CN116987073A - 一种PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂及其应用 - Google Patents

一种PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂及其应用 Download PDF

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张燕飞
高金来
刘石惠
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Abstract

本发明涉及一种PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂，其为如下列具有通式(I)的化合物及其药学上可接受的盐或溶剂合物：

Description

一种PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂及其应用
技术领域
本发明属于药物领域，具体涉及一种PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂及其应用。
背景技术
PI3K/Akt/mTOR信号通路作为细胞内重要的信号传导途径，在细胞的生长、存活、增殖、凋亡等过程中发挥着重要的生物学功能，该通路的紊乱会引起包括癌症、免疫系统和造血系统在内的一系列的疾病。相关研究表明该通路上的关键调控位点PI3K与肿瘤的发生、发展密切相关。靶向PI3K的抗肿瘤药物开发是近年来的一个研究热点(Nature ReviewsMolecular CellBiology，2012，13：195-203)。磷脂酰肌醇3激酶(Phosphoinositide3-kinase，PI3K)是一类包括多个成员的脂质激酶。根据其结构特征、活化机制和对脂类底物选择性的不同，PI3K激酶可主要分为I、II、III三类，其中I类PI3K目前研究得最透彻(Journal of Medicinal Chemistry，2019，62：4815-4850)。I类PI3K激酶包含PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ四个亚型(Molecular Cancer，2019，18：26)。其中，PI3Kα和肿瘤的发生发展联系最为密切，主要的原因是编码催化亚基p110α的PIK3CA基因是最容易突变的致癌基因之一，其突变主要集中发生在三个位点：螺旋域PI3Ka上谷氨酸E542和E545以及激酶催化域PI3Kc上组氨酸H1047，通常谷氨酸E542和E545会突变为赖氨酸，而组氨酸H1047会突变为精氨酸，这三个突变位点所引起的肿瘤约占了所有实体瘤的30％(Science，2004，304：554)。PI3Kα的突变会引起PI3K/Akt/mTOR信号通路异常激活，导致肿瘤细胞过度增殖，进而导致各种恶性肿瘤的发生，如乳腺癌、结肠癌、子宫内膜癌、胃癌、卵巢癌和肺癌等(Aging，2011，3：192-222)。其它三种亚型PI3Kβ、PI3Kδ和PI3Kγ，主要在血栓、免疫功能异常、白血病、过敏及炎症等疾病的形成中发挥作用(Journal of Medicinal Chemistry，2019，62：4815-4850)。Alpelisib(Norvartis)是目前唯一成功上市的PI3Kα亚型选择性抑制剂，于2019年经美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市用于治疗携带PIK3CA基因突变的、患有HR+/HER2-晚期或转移性乳腺癌的、接受内分泌治疗方案之中或之后疾病进展的绝经后女性和男性患者(Drugs，2019，79：1249-1253)。但是该抑制剂作为单一疗法显示出较差的疗效，故目前临床上主要是与氟维司群联合使用。
组蛋白去乙酰化酶(HDACs)是一类重要的表观遗传酶，通过去除组蛋白上赖氨酸残基的ε-氨基来调节基因的表达，HDACs可调节包括肿瘤抑制因子(p53、p21等)和转录因子(如TFIIE、TCF、SF1等)在内的多种蛋白的表达(Translational Oncology，2022，16：101312)。HDACs的失调与癌症的发生和增殖密切相关。HDAC抑制剂已成为癌症治疗的一种有效方法，近年来一系列相关抑制剂获得批准，包括Vorinostat(SAHA)、Romidepsin、Belinostat、Panobinostat和Chidamide等(Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters，2021，49：128286)。然而，这些小分子抑制剂由于缺乏特异性选择性产生了很多毒副作用，如血液学不良反应、胃肠道不良反应和心脏毒性等(Drug Safety，2019，42：235-245)。值得注意的是，作用于细胞质的HDAC家族中的HDAC6亚型能够调节各种非组蛋白底物的乙酰化状态(α-微管蛋白、HSP-90和HSF-1等)和致癌细胞的转化、应激反应、转移，其与耐药性密切相关(Bioorganic Chemistry，2022，127：105992)。此外，与基因敲除I类HDAC后的严重缺陷或致死效应不同，HDAC6基因敲除小鼠可以存活且健康，没有明显的表型异常(Neuropharmacology，2016，110：470-479)。因此靶向HDAC6有希望表现出更好的耐受性和疗效。目前，以Ricolinostat和Tubastain为代表的亚型选择性HDAC6抑制剂被认为是下一代HDAC靶向药物((Bioorganic Chemistry，2022，127：105992)。
一系列研究表明，PI3K抑制剂与HDAC抑制剂联用不但可以协同抑制肿瘤生长，而且能提高疗效、限制耐药性和提供比单一抑制剂更好的治疗窗口(Cancer Cell，2016，29：311-323)。此外，鉴于药物联用疗法存在药物间不良的相互作用、毒副作用累加、药代动力学复杂、患者依从性差等问题(Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry，2019，19：842-874)，因此开发PI3K/HDAC双重抑制剂不仅有望获得比PI3K抑制剂更优的疗效、削弱耐药性、规避PI3K抑制剂和HDAC抑制剂联用带来的相互作用、毒副作用累加、药代动力学复杂、患者依从性差等问题，故研究价值显著。基于此，国内外研究者开展了大量研究。然而，迄今进入临床研究的只有泛PI3K/HDAC双重抑制剂CUDC-907，该抑制剂由于没有能够实现对PI3K特定亚型的选择性抑制，故在临床实验中表现出的毒性和耐受性问题，导致该抑制剂滞留在临床II期(British Journal of Haematology，2021，195：201-209)。
发明内容
一方面针对现有PI3K和HDAC抑制剂，及非选择性的泛PI3K/HDAC双重抑制剂在抗肿瘤疗效和毒性方面所存在的问题；另一方面针对P13K抑制剂和HDAC抑制剂联用疗法的药物间相互作用、毒副作用累加、药代动力学复杂、患者依从性差等问题，故本发明提供一种PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂及其应用。
根据本发明的一个方面，本发明提供PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂，其为如下列具有通式(I)的化合物及其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中，X、Y、Z均为CH；或X、Y为CH，Z为N；或X、Z为CH，Y为N；或Y、Z为CH，X为N；
R1选自C1-6烷基、氟代C1-6烷基、C3-6环烷基、氟代C3-6环烷基、C3-6杂环烷基或氟代C3-6杂环烷基；
R2选自氢、卤素、C1-6烷基、氟代C1-6烷基、C3-6环烷基、氟代C3-6环烷基或C3-6杂环烷基；
L为环A为至少被1个R3取代的C6-14芳基、C5-14芳杂基，R3独立地选自氢、卤素、羟基、氰基、氨甲酰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6不饱和脂链烃基、N(R4)2、NR4OR4、NR4N(R4)2、SO2N(R4)2、NR4SO2R4、NR4CON(R4)2、NR4COOR4、NR4COR4、CON(R4)2，其中，R4独立地选自氢、C1-6烷基或C2-6不饱和脂链烃基。
活性测试证实，本发明的具有通式(I)的化合物为亚型选择性的PI3Kα/HDAC6双重抑制剂，兼具抑制PI3Kα和HDAC6所需的结构单元，具有显著的PI3Kα和HDAC6双重抑制活性。具体地，本发明的具有通式(I)的化合物具有与PI3Kα的关键作用位点以提供选择性抑制PI3Kα的作用，其引入的芳环或芳杂环异羟肟酸结构能与HDAC6的催化通道及锌离子辅基发生更优的相互作用以提供选择性抑制HDAC6的作用。相比CUDC-907，本发明具有通式(I)的化合物抑制PI3K和HDAC家族的靶点个数从10余个降低到了两个与肿瘤发生发展密切相关的目标靶点，因此具有更小的毒性和更大的耐受剂量(治疗窗口)。另外，由于具有单分子双靶点效应，本发明的具有通式(I)的化合物可规避PI3K抑制剂和HDAC抑制剂联用疗法的药物间相互作用、毒副作用累加、药代动力学复杂、患者依从性差等问题，在治疗癌症等增殖性疾病中特别有价值。
本发明中的具有通式(I)的化合物可以以水合物、溶剂合物和多晶型物及其混合物的形式存在。
本发明中的具有通式(I)的化合物可以以旋光活性形式、旋光异构体混合物的形式、一种或多种阻转异构体及其混合物的形式、或一种或多种互变异构体及其混合物的形式存在。
优选地，R1选自
优选地，R2选自甲基或氯。
优选地，具有通式(I)的化合物选自编号1-19中的任一化合物：
需要特别说明的是，上述编号1-19的化合物仅用于举例以使得本发明的技术方案更加清楚，本发明的PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂不仅仅包括上述编号1-19的化合物及其药学上可接受的盐或溶剂合物。
根据本发明的另一个方面，本发明提供PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂在用于制备抗肿瘤药物中的应用。
优选地，所述肿瘤包括实体瘤或血液瘤。
本发明涉及的适应症-肿瘤，包括但不局限于肺和支气管癌；前列腺癌；乳腺癌；胰腺癌；结肠和直肠癌；甲状腺癌；肝和肝内胆管癌；肝细胞癌；胃癌；神经胶质瘤/成胶质细胞瘤；子宫内膜癌；黑素瘤；肾和肾盂癌；膀胱癌；子宫体癌；子宫颈癌；卵巢癌；多发性骨髓瘤；食管癌；急性髓性白血病；慢性髓性白血病；淋巴细胞白血病；髓性白血病；脑癌；口腔和咽癌；喉癌；小肠癌；非霍奇金淋巴瘤；黑素瘤和绒毛状结肠腺瘤等。
优选地，所述PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂的用药剂量为1mg-1000mg/天。应该理解，该剂量仅作为示例而非限制，可根据病情的轻重或剂型的不同偏离此范围。
优选地，所述PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂以组合物的形式起作用。
本发明中的组合是指一种剂量单位形式的固定组合，或者用于组合施用的成套药盒，其中具有通式(I)的化合物和组合伙伴(如其它药物)可以同时独立施用或在时间间隔内分别施用，尤其是当这些时间间隔使组合伙伴显示出协作作用(如协同作用)时。该施用在患者体内提供了两种及两种以上药物(化合物)的治疗有效水平(如鸡尾酒疗法)。
优选地，所述组合物还包括至少一种药用载体或赋形剂。
优选地，所述组合物还包括至少一种抗癌剂。
本发明提供治疗有细胞增殖性疾病如癌症的方法，包括给该个体单独施用或者与一种或多种其它抗癌剂组合施用治疗有效量的具有通式(I)的化合物。特别是组分将被配制在一起作为组合治疗剂或者分别施用。适于与具有通式(I)的化合物使用的抗癌剂包括但不限于一种或多种选自激酶抑制剂(如吉非替尼、厄洛替尼等)、抗雌激素剂(如氟维司群、他莫昔芬、托瑞米芬、雷洛昔芬、阿那曲唑等)、抗雄激素剂(如氟他胺、比卡鲁胺、非那雄胺、氨鲁米特、酮康唑和皮质类固醇等)、癌症化疗药物、烷化剂、螯合剂、生物效应调节剂、癌症疫苗、用于反义治疗的物质的化合物等。
优选地，所述组合物的剂型为临床上或药学上可接受的剂型。
总之，本发明所涉及的亚型选择性PI3Kα/HDAC6双重抑制剂可为抗肿瘤提供新疗法。通过多次实验证实，本发明提供的具有通式(I)的化合物可高强度地抑制PI3Kα和HDAC6，同时呈现出优良的PI3Kα/HDAC6亚型选择性，具有被开发为抗肿瘤药物的前景。
具体实施方式
除非指明不同数目的原子，本发明所用术语“烷基”，是指由1-6个碳原子的直链或支链烃链。
除非指明不同数目的原子，本发明所用术语“环烷基”是指由3-11个碳原子单环烷基、螺环烷基和桥环烷基，所述单环烷基、螺环烷基和桥环烷基可以含烷基取代基，也可以不含烷基取代基。
除非指明不同数目的原子，本发明所用术语“杂环烷基”是指由2-9个碳原子及1-2个杂原子(例如氧原子、氮原子、硫原子等)的单环杂烷基、螺环杂烷基和桥环杂烷基，所述单环杂烷基、螺环杂烷基和桥环杂烷基可以含烷基取代基，也可以不含烷基取代基。
本发明所用术语“卤素”表示氟、溴、氯或碘，特别是氟、氯。
本发明所用术语“氟代”表示被氟取代的烷基、环烷基、杂环烷基可以被单、多或全卤代。
本发明所用术语“芳基”是指5-12个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系统。
本发明所用术语“杂芳基”是指5-12个碳原子的非全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系统。
本发明中“药学上可接受的盐”包括无机酸盐、低级烷磺酸盐、芳基磺酸盐、有机酸盐、氨基酸盐等。
本发明中的“治疗”包括预防性(防护性)和治疗性治疗以及延缓疾病或紊乱的进展。
本发明提供的具有结构通式(I)的化合物通过以下步骤制备，但不限于以下方法。
中间体B的合成
2-氨基噻唑衍生物(原料A)与氯甲酸苯酯发生取代反应得到氨基甲酸酯类化合物(中间体B)。反应中所用的碱为二异丙基乙胺(DIPEA)，所用溶剂为1，4-二氧六环(1，4-dioxane)，反应温度为40℃，反应时间为12小时。
下面给出合成中间体B的例子
中间体B-1的合成
苯基(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酸酯
室温下，用无水1，4-二氧六环溶解4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑(250mg，0.83mmol)和DIPEA(360μL，2.07mmol)，升高温度至40℃，缓慢滴加氯甲酸苯酯(156μL，1.24mmol)，继续反应12个小时。反应完成后减压蒸馏除去溶剂，然后以乙酸乙酯溶解，1N氢氧化钠洗涤2次，收集有机层后无水硫酸钠干燥，减压蒸馏除去溶剂得到粗品，粗品经过柱色谱分离提纯得到类白色固体150mg，产率：45％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.53(s，1H，NH)，8.63(d，J＝5.1Hz，1H，Ar-H)，7.59(s，1H，Ar-H)，7.50-7.41(m，3H，Ar-H)，7.36-7.21(m，3H，Ar-H)，2.44(s，3H，CH3)，1.62(s，6H，CH3×2)；ESI-MS：m/z＝422[M+H]+。
中间体B-2的合成
苯基(5-(2-(叔丁基)吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成5-(2-(叔丁基)吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺，得到类白色固体120mg，产率：47％。ESI-MS：m/z＝368[M+H]+。
中间体B-3的合成
苯基(5-(2-环丁基吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成5-(2-环丁基吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺，得到类白色固体132mg，产率：51％。ESI-MS：m/z＝366[M+H]+。
中间体B-4的合成
苯基(4-甲基-5-(2-(1-甲基环丙基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成4-甲基-5-(2-(1-甲基环丙基)吡啶-4-基)噻唑-2-胺，得到类白色固体126mg，产率：48％。ESI-MS：m/z＝366[M+H]+。
中间体B-5的合成
苯基(5-(2-(1-氰基环丙基)吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成1-(4-(2-氨基-4-甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基)环丙烷-1-腈，得到类白色固体106mg，产率：58％。ESI-MS：m/z＝377[M+H]+。
中间体B-6的合成
苯基(4-甲基-5-(2-(1-(三氟甲基)环丙基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成4-甲基-5-(2-(1-(三氟甲基)环丙基)吡啶-4-基)噻唑-2-胺，得到类白色固体125mg，产率：47％。ESI-MS：m/z＝420[M+H]+。
中间体B-7的合成
苯基(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-胺，得到类白色固体118mg，产率：51％。ESI-MS：m/z＝423[M+H]+。
中间体B-8的合成
苯基(5-(2-(叔丁基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成5-(2-(叔丁基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺，得到类白色固体145mg，产率：55％。ESI-MS：m/z＝369[M+H]+。
中间体B-9的合成
苯基(5-(2-环丙基嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成5-(2-环丙基嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺，得到类白色固体135mg，产率：51％。ESI-MS：m/z＝353[M+H]+。
中间体B-10的合成
苯基(4-甲基-5-(2-(1-甲基环丙基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成4-甲基-5-(2-(1-甲基环丙基)嘧啶-4-基)噻唑-2-胺，得到类白色固体128mg，产率：52％。ESI-MS：m/z＝367[M+H]+。
中间体B-11的合成
苯基(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺，得到类白色固体133mg，产率：49％。ESI-MS：m/z＝368[M+H]+。
中间体B-12的合成
苯基(5-(2-(二乙基氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成5-(2-(二乙基氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-胺，得到类白色固体111mg，产率：32％。ESI-MS：m/z＝384[M+H]+。
中间体B-13的合成
苯基(4-氯-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酸酯
合成方法与合成中间体B-1相同，不同之处在于将4-甲基-5-(2-(1，1，1，-三氟-2-甲基丙-2-基)吡啶-4-基)噻唑替换成4-氯-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-胺，得到类白色固体127mg，产率：52％。ESI-MS：m/z＝442[M+H]+。
中间体D的合成
叔丁氧羰基保护的(4R)-氨基-L-脯氨酰胺(原料C)与含有酯基的衍生物发生酸氨缩合反应或者亲核取代反应得到含有酯基的化合物(中间体D)。反应中所用的碱为二异丙基乙胺(DIPEA)，所用溶剂为二氯甲烷(DCM)或异丙醇(Isopropyl alcohol)，反应温度为室温或130℃，反应时间为4小时或12小时。
下面给出合成中间体D的例子。
中间体D-1的合成
(2S，4R)-2-氨基甲酰基-4-(4-(甲氧基羰基)苯甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
室温下，用无水二氯甲烷溶解对苯二甲酸单甲酯(108mg，0.60mmol)，HOBT(81mg，0.60mmol)，EDCI(173mg，0.90mmol)，室温反应2小时，室温下向溶液中加入DIPEA(263μL，1.5mmol)，10分钟后于室温下加入原料C(150mg，0.66mmol)，继续室温反应3小时，反应结束。反应混合物用饱和碳酸氢钠洗涤2次，收集有机层并真空浓缩后经过柱色谱(4％CH3OH/CH2Cl2)分离提纯得到淡黄色固体(129mg，0.33mmol)，产率：55％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.78-8.71(m，1H，NH)，8.03(d，J＝8.3Hz，2H，Ar-H)，7.99-7.92(m，2H，Ar-H)，7.50-7.31(m，1H，NH)，7.10-6.90(m，1H，NH)，4.61-4.43(m，1H，CH)，4.25-4.12(m，1H，CH)，3.87(s，3H，CH3)，3.75-3.64(m，1H，CH)，3.34-3.22(m，1H，CH)，2.31-2.13(m，1H，CH)，2.15-2.02(m，1H，CH)，1.38(s，4H，CH)，1.35(s，5H，CH)；ESI-MS：m/z＝392[M+H]+。
中间体D-2的合成
(2S，4R)-2-氨基甲酰基-4-(2-(4-(甲氧基羰基)苯基)乙酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
合成方法与合成中间体D-1相同，不同之处在于将对苯二甲酸单甲酯替换成4-(甲氧羰基)苯乙酸，得到类白色固体131mg，产率：33％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.44-8.36(m，1H，NH)，7.90(d，J＝8.2Hz，2H，Ar-H)，7.39(d，J＝8.1Hz，2H，Ar-H)，7.37-7.34(m，1H，NH)，7.09-6.89(m，1H，NH)，4.34-4.17(m，1H，CH)，4.19-4.04(m，1H，CH)，3.84(s，3H，CH3)，3.63-3.53(m，1H，CH)，3.50(s，2H，CH2)，3.19-3.06(m，1H，CH)，2.17-1.75(m，2H，CH)，1.38(s，4H，CH)，1.35(s，5H，CH)；ESI-MS：m/z＝406[M+H]+。
中间体D-3的合成
(2S，4R)-2-氨基甲酰基-4-(5-(甲氧基羰基)吡啶-2-酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
合成方法与合成中间体D-1相同，不同之处在于将对苯二甲酸单甲酯替换成5-(甲氧羰基)-2-吡啶羧酸，得到淡黄色固体120mg，产率：38％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.15-9.04(m，2H，Ar-H)，8.52-8.42(m，1H，NH)，8.21-8.11(m，1H，Ar-H)，7.47-7.36(m，1H，NH)，7.07-6.94(m，1H，NH)，4.71-4.50(m，1H，CH)，4.28-4.08(m，1H，CH)，3.93(s，3H，CH3)，3.72-3.53(m，2H，CH)，2.38-2.25(m，1H，CH)，2.07-1.96(m，1H，CH)，1.38(s，4H，CH)，1.35(s，5H，CH)；ESI-MS：m/z＝393[M+H]+。
中间体D-4的合成
6-(((3R，5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-氨基甲酰基吡咯烷-3-基)氨基)烟酸甲酯
原料C(500mg，2.18mmol)和6-氯烟酸甲酯(451mg，2.62mmol)溶解在异丙醇溶剂中，室温下向该溶液中加入DIPEA(1.2mL，6.55mmol)，升温至130℃，继续反应12个小时，反应结束后减压蒸馏除去溶剂得到粗产品，粗产品用柱色谱分离提纯得到淡黄色固体(76mg，0.21mmol)，产率：10％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.57(s，1H，Ar-H)，7.81(d，J＝8.9Hz，1H，Ar-H)，7.68-7.61(m，1H，Ar-H)，7.44-7.38(m，1H，NH)，7.04-6.95(m，1H，NH)，6.55-6.47(m，1H，NH)，4.57-4.37(m，1H，CH)，4.19-4.08(m，1H，CH)，3.75(s，3H，CH3)，3.73-3.63(m，1H，CH)，3.22-3.09(m，1H，CH)，2.17-2.04(m，2H，CH)，1.37(s，4H，CH)，1.35(s，5H，CH)；ESI-MS：m/z＝365[M+H]+。
中间体D-5的合成
2-(((3R，5S)-1-(叔丁氧基羰基)-5-氨基甲酰基吡咯烷-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酸甲酯
合成方法与合成中间体D-4相同，不同之处在于将6-氯烟酸甲酯替换成2-氯嘧啶-5-羧酸甲酯，得到淡黄色固体146mg，产率：50％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.81-8.75(m，1H，Ar-H)，8.74-8.68(m，1H，Ar-H)，8.41-8.33(m，1H，NH)，7.45-7.35(m，1H，NH)，7.05-6.90(m，1H，NH)，4.63-4.43(m，1H，CH)，4.19-4.06(m，1H，CH)，3.77(s，3H，CH3)，3.72-3.64(m，1H，CH)，3.25-3.14(m，1H，CH)，2.20-2.00(m，2H，CH)，1.36(s，4H，CH)，1.33(s，5H，CH)；ESI-MS：m/z＝366[M+H]+。
中间体D-6的合成
(2S，4R)-2-甲酰氨基-4-((4-(甲氧基羰基)苯基)磺酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
室温下，原料C(150mg，0.66mmo1)溶解于无水二氯甲烷中，再在冰浴条件下缓慢滴加4-(氯磺酰基)苯甲酸甲酯(140mg，0.60mmo1)，室温下反应两小时后得粗品，粗品经硅胶色谱分离纯化得到类白色固体(130mg，0.30mmol)，产率：50％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.32-8.23(m，1H，NH)，8.17(d，J＝8.2Hz，2H，Ar-H)，7.95(d，J＝8.2Hz，2H，Ar-H)，7.41-7.29(m，1H，NH)，6.99-6.86(m，1H，NH)，4.08-3.99(m，1H，CH)，3.90(s，3H，CH3)，3.79-3.68(m，1H，CH)，3.41-3.34(m，1H，CH)，3.03-2.90(m，1H，CH)，2.04-1.88(m，1H，CH)，1.87-1.73(m，1H，CH)，1.31(d，J＝3.28Hz，9H，CH3×3)；ESI-MS：m/z＝428[M+H]+。
中间体D-7的合成
(2S，4R)-2-甲酰氨基-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯)
合成方法与合成中间体D-6相同，不同之处在于将4-(氯磺酰基)苯甲酸甲酯替换成4-((氯磺酰基)甲基)苯甲酸甲酯，得到类白色固体120mg，产率：45％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.96(d，J＝7.9Hz，2H，Ar-H)，7.57-7.54(m，1H，NH)，7.52(d，J＝8.1Hz，2H，Ar-H)，7.41-7.28(m，1H，NH)，7.01-6.87(m，1H，NH)，4.48(s，2H，CH2)，4.12-4.02(m，1H，CH)，3.95-3.88(m，1H，CH)，3.86(s，3H，CH3)，3.64-3.51(m，1H，CH)，3.19-3.03(m，1H，CH)，2.11-1.94(m，2H，CH)，1.38(s，4H，CH)，1.34(s，5H，CH)；ESI-MS：m/z＝442[M+H]+。
中间体F的合成
中间体D在三氟乙酸(TFA)的作用下发生水解得到中间体E，所用溶剂为二氯甲烷(DCM)，反应温度为零度到室温，反应时间为2小时。
中间体E与中间体B在碱性条件下发生取代反应得到中间体F。反应中所用的碱为二异丙基乙胺(DIPEA)，所用溶剂为1，4-二氧六环(1，4-dioxane)，反应温度为60℃，反应时间为20小时。
下面给出合成中间体F的例子
中间体F-1的合成
4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯
以无水二氯甲烷溶解中间体(2S，4R)-2-氨基甲酰基-4-(4-(甲氧基羰基)苯甲酰氨基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯，冰浴搅拌条件下滴加等体积的三氟乙酸，室温反应2小时，减压蒸馏除去溶剂即可得到脱Boc产物(中间体E-1)。
室温下以无水1，4-二氧六环溶解中间体苯基(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酸酯(72mg，0.17mmol)和DIPEA(42μL，0.17mmol)，升温至60℃，缓慢滴加中间体E-1(44mg，0.17mmol)，反应12小时，反应结束后减压蒸馏除去溶剂得到粗品。粗品经硅胶色谱(6％CH3OH/CH2Cl2)分离纯化，得到类白色固体(50mg，0.08mmol)，产率：47％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.18(s，1H，NH)，8.85(d，J＝5.9Hz，1H，Ar-H)，8.60(d，J＝5.0Hz，1H，Ar-H)，8.04(d，J＝8.2Hz，2H，Ar-H)，7.97(d，J＝8.2Hz，2H，Ar-H)，7.55(s，1H，NH)，7.48(s，1H，NH)，7.41(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.04(s，1H，NH)，4.67-4.53(m，1H，CH)，4.47-4.33(m，1H)，3.95-3.90(m，1H，CH)，3.88(s，3H，CH3)，3.60-3.47(m，1H，CH)，2.41(s，3H，CH3)，2.34-2.20(m，1H，CH)，2.18-2.03(m，1H，CH)，1.61(s，6H，CH3×2)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ174.01，169.86，167.79，158.58，149.36，141.05，136.87，135.01，133.05，130.98，129.66，128.98，128.02，127.69，124.08，123.12，121.59，120.47，60.32，51.62，450.36，48.79，46.74(q，Jc-F＝24.0Hz)，35.42，21.76，21.75，21.74，16.76；ESI-MS：m/z＝619[M+H]+。
中间体F-2的合成
4-(2-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-2-氧代乙基)苯甲酸甲酯
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体56mg，产率：52％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.05(s，1H，NH)，8.61(d，J＝5.1Hz，1H，Ar-H)，8.54-8.46(m，1H，NH)，7.87(d，J＝8.0Hz，2H，Ar-H)，7.56(s，1H，Ar-H)，7.54-7.43(m，1H，NH)，7.43-7.36(m，3H，Ar-H)，7.10-6.96(m，1H，NH)，4.50-4.27(m，2H，CH)，3.81(s，3H，CH3)，3.77-3.69(m，1H，CH)，3.54-3.48(m，2H，CH)，3.46-3.38(m，1H，CH)，2.41(s，3H，CH3)，2.15-1.94(m，2H，CH)，1.62(s，6H，CH3×2)；13C NMR(150MHz，DMSO-d6)δ174.31，169.69，168.52，165.01，159.96，158.25，155.34，149.67，146.98，143.79，141.36，140.79，134.59，130.06，128.09，126.08，121.59，120.49，118.62，59.08，51.59，49.85，46.79(q，JC-F＝24.0Hz)，35.75，29.79，21.93，21.91，21.89，16.43；ESI-MS：m/z＝633[M+H]+。
中间体F-3的合成
(2S，4R)-4-(5-(甲氧基羰基)吡啶-2-酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到淡黄色固体52mg，产率：49％。1H NMR((600MHz，DMSO-d6)δ11.06(s，1H，NH)，9.31-9.22(m，1H，NH)，9.11(d，J＝1.5Hz，1H，Ar-H)，8.60(d，J＝5.2Hz，1H，Ar-H)，8.49(dd，J＝8.1，2.1Hz，1H，Ar-H)，8.18(d，J＝8.2Hz，1H，Ar-H)，7.56(s，1H，Ar-H)，7.52-7.47(m，1H，NH)，7.42(d，J＝4.1Hz，1H，Ar-H)，7.11-7.01(m，1H，NH)，4.78-4.64(m，1H，CH)，4.45-4.32(m，1H，CH)，3.92(s，3H，CH3)，3.91-3.85(m，1H，CH)，3.61-3.53(m，1H，CH)，2.41(s，3H，CH3)，2.39-2.32(m，1H，CH)，2.11-1.98(m，1H，CH)，1.62(s，6H，CH3×2)；ESI-MS：m/z＝620[M+H]+。
中间体F-4的合成
2-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基)吡啶-5-甲酸甲酯
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类黄色固体30mg，产率：45％。1H NMR(400MHz，CDCl3-d6)δ8.62(s，1H，NH)，8.57-8.41(m，1H，Ar-H)，7.81(d，J＝6.7Hz，1H，Ar-H)，7.67-7.35(m，2H，Ar-H)，7.33-7.24(m，1H，Ar-H)，7.20(s，1H，NH)，7.09(s，1H，NH)，6.36(d，J＝6.3Hz，1H，Ar-H)，6.20(s，1H，NH)，4.80-4.66(m，1H，CH)，4.64-4.50(m，1H，CH)，4.18-3.98(m，1H，CH)，3.74(s，3H，CH3)，3.62(s，1H，CH)，2.62-2.44(m，1H，CH)，2.27(s，4H，CH)，1.57(s，6H，CH3×2)；113C NMR(101MHz，CDCl3-d6)δ175.15，158.59，155.46，149.35，148.75，141.29，135.45，131.05，129.98，127.58，125.34，121.05，120.79，115.28，110.03，58.79，55.45，51.05，48.72，46.73(q，JC-F＝24.0Hz)，35.49，21.89，21.87，21.86，16.73；ESI-MS：m/z＝592[M+H]+。
中间体F-5的合成
2-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基)嘧啶-5-甲酸甲酯
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类黄色固体39mg，产率：55％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.03(s，1H，NH)，8.84-8.71(m，2H，Ar-H)，8.60(d，J＝5.1Hz，1H，Ar-H)，8.51-8.44(m，1H，NH)，7.55(s，1H，Ar-H)，7.49-7.44(m，1H，NH)，7.41(d，J＝4.7Hz，1H，Ar-H)，7.07-6.98(m，1H，NH)，4.72-4.59(m，1H，CH)，4.48-4.31(m，1H，CH)，3.96-3.86(m，1H，CH)，3.80(s，3H，CH3)，3.55-3.42(m，1H，CH)，2.40(s，3H，CH3)，2.28-2.04(m，2H，CH)，1.62(s，6H，CH3×2)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ173.28，165.15，159.03，158.59，156.25，149.36，141.48，131.06，129.51，128.31，125.43，121.58，120.63，116.28，60.26，56.02，52.65，49.69，46.75(q，JC-F＝24.0Hz)，34.59，21.85，21.84，21.82，16.74；ESI-MS：m/z＝593[M+H]+。
中间体F-6的合成
(2S，4R)-4-((4-(甲氧基羰基)苯基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体48mg，产率：44％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.96(s，1H，NH)，8.60(d，J＝5.1Hz，1H，Ar-H)，8.45-8.35(m，1H，NH)，8.16(d，J＝8.3Hz，2H，Ar-H)，7.95(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)，7.54(s，1H，Ar-H)，7.44-7.40(m，1H，NH)，7.40-7.35(m，1H，Ar-H)，7.05-6.92(m，1H，NH)，4.38-4.20(m，1H，CH)，3.91-3.87(m，1H，CH)，3.87(s，3H，CH3)，3.67-3.55(m，1H，CH)，3.12-3.03(m，1H，CH)，2.40(s，3H，CH3)，2.09-1.94(m，1H，CH)，1.90-1.72(m，1H，CH)，1.61(s，6H，CH3×2)；ESI-MS：m/z＝655[M+H]+。
中间体F-7的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体55mg，产率：48％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.05(s，1H，NH)，8.60(d，J＝4.9Hz，1H，Ar-H)，7.98(d，J＝7.6Hz，2H，Ar-H)，7.70-7.60(m，1H，NH)，7.58-7.52(m，3H，Ar-H)，7.50-7.44(m，1H，NH)，7.44-7.38(m，1H，Ar-H)，7.07-6.96(m，1H，NH)，4.50(s，2H，CH2)，4.41-4.27(m，1H，CH)，4.08-3.95(m，1H，CH)，3.86(s，3H，CH3)，3.63-3.57(m，1H，CH)，3.46-3.38(m，1H，CH)，2.41(s，3H，CH3)，2.15-1.98(m，2H，CH)，1.61(s，6H，CH3×2)；ESI-MS：m/z＝669[M+H]+。
中间体F-8的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(叔丁基)吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体50mg，产率：47％。ESI-MS：m/z＝615[M+H]+。
中间体F-9的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-环丁基吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体45mg，产率：45％。ESl-MS：m/z＝613[M+H]+。
中间体F-10的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1-甲基环丙基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体37mg，产率：50％。ESI-MS：m/z＝613[M+H]+。
中间体F-11的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(1-氰基环丙基)吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体48mg，产率：49％。ESI-MS：m/z＝624[M+H]+。
中间体F-12的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1-(三氟甲基)环丙基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体36mg，产率：48％。ESI-MS：m/z＝667[M+H]+。
中间体F-13的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体42mg，产率：53％。ESI-MS：m/z＝670[M+H]+。
中间体F-14的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(叔丁基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体38mg，产率：49％。ESI-MS：m/z＝616[M+H]+。
中间体F-15的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-环丙基嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体40mg，产率：39％。ESI-MS：m/z＝600[M+H]+。
中间体F-16的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1-甲基环丙基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体42mg，产率：41％。ESI-MS：m/z＝614[M+H]+。
中间体F-17的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体51mg，产率：42％。ESI-MS：m/z＝615[M+H]+。
中间体F-18的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(二乙基氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体55mg，产率：56％。ESI-MS：m/z＝631[M+H]+。
中间体F-19的合成
(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-氯-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
合成方法与合成中间体F-1相同，得到类白色固体43mg，产率：46％。ESI-MS：m/z＝689[M+H]+。
4-取代-L-脯氨酰胺类PI3Kα/HDAC6双重抑制剂的合成(实施例1-实施例22)
带有酯基的中间体F与羟胺在碱性条件下反应生成含有异羟肟酸基团的4-取代-L-脯氨酰胺类PI3Kα/HDAC6双重抑制剂。反应中所用的碱氢氧化钠(NaOH)，所用溶剂为四氢呋喃/甲醇(THF/MeOH)，反应温度为室温，反应时间为1小时。
下面给出合成终产物的实施例。这些实施例与上面的例子都是为了举例说明，不应被理解为对本发明范围的限制。此外应理解，在阅读了本发明的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
(2S，4R)-4-(4-(羟基氨基甲酰基)苯甲酰基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
将中间体4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯(49mg，0.08mmol)溶解在等体积四氢呋喃和甲醇的混合溶剂中，每0.1mmol的底物加入1ml的甲醇。冰浴搅拌条件下加入NaOH(26mg，0.64mmol)和NH2OH(50wt.％in water)，每1mmol的底物加入1ml的NH2OH。室温条件下，反应一个小时，反应结束后调节混合物的PH至7得到粗品。粗品用薄层色谱(25％MeOH/CH2Cl2)分离提纯得到白色固体(25mg，0.04mmol)，产率：40％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.09(s，1H，NH)，10.77(s，1H，NH)，8.91(s，1H，OH)，8.59(d，J＝4.6Hz，1H，Ar-H)，8.31-8.19(m，1H，NH)，7.94(d，J＝7.4Hz，2H，Ar-H)，7.85(d，J＝7.8Hz，2H，Ar-H)，7.53(d，J＝8.2Hz，2H，Ar-H)，7.43-7.38(m，1H，NH)，7.10-6.97(m，1H，NH)，4.66-4.55(m，1H，CH)，4.46-4.31(m，1H，CH)，3.94-3.80(m，1H，CH)，3.58-3.49(m，1H，CH)，2.40(s，3H，CH3)，2.35-2.23(m，1H，CH)，2.22-2.04(m，1H，CH)，1.61(s，6H，CH3×2)；13CNMR(150MHz，DMSO-d6)δ174.02，171.18，166.22，158.99，149.57，146.09，145.50，141.41，132.63，130.12，129.73，129.09，127.95，127.23，123.63，121.75，120.72，117.70，51.47，46.80(q，JC-F＝24.0Hz)，31.62，30.30，29.48，28.32，22.55，21.92，14.42；ESI-HRMS：m/zcalcd for C27H28F3N7O5S[M+H]+620.1898；found 620.1900。
实施例2
(2S，4R)-4-(2-(4-(羟基氨基甲酰基)苯基)乙酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成4-(2-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基)-2-氧代乙基)苯甲酸甲酯，得到类白色固体17mg，产率：50％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.43(s，1H，NH)，9.12-8.94(m，1H，NH)，8.66(s，1H，OH)，8.56(d，J＝4.2Hz，1H，Ar-H)，7.92-7.74(m，1H，NH)，7.65(d，J＝7.7Hz，2H，Ar-H)，7.52(s，1H，Ar-H)，7.49-7.44(m，1H，NH)，7.38(d，J＝2.6Hz，1H，Ar-H)，7.27(d，J＝7.5Hz，2H，Ar-H)，7.06-6.93(m，1H，NH)，4.38-4.23(m，2H，CH)，4.19-4.07(m，1H，CH)，3.78-3.70(m，1H，CH)，3.44(s，2H，CH2)，2.37(s，3H，CH3)，2.11-2.04(m，1H，CH)，1.99-1.90(m，1H，CH)，1.58(s，6H，CH3×2)；13C NMR(150MHz，DMSO-d6)δ174.00，172.57，171.86，164.96，160.02，158.96，150.46，149.56，147.46，144.59，141.83，141.43，132.36，129.36，127.86，127.24，121.76，120.72，51.91，46.78(q，JC-F＝24.0Hz)，42.34，31.62，30.29，29.49，29.17，22.57，21.91，14.43；ESI-HRMS：m/z calcd for C28H30F3N7O5S[M+H]+634.2054；found 634.2059。
实施例3
(2S，4R)-4-(5-(羟基氨基甲酰基)吡啶-2-酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(5-(甲氧基羰基)吡啶-2-酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到黄色固体14mg，产率：30％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.40-10.96(m，2H，NH)，9.52-9.30(m，1H，NH)，9.16(s，1H，OH)，9.00(s，1H，Ar-H)，8.60(d，J＝4.5Hz，1H，Ar-H)，8.40-8.28(m，1H，Ar-H)，8.15-8.06(m，1H，Ar-H)，7.59-7.50(m，2H，Ar-H)，7.45-7.37(m，1H，NH)，7.11-7.00(m，1H，NH)，4.78-4.63(m，1H，CH)，4.45-4.35(m，1H，CH)，3.95-3.86(m，1H，CH)，3.61-3.48(m，1H，CH)，2.40(s，3H，CH3)，2.38-2.30(m，1H，CH)，2.12-2.00(m，1H，CH)，1.61(s，6H，CH3×2)；13C NMR(150MHz，DMSO-d6)δ174.04，173.98，169.09，163.92，158.98，151.85，149.58，147.35，141.37，136.99，131.19，130.12，128.37，127.85，122.40，121.78，120.75，55.42，49.03，46.79(q，JC-F＝24.0Hz)，31.62，30.29，29.48，22.56，21.91，14.43；ESI-HRMS：m/z calcd for C26H27F3N8O5S[M+H]+621.1850；found621.1849。
实施例4
(2S，4R)-4-((5-(羟基氨基甲酰基)吡啶-2一基)氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟一2一甲基丙烷一2一基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成2-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2一基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基)吡啶-5-甲酸甲酯，得到黄色固体15mg，产率：43％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.23(s，1H，NH)，8.57(s，1H，OH)，8.55(s，1H，Ar-H)，7.78(d，J＝8.5Hz，1H，Ar-H)，7.68-7.61(m，1H，NH)，7.52-7.44(m，2H，Ar-H)，7.39-7.36(m，1H，Ar-H)，7.35-7.28(m，1H，NH)，7.25-7.17(m，1H，NH)，7.04-6.93(m，1H，NH)，6.50(d，J＝8.9Hz，1H，Ar-H)，4.60-4.54(m，1H，CH)，4.41-4.32(m，1H，CH)，4.21-4.12(m，1H，CH)，3.90-3.84(m，1H，CH)，2.36(s，3H，CH3)，2.15-2.12(m，1H，CH)，1.98-1.93(m，1H，CH)，1.57(s，6H，CH3×2)；13C NMR(100MHz，CDCl3-d6)δ173.45，166.29，159.95，159.43，151.04，148.97，141.43，140.47，138.81，138.16，132.82，129.56，126.75，121.16，120.69，115.46，59.01，51.75，46.85(q，JC-F＝24.0Hz)，35.43，29.68，21.89，21.87，15.43，12.04；ESI-HRMS：m/z calcdfor C25H27F3N8O4S[M+H]+593.1901；found 593.1909。
实施例5
(2S，4R)-4-((5-(羟基氨基甲酰基)嘧啶-2-基)氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成2-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基)氨基)嘧啶-5一甲酸甲酯，得到黄色固体36mg，产率：67％。1H NMR(600MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H，NH)，11.09(s，1H，OH)，8.82-8.75(m，1H，Ar-H)，8.74-8.69(m，1H，Ar-H)，8.69-8.61(m，1H，NH)，8.60(d，J＝5.0Hz，1H，Ar-H)，8.42-8.28(m，1H，NH)，7.55(s，1H，Ar-H)，7.51-7.46(m，1H，NH)，7.41(d，J＝4.2Hz，1H，Ar-H)，7.09-6.97(m，1H，NH)，4.72-4.58(m，1H，CH)，4.44-4.30(m，1H，CH)，3.97-3.83(m，1H，CH)，3.58-3.48(m，1H，CH)，2.40(s，3H，CH3)，2.26-2.15(m，1H，CH)，2.13-2.01(m，1H，CH)，1.61(s，6H，CH3×2)；13C NMR(150MHz，DMSO-d6)δ174.02，173.99，166.29，163.22，162.82，160.24，158.98，149.57，141.37，131.60，129.72，127.85，125.97，121.76，120.74，59.27，51.63，46.79(q，JC-F＝24.0Hz)，35.43，31.76，29.50，22.57，21.90，16.62；ESI-HRMS：m/z calcd for C24H26F3N9O4S[M+H]+594.1854；found 594.1851。
实施例6
(2S，4R)-4-((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-((4-(甲氧基羰基)苯基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到黄色固体18mg，产率：43％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.36(s，1H，NH)，10.09(s，1H，OH)，9.34-9.12(m，1H，NH)，8.59(d，J＝4.3Hz，1H，Ar-H)，8.53-8.36(m，1H，NH)，7.97(d，J＝7.6Hz，2H，Ar-H)，7.89(d，J＝7.9Hz，2H，Ar-H)，7.54(s，1H，Ar-H)，7.49-7.43(m，1H，NH)，7.42-7.36(m，1H，Ar-H)，7.06-6.93(m，1H，NH)，4.35-4.17(m，1H，CH)，3.91-3.77(m，1H，CH)，3.76-3.61(m，1H，CH)，3.07-2.96(m，1H，CH)，2.39(s，3H，CH3)，2.12-1.95(m，1H，CH)，1.89-1.73(m，1H，CH)，1.60(s，6H，CH3×2)；13C NMR(150MHz，DMSO-d6)δ173.80，169.24，160.14，158.97，149.58，147.90，145.89，141.35，135.91，131.08，130.12，129.60，127.85，126.24，124.71，121.78，120.76，58.43，52.30，46.78(q，JC-F＝23.0Hz)，31.62，30.29，29.48，22.56，21.90，14.43；ESI-HRMS：m/z calcdfor C26H28F3N7O6S2[M+H]+656.1568；found656.1579。
实施例7
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到黄色固体17mg，产率：25％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.16(s，1H，NH)，8.59(s，1H，OH)，7.94(d，J＝6.6Hz，1H，Ar-H)，7.93-7.84(m，1H，NH)，7.82-7.69(m，1H，NH)，7.58-7.49(m，2H，Ar-H)，7.47-7.31(m，4H，Ar-H)，7.20-7.14(m，1H，NH)，7.10-6.93(m，1H，NH)，4.44(s，2H，CH2)，4.38-4.26(m，1H，CH)，4.17-4.09(m，1H，CH)，4.09-3.96(m，1H，CH)，3.95-3.76(m，1H，CH)，2.41(s，3H，CH3)，2.21-2.11(m，1H，CH)，2.01-1.91(m，1H，CH)，1.61(s，6H，CH3×2)；13C NMR(150MHz，DMSO-d6)δ173.76，170.35，163.24，158.97，149.57，143.57，141.33，136.83，132.02，131.60，129.72，129.14，128.43，127.84，126.96，121.77，120.74，65.50，46.78(q，JC-F＝24.0Hz)，45.72，31.62，30.28，29.48，22.56，21.90，19.12，8.99；ESI-HRMS：m/z calcd for C27H30F3N7O6S2[M+H]+670.1724；found 670.1736。
实施例8
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(叔丁基)吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(叔丁基)吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到白色固体20mg，产率：36％。ESI-MS：m/z＝616[M+H]+。
实施例9
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-环丁基吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-环丁基吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)-1，2-二甲酰氨，得到白色固体30mg，产率：41％。ESI-MS：m/z＝614[M+H]+。
实施例10
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1-甲基环丙基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1-甲基环丙基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到白色固体29mg，产率：39％。ESI-MS：m/z＝614[M+H]+。
实施例11
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(1-氰基环丙基)吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(1-氰基环丙基)吡啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)一1，2-二甲酰氨，得到白色固体29mg，产率：39％。ESI-MS：m/z＝625[M+H]+。
实施例12
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1-(三氟甲基)环丙基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1-(三氟甲基)环丙基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到白色固体21mg，产率：29％。ESI-MS：m/z＝668[M+H]+。
实施例13
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到白色固体26mg，产率：31％。ESI-MS：m/z＝671[M+H]+。
实施例14
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(叔丁基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)-4-(环丙烷磺酰氨基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(叔丁基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到白色固体32mg，产率：26％。ESI-MS：m/z＝617[M+H]+。
实施例15
a)(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-环丙基嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-环丙基嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到白色固体39mg，产率：32％。ESI-MS：m/z＝601[M+H]+。
实施例16
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1-甲基环丙基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1一三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-甲基-5-(2-(1-甲基环丙基)嘧啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到白色固体35mg，产率：41％。ESI-MS：m/z＝615[M+H]+。
实施例17
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(氮杂环丁烷-1-基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到白色固体37mg，产率：39％。ESI-MS：m/z＝616[M+H]+。
实施例18
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(二乙基氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(5-(2-(二乙基氨基)嘧啶-4-基)-4-甲基噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到白色固体39mg，产率：45％。ESI-MS：m/z＝632[M+H]+。
实施例19
(2S，4R)-4-(((4-(羟基氨基甲酰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-氯-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨
本实施例采用同实施例1相同的实施方式，不同之处在于将4-(((3R，5S)-5-氨基甲酰基-1-((4-甲基-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)氨基甲酰基)吡咯烷-3-基))氨基甲酰基)苯甲酸甲酯替换成(2S，4R)-4-(((4-(甲氧基羰基)苯基)甲基)磺酰氨基)-N1-(4-氯-5-(2-(1，1，1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)吡啶-4-基)噻唑-2-基)吡咯烷-1，2-二甲酰氨，得到白色固体26mg，产率：34％。ESI-MS：m/z＝691[M+H]+。
测试例1：本发明化合物对PI3Kα、HDAC6的抑制活性
本发明化合物的体外PI3Kα酶抑制活性都是通Kinase-Glo Plus LuminescentKinase assay方法来测定的。首先将待测化合物稀释至所需浓度，每个化合物各取2.5μL加入到384孔板中。用50mM HEPES(pH 7.5)，3mM MgCl2，1mM EGTA，100mM NaCl，0.03％CHAPS，2mM DTT制备1x的激酶缓冲液。用激酶缓冲液将PI3Kα稀释至浓度为1.65nM，取2.5μL上述激酶溶液也加入384孔板中。用激酶缓冲液将底物PIP2和ATP稀释至浓度为50μM和25μM，取5μL的底物溶液加入到上述的384孔板。室温反应1小时后，取10μL的Kinase-Glo reagent试剂加入到测定板的反应孔中以终止反应。将得到的混合物离心，然后在振荡器上缓慢摇15分钟，用酶标仪测量其RLM值。抑制率的计算方法如下：抑制率(％)＝(sample RLM-min)/(max-min)×100，“min”表示无酶对照孔的RL，“max”代表含有DMSO对照孔的RLM。IC50值用Graphpad 5.0软件计算。
本发明化合物的体外HDAC6酶抑制活性通过以下步骤测定。首先将待测化合物稀释至所需浓度，用1x激酶缓冲液将激酶稀释至所需浓度。在1x测定缓冲液中加入胰蛋白酶和Ac肽底物，制成底物溶液。将15μL的酶溶液转移到测定板，室温孵育15分钟，每孔加入10μL底物溶液开始反应。用Paradigm测定数值，激发波长为355nm，发射波长为460nm。抑制率的计算方法如下：抑制率(％)＝(Max-Signal)/(Max-Min)*100，Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+(IC50/X)*HillSlope；Y是抑制百分比，X是化合物浓度。
表1发明化合物对P13Kα的抑制活性
“++++”代表1-5nM；“+++”代表5-10nM；“++”代表10-50nM；“+”代表>50nM。
由表1抑酶活性数据可知，本发明中的绝大部分化合物具有显著的PI3Kα/HDAC6双重抑酶活性。在这些具有显著PI3Kα/HDAC6双重抑制活性的化合物中，大部分化合物对PI3Kα的抑制活性优于与或Alpelisib相当，同时对HDAC6的抑制活性与SAHA相当。
测试例2：本发明化合物对PI3Kα的选择性测试
本发明化合物的体外酶抑制活性都是通过ADP-Glo Kinase assay方法来测定的。选择已经上市的PI3Kα小分子抑制剂Alpelisib作为阳性对照。首先将待测化合物稀释至所需浓度，每个化合物各取2.5μL加入到384孔板中。用50mM HEPES(pH 7.5)，3mM MgCl2，1mMEGTA，100mM NaCl，0.03％CHAPS，2mM DTT制备1x的激酶缓冲液。用激酶缓冲液将PI3Kα稀释至浓度为1.65nM，PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ则分别稀释为4.8nM，7.6nM和5.7nM，取2.5μL上述激酶溶液也加入384孔板中。用激酶缓冲液将底物PIP2和ATP稀释至浓度为50μM和25μM，取5μL的底物溶液加入到上述的384孔板。先将5μL的反应混合物转移到新的384孔板中，然后再加入5μL的ADP-Glo reagent试剂以终止反应。将混合物离心，震荡40分钟后，每孔加入10μL激酶检测试剂，继续震摇1小时，最后用酶标仪测量其RLM值。抑制率的计算方法如下：抑制率(％)＝(sample RLM-min)/(max-min)×100，“min”表示无酶对照孔的RL，“max”代表含有DMSO对照孔的RLM。IC50值用Graphpad 5.0软件计算。
PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ酶抑制活性的测试可反映化合物对PI3Kα的亚型选择性抑制情况。以下通过本发明部分具有显著PI3Kα抑酶活性、HDAC6抑酶活性的化合物对PI3Kα、PI3Kβ、PI3Kγ和PI3Kδ的抑制活性数据，进一步阐述其对P13Kα的选择性。不应理解为本发明仅以下化合物具有PI3Kα选择性抑制作用。
表2化合物对PI3Kα的选择性测试
“++++”代表100-500；“+++”代表50-100；“++”代表10-50；“+”代表5-10。
由表2可知，符合通式(I)的实施例3、7、12、13、16对PI3Kα具有优良的亚型选择性，其选择性优于或与Alpelisib相当，说明本发明中实施例3、7、12、13、16在显著抑制剂PI3Kα亚型的同时，有利于降低对其他多种PI3K亚型抑制所产生的毒性。
测试例3：本发明化合物对HDAC6的选择性测试
HDACI、HDAC2、HDAC3、HIDAC6、HDAC8、HDAC10、HDAC11酶抑制活性的测试可反映化合物对HDAC6的亚型选择性抑制情况。以下通过本发明部分具有显著PI3Kα抑酶活性、HDAC6抑酶活性的化合物对HDAC1、2、3、6、8、10、11的抑制活性数据，进一步阐述其对HDAC6的选择性。不应理解为本发明仅以下化合物具有HDAC6选择性抑制作用。化合物对其他HDAC亚型抑制活性的测试方法参考HDAC1抑制活性的测试方法，仅在测试相应酶抑制活性时更换催化反应体系底物。
表3化合物对HDAC6的选择性测试
“++++”代表100-500；“+++”代表50-100；“++”代表10-50；“+”代表5-10。
由表3可知，广谱HDACs抑制剂SAHA抑制各HDAC亚型的活性相对接近，缺少对HDAC6亚型的选择性，而符合通式(I)的实施例3、7、12、13、16对HDAC6具有优良的亚型选择性。说明本发明中实施例3、7、12、13、16在显著抑制剂HDAC6亚型的同时，有利于降低其他多种HDAC亚型抑制所产生的毒性。
以上结果表明，本发明中的化合物能够同时高选择性地抑制与跟肿瘤发生发展密的P13Kα和HDAC6，这非常有利于降低因抑制其他多种具有正常生理功能的PI3K和HDAC亚型而产生的毒性。因此，本发明中的化合物是一类新型的有良好应用前景的抗肿瘤化合物。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范国。以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂，其为如下列具有通式(I)的化合物及其药学上可接受的盐或溶剂合物：
其中，
X、Y、Z均为CH；或X、Y为CH，Z为N；或X、Z为CH，Y为N；或Y、Z为CH，X为N；
R1选自C1-6烷基、氟代C1-6烷基、C3-6环烷基、氟代C3-6环烷基、C3-6杂环烷基或氟代C3-6杂环烷基；
R2选自氢、卤素、C1-6烷基、氟代C1-6烷基、C3-6环烷基、氟代C3-6环烷基或C3-6杂环烷基；
L为环A为至少被1个R3取代的C6-14芳基、C5-14芳杂基，R3独立地选自氢、卤素、羟基、氰基、氨甲酰基、三氟甲基、三氟甲氧基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C2-6不饱和脂链烃基、N(R4)2、NR4OR4、NR4N(R4)2、SO2N(R4)2、NR4SO2R4、NR4CON(R4)2、NR4COOR4、NR4COR4、CON(R4)2，其中，R4独立地选自氢、C1-6烷基或C2-6不饱和脂链烃基。
2.根据权利要求1所述的PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂，其特征在于，R1选自
3.根据权利要求1所述的PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂，其特征在于，R2选自甲基或氯。
4.根据权利要求1所述的PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂，其特征在于，具有通式(I)的化合物选自：
5.一种权利要求1-4中任一项所述的PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂在用于制备抗肿瘤药物中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括实体瘤或血液瘤。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述PI3Kα/HDAC6亚型选择性双重抑制剂以组合物的形式起作用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述组合物还包括至少一种药用载体或赋形剂。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述组合物还包括至少一种抗癌剂。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述组合物的剂型为临床上或药学上可接受的剂型。
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