hz，1H)，4.04(t，J＝3.9，7.5Hz，1H)，3.13(s，3H)，1.76(s，3H)，1.17-1.11(m，2H)，1.07-0.99(m，2H)；ES-LCMS m/z 558.0[M+H]+。
步骤13：甲亚磺酰氯
在-20℃和N2下向(甲基二硫烷基)甲烷(5.35g，56.79mmol，5.10mL，1当量)在AcOH(6.82g，113.59mmol，6.50mL，2当量)中的溶液中添加SO2Cl2(20.27g，170.38mmol，12.36mL，3当量)。将混合物在20℃下搅拌12h。将反应混合物浓缩，得到粗甲亚磺酰氯(8.9g，粗)，为浅黄色油状物，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 3.39(s，3H)。
步骤14：N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]甲亚磺酰胺
向8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(500mg，897.09μmol，100％，1当量)在DCM(30mL)中的溶液中添加DIEA(907.77mg，7.02mmol，1.22mL，7.83当量)和甲亚磺酰氯(176.82mg，1.79mmol，2当量)。将混合物在20℃下搅拌1h。TLC(PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.07)指示原料完全消耗，并且形成一个新点。将反应混合物浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/0至0/1，TLC:PE/EtOAc＝1/1，Rf＝0.07)，得到N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]甲亚磺酰胺(350mg，553.72μmol，61.7％收率，98.0％纯度)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CDCl3)δppm 10.85(br s，1H)，7.48-7.33(m，3H)，7.23-7.02(m，3H)，6.54(t，J＝7.8Hz，1H)，6.33(br s，1H)，4.05(br s，1H)，3.11(s，3H)，2.87(s，3H)，1.82(s，3H)，1.25-1.05(m，4H)；ES-LCMS m/z 620.2[M+H]+。
步骤15：6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-[3-[[甲基-(甲基氨基)-氧代-λ6-亚硫烷基]氨基]苯基]吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮
在-20℃和N2下向N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]甲亚磺酰胺(150mg，237.31μmol，98％，1当量)和MeNH2(0.35g，3.72mmol，33％，15.67当量)在MeCN(45mL)中的溶液中添加t-BuOK(1M，1.42mL，6当量)，接着添加NCS(126.75mg，949.23umol，4当量)。将混合物在20℃下搅拌3h。TLC(PE/EtOAc＝0/1，Rf＝0.28)指示原料完全消耗，并且形成一个新点。通过添加水(50mL)淬灭反应混合物，用EtOAc(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物。将残留物通过快速硅胶色谱法纯化(PE/EtOAc＝1/0至0/1，TLC:PE/EtOAc＝0/1，Rf＝0.28)，得到6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-[3-[[甲基-(甲基氨基)-氧代-λ6-亚硫烷基]氨基]苯基]吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(80mg，109.79μmol，46.2％收率，89.0％纯度)，为白色固体。ES-LCMS m/z649.2[M+H]+。
步骤16：(S)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N-甲基甲磺酰亚胺酰胺和(R)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N-甲基甲磺酰亚胺酰胺
通过SFC(AD_IPA_DEA_5_40_4ML_4MIN_5CM)分离6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-8-[3-[[甲基-(甲基氨基)-氧代-λ6-亚硫烷基]氨基]苯基]吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(80mg，109.79μmol，89％，1当量)。将所需级分浓缩，得到残留物，接着冻干，得到峰1：(S)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N-甲基甲磺酰亚胺酰胺(20.27mg，30.91μmol，28.1％收率，98.9％纯度)(ee＝100％)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm7.58-7.52(m，1H)，7.45(d，J＝8.2Hz，1H)，7.34(t，J＝7.9Hz，1H)，7.19(d，J＝7.8Hz，1H)，7.15(s，1H)，7.07(d，J＝7.5Hz，1H)，6.65(t，J＝8.5Hz，1H)，4.05(td，J＝3.6，7.4Hz，1H)，3.12(d，J＝7.0Hz，6H)，2.72(s，3H)，1.77(s，3H)，1.14(d，J＝2.7Hz，2H)，1.03(d，J＝5.2Hz，2H)；ES-LCMS m/z 649.2[M+H]+。峰2：(R)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N-甲基甲磺酰亚胺酰胺(20.68mg，31.67μmol，28.8％收率，99.3％纯度)(ee＝100％)，为白色固体。1H NMR(500MHz，CD3OD)δppm 7.55(dd，J＝1.8，10.3Hz，1H)，7.45(d，J＝8.5Hz，1H)，7.34(t，J＝7.9Hz，1H)，7.19(d，J＝7.9Hz，1H)，7.15(s，1H)，7.07(d，J＝6.7Hz，1H)，6.65(t，J＝8.6Hz，1H)，4.05(tt，J＝3.9，7.5Hz，1H)，3.18-3.06(m，6H)，2.72(s，3H)，1.77(s，3H)，1.20-1.09(m，2H)，1.07-0.98(m，2H)；ES-LCMS m/z 649.2[M+H]+。
1-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]-3-甲基-胍(I-122)的合成
步骤1：N-[[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]硫代氨基甲酰基]氨基甲酸乙酯
将8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(300mg，538.25μmol，100.0％，1当量)和N-(硫酮亚甲基)氨基甲酸乙酯(155.31mg，1.18mmol，2.2当量)在DCM(10mL)中的溶液在15℃下搅拌12h。向混合物添加PE，过滤并在减压下浓缩，得到N-[[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]硫代氨基甲酰基]氨基甲酸乙酯(330mg，460.12μmol，85.5％收率，96.0％纯度)，为黄色固体，其不经进一步纯化用于下一步。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm11.58(s，1H)，10.83(br s，1H)，8.12(s，1H)，7.86(s，1H)，7.65(d，J＝7.9Hz，1H)，7.51(t，J＝7.9Hz，1H)，7.45(d，J＝9.9Hz，1H)，7.35(d，J＝8.4Hz，1H)，7.30-7.27(m，1H)，6.54(t，J＝8.5Hz，1H)，4.32(q，J＝7.0Hz，2H)，4.06(tt，J＝3.9，7.4Hz，1H)，3.17(s，3H)，1.82(s，3H)，1.38(t，J＝7.0Hz，3H)，1.19-1.14(m，2H)，1.10-1.04(m，2H)；ES-LCMS m/z 689.2[M+H]+。
步骤2：N-[(Z)-N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]-N'-甲基-甲脒基]氨基甲酸乙酯
在0℃下向N-[[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]硫代氨基甲酰基]氨基甲酸乙酯(270mg，376.47μmol，96.0％纯度，1当量)、DIEA(316.25mg，2.45mmol，426.22μL，6.5当量)和甲胺盐酸盐(101.67mg，1.51mmol，4当量)在DCM(20mL)中的溶液中添加EDCI(288.67mg，1.51mmol，4当量)。将混合物在15℃下搅拌12h。TLC(DCM/MeOH＝10/1，Rf＝0.50)指示原料完全消耗。将混合物用水(30mL)稀释，并用DCM(20mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过快速硅胶色谱法纯化(DCM/MeOH＝100/1至50/1，TLC:DCM/MeOH＝10/1，Rf＝0.50)，得到N-[(Z)-N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]-N'-甲基-甲脒基]氨基甲酸乙酯(260mg，371.71μmol，98.7％收率，98.0％纯度)，为黄色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm10.81(s，1H)，7.54-7.18(m，6H)，6.53(t，J＝8.5Hz，1H)，4.19(q，J＝7.2Hz，2H)，4.08-4.00(m，1H)，3.10(s，3H)，2.97(d，J＝4.6Hz，3H)，1.81(s，3H)，1.37-1.29(m，3H)，1.18-1.11(m，2H)，1.11-1.04(m，2H)；ES-LCMS m/z 686.1[M+H]+。
步骤3：1-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]-3-甲基-胍
向N-[(Z)-N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]-N'-甲基-甲脒基]氨基甲酸乙酯(100mg，142.96μmol，98.0％纯度，1当量)在EtOH(4mL)中的溶液中添加KOH(2M，1.14mL，16当量)。将混合物在40℃下搅拌12h。将混合物在减压下浓缩，得到残留物，通过制备型HPLC将其纯化(柱：BostonGreen ODS150*30mm*5um；流动相：[水(FA)-ACN]；B％：26％-46％，12min)，接着冻干，得到1-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]-3-甲基-胍(15.28mg，23.17μmol，16.2％收率，100.0％纯度，FA)，为黄色固体。1HNMR(400MHz，CDCl3)δppm 7.64-7.59(m，1H)，7.56(d，J＝10.4Hz，1H)，7.47(d，J＝8.2Hz，2H)，7.44-7.34(m，2H)，6.66(t，J＝8.5Hz，1H)，4.13-4.01(m，1H)，3.10(s，3H)，2.94(s，3H)，1.77(s，3H)，1.16-1.09(m，2H)，1.08-1.02(m，2H)；ES-LCMS m/z 614.1[M+H]+。
(S)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N,N-二甲基甲磺酰亚胺酰胺(I-123)的合成
步骤1：N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]甲亚磺酰胺
将8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(100mg，179.42μmol，100.0％，1当量)、甲亚磺酰氯(26.52mg，269.13μmol，N/A，1.5当量)和DIEA(69.57mg，538.25μmol，93.75μL，3当量)在DCM(2mL)中的混合物脱气，并用N2吹扫3次，然后将混合物在0℃和N2气氛下搅拌10分钟。将反应混合物用饱和NaHCO3(30mL)溶液洗涤，用DCM(30mL x 3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]甲亚磺酰胺(110mg，163.37μmol，91.1％收率，92.0％纯度)，为黄色固体，其不经进一步纯化直接用于下一步。ES-LCMS m/z 620.0[M+H]+。
步骤2：(S)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N,N-二甲基甲磺酰亚胺酰胺
向N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]甲亚磺酰胺(110mg，163.37μmol，92.0％，1当量)在MeCN(30mL)中的溶液中添加N-甲基甲胺(2M，816.86μL，10当量)和t-BuOK(1M，1.31mL，8当量)，接着添加NCS(141.80mg，1.06mmol，6.5当量)。将混合物在N2气氛和40℃下搅拌12h。将反应混合物用H2O(30mL)稀释，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(TLC:PE/EtOAc＝2/3，Rf＝0.2)。将所需级分在减压下浓缩，得到残留物，通过手性SFC将其分离(柱：DAICEL CHIRALPAK AD(柱：DAICELCHIRALPAK AD(250mm*30mm,10um)；流动相：[0.1％NH3H2O/ETOH]；B％：40％-40％)，得到峰1和峰2。将峰1在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(20mL)和水(20mL)中并冻干，得到(S)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N,N-二甲基甲磺酰亚胺酰胺(18.06mg，27.26μmol，16.7％收率，100.0％纯度，SFC:Rt＝5.737，ee＝100.0％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 10.87(s，1H)，7.45(dd，J＝1.8，10.0Hz，1H)，7.35(d，J＝9.7Hz，1H)，7.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.21(d，J＝8.9Hz，1H)，7.14-6.97(m，2H)，6.53(t，J＝8.5Hz，1H)，4.05(s，1H)，3.12(s，3H)，2.99(s，3H)，2.91(s，6H)，1.81(s，3H)，1.19-1.13(m，2H)，1.09-1.01(m，2H)；ES-LCMS m/z 663.1[M+H]+。
(R)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N,N-二甲基甲磺酰亚胺酰胺(I-124)的合成
步骤1：(R)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N,N-二甲基甲磺酰亚胺酰胺
向N-[3-[6-环丙基-4-(2-氟-4-碘-苯胺基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基]苯基]甲亚磺酰胺(110mg，163.37μmol，92.0％，1当量)在MeCN(30mL)中的溶液中添加N-甲基甲胺(2M，816.86μL，10当量)和t-BuOK(1M，1.31mL，8当量)，接着添加NCS(141.80mg，1.06mmol，6.5当量)。将混合物在N2气氛和40℃下搅拌12h。将反应混合物用H2O(30mL)稀释，并用EtOAc(30mL x 3)萃取。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，得到残留物，将其通过制备型TLC纯化(TLC:PE/EtOAc＝2/3，Rf＝0.2)。将所需级分在减压下浓缩，得到残留物，通过手性SFC将其分离(柱：DAICEL CHIRALPAK AD(柱：DAICELCHIRALPAK AD(250mm*30mm,10um)；流动相：[0.1％NH3H2O/ETOH]；B％：40％-40％)，得到峰1和峰2。将峰2在减压下浓缩，得到残留物，将其溶解在MeCN(20mL)和水(20mL)中并冻干，得到(R)-N'-(3-(6-环丙基-4-((2-氟-4-碘苯基)氨基)-1,3-二甲基-2,5-二氧代-1,2,5,6-四氢吡啶并[2,3-d]哒嗪-8-基)苯基)-N,N-二甲基甲磺酰亚胺酰胺(19.63mg，28.75μmol，17.6％收率，97.0％纯度，SFC:Rt＝6.270，ee＝97.7％)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 10.87(s，1H)，7.45(dd，J＝1.8，10.0Hz，1H)，7.35(d，J＝9.7Hz，1H)，7.31(d，J＝8.0Hz，1H)，7.21(d，J＝8.2Hz，1H)，7.14-6.98(m，2H)，6.53(t，J＝8.5Hz，1H)，4.04(d，J＝3.6Hz，1H)，3.12(s，3H)，2.99(s，3H)，2.91(s，6H)，1.81(s，3H)，1.18-1.13(m，2H)，1.08-1.02(m，2H)；ES-LCMS m/z 663.1[M+H]+。
6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-3-甲基-8-{3-[(甲基氨磺酰基)氨基]phenyl}吡喃并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(I-129)的合成
步骤1
在-78℃和N2气氛下向DIPA(10.55g，104.26mmol，6.00当量)在THF(20.00mL)中的溶液中滴加n-BuLi(41.70mL，104.26mmol，6.00当量)。将反应混合物在-50℃下搅拌0.5小时。在-78℃下将丙酸叔丁酯(6.79g，52.13mmol，3.00当量)在THF(20.00mL)中的溶液滴加到先前的反应混合物中，并在-78℃下再搅拌1小时。然后在-78℃下滴加2-环丙基-5-羟基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酸乙酯(6.00g，17.38mmol，1.00当量)在THF(120.00mL)中的溶液，并将混合物在-50℃下再搅拌2小时。用饱和NH4Cl(500mL)淬灭反应，然后用EtOAc(2x200mL)萃取。将合并的有机物用盐水(400mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并真空浓缩，得到3-[2-环丙基-5-羟基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-基]-2-甲基-3-氧代丙酸叔丁酯(6.00g，粗)，为黄色固体。
步骤2
在100mL圆底烧瓶中，将3-[2-环丙基-5-羟基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-基]-2-甲基-3-氧代丙酸叔丁酯(6.00g，13.97mmol，1.00当量)在TFA(50.00mL)中的溶液在60℃下搅拌3小时。将反应混合物真空浓缩，得到粗产物，将其通过快速色谱法直接纯化(PE:EA＝1:1)，得到6-环丙基-3-甲基-8-(3-硝基苯基)-3H-吡喃并[2,3-d]哒嗪-2,4,5-三酮(1.70g，34.27％)，为黄色固体。
步骤3
在0℃下向6-环丙基-4-羟基-3-甲基-8-(3-硝基苯基)吡喃并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(1.70g，4.79mmol，1.00当量)和TEA(1.33mL，9.57mmol，2.00当量)在DCM(20.00mL)中的溶液中滴加TsCl(1.09g，5.72mmol，1.20当量)在DCM(20.00mL)中的溶液。将混合物在25℃下搅拌16小时。通过添加100.00mL H2O处理反应混合物，并用EA(3x100.00mL)萃取。将合并的有机层用盐水(150.00mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩，得到粗产物，将其通过快速色谱法直接纯化(PE:EA＝3:1)，得到4-甲基苯磺酸6-环丙基-3-甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代吡喃并[2,3-d]哒嗪-4-基酯(1.70g，51.55％)，为黄色固体。
步骤4
在-78℃下向2-氟-4-碘苯胺(2.85g，12.01mmol，3.60当量)在THF(30.00mL)中的溶液中滴加LiHMDS(10.01mL，10.01mmol，3.00当量)，并在-78℃下搅拌0.5小时。然后在-78℃下将4-甲基苯磺酸6-环丙基-3-甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代吡喃并[2,3-d]哒嗪-4-基酯(1.70g，3.34mmol，1.00当量)在THF(30.00mL)中的溶液滴加到反应中，并在-78℃下搅拌0.5小时。通过添加饱和NH4Cl(150.00mL)处理反应混合物，并用EA(3x100.00mL)萃取。将合并的有机层用盐水(150.00mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩，得到粗产物，将其通过快速色谱法直接纯化(PE:EA＝5:1)，得到6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-3-甲基-8-(3-硝基苯基)吡喃并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(1.41g，73.58％)，为黄色固体。
步骤5
在25℃下向6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-3-甲基-8-(3-硝基苯基)吡喃并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(1.06g，1.85mmol，1.00当量)在AcOH(20.00mL)中的溶液中添加Fe(1.03g，18.5mmol，10.00当量)，并在50℃下搅拌12小时。将反应混合物在减压下浓缩。将残留物溶解在50.00mL饱和NaHCO3中，并用EA(3x50.00mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50.00mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩，得到6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-3-甲基-8-(3-硝基苯基)吡喃并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(0.78g，73.58％)，为黄色固体，其不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤6
在0℃下向8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-3-甲基吡喃并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(0.24g，0.44mmol，1.00当量)和吡啶(0.11g，1.32mmol，3.00当量)在DMF(1.50mL)中的溶液中滴加在CH3CN(1.50mL)中的N-甲基氨磺酰氯(0.09g，0.66mmol，1.50当量)。将所得混合物在0℃下搅拌0.5小时。通过添加20.00mL H2O处理反应混合物，并用EA(3x30.00mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50.00mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩，得到粗产物，将其通过制备型HPLC直接纯化(柱：Welch XtimateC18ExRS，250mm，10μm；流动相A：水(0.05％NH3.H2O)，流动相B：ACN；流速：90mL/min；梯度：10分钟内90％ B至90％ B，90％ B；波长：254nm；RT1(min):7；运行次数：5)，得到6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-3-甲基-8-{3-[(甲基氨磺酰基)氨基]苯基}吡喃并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(62mg，33.09％)，为黄色固体。LCMS：(ES，m/z)[M+H]+:638.1.1H NMR:(400MHz，DMSO-d6):δ7.72-7.71(m，1H)，7.63-7.60(m，1H)，7.57-7.50(m，2H)，7.46-7.42(m，1H)，7.35-7.32(m，1H)，6.92(t，J＝8.4Hz，1H)，4.20-4.16(m，1H)，2.62(s，3H)，1.65(s，3H)，1.25-1.23(m，2H)，1.11-1.06(m，2H)。
6-环丙基-3-氟-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-1-甲基-8-{3-[(甲基氨磺酰基)氨基]苯基}吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(I-128)的合成
步骤1
在室温下向2-环丙基-5-羟基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酸乙酯(3.5g，1.45mmol，1.0当量)在DCM(30mL)中的搅拌溶液中滴加(COCl)2(12.9g，14.48mmol，10当量)和DMF(0.7mL，1.30mmol，0.9当量)。将所得混合物在40℃下搅拌1h。在减压下移除溶剂和过量的草酰二氯。将残留物用DCM(50mL)和H2O(30mL)分层，用DCM(2*30mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩，得到5-氯-2-环丙基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酸乙酯(5.3g，粗)，为棕色油状物。ES-LCMSm/z 364.0[M+H]+
步骤2
在0℃下向5-氯-2-环丙基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酸乙酯(4g，11.00mmol，1.0当量)在DCM(40mL)中的搅拌溶液中滴加CH3NH2/THF(45mL，90.00mmol，8.18当量)。将所得混合物在室温下再搅拌4h。在减压下移除溶剂。将残留物在H2O(100mL)中稀释，并用DCM(3x100mL)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩，得到2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酸乙酯(5.06g，粗)，为棕黄色固体。ES-LCMS m/z 359.2[M+H]+
步骤3
在室温下向2-环丙基-5-(甲基氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酸乙酯(3.6g，10.05mmol，1.0当量)在ACN(36mL)中的搅拌溶液中分次添加3-氯-3-氧代丙酸乙酯(3.6mL)。将所得混合物在80℃下再搅拌2h。将反应混合物冷却，并通过倒入水/冰(150mL)中淬灭。将所得混合物用EtOAc(3x150mL)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/THF(5:1)洗脱，得到2-环丙基-5-(3-乙氧基-N-甲基-3-氧代丙酰氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酸乙酯(4.42g，93％)，为棕色固体。ES-LCMS m/z 473.2[M+H]+
步骤4
在0℃和空气气氛下向2-环丙基-5-(3-乙氧基-N-甲基-3-氧代丙酰氨基)-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酸乙酯(4.4g，9.31mmol，1.0当量)在MeOH(45mL)中的搅拌溶液中分次添加甲醇钠(1.0g，18.63mmol，2.0当量)。将所得混合物在0℃下再搅拌1h。将所得混合物浓缩，并用1N HCl(水溶液)酸化至pH 4，然后用EtOAc(3x50mL)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩，得到6-环丙基-1-甲基-8-(3-硝基苯基)-2,4,5-三氧代-3H-吡啶并[2,3-d]哒嗪-3-甲酸乙酯(3.7g，92％)，为棕色固体。ES-LCMS m/z 427.2[M+H]+
步骤5
在0℃和空气气氛下向6-环丙基-1-甲基-8-(3-硝基苯基)-2,4,5-三氧代-3H-吡啶并[2,3-d]哒嗪-3-甲酸乙酯(3.1g，6.16mmol，1.0当量)和乙酸钠(1.0g，12.31mmol，2.0当量)在ACN(35mL)中的搅拌溶液中添加Selectfluor(3.3g，9.23mmol，1.5当量)。将所得混合物在0℃下再搅拌3h。通过在0℃下添加水/冰(5mL)来淬灭反应，然后用EtOAc(3x10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩，得到6-环丙基-3-氟-1-甲基-8-(3-硝基苯基)-2,4,5-三氧代吡啶并[2,3-d]哒嗪-3-甲酸乙酯(2.4g，88％)，为黄色固体。ES-LCMS m/z 445.1[M+H]+。
步骤6
在室温和空气气氛下向6-环丙基-3-氟-1-甲基-8-(3-硝基苯基)-2,4,5-三氧代吡啶并[2,3-d]哒嗪-3-甲酸乙酯(2.4g，5.45mmol，1.0当量)在THF(25mL)中的搅拌溶液中滴加H2SO4(24mL)。将所得混合物在90℃下搅拌3h。然后移除THF，用水(10mL)稀释残留物，并用DCM(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/THF(5:1)洗脱，得到6-环丙基-3-氟-4-羟基-1-甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(1.1g，54％)，为黄色固体。ES-LCMS m/z 373.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ13.12(s，1H)，8.44-8.41(m，1H)，8.40-8.34(m，1H)，8.04-7.98(m，1H)，7.87-7.79(m，1H)，3.78-3.70(m，1H)，2.93(s，3H)，1.10-1.07(m，2H)，1.07-1.04(m，2H)。
步骤7
在0℃下向6-环丙基-3-氟-4-羟基-1-甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(1.1g，2.96mmol，1.0当量)和吡啶(0.7g，8.87mmol，3.0当量)在DCM(10mL)中的搅拌溶液中滴加在DCM(2mL)中的Tf2O(1.7g，5.91mmol，2.0当量)。将所得混合物在室温下搅拌0.5h。将混合物用水(10mL)稀释，并用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/THF(5:1)洗脱，得到三氟甲磺酸6-环丙基-3-氟-1-甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基酯(460mg，30％)，为黄色固体。ES-LCMS m/z 505.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.47(s，1H)，8.39-8.32(m，1H)，8.10-8.03(m，1H)，7.88-7.79(m，1H)，4.10-4.0(m，1H)，2.97(s，3H)，1.49-1.22(m，2H)，0.94-0.76(m，2H)。
步骤8
在0℃和氮气气氛下向2-氟-4-碘苯胺(648mg，2.74mmol，3.0当量)在THF(2mL)中的搅拌溶液中滴加LDA(在THF中2M)(1.82ml，3.65mmol，4.0当量)。将所得混合物在0℃和氮气气氛下搅拌30分钟。在0℃下向上述混合物中滴加在THF(3mL)中的三氟甲磺酸6-环丙基-3-氟-1-甲基-8-(3-硝基苯基)-2,5-二氧代吡啶并[2,3-d]哒嗪-4-基酯(460mg，0.91mmol，1.0当量)。将所得混合物在室温下再搅拌30分钟。通过LCMS监测反应。通过在0℃下添加水(20mL)来淬灭反应，用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EA(2:1)洗脱，得到6-环丙基-3-氟-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-1-甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(210mg，39％)，为白色固体。ES-LCMS m/z 592.0[M+H]+。
步骤9
在室温下向6-环丙基-3-氟-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-1-甲基-8-(3-硝基苯基)吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(240mg，0.40mmol，1.0当量)在AcOH(5mL)中的搅拌溶液中分次添加Fe(226mg，4.06mmol，10当量)。将所得混合物在60℃和氮气气氛下搅拌30分钟。通过LCMS监测反应。将所得混合物冷却到室温，用水(20mL)稀释，用饱和NaHCO3(水溶液)中和至pH 7，用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩。将残留物通过硅胶柱色谱法纯化，用PE/EA(1:1)洗脱，得到8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-3-氟-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-1-甲基吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(150mg，66％)，为白色固体。ES-LCMS m/z562.0[M+H]+。
步骤10
在0℃和氮气气氛下向8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-3-氟-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-1-甲基吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(150mg，0.27mmol，1.0当量)和Et3N(81mg，0.80mmol，3.0当量)在DCM(1.5mL)中的搅拌溶液中滴加在DCM(0.5mL)中的N-甲基氨磺酰氯(69mg，0.53mmol，2.0当量)。将所得混合物在室温下搅拌1h。通过LCMS监测反应。通过在0℃下添加水(20mL)来淬灭反应，用EtOAc(3x20mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥。过滤后，将滤液在减压下浓缩。采用以下条件(Complete Non-WJ SCHardware 50mm x 40cm，7μm，40-60％18min，NH3H2O+NH4HCO3/CAN，快速80mL/min)通过制备型HPLC纯化粗产物(200mg)，得到6-环丙基-3-氟-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-1-甲基-8-{3-[(甲基氨磺酰基)氨基]苯基}吡啶并[2,3-d]哒嗪-2,5-二酮(68.4mg，39％)，为白色固体。ES-LCMS m/z 655.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.92(d，J＝2.6Hz，1H)，9.87(s，1H)，7.76-7.68(m，1H)，7.59-7.52(m，1H)，7.46-7.35(m，2H)，7.30-7.22(m，2H)，7.20-7.13(m，1H)，7.06-6.96(m，1H)，4.03-3.93(m，1H)，2.93(s，3H)，2.47(d，J＝4.8Hz，3H)，1.06-0.99(m，4H)。
6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-{3-[(甲基氨磺酰基)氨基]苯基}哒嗪并[4,5-e][1,3]噁嗪-2,5-二酮(I-127)的合成
步骤1
将2-环丙基-5-羟基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酸甲酯(5g，15.093mmol，1当量)和NH3*H2O(10mL，256.805mmol，17.12当量)在1,4-二噁烷(40mL)中的混合物在80℃下搅拌2h。将所得混合物在减压下浓缩，并通过与乙醚(30mL)一起研磨来纯化。这产生2-环丙基-5-羟基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酰胺(4.6g，96.37％)，为浅棕色固体。
步骤2
将2-环丙基-5-羟基-6-(3-硝基苯基)-3-氧代哒嗪-4-甲酰胺(4.6g，14.544mmol，1当量)和CDI(3.54g，21.816mmol，1.5当量)在DMF中的混合物在室温下搅拌过夜。通过过滤收集沉淀的固体，并用MeOH(3x20mL)洗涤。这产生6-环丙基-4-羟基-8-(3-硝基苯基)哒嗪并[4,5-e][1,3]噁嗪-2,5-二酮(4.2g，84.37％)，为黄色固体。
步骤3
将6-环丙基-4-羟基-8-(3-硝基苯基)哒嗪并[4,5-e][1,3]噁嗪-2,5-二酮(4.2g，12.271mmol，1当量)和PCl5(5.11g，24.542mmol，2当量)在DCE中的混合物在80℃和氮气气氛下搅拌2h。在减压下移除溶剂，得到4-氯-6-环丙基-8-(3-硝基苯基)哒嗪并[4,5-e][1,3]噁嗪-2,5-二酮(6g，粗)，为黄色固体。粗产物不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤4
将2-氟-4-碘苯胺(5.91g，24.951mmol，1.5当量)和4-氯-6-环丙基-8-(3-硝基苯基)哒嗪并[4,5-e][1,3]噁嗪-2,5-二酮(6g，16.634mmol，1当量)在乙腈中的混合物在室温和氮气气氛下搅拌2h。通过过滤收集沉淀的固体，并用ACN(3x10mL)洗涤。通过与MeOH(20mL)一起研磨来纯化收集的固体。这产生6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-(3-硝基苯基)哒嗪并[4,5-e][1,3]噁嗪-2,5-二酮(3.8g，55.15％)，为黄色固体。
步骤5
将6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-(3-硝基苯基)哒嗪并[4,5-e][1,3]噁嗪-2,5-二酮(250mg，0.445mmol，1当量)和SnCl2(2.54g，13.230mmol，29.73当量)在DMF(10mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将所得溶液用EtOAc(50mL)稀释，并用3x20mL的水洗涤。将有机层经无水Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。这产生8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]哒嗪并[4,5-e][1,3]噁嗪-2,5-二酮(280mg，粗)，为黄绿色固体。
步骤6
在0℃下向8-(3-氨基苯基)-6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]哒嗪并[4,5-e][1,3]噁嗪-2,5-二酮(280mg，0.527mmol，1当量)和吡啶(125.06mg，1.581mmol，3当量)在DMF(2.8mL)中的搅拌溶液中滴加在ACN(1mL)中的N-甲基氨磺酰氯(102.42mg，0.790mmol，1.5当量)。将所得混合物在室温下搅拌30分钟，然后用EtOAc(2*20mL)稀释。将合并的有机相用3x20mL的水洗涤并真空浓缩。将残留物通过制备型HPLC纯化(柱：Welch Ultimate XB-C18，50*250mm，10μm；流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：ACN；流速：90mL/min；梯度：12分钟内30％ B至65％ B，9分钟内65％ B；波长：254nm)，得到6-环丙基-4-[(2-氟-4-碘苯基)氨基]-8-{3-[(甲基氨磺酰基)氨基]苯基}哒嗪并[4,5-e][1,3]噁嗪-2,5-二酮(66.9mg，20.33％)，为灰白色固体。LCMS：(ES，m/z)[M+H]+:625.1.1H NMR:(300MHz，DMSO-d6)δ12.02(br，s，1H)，9.93(br，s，1H)，8.29-8.18(m，1H)，7.92-7.82(m，1H)，7.76-7.67(m，1H)，7.58(s，1H)，7.50-7.42(m，2H)，7.41-7.28(m，2H)，4.24-4.13(m，1H)，2.50(s，3H)，1.19-1.05(m，4H)。
虽然描述了本发明的多种实施方案，但显然可以改变基础实施例以提供利用本发明的化合物和方法的其它实施方案。因此，将要了解的是，本发明的范围由本申请和所附权利要求限定，而不是由借助于实施例给出的具体实施方案限定。

Claims (26)

1.一种式I’的化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
环A选自：
每个独立地代表单键或双键；
每个R1独立地为H、卤素、-CN或任选取代的C1-6脂族基；
X是C、CH或N；
Y是CR6、C(O)或N；
L’是共价键、-O-、-C(R9)2-或-NR8-；
R2、R5和R8中的每一者独立地为H或任选取代的C1-6脂族基；
R3、R4、R6和R9中的每一者独立地为H、卤素或任选取代的C1-6脂族基；
环B是选自以下的任选取代的环：3-8元单环碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-8元单环杂环状环；5-11元双环碳环状环；具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的5-11元双环杂环状环；苯基环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元单环杂芳族环；8-11元双环芳族环；和具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的8-11元双环杂芳族环；
L是共价键或C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-S-、-N(R)-、-N+(R)2-、-CH(R)-、-CH(OR)-、-CH(SR)-、–CH(N(R)2)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-(CH2-CH2-O)1-10-、-S(O)-、-N(R)-C(O)-、-N(R)-S(O)2-、-C(O)-N(R)-、-S(O)2-N(R)-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换；
每个-Cy-独立地为选自以下的任选取代的环：3-7元碳环状环；具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的3-7元杂环状环；苯基环；和具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的5-6元杂芳族环；
R7是R、-CN、-S(O)2-N(R)2、-NR-S(O)2-R、-P(O)(OR)-N(R)2、-C(＝N-R)-N(R)2、-C(＝N-OR)-N(R)2、-C(O)-R、-S(O)-R、-N(R)2、-OR、-SR或
每个R独立地为H、-CN或任选取代的C1-6脂族基；且
n是0、1、2、3、4或5。
2.如权利要求1所述的化合物，其中环A是
3.如权利要求1所述的化合物，其中环A是
4.如权利要求1所述的化合物，其中环A是
5.如权利要求1所述的化合物，其中环A是
6.如权利要求1-5中任一项所述的化合物，其中每个R1独立地为卤素。
7.如权利要求1-6中任一项所述的化合物，其中R2是H。
8.如权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中R3是任选取代的C1-6烷基。
9.如权利要求1-8中任一项所述的化合物，其中R4是任选取代的C1-6烷基。
10.如权利要求1-9中任一项所述的化合物，其中R5是任选取代的3、4、5或6元饱和或不饱和碳环基。
11.如权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R6是任选取代的C1-6烷基。
12.如权利要求1-11中任一项所述的化合物，其中环B是任选取代的苯基环。
13.如权利要求1-11中任一项所述的化合物，其中环B是具有1-3个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的5-6元杂芳族环。
14.如权利要求1-11中任一项所述的化合物，其中环B是具有1-5个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的8-10元双环杂芳族环。
15.如权利要求1-14中任一项所述的化合物，其中L是C1-10二价直链或支链烃链，其中所述链的1、2或3个亚甲基单元独立且任选被-O-、-N(R)-、-CH(R)-、-C(＝N-R)-、-C(＝N-OR)-、-C(O)-、-S(O)2-、-P(O)(OR)-或-Cy-置换。
16.如权利要求1-15中任一项所述的化合物，其中-Cy-是具有1、2或3个独立地选自N、O或S的杂原子的任选取代的3、4、5、6或7元杂环状环。
17.如权利要求1-16中任一项所述的化合物，其中R7是-CN、-S(O)2-N(R)2、-NR-S(O)2-R、-P(O)(OR)-N(R)2、-C(＝N-R)-N(R)2、-C(＝N-OR)-N(R)2、-OR或
18.如权利要求1-17中任一项所述的化合物，其中n是2。
19.如权利要求1-18中任一项所述的化合物，其中所述化合物是式(II)、(III)或(IV)的化合物：
或其药学上可接受的盐。
20.如权利要求1-19中任一项所述的化合物，其中所述化合物是选自式(II-a)至(II-o)、(III-a)至(III-e)和(IV-a)至(IV-e)的化合物：
或其药学上可接受的盐。
21.如权利要求1-20中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自表1中的化合物。
22.一种药物组合物，其包含权利要求1-21中任一项的化合物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的载体、佐剂或媒介物。
23.一种治疗由MEK介导的病症的方法，包括对有需要的受试者施用治疗有效量的权利要求1-21中任一项的化合物或权利要求22的药物组合物以治疗所述病症。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述病症是癌症。
25.一种治疗患者的癌症的方法，包括对所述患者施用权利要求1-21中任一项的化合物或其药学上可接受的盐或权利要求22的药物组合物。
26.一种抑制MEK活性的方法，包括使MEK或KSR-MEK复合物或RAF-MEK复合物与有效量的权利要求1-21中任一项的化合物或权利要求22的药物组合物接触以抑制MEK活性。
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