CN117007712A - 一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法 - Google Patents
一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117007712A CN117007712A CN202310976981.2A CN202310976981A CN117007712A CN 117007712 A CN117007712 A CN 117007712A CN 202310976981 A CN202310976981 A CN 202310976981A CN 117007712 A CN117007712 A CN 117007712A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aflatoxin
- decoction pieces
- stiff silkworm
- stir
- fried
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 title claims abstract description 59
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 title claims abstract description 59
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 title claims abstract description 53
- XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N Aflatoxin G Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1C1C=COC1O2 XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 30
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 27
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 24
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 15
- NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N methanol;propan-2-one Chemical compound OC.CC(C)=O NIQQIJXGUZVEBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 39
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 13
- 238000005185 salting out Methods 0.000 claims description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000002115 aflatoxin B1 Substances 0.000 claims description 12
- OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N aflatoxin B1 Chemical compound C=1([C@@H]2C=CO[C@@H]2OC=1C=C(C1=2)OC)C=2OC(=O)C2=C1CCC2=O OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N 0.000 claims description 12
- 229930020125 aflatoxin-B1 Natural products 0.000 claims description 12
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 12
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 11
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 10
- 229930132918 Aflatoxin B2 Natural products 0.000 claims description 9
- 239000002097 aflatoxin B2 Substances 0.000 claims description 9
- WWSYXEZEXMQWHT-WNWIJWBNSA-N aflatoxin B2 Chemical compound C=1([C@@H]2CCO[C@@H]2OC=1C=C(C1=2)OC)C=2OC(=O)C2=C1CCC2=O WWSYXEZEXMQWHT-WNWIJWBNSA-N 0.000 claims description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 claims description 9
- 229930063498 Aflatoxin G1 Natural products 0.000 claims description 8
- XWIYFDMXXLINPU-WNWIJWBNSA-N Aflatoxin G1 Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1[C@@H]1C=CO[C@@H]1O2 XWIYFDMXXLINPU-WNWIJWBNSA-N 0.000 claims description 8
- 229930166256 Aflatoxin G2 Natural products 0.000 claims description 8
- WPCVRWVBBXIRMA-WNWIJWBNSA-N Aflatoxin G2 Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1[C@@H]1CCO[C@@H]1O2 WPCVRWVBBXIRMA-WNWIJWBNSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002098 aflatoxin G1 Substances 0.000 claims description 8
- 239000002100 aflatoxin G2 Substances 0.000 claims description 8
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 7
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 claims description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 claims description 3
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 9
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 abstract description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 4
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 abstract description 3
- 238000001868 liquid chromatography-fluorescence detection Methods 0.000 abstract description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 2
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 241000228197 Aspergillus flavus Species 0.000 description 1
- 206010007269 Carcinogenicity Diseases 0.000 description 1
- 208000005171 Dysmenorrhea Diseases 0.000 description 1
- 206010013935 Dysmenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 208000037093 Menstruation Disturbances Diseases 0.000 description 1
- 206010027339 Menstruation irregular Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000007670 carcinogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000260 carcinogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N ferrosoferric oxide Chemical compound O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000007886 mutagenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000299 mutagenicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 238000000643 oven drying Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/08—Preparation using an enricher
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/74—Optical detectors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
- G01N30/14—Preparation by elimination of some components
- G01N2030/146—Preparation by elimination of some components using membranes
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，主要是通过对粉碎后的炒僵蚕饮片经甲醇‑丙酮混合溶剂超声提取，然后用硫酸镁和氯化钠盐析净化等步骤，实现炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素快速的富集净化，避免了传统样品前处理方法使用亲和柱净化、繁琐耗时、消耗大量有机溶剂、分析成本高的缺点。并且前处理方法结合高效液相色谱‑荧光检测，实现了对黄曲霉毒素的快速分离和检测，建立了炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素快速、有效和灵敏的分析方法，检测灵敏度和准确性高。
Description
技术领域
本发明涉及一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，属于中药饮片质量检测领域。
背景技术
僵蚕是一种中药材，具有补气益血、止血化瘀、消肿止痛等功效，常用于治疗贫血、月经不调、瘀血痛经、跌打损伤等症。僵蚕在采收、加工、贮藏过程中，容易受到黄曲霉的污染，产生黄曲霉毒素。黄曲霉毒素是一类具有强致癌性和致突变性的真菌毒素，主要有黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2四种，其中黄曲霉毒素B1的毒性最强。黄曲霉毒素对人体健康和动物生产造成严重危害，已被世界卫生组织和欧盟等制定了严格的限量标准。
为了保证僵蚕饮片的质量安全，需要对其进行黄曲霉毒素的检测。目前已有多种方法用于检测中药中的黄曲霉毒素，如：
专利CN106053662A公开了一种用于测量中药中黄曲霉素B1含量的方法。该方法包括：将中药溶液的pH调节至2-5，加入磁性纳米颗粒，均匀混合，在外部磁场下使混合溶液分层，去除上清液，将下层沉淀物加入体积比2:1的二氯甲烷和丙酮混合液中；搅拌解吸附，在外加磁场作用下分层，收集上层清液进行HPLC检测。但该方法操作复杂，不利于黄曲霉素的快速检测。
专利CN106770806A公开了一种同时测定中成药中黄曲霉素B1，B2含量的方法；其采用正硅酸乙酯-3-氨基丙基三乙氧基硅烷修饰四氧化三铁磁性纳米颗粒作为磁性固相萃取的吸附剂，首次将其使用于黄曲霉毒素B1，B2的富集中，具有操作简便、成本低、准确度高等特点。
专利CN105823844A公开了一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其包括粉碎、酸浸、清洗、提取、高效液相色谱检测步骤。重点在于将中药粉末置于质量浓度为1.7％的乙酸中浸润2小时，然后用乙腈提取进行HPLC检测。该方法检测黄曲霉素效率高，但是样品处理时间过长。
专利CN108693273A公开了一种中药中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检测方法，去除大部分的水溶性杂质，降低这部分杂质对免疫亲和柱的干扰，促进提取液中杂质成分的溶解，降低其在免疫亲和柱上的吸附，从而提高免疫亲和柱的纯化效果，降低杂质干扰。
专利CN103896959A公开了糟醅中黄曲霉毒素B1的提取方法，其包括如下步骤：称取烘干的糟醅，过筛，加入甲醇水溶液、二氯甲烷或丙酮超声波震荡后过滤，取滤液备用，用二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮萃取滤液，收集二氯甲烷、乙酸乙酯或丙酮层并烘干即可。
以上各种方法各有优缺点，在实际应用中需要根据不同的需求和条件进行选择。然而目前还没有一种方法能够同时满足快速、简便、灵敏、准确、低成本等要求。因此开发一种适用于炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法是迫切需要解决的问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服传统样品前处理方法繁琐耗时、消耗大量有机溶剂、分析成本高的缺点，提供一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法。本发明的方法能够同时满足快速、简便、灵敏、准确、低成本等要求。
为实现上述目的，本发明提出以下技术方案：
一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包括以下步骤：
(1)样品前处理：
1)提取：称取固体样品炒僵蚕饮片，干燥后粉碎并过300目筛，得炒僵蚕饮片粉末；在炒僵蚕饮片粉末中加入相当于样品质量4-6倍的甲醇-丙酮混合溶剂，剧烈振5min-30min，以100W-500W的超声功率超声提取10-30min，制得提取液；其中，甲醇-丙酮混合溶剂中甲醇与丙酮体积比为1:(1-5)；
2)净化：将步骤1)制得的提取液中加入相当于步骤1)中样品质量0.4％-0.8％的盐析剂硫酸镁和氯化钠，以1000r/min-2000r/min的转速混合搅拌1min-10min，然后以1000r/min-4000r/min的转速离心5min-15min，经0.25μm孔径的滤膜过滤，所得滤液即为炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的待测液；
(2)样品测定：
1)将步骤(1)所得的炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的待测液用高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)进行检测分析；所述HPLC-FLD的检测条件为：液相色谱采用WatersAlliance2695高效液相色谱系统，分析柱为Insert ODS-3柱(250×4.6mm，5μm)；流动相采用体积比为4:5的乙腈与水的混合溶液，流速：0.8-1.2mL/min；柱温：20℃-40℃；所述荧光检测器：发射波长440nm，激发波长360nm；
2)称取黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准品，用甲醇配制成混合标准品溶液，取不同量的混合标准品溶液，在与步骤1)相同的高效液相色谱检测条件下进行检测；以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，回归系数的平方(R2)和线性范围；
3)根据步骤1)待测液的高效液相色谱图中的出峰时间确定黄曲霉毒素的具体类别，并将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2相应吸收峰的峰面积数值代入步骤2)建立的线性回归方程中，计算得到待测液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量，进而推算出待测炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。
所述的炒僵蚕饮片中待测黄曲霉毒素包括黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2。
优选的，上述步骤(1)中超声提取条件为400W，时间为15-20min。
优选的，上述步骤(1)中甲醇-丙酮混合溶剂中甲醇与丙酮体积比为1:(1-3)。
更优选的，上述步骤(1)中甲醇-丙酮混合溶剂中甲醇与丙酮体积比为1:2。
优选的，上述步骤(1)中盐析剂为硫酸镁和氯化钠按照质量比1:(1-4)混合成的混合物。
更优选的，上述步骤(1)中盐析剂为硫酸镁和氯化钠按照质量比1:2混合成的混合物。
本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：
(1)本发明通过对粉碎后的炒僵蚕饮片经甲醇-丙酮混合溶剂超声提取，然后用硫酸镁和氯化钠盐析净化等步骤，实现炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素快速的富集净化，净化效果好，避免了传统样品前处理方法使用亲和柱净化、繁琐耗时、消耗大量有机溶剂、分析成本高的缺点。
(2)本发明所述的前处理方法结合高效液相色谱-荧光检测，实现了对黄曲霉毒素的快速分离和检测，建立了炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素快速、有效和灵敏的分析方法，检测灵敏度和准确性高。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所举实施例是为了更好地对本发明的内容进行说明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。
下面实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售产品。
实施例1：一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包括以下步骤：
(1)样品前处理：
1)提取：称取1.0g待测炒僵蚕饮片样品，干燥后粉碎并过300目筛，得炒僵蚕饮片粉末；在炒僵蚕饮片粉末中加入6mL的体积比为1:2的甲醇-丙酮混合溶剂，剧烈振8min，以400W的超声功率超声提取18min，制得提取液；
2)净化：将步骤1)制得的提取液中加入0.6g质量比为1:2的盐析剂硫酸镁和氯化钠，以1500r/min的转速混合搅拌5min，然后以3000r/min的转速离心8min，经0.25μm孔径的滤膜过滤，所得滤液即为炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的待测液；
(2)样品测定：
1)将步骤(1)所得的炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的待测液用高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)进行检测分析；所述HPLC-FLD的检测条件为：液相色谱采用WatersAlliance2695高效液相色谱系统，分析柱为Insert ODS-3柱(250×4.6mm，5μm)；流动相采用体积比为4:5的乙腈与水的混合溶液，流速：0.8mL/min；柱温：30℃；所述荧光检测器：发射波长440nm，激发波长360nm；
2)称取黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准品，用70％甲醇稀释得浓度分别为0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、3.0μg/ml的混合标准品溶液，取不同量的混合标准品溶液，在与步骤(2)1)相同的高效液相色谱检测条件下进行检测；以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，回归系数的平方(R2)和线性范围；结果见表1；
表1：黄曲霉毒素标准曲线的线性回归方程、回归系数的平方(R2)和线性范围
3)根据步骤1)待测液的高效液相色谱图中的出峰时间确定黄曲霉毒素的具体类别，并将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2相应吸收峰的峰面积数值代入步骤2)建立的线性回归方程中，计算得到待测液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量，进而推算出待测炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。
实施例2：考察本发明前处理方法的重复性和定量准确性：
(1)样品前处理：
1)提取：称取3份1.0g不含黄曲霉毒素的空白炒僵蚕饮片，分别干燥后粉碎并过300目筛，对空白炒僵蚕饮片进行高中低三个浓度水平(0.5,2.5,5ng/g)的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2加标处理，分别加入6mL的体积比为1:2的甲醇-丙酮混合溶剂，剧烈振8min，以400W的超声功率超声提取28min，制得提取液；
2)净化：将步骤1)制得的提取液中分别加入0.6g质量比为1:2的盐析剂硫酸镁和氯化钠，以1500r/min的转速混合搅拌5min，然后以3000r/min的转速离心8min，经0.25μm孔径的滤膜过滤，所得滤液即为待测液；
(2)样品测定：
1)将步骤(1)所得的待测液用高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)在与实施例1相同的高效液相色谱检测条件下分离检测黄曲霉毒素；
每个加标含量的样品做3次平行测量取平均值，根据实际加入量和实测结果，计算该样品的加标回收率。结果见表2。
表2：空白炒僵蚕饮片加标回收率
由表2可知，样品的加标回收率在92-97％之间。证明本发明采用的前处理方法具有很好的重复性和定量准确性。
对比例1：与实施例2的区别在于：前处理中提取步骤采用甲醇水溶液作为提取溶剂
(1)样品前处理：
1)提取：称取3份1.0g不含黄曲霉毒素的空白炒僵蚕饮片，分别干燥后粉碎并过300目筛，对空白炒僵蚕饮片进行高中低三个浓度水平(0.5,2.5,5ng/g)的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2加标处理，分别加入6mL的体积比为1:2的甲醇水溶液，剧烈振8min，以400W的超声功率超声提取28min，制得提取液；
2)净化：将步骤1)制得的提取液中分别加入0.6g质量比为1:2的盐析剂硫酸镁和氯化钠，以1500r/min的转速混合搅拌5min，然后以3000r/min的转速离心8min，经0.25μm孔径的滤膜过滤，所得滤液即为待测液；
(2)样品测定：
1)将步骤(1)所得的待测液用高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)在与实施例1相同的高效液相色谱检测条件下分离检测黄曲霉毒素；
每个加标含量的样品做3次平行测量取平均值，根据实际加入量和实测结果，计算该样品的加标回收率。结果见表3。
表3：空白炒僵蚕饮片加标回收率
由表3可知，样品的加标回收率在82-87％之间，明显低于实施例2的加标回收率。表明前处理步骤中采用甲醇水溶液作为提取溶剂的提取效果远差于采用甲醇-丙酮混合溶剂作为提取溶剂的提取效果。
对比例2：与实施例2的区别在于：前处理中净化步骤采用硫酸钠和氯化钠的混合物作为盐析剂
(1)样品前处理：
1)提取：称取3份1.0g不含黄曲霉毒素的空白炒僵蚕饮片，分别干燥后粉碎并过300目筛，对空白炒僵蚕饮片进行高中低三个浓度水平(0.5,2.5,5ng/g)的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2加标处理，分别加入6mL的体积比为1:2的甲醇-丙酮混合溶剂，剧烈振8min，以400W的超声功率超声提取28min，制得提取液；
2)净化：将步骤1)制得的提取液中分别加入0.6g质量比为1:2的盐析剂硫酸钠和氯化钠，以1500r/min的转速混合搅拌5min，然后以3000r/min的转速离心8min，经0.25μm孔径的滤膜过滤，所得滤液即为待测液；
(2)样品测定：
1)将步骤(1)所得的待测液用高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)在与实施例1相同的高效液相色谱检测条件下分离检测黄曲霉毒素；
每个加标含量的样品做3次平行测量取平均值，根据实际加入量和实测结果，计算该样品的加标回收率。结果见表4。
表4：空白炒僵蚕饮片加标回收率
由表4可知，样品的加标回收率在81-85％之间，明显低于实施例2的加标回收率。表明前处理步骤中采用盐析剂硫酸钠和氯化钠的净化效果远差于采用盐析剂硫酸镁和氯化钠的净化效果。
显然，上述实施例仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (7)
1.一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)样品前处理：
1)提取：称取固体样品炒僵蚕饮片，干燥后粉碎并过300目筛，得炒僵蚕饮片粉末；在炒僵蚕饮片粉末中加入相当于样品质量4-6倍的甲醇-丙酮混合溶剂，剧烈振5min-30min，以100W-500W的超声功率超声提取10-30min，制得提取液；其中，甲醇-丙酮混合溶剂中甲醇与丙酮体积比为1:(1-5)；
2)净化：将步骤1)制得的提取液中加入相当于步骤1)中样品质量0.4％-0.8％的盐析剂硫酸镁和氯化钠，以1000r/min-2000r/min的转速混合搅拌1min-10min，然后以1000r/min-4000r/min的转速离心5min-15min，经0.25μm孔径的滤膜过滤，所得滤液即为炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的待测液；
(2)样品测定：
1)将步骤(1)所得的炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的待测液用高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)进行检测分析；所述HPLC-FLD的检测条件为：液相色谱采用WatersAlliance2695高效液相色谱系统，分析柱为Insert ODS-3柱(250×4.6mm，5μm)；流动相采用体积比为4:5的乙腈与水的混合溶液，流速：0.8-1.2mL/min；柱温：20℃-40℃；所述荧光检测器：发射波长440nm，激发波长360nm；
2)称取黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2标准品，用甲醇配制成混合标准品溶液，取不同量的混合标准品溶液，在与步骤1)相同的高效液相色谱检测条件下进行检测；以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程，回归系数的平方(R2)和线性范围；
3)根据步骤1)待测液的高效液相色谱图中的出峰时间确定黄曲霉毒素的具体类别，并将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2相应吸收峰的峰面积数值代入步骤2)建立的线性回归方程中，计算得到待测液中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量，进而推算出待测炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的含量。
2.根据权利要求1所述的炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，所述的炒僵蚕饮片中待测黄曲霉毒素包括黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2。
3.根据权利要求1所述的炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中超声提取条件为400W，时间为15-20min。
4.根据权利要求1所述的炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中甲醇-丙酮混合溶剂中甲醇与丙酮体积比为1:(1-3)。
5.根据权利要求1所述的炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中甲醇-丙酮混合溶剂中甲醇与丙酮体积比为1:2。
6.根据权利要求1所述的炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中盐析剂为硫酸镁和氯化钠按照质量比1:(1-4)混合成的混合物。
7.根据权利要求1所述的炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中盐析剂为硫酸镁和氯化钠按照质量比1:2混合成的混合物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310976981.2A CN117007712B (zh) | 2023-08-04 | 2023-08-04 | 一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310976981.2A CN117007712B (zh) | 2023-08-04 | 2023-08-04 | 一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117007712A true CN117007712A (zh) | 2023-11-07 |
| CN117007712B CN117007712B (zh) | 2024-03-26 |
Family
ID=88570650
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310976981.2A Active CN117007712B (zh) | 2023-08-04 | 2023-08-04 | 一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117007712B (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105784860A (zh) * | 2016-03-03 | 2016-07-20 | 江南大学 | 一种白酒生产过程中固体样品的黄曲霉毒素的检测方法 |
| CN110174471A (zh) * | 2019-05-13 | 2019-08-27 | 山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | 花生油中黄曲霉毒素的前处理方法及检测方法 |
| CN111500546A (zh) * | 2020-05-07 | 2020-08-07 | 上海中药制药技术有限公司 | 分泌抗黄曲霉毒素四种亚型抗体的细胞株及其分泌的抗体和一种免疫层析检测卡 |
| CN112285222A (zh) * | 2020-09-24 | 2021-01-29 | 北京金崇光药业有限公司 | 百药煎中药饮片的检测方法 |
| CN114342882A (zh) * | 2022-01-20 | 2022-04-15 | 南京农业大学 | 一种提高地鳖内在品质的方法 |
-
2023
- 2023-08-04 CN CN202310976981.2A patent/CN117007712B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105784860A (zh) * | 2016-03-03 | 2016-07-20 | 江南大学 | 一种白酒生产过程中固体样品的黄曲霉毒素的检测方法 |
| CN110174471A (zh) * | 2019-05-13 | 2019-08-27 | 山东省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 | 花生油中黄曲霉毒素的前处理方法及检测方法 |
| CN111500546A (zh) * | 2020-05-07 | 2020-08-07 | 上海中药制药技术有限公司 | 分泌抗黄曲霉毒素四种亚型抗体的细胞株及其分泌的抗体和一种免疫层析检测卡 |
| CN112285222A (zh) * | 2020-09-24 | 2021-01-29 | 北京金崇光药业有限公司 | 百药煎中药饮片的检测方法 |
| CN114342882A (zh) * | 2022-01-20 | 2022-04-15 | 南京农业大学 | 一种提高地鳖内在品质的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| CHOOCHUAY S 等: "Determination of aflatoxin B1 in feedstuffs without clean-up step by high-performance liquid chromatography", INTERNATIONAL JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY, vol. 1, pages 392 - 9 * |
| 韦芳 等: "中药材等复杂基质中真菌毒素检测的前处理技术研究新进展", 中国中药杂志, vol. 43, no. 17, pages 3431 - 3443 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN117007712B (zh) | 2024-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111366652A (zh) | 一种超高效液相色谱-串联质谱法测定茶叶中16种真菌毒素的方法 | |
| CN110108821B (zh) | 一种分散固相萃取材料及其制备方法与应用 | |
| CN112730697A (zh) | 一种利用hplc-ms/ms同时检测5种大麻酚化合物的方法 | |
| CN113419022A (zh) | 固相萃取-液相色谱-串联质谱联用测定植物源性食品中双胍辛胺残留量的方法 | |
| CN114088680B (zh) | 一种染发样品中痕量毒品的快速检测方法 | |
| CN109633028B (zh) | 一种特殊医学用途配方食品中香料添加剂的检测方法 | |
| CN117007712B (zh) | 一种炒僵蚕饮片中黄曲霉毒素的检测方法 | |
| CN108434783B (zh) | 固相萃取柱和固相萃取柱填料的制作方法及利用该固相萃取柱检测黄曲霉毒素的方法 | |
| CN107179367B (zh) | 一种用于毒素检测的固相萃取串联柱及制备方法 | |
| CN109900825A (zh) | 玉米在散粮集装箱运输过程中产生的霉菌毒素的分离检测方法 | |
| CN114280206B (zh) | 香辛料及其制品中真菌毒素的检测方法 | |
| Rahimi et al. | Use of functionalized nanoporous silica for the microextraction by packed sorbent of ellagic acid from fruit juice | |
| CN112946153B (zh) | 一种同时测定塑料桶装植物油中多种污染物的方法 | |
| CN113049324A (zh) | 一种适用于水产品麻醉剂或兽药的前处理方法 | |
| Venkatesh et al. | Enrichment and flame atomic absorption spectrometric determination of palladium using chelating matrices designed by functionalizing Amberlite XAD-2/16 and silica gel | |
| CN113624904B (zh) | 姜竹茹中药配方颗粒中生姜的鉴别方法 | |
| RU2287156C1 (ru) | Способ определения палладия | |
| CN114839283B (zh) | 一种降尿酸功能性食品中21种非法添加药物的检测方法 | |
| CN113311075B (zh) | 一种基于溶剂置换优化的QuEChERS法茶叶中农药残留的检测方法 | |
| RU2287157C1 (ru) | Способ определения серебра | |
| CN113092442B (zh) | 一种快速检测组胺的方法 | |
| CN115718157A (zh) | 改进QuEChERS-UPLC-MS/MS测定食药两用物质中15种真菌毒素的方法 | |
| RU2279060C1 (ru) | Способ определения золота | |
| CN117517537A (zh) | 一种基于消除基质效应检测百草油中马兜铃酸的方法 | |
| CN115200968A (zh) | 一种从藻华水体中提纯多种蓝藻毒素的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |