CN116999552B - 一种含有金诺芬和多硫化合物的组合物及其应用 - Google Patents

一种含有金诺芬和多硫化合物的组合物及其应用

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Abstract

本发明公开了一种含有金诺芬和多硫化合物的组合物及其应用，属于生物医药技术领域，所述的组合物包括金诺芬和多硫化合物。本发明通过联合使用金诺芬和多硫化合物，解决了金诺芬在正常生理条件下不能高效抑制癌细胞增殖的缺陷。在联合多硫化合物时，金诺芬可以很好地抑制肿瘤的生长，表明金诺芬和多硫化合物联用可作为抗癌药物组合进行应用。而且还可以通过调节多硫化合物的种类，进而调节金诺芬在肿瘤组织的吸收，从而在体内抗癌上具有较好的选择性，所述的组合物具有良好的稳定性，不易被空气氧化，通过口服(灌胃给药)方式该药物组合亦可达到抗癌效果，而不仅仅局限在腹腔或者静脉注射方式，同时该药物组合还具有良好的抗菌作用。

Description

一种含有金诺芬和多硫化合物的组合物及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种含有金诺芬和多硫化合物的组合物及其应用。
背景技术
金诺芬为一种口服抗风湿药，主要用于治疗活动性类风湿性关节炎。早期研究表明，对于以腹腔注射(i.p.)接种了急性淋巴白血病细胞P388的小鼠，金诺芬只有以i.p.给药才有效，其他的给药方式(例如静脉注射、皮下注射或口服给药)均无效；对于以其他方式接种了急性淋巴白血病细胞P388的小鼠，金诺芬无论以何种方式给药均无效。后续研究表明，在几种实体瘤模型(骨肉瘤、黑色素瘤、肺癌、结肠癌和乳腺癌)中，金诺芬既不能延长老鼠寿命，也不能抑制肿瘤生长。近年来，也有少许文献报道单用金诺芬具有抗癌活性，然而所使用的剂量很高(接近致死量)。
在体内应用中，单用金诺芬或者通过简单的药理联用技术，由于金诺芬自身容易与血液中的人血清白蛋白结合，导致其药理活性在很大程度上被减弱。因此，进一步开发可以增强金诺芬抗癌活性的药物组合，对于抗癌药物的研发具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种含有金诺芬和多硫化合物的组合物及其应用，所述的组合物能够有效的抑制癌细胞的增殖，抑制肿瘤的生长，同时具有良好的抗菌作用。
为此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种组合物，所述组合物包括金诺芬和多硫化合物。
现有技术中(CN112691196A)公开了一种含有金诺芬和巯基化合物的抗癌组合物及其应用，其进一步公开了所述的巯基化合物可以有效地抑制体内金诺芬与血液蛋白中的巯基结合，以此增强金诺芬的细胞摄取，进而调控金诺芬的体内抗癌活性，但发明人发现，所述的巯基化合物易于被空气氧化，稳定性存在不足，且只能够以腹腔或者静脉注射方式进行给药，限制了其应用。
发明人在大量的化合物中进行摸索，偶然的发现，金诺芬与多硫化合物联用，竟显示出极强的肿瘤抑制效果。在安全剂量条件下，单独给药金诺芬或多硫化合物时，肿瘤的抑制效果很差；但当二者联用时，可以显著地抑制肿瘤的生长，多硫化合物可以显著增强金诺芬的抗肿瘤效果。
发明人进一步探究其机理，发现由于金诺芬在进入人体后会迅速与人血清白蛋白(human serum albumin，HSA)结合，使金离子的有效摄取量降低，降低了金诺芬的细胞毒性，使其无法发挥有效的癌症抑制效果。本发明中的组合物中含有多硫化合物，可以抑制体内金诺芬与血液蛋白中的巯基结合，以此增强金诺芬的细胞摄取，进而调控金诺芬的体内抗癌活性。
利用金诺芬的配体交换性质以及与巯基的高亲和性质，通过加入特定的多硫化合物，可以恢复金诺芬的体内抗癌活性，使组合物具备更高的抗癌活性。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物包括结构式如式I、式II、式III、式IV所示的化合物；或
式I、式II、式III、式IV所示的化合物的异构体、药学上可接受的水合物、溶剂化物或盐；
其中，式I、式II中的n为≥1的整数；
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6独立的选自烷基、烯基、羰基、芳基、含杂原子的烷基衍生物、含杂原子的烯基衍生物、含杂原子的羰基衍生物或含杂原子的芳基衍生物；
所述杂原子为N、S、O、P、Si中的至少一种。
发明人进一步探究上述组合物的稳定性和给药方式，发现，式I、式II、式III、式IV所示的化合物中的二硫键的存在是关键，所述的式I、式II、式III、式IV所示的化合物或式I、式II、式III、式IV所示的化合物的异构体、药学上可接受的水合物、溶剂化物或盐由于含有二硫键(相比于CN112691196的单硫化合物)，使其具有良好的稳定性，不易被空气氧化，且其可通过口服(灌胃给药)方式达到抗癌效果，而不仅仅局限在腹腔或者静脉注射方式。
发明人进一步发现，所述的组合物不仅具有极高的抗癌活性，同时竟还具有良好的抗菌作用，二者联用，具有显著的增效作用。
作为本发明的优选实施方案，如下(a)～(c)中的至少一项：
(a)所述R1、R2基团选自以下结构中的至少一种：
(b)所述选自以下结构中的一种：
(c)所述R5、R6的结构如下：
作为本发明的优选实施方案，所述式I所示的化合物为泛硫乙胺、呋喃硫胺、丙舒硫胺、蒜硫胺素、阿霍烯、烯丙基三硫醚、二甲基三硫、福美双、二羟乙基二硫化物、polycarpamine A-E、吡硫醇、PX-12、生物素二硫化物、叶酸二硫化合物或二苯二硫醚。
式I所示的化合物的结构式具体如下：
作为本发明的优选实施方案，所述式II所示的化合物为硫辛酸、硫辛酰胺、罗米地辛、Outovirin、Varacins、leptosins、硫藤黄菌素、全霉素、曲霉菌素或金丝菌素。
式II所示的化合物的结构式具体如下：
作为本发明的优选实施方案，所述式III所示的化合物为大蒜素。
式III所示的化合物的结构式具体如下：
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
发明人在研究多硫化合物与金诺芬的用量时发现，多硫化合物与金诺芬照特定的摩尔比进行组合才能发挥联用增强效果，即多硫化合物、金诺芬按照特定的摩尔比进行组合才具有增效作用，当多硫化合物添加量过低时，其对金诺芬是没有增效作用的。
当多硫化合物、金诺芬的摩尔比为1：1时，所述的多硫化合物、金诺芬开始发挥增效作用，且随着多硫化合物、金诺芬的摩尔比增加，其增效效果更佳。
当金诺芬、多硫化合物的摩尔比为1：1～1000时，所述的金诺芬、多硫化合物开始发挥增效作用，而当摩尔比为1：1000，抗癌活性和抗菌作用达到最佳。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为泛硫乙胺，所述泛硫乙胺与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为硫辛酸，所述硫辛酸与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为硫辛酰胺，所述硫辛酰胺与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为呋喃硫胺，所述呋喃硫胺与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为丙舒硫胺，所述丙舒硫胺与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为蒜硫胺素，所述蒜硫胺素与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为阿霍烯，所述阿霍烯与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为大蒜素，所述大蒜素与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为烯丙基三硫醚，所述烯丙基三硫醚与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为二甲基三硫，所述二甲基三硫与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为二羟乙基二硫化物，所述二羟乙基二硫化物与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为罗米地辛，所述罗米地辛与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为polycarpamine A-E，所述polycarpamine A-E与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为Outovirin，所述Outovirin与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为Varacins，所述Varacins与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为leptosins，所述leptosins与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为硫藤黄菌素，所述硫藤黄菌素与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为全霉素，所述全霉素与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为曲霉菌素，所述曲霉菌素与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为金丝菌素，所述金丝菌素与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物为吡硫醇，所述吡硫醇与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
在本发明的第二方面，本发明提出了前面所描述的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
作为本发明的优选实施方案，所述肿瘤为结肠癌、肝癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、黑色素瘤或胰腺癌。
在本发明的第三方面，本发明提出了前面所描述的组合物在制备细胞增殖抑制剂中的应用。
作为本发明的优选实施方案，所述细胞为结肠癌细胞、肝癌细胞、肺癌细胞、胃癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、膀胱癌细胞、黑色素瘤细胞或胰腺癌细胞。
在本发明的第四方面，本发明提出了前面所描述的组合物在制备抗菌药物中的应用。
作为本发明的优选实施方案，所述抗菌药物为抗金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌或克雷伯肺炎杆菌的药物。
在本发明的第五方面，本发明提出了前面所描述的组合物在制备TrxR酶抑制剂中的应用。
在本发明的第六方面，本发明提出了前面所描述的多硫化合物作为金诺芬的增效剂在制备TrxR酶抑制剂中的应用。
所述多硫化合物包括结构式如式I、式II、式III、式IV所示的化合物；或
式I、式II、式III、式IV所示的化合物的异构体、药学上可接受的水合物、溶剂化物或盐；
其中，式I、式II中的n为≥1的整数；
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6独立的选自烷基、烯基、羰基、芳基、含杂原子的烷基衍生物、含杂原子的烯基衍生物、含杂原子的羰基衍生物或含杂原子的芳基衍生物；
所述杂原子为N、S、O、P、Si中的至少一种。
作为本发明的优选实施方案，如下(a)～(c)中的至少一项：
(a)所述R1、R2基团选自以下结构中的至少一种：
(b)所述选自以下结构中的一种：
(c)所述R5、R6的结构如下：
作为本发明的优选实施方案，所述式I所示的化合物为泛硫乙胺、呋喃硫胺、丙舒硫胺、蒜硫胺素、阿霍烯、烯丙基三硫醚、二甲基三硫、福美双、二羟乙基二硫化物、polycarpamine A-E、吡硫醇、PX-12、生物素二硫化物、叶酸二硫化合物或二苯二硫醚。
式I所示的化合物的结构式具体如下：
作为本发明的优选实施方案，所述式II所示的化合物为硫辛酸、硫辛酰胺、罗米地辛、Outovirin、Varacins、leptosins、硫藤黄菌素、全霉素、曲霉菌素或金丝菌素。
式II所示的化合物的结构式具体如下：
作为本发明的优选实施方案，所述式III所示的化合物为大蒜素。
式III所示的化合物的结构式具体如下：
作为本发明的优选实施方案，所述多硫化合物与金诺芬的摩尔比≥1，优选≥2，进一步优选≥200，更优选≥1000。
在本发明的第七方面，本发明提出了一种产品，包括前面所描述的组合物，所述产品为抗肿瘤药物、抗菌药物或细胞增殖抑制剂。
作为本发明的优选实施方案，所述产品还包括药学上可接受的辅料。本领域的技术人员可以根据药物的剂型以及药物的综合性能，按照常规选择合适的辅料。
作为本发明的优选实施方案，如下(a)～(c)中的至少一项：
(a)所述肿瘤为结肠癌、肝癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、黑色素瘤或胰腺癌；
(b)所述细胞为结肠癌细胞、肝癌细胞、肺癌细胞、胃癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、膀胱癌细胞、黑色素瘤细胞或胰腺癌细胞；
(c)所述抗菌药物为抗金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌或克雷伯肺炎杆菌的药物。
本发明的有益效果在于：
(1)金诺芬在正常生理条件下不能高效抑制人结肠癌细胞、人肝癌细胞、人肺癌细胞、人胃癌细胞、人宫颈癌细胞和人乳腺癌细胞、人前列腺癌细胞、人膀胱癌细胞、人黑色素瘤细胞、胰腺癌的增殖；而当加入无毒剂量的多硫化合物(泛硫乙胺、硫辛酸、呋喃硫胺等)时，金诺芬则对上述10种癌细胞均表现出优异的抑制作用，其中包括抑制TrxR和肿瘤细胞增殖。小鼠体内肿瘤模型实验也表明，在联合多硫化合物时，金诺芬可以很好地抑制肿瘤的生长，表明金诺芬和多硫化合物联用可作为抗癌药物组合进行应用。此外，由于可以调节本发明所述多硫化合物的种类，进而调节金诺芬在肿瘤组织的吸收，从而在体内抗癌上具有较好的选择性。
(2)所述的组合物其具有良好的稳定性，不易被空气氧化，且其可通过口服(灌胃给药)方式达到抗癌效果，而不仅仅局限在腹腔或者静脉注射方式。
(3)所述的组合物将金诺芬和含多硫化合物联合应用时，具有良好的抗菌作用。
附图说明
图1为金诺芬联用泛硫乙胺在小鼠体内肿瘤模型中的对肿瘤体积的影响图；
图2为金诺芬联用泛硫乙胺在小鼠体内肿瘤模型中的对小鼠体重影响图；
图3为金诺芬联用泛硫乙胺在小鼠体内肿瘤模型中的对肿瘤质量的影响图；
图4为金诺芬联用泛硫乙胺在小鼠体内肿瘤模型中的肿瘤抑制实际效果(肿瘤的图像)图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例
实施例1～29组合物分别如表1所示，表中的摩尔比代表相对应的多硫化合物与金诺芬的摩尔比。
表1
实施例30
1.金诺芬联用各种多硫化合物对多种癌细胞的抑制活性的影响
(1)癌细胞的培养
取培养有实验所需癌细胞的培养瓶，弃原培养液，用2mL PBS清洗三遍，加入1mL胰酶消化30s，加2mL培养基终止消化。将细胞转移到离心管，1000转离心3min，弃上清，加2mL培养液吹打10次混匀。取10μL细胞悬液到细胞计数中，计数；铺96孔板，按每孔种5000个细胞，每个化合物3个复孔计算需要细胞量与细胞孔量，通过细胞计数计算所需细胞悬液量，培养基稀释所需细胞数量，每孔5000个细胞，100μL培养基铺板，吸打混匀，利用排枪种细胞，置于培养箱培养，做好标记。
(2)取步骤(1)中培养完成的细胞，弃去原有培养基，将金诺芬母液稀释为一定浓度的稀释液，混合均匀，利用排枪每孔吸取100μL稀释液，倾斜96孔板，往96孔板中加入含金诺芬的稀释液(防止戳伤细胞)，做好标记，左右前后轻晃3次，放入CO2培养箱培养。
加入金诺芬培养1小时后，将含多硫化合物母液稀释成一定浓度，混合均匀，利用排枪(使用其中3个孔)每孔吸取20μL稀释液，倾斜96孔板，往标记好的相应的3个孔加入稀释液(防止戳伤细胞)，依次加入不同多硫化合物，加入后吹吸3左右混匀，放回培养箱继续培养。
(3)MTT比色法检测癌细胞增殖抑制效果
加入不同多硫化合物作用细胞24小时后，用排枪每孔加20μL MTT至96孔板中(MTT浓度为5mg/mL在PBS里)；37℃孵育4小时，孵育时间结束后，吸掉MTT混合液，利用排枪按130μL/孔加入DMSO；水平摇床摇10min，待甲瓒(Formazan)充分溶解，用酶标仪在490nm波长下检测吸光度，按要求计算细胞在各浓度药物下存活率，作散点图，得到金诺芬、多硫化合物以及两药联用对癌细胞增殖的影响结果如表2、表3所示。
备注(表2)：对于肺癌细胞(PCGR、A549)、宫颈癌细胞(Hela)、乳腺癌细胞(MCF-7)以下四种细胞系，金诺芬的给药浓度为10μM；对于以下其它细胞系，金诺芬的给药浓度为5μM。
表2金诺芬和泛硫乙胺(200μM)联用对不同细胞系的细胞存活率影响
表3金诺芬(5μM)和各种多硫化合物(50μM)分别以及联用对肺癌细胞系(PC9)的细胞存活率影响(本实验中，多硫化合物使用无毒或低毒的浓度)
由表2-3的结果可知，在正常生理条件(在空培养基中加入FBS可模拟生理条件下的高巯基环境)下，金诺芬对人结肠癌细胞、人肝癌细胞、人肺癌细胞、人胃癌细胞、人宫颈癌细胞、人乳腺癌细胞、人前列腺癌细胞、人膀胱癌细胞、人黑色素瘤细胞和胰腺癌的抑制作用不明显；而当加入无毒剂量的含多硫化合物(泛硫乙胺、硫辛酸、硫辛酰胺、呋喃硫胺、丙舒硫胺、蒜硫胺素(allithiamine)、阿霍烯(ajoene)、大蒜素、烯丙基三硫醚、二甲基三硫(dimethyl trisulfide)、福美双(thiram)，二羟乙基二硫化物(2-Hydroxyethyldisulfide)、罗米地辛(romidepsin)、polycarpamine A-E、Outovirin、Varacins、leptosins、硫藤黄菌素(thiolutin)、全霉素(holomycin)、曲霉菌素(gliotoxin)、金丝菌素(aureothricin)、吡硫醇(pyrithioxine))，金诺芬则对上述10种癌细胞均表现出优异的抑制作用。
2.关于金诺芬和多硫化合物联用的配比范围研究
表4金诺芬和不同摩尔浓度泛硫乙胺分别以及联用对肺癌细胞系(PC9)的细胞存活率影响
注：配比为[金诺芬浓度：泛硫乙胺浓度]；此处固定金诺芬浓度为5μM，改变泛硫乙胺浓度。
由表4的结果可知，当多硫化合物的联用浓度(比例)较低时，其与金诺芬是没有联用效果的。当多硫化合物的联用浓度(比例)增加时，其与金诺芬联用才有效果。因此我们提出，多硫化合物与金诺芬的配比大于等于1时，联用才具有增效作用，且随着多硫化合物的用量增加，联用增效效果也随着增加。
3.多硫化合物对金诺芬TrxR酶活性抑制效果的强化
检测步骤如下：
以A549细胞为试验对象。
将细胞以2×105个/孔接种在6孔板中，孵育24小时。
孵育结束后，将细胞培养基换成含30％FBS，模拟正常生理条件下的高浓度巯基环境。不加入任何试剂作为对照组，实验组加入金诺芬1.0μM，37℃孵育30min。加入多硫化合物(泛硫乙胺、呋喃硫胺)孵育12h(体系中DMSO的终浓度≤1％)。将孵育后的细胞用PBS洗涤3次，加入100μL冰冷的裂解缓冲液(含有50mM pH 7.4的磷酸盐缓冲液，1mM EDTA和0.1％Triton-X 100)，在冰上进行细胞裂解5分钟，收集细胞裂解液。
在收集的细胞裂解液(10μg蛋白)中加入100μL缓冲液(含有50mM pH 7.4的磷酸钾、1mM EDTA和0.2mM NADPH)中，加入5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB，终浓度为3mM)引发反应，TrxR活性可根据10分钟内的OD值增加量(OD值检测波长为410nm)得到。其中，单独给药金诺芬为阳性对照样品，空白组为阴性性对照，结果如表5所示。
表5各试验组对TrxR酶活性的抑制效果
备注(表5)：*标注为培养基中含30％FBS。
由表5可知，在不含FBS条件(即模拟体外条件)下，金诺芬可以将A549细胞内TrxR酶活抑制到13.2％；然而在30％FBS条件(模拟体内条件)下，金诺芬抑制酶活的能力降低，只能将细胞内TrxR酶活抑制到82.1％。但是，当加入多硫化合物，即使在30％FBS条件下，金诺芬抑制酶活的能力有了很大提高；相对于没加入多硫化合物，金诺芬抑制酶活能力可以提高3倍多。
4.金诺芬联用各种多硫化合物对金诺芬细胞吸收的影响
检测步骤如下：
以A549细胞为试验对象。
将细胞以2×105个/孔接种在6孔板中，孵育24小时。
孵育结束后，将细胞培养基换成含30％FBS，模拟正常生理条件下的高浓度巯基环境。不加入任何试剂作为对照组，实验组加入2μM金诺芬，37℃孵育10min。加入多硫化合物(50μM呋喃硫胺)孵育12h(体系中DMSO的终浓度≤1％)。将孵育后的细胞立即用PBS洗涤3次，每孔加入500μL超纯水破裂细胞，15min后，收集细胞裂解液。
在收集的细胞裂解液中加入王水溶解，之后用超纯水稀释到适当比例。采用电感耦合等离子体质谱(Inductively coupled plasma mass spectrometry，ICP-MS)进行金元素检测。以不含FBS条件下的5μM金诺芬细胞吸收率作为对照，结果如表6所示。
表6呋喃硫胺对金诺芬细胞吸收率的影响
其中，上述吸收量为细胞内每g蛋白含有的金含量(mg)。
由表6可知，在不含FBS条件下，金诺芬为参照，金的吸收率达到100％。可是，当提高培养基中FBS的浓度后，金的吸收迅速降低；当加入呋喃硫胺，金诺芬的吸收有了很大提高。这说明，加入呋喃硫胺以后，金诺芬在细胞内的吸收得到了提高。
5.金诺芬联用多硫化合物在小鼠体内肿瘤模型中的实际抑制效果
检测步骤如下：
建立小鼠肿瘤模型：将悬浮于PBS中的200万个结肠癌细胞HCT116细胞皮下注射到5-7周龄的雌性BALB/c-nu/nu(裸鼠)小鼠背侧，建立异种移植模型。当肿瘤体积达到约50mm3(肿瘤接种后3-4天)时，将小鼠随机分为对照组(使用蓖麻油)和治疗组(金诺芬组、泛硫乙胺组以及联合给药组)，联合给药组用金诺芬(10mg/kg小鼠体重/day)联用泛硫乙胺(200mg/kg小鼠体重/day)灌胃给药进行治疗，一周灌胃给药2次，当肿瘤体积长到1000mm3后，麻醉小鼠然后脱颈椎处死小鼠。
结果如图1-4所示。
对照组、单独给药金诺芬组或者单独给药多硫化合物组，其肿瘤的生长并未得到有效抑制；当金诺芬和多硫化合物联合应用时，肿瘤的生长被很大程度抑制。
6.金诺芬联用各种多硫化合物对多种细菌的抑制活性的影响
检测步骤如下：
(1)细菌转接
用接种环在LA固体培养基中挑出细菌单克隆，然后转接至盛有2ml LB培养基的50ml离心管中，斜放入37℃摇床中过夜培养，待培养基变浑浊后可用于实验。
(2)蘸取少量步骤1中的菌液于2mL培养基(肉汤培养基)中，于50ml离心管中，斜放入37℃摇床中培养。
(3)12h后，将步骤2中的菌液(20uL)稀释至培养基(2ml)，于50ml离心管中混合，斜放入37℃摇床中培养。
(4)加药
提前在96孔板中加好对应药物浓度，使金诺芬的最终浓度分别为40μM，固定多硫化合物浓度为200μM。
2.5h后，取出步骤3中菌液，在加药槽中稀释1000倍，然后向96孔板以150μL/孔加入稀释后的菌液，放入37℃摇床中固定好。
24h后，用酶标仪在600nm波长下检测吸光度，按要求计算细菌在各浓度药物下抑菌率，作散点图，得到金诺芬、多硫化合物以及两药联用对菌株生长的影响结果如表7所示。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC29213)；表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis ATCC12228)；大肠杆菌(Escherichia coli ATCC25922)；绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa ATCC9027)；鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii ATCC19606)；克雷伯肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniae ATCC10031)。
表7金诺芬(40μM)和泛硫乙胺(200μM)分别以及联用对多种细菌的抑制活性的影响
抑菌率＝(对照组菌落数-给药组菌落数)/对照组菌落数*100％
由表7的结果可知，在正常生理条件(在空培养基中加入FBS可模拟生理条件下的高巯基环境)下，金诺芬对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC29213)；表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis ATCC12228)；大肠杆菌(Escherichia coliATCC25922)；绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa ATCC9027)；鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii ATCC19606)；克雷伯肺炎杆菌(Klebsiella pneumoniaeATCC10031)的抑制作用不明显；而当加入无毒剂量的含多硫化合物(泛硫乙胺)金诺芬则对上述6种菌株均表现出优异的抑制作用。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (14)

1.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括金诺芬和多硫化合物；所述多硫化合物包括泛硫乙胺、呋喃硫胺、丙舒硫胺、蒜硫胺素、阿霍烯、烯丙基三硫醚、二甲基三硫、福美双、二羟乙基二硫化物、硫辛酸、硫辛酰胺、大蒜素中的至少一种；
所述多硫化合物与金诺芬的摩尔比≥10。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述多硫化合物与金诺芬的摩尔比≥200。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述多硫化合物与金诺芬的摩尔比≥1000。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述多硫化合物为泛硫乙胺，所述泛硫乙胺与金诺芬的摩尔比≥10；或
所述多硫化合物为硫辛酸，所述硫辛酸与金诺芬的摩尔比≥10；或
所述多硫化合物为硫辛酰胺，所述硫辛酰胺与金诺芬的摩尔比≥10；或
所述多硫化合物为呋喃硫胺，所述呋喃硫胺与金诺芬的摩尔比≥10；或
所述多硫化合物为丙舒硫胺，所述丙舒硫胺与金诺芬的摩尔比≥10；或
所述多硫化合物为蒜硫胺素，所述蒜硫胺素与金诺芬的摩尔比≥10；或
所述多硫化合物为阿霍烯，所述阿霍烯与金诺芬的摩尔比≥10；或
所述多硫化合物为大蒜素，所述大蒜素与金诺芬的摩尔比≥10；或
所述多硫化合物为烯丙基三硫醚，所述烯丙基三硫醚与金诺芬的摩尔比≥10；或
所述多硫化合物为二甲基三硫，所述二甲基三硫与金诺芬的摩尔比≥10；或
所述多硫化合物为二羟乙基二硫化物，所述二羟乙基二硫化物与金诺芬的摩尔比≥10。
5.权利要求1~4任一所述的组合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤为结肠癌、肝癌、非小细胞肺癌、胃癌、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、黑色素瘤或胰腺癌。
6.权利要求1~4任一所述的组合物在制备细胞增殖抑制剂中的应用，其特征在于，所述细胞为结肠癌细胞、肝癌细胞、非小细胞肺癌细胞、胃癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、膀胱癌细胞、黑色素瘤细胞或胰腺癌细胞。
7.一种组合物在制备抗菌药物中的应用，其特征在于，所述组合物包括金诺芬和泛硫乙胺，所述泛硫乙胺与金诺芬的摩尔比≥5；
所述抗菌药物为抗金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌或克雷伯肺炎杆菌的药物。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述泛硫乙胺与金诺芬的摩尔比≥200。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述泛硫乙胺与金诺芬的摩尔比≥1000。
10.一种产品，其特征在于，包括权利要求1~4任一所述的组合物，所述产品为抗肿瘤药物或细胞增殖抑制剂；所述肿瘤为结肠癌、肝癌、非小细胞肺癌、胃癌、宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、黑色素瘤或胰腺癌；所述细胞为结肠癌细胞、肝癌细胞、非小细胞肺癌细胞、胃癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、膀胱癌细胞、黑色素瘤细胞或胰腺癌细胞。
11.根据权利要求10所述的产品，其特征在于，还包括药学上可接受的辅料。
12.一种产品，其特征在于，包括含金诺芬和泛硫乙胺的组合物，所述产品为抗菌药物，所述泛硫乙胺与金诺芬的摩尔比≥5；所述抗菌药物为抗金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌或克雷伯肺炎杆菌的药物。
13.根据权利要求12所述的产品，其特征在于，所述泛硫乙胺与金诺芬的摩尔比≥200。
14.根据权利要求12所述的产品，其特征在于，所述泛硫乙胺与金诺芬的摩尔比≥1000。
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