CN116904349A

CN116904349A - 一种具有好氧反硝化能力的粘着剑菌及其应用

Info

Publication number: CN116904349A
Application number: CN202310711527.4A
Authority: CN
Inventors: 刘莉; 颜薇芝; 史吉平; 史晶晶
Original assignee: Shanghai Advanced Research Institute of CAS
Current assignee: Shanghai Advanced Research Institute of CAS
Priority date: 2023-06-15
Filing date: 2023-06-15
Publication date: 2023-10-20
Anticipated expiration: 2043-06-15
Also published as: CN116904349B

Abstract

本发明涉及环境微生物技术领域，特别是涉及一株具有好氧反硝化能力的高效脱氮菌株：粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1及其应用，保藏编号为CCTCC NO：M 20221868。所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1具有很强的反硝化能力，能有效解决水体中的氮素污染问题，NO₃ ^‑‑N和NO₂ ^‑‑N降解率可分别达到98.66％和77.37％。所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1可用于治理多种污染水体，强化水处理体系的脱氮效果，在污染水体治理中具有较高的应用价值。

Description

一种具有好氧反硝化能力的粘着剑菌及其应用

技术领域

本发明涉及环境微生物技术领域，特别是涉及一种具有好氧反硝化能力的粘着剑菌及其应用。

背景技术

随着人类社会的快速发展，水环境污染问题日益严重。生活污水、工业废水和养殖废水的超标排放，使水体中硝酸盐和亚硝酸盐浓度过高，引起水体富营养化，人畜若长期饮用会引起中毒，而且一些有毒藻类的生长与大量繁殖会排放大量毒素于水体中，导致水生动物的大量死亡，从而严重破坏水体的生态平衡。传统的生物脱氮技术由好氧自养硝化作用和厌氧异养反硝化作用共同完成。新型的好氧反硝化细菌的发现，可以使硝化和反硝化在同一反应器中完成，减少硝酸盐和亚硝酸盐的积累，加快反应过程，减小反应器容积，缩短水力停留时间，降低运行成本，提高系统抗冲击能力，处理高浓度的含氮废水。因而逐渐成为目前生物脱氮研究的热点。

因此，筛选分离出高效的好氧反硝化菌，能够有效提高污染水体的脱氮效率和稳定性，对提高污水处理效率和经济性有着重要的理论价值和实际意义。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种具有好氧反硝化能力的粘着剑菌及其应用，用于解决现有技术中的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种一株好氧反硝化菌，保藏编号为：CCTCC NO：M 20221868。

本发明还提供一种菌剂，所述菌剂中包含粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1。

本发明还提供所述菌剂的制备方法，包括如下步骤：将粘着剑菌Ensiferadhaerens Dn1的纯菌种接种于富集培养基培养，培养结束后收集菌液即得到所述菌剂。

本发明还提供所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1在污水处理中的应用。

本发明还提供一种污水处理的方法，包括如下步骤：将所述粘着剑菌Ensiferadhaerens Dn1或所述菌剂接种至污水中从而对污水进行处理。

如上所述，本发明的具有好氧反硝化能力的粘着剑菌及其应用，具有以下有益效果：能有效降低污染水体中的硝酸盐、亚硝酸盐的含量，且操作方便、处理效率高、成本低、无污染，在好氧反硝化脱氮方面具有很大的工程应用潜力和广阔的应用前景。

附图说明

图1是实施例2中的菌株Dn1的系统进化树；

图2是实施例3中的C/N和接种量对菌株Dn1反硝化脱氮的影响；

图3是实施例3中的菌株Dn1反硝化效果验证，A图以硝酸盐(NO₃ ^—N)为唯一氮源，B图以亚硝酸盐(NO₂ ^—N)为唯一氮源。

具体实施方式

本发明第一方面提供一株好氧反硝化菌，经鉴定为粘着剑菌Ensifer adhaerens，保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，菌种名称：粘着剑菌Dn1 Ensifer adhaerens Dn1，保藏编号为：CCTCC NO：M 20221868，保藏日期为2022年12月5日，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。

反硝化菌是指一类能将硝态氮(NO₃ ^--N)或亚硝态氮(NO₂ ^--N)还原为气态氮(N₂)的菌群。

所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1为革兰氏阴性菌，呈短杆状，菌落形态为圆形，呈白色，透明有光泽，表面光滑，凸透镜状，边缘规则。

所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1，含有如SEQ ID NO.1所示的基因序列。

所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1，能够实现好氧反硝化。所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1在反硝化验证实验中，NO₃ ^--N和NO₂ ^--N的去除率分别为98.66％和77.37％。

所述NO₃ ^--N的去除率通过下述步骤得到：

将粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1纯菌种接种于富集培养基中培养12h后获得菌液，将菌液以1％(v/v)的接种量接种于DM-1培养基中，DM-1培养基的配方为：KNO₃ 0.7g/L，琥珀酸钠2.81g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，CaCl₂ 0.15g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，K₂HPO₄ 2.5g/L，pH 7.0～7.2。于30℃，50rpm恒温振荡培养2天，测定NO₃ ^--N的浓度，并按照公式1)计算NO₃ ^--N的去除率。

硝酸盐(NO₃ ^--N)去除率＝(A0–A1)/A0×100％1)

其中：A0为原始的硝酸盐浓度；A1为反应后的硝酸盐浓度。

所述NO₂ ^--N的去除率通过下述步骤得到：

将粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1纯菌种接种于富集培养基中培养12h后获得菌液，将菌液以1％(v/v)的接种量接种于DM-2培养基中，DM-2培养基的配方为：NaNO₂0.5g/L，琥珀酸钠2.81g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，CaCl₂ 0.15g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，K₂HPO₄2.5g/L，pH 7.0～7.2。于30℃，50rpm恒温振荡培养2天，测定NO₂ ^--N的浓度，并按照公式2)计算NO₂ ^--N的去除率。

亚硝酸盐去除率＝(B0–B1)/B0×100％2)

式中：B0为原始亚硝酸盐浓度；B1为反应后的亚硝酸盐浓度。

在一种实施方式中，所述菌剂为液体菌剂，所述液体菌剂中粘着剑菌Ensiferadhaerens Dn1的浓度至少为1×10⁸CFU/mL。

在本发明的某些实施方式中，将粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1纯菌种接种于富集培养基中培养。

在本发明的某些实施方式中，以富集培养基的总体积为基准，富集培养基的配方为：NH4Cl 0.1～0.3g/L，KNO₃ 0.1～0.5g/L，C6H8O7·H₂O 2～3g/L，Na₂CO₃ 1.0～2.0g/L，MgSO₄·7H₂O0.1～1.0g/L，CaCO₃ 1～2g/L，K₂HPO₄ 0.1～0.3g/L，KH₂PO₄ 0.1～0.3g/L。

在本发明的某些实施方式中，以富集培养基的总体积为基准，富集培养基的配方为：NH4Cl 0.2g/L，KNO₃ 0.35g/L，C6H8O7·H₂O 2.55g/L，Na₂CO₃ 1.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，CaCO₃ 1.25g/L，K₂HPO₄ 0.156g/L，KH₂PO₄ 0.144g/L。

在本发明的某些实施方式中，培养温度为20～38℃。具体的，培养温度例如为20～25℃、25～30℃、30～35℃、35～38℃。

在本发明的某些实施方式中，培养方式为振荡培养。振荡的转速为100～300rpm。振荡的转速例如为100～150rpm、150～200rpm、200～250rpm、250～300rpm。

在本发明的某些实施方式中，将所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1的纯菌种接种至富集培养基中培养20～28h后再接种至另一富集培养基中扩大培养，培养结束后收集菌液获得所述菌剂。

在一种实施方式中，扩大培养的次数为1～6次。在一种实施方式中，每次扩大培养的培养时间为20～28h。

本发明的粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1还可以制备成固体菌剂使用。所述固体菌剂为液体菌剂经干燥后得到的菌粉。

在一种实施方式中，所述污水处理为污水脱氮处理。

所述污水选自水产养殖尾水、畜禽养殖废水、河道污染水体等。所述水产养殖尾水是指繁殖、培育和收获水生动植物的生产活动中产生的向环境水体、污水集中处理设施等外环境排放的水。所述水产养殖尾水选自养鱼尾水、虾蟹养殖尾水。所述畜禽养殖废水是指养猪废水、养鸡废水、养鸭废水、养牛废水、养羊废水等。所述河道污染水体可以指江河、湖泊、运河、渠道、水库等地表水体或海域水体。

在一种实施方式中，将所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1或所述菌剂接种至污水中从而对污水进行脱氮处理。所述污水处理的方法可以降低污水中的NO₃ ^--N、NO₂ ^--N和TN。

所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1液体菌剂的接种量为污水水体体积的0.5～5％。例如所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1液体菌剂的接种量为污水水体体积的0.5～1％、1～1.5％、1.5～2％、2～3％、3～4％、4～5％。优选的，所述粘着剑菌Ensiferadhaerens Dn1液体菌剂的接种量为污水水体体积的1～3％。

对污水进行处理时温度为5～40℃，优选为20～30℃。

对污水进行处理时体系的pH值为5～9，优选为6～8。

对污水进行处理时体系的DO(溶解氧)值为0.2～8mg/L，优选为0.2～2mg/L。

对污水进行处理时体系的C/N为1～10。例如C/N为1～2.5、2.5～5、5～7.5、7.5～10。优选为2.5～7.5。更优选的为3～5。

对污水进行处理的时间为10～50小时。具体的处理时间可以根据污水的特点进行调整，例如10～20小时、20～30小时、30～40小时或40～50小时。

本发明的高效好氧反硝化菌Dn1，能有效降低污染水体中的硝酸盐、亚硝酸盐的含量，在好氧反硝化脱氮方面具有很大的工程应用潜力和广阔的应用前景。

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围；在本发明说明书和权利要求书中，除非文中另外明确指出，单数形式“一个”、“一”和“这个”包括复数形式。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

实施例1：好氧反硝化菌的筛选及性能测定

本发明的粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1从虾塘养殖底泥中分离筛选得到，分离方法如下：

初筛：取5mL底泥至45mL灭菌的富集培养基中。富集培养基的配方为：NH4Cl 0.2g/L，KNO₃ 0.35g/L，C6H8O7·H₂O 2.55g/L，Na₂CO₃ 1.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，CaCO₃1.25g/L，K₂HPO₄ 0.156g/L，KH₂PO₄ 0.144g/L。于30℃，200rpm恒温振荡培养1d后，取1mL富集培养液于含有50mL富集培养基的三角瓶中，于30℃，200rpm恒温振荡培养1d。将富集液进行梯度稀释，取10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-7多个梯度涂布于初筛培养基上。初筛培养基配方为：NH4Cl 0.2g/L，KNO₃ 0.35g/L，C6H8O7·H₂O 0.55g/L，Na₂CO₃ 1.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，CaCO₃ 0.25g/L，K₂HPO₄ 0.056g/L，KH₂PO₄ 0.044g/L，琼脂15g/L，pH 7.0～7.2。置于30℃恒温培养箱中培养直至长出单菌落，挑取形态大小不同的单克隆，划线纯化后编号保藏，经分离纯化得到多株菌株完成初筛。

复筛：将初筛获得的单菌落接入富集培养基进行活化，以1％接种量接入溴百里酚蓝(BTB)复筛培养基。BTB培养基的配方为：KNO₃ 0.7g/L，柠檬酸钠0.8g/L，MgSO₄·7H₂O0.5g/L，CaCl₂ 0.15g/L，KH₂PO₄ 0.1g/L，K₂HPO₄ 0.15g/L，1％ BTB 1mL，琼脂15g/L，pH7.0～7.3。1g BTB溶于100mL无水乙醇即得1％ BTB乙醇溶液。在30℃恒温培养箱中培养，挑取周围培养基出现蓝色晕圈的菌株至BTB培养基，划线纯化并编号保藏。

将复筛获得的单菌落分别接入验证培养基(DM-1)进行验证，DM-1培养基的配方为：KNO₃ 0.7g/L，琥珀酸钠2.81g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，CaCl₂ 0.15g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，K₂HPO₄ 2.5g/L，pH 7.0～7.2。定期取样测定OD₆₀₀、NH₄ ⁺-N、NO₃ ^--N、NO₂ ^--N和TN(TotalNitrogen)的浓度，即可得到效果最好的好氧反硝化菌Dn1。其中，菌体生长状态(OD₆₀₀)采用吸光度法测定；NH₄ ⁺-N浓度采用纳氏试剂分光光度法；NO₃ ^--N浓度采用紫外分光光度法(HZ-HJ-SZ-0138)；NO₂ ^--N浓度采用N-(1-萘基)-乙二胺光度法(GB 7493-87)；TN浓度采用紫外分光光度法(HJ 636-2012)。

实施例2：菌株的分子生物学鉴定

提取Dn1的基因组DNA，并以此为模板扩增16S rDNA，引物：16S rDNA-8F：AGAGTTTGATCCTGGCTCA(SEQ ID NO.2)，1492R：GGTTACCTTGTTACGACTT(SEQ ID NO.3)。PCR反应体系(20μL)：模板DNA 5μL，PCR Taqmix 10μL，上下游引物各0.6μL，加ddH₂O至反应体系为20μL。PCR程序：94℃10min，94℃30s，50℃30s，72℃1min，循环35次，72℃10min，16℃10min。PCR产物的纯化和测序由杰李生物医药科技有限公司完成，测序序列登录GenBank进行同源性序列比对分析，应用MEGA 7.0软件构建该菌株系统发育树(图1)。

Dn1的核苷酸有效序列长度为1334bp，核苷酸序列如SEQ ID NO：1。

GCGCCCCGCAAGGGGAGCGGCAGACGGGTGAGTAACGCGTGGGAATCTACCCTTTTCTACGGAATAACGCAGGGAAACTTGTGCTAATACCGTATACGCCCTTCGGGGGAAAGATTTATCGGGAAAGGATGAGCCCGCGTTGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCCATAGCTGGTCTGAGAGGATGATCAGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGCAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGAGTGATGAAGGCCCTAGGGTTGTAAAGCTCTTTCACCGGTGAAGATAATGACGGTAACCGGAGAAGAAGCCCCGGCTAACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGGGCTAGCGTTGTTCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCACGTAGGCGGACATTTAAGTCAGGGGTGAAATCCCGGGGCTCAACCCCGGAACTGCCTTTGATACTGGGTGTCTAGAGTATGGAAGAGGTGAGTGGAATTCCGAGTGTAGAGGTGAAATTCGTAGATATTCGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCACTGGTCCATTACTGACGCTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAATGTTAGCCGTCGGGCAGTTTACTGTTCGGTGGCGCAGCTAACGCATTAAACATTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGCAGAACCTTACCAGCCCTTGACATCCCGATCGCGGATTACGGAGACGTTTTCCTTCAGTTCGGCTGGATCGGAGACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCTTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAAGGGGACTGCCGGTGATAAGCCGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTACGGGCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTGGTGACAGTGGGCAGCGAGACCGCGAGGTCGAGCTAATCTCCAAAAGCCATCTCAGTTCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGTTGGAATCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTGGTTCTACCCGAAGGTAGTGCGCTAACCGCAAGGA(SEQ ID NO：1)

经过比对，该序列与NCBI数据库的(NCBI登录号为：CP030264.1)同源性达100％，属于粘着剑菌(Ensifer adhaerens)，将其命名为Ensifer adhaerens Dn1。

实施例3：菌株Dn1的好氧反硝化能力验证

所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1具有高效的好氧反硝化能力。为验证所述效果，进行以下实验：

一、环境因子C/N对所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1的影响研究。在DM-1培养基的基础上，固定初始硝酸盐浓度，变化琥珀酸钠浓度，使DM-1培养基的C/N为1、3、5、10、15。将粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1纯菌种接种于富集培养基中培养12h后，将获得的菌液以10％的接种量接种于DM-1培养基中，于30℃，50rpm恒温振荡培养2d后，测定NO₃ ^--N、NO₂ ^--N和TN的浓度。结果见图2中(A)，在C/N＝5条件下，按照公式1)计算NO₃ ^--N降解率，结果显示NO₃ ^--N降解率达到91.01％，按照公式3)计算TN去除率，TN去除率达到64.23％。

TN去除率＝(C0–C1)/C0×100％3)

式中：C0为原始TN浓度；C1为反应后的TN浓度。

二、所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1最佳接种量的研究。将菌液分别以1％、5％、10％、15％、20％的接种量接入DM-1培养基中，于30℃，50rpm恒温振荡培养，测定。结果见图2(B)，1％的接种量具有更高的TN去除率，在NO₃ ^--N降解率达到91.27％的同时，TN去除率达到84.87％。

三、所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1反硝化效果验证。将粘着剑菌Ensiferadhaerens Dn1纯菌种接种于富集培养基中培养12h后，将获得的菌液以1％的接种量分别接种于DM-1、DM-2培养基中，DM-2培养基的配方为：NaNO₂ 0.5g/L，琥珀酸钠2.81g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，CaCl₂ 0.15g/L，KH₂PO₄ 0.5g/L，K₂HPO₄ 2.5g/L，pH 7.0～7.2。于30℃，50rpm恒温振荡培养2d，测定NO₃ ^--N、NO₂ ^--N和TN的浓度。结果见图3(A)，在DM-1培养基中，NO₃ ^--N降解率达到98.66％，TN去除率达到79.17％；如图3(B)，在DM-2培养基中，NO₂ ^--N降解率达到77.37％，TN去除率达到51.51％。

通过以上实验，所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1最佳反硝化条件为C/N＝5，接种量为1％，具有高效的硝酸盐、亚硝酸盐去除率和TN去除率，是一株高效的好氧反硝化细菌。

实施例4：菌株Dn1在污染水体中的应用效果

所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1，可广泛应用于包括但不限于水产养殖尾水、畜禽养殖废水、河道污染等水体的反硝化脱氮处理，对不同环境下水体的治理和修复具有重要意义。为验证所述效果，进行以下实验：

一、所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1在水产养殖尾水中的应用。取某虾塘养殖尾水100mL，pH 7.35，NH₄ ⁺-N 7.2mg/L，NO₃ ^--N 6.28mg/L。取1mL菌悬液接种于100mL待处理尾水，在30℃、50rpm恒温振荡培养。1d后，与不接菌的对照组相比，NH₄ ⁺-N去除率从15.2％增强到78.6％；NO₃ ^--N去除率从7.5％增加到92.25％，无NO₂ ^--N积累。

二、所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1在养猪废水中的应用。取某养猪场氧化塘废水100mL，pH 8.08，NH₄ ⁺-N 1240mg/L。取1mL菌悬液接种于100mL待处理废水，在30℃、50rpm恒温振荡培养。2d后，与不接菌的对照组相比，对照组的NH₄ ⁺-N去除率达到50.1％，生成20％的中间产物NO₃ ^--N和3％的NO₂ ^--N积累；实验组的NH₄ ⁺-N去除率达到72.3％的同时，无硝酸盐氮和亚硝酸盐氮的积累。

三、所述粘着剑菌Ensifer adhaerens Dn1在河道水体修复中的应用。取某污染河道水100mL，pH 7.52，NH₄ ⁺-N 2.85mg/L，NO₃ ^--N 2.06mg/L。取0.5mL菌悬液接种于100mL待处理河水，在30℃、50rpm恒温振荡培养。1d后，与不接菌的对照组相比，NH₄ ⁺-N去除率从5.18％增强到54.2％，NO₃ ^--N去除率从0.24％增强到86.8％。

以上的实施例是为了说明本发明公开的实施方案，并不能理解为对本发明的限制。此外，本文所列出的各种修改以及发明中方法的变化，在不脱离本发明的范围和精神的前提下对本领域内的技术人员来说是显而易见的。虽然已结合本发明的多种具体优选实施例对本发明进行了具体的描述，但应当理解，本发明不应仅限于这些具体实施例。事实上，各种如上所述的对本领域内的技术人员来说显而易见的修改来获取发明都应包括在本发明的范围内。

Claims

1.一种粘着剑菌(Ensifer adhaerens)Dn1，保藏编号为CCTCC NO：M 20221868。

2.根据权利要求1所述的粘着剑菌(Ensifer adhaerens)Dn1，其特征在于，所述粘着剑菌(Ensifer adhaerens)Dn1含有如SEQ ID NO.1所示的基因序列，和/或，所述粘着剑菌(Ensifer adhaerens)Dn1具有好氧反硝化能力。

3.根据权利要求1所述的粘着剑菌(Ensifer adhaerens)Dn1，其特征在于，所述粘着剑菌(Ensifer adhaerens)Dn1对验证培养基中NO₃ ^--N和NO₂ ^--N降解率分别为98.66％和77.37％。

4.一种菌剂，其特征在于，所述菌剂中包含权利要求1～3任一所述的粘着剑菌(Ensiferadhaerens)Dn1。

5.根据权利要求4所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂为液体菌剂，所述液体菌剂中粘着剑菌(Ensifer adhaerens)Dn1的浓度至少为1×10⁸CFU/mL。

6.如权利要求4或5所述的菌剂的制备方法，其特征在于，包括将权利要求1-3所述的粘着剑菌(Ensifer adhaerens)Dn1的纯菌种接种于培养基中培养，培养结束后收集菌液即得到所述菌剂。

7.权利要求1-3所述的粘着剑菌(Ensifer adhaerens)Dn1在污水处理中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述污水处理为污水脱氮处理，和/或，所述污水选自水产养殖尾水、畜禽养殖废水或河道污染水体。

9.一种污水处理的方法，其特征在于，包括如下步骤：将权利要求1-3所述的粘着剑菌(Ensiferadhaerens)Dn1或权利要求4-5所述的菌剂接种至污水中从而对污水进行处理。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，还包括以下条件中的一种或几种：

1)所述方法为污水脱氮处理方法；优选的，为降低污水中的NO₃ ^--N、NO₂ ^--N和/或TN的方法；

2)所述菌剂的接种量为污水体积的0.5～5％；

3)对污水进行处理时温度为5～40℃；

4)对污水进行处理时体系的pH值为5～9；

5)对污水进行处理时体系的DO值为0.2～8mg/L；

6)对污水进行处理时体系的C/N为1～10；

7)对污水进行处理的时间为10～50小时。