CN116897832A - 一种紫皮石斛种子一步成苗的培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种紫皮石斛种子一步成苗的培养方法,包括采集紫皮石斛成熟蒴果,对蒴果消毒;种子萌发培养基为MS+0.1mg/L6‑BA+0.2mg/LNAA+60g/L马铃薯汁+70g/L香蕉汁(带皮)+25g/L蔗糖+6.8g/L琼脂,pH=5.9,种子在培养瓶内培养195天以后,不经任何转接长成7~9cm的带根茎叶的完整植株。本发明从种子播种到成苗无需转接,节约了培养基原料和人力、物力,相比传统三步培养法缩短了近25天的时间提早出苗。本发明种子培养基中添加带皮的香蕉汁,是由于香蕉皮中富含丰富的钾元素,可以补充紫皮石斛生长所需的钾元素等必需元素。
Description
技术领域
本发明涉及植物的组织培养技术领域,尤其是涉及一种紫皮石斛种子一步成苗的培养方法。
背景技术
石斛是名贵的药食同源食物,既可作药用,又可用作保健品。紫皮石斛又名齿瓣石斛、紫皮兰,具有益胃生津、润肺止咳、滋阴清热等功效。云南龙陵是紫皮石斛的主要产地,已成功申报注册了“龙陵紫皮石斛”地理标志、农产品地理标志和国家地理标志保护产品。鉴于紫皮石斛的优良品质和经济价值,有学者建议将其收入《中国药典》。除此之外,紫皮石斛具有较高观赏价值,既可作切花,也可盆栽观赏;而且花姿优雅,花色鲜艳,茎叶体形独特,花朵、茎叶都可用作艺术插花供人们欣赏。
由于紫皮石斛的经济价值和观赏价值较高,生境破坏与植树造林、繁殖特性缺陷等原因,致使紫皮石斛野生资源受到了严重破坏,已成为濒危植物。在其主要产区云南龙陵县,集体林区内已较难找到野生紫皮石斛。目前龙陵县石斛产业已由过去的粗放仿野生栽培、零星种植、分散经营发展到如今的集约化栽培、规模规范化种植和行业组织化经营。目前,工厂化石斛种苗培育主要流程为种子萌发及原球茎培养、原球茎增殖和分化、生根壮苗培养,但此方法在种苗生产过程中需要频繁更换培养基、多次的换瓶转接,在转接过程中不仅浪费人力、财力、物力,而且转接过程增加了组培苗的污染率,会导致紫皮石斛组培苗出瓶率降低,种苗生产成本居高。
石斛一步成苗方法在铁皮石斛和金钗石斛中已有报道,但是以铁皮石斛的一步成苗培养基培养紫皮石斛时小苗黄化,长势较弱且生长速度较慢,且培养基硬度稍高,不适合紫皮石斛根生长;以金钗石斛的一步成苗培养基培养紫皮石斛时,紫皮石斛苗根的生长较为健壮,但是苗的分化率较低,幼芽诱导率较低,同时较高的湿度会导致紫皮石斛叶片基部腐烂褐化。有鉴于此,急需提供一种流程简便、可操作性强且成功率高的紫皮石斛种子一步成苗的培养方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种紫皮石斛种子一步成苗的培养方法,可以减少组织培养过程中的转接次数,简化紫皮石斛种苗生产的工艺流程,降低种苗生产成本,为工厂化育苗提供技术支撑。
根据本发明的一个目的,本发明提供一种紫皮石斛种子一步成苗的培养方法,包括如下步骤:
S1,紫皮石斛蒴果采集和消毒
采集紫皮石斛成熟蒴果,对蒴果消毒;
S2,种子播种及培养
种子萌发培养基为MS+0.1mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+60g/L马铃薯汁+70g/L香蕉汁(带皮)+25g/L蔗糖+6.8g/L琼脂,pH=5.9,种子在培养瓶内培养195天以后,不经任何转接长成7~9cm的带根茎叶的完整植株。
进一步地,S1中,采集无病虫害、成熟的紫皮石斛蒴果,蒴果消毒先用流动自来水冲洗2min,然后采用体积分数为75%的酒精消毒1min,无菌水冲洗3遍后再用质量分数为3%的次氯酸钠溶液进行表面消毒3min,不断震荡后用无菌水清洗4遍。
进一步地,S2中,将消毒好的蒴果置于消毒后的滤纸上吸干水分,用手术刀划开果荚外种皮,将嫩黄色粉末状种子以20粒为单位分别置于1ml无菌水中制成密度为20粒/ml的无菌种子悬浮液,后用移液枪将种子均匀铺平接种在种子萌发培养基。
进一步地,S2中,种子萌发及培养的温度为22-25℃,湿度70%-80%。
进一步地,S2中,种子萌发及培养光照强度1400-1500lx,光照周期为10-12h/d。
进一步地,S2中,种子萌发及培养是直接在培养瓶内培养195天以后,不经任何转接长成7~9cm的带根茎叶的完整植株。
有益效果
本发明从种子播种到成苗无需转接,节约了培养基原料和人力、物力,相比传统三步培养法缩短了近25天的时间提早出苗。本发明种子培养基中添加带皮的香蕉汁,是由于香蕉皮中富含丰富的钾元素,可以补充紫皮石斛生长所需的钾元素等必需元素。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中,需要理解的是,术语"中心"、"纵向"、"横向"、"长度"、"宽度"、"厚度"、"上"、"下"、"前"、"后"、"左"、"右"、"竖直"、"水平"、"顶"、"底"、"内"、"外"、"顺时针"、"逆时针"等指示的方位或位置关系仅是为了便于描述本发明和简化描述,而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对本发明的限制。
此外,术语"第一"、"第二"仅用于描述目的,而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此,限定有"第一"、"第二"的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个所述特征。在本发明的描述中,"多个"的含义是两个或两个以上,除非另有明确具体的限定。此外,术语“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解,例如,可以是固定连接,也可以是可拆卸连接,或一体地连接;可以是机械连接,也可以是电连接;可以是直接相连,也可以通过中间媒介间接相连,可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言,可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
实施例1
一种紫皮石斛种子一步成苗的培养方法,包括如下步骤:
S1,紫皮石斛蒴果采集和消毒
采集无病虫害、生长健壮的成熟的紫皮石斛蒴果,先用流动自来水冲洗2min,然后采用体积分数为75%的酒精消毒1min,无菌水冲洗3遍后再用质量分数为3%的次氯酸钠溶液进行表面消毒3min,不断震荡后用无菌水清洗4遍。将消毒好的蒴果置于消毒后的滤纸上吸干水分,用手术刀划开果荚外种皮,将嫩黄色粉末状种子以20粒为单位分别置于1ml无菌水中制成密度为20粒/ml的无菌种子悬浮液,后用移液枪将种子均匀铺平接种在种子萌发培养基中。
S2,种子播种及培养
种子萌发培养基为MS+0.1mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+60g/L马铃薯汁+70g/L香蕉汁(带皮)+25g/L蔗糖+6.8g/L琼脂,pH=5.9,种子萌发及培养的温度为22-25℃,湿度70-80%。种子萌发及培养光照强度1400-1500lx,光照周期为10-12h/d。种子在培养瓶内培养195天以后,不经任何转接长成7~9cm的带根茎叶的完整植株。
实施例2
一种紫皮石斛种子一步成苗的培养方法的具体应用,包括如下步骤:
(1)成熟蒴果采集:
于10-12月选择无病虫害、生长健壮、品质优良的紫皮石斛植株的成熟蒴果,当其膨大部位呈现微黄色或紫红色时采摘,去除表面灰尘和污垢后储存在4℃冰箱中备用。
(2)成熟蒴果消毒:
先用流动自来水冲洗2min,然后采用体积分数为75%的酒精消毒1min,无菌水冲洗3遍后再用质量分数为3%的次氯酸钠溶液进行表面消毒3min,不断震荡后用无菌水清洗4遍,将种子置于消毒后的滤纸上吸干水分备用。
(3)种子播种及培养:
用手术刀划开果荚外种皮,将嫩黄色粉末状种子以20粒为单位分别置于1ml无菌水中制成密度为20粒/ml的无菌种子悬浮液,后用移液枪将种子均匀铺平接种在种子萌发培养基:MS+0.1mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+60g/L马铃薯汁+70g/L香蕉汁(带皮)+25g/L蔗糖+6.8g/L琼脂,pH=5.9,温度22-25℃,湿度70-80%,光照强度1400-1500lx,光照周期为10-12h/d,培养8-12d,紫皮石斛种子开始萌发,种胚渐渐长大,呈黄绿色,之后逐步形成原球茎。经过45d左右,原球茎进一步分化成原叶体,已经全部变绿,已基本铺平整个培养基,继续培养195d后,不经任何转接长成7~9cm的带根茎叶的完整植株,成苗率达92%。
本发明采用的基本培养基为植物组织培养通用的,所有药品及试剂都是常规市场可以购到的,由于近年来规模化种植中化肥等的施用,部分种植地区土壤逐渐碱化,pH值逐渐升高,本发明培养的pH为5.9,较常规偏高,可以加大组培苗的适宜栽植区域。
常规的点播接种是用无菌水稀释原球茎悬浮液,移液枪吸取原球茎悬浮液置于载玻片上观察原球茎个数然后均匀地点播到一步成苗固体培养基上,但是发现点播的原球茎数量和最后成苗的数量有差异且点播成苗不均匀,所以本发明先确定种子数量以后在进行接种,避免了因原球茎质量不一造成的成苗不均匀和直接播种导致密度不均的问题。
本发明从种子播种到成苗无需转接,节约了培养基原料和人力、物力,相比传统三步培养法缩短了近25天的时间提早出苗。本发明种子培养基中添加带皮的香蕉汁,是由于香蕉皮中富含丰富的钾元素,可以补充紫皮石斛生长所需的钾元素等必需元素。
综上所述,本发明的蒴果消毒率达100%,种子成苗率达92%。本发明可简化紫皮石斛种苗生产工艺流程,降低生产成本,解决病虫害感染,快速繁殖紫皮石斛无菌种苗,缩短育种年限以适应市场需求。
最后应说明的是:以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (6)
1.一种紫皮石斛种子一步成苗的培养方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1,紫皮石斛蒴果采集和消毒
采集紫皮石斛成熟蒴果,对蒴果消毒;
S2,种子播种及培养
种子萌发培养基为MS+0.1mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+60g/L马铃薯汁+70g/L香蕉汁+25g/L蔗糖+6.8g/L琼脂,pH=5.9,种子在培养瓶内培养195天以后,不经任何转接长成7~9cm的带根茎叶的完整植株。
2.根据权利要求1所述的紫皮石斛种子一步成苗的培养方法,其特征在于,S1中,采集无病虫害、成熟的紫皮石斛蒴果,蒴果消毒先用流动自来水冲洗2min,然后采用体积分数为75%的酒精消毒1min,无菌水冲洗3遍后再用质量分数为3%的次氯酸钠溶液进行表面消毒3min,不断震荡后用无菌水清洗4遍。
3.根据权利要求2所述的紫皮石斛种子一步成苗的培养方法,其特征在于,S2中,将消毒好的蒴果置于消毒后的滤纸上吸干水分,用手术刀划开果荚外种皮,将嫩黄色粉末状种子以20粒为单位分别置于1ml无菌水中制成密度为20粒/ml的无菌种子悬浮液,后用移液枪将种子均匀铺平接种在种子萌发培养基中。
4.根据权利要求3所述的紫皮石斛种子一步成苗的培养方法,其特征在于,S2中,种子萌发及培养的温度为22-25℃,湿度70%-80%。
5.根据权利要求4所述的紫皮石斛种子一步成苗的培养方法,其特征在于,S2中,种子萌发及培养光照强度1400-1500lx,光照周期为10-12h/d。
6.根据权利要求5所述的紫皮石斛种子一步成苗的培养方法,其特征在于,S2中,种子萌发及培养是直接在培养瓶内培养195天以后,不经任何转接长成7~9cm的带根茎叶的完整植株。
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