CN116888108A - 新型egfr降解剂 - Google Patents

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Abstract

一种可降解EGFR的新型双功能化合物(I)，含有所述化合物的药物组合物、制备方法及利用本发明化合物治疗细胞增殖性疾病，例如癌症的方法。

Description

新型EGFR降解剂 技术领域：
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种可降解EGFR的新型双功能化合物，含有所述化合物的药物组合物、其制备方法及利用本发明化合物治疗EGFR介导的癌症的方法。
背景技术：
近些年，基于泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)的PROTAC技术(Proteolysis Targeting Chimeria)得到了快速的发展。PROTAC技术源于2004年诺贝尔化学奖——以色列科学家Aaron Ciechanover、Avram Hershko和美国科学家Irwin Rose共同发现的细胞降解有害蛋白质，即泛素调节的蛋白质降解过程。
PROTAC是一种双功能的小分子三联体化合物，可以分为靶蛋白配体、Linker(接头)、E3连接酶配体(降解决定子)三部分。PROTAC分子进入细胞后，其结构中的目标蛋白(Protein of Interest，POI)配体可特异性地与相应的靶蛋白结合，而另一端可以募集E3连接酶从而形成POI-Linker-E3 ligase三元复合物，其中E3连接酶可介导泛素结合酶E2对POI泛素化。被泛素标记的POI被蛋白酶体识别并降解。
理论上PROTAC是事件驱动的药理作用模式，此过程无需靶蛋白配体长时间占据结合位点，只需三元复合物短暂的形成便可瞬时完成目标蛋白的泛素化，并且PROTAC分子在细胞内可多次循环利用，因此，与传统的小分子抑制剂和大分子抗体相比，PROTAC具有明显的优势，有望将那些难以成药的蛋白靶向成药，并且可能具备用量小、毒性低、不依赖于亲和力、可选择性高、克服靶蛋白突变/过表达引起的耐药等优点。
EGFR，即表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor)，广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞等细胞表面。EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。EGFR突变也是NSCLC患者中最常见的一种突变类型，尤其是在亚洲人群中可以占到40％～50％，因此EGFR一直是制药产业研究的最热门靶点之一。
目前，上市的EGFR抑制剂有一、二、三代。第一代为可逆的靶向药物，例如吉非替尼、厄洛替尼、埃克替尼。第二代为不可逆的靶向药物，例如阿法替尼以及达克替尼。第一、二代靶向药物虽然疗效显著，但多数患者都会在使用药物1-2年出现耐药性。EGFR抑制剂耐药的患者中，有50％的耐药与T790M突变有关。第三代EGFR靶向药物奥希替尼能与EGFR敏感突变的T790M突变位点结合，抑制由于T790M突变引起的肿瘤耐药，它的问世给更多的肺癌患者带来了好的生存获益。然而第三代EGFR抑制剂也由于C797S突变，不可避免地产生耐药性。
对于目前奥希替尼的耐药，尚无成熟的治疗手段，基于临床需求的迫在眉睫，同时基于PROTAC技术的独特优势，本发明旨在开发一种可特异性降解EGFR蛋白的双功能的小分子三联体化合物。
发明内容：
本发明提供了一种可以用于降解EGFR的新型双功能化合物，含有所述化合物的药物组合物、其制备方法及其用于治疗EGFR介导的癌症的用途。
根据本发明所述的化合物为包含靶向配体、接头与降解决定子的三联体化合物，如式(X)所示，
其中，靶向配体可以特异性结合靶蛋白，如EGFR和/或突变的EGFR，在三联体化合物中通过共价键与接头相连接；接头为靶向配体与降解决定子的连接基团，一端与靶向配体共价结合，另一端与降解决定子共价结合；降解决定子能够结合泛素连接酶，如E3泛素连接酶，与接头共价结合。
具体地，本发明提供了一种式(I)所示的双功能化合物及其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，
式(TL)为靶向配体，通过R 1基团与接头共价结合，其中，
R 1选自 或任选地被一个或多个R 9基团所取代的A；
A选自3-7元杂环烷基、3-7元杂环烷基-O-、3-7元杂环烷基-NR a-、-(3-7元杂环烷基)-(3-7元杂环烷基)-、6-14元螺杂环基、6-14元桥杂环基、6-14元并杂环基；
R 2选自C 6-10芳基、5-12元杂芳基，5-6元杂环烯基、其中所述C 6-10芳基、5-12元杂芳基，5-6元杂环烯基各自独立任选地被一个或多个R 10基团所取代；
R 3选自H、卤素、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4卤代烷基、C 1-4卤代烷氧基；
M选自N或者CR 11；
R 4选自H、卤素、-CN、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、C 3-6环烷基；
R 5选自-C(＝O)NR bR c、-S(＝O) 2R b、-P(＝O)R bR c、-P(＝O)R bNR cR d、-P(＝O)R bOR c、-P(＝O)OR bOR c、-P(＝S)R bR c、-P(＝S)R bNR cR d、-P(＝S)R bOR c、-P(＝S)OR bOR c、-S(＝O) 2NR bR c、-NR c S(＝O) 2R b、或-NR bC(O)R c；
R 6、R 7、R 8各自独立地选自H、C 1-4烷基、卤素、C 3-6环烷基；
或者，R 6、R 7和与其连接的原子一起环化成C 4-6环烷基、4-7元杂环烷基、5-7元杂芳基；
或者R 7、R 8和与其连接的原子一起环化成C 4-6环烷基、4-7元杂环烷基、5-7元杂芳基；
每个R 9独立选自H、卤素、-OH、-NH 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4卤代烷基、-C 0-4烷基-NR aR b；
每个R 10独立选自H、卤素、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、C 3-6环烷基磺酰基；
R 11选自H、卤素、C 1-4烷基；
R a选自H、C 1-4烷基；
R b、R c、R d各自独立地选自H、C 1-4烷基、C 3-6环烷基；
接头是与靶向配体中R 1基团和降解决定子共价结合的基团；
降解决定子是能够与泛素连接酶结合的基团。
在本发明的一些方案中，上述式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，其中，
R 1选自 或任选地被一个或多个R 9基团所取代的A；
A选自3-7元杂环烷基、3-7元杂环烷基-O-、3-7元杂环烷基-NR a-、-(3-7元杂环烷基)-(3-7元杂环烷基)-、6-14 元螺杂环基、6-14元桥杂环基、6-14元并杂环基；
R 2选自C 6-10芳基、5-12元杂芳基，5-6元杂环烯基、其中所述C 6-10芳基、5-12元杂芳基，5-6元杂环烯基各自独立任选地被一个或多个R 10基团所取代；
R 3选自H、卤素、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4卤代烷基、C 1-4卤代烷氧基；
M选自N或者CR 11；
R 4选自H、卤素、-CN、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、C 3-6环烷基；
R 5选自-C(＝O)NR bR c、-S(＝O) 2R b、-P(＝O)R bR c、-P(＝O)R bNR cR d、-P(＝O)R bOR c、-P(＝O)OR bOR c、-P(＝S)R bR c、-P(＝S)R bNR cR d、-P(＝S)R bOR c、-P(＝S)OR bOR c、-S(＝O) 2NR bR c、-NR c S(＝O) 2R b、或-NR bC(O)R c；
R 6、R 7、R 8各自独立地选自H、C 1-4烷基；
或者，R 6、R 7和与其连接的原子一起环化成C 4-6环烷基、5-7元杂芳基；
或者R 7、R 8和与其连接的原子一起环化成C 4-6环烷基、5-7元杂芳基；
每个R 9独立选自H、卤素、-OH、-NH 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4卤代烷基、-C 0-4烷基-NR aR b；
每个R 10独立选自H、卤素、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、C 3-6环烷基磺酰基；
R 11选自H、卤素、C 1-4烷基；
R a选自H、C 1-4烷基；
R b、R c、R d各自独立地选自H、C 1-4烷基、C 3-6环烷基；
接头是与靶向配体中R 1基团和降解决定子共价结合的基团；
降解决定子是能够与泛素连接酶结合的基团。
在本发明的一些方案中，上述式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，其中，
R 1选自 或任选地被一个或多个R 9基团所取代的A；
A选自3-7元杂环烷基、3-7元杂环烷基-O-、3-7元杂环烷基-NR a-、-(3-7元杂环烷基)-(3-7元杂环烷基)-、6-14
元螺杂环基、6-14元并杂环基；
R 2选自5-6元杂芳基，其中所述5-6元杂芳基任选地被一个或多个R 10基团所取代；
R 3选自C 1-4烷氧基；
M选自CR 11；
R 4选自H、卤素、C 1-4烷基；
R 5选自-P(＝O)R bR c、-NR c S(＝O) 2R b；
R 6、R 7、R 8各自独立的选自H、C 1-4烷基；
或者，R 6、R 7和与其连接的原子一起环化成5-7元杂芳基；
每个R 9独立选自H、卤素、-OH、-NH 2、C 1-4烷基；
每个R 10独立选自H、C 1-4烷基；
R 11选自H、卤素；
R a选自H、C 1-4烷基；
R b、R c各自独立的选自H、C 1-4烷基；
接头是与靶向配体中R 1基团和降解决定子共价结合的基团；
降解决定子是能够与泛素连接酶结合的基团。
在本发明的一些方案中，A选自5-6元杂环烷基、5-6元杂环烷基-O-、5-6元杂环烷基-NR a-、-(5-6元杂环烷基)-(5-6元杂环烷基)-、7-11元螺杂环基、8-10元并杂环基。
在本发明的一些方案中，A选自5-6元氮杂环烷基、5-6元氮杂环烷基-O-、5-6元氮杂环烷基-NR a-、-(5-6元杂环烷基)-(5-6元杂环烷基)-、7-11元螺杂环基、8-10元氮杂并环基。
在本发明的一些方案中，A选自5-6元氮杂环烷基。
在本发明的一些方案中，A选自11元氮杂螺环基。
在本发明的一些方案中，A选自8元氮杂并环基。
在本发明的一些方案中，M选自CH。
在本发明的一些方案中，M选自CF。
在本发明的一些方案中，上述A选自 R a如上文所定义。
在本发明的一些方案中，上述A选自
在本发明的一些方案中，上述A选自
在本发明的一些方案中，上述式R 1选自 R a如上文所定义。
在本发明的一些方案中，上述R 1选自
在本发明的一些方案中，上述R 1选自
在本发明的一些方案中，上述A选自
在本发明的一些方案中，上述R 1选自
在本发明的一些方案中，上述R 10选自H、甲基、乙基或二氟甲基。
在本发明的一些方案中，上述R 2选自
在本发明的一些方案中，上述R 2选自
在本发明的一些方案中，上述R 3选自甲氧基。
在本发明的一些方案中，上述R 3选自H、甲基、F。
在本发明的一些方案中，上述R 4选自F、Cl、Br或甲基。
在本发明的一些方案中，上述R 4选自Br。
在本发明的一些方案中，上述R 4选自H。
在本发明的一些方案中，上述R 4选自三氟甲基。
在本发明的一些方案中，上述R 5选自
在本发明的一些方案中，上述R 5选自
在本发明的一些方案中，上述R 6、R 7、R 8选自H。
在本发明的一些方案中，上述R 6、R 7、R 8各自独立的选自CH 3、环丙基、氟。
在本发明的一些方案中，上述R 6、R 7选自CH 3。
在本发明的一些方案中，上述R 6选自H，R 7选自CH 3、环丙基、氟。
在本发明的一些方案中，上述R 6、R 7和与其连接的原子一起环化成吡嗪环。
在本发明的一些方案中，上述R 6、R 7和与其连接的原子一起环化成吡啶环。
在本发明的一些方案中，所述靶向配体式(TL)选自：
所述靶向配体通过 与所述接头共价结合。
在本发明的一些方案中，所述靶向配体式(TL)选自：
在本发明的一些方案中，所述靶向配体式(TL)选自：
在本发明的一些方案中，所述靶向配体式(TL)选自：
在本发明的一些方案中，所述靶向配体式(TL)选自：
在本发明的一些方案中，上述接头具有式LA：
或其立体异构体，
其中，p 1选自0-6的整数；p 2选自0-6的整数；p 3选自0-6的整数；
U为键，或者选自C＝O、O、NH或NR 12；
每个Q独立地选自键、CH 2、O、S、NH或NR 12；
W为键，或者选自C＝O、O、NH、NR 12、C≡C；
其中所述R 12选自C 1-4烷基；
所述接头通过U基团与靶向配体(式TL)中的R 1共价结合，W基团与降解决定子共价结合。
在本发明的一些方案中，上述TL-LA选自：
其中，p 1、p 2、p 3如上述所定义，TL代表靶向配体，不属于接头LA，仅代表接头LA与靶向配体的连接关系；以及式TL具有如上所述的定义。
在本发明的一些方案中，上述TL-LA选自：
在本发明的一些方案中，上述TL-LA选自：
在本发明的一些方案中，上述接头具有式LB：
或其立体异构体，
其中，p 1选自0-6的整数；p 2选自0-6的整数；p 3选自0-6的整数，p 4选自0-6的整数；p 5选自0-6的整数；
U为键，或者选自C＝O、O、NH或NR 13；
每个Q独立地选自键、CH 2、O、S、NH或NR 13；
W为键，或者选自C＝O、O、NH、NR 13、C≡C；
其中所述R 13选自C 1-4烷基；
每个Z 1各自独立地选自不存在、苯基、C 3-6元环烷基、3-6元杂环烷基、5-6元杂芳基，其中所述苯基、C 3-6元环烷基、3-6元杂环烷基、5-6元杂芳基各自独立任选地被一个或多个R 14基团所取代；每个R 14独立选自卤素、C 1-4烷基、羟基；
或每个Z 1各自独立地选自7-11元氮杂螺环，其中所述7-11元氮杂螺环任选地被一个或多个R 14基团所取代；每个R 14独立选自卤素、C 1-4烷基、羟基；
所述接头通过U基团与靶向配体中的R 1共价结合，W基团与降解决定子共价结合。
在本发明的一些方案中，上述接头LB选自：
其中，p 1、p 2、p 3、p 4、U、W、Z 1如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述TL-LB选自：
其中，p 1、p 3、p 4、Z 1如上述所定义，TL代表靶向配体，不属于接头LB，仅代表接头LB与靶向配体的连接关系；以及式TL具有如上所述的定义。
在本发明的一些方案中，上述TL-LB选自：
在本发明的一些方案中，上述TL-LB选自：
在本发明的一些方案中，上述TL-LB选自：
其中，p 1、p 3、p 4、Z 1如上所述定义。
在本发明的一些方案中，上述TL-LB选自： 其中，p 1、p 2、Z 1如上所述的 定义。
在本发明的一些方案中，上述TL-LB选自：
在本发明的一些方案中，上述TL-LB选自：
在本发明的一些方案中，上述TL-LB选自
在本发明的一些方案中，上述TL-LB选自
在本发明的一些方案中，上述TL-LB选自
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子具有式D1，
或其立体异构体，
其中，每个R 15独立地选自C 1-4烷基；
R 16选自H、氘；
每个R 17独立地选自卤素、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、羟基；
Z 2选自CH 2或者C＝O；
Y为键、O或者NH；其通过共价键与接头相连；
m选自0-3的整数；
n选自0-4的整数。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D1中的Z 2选自C＝O。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D1中Y选自键或者NH。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D1中Y选自O。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D1选自：
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D1选自：
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D1选自：
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D1选自：
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子具有式D2，
或其立体异构体，
其中，每个R 15，任意独立地选自C 1-4烷基；
R 16，选自H、氘；
每个R 17，任意独立地选自卤素、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基；
Y’为键、O或者NH，其通过共价键与接头相连；
m选自0-3的整数；
n选自0-4的整数。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D2选自：
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子具有式D3，
或其立体异构体，
其中，R 18选自H、C 1-4烷基；
每个R 19任意独立地选自C 1-4烷基；
R 20选自H、C 1-4烷基；
q选自0-4的整数；
其中所述降解决定子通过 与所述接头共价结合。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D3中的R 18选自甲基。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D3中的R 20选自甲基。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D3选自：
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子具有式D3 ’，
或其立体异构体，
其中，R 18a选自H、C 1-4烷基；
每个R 19a任意独立地选自C 1-4烷基、C 1-4烷氧基；
R 20a、R 20b任意独立地选自H、C 1-4烷基；
或者R 20a与R 20b相连接，环化形成C 3-6环烷基；
或者R 19a与R 20a或R 19a与R 20b相连接，环化形成3-6元杂环烷基；
r选自0-4的整数；
其中所述降解决定子通过 与所述接头共价结合。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D3’中的R 18a选自甲基。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D3’中的R 20a、R 20b和与其连接的原子一起环化形成环丙基。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D3’中的R 19a与R 20a和与其连接的原子一起环化，或R 19a与R 20b和与其连接的原子一起环化形成四氢吡喃环。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子具有式D3’，选自：
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子具有式D4，
或其立体异构体，
Y为键、或者NH，其通过共价键与接头相连。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D4选自：
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子具有式D5，
其中，M选自NH、O或者S；
V为键、NH或者O，其通过共价键与接头相连；
每个R 21各自独立地选自卤素；
S选自0、1、2或3。
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D5为
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D5为
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D5为
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D5为
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子D5为
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子选自
在本发明的一些方案中，所述的降解决定子选自
在本发明的一些方案中，上述式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物选自以下结构：
其中，A、M、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、R 20、Y、R 15、n、接头、降解决定子如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，选自以下结构：
其中，M、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、R 20、Y、R 15、n、接头与降解决定子如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，选自式(Ic-A)或(Ic-B)：
其中，R 6、R 7、R 15、Y、n、接头与降解决定子如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，选自式(Ic)：
其中，接头与降解决定子如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，选自式(Id)：
其中，接头与降解决定子如上述所定义。
在本发明的一些方案中，上述式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，选自以下结构：
其中，接头、R 20、Y、R 15、n如上述所定义。
本发明提供的双功能化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，其选自：
本发明还提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的上述双功能化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物和药学上可接受的载体。
根据本发明的药物组合物可以配制用于各种常规给药或特定给药途径，如口服给药、胃肠外给药和直肠给药等。口服给药的剂型，例如片剂、胶囊剂(包括持续释放或定时释放处方)、丸剂、散剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、混悬液(包括纳米混悬液、微米混悬液、喷雾干燥分散剂)、糖浆剂和乳剂；胃肠外给药，例如通过皮下、静脉内、肌内或胸骨内的注射，或输注技术(例如作为无菌可注射水溶液或非水溶液或混悬液)；经鼻给药，例如对鼻粘膜给药，通过吸入喷雾；局部给药，例如以乳膏或软膏的形式；直肠给药，例如以栓剂的形式。根据本发明的化合物可单独给药，但通常会与根据所选择的给药途径和标准药学操作选择的药学载体一起给药。
“药学上可接受的载体”指本领域通常可接受的用于将生物活性药剂递送给动物、特别是哺乳动物的介质，根据给药方式和剂型的性质包括例如佐剂、赋形剂或赋形物，例如稀释剂、防腐剂、填充剂、流动调节剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、助悬剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂。
药学上可接受的载体在本领域普通技术人员的眼界范围内可以综合大量因素进行选择和配制。其包括但不限于：配制的活性药剂的类型和性质，要将含有该药剂的组合物给药的对象，组合物的预期给药途径和目标治疗适应症等。药学上可接受的载体包括含水介质和非水介质这两者以及多种固体和半固体剂型。除了活性药剂以外，这样的载体可以包括许多不同的成分和添加剂，因多种原因(例如稳定活性药剂、粘合剂等)在处方中包括另外的成分对于本领域普通技术人员也是众所周知的。
用于本发明化合物的给药方案当然可根据已知的因素改变，例如具体药剂的药效学特征及其给药的模式和途径，接受者的物种、年龄、性别、健康、医学状况和体重，症状的性质和程度，共存的治疗的种类，治疗的频率， 给药的途径，患者的肾脏和肝脏的功能，和需要的效果。治疗有效剂量的化合物、药物组合物或其组合取决于对象种类、体重、年龄和个体情况、所治疗病症或疾病或其严重度。掌握普通技术的医生、临床医生或兽医能容易确定预防、治疗或抑制病症或疾病进展所需的各活性成分有效量。
本发明还提供上述双功能化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物或上述的药物组合物在制备治疗癌症药物中的应用。
表皮生长因子受体EGFR(epidermal growth factor receptor)，广泛分布于哺乳动物上皮细胞、成纤维细胞、胶质细胞等细胞表面。EGFR信号通路对细胞的生长、增殖和分化等生理过程发挥重要的作用。EGFR突变也是NSCLC患者中最常见的一种突变类型，尤其是在亚洲人群中可以占到40％～50％。
因此，本发明还提供了治疗癌症的方法，其包括向患者施用治疗有效量的上述化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物或上述的药物组合物。上述癌症包括淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤，黑色素瘤、白血病、胃癌、子宫内膜癌、肺癌、肝细胞癌、胃肠道间质瘤(GIST)、急性髓细胞白血病(AML)、胆管癌、肾癌、甲状腺癌、间变性大细胞淋巴瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤。
本发明还提供了上述化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物或上述的药物组合物在制备治疗EGFR相关癌症药物中的应用。上述癌症包括淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤，黑色素瘤、白血病、胃癌、子宫内膜癌、肺癌、肝细胞癌、胃肠道间质瘤(GIST)、急性髓细胞白血病(AML)、胆管癌、肾癌、甲状腺癌、间变性大细胞淋巴瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤。
在本发明的一些方案中，上述癌症为肺癌。
本发明提供的上述双功能化合物或其立体异构体、互变异构体、药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物或上述的药物组合物，用于治疗癌症，上述癌症包括淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤，黑色素瘤、白血病、胃癌、子宫内膜癌、肺癌、肝细胞癌、胃癌、胃肠道间质瘤(GIST)、急性髓细胞白血病(AML)、胆管癌、肾癌、甲状腺癌、间变性大细胞淋巴瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤。
在本发明的一些方案中，上述癌症为肺癌。
本文所述的化合物可以通过本领域人员已知的方法制备，仅作为一般性举例，可以使用以下方案制备：
通用方案一：
通用方案二：
如通用方案一中所示，接头与靶向配体可以先通过化学反应相连接，随后再加入降解决定子，制备得到本发明的三联体化合物；或者如通用方案二中所示，接头先与降解决定子通过化学反应相连接，随后再加入靶向配体，制备得到本发明的三联体化合物；
需要说明的是，三联体化合物中两个部分相连接时，可以是两部分分别制备完成后再连接，也可以是先连接，再完成每一部分的合成。例如通用方案一中靶向配体与接头部分相连接，可以是制备完成的靶向配体与接头相连接，也可以是靶向配体中的一部分先与接头相连接，连接完成后，再完成靶向配体本身的制备。
三联体化合物中两个部分的连接，通过常规的化学反应制备得到，如通用方案一、二中的步骤1与步骤2，可以通过亲核取代、缩合或者偶联等反应实现。
具体的，本发明中的三联体化合物可通过以下方式制备：
靶向配体与接头连接后，再与降解决定子连接得到：
或者
接头与降解决定子连接后，再与靶向配体连接得到：
其中，靶向配体，接头，降解决定子如上述所定义。
代表性合成路线一：
步骤1接头中的羧酸与降解决定子中的氨基在缩合试剂的作用下发生缩合反应形成酰胺键，常用的缩合剂包括但不限于4-(4,6-二甲氧基三嗪)-4-甲基吗啉盐酸盐(DMTMM)、二环己基碳二亚胺(DCC)、二异丙基碳二亚胺(DIC)和1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDCI)、2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)等。
步骤2靶向配体中的氨基进攻降解决定子的LG基团，LG离去发生亲核取代反应制备得到三联体化合物；其中，LG代表常用离去基团，例如三氟甲磺酸基、甲磺酸基、对甲基苯磺酸基以及氟、溴、碘、氯等卤素原子。
以上两步反应常在碱的催化下进行，常用的碱催化剂包括三乙胺、吡啶、N,N-二异丙基乙胺、醋酸钠、碳酸钠、碳酸钾等。
代表性合成路线二：
步骤1，靶向配体中的氨基进攻接头中的LG基团，LG离去发生亲核取代反应；LG代表常用离去基团，例如三氟甲磺酸根、甲磺酸根、对甲基苯磺酸根以及氟、溴、碘、氯等卤素原子；接头中的PG代表常用的氨基保护基团，包括但不限于叔丁氧羰基、苄氧羰基、对甲苯磺酰基、笏甲氧羰基、对甲氧基苄基、苄基、三苯甲基等。
步骤2，一般情况下在酸性作用下脱除氨基保护基，常用的酸包括但不限于盐酸、甲酸、三氟乙酸、氢溴酸等。
步骤3，靶向配体-接头中氨基进攻降解决定子中的LG基团，LG离去发生亲核取代反应，制备得到三联体化合物。LG代表常用离去基团，例如三氟甲磺酸根、甲磺酸根、对甲基苯磺酸根以及氟、溴、碘、氯等卤素原子。
步骤1与步骤3常在常在碱的催化下进行，常用的碱催化剂包括三乙胺、吡啶、N,N-二异丙基乙胺、醋酸钠、碳酸钠、碳酸钾等。
代表性合成路线三：
步骤1中，在催化剂的作用下接头与降解决定子发生偶联反应，常用的催化剂为双(三苯基膦)二氯化钯(Ⅱ)、四(三苯基膦)钯或[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯和碘化亚铜等。
随后步骤2中羟基基团转化为易离去的基团LG，与靶向配体中的氨基发生亲核取代反应生成三联体化合物。
本发明中使用的靶向配体，可以参考CN112538072A中相关化合物的制备方法中的靶向配体，相关内容以引用的方式并入本申请。
以上反应式中的各个基团变量如上文中所定义。
技术效果：
本发明化合物对Ba/F3 Del19/T790M/C797S EGFR三突变细胞系和Ba/F3 L858R/T790M/C797S EGFR三突变细胞系的细胞增殖有着很好的抑制作用。
本发明化合物能够显著地诱导EGFR蛋白的降解。
说明和定义：
除非另有说明，本文所用的下列术语和短语具有下列含义。一个特定的术语或短语在没有特别定义的情况下不应该被认为是不确定的或不清楚的，而应该按照普通的含义去理解。
术语“药学上可接受的”指在合理的医学判断范围内适合与人类和动物的组织接触使用而无过度的毒性、刺激、过敏反应或其它的问题或并发症，具有合理的收益/风险比的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与相对无毒的酸或碱制备得到的衍生物。这些盐可以在化合物合成、分离、纯化期间就被制备，或者单独使用经过纯化的化合物的游离形式与适合的酸或碱反应。当化合物中含有相对酸性的官能团时，与碱金属、碱土金属氢氧化物或有机胺反应得到碱加成盐，包括基于碱金属与碱土金属的阳离子以及无毒的铵、季铵和胺阳离子，还涵盖氨基酸的盐等。当化合物中含有相对碱性的官能团时，与有机酸或无机酸反应得到酸加成盐。
本发明所提供的化合物还包括前药的形式，表示体内迅速转化得到上式母体化合物的化合物，其可在体内或者体外的环境中通过化学或生化方法被转换成本发明的化合物，例如借助血液中的水解作用。
本发明的化合物能够以非溶剂化以及溶剂化形式存在，所述溶剂化物包括水合物形式。一般而言，溶剂化物形式的药学效果等价于未溶剂化形式，也涵盖在本发明的范围内。
本发明的化合物存在“互变异构体”，术语“互变异构体”是指官能团异构体的一种，其通过一个或多个双键位移而具有不同的连接点，例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。
本发明的化合物存在几何异构体以及立体异构体，例如顺反异构体、对映异构体、非对映异构体、外消旋混合物和其他混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。
本发明的化合物存在“互变异构体”，术语“互变异构体”是指官能团异构体的一种，其通过一个或多个双键位移而具有不同的连接点，例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。
术语“对映异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
术语“顺反异构体”是指分子中双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而存在的构型。
除非另有说明，用楔形实线键 和楔形虚线键 表示一个立体中心的绝对构型，用直形实线键 和直形虚线键 表示立体中心的相对构型。
本发明化合物的立体异构体可以通过手性合成或手性试剂或者其他常规技术制备。例如本发明某化合物的一种对映体，可以通过不对称催化技术或者手性助剂衍生技术制备得到。或者通过手性拆分技术，从混合物中得到单一立体构型的化合物。或者用手性起始原料，直接制备得到。本发明中的光学纯化合物的分离通常是使用制备色谱完成的，采用手性色谱柱，达到分离手性化合物的目的。
一般情况下，光学纯的化合物作为起始物料参与反应时，其结构中手性原子的立体构型也会发生传递，无特殊情况，其构型在反应中视为保持不变，即产物具有与起始物料相同的构型，当光学纯混合物参与反应时，生成的化合物也是光学纯相应的混合物。例如，(R)-3-甲基吗啉作为起始物料参与反应，得到的化合物也是R构型；反式-2,6-二甲基吗啉作为起始物料参与反应，得到的化合物为2S,6S与2R,6R构型的外消旋体。
术语“光学纯”或“对映体富集”是指该异构体或对映体的含量大于等于60％，或者大于等于70％，或者大于等于80％，或者大于等于90％，或者大于等于95％，或者大于等于96％，或者大于等于97％，或者大于等于98％，或者大于等于99％，或者大于等于99.5％，或者大于等于99.6％，或者大于等于99.7％，或者大于等于99.8％，或 者大于等于99.9％。
化合物的绝对立体构型通过可以通过本领域常规技术手段予以确证。例如单晶X射线衍射法，也可以通过原料的手性结构以及不对称合成的反应机理来确证化合物的绝对构型。
本发明还包括同位素标记衍生物。包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分别例如 2H、 3H、 13C、 11C、 14C、 15N、 18O、 17O、 31P、 32P、 35S、 18F和 36Cl。含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的本发明化合物都属于本发明的范围。
术语“有效预防或治疗量”是指本发明化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物以适用于任何医学治疗和/或预防的合理效果/风险比治疗障碍的足够量的化合物。但应认识到，本发明式I所示化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物和组合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。一般说来，本发明式I所示化合物或其药学上可接受的盐用于哺乳动物特别是人的剂量可以介于0.001～1000mg/kg体重/天，例如介于0.01～100mg/kg体重/天，例如介于0.01～10mg/kg体重/天。
术语“任选被取代的”是指可以被取代，也可以不被取代，除非另有规定，取代基的种类和数目在化学上可以实现的基础上可以是任意的，例如，术语“可任选地被一个或多个R 0取代”是指可以被一个或多个R 0取代，也可以不被R 0取代。
当任何变量(例如R 12)在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的。例如，如果一个基团被0-2个R 12所取代，则所述基团可以任选地至多被两个R 12所取代，并且每种情况下的R 12都有独立的选项。
当一个连接基团的数量为0时，比如-O(CH 2) nCH 3，n＝0表示该连接基团为单键，即-OCH 3。
当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。例如，结构单元 表示取代基R 12可以在苯环上的任意一个位置发生取代。
当所列举的取代基中没有指明其通过哪一个原子连接到化学结构通式中时，这种取代基可以通过其任何原子相键合。例如，吡唑作为取代基，是指吡唑环上任意一个碳原子连接到被取代的基团上；当结构中出现 或者 时，表示该原子为键合原子，例如 与 均表示吗啉环上的N原子为键合原子。
除非另有规定，“环”是指饱和的、部分饱和的或不饱和的单环以及多环，“多环”包括螺环、并环或桥环。代表性的“环”包括被取代或未被取代的环烷基、杂环烷基、环烯基、杂环烯基、环炔基、杂环炔基、芳基或杂芳基。
术语“杂”表示取代或未被取代的杂原子以及杂原子的氧化形式，所述杂原子一般选自N、O、S，氧化形式一般包括NO、SO、S(O) 2，氮原子可以是取代的，即NR(R为H或者文中定义的其他取代基)；环上原子的数目通常被定义为环的元数，例如，“3-6元杂环烷基”是指3-6个原子环绕排列而成的环，每个环任选地包含1～3个杂原子，即N、O、S、NO、SO、S(O) 2或NR，每个环任选的被R基团所取代，R为本发明中所定义的任意取代基。
除非另有规定，“环烷基”是指饱和的单环烃基。环烷基优选3-8元单环烷基，更优选3-6元单环烷基，这些单环烷基的实例包括但不限于：环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基。
除非另有规定，“杂环烷基”是指环中包含一定数目杂原子或杂原子团的单杂环烷基，所述杂原子或杂原子团一般选自N、O、S、NO、SO、S(O) 2以及NR。杂环烷基优选3-8元单杂环烷基，更优选3-6元单杂环烷基，这些单杂环烷基的实例包括，但不限于环氧乙烷基、四氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、四氢呋喃基、四氢噻 吩基、四氢吡喃基、1,3-二氧戊环、1,4-二氧六环等。
除非另有规定，“螺环基”是指单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环体系，每个单环中均可包含一定数目的双键，螺环基优选5-13元螺环基、6-12元螺环基、或者7-11元螺环基。螺环基的实施例包括但不限于螺[2.2]戊基、螺[2.3]己基、螺[2.4]庚基、螺[2.5]辛基、螺[2.6]壬基、螺[3.3]庚基、螺[3.4]辛基、螺[3.5]壬基、螺[3.6]癸基、螺[4.4]壬基、螺[4.5]癸基、螺[4.6]十一烷基、螺[5.5]十一烷基、螺[5.6]十二烷基、螺[6.6]十三烷基、螺[6.7]十四烷基。
“螺杂环基”是指螺环骨架结构中的一个或多个碳原子被杂原子或杂原子团取代的螺环基，所述杂原子或杂原子团选自N、O、S、NO、SO、S(O) 2等。螺杂环基优选5-13元螺杂环基、6-12元螺杂环基、7-11元螺杂环基以及7-11元氮杂螺环基。螺杂环基的实施例包括但不限于2-氧杂-7-氮杂螺[5.3]壬烷-7-基、2-氧杂-7-氮杂螺[4.4]壬烷-7-基、2-氧杂-6-氮杂螺[3.3]庚烷-6-基、2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸烷-8-基、1,4,9-三氮杂螺[5.5]十一烷-9-基、3-氧杂-9-氮杂螺[5.5]十一烷-9-基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-基、2,7-二氮杂螺[5.3]壬烷-7-基、2,7-二氧杂螺[5.3]壬基、3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基、1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基、1-氧杂-4,8-二氮杂螺[5.4]癸烷-8-基、3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基、7-氮杂螺[3.5]癸烷-7-基、1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基、6-氧杂-2,9-二氮杂螺[4.5]癸烷-9-基、9-氧杂-2,6-二氮杂螺[4.5]癸烷-6-基、3-氮杂螺[5.5]十一烷-3-基、4-氧杂-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基。
除非另有规定，“桥环基”是指共用两个不直接连接的碳原子的多环体系，体系中可包含一定数目的双键。桥环基优选4-13元桥环基、5-12元桥环基、6-12元桥环基、6-11元桥环基、7-11元桥环基。桥环基的实施例包括但不限于 等。
“桥杂环基”是指构成桥环骨架的一个或多个碳原子被杂原子或杂原子团取代的桥环基，所述杂原子或杂原子团选自N、O、S、NO、SO、S(O) 2等。桥杂环基优选4-13元桥杂环基、5-12元桥杂环基、6-12元桥杂环基、6-11元桥杂环基、7-11元桥杂环基。桥杂环基的实施例包括但不限于 等。
除非另有规定，“并环”是指系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的多环基团，其中每个环中可包含一定数目的双键。所述并环优选5-14元并环基，更优选7-12元并环基、更优选8-10元并环基，并环基的实例包括但不限于 等。
“并杂环”是指构成并环骨架的一个或多个碳原子被杂原子或杂原子团取代的并环基，所述杂原子或杂原子团选自N、O、S、NO、SO、S(O) 2等。优选5-14元并杂环基，更优选7-12元并杂环基，更优选8-10元并杂环基，更优选8-10元氮杂并环基，并杂环基的实例包括但不限于 等。
环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基均可以与苯环稠合，形成相应的多环结构。例如结构 中，“R 7与R 8可以环化成C 4-6环烷基”即代表了该结构可以是 “R 7与R 8可以环化成4-6元杂环烷基”的实施例包括但不仅限于 “R 7与R 8可以环化成5-7元杂芳基”的实施例包括但不仅限于
除非另有规定，术语“芳基”是指多不饱和的、芳族的烃基，其可为单环或稠合在一起的多个环。芳基的实例包括但不限于苯基。萘基。
除非另有规定，术语“杂芳基”意指包含至少一个杂原子或杂原子团(N、O、S、NO、SO、S(O) 2或NR)的稳定的单环或者多环的芳族基团。优选5-12元杂芳基，更优选5、6、7元单环或6、7、8、9或10元双环杂芳基；优选包含碳原子和1、2、3或4个独立地选自N、O和S的环杂原子。杂芳基的实例包括但不限于吡咯基、吡唑基、咪唑基、吡嗪基、恶唑基、苯并恶唑基、异恶唑基、噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、嘧啶基、苯并噻唑基、嘌呤基、苯并咪唑基、吲哚基、异喹啉基、喹喔啉基、喹啉基。
除非另有规定，术语“烷基”表示直链或支链的饱和烃基。优选C 1-6的烷基，更优选C 1-3的烷基，烷基的实例包括但不限于甲基，乙基，正丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、异戊基、新戊基、正己基等。
除非另有规定，术语“卤素”表示氟、氯、溴或碘原子。
除非另有规定，术语“卤代烷基”是指一个或多个氢原子被卤素原子取代的烷基。优选C 1-6卤代烷基，卤代烷基的实例包括但不仅限于一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、三溴甲基、2,2,2-三氟乙基，2,2,2三氯乙基等。
除非另有规定，术语“烷氧基”是指通过氧桥连接的烷基，也即是烷基将羟基中的氢原子取代所得到的基团。优选C 1-6烷氧基，更优选C 1-3烷氧基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、新戊氧基、正己基氧基等。
除非另有规定，术语“环烷基氧基”是指通过氧桥连接的环烷基，也即是环烷基取代羟基中的氢原子所得到的基团。环烷基氧基优选3-7元、4-7元、或5-7元环烷氧基。环烷基氧基的实例包括但不限于环丙基氧基、环丁基氧基、环戊烷基氧基、环己基氧基等。
除非另有规定，术语“卤代烷氧基”是指一个或多个氢原子被卤素原子取代的烷氧基。卤代烷氧基的实例包括但不限于三氟甲氧基、三氯甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、2,2,2-三氯乙氧基等。
除非另有规定，术语“环烯基”是指环中包含一个或多个不饱和碳-碳双键的稳定的单环烃基或多环烃基。这些环烯基的实例包括但不限于环丙烯、环丁烯、环戊烯基、环己烯基、1,3-环己二烯基、1,4-环己二烯基等。
除非另有规定，术语“杂环烯基”是指环中包含1-3个杂原子或杂原子团的环烯基。
特别说明，本文中所有的取代基和/或其变体的组合只有在这样的组合会产生稳定的化合物的情况下才是被允许的。
在本发明实施例中，标题化合物的命名是借助Chemdraw通过化合物结构转化过来的。若化合物名称与化合物结构存在不一致的情况，可通过综合相关信息和反应路线辅助确定；无法通过其他来确认的，以给出的化合物结构式为准。
本发明中部分化合物的制备方法引用了前述类似化合物的制备方法。本领域人员应当知晓，在使用或参照使用其引用的制备方法时，反应物的投料比、反应溶剂、反应温度等可根据反应物的不同，进行适当的调整。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
本发明实施例中使用的缩写及其对应的化学名称如下：
缩写 化学名称
HATU 2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯
DMAP 4-二甲氨基吡啶
DIEA N,N-二异丙基乙胺
DMSO 二甲基亚砜
DMF N,N-二甲基甲酰胺
NMP N-甲基吡咯烷酮
具体实施方式：
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker Avance III 400M核磁仪器，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d 6)，氘代甲醇(CD 3OD)和氘代氯仿(CDCl 3)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Shimadzu LCMS-2020质谱仪(离子源为电喷雾离子化)。HPLC的测定使用Shimadzu LCMS-20高效液相色谱。
制备高效液相色谱使用Waters 2767-2489(Xbridge，C18，10μm，OBD 250cm×19cm)或Waters 2767-2489(Sunfire Prep，C18，10μm，OBD 250cm×19cm)。
薄层层析硅胶板使用烟台江友硅胶开发有限公司GF254硅胶板或乳山市上邦新材料有限公司GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，制备型20x 20cm，柱层析一般使用于成化工200～300目硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度。
实施例1:
(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将喹喔啉-6-胺(5.0g,34.5mmol)溶于乙酸(150mL)中，缓慢滴加氯化碘(6.1g,37.6mmol)的乙酸(55mL)溶液，氩气氛围下20℃搅拌2小时至反应完全。反应液直接减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1～3/1)得到5-碘喹喔啉-6-胺(6.0g，收率64％)。
MS(ESI)M/Z:272.1[M+H] +.
步骤2：室温下将5-碘喹喔啉-6-胺(6.0g,22.1mmol)、二甲基膦氧(2.6g,33.2mmol)和磷酸钾(7.0g,33.2mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(100mL)和水(20mL)中，加入4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(1.2g,2.2mmol)和醋酸钯(494mg,2.2mmol)。反应液在氩气氛下加热至120℃搅拌24小时至反应完全。冷却至室温，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1～1/1)得到(6-氨基喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(4.0g，收率82％)。
MS(ESI)M/Z:221.9[M+H] +.
步骤3：室温下将(6-氨基喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(1.0g,4.5mmol)溶于乙醇(20mL)中，加入5-溴-2,4-二氯吡啶(2.0g,9.0mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.5g,27.1mmol)。反应液在氩气保护下加热至120℃搅拌72小时至反应完全。将反应液冷却至室温并减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1～1/1)得到(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(0.5g，收率27％)。
MS(ESI)M/Z:411.9[M+H] +.
步骤4：将1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(5.0g,20.1mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.1g,22.0mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(60mL)中，加入碳酸钾(8.3g,60.0mmol)，升温至60℃搅拌过夜。反应液用水(300mL)稀释后用乙酸乙酯(200mL×3次)萃取。合并有机相，先用饱和食盐水(300mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝8/1)得到4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.9g，收率83％)。
MS(ESI)M/Z:416.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ8.22(s,1H),6.58(s,1H),3.96(s,3H),3.64(t,J＝4.8Hz,4H),3.12(t,J＝4.8Hz,4H),1.49(s,9H).
步骤5：室温下将4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.0g,7.2mmol)和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸频那醇酯(2.25g,10.8mmol)溶于二氧六环(60mL)和水(6mL)中,加入碳酸钠(2.3g,21.6mmol)和二茂铁二氯化钯(587.5mg,0.72mmol)。反应液在氩气氛围下加热至105℃搅拌过夜。将反应液冷却至室温，用水(300mL)稀释后用乙酸乙酯(200mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.4g，收率80％)。
MS(ESI)M/Z:418.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ7.93(s,1H),7.86(s,1H),7.71(s,1H),6.60(s,1H),3.98(s,3H),3.96(s,3H),3.50(br,4H),2.95(br,4H),1.47(s,9H).
步骤6：室温下向4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.9g,4.6mmol)的甲醇(2mL)溶液中加入盐酸二氧六环溶液(12mL,4M)。室温下搅拌18小时后减压浓缩得到1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪盐酸盐(1.4g，粗品)。
MS(ESI)M/Z:318.1[M+H] +.
步骤7：室温下向1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪盐酸盐(1.0g,粗品，约2.8mmol)和6-溴代己酸甲酯(0.6mL,3.8mmol)的N’N-二甲基甲酰胺(41mL)溶液中加入碳酸铯(3.5g,10.8mmol)。反应液在室温下搅拌18小时。将反应液用水(200mL)稀释后用乙酸乙酯(150mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝19/1)得到6-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)己酸甲酯(927mg，收率64％)。
MS(ESI)M/Z:446.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ7.92(s,1H),7.86(s,1H),7.69(s,1H),6.61(s,1H),3.97(s,3H),3.95(s,3H),3.67(s,3H),3.03(brs,4H),2.52(brs,4H),2.38(t,J＝7.6Hz,2H),2.32(t,J＝7.6Hz,2H),1.67-1.60(m,4H),1.54-1.49(m,2H).
步骤8：室温下向6-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)己酸甲酯(927mg,2.1mmol)的甲醇(20mL)溶液中加入10％钯碳催化剂Pd/C(223mg)。氢气置换三次后反应体系在15psi氢气氛围下搅拌过夜。反应液过滤，滤饼用甲醇(20mL)洗涤，滤液减压浓缩得到6-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酸甲酯(592mg，收率68％)。
MS(ESI)M/Z:416.2[M+H +].
步骤9：室温下向6-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酸甲酯(204mg,0.49mmol)和(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(203mg,0.49mmol)的异丙醇(8mL)溶液中加入三氟乙酸(0.36mL,4.9mmol)。反应液升温至100℃搅拌36小时。将反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝40/1)得到6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酸甲酯(277mg，收率71％)。
MS(ESI)M/Z:791.2[M+H] +.
步骤10：室温下向6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酸甲酯(200mg,0.25mmol)的四氢呋喃(2mL)和水(1mL)混合溶液中加入氢氧化锂(32mg,0.75mmol)。反应液在室温下搅拌2小时，用稀盐酸将反应液pH值调节至5，得到的混合物直接用反相柱色谱层析纯化得到6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酸(111mg，收率57％)。
MS(ESI)M/Z:777.5[M+H] +.
步骤11：室温下将6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酸(60mg,0.077mmol),HATU(44mg,0.10mmol)和三乙胺(23mg,0.11mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(4mL)中，室温下搅拌0.1小时后加入(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲酰胺盐酸盐(34mg,0.077mmol)。反应液在室温下继续搅拌3小时， 加入水(8mL)，有黄色固体析出，过滤，滤饼用高效液相制备色谱纯化得到目标化合物(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲酰胺(35mg，收率38％)。
MS(ESI)M/Z:1189.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.60(s,1H),8.97(s,1H),8.84-8.80(m,3H),8.57(t,J＝6.0Hz,1H),8.42(s,1H),8.27(s,1H),7.99(s,1H),7.87(d,J＝9.2Hz,1H),7.79(s,1H),7.57(br,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(d,J＝8.0Hz,2H),6.84(s,1H),5.14(d,J＝3.6Hz,1H),4.56(d,J＝9.2Hz,1H),4.45-4.40(m,2H),4.35(brs,1H),4.21(d,J＝16.0Hz,5.6Hz,1H),3.81(s,3H),3.75(s,3H),3.71-3.63(m,2H),2.87(br,4H),2.51-2.49(m,4H),2.44(s,3H),2.35-2.27(m,3H),2.18-2.13(m,1H),2.10(s,3H),2.03(s,3H),2.10-2.02(m,1H),1.99-1.90(m,1H),1.60-1.40(m,4H),1.35-1.25(m,2H),0.94(s,9H).
实施例2:
(2S,4R)-1-((S)-2-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪(2.0g，6.3mmol)和DMAP(766mg，6.3mmol)加入到二氯甲烷(20mL)中，搅拌5分钟，再加入三氟乙酸酐(2.64g，12.6mmol)，室温搅拌反应2小时。将反应液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1～5/1)得到2,2,2-三氟-1-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(2.0克，收率77％)。
MS(ESI)M/Z:414.1[M+H] +.
步骤2：室温下将2,2,2-三氟-1-(4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(2.0g，4.8mmol)和10％钯碳(500mg)加入到乙醇(30mL)中，在氢气球氛围下，升温到55℃搅拌反应2小时。将反应液冷至室温，过滤，滤液减压浓缩得到1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮直接用于下一步反应(1.7克，收率92％)。
MS(ESI)M/Z:384.1[M+H] +.
步骤3：室温下将1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(1.0g，2.6mmol)，(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧膦(859mg，2.1mmol)和三氟乙酸(2.96g，26.0mmol)依次加入到异丙醇(30mL)中，氩气保护下升温至95℃搅拌反应16小时。将反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到1-(4-(4-((5-溴 -4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮(1.5克，收率76％)。
MS(ESI)M/Z:759.1[M+H] +.
步骤4：室温下将1-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮(2.5g，3.3mmol)和氢氧化钾(1.85g，33.0mmol)加入到甲醇(100mL)和水(10mL)中，升温至60℃搅拌反应5小时。将反应液冷却至室温，用二氯甲烷(100mL)稀释，分液。有机相先用饱和食盐水(100mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到((6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(1.5克，收率69％)。
MS(ESI)M/Z:663.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.84-8.65(m,3H),8.25-8.11(m,1H),7.93(d,J＝14.4Hz,1H),7.78(d,J＝6.0Hz,1H),7.41(s,2H),6.81-6.56(m,1H),3.86(s,3H),3.63(s,3H),2.95-2.87(m,4H),2.85-2.77(m,4H),2.13(d,J＝4.8Hz,3H),2.08(s,3H).
步骤5：室温下将5-氯戊酸(62mg,0.45mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中，依次加入HATU(172mg,0.45mmol)和DIEA(135mg,1.05mmol)，搅拌30分钟后，滴加(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲酰胺(150mg,0.35mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液，继续室温搅拌3小时。LCMS监控显示原料消失，往反应液中加入水(10mL)淬灭反应。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到(2S,4R)-1-((S)-2-(5-氯戊酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(125mg，收率65％)。
MS(ESI)M/Z:549.5[M+H] +.
步骤6：室温下将(2S,4R)-1-((S)-2-(5-氯戊酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(125mg,0.23mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，依次加入碘化钠(51mg,0.34mmol)，DIEA(88mg,0.76mmol)和((6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(151mg,0.23mmol)，将反应体系加热至90℃并搅拌4小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(10mL)淬灭反应。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用反相柱层析纯化(洗脱剂：乙腈/10％碳酸氢铵＝11/9)得到终产物(2S,4R)-1-((S)-2-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(15.4mg，收率6％)。
MS(ESI)M/Z:1175.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),8.98(dd,J＝9.6,4.4Hz,1H),8.78-8.63(m,3H),8.29(s,1H),8.19(s,1H),7.75-7.51(m,3H),7.43-7.30(m,6H),6.72(s,1H),6.21(brs,1H),4.75(t,J＝8.0Hz,1H),4.57-4.53(m,3H),4.35(dd,J＝14.8,5.2Hz,1H),4.10(d,J＝11.2Hz,1H),3.89(s,3H),3.70(s,3H),3.60(d,J＝8.0Hz,2H),3.02(brs,4H),2.67(s,3H),2.54-2.51(m,6H),2.37-2.15(m,4H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.62-1.55(m,2H),1.34-1.21(m,2H),0.94(s,9H).
实施例3:
(2R,4S)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲酰胺
反应流程:
反应步骤：
以(2R,4S)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲酰胺和6-溴己酸为原料，参照实施例2的步骤制备得到终产物(2R,4S)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲酰胺(22mg)。
MS(ESI)M/Z:1189.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.56(s,1H),9.01-8.97(m,1H),8.72(d,J＝2.0Hz,1H),8.70(d,J＝2.0Hz,1H),8.66(s,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),7.68(s,1H),7.64-7.57(m,2H),7.42-7.37(m,3H),7.32-7.29(m,3H),6.73(s,1H),6.04-6.01(d,J＝7.2Hz,1H),4.75-4.72(m,1H),4.64-4.62(m,1H),4.58-4.53(m,1H),4.36-4.29(m,2H),4.16-4.12(m,1H),3.89(s,3H),3.73(s,3H),3.66-3.62(m,1H),2.92-2.90(m,4H),2.52(s,3H),2.52-2.47(m,4H),2.33-2.28(m,2H),2.24-2.11(m,1H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),2.07-1.94(m,2H),1.47-1.42(m,4H),1.32-1.21(m,4H),1.08(s,9H).
实施例4:
(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应流程:
反应步骤：
以(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲酰胺和7-溴庚酸为原料，参照实施例2的步骤制备得到终产物(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)庚酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(37.9mg)。
MS(ESI)M/Z:1203.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),8.99(dd,J＝9.6,4.4Hz,1H),8.75-8.64(m,3H),8.29(s,1H),8.22(s,1H),7.65-7.61(m,3H),7.38-7.33(m,6H),6.73(s,1H),6.12-5.98(m,1H),4.74(t,J＝8.0Hz,1H),4.63-4.47(m,3H),4.33(dd,J＝14.8,5.2Hz,1H),4.12(d,J＝11.2Hz,1H),3.89(s,3H),3.73(s,3H),3.60(dd,J＝11.2,3.6Hz,1H),2.94(br s,4H),2.65-2.25(m,9H),2.21-2.20(m,2H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.76-1.40(m,6H),1.32(brs,4H),0.93(s,9H).
实施例5:
(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应流程:
反应步骤：
以(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷基-2-甲酰胺和4-氯丁酸为原料，参照实施例2的步骤制备得到终产物(2S,4R)-1-((S)-2-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丁酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(22.4mg)。
MS(ESI)M/Z:1161.2[M+H +].
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),8.98(dd,J＝9.6,4.0Hz,1H),8.71(dd,J＝10.0,2.0Hz,2H),8.66(s,1H),8.29(s,1H),8.20(s,1H),7.75-7.59(m,2H),7.55-7.44(m,2H),7.38-7.29(m,5H),6.95-6.71(m,2H),4.79(t,J＝8.0Hz,1H),4.63-4.45(m,3H),4.37(dd,J＝14.8,5.2Hz,1H),4.17(d,J＝11.6Hz,1H),3.90(s,3H),3.75(d,J＝4.8Hz,1H),3.68(s,3H),3.59(dd,J＝11.2,3.2Hz,1H),3.26-2.75(m,10H),2.67-2.47(m,5H),2.36(d,J＝13.2Hz,1H),2.26-2.17(m,1H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.99(brs,2H),0.97(s,9H).
实施例6:
4-((2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将((6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(50mg,0.076mmol)和(2-(2-(2-(2-溴乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(50mg,0.14mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入DIEA(39mg,0.30mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至85℃搅拌5小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(10mL)淬灭反应。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(70mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:938.3[M+H] +.
步骤2：室温下向(2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(90mg,约0.096mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入盐酸二氧六环溶液(12mL,4M)。室温下搅拌2小时后减压浓缩得到(6-((2-((4-(4-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(60mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:838.3[M+H] +.
步骤3：室温下将(6-((2-((4-(4-(2-(2-(2-(2-氨基乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(60mg,约0.072mmol)和2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-4-氟异吲哚-1,3-二酮(20mg,0.72mmol)溶于DMSO(5mL)中，加入DIEA(47mg,0.36mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至110℃搅拌12小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(10mL)淬灭反应。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物4-((2-(2-(2-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1mg)。
MS(ESI)M/Z:1093.7[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.57(s,1H),8.98-8.95(m,1H),8.75(d,J＝1.2Hz,1H),8.70(d,J＝1.6Hz,1H),8.29(s,1H),8.20(s,1H),7.66(brs,2H),7.52-7.46(m,2H),7.35-7.26(m,2H),7.10(d,J＝6.8Hz,1H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),6.71(s,1H),6.53(t,J＝5.2Hz,1H),4.94-4.89(m,1H),3.89(s,3H),3.73-3.62(m,13H),3.48-3.43(m,2H),3.0-2.7(m,12H),2.26-2.18(m,2H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),2.07-1.95(m,2H).
实施例7:
(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(400mg，1.04mmol)，(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧膦(331mg，0.92mmol)和三氟乙酸(296mg，2.6mmol)依次加入到异丙醇(20mL)中，氩气保护下升温至95℃搅拌反应16小时。将反应液冷却至室温并减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑基-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟噻吩-1-酮(510mg，收率78％)。
MS(ESI)M/Z:707.4[M+H] +.
步骤2：室温下将1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑基-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟噻吩-1-酮(510mg，0.72mmol)和氢氧化钾(403mg，7.2mmol)加入到甲醇(15mL)和水(6mL)中，升温至60℃搅拌反应4小时。将反应液冷却至室温，用二氯甲烷(100mL)稀释，分液。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(370mg，收率84％)。
MS(ESI)M/Z:611.2[M+H] +.
以(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦和(2S,4R)-1-((S)-2-(6-氯己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺为原料，参照实施例2制备得到终产物(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(45.5mg)。
MS(ESI)M/Z:1137.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ10.67(s,1H),8.68(s,1H),8.49-8.45(m,1H),8.22(d,J＝3.6Hz,2H),7.79(s,1H),7.52(s,1H),7.39-7.29(m,7H),7.03-6.95(m,2H),6.71(s,1H),6.10(brs,1H),4.75(t,J＝8.0Hz,1H),4.61-4.51(m,3H),4.36-4.31(m,1H),4.10(d,J＝11.2Hz,1H),3.88(s,3H),3.85(s,3H),3.60-3.57(m,1H),2.98(br s,4H),2.60-2.52(m,9H),2.26-2.13(m,4H),1.86(s,3H),1.83(s,3H),1.75-1.50(m,4H),1.37-1.32(m,2H),0.93(s,9H).
实施例8:
4-((2-(2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基-3-氧丙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(50mg，0.076mmol)溶于DMF(5mL)中，依次加入3-(2-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-4-基)氨基)乙氧基)丙酸(43mg，0.10mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIEA(20mg，0.15mmol)，反应体系加热至25℃搅拌3小时。LCMS监控显示原料消失，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取。合并有机相，先用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物4-((2-(2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基-3-氧丙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(26.8mg，收率33％)。
MS(ESI)M/Z:1077.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.86-8.85(m,2H),8.75-8.61(m,1H),8.28(s,1H),7.96(s,1H),7.65(brs,2H),7.58-7.54(m,1H),7.48-7.44(m,1H),7.01-6.95(m,2H),6.82(s,1H),5.02-4.98(m,1H),3.88(s,3H),3.79-3.76(m,4H),3.72-3.69(m,2H),3.68-3.57(m,8H),3.44-3.42(m,2H),2.91-2.84(m,4H),2.80-2.75(m,1H),2.70-2.61(m,4H),2.17-2.13(m,6H),2.04-1.98(m,1H),1.32-1.28(m,1H).
实施例9:
4-((15-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-15-氧-3,6,9,12-四氧戊癸基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将1-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)-3,6,9,12-四氧代十五烷基-15-油酸(120mg，0.23mmol)，2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(105mg，0.28mmol)和N,N-二异丙基 乙胺(59mg，0.46mmol)溶于DMF(5mL)，搅拌一小时后加入((6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(152mg，0.23mmol)，继续搅拌3小时。LCMS监测反应基本结束，反应液过滤，滤液经高效制备液相色谱纯化得到终产物4-((15-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-15-氧-3,6,9,12-四氧戊癸基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(42mg，收率16％)。
MS(ESI)M/Z:1166.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.58(s,1H),8.98-8.94(m,1H),8.88-8.83(m,1H),8.74(d,J＝1.6Hz,1H)，8.70(d,J＝2.0Hz,1H),8.29(s,1H),8.23(s,1H),7.67(s,1H),7.66-7.56(m,2H),7.51-7.45(m,1H),7.38(s,1H),7.10(d,J＝6.8Hz,1H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),6.65(s,1H),6.50-6.48(m,1H),4.96-4.85(m,1H),3.89(s,3H),3.83-3.80(t,J＝4.8Hz,2H),3.73-3.64(m,18H),3.55-3.53(m,2H),3.53-3.48(m,2H),2.89(brs,4H),2.67-2.64(m,2H),2.58(t,J＝6.8Hz,2H),2.24-2.20(m,1H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),2.02-1.98(m,1H),1.31-1.26(m,1H).
实施例10:
4-((2-(2-(2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(50mg，0.076mmol)溶于DMF(5mL)中，依次加入3-(2-(2-(2-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-4-基)氨基)乙氧基)乙氧基)丙酸(35mg，0.073mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIEA(20mg，0.15mmol)，反应体系加热至25℃搅拌3小时。LCMS监控显示原料消失，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取。合并有机相，先用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物4-((2-(2-(2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-3-氧丙氧基)乙氧基)乙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(23.6mg，收率29％)。
MS(ESI)M/Z:1121.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.86-8.84(m,2H),8.77-8.57(m,1H),8.28(s,1H),7.96(s,1H),7.64(s,2H),7.55-7.52(m,1H),7.47-7.43(m,1H),6.99-6.95(m,2H),6.82(s,1H),5.03-4.98(m,1H),3.88(s,3H),3.78-3.69(m,7H),3.68-3.58(m,11H),3.40(t,J＝5.2Hz,2H),2.95-2.87(m,4H),2.83-2.78(m,1H),2.73-2.59(m,4H),2.16(s,3H),2.13(s,3H),2.08-1.99(m,1H),1.33-1.28(m,1H).
实施例11:
4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-9-氧化壬基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(50mg，0.076mmol)溶于DMF(5mL)中，依次加入9-((2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚-4-基)氨基)壬酸(32mg，0.075mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIEA(20mg，0.15mmol)，反应体系加热至25℃搅拌3小时。LCMS监控显示原料消失，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取。合并有机相，先用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-9-氧化壬基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(21.5mg，收率27％)。
MS(ESI)M/Z:1074.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.88-8.85(m,2H),8.74-8.59(m,1H),8.25(s,1H),7.98(s,1H),7.75-7.57(m,3H),7.53-7.49(m,1H),7.02-6.99(m,2H),6.85(s,1H),5.05-5.00(m,1H),3.89(s,3H),3.80-3.62(m,7H),2.97-2.86(m,4H),2.84-2.60(m,3H),2.43(t,J＝7.6Hz,2H),2.17(s,3H),2.14(s,3H),2.10-1.99(m,2H),1.67-1.58(m,4H),1.47-1.28(m,9H).
实施例12:
4-((2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((2-(3-羟基丙氧基)乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg,0.27 mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(40mg,0.40mmol)。降温至0℃，缓慢滴加甲磺酰氯(46mg,0.40mmol)，0℃下搅拌1小时。TLC监测显示反应结束，加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)淬灭反应。混合液用二氯甲烷(20mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法纯化得到3-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙基甲磺酸酯。
MS(ESI)M/Z:454.3[M+H] +.
步骤2：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(48mg,0.073mmol)和3-(2-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)乙氧基)丙基甲磺酸酯(50mg,0.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入DIEA(28.7mg,0.22mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至80℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(10mL)淬灭反应。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物4-((2-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(26.7mg，收率35％)。
MS(ESI)M/Z:1020.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.34(brs,1H),10.97(brs,1H),10.39(brs,1H),8.90(s,1H),8.78(d,J＝1.2Hz,1H),8.71-8.68(m,1H),8.08(s,1H),7.92(d,J＝9.2Hz,1H),7.83(s,1H),7.64(s,1H),7.58-7.54(m,1H),7.39(s,1H),7.16(d,J＝6.8Hz,1H),6.95(d,J＝8.4Hz,1H),6.75(s,1H),6.54(t,J＝4.8Hz,1H),5.01-4.96(m,1H),3.90(s,3H),3.74-3.69(m,9H),3.62-3.58(m,2H),3.51-3.49(m,2H),3.40-3.38(m,1H),3.28-3.21(m,3H),3.13-3.08(m,2H),3.00-2.92(m,2H),2.81-2.76(m,1H),2.35-2.18(m,3H),2.14(s,3H),2.11(s,3H).
实施例13:
5-(4-((1-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-羰基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
将4-(4-((4-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)苯甲酸(73mg，0.13mmol)溶于DMF(5mL)中，依次加入(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(87mg，0.13mmol)、HATU(99mg，0.26mmol)和DIEA(67mg，0.52mmol)，反应体系室温下搅拌1小时。LCMS监控显示原料消失，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取。合并有机相，先用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(4-((1-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-羰基)苯基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7.2mg，收率4.6％)。
MS(ESI)M/Z:1204.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.66(s,1H),11.07(s,1H),8.84-8.80(m,3H),8.40(s,1H),8.28(s,1H),8.12(s,1H),7.75(s,1H),7.69-7.64(m,2H),7.36-7.32(m,3H),7.27-7.23(m,1H),6.89(s,1H),6.54(d,J＝8.8Hz,2H),5.09-5.05(m,1H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.70-3.68(m,4H),3.51-3.44(m,6H),3.39-3.36(m,2H),2.90-2.83(m,6H),2.67-2.51(m,6H),2.44-2.40(m,2H),2.33-2.27(m,1H),2.19-2.13(m,1H),2.03(s,3H),2.00(s,3H),1.69-1.64(m,3H).
实施例14:
5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将2-(哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐(500mg,2.4mmol)、1-Boc-3-碘氮杂环丁烷(1.05g,3.6mmol)和碘化钠(36mg,0.24mmol)溶于乙腈(100mL)中，加入碳酸钾(1.0g,7.2mmol)，反应体系升温至80℃搅拌16小时。LCMS监测显示反应结束，反应液冷却至室温，倒入到冰水(200mL)中。混合液用乙酸乙酯(200mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到3-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(304mg，收率39％)。
MS(ESI)M/Z:327.2[M+H] +.
步骤2：将3-(4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(240mg,0.74mmol)溶于氯化氢二氧六环溶液(3M,5mL)中，室温下搅拌3小时。LCMS监测显示反应结束，反应液减压浓缩得到190mg 2-(1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐。
MS(ESI)M/Z:227.2[M+H] +.
步骤3：将2-(1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯盐酸盐(250mg,0.95mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(263mg,0.95mmol)溶于乙腈(100mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(245mg，1.90mmol)，反应体系升温至85℃搅拌16小时。LCMS监测显示反应结束，反应液冷却至室温，倒入到冰水(200mL)中。混合液用乙酸乙酯(200mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化得到2-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯(143mg，收率31％)。
MS(ESI)M/Z:483.2[M+H] +.
步骤4：将2-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸乙酯(140mg,0.29mmol)溶于水(5mL)中，降温至0℃，缓慢滴加浓硫酸(1mL)。反应体系升温至100℃下搅拌16小时，LCMS监测显示反应结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液调节pH值至中性，减压浓缩，所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到2-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸(103mg，收率78％)。
MS(ESI)M/Z:455.2[M+H] +.
步骤5：将2-(1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙酸(27.7mg，0.06mmol)溶于DMF(3mL)中，依次加入(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(33mg，0.05mmol)、HATU(57mg，0.15mmol)和DIEA(20mg，0.15mmol)，反应体系室温下搅拌2小时。LCMS监控显示原料消失，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取。合并有机相，先用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3.6mg，收率6.6％)。
MS(ESI)M/Z:1099.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.56(s,1H),8.99-8.96(m,1H),8.74-8.70(m,2H),8.30-8.24(m,2H),8.03(s,1H),7.65-7.62(m,3H),7.36(s,1H),6.78(s,1H),6.64(s,1H),6.52(d,J＝9.4Hz,1H),5.36-5.30(m,1H),4.95-4.90(m,1H),4.11(t,J＝7.6Hz,2H),3.90(brs,4H),3.73(brs,4H),3.53(s,2H),2.90-2.84(m,6H),2.80-2.72(m,2H),2.29(d,J＝6.4Hz,1H),2.24-2.20(m,1H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),2.02-1.98(m,4H),1.90-1.84(m,2H),1.28-1.25(m,3H).
实施例15:
4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丁酰胺
反应流程:
反应步骤：
将4-氯-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丁酰胺(100mg,0.26mmol)、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(176mg,0.26mmol)和碘化钠(5mg,0.03mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入DIEA(68mg,0.52mmol)，反应体系升温至90℃搅拌16小时。LCMS监测显示反应结束，反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)丁酰胺(10.5mg，收率4％)。
MS(ESI)M/Z:1004.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.69(s,1H),11.16(s,1H),9.85(s,1H),9.69-9.58(m,1H),8.85(d,J＝2.0Hz,1H),8.81-8.78(m,2H),8.45-8.43(m,2H),8.29(s,1H),8.05(s,1H),7.89-7.82(m,2H),7.68-7.66(m,2H),6.77(s,1H),5.18-5.13(m,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.60-3.56(m,2H),3.27-3.22(m,6H),3.00-2.95(m,3H),2.67-2.55(m,5H), 2.09-2.06(m,2H),2.04(s,3H),2.00(s,3H).
实施例16:
7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)庚酰胺
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦和7-溴-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)庚酰胺为原料，参照实施例15制备得到终产物7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-N-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)庚酰胺(34.1mg)。
MS(ESI)M/Z:1046.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.78(s,1H),11.16(s,1H),9.71(s,1H),9.29(brs,1H),8.86(s,1H),8.82-8.77(m,2H),8.59(brs,1H),8.48(d,J＝8.0Hz,1H),8.31(s,1H),8.03(s,1H),7.84-7.81(m,2H),7.65-7.62(m,2H),6.77(s,1H),5.16-5.12(m,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.25-3.22(m,8H),2.97-2.91(m,4H),2.67-2.55(m,4H),2.04(s,3H),2.01(s,3H),1.69(brs,4H),1.40(brs,4H).
实施例17:
3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦和5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)戊-4-炔-1-基甲磺酸酯为原料(其制备，参见WO2017176958A1)，参照实施例15制备得到终产物3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(15.1mg)。
MS(ESI)M/Z:971.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.17(s,1H),10.61(s,1H),8.80(s,1H),8.76(s,1H),8.69-8.65(m,1H),8.06(s,1H),7.97(s,1H),7.89-7.85(m,2H),7.59(d,J＝7.6Hz,1H),7.52-7.41(m,2H),7.30(s,1H),6.75(s,1H),5.34-5.29(m,1H),4.67-4.49(m,2H),3.93(s,3H),3.78(s,3H),3.74-3.67(m,1H),3.63-3.56(m,1H),3.41-3.36(m,2H),3.26-3.24(m,3H),3.18-3.13(m,1H),2.98-2.91(m,2H),2.87-2.85(m,2H),2.67-2.65(m,2H),2.58-2.10(m,8H),1.27-1.24(m,2H).
实施例18:
3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦和5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)戊基甲磺酸酯为原料(其制备，参见WO2017176958A1)，参照实施例15制备得到终产物3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(17mg)。
MS(ESI)M/Z:975.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.17(s,1H),9.62(s,1H),8.73(d,J＝2.0Hz,1H),8.69(d,J＝1.6Hz,1H),8.62-8.57(m,1H),7.99(s,1H),7.95(s,1H),7.75-7.70(m,1H),7.64-7.61(m,1H),7.45-7.40(m,2H),7.34-7.29(m,2H),6.67(s,1H),5.23-5.18(m,1H),4.47-4.28(m,2H),3.79(s,3H),3.72(s,3H),3.57-3.54(m,2H),3.32-3.26(m,1H),3.20-3.13(m,3H),2.95-2.88(m,4H),2.84-2.78(m,1H),2.66-2.61(m,2H),2.49-2.36(m,1H),2.18-2.15(m,2H),2.07(s,3H),2.04(s,3H),1.24-1.19(m,2H),0.80-0.74(m,4H).
实施例19:
3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((5-羟基戊基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(65mg,0.18mmol，制备，参见Journal of Medicinal Chemistry，2020,192,112186)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺(27mg,0.27mmol)。降温至0℃，缓慢滴加甲磺酰氯(31mg,0.27mmol)，0℃下搅拌1小时。TLC监测显示反应结束，加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)淬灭反应。混合液用二氯甲烷(20mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法纯化得到5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)戊基甲磺酸酯(65mg，收率82％)。
MS(ESI)M/Z:438.0[M+H] +.
步骤2：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(98mg,0.15mmol)和5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)戊基甲磺酸酯(65mg,0.15mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入DIEA(48mg,0.37mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至80℃并搅拌12小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物3-(4-(5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(20.5mg，收率35％)。
MS(ESI)M/Z:1004.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.58(s,1H),8.99(dd,J＝4.4,9.6Hz,1H),8.73(d,J＝2.0Hz,1H),8.70(d,J＝2.0Hz,1H),8.43(brs,1H),8.29(s,1H),8.21(s,1H),7.65-7.61(m,3H),7.53-7.47(m,1H),7.34(s,1H),7.10(d,J＝7.2Hz,1H),6.89(d,J＝8.8Hz,1H),6.74(s,1H),6.24(t,J＝5.6Hz,1H),4.94-4.89(m,1H),3.89(s,3H),3.72(s,3H),3.32-3.26(m,2H),2.96(brs,4H),2.91-2.59(m,8H),2.45(brs,2H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.75-1.67(m,4H),1.51-1.43(m,2H).
实施例20:
4-((3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((3-羟基丙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮为原料，参照实施例19制备得到终产物4-((3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6.7mg)。
MS(ESI)M/Z:976.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.58(s,1H),9.00-8.96(m,1H),8.74(d,J＝1.6Hz,1H),8.70(d,J＝1.6Hz,1H),8.29(s,1H),8.21(s,1H),7.66(brs,2H),7.52(t,J＝6.4Hz,1H),7.34(s,1H),7.14-7.11(m,1H),7.00-6.96(m,1H),6.75(s,1H),6.47(brs,1H),4.94-4.89(m,1H),3.91(s,3H),3.69(s,3H),3.42(brs,2H),3.39-2.58(m,12H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),2.00-1.78(m,2H),1.31-1.25(m,2H).
实施例21:
3-(4-(3-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)丙基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦和3-(4-(3-(3-羟基丙氧基)丙基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(制备参见WO2020113233A1)为原料，参照实施例19制备得到终产物3-(4-(3-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙氧基)丙基)-3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-苯并[d]咪唑-1-基)哌啶-2,6-二酮(12.3mg)。
MS(ESI)M/Z:1020.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),8.99-8.95(m,1H),8.75(d,J＝1.2Hz,1H),8.71(d,J＝1.6Hz,1H), 8.30(s,1H),8.22(s,1H),7.90(brs,1H),7.69(d,J＝8.8Hz,1H),7.37(brs,2H),7.02-6.89(m,2H),6.74(s,1H),6.67(d,J＝8.0Hz,1H),5.26-5.21(m,1H),3.90(s,3H),3.70(s,3H),3.66-3.64(m,3H),3.53-3.47(m,2H),3.42-3.37(m,2H),3.13-2.71(m,12H),2.66-2.59(m,2H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.98-1.86(m,6H).
实施例22:
(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)庚酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将7-溴庚酸(210mg，1.0mmol)溶于DMF(3mL)中，加入HATU(1.1g，3.0mmol)和DIEA(387mg，3.0mmol)，室温下搅拌30分钟后，再滴加(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(444mg，1.0mmol)的DMF(2mL)溶液，反应体系室温下继续搅拌1小时。LCMS监控显示原料消失，向反应液中加入水(20mL)淬灭。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取。合并有机相，先用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(2S,4R)-1-((S)-2-(7-溴庚酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(200mg，收率32％)。
MS(ESI)M/Z:635.3[M+H] +.
步骤2：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(105mg,0.16mmol)和(2S,4R)-1-((S)-2-(7-溴庚酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(100mg,0.16mmol)溶于DMF(5mL)中，加入DIEA(62mg,0.48mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至80℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物(2S,4R)-1-((S)-2-(7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)庚酰氨基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(22.5mg，收率12％)。
MS(ESI)M/Z:1217.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),8.99-8.95(m,1H),8.74(d,J＝1.6Hz,1H),8.71(d,J＝2.0Hz,1H),8.66(s,1H),8.30(s,1H),8.21(s,1H),7.75(s,1H),7.72-7.68(m,1H),7.51(d,J＝7.2Hz,1H),7.39-7.36(m,6H),6.71(s,1H),6.28(d,J＝8.0Hz,1H),5.12-5.05(m,1H),4.77(t,J＝8.2Hz,1H),4.62(d,J＝9.2Hz,1H),4.49(s,1H),4.11(d,J＝11.6Hz,1H),3.91(s,3H),3.67(s,3H),3.58-5.54(m,1H),3.35-3.15(m,5H),2.91-2.85(m,2H),2.52(s,3H),2.50-2.39(m,1H),2.35-2.27(m,2H),2.24-2.18(m,2H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.81-1.72(m,4H),1.63-1.55(m,2H), 1.48(d,J＝7.2Hz,3H),1.39-1.30(m,4H),1.05(s,9H).
实施例23:
(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺
反应流程:
反应步骤：
以(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺、6-溴己酸和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例22的步骤制备得到终产物(2S,4R)-1-((S)-2-(6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺(54.3mg)。
MS(ESI)M/Z:1203.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),9.00-8.96(m,1H),8.74(d,J＝2.0Hz,1H),8.70(d,J＝1.6Hz,1H),8.66(s,1H),8.29(s,1H),8.22(s,1H),7.68(brs,2H),7.49-7.32(m,7H),6.72(s,1H),6.36-6.18(m,1H),5.12-5.04(m,1H),4.78-4.74(m,1H),4.59(d,J＝8.8Hz,1H),4.49(s,1H),4.12(d,J＝11.2Hz,1H),3.90(s,3H),3.70(s,3H),3.59-3.54(m,2H),3.24-2.90(m,5H),2.90-2.59(m,4H),2.53(s,3H),2.30-2.23(m,2H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.85-1.66(m,6H),1.48(d,J＝6.8Hz,3H),1.40-1.35(m,2H),1.05(s,9H).
实施例24:
4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)壬基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将9-氨基壬-1-醇(95mg,0.60mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(110mg,0.40mmol)溶于NMP(3mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(0.1mL)，反应体系升温至140℃搅拌20分钟。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，倒入到水(10mL)中。混合液用乙酸乙酯(10mL×4次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝0:1)纯化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((9-羟基壬基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(80mg，收率48％)。
MS(ESI)M/Z:416.2[M+H] +.
步骤2：室温下将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((9-羟基壬基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(80mg,0.19mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(0.04mL)。降温至0℃，缓慢滴加甲磺酰氯(31mg,0.27mmol)，0℃下搅拌1小时。TLC监测显示反应结束，将反应液倒入水(10mL)中。混合液用乙酸乙酯(10mL×2次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到9-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)壬基甲磺酸酯(55mg，收率58％)。
MS(ESI)M/Z:494.2[M+H] +.
步骤3：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(52mg,0.08mmol)和9-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)壬基甲磺酸酯(55mg,0.11mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入DIEA(0.04mL)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至80℃并搅拌16小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，倒入水(5mL)中。混合液用二氯甲烷(10mL×2次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用制备型薄层层析硅胶板(二氯甲烷：甲醇＝20：1)纯化得到终产物4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)壬基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(31mg，收率37％)。
MS(ESI)M/Z:1060.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.58(s,1H),8.99-8.95(m,1H),8.75(d,J＝1.2Hz,1H),8.70(d,J＝1.2Hz,1H),8.29(s,1H),8.21(s,1H),7.76-7.68(m,2H),7.52-7.48(m,1H),7.44(s,1H),7.37(s,1H),7.09(d,J＝7.2Hz,1H),6.89(d,J＝8.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.25(t,J＝6.0Hz,1H),4.93-4.89(m,1H),3.91(s,3H),3.68(s,3H),3.29-3.28(m,2H),3.14(brs,4H),2.95-2.66(m,8H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.96-1.80(m,10H),1.70-1.64(m,4H),1.47-1.39(m,2H).
实施例25:
4-((7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)庚基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮、7-氨基庚-1-醇和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例24的步骤制备得到终产物4-((7-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)庚基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(23mg)。
MS(ESI)M/Z:1032.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.74(s,1H),11.11(s,1H),9.50(brs,1H),8.87(d,J＝2.0Hz,1H),8.82(d,J＝2.0Hz,1H),8.53(s,1H),8.31(s,1H),8.04(s,1H),7.82(s,1H),7.68(s,1H),7.63-7.59(m,1H),7.50(brs,1H),7.12(d,J＝8.8Hz,1H),7.05(d,J＝7.2Hz,1H),6.78(s,1H),6.55(brs,1H),5.09-5.04(m,1H),3.85(s,3H),3.79(s,3H),3.57-3.54(m,2H),3.37-3.16(m,8H),3.00-2.96(m,3H),2.64-2.56(m,1H),2.05(s,3H),2.02(s,3H),1.70-1.62(m,4H),1.39(brs,6H),1.24(brs,2H).
实施例26:
4-((8-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)辛基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮、8-氨基辛-1-醇和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例24的步骤制备得到终产物4-((8-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)辛基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(23mg)。
MS(ESI)M/Z:1046.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.26(s,1H),9.28(s,1H),8.83-8.77(m,2H),8.73 8.64(m,1H),8.05-8.02(m,2H),7.69-7.67(m,1H),7.54-7.50(m,1H),7.45-7.42(m,2H),7.10(d,J＝6.8Hz,1H),6.91(d,J＝8.8Hz,1H),6.74(s,1H), 4.97-4.92(m,1H),3.84(s,3H),3.82(s,3H),3.67-3.60(m,2H),3.32-3.24(m,6H),3.07-2.98(m,4H),2.81-2.70(m,4H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.74-1.69(m,4H),1.47-1.26(m,8H).
实施例27:
4-((6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-氟异吲哚啉-1,3-二酮、6-氨基己-1-醇和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例24的步骤制备得到终产物4-((6-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)己基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(22mg)。
MS(ESI)M/Z:1018.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),8.99-8.95(m,1H),8.75(d,J＝1.6Hz,1H),8.71(d,J＝1.6Hz,1H),8.29(s,1H),8.22(s,1H),7.69(brs,1H),7.54-7.48(m,1H),7.35(s,1H),7.11(d,J＝7.2Hz,1H),6.91(d,J＝9.2Hz,1H),6.72(s,1H),6.25-6.23(m,1H),4.94-4.89(m,1H),3.90(s,3H),3.66(s,3H),3.34-3.31(m,2H),3.11-2.60(m,12H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.72-1.68(m,4H),1.52-1.36(m,6H).
实施例28:
4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)壬基)氧代)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将9-溴-1-壬醇(222mg,1.0mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-羟基-异吲哚啉-1,3-二酮(274mg,1.0mmol)溶于DMF(10mL)中，加入碳酸氢钠(168mg,2.0mmol)，反应体系升温至70℃搅拌12小时。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，倒入到水(100mL)中。混合液用乙酸乙酯(50mL×2次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((9-羟基壬基)氧代)异吲哚啉-1,3-二酮(390mg，收率93％)。
MS(ESI)M/Z:417.3[M+H] +.
后续步骤以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((9-羟基壬基)氧代)异吲哚啉-1,3-二酮为原料，参照实施例24的制备方法得到终产物4-((9-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)壬基)氧代)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(21.3mg)。
MS(ESI)M/Z:1061.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.90(s,1H),12.76(s,1H),11.24(s,1H),9.45(s,1H),8.87-8.82(m,1H),8.79(d,J＝2.0Hz,1H),8.73(s,1H),8.19(s,1H),7.89(s,2H),7.75-7.68(m,2H),7.45(d,J＝7.2Hz,1H),7.31(s,1H),7.22(s,1H),6.70(s,1H),5.02-4.95(m,1H),4.20(t,J＝6.0Hz,2H),3.89(s,3H),3.71(s,3H),3.58-3.56(m,2H),3.27-3.18(m,2H),3.10-3.01(m,2H),3.00-2.97(m,2H),2.88-2.86(m,2H),2.83-2.76(m,2H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.91-1.87(m,2H),1.57-1.52(m,2H),1.48-1.46(m,2H),1.46-1.34(m,10H).
实施例29:
3-(4-(10-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)癸-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将3-(4-溴-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(50mg,0.16mmol)，双(三苯基膦)二氯化钯(Ⅱ)(43 mg,0.06mmol)和碘化亚铜(17mg,0.09mmol)溶于DMF(5mL)中，氮气置换3次，再加入DIEA(216mg,1.7mmol)和癸-9-炔-1-醇(213mg,1.4mmol)，反应体系升温至65℃搅拌16小时。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，倒入到水(100mL)中。混合液用乙酸乙酯(50mL×2次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝0:1)纯化得到3-(4-(10-羟基癸-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(34mg，收率56％)。
MS(ESI)M/Z:397.2[M+H] +.
后续步骤以3-(4-(10-羟基癸-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮为原料，参照实施例24的制备方法得到终产物3-(4-(10-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)癸-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(3.9mg)。
MS(ESI)M/Z:1041.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.58(s,1H),9.00-8.96(m,1H),8.74-8.70(m,2H),8.30-8.28(m,1H),8.19(s,1H),7.81-7.32(m,8H),6.72(s,1H),5.29-5.24(m,1H),4.51-4.31(m,2H),3.91(s,3H),3.71(s,3H),2.97-2.82(m,6H),2.71-2.45(m,6H),2.35-2.21(m,4H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.53-1.46(m,4H),1.37-1.25(m,8H).
实施例30:
5-((2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将2-氨基乙-1-醇(166mg,2.7mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(500mg,1.8mmol)溶于NMP(10mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(351mg,2.7mmol)，反应体系升温至140℃搅拌20分钟。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，倒入到水(50mL)中。混合液用乙酸乙酯(40mL×4次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝0:1)纯化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-羟基乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮(200mg，收率35％)。
MS(ESI)M/Z:318.1[M+H] +.
后续步骤以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-((2-羟基乙基)氨基)异吲哚啉-1,3-二酮为原料，参照实施例24的制备方法得到终产物5-((2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5mg)。
MS(ESI)M/Z:962.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.19(s,1H),9.58(brs,1H),8.79(d,J＝1.6Hz,1H),8.75(d,J＝1.6Hz,1H),8.73-8.69(m,1H),8.09(s,1H),8.05(s,1H),7.68-7.61(m,3H),7.35(s,1H),6.99-6.95(m,2H),6.70(s,1H),4.98-4.93(m,1H),3.84(s,3H),3.77(s,3H),3.58-3.50(m 4H),3.38-3.32(m,4H),3.30-3.10(m,4H),2.95-2.76(m,4H),2.14(s,3H),2.10(s,3H).
实施例31:
5-((5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮、5-氨基戊-1-醇和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例24的步骤制备得到终产物5-((5-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3.2mg)。
MS(ESI)M/Z:1004.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.58(s,1H),9.00-8.96(m,1H),8.74(d,J＝2.0Hz,1H),8.70(d,J＝2.0Hz,1H),8.29(s,1H),8.21(s,1H),7.67-7.52(m,4H),7.35(s,1H),6.97(d,J＝2.4Hz,1H),6.79-6.76(m,1H),6.74(s,1H),4.95-4.90(m,1H),3.90(s,3H),3.70(s,3H),3.28-3.23(m,2H),3.05(brs,4H),2.92-2.70(m,6H),2.59(brs,2H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.54-1.47(m,4H),1.34-1.22(m,4H).
实施例32:
4-((5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(500mg,0.76mmol)和4-碘哌啶-1-羧酸叔丁酯(705mg,2.3mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入碳酸钾(312mg,2.3mmol)，反应体系升温至100℃搅拌36小时。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝1:1)纯化得到4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(460mg，收率72％)。
MS(ESI)M/Z:846.3[M+H] +.
步骤2：室温下向4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(460mg,0.54mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入盐酸二氧六环溶液(10mL,4M)。室温下搅拌30分钟后减压浓缩得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲磷氧化物盐酸盐(500mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:746.2[M+H] +.
步骤3：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲磷氧化物盐酸盐(68mg,约0.08mmol)和5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)戊基甲磺酸酯(60mg,0.14mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入DIEA(35mg,0.27mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至85℃并搅拌12小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物4-((5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8.2mg，收率37％)。
MS(ESI)M/Z:1087.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.57(s,1H),8.99-8.96(m,1H),8.73(d,J＝1.6Hz,1H),8.70(d,J＝1.6Hz,1H),8.28(s,1H),8.19(s,1H),7.64(brs,3H),7.53-7.47(m,1H),7.32(s,1H),7.09(d,J＝7.2Hz,1H),6.89(d,J＝8.4Hz,1H),6.74(s,1H),6.25(t,J＝5.4Hz,1H),4.93-4.88(m,1H),3.89(s,3H),3.71(s,3H),3.31-3.26(m 2H),3.11-3.03(m,2H),2.95(brs,4H),2.91-2.74(m,4H),2.72-2.69(m,4H),2.51-2.15(m,5H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.95-1.88(m,2H),1.53-1.43(m,4H),1.34-1.25(m,4H).
实施例33:
4-((3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以3-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)氨基)丙基甲磺酸酯和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲磷氧化物盐酸盐为原料，参照实施例32的步骤制备得到终产物4-((3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)丙基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6mg)。
MS(ESI)M/Z:1059.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.54(s,1H),8.97-8.93(m,1H),8.73(d,J＝2.0Hz,1H),8.70(d,J＝2.0Hz,1H),8.28(s,1H),8.16(s,1H),7.68-7.46(m,5H),7.31(s,1H),7.08(d,J＝6.8Hz,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),6.86-6.83(m,1H),6.76(s,1H),4.90-4.86(m,1H),3.89(s,3H),3.70(s,3H),3.38-3.33(m,2H),3.04-3.01(m,6H),2.87-2.63(m,9H),2.47-2.44(m,2H),2.29-2.23(m,2H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.77-1.64(m,4H),1.33-1.23(m,2H).
实施例34:
3-(4-(5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉-4-基)戊-4-炔-1-基甲磺酸酯和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲磷氧化物盐酸盐为原料，参照实施例32的步骤制备得到终产物3-(4-(5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(10.8mg)。
MS(ESI)M/Z:1054.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.04(s,1H),9.67(s,1H),8.80(s,1H),8.79-8.72(m,2H),8.14(s,1H),7.86-7.84(m,2H),7.75(s,1H),7.66-7.64(m,1H),7.58(d,J＝7.2Hz,1H),7.47(t,J＝7.6Hz,1H),7.39(s,1H),6.69(s,1H), 5.36-5.33(m,2H),4.58-4.41(m,2H),3.86(s,3H),3.76(s,3H),3.26(brs,4H),2.95-2.76(m,5H),2.67-2.60(m,2H),2.54-2.34(m,6H),2.24-2.20(m,4H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),1.31-1.25(m,6H).
实施例35:
5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲磷氧化物盐酸盐(110mg,0.13mmol)和3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(209mg,0.74mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入碳酸钾(102mg,0.74mmol)，反应体系升温至100℃搅拌5天。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩。所得残余物用制备型薄层层析硅胶板纯化得到3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(90mg，收率77％)。
MS(ESI)M/Z:901.3[M+H] +.
步骤2：将3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(90mg,0.10mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温下搅拌30分钟。LCMS监测显示反应结束，反应液减压浓缩得到(6-((2-((4-(4-(1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸盐(50mg，收率55％)。
MS(ESI)M/Z:801.3[M+H] +.
步骤3：室温下将(6-((2-((4-(4-(1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基磷氧化物三氟乙酸盐(25mg,0.03mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(25mg,0.09mmol)溶于DMSO(5mL)中，加入DIEA(12mg,0.09mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至60℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(11.4mg，收率35％)。
MS(ESI)M/Z:1057.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.23(s,1H),8.80(d,J＝1.2Hz,1H),8.75(d,J＝1.6Hz,1H),8.86-8.72(m,1H),8.58(brs,1H),8.07(s,1H),7.93(s,1H),7.69-7.60(m,2H),7.52-7.50(m,1H),7.43(s,1H),6.82(d,J＝1.2Hz,1H), 6.71(s,1H),6.60-6.57(m,1H),4.97-4.92(m,1H),4.19-4.08(m,4H),3.84(s,3H),3.79(s,3H),3.69-3.65(m,1H),3.57-3.51(m,2H),3.35-3.27(m,6H),2.93-2.68(m,5H),2.49(m,4H),2.30-2.27(m,4H),2.14(s,3H),2.11(s,3H).
实施例36:
5-(4-((4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg,0.27mmol，制备参见WO2018140809A1)溶于二氯甲烷(5mL)中，加入三乙胺(81.5mg,0.81mmol)。降温至0℃，缓慢滴加甲磺酰氯(34mg,0.30mmol)，0℃下搅拌1小时。TLC监测显示反应结束。反应液用二氯甲烷(20mL)稀释后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL×2次)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基甲磺酸酯(52mg，收率42％)。
MS(ESI)M/Z:450.1[M+H] +.
步骤2：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲磷氧化物盐酸盐(86mg,约0.10mmol)和(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基甲磺酸酯(52mg,0.12mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入DIEA(45mg,0.35mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至85℃并搅拌12小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(4-((4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.2mg，收率2％)。
MS(ESI)M/Z:1099.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CD 3OD):δ8.88-8.77(m,3H),8.29(s,1H),7.95(s,1H),7.78(s,1H),7.66(d,J＝8.4Hz,1H),7.55(brs,2H),7.00(d,J＝2.0Hz,1H),6.89-6.80(m,2H),5.08-5.06(m,1H),3.94(s,3H),3.89-3.81(m,2H),3.70(s,3H),3.68-3.53(m,4H),3.52-3.46(m,4H),3.26-3.24(m,2H),3.17-3.13(m,4H),2.89-2.48(m,1H),2.76-2.69(m,2H),2.61-2.49(m,2H),2.50-2.22(m,3H),2.17(s,3H),2.14(s,3H),2.12-2.04(m,5H),1.99-1.97(m,2H),1.88-1.78(m,1H).
实施例37:
5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下向9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-羧酸叔丁酯(346mg,0.71mmol，制备参见CN112538072A)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入盐酸二氧六环溶液(12mL,4M)。室温下搅拌2小时后减压浓缩得到3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷盐酸盐(458mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:386.2[M+H] +.
步骤2：室温下将3-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷盐酸盐(458mg，粗品)和DMAP(342mg，2.8mmol)加入到二氯甲烷(10mL)中，搅拌5分钟，再加入三氟乙酸酐(588mg，2.8mmol)，室温搅拌反应2小时。将反应液减压浓缩得到2,2,2-三氟-1-(9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙烷-1-酮(382mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:482.3[M+H] +.
步骤3：室温下将2,2,2-三氟-1-(9-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)乙烷-1-酮(382mg，粗品)和10％钯碳(50mg)加入到甲醇(15mL)中，氢气置换三次后，室温下搅拌反应2小时。过滤，滤液减压浓缩得到1-(9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(371mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:452.2[M+H] +.
步骤4：室温下将1-(9-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(371mg，粗品)，(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧膦(310mg，0.75mmol)和三氟乙酸(857mg，7.5mmol)依次加入到异丙醇(10mL)中，氩气保护下升温至100℃搅拌反应16小时。将反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物用制备TLC板纯化得到1-(9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮(277mg，四步收率47％)。
MS(ESI)M/Z:827.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),9.02-8.98(m,1H),8.73(d,J＝1.6Hz,1H),8.70(d,J＝1.6Hz,1H), 8.29(s,1H),8.19(s,1H),7.68-7.61(m,3H),7.34(s,1H),6.72(s,1H),3.91(s,3H),3.72(s,3H),3.68-3.64(m,2H),3.57(brs,2H),2.90-2.83(m,4H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.64(brs,8H).
步骤5：室温下将1-(9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮(237mg，0.29mmol)和氢氧化钾(160mg，2.9mmol)加入到甲醇(10mL)和水(4mL)中，升温至60℃搅拌反应4小时。将反应液冷却至室温，用二氯甲烷(20mL)稀释，分液。有机相先用饱和食盐水(20mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(174mg，收率83％)。
MS(ESI)M/Z:731.2[M+H] +.
步骤6：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(54mg,0.074mmol)和(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基甲磺酸酯(50mg,0.11mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入DIEA(29mg,0.22mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至85℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(4-((9-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(18.2mg，收率23％)。
MS(ESI)M/Z:1084.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.35(s,1H),12.55(brs,1H),8.80(d,J＝1.2Hz,1H),8.76-8.72(m,2H),8.05(d,J＝2.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.80(s,1H),7.69-7.64(m,2H),7.58(d,J＝9.2Hz,1H),7.46(s,1H),6.92(d,J＝0.8Hz,1H),6.74(s,1H),6.67(d,J＝8.0Hz,1H),4.96-4.91(m,1H),3.85(s,6H),3.63-3.38(m,6H),3.10-3.05(m,2H),2.96-2.75(m,8H),2.39(brs,2H),2.29(brs,2H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),1.98(brs,6H),1.79-1.69(m,5H).
实施例38:
5-(4-((5-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(250mg,1.0mmol)和六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(233mg,1.1mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入碳酸钾(414mg,3.0mmol)，升温至60℃搅拌过夜。反应液用水(50mL)稀释后用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，先用饱和食盐水(50mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用乙酸乙酯打浆纯化得到5-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(280mg，收率63％)。
MS(ESI)M/Z:442.1[M+H] +.
步骤2：室温下将5-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(280mg,0.63mmol)和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸频那醇酯(197mg,0.95mmol)溶于二氧六环(10mL)和水(2mL)中,加入磷酸钾(267mg,1.26mmol)和二茂铁二氯化钯(46mg,0.06mmol)。反应液在氩气氛围下加热至110℃搅拌12小时。将反应液冷却至室温，用水(50mL)稀释后用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用乙酸乙酯打浆纯化得到5-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(170mg，收率60％)。
MS(ESI)M/Z:444.2[M+H] +.
步骤3：室温下向5-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-羧酸叔丁酯(170mg,0.38mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入盐酸二氧六环溶液(8mL,4M)。室温下搅拌2小时后减压浓缩得到2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯盐酸盐(164mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:344.2[M+H] +.
步骤4：室温下将2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)八氢吡咯[3,4-c]吡咯盐酸盐(20mg,约0.046mmol)和(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)甲基甲磺酸酯(36mg,0.08mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入DIEA(16mg,0.12mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至85℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用水(50mL)稀释后用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用制备级TLC板纯化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((5-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(21mg，收率65％)。
MS(ESI)M/Z:697.3[M+H] +.
步骤5：室温下将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(4-((5-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(21mg,0.03mmol)和10％钯碳(10mg)加入到四氢呋喃(6mL)中，氢气置换三次后，室温下搅拌反应2小时。过滤，滤液减压浓缩得到5-(4-((5-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(18mg，收率90％)。
MS(ESI)M/Z:667.3[M+H] +.
步骤6：室温下将5-(4-((5-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(18mg，0.027mmol)，(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧膦(12mg，0.029mmol)和三氟乙酸(34mg，0.3mmol)依次加入到异丙醇(4mL)中，氩气保护下升温至95℃搅拌反应16小时。将反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(4-((5-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)六氢吡咯[3,4-c]吡咯-2(1H)-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6.6mg，收率23％)。
MS(ESI)M/Z:1042.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.37(s,1H),13.04(s,1H),8.9(dd,J＝8.8,1.2Hz,2H),8.13(s,1H),8.05(s,1H),7.71-7.66(m,3H),7.39(s,1H),7.34(s,1H),6.95(s,1H),6.70(d,J＝8.4Hz,2H),4.96-4.91(m,1H),4.02(brs,2H),3.85(s,3H),3.82(s,3H),3.67-3.61(m,2H),3.60-3.50(m,2H),3.49-3.38(m,2H),3.19(brs,4H),3.11(d,J＝9.6Hz,4H),2.70-2.56(m,4H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),2.06-1.96(m,4H),1.70-1.50(m,1H).
实施例39:
4-((5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.0g,7.4mmol)、1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1.9g,7.4mmol)溶于DMF(50mL)中，加入碳酸钾(2.1g,15.0mmol)。将反应体系加热至60℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失。将反应液冷却至室温，倒入水(250mL)中，用乙酸乙酯萃取(200mL×2)。合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到4-(1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.9g，收率51％)。
MS(ESI)M/Z:499.2[M+H] +.
步骤2：室温下将4-(1-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.9g,3.8mmol)和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸频那醇酯(0.95g,4.6mmol)溶于二氧六环(50mL)和水(10mL)中,加入磷酸钾(1.6g,7.6mmol)和二茂铁二氯化钯(0.28g,0.38mmol)，反应液在氮气氛围下加热至110℃搅拌过夜。LCMS监测反应结束，将反应液冷却至室温，用水(300mL)稀释后用乙酸乙酯(200mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.3g，收率68％)。
MS(ESI)M/Z:501.3[M+H] +.
后续步骤以4-(1-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯为原料，参照实施例37的制备方法得到终产物4-((5-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8.0mg)。
MS(ESI)M/Z:1087.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.32(s,1H),10.74(brs,1H),9.41(s,1H),8.84(s,1H),8.76(s,1H),8.70-8.64(m, 1H),8.04(s,1H),7.79(s,1H),7.66(s,1H),7.58-7.48(m,4H),7.15(d,J＝7.2Hz,1H),6.92(d,J＝8.4Hz,1H),6.68(s,1H),4.99-4.93(m,1H),3.91(s,3H),3.86(s,3H),3.83-3.79(m,2H),3.37-3.06(m,9H),2.96-2.86(m,2H),2.82-2.64(m,8H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.91-1.88(m,4H),1.78-1.56(m,6H).
实施例40:
4-((5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊基)氧代)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-((5-羟戊基)氧代)异吲哚啉-1,3-二酮(16mg,0.044mmol，制备参见CN112552293A)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入DIEA(17mg,0.13mmol)。降温至0℃，缓慢滴加甲磺酰氯(6mg,0.05mmol)，0℃下搅拌19小时。TLC监测显示反应结束。反应液用二氯甲烷(10mL)稀释后，用饱和碳酸氢钠水溶液(10mL×2次)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用制备TLC板(二氯甲烷：甲醇＝30:1)纯化得到5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧代)戊基甲磺酸酯(10mg，收率52％)。
MS(ESI)M/Z:439.1[M+H] +.
步骤2：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲磷氧化物盐酸盐(17mg,约0.02mmol)和5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氧代)戊基甲磺酸酯(10mg,0.023mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入碳酸钾(10mg,0.072mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至90℃并搅拌16小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物4-((5-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊基)氧代)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5.1mg，收率21％)。
MS(ESI)M/Z:1088.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ8.85-8.76(m,4H),8.22(s,1H),7.86-7.83(m,1H),7.76-7.72(m,1H),7.67-7.62(m,2H),7.51(d,J＝8.0Hz,1H),7.29-7.25(m,1H),6.75(s,1H),5.03-4.99(m,1H),4.25-4.22(m,2H),3.90(s,3H),3.80-3.64(m,6H),3.55-3.47(m,2H),3.44-3.39(m,2H),3.33-3.22(s,8H),3.17-2.99(m,4H),2.86-2.70(m,4H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),2.02-1.94(m,4H),1.77-1.70(m,2H).
实施例41:
3-(4-(6-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)己-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以3-(4-(6-羟己基-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(制备参见WO202191575A1)和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲磷氧化物盐酸盐为原料，参照实施例40的步骤制备得到30.4mg终产物3-(4-(6-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)己-1-炔-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。
MS(ESI)M/Z:1068.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.29(s,1H),10.57(brs,1H),10.24(s,1H),8.83(s,1H),8.76(s,1H),8.62(d,J＝7.2Hz,1H),8.04(s,1H),7.89(brs,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.58(d,J＝7.6Hz,2H),7.48-7.44(m,3H),6.66(s,1H),5.28-5.23(m,1H),4.58-4.42(m,2H),3.80(brs,6H),3.65-3.45(m,3H),3.30-3.25(m,8H),3.10-3.02(m,4H),2.91-2.84(m,4H),2.60-2.54(m,6H),2.14(s,3H),2.10(s,3H),2.10-2.03(m,2H),1.71-1.65(m,2H).
实施例42:
3-(4-(6-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)己基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以3-(4-(6-羟己基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(制备参见WO202191575A1)和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲磷氧化物为原料， 参照实施例40的步骤制备得到3.3mg终产物3-(4-(6-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)己基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮。
MS(ESI)M/Z:1072.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.26(s,1H),10.80(brs,1H),9.13(brs,1H),8.84(s,1H),8.76(d,J＝0.8Hz,1H),8.69-8.65(m,1H),8.05(s,1H),7.81(s,1H),7.77(d,J＝7.2Hz,1H),7.69(s,1H),7.52(d,J＝9.2Hz,2H),7.46(d,J＝7.6Hz,1H),7.39(d,J＝7.2Hz,1H),6.68(s,1H),5.29-5.24(m,1H),4.48-4.31(m,2H),3.92(s,3H),3.86(s,3H),3.34-3.21(m,4H),3.03-2.89(m,6H),2.7-2.69(m,7H),2.28-2.22(m,2H),2.17(s,3H),2.13(s,3H),2.09-2.04(m,2H),1.78-1.62(m,6H),1.44-1.28(m,6H).
实施例43:
4-((8-(2-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氢吡咯[3,4-c]并吡唑-5(4H)-基)辛基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1.5g,6.0mmol)、2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-羧酸叔丁酯(1.3g,6.0mmol)溶于DMF(50mL)中，加入碳酸钾(1.7g,12.0mmol)。将反应体系加热至85℃并搅拌18小时。LCMS监控显示原料消失。将反应液冷却至室温，倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取(100mL×2)。合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到2-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-羧酸叔丁酯(1.6g，收率61％)。
MS(ESI)M/Z:439.1[M+H] +.
步骤2：室温下将2-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-羧酸叔丁酯(1.6g,3.6mmol)和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸频那醇酯(0.76g,3.7mmol)溶于1,4-二氧六环(100mL)和水(20mL)中,加入碳酸铯(3.6g,10.9mmol)和二茂铁二氯化钯(0.27g,0.36mmol)，反应液在氮气氛围下加热至110℃搅拌18小时。LCMS监测反应结束，将反应液冷却至室温，旋蒸除去大部分1,4-二氧六环，加水(100mL)稀释后用乙酸乙酯(100mL×3 次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-羧酸叔丁酯(1.4g，收率84％)。
MS(ESI)M/Z:441.2[M+H] +.
步骤3：室温下向2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-羧酸叔丁酯(1.4g,3.1mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中滴加三氟乙酸(25mL)。室温下搅拌2小时后减压浓缩得到2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑三氟乙酸盐(1.1g，粗品)。
MS(ESI)M/Z:341.2[M+H] +.
步骤4：室温下将2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,4,5,6-四氢吡咯并[3,4-c]吡唑三氟乙酸盐(1.1g，粗品)和DMAP(789mg，6.5mmol)加入到二氯甲烷(50mL)中，搅拌5分钟，再加入三氟乙酸酐(1.4g，6.5mmol)，室温搅拌反应2小时。加水(100mL)淬灭后用二氯甲烷(100mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到2,2,2-三氟-1-(2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)乙烷-1-酮(1.1g，二步收率79％)。
MS(ESI)M/Z:437.3[M+H] +.
步骤5：室温下将2,2,2-三氟-1-(2-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)乙烷-1-酮(1.1g，2.5mmol)和10％湿钯碳(110mg)加入到二氯甲烷(25mL)和甲醇(25mL)的混合溶液中，氢气球置换三次，室温下搅拌2小时。LCMS检测反应完全，过滤，滤液减压浓缩得到1-(2-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(960mg，收率94％)。
MS(ESI)M/Z:407.2[M+H] +.
步骤6：室温下将1-(2-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(960mg，2.4mmol)，(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧膦(975mg，2.4mmol)和三氟乙酸(2.7g，23.6mmol)依次加入到正丁醇(25mL)中，氩气保护下升温至110℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全，将反应液冷却至室温，加水(100mL)稀释后用乙酸乙酯(100mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到1-(2-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(540mg，收率29％)。
MS(ESI)M/Z:782.1[M+H] +.
步骤7：室温下将1-(2-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-5(4H)-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(540mg，0.69mmol)和氢氧化钾(77mg，1.4mmol)加入到甲醇(10mL)和水(5mL)中，升温至60℃搅拌反应2小时。将反应液冷却至室温，旋蒸除去大部分甲醇，用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(6-((5-溴-2-((4-(5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-2(4H)-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(480mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:686.2[M+H] +.
步骤8：室温下将(6-((5-溴-2-((4-(5,6-二氢吡咯并[3,4-c]吡唑-2(4H)-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(140mg,约0.20mmol)和8-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)辛基甲磺酸酯(98mg,0.20mmol，制备参见专利WO201889736A1)溶于乙腈(25mL)中，加入DIEA(77mg,0.60mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至80℃并搅拌16小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物4-((8-(2-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-2,6-二氢吡咯[3,4-c]并吡唑-5(4H)-基)辛基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(34mg，收率16％)。
MS(ESI)M/Z:1069.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.02(s,1H),9.44(s,1H),8.78-8.73(m,3H),8.59(s,1H),8.21(s,1H),8.17(s,1H),7.62(d,J＝9.2Hz,1H),7.53-7.49(m,1H),7.19(s,1H),7.10(d,J＝7.2Hz,1H),7.01(s,1H),6.91-6.86(m,2H),6.68(s, 1H),6.25(brs,1H),5.00-4.89(m,3H),4.20-4.06(m,2H),3.92(s,3H),3.72(s,3H),3.37-3.27(m,4H),3.11-2.99(m,8H),2.90-2.73(m,4H),2.16(s,3H),2.12(s,3H),1.89-1.85(m,2H),1.70-1.65(m,2H).
实施例44:
4-((5-(4-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(0.5g，1.3mmol)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧膦(375mg，1.2mmol)和三氟乙酸(1.35g，11.8mmol)依次加入到异丙醇(20mL)中，氩气保护下升温至100℃搅拌反应16小时。将反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物用乙酸乙酯打浆纯化得到1-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮(480mg，收率60％)。
MS(ESI)M/Z:663.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ11.03(s,1H),8.56-8.52(m,1H),8.22(s,1H),8.10(s,1H),7.84(s,1H),7.51(s,1H),7.00-6.99(m,2H),6.64(s,1H),3.90(s,3H),3.86(s,3H),3.79(brs,2H),3.71-3.67(m,2H),2.99-2.94(m,4H),1.86(s,3H),1.83(s,3H).
步骤2：室温下将1-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮(430mg，0.65mmol)和氢氧化钾(363mg，6.5mmol)加入到甲醇(10mL)和水(4mL)中，升温至60℃搅拌反应4小时。将反应液冷却至室温，用二氯甲烷(20mL)稀释，分液。有机相先用饱和食盐水(20mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(2-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(304mg，收率69％)。
MS(ESI)M/Z:567.3[M+H] +.
后续步骤以(2-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例32的制备方法得到终产物4-((5-(4-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(20.2mg)。
MS(ESI)M/Z:989.4[M-H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.01(s,1H),10.59(brs,1H),10.15(s,1H),8.35-8.31(m,1H),7.87(d,J＝5.6Hz,2H),7.58-7.50(m,2H),7.42(s,1H),7.17-7.12(m,2H),6.99-6.92(m,2H),6.68(s,1H),6.25(brs,1H),4.94-4.89(m, 1H),3.89(s,3H),3.81(s,3H),3.57(d,J＝10.4Hz,2H),3.39-3.36(m,2H),3.28(brs,5H),2.97-2.86(m,4H),2.80-2.74(m,4H),2.58-2.53(m,4H),2.36-2.27(m,6H),1.86(s,3H),1.83(s,3H),1.78-1.73(m,2H),1.63-1.59(m,2H).
实施例45:
4-((5-(4-(4-((4-((2-(二甲磷酰基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(714mg，1.9mmol)，(2-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧膦(500mg，1.7mmol)和三氟乙酸(1.94g，17.0mmol)依次加入到异丙醇(50mL)中，氩气保护下升温至95℃搅拌反应16小时。将反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物用制备级TLC板纯化得到1-(4-(4-((4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮(690mg，收率63％)。
MS(ESI)M/Z:643.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.83(s,1H),9.51(s,1H),8.46(s,1H),8.18(s,1H),7.86(s,2H),7.63-7.57(m,2H),7.20-7.03(m,2H),6.92(s,1H),3.86(s,3H),3.82(s,3H),3.79(brs,4H),3.01-2.94(m,4H),2.13(s,3H),1.83(s,3H),1.80(s,3H).
步骤2：室温下将1-(4-(4-((4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙基-1-酮(500mg，0.78mmol)和氢氧化钾(437mg，7.8mmol)加入到甲醇(50mL)和水(20mL)中，升温至60℃搅拌反应4小时。将反应液冷却至室温，用二氯甲烷(50mL)稀释，分液。有机相先用饱和食盐水(20mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(2-((2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(315mg，收率74％)。
MS(ESI)M/Z:547.3[M+H] +.
步骤3：室温下将(2-((2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(50mg,0.092mmol)和5-((2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧异吲哚啉-4-基)氨基)戊基甲磺酸酯(60mg,0.14mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入DIEA(35mg,0.27mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至110℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物 4-((5-(4-(4-((4-((2-(二甲磷酰基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10mg，收率12％)。
MS(ESI)M/Z:888.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.09(s,1H),10.84(s,1H),8.60-8.56(m,1H),7.90(d,J＝12.0Hz,2H),7.83(d,J＝4.8Hz,2H),7.65(s,1H),7.61-7.57(m,1H),7.52-7.45(m,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,1H),7.03(d,J＝7.2Hz,1H),6.95-6.94(m,2H),6.79(s,1H),6.56-6.52(m,1H),5.07-5.02(m,1H),3.82(s,3H),3.81(s,3H),2.92-2.83(m,6H),2.67-2.56(m,4H),2.42-2.33(m,2H),2.06(s,3H),2.02-1.98(m,2H),1.79(s,3H),1.76(s,3H),1.64-1.58(m,2H),1.55-1.51(m,2H),1.42-1.37(m,2H),1.28-1.24(m,2H).
实施例46:
4-((5-(4-(4-(4-((4-((2-(二甲磷酰基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(2-((2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例32的步骤制备得到终产物4-((5-(4-(4-(4-((4-((2-(二甲磷酰基)苯基)氨基)-5-甲基嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(9.3mg)。
MS(ESI)M/Z:971.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.11(brs,1H),10.83(s,1H),8.60-8.57(m,1H),7.92(s,1H),7.89(s,1H),7.84(d,J＝2.4Hz,2H),7.65(s,1H),7.61-7.58(m,1H),7.53-7.46(m,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,1H),7.03(d,J＝6.8Hz,1H),6.97-6.95(m,2H),6.82(s,1H),6.56-6.53(m,1H),5.08-5.04(m,1H),3.83(s,3H),3.81(s,3H),2.94-2.85(m,8H),2.62-2.55(m,6H),2.27-2.24(m,2H),2.20-2.15(m,1H),2.07(s,3H),2.04-1.98(m,2H),1.90-1.83(m,2H),1.80(s,3H),1.77(s,3H),1.64-1.58(m,2H),1.49-1.33(m,6H),1.24(d,J＝1.2Hz,2H).
实施例47:
4-((5-(4-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将2-溴-1-氟-4-硝基苯(5.0g,22.8mmol)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(4.3g,23.0mmol)溶于DMF(50mL)中，加入碳酸钾(9.5g,68.8mmol)。将反应体系加热至60℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失。将反应液冷却至室温，倒入水(300mL)中，用乙酸乙酯萃取(300mL×2)。合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩，残留物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到4-(2-溴-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.1g，收率69％)。
MS(ESI)M/Z:386.1[M+H] +.
步骤2：室温下将4-(2-溴-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(6.0g,15.6mmol)和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸频那醇酯(3.23g,15.6mmol)溶于DMF(50mL)中,加入碳酸钠(4.9g,46.6mmol)和二茂铁二氯化钯(0.6g,0.8mmol)，反应液在氩气氛围下加热至110℃搅拌12小时。LCMS监测反应结束，将反应液冷却至室温，加水(500mL)稀释后用乙酸乙酯(250mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝40/1)得到4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.3g，收率88％)。
MS(ESI)M/Z:388.2[M+H] +.
步骤3：室温下向4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(5.3g,13.7mmol)的二氯甲烷 (30mL)溶液加入5M盐酸/二氧六环(30mL，150mmol)，室温搅拌2小时。LCMS监测原料消失，直接浓缩得到1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪盐酸盐(2.8g，粗品)。
MS(ESI)M/Z:288.2[M+H] +.
步骤4：室温下将1-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪盐酸盐(2.1g，粗品)和DMAP(1.8g，14.6mmol)加入到DMF(50mL)中，搅拌5分钟，再加入三氟乙酸酐(3.1g，14.6mmol)，室温搅拌过夜。将反应液倒入冰水(300mL)中，用乙酸乙酯(200mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到2,2,2-三氟-1-(4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(2.2g，粗品)。
MS(ESI)M/Z:384.3[M+H] +.
步骤5：室温下将2,2,2-三氟-1-(4-(2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)乙烷-1-酮(2.2g，粗品)和10％湿钯碳(200mg)加入到甲醇(30mL)中，氢气球置换三次，室温下搅拌过夜。LCMS检测反应完全，过滤，滤液减压浓缩得到1-(4-(4-氨基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(1.55g，粗品)。
MS(ESI)M/Z:354.2[M+H] +.
步骤6：室温下将1-(4-(4-氨基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(0.35g，粗品)，(2-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧膦(0.32g，1.0mmol)和三氟乙酸(0.35g，3.0mmol)依次加入到异丙醇(10mL)中，氩气保护下升温至110℃搅拌反应16小时。LCMS检测反应完全，将反应液冷却至室温，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30/1)得到1-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(420mg，四步收率29％)。
MS(ESI)M/Z:633.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.19(s,1H),9.28(s,1H),8.58(s,1H),8.18(s,2H),7.84(s,1H),7.66(d,J＝2.4Hz,1H),7.59-7.57(m,1H),7.46(d,J＝8.6Hz,1H),7.25(s,1H),7.09-7.05(m,2H),3.88(s,3H),3.74-3.70(m,4H),2.87-2.83(m,4H),1.80(s,3H),1.77(s,3H).
步骤7：室温下将1-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲基磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(1.3g，2.1mmol)和氢氧化钾(1.2g，21.0mmol)加入到甲醇(15mL)和水(6mL)中，升温至60℃搅拌反应4小时。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷(30mL)稀释，用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(2-((5-氯-2-((3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦(1.0g，收率91％)。
MS(ESI)M/Z:537.2[M+H] +.
后续步骤以(2-((5-氯-2-((3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例32的制备方法得到终产物4-((5-(4-(4-(4-((5-氯-4-((2-(二甲磷酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(16.9mg)。
MS(ESI)M/Z:961.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.15(s,1H),11.58(brs,1H),10.10(s,1H),8.48-8.45(m,1H),7.93(s,1H),7.84(s,1H),7.57-7.50(m,3H),7.39(d,J＝2.0Hz,1H),7.35-7.29(m,2H),7.20-7.14(m,2H),7.03(d,J＝8.8Hz,1H),6.93(d,J＝8.4Hz,1H),6.24(brs,1H),4.94-4.89(m,1H),3.93(s,3H),3.62-3.45(m,2H),3.38(brs,4H),3.24(brs,5H),2.98-2.87(m,4H),2.81-2.73(m,4H),2.71-2.62(m,2H),2.58-2.44(m,4H),2.35-2.24(m,2H),1.89(s,3H),1.85(s,3H),1.78-1.59(m,4H).
实施例48:
5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.7g，4.5mmol)，(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧膦(1.5g，4.1mmol)和三氟乙酸(4.68g，41.0mmol)依次加入到正丁醇(30mL)中，氩气保护下升温至98℃搅拌过夜。将反应液冷却至室温，减压浓缩，加入四氢呋喃(30mL)，然后向溶液中加入三乙胺(1.24g，12.3mmol)，搅拌10分钟，加入二碳酸二叔丁酯(900mg，4.1mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入水(30mL)淬灭，乙酸乙酯(40mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30/1)得到4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.0g，收率75％)。
MS(ESI)M/Z:719.4[M+H] +.
步骤2：将4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.0g，2.8mmol)溶于乙酸乙酯(25mL)中，加入5M盐酸/二氧六环(18.5mL，92.5mmol)，室温搅拌30分钟。TLC监测原料消失，直接浓缩得到(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(2.0g，粗品)。
MS(ESI)M/Z:619.0[M+H] +.
步骤3：将(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(500mg，约0.70mmol)溶于1,2二氯乙烷(20mL)和N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入三乙胺(232mg，2.3mmol)，搅拌5分钟，然后加入4-(2-氧乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(347mg，1.5mmol)，搅拌15分钟，加入醋酸(0.75mL)，最后加入三乙酰氧基硼氢化钠(486mg，2.3mmol)，室温搅拌2小时。TLC监测原料消失，向反应液加入饱和碳酸氢钠(20mL)淬灭，乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到4-(2-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(380mg，收率65％)。
MS(ESI)M/Z:830.3[M+H] +.
步骤4：将4-(2-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(380mg，0.46mmol)溶于乙酸乙酯(6mL)中，加入5M盐酸/二氧六环溶液(3.5mL)，室温搅拌30分钟。TLC监测原料消失，直接减压浓缩得到(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(350mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:730.4[M+H] +.
后续步骤以(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐为原料，参照实施例35的制备方法得到终产物5-(3-(4-(2-(4-(4-((5- 氯-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(25.1mg)。
MS(ESI)M/Z:1041.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.78(s,1H),9.14(dd,J＝9.6,4.0Hz,1H),8.73(dd,J＝14.8,1.8Hz,2H),8.23-8.19(m,3H),7.83(s,1H),7.73-7.60(m,2H),7.55-7.33(m,2H),6.79(d,J＝2.0Hz,1H),6.73(s,1H),6.53(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.95-4.90(m,1H),4.11(t,J＝7.2Hz,2H),3.91(s,3H),3.91-3.83(m,2H),3.71(s,3H),3.35(brs,2H),3.30-2.67(m,15H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.95-1.91(m,2H),1.85-1.29(m,7H).
实施例49:
5-(3-(4-((4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(500mg，约0.70mmol)溶于1,2二氯乙烷(20mL)和N,N-二甲基甲酰胺(4mL)中，加入三乙胺(232mg，2.3mmol)，搅拌5分钟，然后加入4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(325mg，1.5mmol)，搅拌15分钟，加入醋酸(0.75mL)，最后加入三乙酰氧基硼氢化钠(486mg，2.3mmol)，室温搅拌2小时。TLC监测原料消失，向反应液加入饱和碳酸氢钠(20mL)淬灭，乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到4-((4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(420mg，收率74％)。
MS(ESI)M/Z:816.4[M+H] +.
步骤2：将4-((4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(420mg，0.52mmol)溶于乙酸乙酯(7mL)中，加入5M盐酸/二氧六环溶液(3.9mL)，室温搅拌30分钟。TLC监测原料消失，直接减压浓缩得到(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(400mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:716.5[M+H] +.
后续步骤以(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐为原料，参照实施例35的制备方法得到终产物5-(3-(4-((4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌 啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(5.8mg)。
MS(ESI)M/Z:1027.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.78(s,1H),9.15(dd,J＝9.2,3.6Hz,1H),8.73(d,J＝14.0Hz,2H),8.26-8.07(m,3H),7.80-7.65(m,3H),7.38(brs,2H),6.79(s,1H),6.74(s,1H),6.53(d,J＝7.6Hz,1H),4.95-4.91(m,1H),4.11(t,J＝6.8Hz,2H),3.92(s,3H),3.72(s,3H),3.70-3.49(m,4H),3.36(brs,1H),3.22-2.66(m,14H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),2.00-1.25(m,7H).
实施例50:
4-((5-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将1-溴-2-氟-4-甲基-5-硝基苯(2.0g,8.6mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.9g,10.2mmol)溶于N’N-二甲基甲酰胺(12mL)中，加入碳酸钾(2.4g,17.1mmol)，升温至60℃搅拌过夜。反应液用水(100mL)稀释后用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，先用饱和食盐水(50mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝8/1)得到4-(2-溴-5-甲基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.2g，收率93％)。
MS(ESI)M/Z:400.1[M+H] +.
步骤2：室温下将4-(2-溴-5-甲基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(3.2g,8.0mmol)和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸频那醇酯(2.16g,10.4mmol)溶于二氧六环(70mL)和水(14mL)中,加入碳酸钠(1.7g,16.0mmol)和二茂铁二氯化钯(586mg,0.7mmol)。反应液在氮气氛围下加热至80℃搅拌过夜。将反应液冷却至室温，用水(200mL)稀释后用乙酸乙酯(100mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到4-(5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(2.1g，收率66％)。
MS(ESI)M/Z:402.3[M+H] +.
步骤3：将铁粉(1.5g，27.0mmol)、二氧化硅(100-200目，3.1g)和氯化铵(0.9g，17.0mmol)加入乙醇(20mL)和水(20mL)中，升温至65℃，加入4-(5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.7g，4.2mmol)的四氢呋喃(15mL)溶液，反应液在65℃搅拌1.5小时。TLC监测原料消失，将反应液倒入饱和食盐水(100mL)和乙酸乙酯(200mL)中。过滤，分液，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到4-(4-氨基-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.7g，收率92％)。
MS(ESI)M/Z:372.2[M+H] +.
步骤4：室温下将4-(4-氨基-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.0g，2.7mmol)，(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧膦(830mg，2.3mmol)和三氟乙酸(2.5g，22.4mmol)依次加入到正丁醇(20mL)中，氮气保护下升温至98℃搅拌过夜。将反应液冷却至室温，减压浓缩，加入四氢呋喃(16mL)，然后向溶液中加入三乙胺(0.68g，6.7mmol)，搅拌10分钟，加入二碳酸二叔丁酯(488mg，2.2mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入水(30mL)淬灭，乙酸乙酯(40mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30/1)得到4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.0g，收率66％)。
MS(ESI)M/Z:703.2[M+H] +.
步骤5：将4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.0g，1.4mmol)溶于乙酸乙酯(20mL)中，加入5M盐酸/二氧六环(11mL，55.0mmol)，室温搅拌30分钟。TLC监测原料消失，直接浓缩得到(6-((5-氯-2-((2-甲基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(1.0g，粗品)。
MS(ESI)M/Z:603.6[M+H] +.
步骤6：将(6-((5-氯-2-((2-甲基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(110mg，约0.14mmol)溶于N,N二甲基甲酰胺(20mL)中，依次加入N,N-二异丙基乙胺(407mg，3.1mmol)、5-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代吲哚啉-4-基)氨基)戊基甲磺酸酯(411mg，0.94mmol)和碘化钠(30mg)，反应液60℃搅拌过夜。TLC监测原料消失，向反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(50mL)淬灭，二氯甲烷(25mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物4-((5-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(15.8mg，收率12％)。
MS(ESI)M/Z:944.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.81(s,1H),9.08(dd,J＝9.6,4.0Hz,1H),8.74-8.63(m,2H),8.14(s,1H),7.90(brs,1H),7.77-7.65(m,2H),7.59(d,J＝9.6Hz,1H),7.54-7.50(m,1H),7.11(d,J＝7.2Hz,1H),6.97(s,1H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),6.66(s,1H),6.25(t,J＝5.6Hz,1H),4.94-4.90(m,1H),3.82(s,3H),3.32-3.30(m,2H),3.06(brs,4H),2.95-2.52(m,8H),2.28(s,3H),2.12-2.09(m,8H),1.76-1.63(m,6H).
实施例51:
4-((5-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐为原料，参照实施例50的操作制备得到终产物4-((5-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)戊基)氨基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(13.6mg)。
MS(ESI)M/Z:960.8[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.77(s,1H),9.14(dd,J＝9.6,4.0Hz,1H),8.73(dd,J＝14.6,1.8Hz,2H),8.22-8.19(m,2H),7.76(brs,1H),7.68-7.56(m,2H),7.54-7.47(m,1H),7.36(s,1H),7.11(d,J＝6.8Hz,1H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),6.73(s,1H),6.25(t,J＝5.6Hz,1H),4.95-4.91(m,1H),3.90(s,3H),3.73(s,3H),3.31-3.25(m,2H),3.03(brs,4H),2.94-2.37(m,8H),2.15-2.10(m,8H),1.77-1.66(m,6H).
实施例52:
5-(3-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例35的操作步骤制备得到终产物5-(3-(4-(1-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(17.8mg)。
MS(ESI)M/Z:1075.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.71(s,1H),11.09(s,1H),9.41(brs,1H),8.86(d,J＝2.0Hz,1H),8.81(d,J＝ 1.6Hz,2H),8.45(s,1H),8.29(s,1H),7.94(s,1H),7.84(s,1H),7.66-7.60(m,2H),6.96(d,J＝7.6Hz,1H),6.81(s,1H),5.10-5.05(m,1H),4.31-4.26(m,2H),4.07-4.01(m,2H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.35-3.28(m,2H),3.23-3.07(m,8H),2.90-2.82(m,1H),2.72-2.59(m,4H),2.35-2.28(m,3H),2.19-2.11(m,2H),2.04(s,3H),2.00(s,3H),1.87-1.77(m,2H).
实施例53:
5-(3-(4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(1.0g，约1.5mmol)溶于1,2二氯乙烷(50mL)和N,N-二甲基甲酰胺中(10mL)中，加入三乙胺(500mg，5.0mmol)，搅拌5分钟，再加入4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.3g，6.5mmol)，搅拌15分钟，最后加入醋酸(1.5mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.6g，7.5mmol)，室温搅拌过夜。TLC监测原料消失，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭，乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(840mg，收率69％)。
MS(ESI)M/Z:702.7[M-Boc+H] +.
步骤2：将4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(840mg，1.0mmol)溶于乙酸乙酯(16mL)中，加入5M盐酸/二氧六环溶液(8mL)，室温搅拌30分钟。TLC监测原料消失，直接减压浓缩得到(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(800mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:702.3[M+H] +.
后续步骤以(6-((5-氯-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐为原料，参照实施例35的制备方法得到终产物5-(3-(4-(4-(4-((5-氯-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环 丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(29.4mg)。
MS(ESI)M/Z:1013.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.78(s,1H),9.14(dd,J＝9.6,4.0Hz,1H),8.73(dd,J＝15.6,2.0Hz,2H),8.23(s,1H),8.19(s,1H),8.12(brs,1H),7.82(brs,1H),7.75-7.63(m,3H),7.59-7.49(m,1H),7.39(brs,1H),6.80(d,J＝2.0Hz,1H),6.74(s,1H),6.55(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.96-4.92(m,1H),4.25-4.23(m,1H),4.22-4.08(m,2H),3.91(s,3H),3.91-3.87(m,2H),3.70(brs,4H),3.39(brs,2H),3.28-2.67(m,12H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),2.08-1.96(m,2H),1.77-1.65(m,4H).
实施例54:
3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将1-溴-4-硝基苯(4.8g，23.8mmol)、N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(7.3g，23.8mmol)、Pd(dppf)Cl 2(1.7g，2.4mmol)和磷酸钾(9.85g，71.3mmol)依次加入二氧六环/水(40mL/10mL)中，氮气置换三次，升温至100℃搅拌过夜。LCMS监测原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(50mL)稀释，乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到4-(4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(4.5g，收率62％)。
MS(ESI)M/Z:305.1[M+H] +.
步骤2：室温下将4-(4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(2.0g，6.6mmol)和10％湿钯碳(350mg)加入到甲醇/DMF(10mL/10mL)中，氢气置换三次，室温搅拌过夜。LCMS检测反应完全，反应液过滤，减压浓缩得到4-(4-氨基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.68g，收率92％)。
MS(ESI)M/Z:277.2[M+H] +.
步骤3：室温下将4-(4-氨基苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(252mg,0.9mmol)、3-溴哌啶-2,6-二酮(175mg，0.9mmol)和碳酸氢钠(230mg，2.7mmol)依次加入DMF(10mL)中，升温至50℃搅拌过夜。LCMS监测原料消失，加入水(50mL)稀释，乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得到4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(112mg，收率32％)。
MS(ESI)M/Z:388.2[M+H] +.
步骤4：将4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(60mg，0.16mmol)和5M HCl/dioxane(10mL)加入到DCM(5mL)中，室温下搅拌30分钟。LCMS监测反应完成。反应液减压浓缩得到3-((4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐(47mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:288.2[M+H] +.
步骤5：室温下将3-((4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐(27mg，粗品)、碳酸氢钠(44mg，0.5mmol)和溴乙酸叔丁酯(21mg，0.1mmol)依从加入到乙腈(6mL)中，升温至50℃搅拌过夜。LCMS监测原料消失，加入水(30mL)稀释，乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用制备级TLC板纯化得到2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯(30mg，二步收率84％)。
MS(ESI)M/Z:402.3[M+H] +.
步骤6：将2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯(30mg，0.075mmol)和5M HCl/dioxane(5mL)加入到DCM(5mL)中，室温下搅拌1小时。LCMS监测反应完成。反应液减压浓缩得到2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐(25mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:346.2[M+H] +.
步骤7：室温下将2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)苯基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐(25mg，粗品)、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(60mg，0.09mmol)、HATU(55mg，0.14mmol)和DIEA(28mg，0.22mmol)依次加入到DMF(5mL)中，室温下搅拌10分钟。LCMS监测原料消失，加入水(30mL)稀释，乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(7.8mg，二步收率11％)。
MS(ESI)M/Z:990.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.57(s,1H),8.99-8.96(m,1H),8.73(d,J＝1.6Hz,1H),8.71(d,J＝1.6Hz,1H),8.29(s,1H),8.24(s,1H),8.11(brs,1H),7.68(s,1H),7.64-7.61(m,2H),7.36(s,1H),7.05(d,J＝7.6Hz,2H),6.66-6.62(m,3H),4.09-4.05(m,1H),3.89(s,3H),3.75(s,3H),3.71-3.68(m,2H),3.34(brs,2H),3.10-3.06(m,2H),2.91-2.88(m,6H),2.79-2.70(m,2H),2.56-2.52(m,2H),2.46-2.41(m,2H),2.34-2.28(m,2H),2.24-2.20(m,1H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),2.03-2.00(m,2H).
实施例55:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇(219.5mg，1.7mmol)溶于NMP(5mL)中，加入2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(500mg，1.7mmol，制备参见US202016143A1)，微波下升温至140℃反应5分钟。LCMS监测反应结束，将反应液倒入水中，有固体析出，过滤，石油醚淋洗得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-(2-羟乙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(560mg，收率82％)。
MS(ESI)M/Z:385.1[M-H 2O] +.
步骤2：室温下将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-(4-(2-羟乙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg，0.25mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，加入三乙胺(38mg，0.37mmol)，降温至0℃，缓慢滴加甲磺酰氯(42.6mg，0.37mmol)，0℃下搅拌30分钟。LCMS监测反应结束，反应液用二氯甲烷(15mL)稀释，饱和碳酸氢钠水溶液(20mL×2)洗涤。合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯(100mg，收率84％)。
MS(ESI)M/Z:482.1[M+H] +.
步骤3：室温下将2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯(37mg，0.077mmol)、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(51mg,0.077mmol)溶于乙腈(3mL)中，加入DIEA(30mg，0.23mmol)和催化量的碘化钠，85℃搅拌反应15小时。LCMS监测原料消失，反应液冷却至室温，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(18.7mg，收率23％)。
MS(ESI)M/Z:1048.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.73(s,1H),11.11(s,1H),9.53(brs,1H),8.86(d,J＝1.6Hz,1H),8.82(d,J＝2.0Hz,1H),8.80(brs,1H),8.52(s,1H),8.30(s,1H),8.03(s,1H),7.83(s,1H),7.73(d,J＝11.6Hz,1H),7.66(s,1H),7.48(d,J＝7.2Hz,1H),6.78(s,1H),5.13-5.08(m,1H),3.84(s,3H),3.78(s,3H),3.69-3.55(m,4H),3.32-3.21(m,4H),3.03-2.85(m,4H),2.62-2.51(m,2H),2.04(s,3H),2.01(s,3H),1.88-1.79(m,2H),1.75-1.67(m,2H),1.62-1.55(m,1H),1.44-1.35(m,2H),1.29-1.21(m,4H).
实施例56:
5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮和哌啶-4-基甲醇为原料，参照实施例55的操作步骤制备得到终产物5-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(30.7mg)。
MS(ESI)M/Z:1034.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.78(s,1H),11.11(s,1H),9.77(brs,1H),8.87(s,1H),8.83(s,1H),8.63(s, 1H),8.33(s,1H),8.05(s,1H),7.83(s,1H),7.70-7.60(m,2H),7.50(brs,1H),7.09(d,J＝6.8Hz,1H),6.80(s,1H),5.11-5.06(m,1H),3.84-3.60(m,11H),3.28(brs,8H),3.03-2.86(m,3H),2.63-2.52(m,2H),2.33(brs,1H),2.18(brs,1H),2.06(s,3H),2.02(s,3H),1.90(brs,2H),1.71(brs,1H).
实施例57:
5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦和4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯为原料，参照实施例49的操作步骤制备得到终产物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(16.1mg)。
MS(ESI)M/Z:1070.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.58(s,1H),8.99(dd,J＝9.6,4.0Hz,1H),8.72(dd,J＝12.0,1.6Hz,2H),8.29(s,1H),8.21(brs,2H),7.80-7.52(m,4H),7.36(s,1H),6.81-6.71(m,2H),6.52(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.94-4.92(m,1H),4.11(t,J＝7.6Hz,2H),3.90(brs,5H),3.72(s,3H),3.37-3.33(m,1H),3.22-2.66(m,14H),2.15-2.11(m,8H),1.96-1.89(m,5H),1.45-1.27(m,2H).
实施例58:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮和2-(哌啶-4-基)乙烷-1-醇为原料，参照实施例55的操作步骤制备得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(12.8mg)。
MS(ESI)M/Z:1030.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),8.99(dd,J＝9.6,4.0Hz,1H),8.73(dd,J＝13.6,1.6Hz,2H),8.30(s,1H),8.23(s,1H),8.14(brs,1H),7.77-7.55(m,4H),7.36(s,1H),7.28(d,J＝2.4Hz,1H),7.05(dd,J＝8.4,2.4Hz,1H),6.72(s,1H),4.96-4.93(m,1H),3.98-3.87(m,5H),3.71(s,3H),3.05-2.38(m,14H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.86-1.82(m,2H),1.68-1.57(m,5H),1.40-1.23(m,2H).
实施例59:
5-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(1.7g，约2.6mmol)溶于甲醇(20mL)和二氯甲烷(5mL)中，加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(740mg，3.1mmol)，室温搅拌1小时后，冰浴下慢慢加入氰基硼氢化钠(650mg，10.3mmol)，再室温搅拌16小时。TLC监测原料消失，向反应液加入饱和碳酸氢钠(20mL)淬灭，乙酸乙酯(40mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝40/1～20/1)得到2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(810mg，收率36％)。
MS(ESI)M/Z:886.5[M+H] +.
步骤2：将2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(810mg，0.92mmol)溶于二氯甲烷(3mL)中，冰浴下加入三氟乙酸(6mL)，室温搅拌3小时。TLC监测原料消失，直接减压浓缩得到(6-((2-((4-(4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸(800mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:786.7[M+H] +.
步骤3：室温下将(6-((2-((4-(4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸(200mg，粗品)、2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(200mg,0.68mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，加入碳酸钾(152mg，1.1mmol)和催化量的碘化钠，75℃搅拌反应16小时。LCMS监测原料消失，反应液冷却至室温，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(28.6mg，收率12％)。
MS(ESI)M/Z:1060.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.68(s,1H),11.12(s,1H),8.85-8.81(m,3H),8.44(s,1H),8.28(s,1H),8.00(s,1H),7.80(s,1H),7.73-7.44(m,4H),6.87(m,1H),5.13-5.08(m,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.23-3.15(m,4H),2.89-2.85(m,8H),2.66-2.50(m,3H),2.05-2.01(m,8H),1.74-1.64(m,6H),1.25-1.15(m,2H).
实施例60:
5-(3-(1'-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-二哌啶]-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将[4,4'-二哌啶]-1-羧酸叔丁酯(1.6g,6.0mmol)、1-溴-2-氟-4-甲氧基-5-硝基苯(1.4g,5.6mmol)溶于DMF(20mL)中，加入碳酸钾(0.8g,6.0mmol)，室温搅拌16小时。LCMS监控显示原料消失。将反应液冷却至室温，倒入冰水(100mL)中，用乙酸乙酯萃取(120mL×2)。合并有机相，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，最后减压浓缩，石油醚结晶纯化得到1'-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-羧酸叔丁酯(1.6g，收率57％)。
MS(ESI)M/Z:498.2[M+H] +.
步骤2：室温下将1'-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-羧酸叔丁酯(1.6g,3.2mmol)和1-甲基-4-1H-吡唑硼酸频那醇酯(0.8g,3.8mmol)溶于二氧六环(10mL)和水(1mL)中,加入磷酸钾(1.3g,6.4mmol)和二茂铁二氯化钯(0.12g,0.16mmol)，反应液在氮气氛围下加热至80℃搅拌16小时。LCMS监测反应结束，将反应液冷却至室温，用水(200mL)稀释后用乙酸乙酯(100mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-羧酸叔丁酯(1.3g，粗品)。
MS(ESI)M/Z:500.4[M+H] +.
步骤3：室温下将1'-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-羧酸叔丁酯(1.1g，粗品)和10％钯碳(110mg)加入到甲醇(15mL)中，在氢气球氛围下室温搅拌4小时。TLC监测显示原料消失，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/乙酸乙酯＝1/1)得到1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-羧酸叔丁酯(0.75g，二步收率59％)。
MS(ESI)M/Z:470.4[M+H] +.
后续步骤以1'-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-联哌啶]-1-羧酸叔丁酯为原料，参照实施例35和实施例48的制备方法得到终产物5-(3-(1'-(4-((5-溴-4-((5-(二甲磷酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-[4,4'-二哌啶]-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二 酮(33.6mg)。
MS(ESI)M/Z:1056.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.68(s,1H),11.09(s,1H),8.84-8.81(m,3H),8.45(s,1H),8.26(s,1H),8.01(s,1H),7.71(s,1H),7.67-7.65(m,1H),7.56(s,2H),6.81(d,J＝8.0Hz,2H),6.69-6.67(m,1H),5.10-5.06(m,1H),4.14-4.10(m,2H),3.84-3.79(m,2H),3.79(s,3H),3.75(s,3H),3.37-3.31(m,2H),3.15-3.12(m,2H),2.91-2.85(m,3H),2.66-2.52(m,6H),2.03(s,3H),1.99(s,3H),1.93-1.70(m,6H),1.35-1.10(m,4H).
实施例61:
5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将(6-氨基-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(1.1g,5.6mmol)溶于丙酮(50mL)中，加入5-溴-2,4-二氯吡啶(1.3g,5.6mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.4g,11.2mmol)。反应液在氮气保护下加热至60℃搅拌3小时至反应完全。将反应液冷却至室温并减压浓缩，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(1.7g，收率78％)。
MS(ESI)M/Z:388.0[M+H] +.
步骤2：室温下将(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(1.7g，4.4mmol)溶于正丁醇(50mL)，加入1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(1.7g，4.4mmol)和三氟乙酸(5.0g，43.7mmol)，氮气置换2次，升温至110℃搅拌过夜，LCMS监测反应完毕。将反应液冷却至室温并减压浓缩，加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(3.2g，收率99％)。
MS(ESI)M/Z:735.2[M+H] +.
步骤3：室温下将1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(3.2g，4.4mmol)溶于甲醇(50mL)和水(10mL)中，加 入氢氧化钾(487mg，8.7mmol)，氮气保护下升温至60℃搅拌1小时，LCMS监测反应结束。将反应液冷却至室温并减压浓缩，加入水(50mL)，用乙酸乙酯/甲醇＝10:1(50mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物(2.2g，收率79％)。
MS(ESI)M/Z:639.2[M+H] +.
步骤4：将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物(2.2g,3.4mmol)和4-碘哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.1g,6.9mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入碳酸钾(1.4g,10.3mmol)，氮气置换3次后，反应体系升温至100℃搅拌4天。LCMS监测显示反应结束，反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩。加入水(50mL)，用二氯甲烷(50mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1～5/1)得到4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g，收率53％)。
MS(ESI)M/Z:822.3[M+H] +.
步骤5：将4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.5g,1.8mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温下搅拌3小时。LCMS监测显示反应结束，加入水(50mL)，用二氯甲烷(50mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸盐(1.2g，粗品)。
MS(ESI)M/Z:722.3[M+H] +.
步骤6：将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸盐(0.5g,粗品)和3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(588mg,2.1mmol)溶于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(477mg,3.5mmol)，氮气置换3次后，反应体系升温至100℃搅拌4天。LCMS监测显示反应结束，反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩。加入水(50mL)，用二氯甲烷(50mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1～5/1)得到3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(280mg，二步收率42％)。
MS(ESI)M/Z:877.3[M+H] +.
步骤7：将3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(280mg,0.32mmol)溶于二氯甲烷(50mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温下搅拌3小时。LCMS监测显示反应结束，加入水(30mL)，用二氯甲烷(30mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(6-((2-((4-(4-(1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸盐(220mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:777.3[M+H] +.
步骤8：室温下将(6-((2-((4-(4-(1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸盐(120mg,粗品)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(43mg,0.15mmol)溶于DMSO(5mL)和乙腈(5mL)中，加入DIEA(40mg,0.31mmol)，将反应体系加热至80℃并搅拌16小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(23.1mg，收率15％)。
MS(ESI)M/Z:1033.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3/CD 3OD):δ8.08(s,1H),7.98-7.95(m,1H),7.71-7.64(m,4H),7.50(s,1H),6.86(s,1H), 6.77-6.71(m,2H),6.65-6.62(m,1H),4.98-4.95(m,1H),4.26(t,J＝7.6Hz,2H),3.93(s,3H),3.89(s,3H),3.88-3.81(m,1H),3.75-3.50(m,4H),3.28(brs,6H),2.88-2.75(m,3H),2.71-2.59(m,2H),2.40-2.29(m,6H),2.20-2.11(m,8H),2.02(s,3H),1.99(s,3H).
实施例62：
5-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,4’-双哌啶-1’-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将4-(5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-硝基苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(770mg，1.9mmol，制备可参考专利WO2021/104441A1)溶于甲醇(20mL)中，加入10％Pd/C(80mg)。室温10公斤氢气压下搅拌反应16小时。过滤，滤液减压浓缩得到4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(600mg，收率84％)，直接用于下步反应。
MS(ESI)M/Z:387.2[M+H] +.
步骤2：室温下将4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(370mg，0.96mmol)，(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧膦(357mg，0.87mmol)和三氟乙酸(992mg，8.7mmol)依次加入到正丁醇(10mL)中，氮气保护下升温至98℃搅拌过夜。将反应液冷却至室温，减压浓缩，加入四氢呋喃(10mL)，然后向溶液中加入三乙胺(90mg，0.89mmol)，搅拌10分钟，加入二碳酸二叔丁酯(285mg，1.3mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入水(50mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50/1)得到4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(370mg，收率56％)。
MS(ESI)M/Z:761.7[M+H] +.
步骤3：将4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(370mg，0.49mmol)溶于乙酸乙酯(8mL)中，加入5M氯化氢/乙酸乙酯溶液(5mL)，室温搅拌30分钟。TLC监测原料消失，过滤，滤饼用饱和碳酸钾溶液调节pH值到9，乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(300mg，收率93％)。
MS(ESI)M/Z:661.9[M+H] +.
后续步骤以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌啶-4-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5- 基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例35和实施例53的制备方法得到终产物5-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-1,4’-双哌啶-1’-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(4mg)。
MS(ESI)M/Z:1056.6[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.77(s,1H),8.90-8.80(m,1H),8.78(s,1H),8.73(s,1H),8.22(s,1H),8.10(s,1H),8.00(brs,1H),7.67-7.64(m,2H),7.34-7.26(m,2H),7.10(s,1H),6.83-6.80(m,1H),6.56-6.54(m,1H),4.95-4.93(m,1H),4.20-4.05(m,2H),3.95-3.80(m,8H),3.60-3.40(m,4H),2.85-2.65(m,6H),2.20-2.00(m,9H),2.00-1.60(m,6H),1.30-1.20(m,4H).
实施例63:
5-(4-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基磷氧化物的盐酸盐(0.5g,0.72mmol)和3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.1g,3.9mmol)溶于乙腈(20mL)中，加入碳酸钾(521mg,3.8mmol)，氮气置换3次后，反应体系升温至98℃搅拌3天。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液(100mL)淬灭，用二氯甲烷(50mL×2次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝8/1)得到3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(230mg，收率39％)。
MS(ESI)M/Z:818.6[M+H] +.
步骤2：将3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(230mg，0.28mmol)溶于乙酸乙酯(5mL)中，加入5M氯化氢/1,4-二氧六环溶液(5mL)，室温搅拌30分钟。TLC监测原料消失，直接减压浓缩得到(6-((2-((4-(4-(氮杂环丁 烷-3-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦的盐酸盐(200mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:718.2[M+H] +.
步骤3：将(6-((2-((4-(4-(氮杂环丁烷-3-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(200mg，粗品)溶于1,2二氯乙烷(10mL)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中，加入三乙胺(118mg，1.2mmol)，搅拌5分钟，再加入4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(155mg，0.78mmol)，搅拌15分钟，最后加入醋酸(0.4mL)和三乙酰氧基硼氢化钠(248mg，1.2mmol)，室温搅拌2小时。TLC监测原料消失，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭，乙酸乙酯(30mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到4-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(190mg，二步收率75％)。
MS(ESI)M/Z:901.5[M+H] +.
步骤4：将4-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(190mg，0.21mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(10mL)，室温搅拌30分钟。TLC监测原料消失，直接减压浓缩得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(1-(哌啶-4-基)氮杂环丁烷)-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦的三氟乙酸盐(200mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:801.5[M+H] +.
步骤5：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(1-(哌啶-4-基)氮杂环丁烷)-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸盐(200mg,粗品)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(207mg,0.75mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入DIEA(163mg,1.3mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至60℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭，乙酸乙酯(15mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(4-(3-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(8.5mg，二步收率3.8％)。
MS(ESI)M/Z:1057.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),8.97(dd,J＝9.6,4.2Hz,1H),8.73(dd,J＝12.0 1.8Hz,2H),8.37(s,1H),8.29(s,1H),8.22(s,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,1H),7.65-7.40(m,3H),7.38(s,1H),7.06(dd,J＝8.6,1.8Hz,1H),6.70(s,1H),4.95(dd,J＝12.0,5.2Hz,1H),4.03-3.93(m,2H),3.91(s,3H),3.75(s,3H),3.55(brs,2H),3.13-2.65(m,12H),2.49(brs,4H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),2.07-1.95(m,6H).
实施例64:
5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(1-(哌啶-4-基)氮杂环丁烷)-3-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸盐和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮为原料，参照实施例63的操作步骤制备得到终产物5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)氮杂环丁烷-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(25.6mg)。
MS(ESI)M/Z:1075.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.68(s,1H),11.12(s,1H),8.85-8.80(m,3H),8.45(s,1H),8.27(s,1H),7.98(s,1H),7.81(s,1H),7.73-7.70(m,1H),7.56(s,1H),7.46-7.44(m,1H),6.86(s,1H),5.13-5.08(m,1H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.55-3.40(m,2H),3.00-2.80(m,14H),2.60-2.20(m,4H),2.10-1.95(m,10H),1.80-1.70(m,2H).
实施例65:
5-(3-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(830mg，1.2mmol)溶于1,2二氯乙烷(35mL)和N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中，加入三乙胺(380mg，3.8mmol)，搅拌5分钟，然后加入4-(2-氧乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(570mg，2.5mmol)，搅拌15分钟，加入醋酸(1.2g)，最后加入三乙酰氧基硼氢化钠(790mg，3.8mmol)，室温搅拌16小时。TLC监测原料消失，向反应液加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并有机相，饱和 食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50/1～20/1)得到4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(600mg，收率58％)。
MS(ESI)M/Z:873.9[M+H] +.
步骤2：将4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(600mg，0.69mmol)溶于乙酸乙酯(3mL)中，冰浴下加入3.7M氯化氢/二氧六环溶液(3mL)，室温搅拌16小时。TLC监测原料消失，过滤，滤饼用乙酸乙酯(3mL)洗涤一次，干燥得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(560mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:773.9[M+H] +.
后续步骤以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(2-(哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐为原料，参照实施例35的制备方法得到终产物5-(3-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(36mg)。
MS(ESI)M/Z:1085.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.60(s,1H),8.98(dd,J＝9.2,4.0Hz,1H),8.75(s,1H),8.71(s,1H),8.30(s,1H),8.23-8.15(m,2H),8.10(s,1H),7.80-7.70(m,2H),7.63-7.60(m,1H),7.38(s,1H),6.78(s,1H),6.72(s,1H),6.51(d,J＝8.4Hz,1H),4.95-4.92(m,1H),4.15-4.05(m,2H),3.91-3.80(m,5H),3.68(s,3H),3.60-2.90(m,9H),2.90-2.65(m,8H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.95-1.90(m,2H),1.79-1.70(m,2H),1.60-1.20(m,5H).
实施例66:
5-(3-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将(6-((2-((4-(4-(2-(1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸盐(134mg,约0.14mmol)和2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(143mg,0.48mmol)溶于DMSO(6mL)中，加入DIEA(105mg,0.81mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至60℃并搅拌16小时。TLC监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(20mL)淬灭，二氯甲烷(60mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(49.7mg，收率32％)。
MS(ESI)M/Z:1103.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.68(s,1H),11.11(s,1H),8.84-8.81(m,3H),8.45(s,1H),8.27(s,1H),7.99(s, 1H),7.81(s,1H),7.63-7.56(m,3H),6.92(d,J＝7.2Hz,1H),6.84(s,1H),5.10-5.05(m,1H),4.23(brs,2H),3.96(brs,2H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.20(brs,1H),2.87-2.71(m,8H),2.60-2.30(m,8H),2.03(s,3H),2.00(s,3H),1.83-1.78(m,4H),1.40-1.15(m,5H).
实施例67:
5-(3-(4-((4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将(6-((2-((4-(4-((1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)甲基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦三氟乙酸盐(200mg,约0.22mmol)和2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(217mg,0.74mmol)溶于DMSO(5mL)中，加入DIEA(142mg,1.1mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至60℃并搅拌16小时。TLC监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(20mL)淬灭，二氯甲烷(60mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(4-((4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(43.5mg，收率18％)。
MS(ESI)M/Z:1089.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.68(s,1H),11.11(s,1H),8.90-8.80(m,3H),8.43(s,1H),8.28(s,1H),8.00(s,1H),7.80(s,1H),7.63-7.57(m,3H),6.94-6.86(m,2H),5.08-5.05(m,1H),4.23(brs,2H),4.14-4.10(m,2H),3.97(brs,2H),3.81(s,3H),3.76(s,3H),3.30-3.20(m,2H),2.90-2.75(m,7H),2.58-2.50(m,4H),2.22(brs,2H),2.03(s,3H),2.00(s,3H),1.83-1.55(m,5H),1.20-1.10(m,2H).
实施例68:
5-(3-(4-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将4-(2-溴-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.3g,3.1mmol)和1-乙基-1H-吡唑-4-基硼酸(0.57g,4.1mmol)溶于二氧六环(20mL)和水(4mL)中,加入碳酸钠(0.66g,6.2mmol)和二茂铁二氯化钯(0.23g,0.31mmol)，反应液在氮气氛围下加热至80℃搅拌16小时。LCMS监测反应结束，将反应液冷却至室温，用水(100mL)稀释后用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1～1/1)得到4-(2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.7g，收率52％)。
MS(ESI)M/Z:432.1[M+H] +.
步骤2：室温下将还原铁粉(1.1g，19.6mmol)，硅胶(2.2g，100-200目)和氯化铵(0.65g，36mmol)加入到乙醇(8mL)和水(8mL)中，升温至65℃搅拌0.5小时。再加入4-(2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.3g，3.0mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液，反应体系在65℃继续搅拌1.5小时。TLC监测反应结束，硅藻土过滤，滤液中加入水(10mL)稀释，乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1～1/1)得到4-(4-氨基-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.2g，收率99％)。
MS(ESI)M/Z:402.4[M+H] +.
步骤3：室温下将4-(4-氨基-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.1g，2.7mmol)，(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧膦(1.2g，2.9mmol)和三氟乙酸(3.1g，27.2mmol)依次加入到正丁醇(10mL)中，氮气保护下升温至98℃搅拌过夜。将反应液冷却至室温，减压浓缩，加入四氢呋喃(10mL)，然后向溶液中加入三乙胺(270mg，2.7mmol)，搅拌10分钟，加入二碳酸二叔丁酯(0.89g，4.0mmol)，室温搅拌2小时。向反应液中加入水(50mL)淬灭，乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50/1)得到4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.9g，收率43％)。
MS(ESI)M/Z:777.4[M+H] +.
步骤4：将4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(900mg，1.2mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入5M氯化氢/乙酸乙酯溶液(2mL)，室温搅拌30分钟。TLC监测原料消失，过滤，滤饼用饱和碳酸钾溶液调节pH值到9，乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到(6-((5-溴-2-((5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(550mg，收率70％)。
MS(ESI)M/Z:677.4[M+H] +.
步骤5：将(6-((5-溴-2-((5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(900mg，1.3mmol)溶于DCM(7.5mL)和MeOH(7.5mL)中，加入4-氧代哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.1g，5.3mmol)，搅拌1小时，再加入氰基硼氢化钠(500mg，8.0mmol)，室温搅拌16小时。TLC监测显示原料消失，向反应液中加入水(20mL)和乙酸乙酯(50mL)，水相再用乙酸乙酯(30mL)萃取。合并有机 相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50/1～25/1)得到4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(570mg，收率50％)。
MS(ESI)M/Z:860.4[M+H] +.
步骤6：将4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(570mg，0.66mmol)溶于DCM(10mL)，冰浴下加入三氟乙酸(4mL)，室温下搅拌0.5小时，TLC监测显示原料消失，用饱和碳酸钾溶液调节pH值到9，乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到(6-((5-溴-2-((5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(350mg，收率70％)。
MS(ESI)M/Z:760.0[M+H] +.
步骤7：将(6-((5-溴-2-((5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基-4-(4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦(350mg,0.46mmol)和3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(651mg,2.3mmol)溶于乙腈(30mL)中，加入碳酸钾(318mg,2.3mmol)，反应体系升温至98℃搅拌2天。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50/1～25/1)得到3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(250mg，收率59％)。
MS(ESI)M/Z:915.5[M+H] +.
步骤8：将3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(250mg,0.27mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三氟乙酸(3mL)，室温下搅拌30分钟。TLC监测显示反应结束，反应液减压浓缩得到(6-((2-((4-(4-(1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸盐(200mg，收率79％)。
MS(ESI)M/Z:814.9[M+H] +.
步骤9：室温下将(6-((2-((4-(4-(1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)哌嗪-1-基)-5-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-2-甲氧基苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基磷氧化物三氟乙酸盐(200mg,0.22mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(204mg,0.73mmol)溶于DMSO(10mL)中，加入DIEA(160mg,1.2mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至60℃并搅拌16小时。TLC监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(20mL)，再用二氯甲烷(60mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(4-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(58.7mg，收率25％)。
MS(ESI)M/Z:1071.8[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.68(s,1H),11.10(s,1H),8.84-8.80(m,3H),8.46(s,1H),8.28(s,1H),8.10(s,1H),7.83(s,1H),7.67-7.45(m,3H),6.85-6.75(m,2H),6.70-6.60(m,1H),5.09-5.04(m,1H),4.11-4.05(m,4H),3.85-3.75(m,5H),2.90-2.80(m,8H),2.70-2.50(m,8H),2.03(s,3H),1.99(s,3H),1.91-1.80(m,4H),1.45(brs,2H),1.31-1.20(m,3H).
实施例69:
5-(3-(4-(4-(4-(5-溴-4-(5-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以1-(二氟甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼烷-2-基)-1H-吡唑为原料，参照实施例68的制备方法得到终产物5-(3-(4-(4-(4-(5-溴-4-(5-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)-2-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-5-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(33.6mg)。
MS(ESI)M/Z:1093.6[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.68(s,1H),11.10(s,1H),8.84-8.79(m,3H),8.55(brs,2H),8.31(s,1H),8.20(brs,1H),7.74-7.55(m,4H),6.95-6.91(m,1H),6.81(s,1H),6.68-6.65(m,1H),5.09-5.04(m,1H),4.15-4.10(m,2H),3.85-3.80(m,5H),2.95-2.80(m,8H),2.70-2.50(m,8H),2.03(s,3H),1.99(s,3H),1.90-1.80(m,4H),1.45(brs,2H).
实施例70:
5-(3-(4-(4-(4-(4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((2-氯-5-(三氟甲基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基磷氧化物(制备参见WO2021/190417A1)为原料，参照实施例68的制备方法得到终产物5-(3-(4-(4-(4-(4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)-5-(三氟甲基)嘧啶-2-基) 氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(14.1mg)。
MS(ESI)M/Z:1047.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.64(s,1H),11.09(s,1H),9.00(brs,1H),8.84-8.81(m,2H),8.51(brs,1H),8.44(s,1H),7.99(s,1H),7.80(s,1H),7.65(d,J＝8.0,1H),7.50(s,1H),7.43(brs,1H),6.83(s,1H),6.80(s,1H),6.66(dd,J＝8.4,1.6Hz,1H),5.10-5.00(m,1H),4.11(t,J＝7.6,2H),3.90-3.70(m,8H),2 85(brs,8H),2.70-2.50(m,8H),2.01(s,3H),1.99(s,3H),1.90-1.80(m,4H),1.55-1.40(m,2H).
实施例71:
3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以4-溴-3-氟苯胺为原料，参照实施例54的制备方法得到终产物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(29.2mg)。
MS(ESI)M/Z:1008.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.80(s,1H),10.81(s,1H),9.60(brs,1H),8.87-8.78(m,3H),8.63(s,1H),8.32(s,1H),8.10(d,J＝6.8Hz,1H),7.78(s,1H),7.67(s,1H),7.53(brs,1H),7.02-6.96(m,1H),6.82(s,1H),6.52-6.46(m,2H),4.48(brs,2H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.73(brs,2H),3.63-3.55(m,4H),3.19-3.10(m,2H),3.05-2.83(m,6H),2.79-2.70(m,1H),2.62-2.54(m,1H),2.13-2.06(m,2H),2.05(s,3H),2.01(s,3H),1.96-1.74(m,4H).
实施例72:
3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以4-溴-2-氟苯胺为原料，参照实施例54的制备方法得到终产物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-2-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(26.4mg)。
MS(ESI)M/Z:1008.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.71(s,1H),10.82(s,1H),9.54(brs,1H),8.86-8.81(m,3H),8.46(s,1H),8.30(s,1H),8.09(d,J＝6.0Hz,1H),7.78(s,1H),7.67(s,1H),7.53(brs,1H),6.97-6.93(m,1H),6.88-6.78(m,3H),4.39-4.35(m,2H),3.82(s,3H),3.78(s,3H),3.75-3.68(m,2H),3.63-3.55(m,4H),3.09(brs,2H),2.94-2.87(m,4H),2.85-2.64(m,3H),2.61-2.55(m,1H),2.13-1.97(m,12H).
实施例73:
3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯氧基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氧代)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(制备参见WO2021/83949A1)为原料，参照实施例54的制备方法得到终产物3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯氧基)哌啶-2,6-二酮(30.8mg)。
MS(ESI)M/Z:991.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.67(s,1H),10.88(s,1H),8.81(d,J＝1.6Hz,2H),8.76(d,J＝1.6Hz,1H),8.41(s,1H),8.27(s,1H),8.11(s,1H),7.77(s,1H),7.61(s,1H),7.54(brs,1H),6.91-6.81(m,5H),5.02-4.99(m,1H),3.79(s,6H),3.74(brs,2H),3.66(brs,2H),3.25(s,2H),3.04(brs,4H),2.85(brs,4H),2.68-2.64(m,1H),2.60-2.56(m,6H),2.19-2.13(m,1H),2.11-2.05(m,1H),2.03(s,3H),1.99(s,3H).
实施例74:
3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯)硫代)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将4-溴苯硫酚(2.0g,10.6mmol)、3-溴哌啶-2,6-二酮(2.0g，10.6mmol)和无水碳酸钾(4.4g，31.8mmol)依次加入乙腈(20mL)中，升温至50℃搅拌过夜。TLC监测原料消失，加入水(50mL)稀释，乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到3-((4-溴苯基)硫代)哌啶-2,6-二酮(3.17g，粗品)，直接用于下步反应。
MS(ESI)M/Z:300.0[M+H] +.
步骤2：将3-((4-溴苯基)硫代)哌啶-2,6-二酮(3.17g，粗品)、N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(3.3g，10.6mmol)、Pd(dppf)Cl 2(775mg，1.06mmol)和无水碳酸钾(4.4g，31.8mmol)依次加入DMF(30mL)中，氮气置换三次，升温至100℃搅拌过夜。TLC监测反应完毕，将反应液冷却至室温，加入水(50mL)稀释，乙酸乙酯(50mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝60/1)得到4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)硫代)苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.72g，二步收率40％)。
MS(ESI)M/Z:403.2[M+H] +.
步骤3：室温下将4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)硫代)苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(1.12g，2.8mmol)和10％湿钯碳(300mg)加入到甲醇(10mL)中，氢气置换三次，升温至50℃搅拌过夜。LCMS检测反应完全，反应液过滤，减压浓缩，所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)硫代)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(100mg，收率9％)。
MS(ESI)M/Z:405.2[M+H] +.
后续步骤以4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)硫代)苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯为原料，参照实施例54的制备方法得到终产物3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)苯)硫代)哌啶-2,6-二酮(4.2mg)。
MS(ESI)M/Z:1007.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.62(s,1H),8.96(dd,J＝9.6,4.0Hz,1H),8.75(d,J＝1.8Hz,1H),8.71(d,J＝1.8Hz,1H),8.29(s,1H),8.23(s,1H),7.76(s,1H),7.68-7.59(m,2H),7.57(s,1H),7.53-7.35(m,3H),6.64(s,1H),5.36-5.34(m,1H),3.91(s,3H),3.73(s,3H),3.56-3.50(m,2H),3.41-3.44(m,2H),2.93-2.78(m,6H),2.65-2.58(m,1H), 2.50-2.40(brs,1H),2.38-2.29(m,1H),2.24-2.16(m,2H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),2.03-1.99(m,4H),1.66-1.61(m,4H).
实施例75:
3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氨基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以4-溴-2,3-二氢苯并呋喃-7-胺(制备参见CN106220644A)为原料，参照实施例54的制备方法得到终产物3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-2,3-二氢苯并呋喃-7-基)氨基)哌啶-2,6-二酮(22mg)。
MS(ESI)M/Z:1030.3[M-H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.58(s,1H),8.99-8.96(m,1H),8.72(d,J＝11.2Hz,2H),8.30(s,1H),8.24(s,1H),8.11(brs,1H),7.67-7.62(m,3H),7.38(s,1H),6.66(s,1H),6.61(d,J＝8.0Hz,1H),6.46(d,J＝8.4Hz,1H),4.62-4.57(m,2H),4.13-4.09(m,1H),3.90(s,3H),3.75(s,3H),3.67(brs,2H),3.39(brs,2H),3.20-3.11(m,4H),2.90(brs,5H),2.82-2.69(m,2H),2.52-2.43(m,5H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),2.00-1.89(m,5H).
实施例76:
4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯甲酰胺
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将4-溴-2-氟苯甲酸(2.0g，9.1mmol)、N-Boc-1,2,5,6-四氢吡啶-4-硼酸频哪醇酯(2.8g，9.1mmol)、Pd(PPh 3) 4(1.1g，0.9mmol)和碳酸钾(3.8g，27.4mmol)依次加入二氧六环/水(20mL/5mL)中，氮气置换三次，升温至100℃搅拌反应2小时。TLC监测反应完毕，将反应液冷却至室温，加入水(30mL)稀释，乙酸乙酯(30mL×3)洗涤后，稀盐酸调节pH值至弱酸性。有固体析出，过滤，收集滤饼，干燥得到4-(1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-2-氟苯甲酸(2.1g，收率72％)。
MS(ESI)M/Z:322.1[M+H] +.
步骤2：室温下将4-(1-(叔丁氧羰基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)-2-氟苯甲酸(1.0g，3.1mmol)和10％湿钯碳(100mg)加入到甲醇(20mL)中，氢气置换三次，室温搅拌反应2小时。TLC检测反应完全，反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酸(0.7g，收率70％)。
MS(ESI)M/Z:324.2[M+H] +.
步骤3：室温下将4-(1-(叔丁氧羰基)哌啶-4-基)-2-氟苯甲酸(650mg,2.0mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，N 2保护下冷却至0℃，滴加草酰氯(0.35mL，4.0mmol)和DMF(0.2mL)中，搅拌10分钟后，升至室温，在室温下继续反应1个小时。TLC监测反应结束，反应液减压浓缩得到4-(4-(氯羰基)-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(670mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:342.2[M+H] +.
步骤4：室温下将3-氨基哌啶-2,6-二酮(1.0g，8.0mmol)和DIEA(3.5mL，20.1mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，N 2保护下冷却至0℃，滴加4-(4-(氯羰基)-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(670mg，粗品)的四氢呋喃溶液，反应体系在0℃搅拌2个小时。TLC监测反应结束，加入水(40mL)，用二氯甲烷(30mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50/1)得到4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氨甲酰基)-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(502mg，二步收率58％)。
MS(ESI)M/Z:434.2[M+H] +.
以4-(4-((2,6-二氧哌啶-3-基)氨甲酰基)-3-氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯为原料，后续步骤参照实施例54的制备方法得到终产物4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-N-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯甲酰胺(22.9mg)。
MS(ESI)M/Z:1036.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.58(s,1H),9.02-8.95(m,1H),8.78-8.68(m,2H),8.32-8.22(m,3H),8.04-8.00(m,1H),7.66(brs,3H),7.54-7.50(m,1H),7.40(s,1H),7.15(d,J＝8.0Hz,1H),7.02(d,J＝8.0Hz,1H),6.66(s,1H),4.83-4.74(m,1H),3.90(s,3H),3.75(s,3H),3.66-3.62(m,2H),3.44-3.34(m,2H),3.17-3.09(m,2H),2.92-2.90(m,4H),2.85-2.69(m,3H),2.67-2.45(m,3H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),2.08-1.94(m,7H).
实施例77:
5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将(6-((2-((4-(4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基磷氧化物的三氟乙酸盐(1.5g,1.7mmol)和3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.6g,9.0mmol)溶于DMF(25mL)中，加入碳酸钾(1.3g,9.0mmol)，氮气置换3次后，反应体系升温至75℃搅拌16小时。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩。加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝100/1～50/1)得到3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(450mg，收率28％)。
MS(ESI)M/Z:941.2[M+H] +.
步骤2：将3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(450mg,0.48mmol)溶于乙酸乙酯(5mL)中，冰浴下加入氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M,5mL)，室温下搅拌3小时。LCMS监测显示反应结束，减压浓缩得到(6-((2-((4-(4-(7-(氮杂环丁烷-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基磷氧化物的盐酸盐(450mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:841.3[M+H] +.
步骤3：室温下将(6-((2-((4-(4-(7-(氮杂环丁烷-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基磷氧化物的盐酸盐(210mg,粗品)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(210mg,0.76mmol)溶于DMF(6mL)中，加入碳酸钾(160mg,1.16mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至75℃并搅拌16小时。TLC监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(30mL)，用乙酸乙酯(60mL×2次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(20.3mg，二步收率8.3％)。
MS(ESI)M/Z:1096.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.60(s,1H),9.02-8.92(m,1H),8.76(d,J＝1.6Hz,1H),8.72(d,J＝1.6Hz,1H),8.30(s,1H),8.23(s,1H),8.08(s,1H),7.81-7.63(m,3H),7.39(s,1H),6.78(s,1H),6.72(s,1H),6.53(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.95-4.90(m,1H),4.10(t,J＝7.2Hz,2H),3.92(s,3H),3.87-3.80(m,2H),3.67(s,3H),3.58-3.45(m,5H),3.40-3.25(m,2H),3.20-3.12(m,2H),2.88-2.66(m,7H),2.30-2.20(m,2H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),2.00-1.80(m,8H).
实施例78:
5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将(6-((2-((4-(4-(7-(氮杂环丁烷-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基磷氧化物的盐酸盐(210mg,约0.24mmol)和2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(210mg,0.71mmol)溶于DMF(6mL)中，加入碳酸钾(160mg,1.2mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至75℃并搅拌16小时。TLC监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(20mL)淬灭，二氯甲烷(60mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(2.1mg，收率0.8％)。
MS(ESI)M/Z:1116.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.60(s,1H),9.00-8.97(m,1H),8.76(s,1H),8.72(s,1H),8.30(s,1H),8.25(s,1H),8.06(brs,1H),7.81-7.73(m,2H),7.40-7.30(m,2H),6.84-6.82(m,1H),6.71(s,1H),4.92-4.89(m,1H),4.25(brs,2H),4.10-4.00(m,2H),3.92(s,3H),3.67(s,3H),3.55-3.45(m,5H),3.40-3.25(m,2H),3.25-3.10(m,2H),2.89-2.66(m,7H),2.35-1.80(m,16H).
实施例79:
5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将3-(哌啶-4-基)丙基-1-醇(250mg,1.75mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-异吲哚啉-1,3-二酮(482mg,1.75mmol)溶于NMP(30mL)和N,N-二异丙基乙胺(15mL)中，反应体系升温至110℃搅拌6小时。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，倒入水(100mL)中。用乙酸乙酯(100mL×3次)萃取，合并有机相，饱和食盐水(100mL)洗涤两次，然后无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝3:1)纯化得到2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-5-(4-(3-羟基丙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(310mg，收率44％)。
MS(ESI)M/Z:400.2[M+H] +.
步骤2：室温下将2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-5-(4-(3-羟基丙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(300mg,0.75mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，加入三乙胺(114mg,1.1mmol)。降温至0℃，缓慢滴加甲磺酰氯(129mg,1.1mmol)，室温下搅拌过夜。TLC监测显示反应结束，加入饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)淬灭反应。混合液用二氯甲烷(20mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤，然后无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱色谱层析法(石油醚：乙酸乙酯＝5:1)纯化得到3-(1-(2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)丙基甲磺酸酯(270mg，收率75％)。
MS(ESI)M/Z:478.2[M+H] +.
步骤3：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(200mg,0.29mmol)和3-(1-(2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)丙基甲磺酸酯(164mg,0.34mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入DIEA(184mg,1.4mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至80℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(20mL)淬灭反应。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(21.3mg，收率7％)。
MS(ESI)M/Z:1044.7[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),8.98(d,J＝4.4Hz,1H),8.74(d,J＝1.6Hz,1H),8.71(d,J＝1.6Hz,1H),8.53(brs,1H),8.30(s,1H),8.22(s,1H),7.76-7.54(m,4H),7.38(s,1H),7.05-7.03(m,1H),6.74(s,1H),4.95-4.85(m,1H),3.97-3.90(m,2H),3.90(s,3H),3.70(s,3H),3.08(brs,4H),3.00-2.54(m,10H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.85-1.51(m,6H),1.33-1.25(m,5H).
实施例80:
5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟-异吲哚啉-1,3-二酮为原料，参照实施例79的制备方法得到终产物5-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(26.4mg)。
MS(ESI)M/Z:1063.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.50(s,1H),8.92(d,J＝5.6Hz,1H),8.67-8.64(m,3H),8.22(s,1H),8.13(s,1H),7.60-7.55(m,3H),7.39-7.30(m,3H),6.67(s,1H),4.87-4.85(m,1H),3.82(s,3H),3.64(s,3H),3.59-3.56(m,2H),2.96(brs,4H),2.86-2.37(m,10H),2.07(s,3H),2.04(s,3H),1.78-1.28(m,11H).
实施例81:
4-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-4-(4-(3-羟丙基)哌啶-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(制备可参考WO2020/113233A1)为原料，参照实施例79的制备方法得到终产物4-(4-(3-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)丙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(27.2mg)。
MS(ESI)M/Z:1045.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.58(s,1H),8.98(dd,J＝9.6Hz,4.4Hz,1H),8.74(d,J＝2.0Hz,1H),8.71(d,J＝1.6Hz,1H),8.37(brs,1H),8.29(s,1H),8.22(s,1H),7.65(brs,3H),7.65-7.55(m,1H),7.36(d,J＝6.8Hz,2H),7.18(d,J＝8.4Hz,1H),6.75(s,1H),4.98-4.90(m,1H),3.90(s,3H),3.74-3.72(m,5H),3.02(brs,4H),2.91-2.65(m,6H),2.47(brs,4H),2.13(s,3H),2.13(s,3H),1.88-1.57(m,6H),1.48-1.35(m,5H).
实施例82:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将2-(哌啶-4-基)乙酸(500mg,3.5mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(368mg,1.25mmol)溶于NMP(30mL)和N,N-二异丙基乙胺(15mL)中，反应体系升温至110℃搅拌6小时。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，倒入水(100mL)中，用稀盐酸调节pH值至4-5，乙酸乙酯(100mL×3次)萃取，合并有机相，饱和食盐水(100mL)洗涤两次，然后无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到2-(1-(2-(2,6- 氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酸(310mg，粗品)，直接用于下一步反应。
MS(ESI)M/Z:418.1[M+H] +.
步骤2：室温下将2-(1-(2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-1-基)乙酸(119mg，粗品)、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(200mg，0.29mmol)、HATU(163mg，0.43mmol)和DIEA(147mg，1.1mmol)依次加入到二氯甲烷(5mL)中，室温下搅拌过夜。LCMS监测原料消失，加入水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(40mg，二步收率13％)。
MS(ESI)M/Z:1062.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.77(brs,1H),8.95-8.90(m,1H),8.76(d,J＝1.6Hz,1H),8.72(d,J＝1.6Hz,1H),8.43(s,1H),8.26(s,1H),8.15(s,1H),7.67-7.61(m,3H),7.45(d,J＝6.8Hz,1H),7.39(d,J＝7.2Hz,1H),6.66(s,1H),4.95-4.85(m,1H),3.90(s,3H),3.75(brs,5H),3.66-3.63(m,2H),3.56(brs,2H),2.89-2.65(m,9H),2.35-2.30(m,2H),2.15-2.11(m,8H),1.95-1.92(m,2H),1.47-1.44(m,2H).
实施例83:
5-(4-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(500mg，0.72mmol)和三乙胺(454mg，4.5mmol)溶于二氯乙烷(10mL)和DMF(2mL)中，搅拌15分钟后加入4-(4-甲酰基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(311mg，1.1mmol)，搅拌15分钟，再加入三乙酰氧基硼氢化钠(216mg，2.1mmol)，室温搅拌过夜。TLC监测显示原料消失，向反应液中加入水(20mL)和乙酸乙酯(50mL)，水相再用乙酸乙酯(30mL)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50/1)得到4-(4-((4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110mg，收率16％)。
MS(ESI)M/Z:936.8[M+H] +.
步骤2：将4-(4-((4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(110mg，0.12mmol)溶于DCM(3mL)，冰浴下加入6N氯化氢/二氧六环溶液(10mL)，室温下搅拌1小时，TLC监测显示原料消失，减压浓缩得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(4-(哌嗪-1-基)苄基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦的盐酸盐(110mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:836.8[M+H] +.
步骤3：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(4-(哌嗪-1-基)苄基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(110mg,粗品)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(99mg,0.36mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，加入碳酸钾(83mg,0.60mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至80℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(20mL)淬灭反应。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(4-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(17.9mg，二步收率14％)。
MS(ESI)M/Z:1092.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),8.99-8.96(m,1H),8.75-8.71(m,2H),8.29(s,1H),8.22(s,1H),7.84(brs,1H),7.71-7.69(m,2H),7.45(brs,2H),7.37(s,1H),7.26-7.24(m,2H),7.07-7.05(m,1H),6.92-6.90(m,2H),6.72(s,1H),4.99-4.96(m,1H),3.96-3.85(m,5H),3.70-3.55(m,9H),3.40(brs,6H),3.10-2.63(m,8H),2.15(s,3H),2.11(s,3H).
实施例84:
5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将(6-氨基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-5-基)二甲基氧化膦(487mg,2.1mmol)溶于正丁醇(10mL)中，加入5-溴-2,4-二氯吡啶(977mg,4.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(555mg,4.3mmol)。反应液在氮气保护下加热至100℃搅拌1小时至反应完全。将反应液冷却至室温并减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-5-基)二甲基氧化膦(874mg，收率98％)。
MS(ESI)M/Z:418.0[M+H] +.
步骤2：室温下将(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-5-基)二甲基氧化膦(824mg，2.0 mmol)溶于正丁醇(20mL)，加入1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(755mg，2.0mmol)和三氟乙酸(2.3g，20.0mmol)，氮气置换2次，升温至110℃搅拌16小时，LCMS监测反应完毕。将反应液冷却至室温并减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到1-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(1.05g，收率69％)。
MS(ESI)M/Z:765.1[M+H] +.
步骤3：室温下将1-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(950mg，1.24mmol)溶于甲醇(5mL)和水(1mL)中，加入氢氧化钾(700mg，12.4mmol)，氮气保护下升温至60℃搅拌1小时，LCMS监测反应结束。将反应液冷却至室温并减压浓缩，加入水(30mL)，用二氯甲烷(30mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝8/1)得到(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-5-基)二甲基磷氧化物(808mg，收率97％)。
MS(ESI)M/Z:669.2[M+H] +.
后续步骤以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-5-基)二甲基磷氧化物为原料，参照实施例53和61的制备方法得到终产物5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.0mg)。
MS(ESI)M/Z:1063.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.60(s,1H),7.98-7.95(m,1H),7.85-7.77(m,2H),7.71-7.66(m,1H),7.61(s,1H),7.52(s,1H),6.83(s,1H),6.71(s,1H),6.61-6.56(m,1H),6.39-6.34(m,1H),4.96-4.92(m,1H),4.30-4.18(m,7H),4.10-4.07(m,2H),3.92(s,3H),3.83(s,3H),3.78-3.75(m,1H),3.57-3.41(m,4H),3.33-3.28(m,6H),2.90-2.74(m,4H),2.64-2.52(m,4H),2.35-2.20(m,2H),1.90(s,3H),1.86(s,3H).
实施例85:
5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将(2-氨基-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦(1.0g,4.8mmol)溶于正丁醇(25mL)中，加入5-溴-2,4-二氯吡啶(2.2g,9.6mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.85g,14.3mmol)。反应液在氮气保护下加热至100℃搅拌16小时至反应完全。将反应液冷却至室温并减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦(510mg，收率27％)。
MS(ESI)M/Z:400.0[M+H] +.
步骤2：室温下将(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦(510mg，2.0mmol)溶于正丁醇(50mL)，加入1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(489mg，1.3mmol)和三氟乙酸(1.45g，12.7mmol)，氮气置换2次，升温至100℃搅拌16小时，LCMS监测反应完毕。将反应液冷却至室温，倒入石油醚中(50mL)，有固体析出，过滤，所得滤饼用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到1-(4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(450mg，收率46％)。
MS(ESI)M/Z:746.9[M+H] +.
步骤3：室温下将1-(4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(450mg，0.60mmol)溶于甲醇(5mL)和水(1mL)中，加入氢氧化钾(338mg，6.0mmol)，氮气保护下升温至60℃搅拌2小时，LCMS监测反应结束。将反应液冷却至室温并减压浓缩，加入水(30mL)，用二氯甲烷(30mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-环丙基苯基)二甲基磷氧化物(260mg，收率66％)。
MS(ESI)M/Z:651.2[M+H] +.
后续步骤以(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-环丙基苯基)二甲基磷氧化物为原料，参照实施例61的制备方法得到终产物5-(3-(4-(4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(10.0mg)。
MS(ESI)M/Z:1045.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.60(s,1H),8.37(s,1H),8.28(s,1H),8.20(s,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.52-7.49(m,2H),7.43(d,J＝6.8Hz,1H),7.36(d,J＝7.6Hz,2H),7.02-6.98(m,1H),6.79-6.75(m,2H),6.55-6.53(m1H),4.95-4.90(m,1H),4.12(t,J＝7.2Hz,2H),4.03-3.95(m,1H),3.91(s,3H),3.88(s,3H),3.65-3.35(m,4H),3.20-3.00(m,6H),2.93-2.74(m,3H),2.50-2.46(m,2H),2.28-2.00(m,8H),1.85(s,3H),1.82(s,3H),1.25-1.20(m,1H),0.98-0.93(m,2H),0.58-0.53(m,2H).
实施例86:
3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯 基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氯苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以4-溴-3-氯苯胺为原料，参照实施例54的制备方法得到终产物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氯苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(14.4mg)。
MS(ESI)M/Z:1024.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.56(s,1H),8.97(dd,J＝9.2,4.0Hz,1H),8.73(s,1H),8.71(s,1H),8.29-8.19(m,3H),7.67(s,1H),7.63-7.60(m,2H),7.39(s,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),6.67(d,J＝5.6Hz,2H),6.56(dd,J＝8.0,1.2Hz,1H),4.68(brs,1H),4.08-4.04(m,1H),3.89(s,3H),3.75(s,3H),3.64(s,2H),3.49(brs,2H),3.21(brs,2H),2.98-2.85(m,6H),2.80-2.71(m,1H),2.58-2.49(m,3H),2.14(s,3H),2.11(s,3H),2.01-1.81(m,6H).
实施例87:
5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(200mg，0.31mmol)溶于DMSO(5mL)中，加入2-氧代-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(116mg，0.48mmol)，滴加15滴醋酸，室温搅拌1小时后，冰浴下慢慢加入三乙酰氧基硼氢化钠(204mg，0.96mmol)，再升温至70℃搅拌12小时。TLC监测原料消失，向反应液加入饱和碳酸氢钠(20mL)淬灭，乙酸乙酯(40mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物硅胶柱层析提纯(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(60mg，收率36％)。
MS(ESI)M/Z:862.4[M+H] +.
步骤2：将2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(60mg，0.07mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，冰浴下加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌1小时。TLC监测原料消失，直接减压浓缩得到(6-((2-((4-(4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦三氟乙酸盐(48mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:762.3[M+H] +.
步骤3：将(6-((2-((4-(4-(7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦三氟乙酸盐(48mg,0.06mmol)和3-碘氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(43mg,0.16mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入碳酸钾(32mg,0.23mmol)，氮气置换3次后，反应体系升温至100℃搅拌5天。TLC监测显示反应结束，反应液冷却至室温，过滤，减压浓缩。加入水(20mL)，用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)得到3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(41mg，收率81％)。
MS(ESI)M/Z:917.4[M+H] +.
步骤4：将3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(35mg,0.04mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，冰浴下加入三氟乙酸(2mL)，室温下搅拌1小时。LCMS监测显示反应结束，减压浓缩得到(6-((2-((4-(4-(7-(氮杂环丁烷-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基膦氧化物的三氟乙酸盐(27mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:817.3[M+H] +.
步骤5：室温下将(6-((2-((4-(4-(7-(氮杂环丁烷-3-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基膦氧化物的三氟乙酸盐(27mg,粗品)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(22mg,0.08mmol)溶于DMSO(3mL)中，加入DIEA(42mg,0.33mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至60℃并搅拌过夜。TLC监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3.2mg，二步收率7.8％)。
MS(ESI)M/Z:1073.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.08(s,1H),11.10(s,1H),10.26(s,1H),8.27(brs,1H),8.17(s,1H),8.04(s,1H),7.90-7.83(m,2H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(s,1H),6.92(s,1H),6.78-6.75(m,2H),6.66(s,1H),5.11-5.06(m,1H),4.36-4.25(m,5H),3.90-3.80(m,8H),3.25-3.20(m,4H),3.15-3.00(m,3H),2.99-2.85(m,6H),2.60-2.50(m,2H),2.25(s,3H),2.09(s,3H),2.05-2.00(m,4H),1.91(s,3H),1.87(s,3H),1.83-1.75(m,4H).
实施例88:
5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例87的制备方法得到终产物5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(7.2mg)。
MS(ESI)M/Z:1085.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ10.58(s,1H),8.40-8.36(m,1H),8.27(s,1H),8.20(s,1H),8.01(s,1H),7.93(s,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.32-7.30(m,2H),7.02-6.98(m,1H),6.78(brs,2H),6.70(s,1H),6.54-6.51(m,1H),4.95-4.90(m,1H),4.10-4.08(m,2H),3.91(s,3H),3.87(s,3H),3.60-3.41(m,5H),3.31(brs,2H),3.17-3.14(m,2H),2.91-2.80(m, 2H),2.76-269(m,4H),2.37-2.11(m,8H),2.12-1.89(m,2H),1.85(s,3H),1.81(s,3H),1.68(brs,4H),0.98-0.96(m,2H),0.60-0.58(m,2H).
实施例89:
5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-二氢苯并[b][1,4]二噁英-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例87的制备方法得到终产物5-(3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2.2mg)。
MS(ESI)M/Z:1103.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ7.99-7.95(m,1H),7.89-7.80(m,2H),7.70-7.65(m,1H),7.62-7.55(m,1H),7.52-7.48(m,1H),6.87-6.79(m,1H),6.73-6.68(m,1H),6.63-6.57(m,1H),6.42-6.34(m,1H),4.98-4.91(m,1H),4.42-4.20(m,9H),3.91(s,3H),3.83(s,3H),3.64-3.42(m,5H),3.30-3.18(m,5H),3.05-2.73(m,7H),2.58-2.47(m,4H),2.25-1.99(m,4H),1.90(s,3H),1.86(s,3H).
实施例90:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将(2-氨基-5-甲基苯基)二甲基氧化膦(8.1g,粗品，约37.6mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(80mL)中，加入5-溴-2,4-二氯吡啶(15.1g,66.3mmol)和N,N-二异丙基乙胺(11.4g,88.4mmol)。反应液在氮气保护下加热至80℃搅拌4小时至反应完全。将反应液冷却至室温，加入水(500mL)，用乙酸乙酯(150mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝90/1)得到(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-甲基苯基)二甲基氧化膦(10.0g，收率71％)。
MS(ESI)M/Z:373.9[M+H] +.
步骤2：室温下将(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-5-甲基苯基)二甲基氧化膦(508mg，1.4mmol)溶于正丁醇(15mL)，加入1-(4-(4-氨基-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(400mg，1.0mmol)和三氟乙酸(1.2g，10.4mmol)，氮气置换2次，升温至100℃搅拌过夜，LCMS监测反应完毕。将反应液冷却至室温，加入水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩，所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)得到1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(519mg，收率69％)。
MS(ESI)M/Z:721.1[M+H] +.
步骤3：室温下将1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(519mg，0.72mmol)溶于甲醇(10mL)和水(2mL)中，加入氢氧化钠(287mg，7.2mmol)，氮气保护下升温至60℃搅拌1小时，LCMS监测反应结束。将反应液冷却至室温，加入水(50mL)，用二氯甲烷(50mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水洗涤三次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-甲基苯基)二甲基磷氧化物(442mg，收率98％)。
MS(ESI)M/Z:625.2[M+H] +.
步骤4：室温下将(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-甲基苯基)二甲基磷氧化物(50mg,0.08mmol)和2-(1-(2-(2,6-氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯(48mg,0.10mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入DIEA(103mg,0.80mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至100℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(20mL)淬灭反应。混合液用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经制备级薄层色谱(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(16.6mg，收率20％)。
MS(ESI)M/Z:1010.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ10.53(s,1H),8.34(dd,J＝8.6,4.6Hz,1H),8.25(s,1H),8.19(s,1H),8.02(s,1H),7.77(s,1H),7.65(s,1H),7.45(d,J＝11.2Hz,1H),7.38(s,J＝7.2Hz,1H),7.28(s,1H),7.05-7.01(m,1H),6.85-6.79(m,1H),6.73(s,1H),4.95-4.91(m,1H),3.88(s,3H),3.87(s,3H),3.66-3.63(m,2H),3.02-2.68(m,10H),2.65-2.44(m,5H),2.25(s,3H),2.19-2.11(m,1H),1.85-1.81(m,2H),1.84(s,3H),1.81(s,3H),1.58-1.35(m,5H).
实施例91:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-氨基喹啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例90的制备方法得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(45.8mg)。
MS(ESI)M/Z:1047.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.38(brs,1H),11.12(s,1H),8.78(s,1H),8.55-8.50(m,1H),8.44-8.42(m,1H),8.28(brs,1H),8.22(s,1H),7.95(s,1H),7.83(s,1H),7.73-7.70(m,1H),7.56-7.44(m,4H),6.81(s,1H),5.13-5.08(m,1H),3.80(s,3H),3.77(s,3H),3.63-3.60(m,2H),3.35-3.20(m,2H),2.89-2.85(m,8H),2.65-2.40(m,5H),2.05-2.02(m,7H),1.84-1.81(m,2H),1.60-1.45(m,3H),1.40-1.30(m,2H).
实施例92:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-氨基-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例90的制备方法得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(32.8mg)。
MS(ESI)M/Z:1024.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.19(s,1H),11.12(s,1H),9.57(brs,1H),8.45(brs,1H),8.19(s,1H),8.05(s,1H),7.88-7.85(m,2H),7.75-7.72(m,1H),7.66(s,1H),7.48(d,J＝7.2Hz,1H),6.76(s,1H),6.64(brs,1H),5.14-5.10(m,1H),3.88(s,3H),3.84(s,3H),3.65-3.23(m,4H),3.01-2.83(m,8H),2.66-2.40(m,5H),2.25(s,3H),2.10-1.95(m,4H),1.91(s,3H),1.88(s,3H),1.83(brs,2H),1.71(brs,2H),1.60(brs,1H),1.44-1.34(m,2H).
实施例93:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(2-氨基-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例90的制备方法得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(37.5mg)。
MS(ESI)M/Z:1036.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.11(s,1H),11.04(s,1H),9.54(brs,1H),8.46(brs,1H),8.20(s,1H),8.14(brs,1H),8.02(s,1H),7.95(s,1H),7.76-7.67(m,2H),7.47(d,J＝7.2Hz,1H),7.24-7.20(m,1H),6.76(s,1H),6.45(brs,1H),5.13-5.08(m,1H),3.86(s,3H),3.83(s,3H),3.66-3.56(m,4H),3.31-3.21(m,6H),3.03-2.86(m,5H),2.69-2.53(m,3H),2.08-2.00(m,1H),1.84-1.72(m,2H),1.77(s,3H),1.74(s,3H),1.73-1.67(m,2H),1.59(brs,1H),1.42-1.34(m,2H),0.94-0.88(m,2H),0.56-0.51(m,2H).
实施例94:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-氨基-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例90的制备方法得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(7.8mg)。
MS(ESI)M/Z:1054.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.63(s,1H),11.10(s,1H),8.12-8.08(m,2H),8.02(s,1H),7.94-7.87(m,1H),7.80(s,1H),7.72-7.68(m,1H),7.58(s,1H),7.45(d,J＝7.6Hz,1H),6.81(s,1H),6.44-6.34(m,1H),5.12-5.08(m,1H),4.31-4.20(m,4H),3.84(s,3H),3.79(s,3H),3.60-3.30(m,4H),2.93-2.88(m,8H),2.50-2.40(m,5H),2.08-1.80(m,1H),1.90-1.80(m,8H),1.60-1.40(m,3H),1.35-1.20(m,2H).
实施例95:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(2-氨基-5-氟苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例90的制备方法得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(32.4mg)。
MS(ESI)M/Z:1014.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ10.39(s,1H),8.39-8.33(m,1H),8.19(d,J＝7.2Hz,2H),8.04(s,1H),7.74(s,1H),7.62(s,1H),7.46(d,J＝11.2Hz,1H),7.38(d,J＝7.2Hz,1H),7.31(s,1H),6.97-6.90(m,1H),6.73(s,1H),6.59(brs,1H),4.95-4.91(m,1H),3.91(s,3H),3.89(s,3H),3.66-3.63(m,2H),2.98-2.63(m,10H),2.56-2.42(m,5H),2.16-2.11(m,1H),1.86-1.82(m,8H),1.58-1.40(m,5H).
实施例96:
3-(5-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将4,5-二氟-2-甲基苯甲酸甲酯(500mg,2.7mmol)溶于1,2-二氯乙烷(10mL)中，加入偶氮二异丁腈(22mg,0.13mmol)。反应液在氮气保护下加热至80℃搅拌20小时至反应完全。将反应液冷却至室温，加入饱和硫代硫酸钠水溶液(10毫升)淬灭。混合液用二氯甲烷(20mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1)纯化得到2-(溴甲基)-4,5-二氟苯甲酸甲酯(741mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:265.0[M+H] +.
步骤2：室温下将2-(溴甲基)-4,5-二氟苯甲酸甲酯(741mg，粗品)溶于乙腈(10mL)中，加入3-氨基哌啶-2,6-二酮盐酸盐(506mg,3.1mmol)和DIEA(542mg,4.2mmol)。反应液在氮气保护下加热至80℃搅拌20小时至反应完全。将反应液冷却至室温，加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL),分液，有机相用饱和食盐水洗涤(50mL)一次，无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到3-(5,6-二氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(750mg，二步收率99％)。
MS(ESI)M/Z:281.1[M+H] +.
步骤3：室温下将3-(5,6-二氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(2.0g，7.1mmol)溶于DMSO(20mL)中，加入2-(哌啶-4-基)乙醇(2.8g，21.4mmol)和三乙胺(2.2g，21.4mmol)，氮气保护下升温至80℃搅拌20小时。TLC监测原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL)萃取四次。合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50/1)纯化得到3-(6-氟-5-(4-(2-羟乙基)哌啶-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(0.9g，收率33％)。
MS(ESI)M/Z:389.6[M+H] +.
步骤4：将3-(6-氟-5-(4-(2-羟乙基)哌啶-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(500mg，1.3mmol)和三乙胺(261mg，2.6mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，冰浴下滴加甲磺酰氯(220mg，1.9mmol)，室温搅拌2小时。TLC监测原料消失，加入水(50mL)淬灭，用二氯甲烷(50mL)萃取三次。合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝50/1)纯化得到2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯(89mg，收率15％)。
MS(ESI)M/Z:468.2[M+H] +.
步骤5：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦盐酸盐(126mg,0.18mmol)和2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯(89mg,0.19mmol)溶于乙腈(10mL)中，加入DIEA(74mg,0.57mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至80℃并搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(50mL)淬灭反应。混合液用二氯甲烷(50mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物3-(5-(4-(2-(4-(4-(5-溴-4-(5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-6-氟-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(23.2mg，收率12％)。
MS(ESI)M/Z:1034.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.73(s,1H),12.72(s,1H),8.86(s,1H),8.79(s,1H),8.65-8.64(m,1H),8.05-8.02(m,2H),7.75(s,1H),7.65-7.62(m,1H),7.52-7.50(m,2H),6.75(s,1H),5.18-5.14(m,1H),4.48-4.35(m,2H),3.85(s,6H),3.66-3.60(m,6H),3.35-2.80(m,9H),2.40-2.20(m,3H),2.16(s,3H),2.14(s,3H),2.10-1.50(m,7H).
实施例97:
3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐(50mg，约0.13mmol)、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(78mg，0.12mmol)、HATU(91mg，0.24mmol)和DIEA(78mg，0.60mmol)依次加入到DMF(3mL)中，升温至35℃搅拌30分钟。LCMS监测原料消失，加入水(30mL)稀释，乙酸乙酯(30mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(21.6mg，收率18％)。
MS(ESI)M/Z:982.2[M-H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3/CD 3OD):δ8.18(s,1H),8.14(s,1H),8.10-8.06(m,1H),7.70(s,1H),7.63(s,1H),6.92(t,J＝8.0Hz,1H),6.80(d,J＝7.2Hz,1H),6.68(s,1H),6.44-6.39(m,2H),4.13-4.09(m,1H),3.88(s,6H),3.84-3.66(m,4H),3.57(brs,2H),3.45-3.39(m,3H),2.93-2.80(m,7H),2.48-2.38(m,1H),2.31(s,3H),2.13(s,3H),2.00(s,3H), 1.97(s,3H),1.94-1.76(m,6H).
实施例98:
3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-4-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐(35mg，0.09mmol)、(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-甲基苯基)二甲基氧化膦(63mg，0.10mmol)、HATU(54mg，0.14mmol)和DIEA(37mg，0.29mmol)依次加入到DMF(2mL)中，室温搅拌2小时。LCMS监测原料消失，加入水(20mL)稀释，有固体析出，过滤，滤饼经制备级薄层色谱(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到终产物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-4-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(18.7mg，收率21％)。
MS(ESI)M/Z:970.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ10.55(s,1H),8.34(dd,J＝8.4,4.4Hz,1H),8.29(s,1H),8.20(s,1H),7.90(s,1H),7.77(s,1H),7.64(s,1H),7.31(s,1H),7.07-7.02(m,2H),6.84-6.81(m,1H),6.65(s,1H),6.41(dd,J＝8.2,2.2Hz,1H),6.33(dd,J＝12.4,2.4Hz,1H),4.71-4.70(m,1H),4.06-4.01(m,1H),3.89(s,3H),3.88(s,3H),3.74-3.70(m,4H),3.27-3.22(brs,2H),3.03-2.99(m,2H),2.91-2.86(m,5H),2.80-2.71(m,2H),2.56-2.51(m,1H),2.26(s,3H),2.30-2.10(m,1H),1.85(s,3H),1.81(s,3H),1.95-1.75(m,5H).
实施例99:
3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将2-(4-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸盐酸盐(56mg，0.14mmol)、(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-氟苯基)二甲基氧化膦(75mg，0.12mmol)、HATU(68mg，0.18mmol)和DIEA(31mg，0.24mmol)依次加入到DMF(3mL)中，室温搅拌1小时。LCMS监测原料消失，加入水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物3-((4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(22.3mg，收率19％)。
MS(ESI)M/Z:974.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ10.78(d,J＝3.2Hz,2H),8.30(brs,1H),8.21(d,J＝3.2Hz,1H),8.18(s,1H),8.12(s,1H),7.81(s,1H),7.64(s,1H),7.43-7.35(m,1H),6.96(t,J＝8.6Hz,1H),6.79(s,1H),6.68(brs,1H),6.44(s,1H),6.40(s,1H),5.99(d,J＝7.6Hz,1H),4.33-4.26(m,1H),3.86(s,3H),3.79(s,3H),3.74-3.71(m,2H),3.63(brs,2H),3.19(s,2H),2.95-2.87(m,4H),2.81-2.50(m,5H),2.14-2.05(m,3H),1.93-1.82(m,1H),1.79(s,3H),1.76(s,3H),1.65(brs,4H).
实施例100:
5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹啉-5-基)二甲基氧化膦和4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯为原料，参照实施例49和35的操作步骤制备得到终产物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(14.9mg)。
MS(ESI)M/Z:1069.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.37(s,1H),11.08(s,1H),8.78(d,J＝3.6Hz,1H),8.58-8.52(m,1H),8.44(d,J＝9.6Hz,1H),8.27(s,1H),8.22(s,1H),7.96(s,1H),7.83(s,1H),7.66(d,J＝8.0Hz,1H),7.60-7.49(m,3H),6.81(brs,2H),6.67-6.65(m,1H),5.10-5.04(m,1H),4.66(brs,8H),4.12(brs,2H),3.85-3.75(m,8H),2.87(brs,7H),2.20(brs,3H),2.10-1.96(m,8H),1.90-1.70(m,4H).
实施例101:
5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-环丙基苯基)二甲基氧化膦和4-甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯为原料，参照实施例49和35的操作步骤制备得到终产物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((4-环丙基-2-(二甲膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(17.2mg)。
MS(ESI)M/Z:1059.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ10.51(s,1H),8.32-8.29(m,1H),8.20(s,1H),8.13(s,1H),7.88(brs,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,1H),7.26(s,1H),6.95-6.90(m,1H),6.72-6.64(m,3H),6.47(d,J＝8.8Hz,1H),4.8-4.84(m,1H),4.08-4.01(m,2H),3.83(s,3H),3.80(s,3H),3.67-3.26(m,5H),3.10-3.03(m,2H),2.92-2.64(m,10H),2.09-2.03(m,2H)，2.01-1.92(m,5H),1.78(s,3H),1.75(s,3H),1.50-1.25(m,3H),0.90-0.88(m,2H),0.53-0.49(m,2H).
实施例102:
5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将哌啶-4-羧酸乙酯(8.9g,56.6mmol)和N-叔丁氧羰基-3-氮杂环丁酮(9.7g,56.6mmol)溶 于四氢呋喃(180mL)中，冰浴下缓慢加入三乙酰氧基硼氢化钠(36.0g,169.8mmol)。反应体系在室温下搅拌16小时，LC-MS显示反应结束。向反应液中缓慢加入饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)淬灭，混合液用乙酸乙酯(100mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥并过滤。滤液减压浓缩，所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化得到1-(1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-羧酸乙酯(16.0g，收率90％)。
MS(ESI)M/Z:313.2[M+H] +.
步骤2：氮气保护下将四氢呋喃(170mL)冷却至0℃，慢慢加入氢化铝锂(2.9g,76.8mmol)，搅拌10分钟后，缓慢滴加1-(1-(叔丁氧羰基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-羧酸乙酯(16.0g,51.3mmol)的四氢呋喃(30mL)溶液，反应体系在0℃下搅拌1小时。TLC显示反应结束，反应液在0℃下经十水合硫酸钠淬灭并过滤。滤液减压浓缩得到3-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-羧酸叔丁酯(10.5g，收率76％)。
MS(ESI)M/Z:271.2[M+H] +.
步骤3：室温下将3-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-羧酸叔丁酯(10.5g,38.9mmol)和咪唑(5.5g,81.2mmol)溶于二氯甲烷(200mL)中，冰浴并下缓慢加入叔丁基二苯基氯硅烷(15.2g,55.4mmol)，反应体系在室温下搅拌16小时。LC-MS显示反应结束，向反应液中加入水(300mL)，用乙酸乙酯(100mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化得到3-(4-((叔丁基二苯基硅氧基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-羧酸叔丁酯(17.2g，收率87％)。
MS(ESI)M/Z:509.3[M+H] +.
步骤4：室温下将3-(4-((叔丁基二苯基硅氧基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-羧酸叔丁酯(17.2g,33.8mmol)溶于二氯甲烷(200mL)中，冰浴下慢慢加入三氟乙酸(25.9mL,338mmol)。反应体系在室温下搅拌5小时，LC-MS显示反应结束。反应液减压浓缩后加入饱和碳酸氢钠水溶液(400mL)中和，再用二氯甲烷(150mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(200mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/四氢呋喃＝10/1)纯化得到1-(氮杂环丁-3-基)-4-((叔丁基二苯基硅氧基)甲基)哌啶(13.2g，收率96％)。
MS(ESI)M/Z:409.3[M+H] +.
步骤5：室温下将1-(氮杂环丁-3-基)-4-((叔丁基二苯基硅氧基)甲基)哌啶(2.0g,4.9mmol)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟异吲哚啉-1,3-二酮(1.35g,4.9mmol)溶于二甲基亚砜(20mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(6.3g,49.0mmol)。反应体系升温至140℃搅拌30分钟。LC-MS显示原料消失，将反应液冷却至室温，加水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50mL×3次)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)纯化得到5-(3-(4-((叔丁基二苯基硅氧基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.5g，收率46％)。
MS(ESI)M/Z:665.3[M+H] +.
步骤6：将5-(3-(4-((叔丁基二苯基硅氧基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.3g,1.95mmol)溶于四氢呋喃(15mL)中，冰浴下加入四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(1M,3.9mL,3.9mmol)。反应体系室温下搅拌2小时。LC-MS显示原料消失，往反应液中加水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(20mL×3次)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(3-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(630mg，收率76％)。
MS(ESI)M/Z:427.1[M+H] +.
步骤7：氮气保护下将草酰氯(66mg,0.52mmol)溶于干燥二氯甲烷(3mL)中，冷却至-78℃，滴加二甲基亚砜(81mg,1.04mmol)，搅拌10分钟后，再滴加2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-(3-(4-(羟甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(200mg,0.47mmol)的干燥二氯甲烷(2mL)溶液。反应体系在-78℃继续搅拌1小时，然后滴加三乙胺(238mg,2.35mmol)并搅拌10分钟。LC-MS显示原料消失，反应液自然升温至室温，加水(10mL)稀释，用二氯甲烷(10mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL×3次)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝40/1)纯化得到1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-甲醛(80mg，收率40％)。
MS(ESI)M/Z:425.0[M+H] +.
步骤8：将1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-甲醛(40mg,0.094mmol)和(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-氟苯基)二甲基氧化膦(59mg,0.094mmol)溶于四氢呋喃/N,N-二甲基甲酰胺(2.7mL/0.3mL)中，冰浴下加入三乙酰氧基硼氢化钠(60mg,0.28mmol)。反应体系在室温下搅拌2小时。LC-MS显示原料消失，反应液加水(10mL)淬灭，用二氯甲烷(10mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL×3次)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(36.5mg，收率37％)。
MS(ESI)M/Z:1037.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ10.37(s,1H),8.37-8.30(m,1H),8.23-8.17(m,2H),8.10(s,1H),7.73(s,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.60(s,1H),7.34(s,1H),6.98-6.90(m,1H),6.78(d,J＝2.0Hz,1H),6.71(s,1H),6.58(brs,1H),6.53(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.95-4.90(m,1H),4.10(t,J＝7.4Hz,2H),3.91-3.88(m,8H),3.39-3.31(m,1H),2.94-2.70(m,9H),2.57(brs,4H),2.32-2.30(m,2H),2.15-2.10(m,1H),1.94-1.82(m,10H),1.64-1.60(brs,1H),1.34-1.24(m,2H).
实施例103:
5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
将1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-甲醛(47mg,0.11mmol)和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(60mg,0.094mmol)溶于四氢呋喃/N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL/0.5mL)中，冰浴下加入三乙酰氧基硼氢化钠(60mg,0.28mmol)。反应体系在室温下搅拌2小时。LC-MS显示原料消失，反应液加水(10mL)淬灭，用二氯甲烷(10mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL×3次)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(37.1mg，收率31％)。
MS(ESI)M/Z:1047.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ11.77(s,1H),8.23(s,1H),8.17-8.13(m,2H),8.04(brs,1H),7.74(s,1H),7.70(s,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.24(s,1H),6.83(d,J＝8.0Hz,1H),6.78(d,J＝2.4Hz,1H),6.71(s,1H),6.52(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),4.95-4.90(m,1H),4.10(t,J＝7.6Hz,2H),3.91-3.86(m,8H),3.37-3.31(m,1H),2.92-2.68(m,9H),2.55(brs,4H),2.30-2.28(m,5H),2.13(s,4H),2.00(s,3H),1.97(s,3H),1.93-1.83(m,4H),1.60(brs,1H),1.33-1.23(m,2H).
实施例104:
5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
将1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-甲醛(40mg,0.094mmol)和(2-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-5-甲基苯基)二甲基氧化膦(59mg,0.094mmol)溶于四氢呋喃/N,N-二甲基甲酰胺(2.7mL/0.3mL)中，冰浴下加入三乙酰氧基硼氢化钠(60mg,0.28mmol)。反应体系在室温下搅拌2小时。LC-MS显示原料消失，反应液加水(10mL)淬灭，用二氯甲烷(10mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL×3次)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(34.5mg，收率36％)。
MS(ESI)M/Z:1033.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ10.51(s,1H),8.34(dd,J＝8.6,4.6Hz,1H),8.24(s,1H),8.19(s,1H),8.06(s,1H),7.74(s,1H),7.67(s,1H),7.63(d,J＝8.0Hz,1H),7.30(s,1H),7.03(d,J＝14.4Hz,1H),6.82-6.77(m,2H),6.72(s,1H),6.52(dd,J＝8.2,2.2Hz,1H),4.95-4.90(m,1H),4.10(t,J＝7.4Hz,2H),3.91-3.86(m,8H),3.37-3.31(m,1H),2.93-2.70(m,9H),2.56(brs,4H),2.29(d,J＝6.4Hz,2H),2.25(s,3H),2.15-2.10(m,1H),1.94-1.81(m,10H),1.60(brs,1H),1.33-1.24(m,2H).
实施例105:
5-((R)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1:室温下将(S)-3-(2-羟乙基)吡咯啉-1-羧酸叔丁酯(200mg,0.93mmol)溶于二氯甲烷(2mL)中，冰 浴下加入氯化氢/1,4-二氧六环溶液(4M,1mL,4mmol)。反应体系在室温下搅拌1小时，LC-MS显示反应结束。反应液减压浓缩，加入饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)，用二氯甲烷(5mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(5mL×3次)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩得到(S)-2-(吡咯啉-3-基)乙-1-醇(110mg,粗品)，直接用于下一步反应。
MS(ESI)M/Z:116.2[M+H +].
步骤2：室温下将(S)-2-(吡咯啉-3-基)乙-1-醇(110mg,粗品)和2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮(281mg,0.96mmol)溶于二甲基亚砜(2mL)中，加入N,N-二异丙基乙胺(1.3g,10.0mmol)。反应体系升温至140℃搅拌30分钟。LC-MS显示原料消失，将反应液冷却至室温，加水(10mL)稀释，用乙酸乙酯(10mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL×3次)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝20/1)纯化得到2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-((S)-3-(2-羟乙基)吡咯啉-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(307mg，收率85％)。
MS(ESI)M/Z:390.1[M+H] +.
步骤3：室温下将2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-((S)-3-(2-羟乙基)吡咯啉-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮(100mg,0.26mmol)溶于二氯甲烷(4mL)中，冰浴下加入三乙胺(78mg,0.77mmol)和甲基磺酰氯(44mg,0.39mmol)。反应体系在冰浴下搅拌1小时。LC-MS显示原料消失，加入饱和碳酸氢钠水溶液(8mL)和水(5mL)稀释，用二氯甲烷(20mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/2)纯化得到2-((3S)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)吡咯啉-3-基)乙基甲磺酸酯(78mg，收率65％)。
MS(ESI)M/Z:468.1[M+H] +.
步骤4：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(107mg,0.17mmol)和2-((3S)-1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)吡咯啉-3-基)乙基甲磺酸酯(78mg,0.17mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入DIEA(216mg,1.7mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至85℃搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠水溶液(10mL)淬灭反应。混合液用二氯甲烷/无水甲醇＝10/1(33mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经制备级薄层色谱(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝10/1)纯化得到终产物5-((R)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(52.2mg，收率31％)。
MS(ESI)M/Z:1010.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ11.79(s,1H),8.25(s,1H),8.17-8.14(m,2H),7.99(s,1H),7.77(s,1H),7.68(s,1H),7.38(d,J＝12.4Hz,1H),7.22(s,1H),7.01(d,J＝7.6Hz,1H),6.87-6.83(m,1H),6.71(s,1H),4.94-4.89(m,1H),3.88(s,3H),3.87(s,3H),3.76-3.72(m,1H),3.65-3.58(m,2H),3.28-3.22(m,1H),2.99-2.65(m,8H),2.61-2.45(m,5H),2.37-2.29(m,4H),2.23-2.11(m,5H),2.00(s,3H),1.97(s,3H),1.72-1.56(m,3H).
实施例106:
5-((S)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(R)-3-(2-羟乙基)吡咯啉-1-羧酸叔丁酯为原料，参照实施例105的操作步骤制备得到终产物5-((S)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(23.6mg)。
MS(ESI)M/Z:1010.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.92(s,1H),11.08(s,1H),8.11(s,1H),7.99(s,2H),7.90-7.88(m,1H),7.79(s,1H),7.61-7.57(m,2H),7.06(d,J＝7.6Hz,1H),6.79(s,1H),6.69(brs,1H),5.08-5.04(m,1H),3.84(s,3H),3.79(s,3H),3.76-3.71(m,1H),3.66-3.56(m,2H),3.27-3.21(m,1H),2.92-2.84(m,5H),2.68-2.56(m,5H),2.50-2.43(m,3H),2.34-2.21(m,4H),2.17-1.99(m,5H),1.88(s,3H),1.85(s,3H),1.66-1.61(m,3H).
实施例107:
5-(3-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯啉-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将(S)-3-(羟甲基)吡咯啉-1-羧酸叔丁酯(500mg,2.5mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，冰浴下加入DIEA(641mg,5.0mmol)和甲基磺酰氯(427mg,3.7mmol)。反应体系在室温下搅拌1小时。LC-MS显示原料消失，加入水(20mL)稀释，用二氯甲烷(20mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1)纯化得到(S)-3-((甲磺酰氧基)甲基)吡咯啉-1-羧酸叔丁酯(540mg，收率78％)。
MS(ESI)M/Z:280.1[M+H] +.
步骤2：室温下将(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(200mg,0.31mmol)和(S)-3-((甲磺酰氧基)甲基)吡咯啉-1-羧酸叔丁酯(131mg,0.47mmol)溶于DMSO(8mL)中，加入DIEA(121mg,0.94mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至100℃搅拌过夜。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，加入水(40mL)淬灭反应。混合液用乙酸乙酯(40mL×3次)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经硅胶柱层析(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30/1)纯化得到(R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯啉-1-羧酸叔丁酯(140mg，收率55％)。
MS(ESI)M/Z:822.3[M+H] +.
步骤3:室温下将(R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯啉-1-羧酸叔丁酯(140mg,0.17mmol)溶于二氯甲烷(6mL)中，冰浴下加入氯化氢/1,4-二氧六环溶液(4M,3mL,12mmol)。反应体系在室温下搅拌1小时，LC-MS显示反应结束。反应液减压浓缩得到(S)-(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(吡咯啉-3-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦盐酸盐(140mg,粗品)，直接用于下一步反应。
MS(ESI)M/Z:722.3[M+H +].
后续步骤以(S)-(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(4-(吡咯啉-3-基甲基)哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦盐酸盐为原料，参照实施例35的制备方法得到终产物5-(3-((R)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯啉-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(6.6mg)。
MS(ESI)M/Z:1033.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3/CD 3OD):δ8.08-7.88(m,4H),7.64(d,J＝1.8Hz,1H),7.53-7.58(m,3H),6.74-6.66(m,3H),6.54-6.45(m,1H),4.90-4.80(m,1H),4.09-4.07(m,2H),3.88-3.92(m,4H),3.82(s,3H),3.80(s,3H),3.25-2.88(m,5H),2.75-2.63(m,6H),2.60-2.40(m,4H),2.26(s,3H),2.13-2.10(m,2H),2.04(s,3H),1.93(s,3H),1.89(s,3H),1.60-1.46(m,3H).
实施例108:
5-(3-((S)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯啉-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(R)-3-(羟甲基)吡咯啉-1-羧酸叔丁酯为原料，参照实施例107的制备方法得到终产物5-(3-((S)-3-((4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)吡咯啉-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(12.9mg)。
MS(ESI)M/Z:1033.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ11.74(s,1H),8.19-8.07(m,4H),7.76(s,1H),7.57(d,J＝8.0Hz,1H),7.45(s,1H),6.82(s,1H),6.71(s,1H),6.63(s,1H),6.46(d,J＝8.0Hz,1H),4.87-4.83(m,1H),4.04(t,J＝6.8Hz,2H),3.94-3.88(m,2H),3.80(s,6H),3.50(brs,2H),3.22-3.06(m,3H),2.85-2.53(m,12H),2.23(s,3H),2.18-2.13(m,2H),2.10(s,3H),1.93(s,3H),1.90(s,3H),1.60-1.46(m,3H).
实施例109:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮和2-(4-甲基哌啶-4-基)乙烷-1-醇(制备可参考文献Collection of Czechoslovak Chemical Communications,1953,vol.18,p.818,821)为原料，参照实施例55的操作步骤制备得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(7mg)。
MS(ESI)M/Z:1038.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ11.78(s,1H),8.24(s,1H),8.17-8.14(m,2H),8.00(brs,1H),7.80(s,1H),7.61(s,1H),7.46(d,J＝11.2Hz,1H),7.40(d,J＝7.2Hz,1H),7.24(s,1H),6.89-6.82(m,1H),6.70(s,1H),4.95-4.91(m,1H),3.88(s,3H),3.87(s,3H),3.37-3.30(m,2H),3.22-3.15(m,2H),3.00(brs,4H),2.93-2.68(m,6H),2.63-2.53(m,3H),2.30(s,3H),2.18-2.11(m,4H),2.00(s,3H),1.97(s,3H),1.60-1.45(m,6H),1.05(s,3H).
实施例110:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：氮气保护下将四氢呋喃(10mL)冷却至0℃，慢慢加入氢化铝锂(176mg,4.6mmol)，搅拌10分钟后，缓慢滴加4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-4-氟哌啶-1-羧酸苄酯(1.0g,3.1mmol)的四氢呋喃(2mL)溶液，反应体系在0℃下搅拌0.5小时。LCMS显示反应结束，冰浴下向反应液中加入乙酸乙酯(20mL)稀释，再依次加水(0.5mL)、10％氢氧化钠水溶液(0.4mL)和水(0.5mL)。混合物过滤，滤液经无水硫酸钠干燥后减压浓缩得到4-氟-4-(2-羟乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(800mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:282.0[M+H] +.
步骤2：室温下将4-氟-4-(2-羟乙基)哌啶-1-羧酸苄酯(800mg，粗品)溶于甲醇(10mL)中，加入10％湿钯炭(240mg)。反应体系在氢气球氛围下搅拌过夜。LCMS显示反应结束，反应液减压浓缩得到2-(4-氟哌啶-4-基)乙烷-1-醇(520mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:148.1[M+H] +.
后续步骤以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮和2-(4-氟哌啶-4-基)乙烷-1-醇为原料，参照实施例55的操作步骤制备得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(41.1mg)。
MS(ESI)M/Z:1042.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.92(s,1H),11.10(s,1H),8.11(s,1H),7.99(s,2H),7.89(dd,J＝7.8,3.4Hz,1H),7.79(s,1H),7.74(d,J＝11.6Hz,1H),7.58(s,1H),7.51(d,J＝7.6Hz,1H),6.77(s,1H),6.71(brs,1H),5.13-5.08(m,1H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),3.51-3.47(m,2H),3.33-3.29(m,1H),3.19-3.12(m,2H),2.93-2.80(m,5H),2.68-2.53(m,7H),2.22(s,3H),2.07-2.00(m,4H),1.96-1.81(m,12H).
实施例111:
3-(4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-基)-3-氟苯基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将2-(1-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸盐酸盐(50mg，0.14mmol，制备参照专利WO2021/127561A1)、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(88mg，0.14mmol)、HATU(80mg，0.21mmol)和DIEA(35mg，0.27mmol)依次加入到DMF(3mL)中，室温搅拌1小时。LCMS监测原料消失，加入水(10mL)稀释，乙酸乙酯(10mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物3-(4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-基)-3-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(68.8mg，收率50％)。
MS(ESI)M/Z:985.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.91(s,1H),10.81(s,1H),8.11(d,J＝7.6Hz,2H),7.99(s,1H),7.89(d,J＝5.2Hz,1H),7.75(s,1H),7.63(s,1H),7.02-6.93(m,3H),6.78(s,1H),6.70(brs,1H),4.94(s,1H),3.86(s,3H),3.79(brs,4H),3.70(brs,4H),3.10-2.98(m,4H),2.83(brs,4H),2.69-2.57(m,4H),2.23-2.15(m,4H),2.08(s,3H),2.03-1.97(m,1H),1.89(s,3H),1.85(s,3H),1.83-1.68(m,4H).
实施例112:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：将1,4-二氯-2-氟-5-硝基苯(11.5g,55.0mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(12.2g,65.6mmol)溶于乙腈(300mL)中，加入碳酸钾(15.1g,109mmol)，升温至70℃搅拌过夜。反应液冷却至室温，减压浓缩除去大部分溶剂，加入乙酸乙酯(300mL)稀释，再用饱和食盐水(200mL×3)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1)得到4-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(18.6g，收率90％)。
MS(ESI)M/Z:376.0[M+H] +.
步骤2：室温下向4-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(15.6g,41.6mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入氯化氢二氧六环溶液(50mL,4M)。室温下搅拌3小时后减压浓缩得到1-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌嗪盐酸盐(10.1g，粗品)。
MS(ESI)M/Z:276.1[M+H] +.
步骤3：室温下将1-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌嗪盐酸盐(10.1g，粗品)和DMAP(8.9g，73.2mmol)加入到二氯甲烷(150mL)中，搅拌5分钟，再加入三氟乙酸酐(11.5g，54.9mmol)，室温搅拌反应1小时。将反应液倒入冰水(150mL)中，用二氯甲烷(100mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝20/1)得到1-(4-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(9.1g，二步收率59％)。
MS(ESI)M/Z:372.0[M+H] +.
步骤4：室温下将1-(4-(2,5-二氯-4-硝基苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(9.1g，24.5mmol)溶于甲醇(100mL)和水(20mL)中，依次加入和原料等重的氯化铵和铁粉，升温至70℃搅拌2小时。LCMS检测反应完全，反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝5/1)得到1-(4-(4-氨基-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(4.2g，收率50％)。
MS(ESI)M/Z:342.1[M+H] +.
步骤5：室温下将1-(4-(4-氨基-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(176mg，0.52mmol)，(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧膦(200mg，0.52mmol)和三氟乙酸(582mg，5.1mmol)依次加入到正丁醇(10mL)中，氮气保护下升温至110℃搅拌过夜。LCMS检测反应完全，将反应液冷却至室温，加水(50mL)稀释后用乙酸乙酯(50mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝25/1)得到1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(84mg，收率24％)。
MS(ESI)M/Z:693.1[M+H] +.
步骤6：室温下将1-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)-2,2,2-三氟乙烷-1-酮(84mg，0.12mmol)和氢氧化钾(34mg，0.60mmol)加入到甲醇(8mL)和水(2mL)中，升温至60℃搅拌反应1小时。LCMS监测反应完毕，将反应液冷却至室温，加入冰水(20mL)稀释，再用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物经制备级薄层色谱纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝15/1)得到(6-((5-溴-2-((2,5-二氯-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯)二甲基氧化膦(23mg，收率32％)。
MS(ESI)M/Z:597.1[M+H] +.
步骤7：室温下将(6-((5-溴-2-((2,5-二氯-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯)二甲基氧化膦(23mg,0.039mmol)和2-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)哌啶-4-基)乙基甲磺酸酯(19mg,0.040mmol)溶于乙腈(3mL)中，加入DIEA(15mg,0.12mmol)和催化量的碘化钠，将反应体系加热至85℃并搅拌15小时。LCMS监控显示原料消失，将反应液冷却至室温，用高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(6.5mg，收率17％)。
MS(ESI)M/Z:982.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.61(s,1H),8.01(d,J＝5.6Hz,2H),7.88-7.85(m,2H),7.47(d,J＝10.8Hz,1H),7.38(d,J＝7.2Hz,1H),7.14-7.11(m,2H),4.96-4.91(m,1H),3.76-3.64(m,4H),3.44-3.31(m,4H),3.19-3.15(m,2H),3.09-3.04(m,2H),2.88-2.81(m,4H),2.78-2.69(m,2H),2.30(s,3H),2.24(s,3H),2.16-2.12(m,1H),2.00(s,3H),1.97(s,3H),1.86-1.81(m,3H),167-1.59(m,1H),1.54-1.45(m,2H).
实施例113:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例112的操作步骤制备得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(20mg)。
MS(ESI)M/Z:1006.0[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.66(s,1H),8.93(dd,J＝9.6,4.0Hz,1H),8.78(d,J＝2.0Hz,1H),8.73(d,J＝1.6Hz,1H),8.37(s,1H),8.31(s,1H),8.21(d,J＝9.2Hz,1H),8.08(brs,1H),7.45(d,J＝11.2Hz,1H),7.39(d,J＝7.2Hz,1H),7.30(s,1H),7.09(s,1H),4.95-4.91(m,1H),3.65(d,J＝12.4Hz,2H),3.10(brs,4H),2.93-2.69(m,8H),2.60-2.56(m,2H),2.16(s,3H),2.12(s,3H),1.84(brs,4H),1.62-1.45(m,5H).
实施例114:
1-(6-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-3,3-二氟哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)-3,3-二氟哌啶-1-基)乙酸三氟乙酸盐(制备参见专利WO2021/127561A1)和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例111的操作步骤制备得到终产物1-(6-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-3,3-二氟哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(46mg)。
MS(ESI)M/Z:1042.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ11.94(s,1H),8.21(s,1H),8.15-8.12(m,2H),7.77(s,1H),7.70(s,1H),7.68(s,1H), 7.63(d,J＝8.8Hz,1H),7.29(s,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,1H),6.83(d,J＝7.6Hz,1H),6.66(s,1H),4.09(t,J＝6.8Hz,2H),4.00(s,3H),3.90(s,3H),3.85(s,3H),3.76-3.67(m,3H),3.47-3.34(m,2H),3.27-3.22(m,1H),3.13-3.03(m,2H),2.95-2.87(m,7H),2.73-2.63(m,1H),2.55-2.50(m,1H),2.30(s,3H),2.15(s,3H),2.00(s,3H),1.97(s,3H),1.72(brs,2H).
实施例115:
1-(6-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(4-(3-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-1-甲基-1H-吲唑-6-基)哌啶-1-基)乙酸三氟乙酸盐(制备参见专利WO2021/127561A1)和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例111的操作步骤制备得到终产物1-(6-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲基膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-1-甲基-1H-吲唑-3-基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(14.8mg)。
MS(ESI)M/Z:1029.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.59(s,1H),9.03-8.93(m,1H),8.72(d,J＝12.6Hz,2H),8.30(s,1H),8.25(s,1H),7.74-7.57(m,5H),7.40(d,J＝0.9Hz,1H),7.15(s,1H),7.05(d,J＝7.6Hz,1H),6.67(s,1H),4.10-4.07(m,2H),3.98(s,3H),3.89(s,3H),3.75-3.71(m,6H),3.35-3.25(m,2H),3.09-3.05(m,2H),2.91-2.84(m,4H),2.72-2.62(m,1H),2.40-2.27(m,2H),2.15(s,3H),2.11(s,3H),1.93-1.84(m,7H).
实施例116:
3-(5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
以3-(5-(4-(2-羟乙基)哌啶-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(制备参见专利US2020/339572A1)和 (6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例55的操作步骤制备得到终产物3-(5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮(7.1mg)。
MS(ESI)M/Z:1016.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ12.68(s,1H),10.96(s,1H),8.85-8.81(m,3H),8.43(s,1H),8.28(s,1H),8.00(s,1H),7.81(s,1H),7.52-7.45(m,3H),7.10-7.00(m,2H),6.83(s,1H),5.07-5.04(m,1H),4.34-4.22(m,2H),3.90-3.87(m,2H),3.82(s,3H),3.76(s,3H),2.90-2.75(m,8H),2.70-2.40(m,6H),2.03-1.90(m,8H),1.80-1.70(m,2H),1.55-1.40(m,5H).
实施例117:
3-((4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将2-(1-(4-((2,6-二氧代哌啶-3-基)氨基)-2-氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸盐酸盐(80mg，0.19mmol，制备参照专利WO2021/127561A1)、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(183mg，0.22mmol)、HATU(123mg，0.32mmol)和DIEA(105mg，0.81mmol)依次加入到DMF(5mL)中，室温搅拌3小时。LCMS监测原料消失，反应液倒入水(20mL)中，乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(10mL)洗涤二次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物3-((4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-基)-3-氟苯基)氨基)哌啶-2,6-二酮(95mg，收率49％)。
MS(ESI)M/Z:1000.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.98(s,1H),10.86(s,1H),8.18(d,J＝2.0Hz,2H),8.09(s,1H),7.95(d,J＝4.0Hz,1H),7.83(s,1H),7.69(brs,1H),6.92-6.90(m,1H),6.85(s,1H),6.80-6.70(m,1H),6.58-6.54(m,1H),6.49-6.46(m,1H),5.87-5.83(m,1H),4.95(s,1H),4.40-4.28(m,1H),3.93(s,3H),3.86(s,3H),3.77-3.70(m,4H),2.90-2.75(m,9H),2.63-2.56(m,3H),2.29(s,3H),2.14-2.05(m,5H),1.95(s,3H),1.92(s,3H),1.85-1.65(m,4H).
实施例118:
1-(4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-基)-3-氟苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮
反应流程:
反应步骤：
室温下将2-(1-(4-(2,4-二氧代四氢嘧啶-1(2H)-基)-2-氟苯基)-4-羟基哌啶-4-基)乙酸(150mg，0.41mmol，制备参照专利WO2021/127561A1)、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(277mg，0.43mmol)、HATU(187mg，0.49mmol)和DIEA(159mg，1.23mmol)依次加入到DMF(5mL)中，室温搅拌3小时。LCMS监测原料消失，反应液倒入水(20mL)中，乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(10mL)洗涤二次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物1-(4-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)-4-羟基哌啶-1-基)-3-氟苯基)二氢嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮(55.8mg，收率14％)。
MS(ESI)M/Z:986.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.92(s,1H),10.38(s,1H),8.12(d,J＝2.0Hz,2H),8.03(s,1H),7.88(d,J＝4.0Hz,1H),7.77(s,1H),7.62(s,1H),7.18-7.14(m,1H),7.07-7.05(m,2H),6.78(s,1H),6.76(brs,1H),4.96(s,1H),3.86(s,3H),3.79(s,3H),3.75-3.65(m,6H),3.10-2.95(m,4H),2.83-2.80(m,4H),2.68(t,J＝6.8Hz,2H),2.58(brs,2H),2.23(s,3H),2.08(s,3H),1.89(s,3H),1.85(s,3H),1.80-1.69(m,4H).
实施例119:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(2-((5-溴-2-氯嘧啶-4-基)氨基)苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例112的操作步骤制备得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(三氟乙酸盐，26.2mg)。
MS(ESI)M/Z:953.9[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ13.00(s,1H),11.64(s,1H),11.32(brs,1H),8.14-8.10(m,1H),8.06(s,1H),8.01(s, 1H),7.63(s,1H),7.47(d,J＝10.8Hz,1H),7.38(d,J＝7.6Hz,1H),7.30-7.21(m,3H),7.16(s,1H),4.96-4.91(m,1H),3.78(d,J＝11.6Hz,2H),3.65(d,J＝12.8Hz,2H),3.47(d,J＝11.6Hz,2H),3.45(t,J＝11.8Hz,2H),3.22-3.17(m,2H),3.13-3.07(m,2H),2.94-2.72(m,5H),2.18-2.11(m,1H),1.89-1.83(m,10H),1.65-1.61(m,1H),1.55-1.43(m,2H).
实施例120:
5-(4-(2-(4-(2,5-二氯-4-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((2,5-二氯嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例116的操作步骤制备得到终产物5-(4-(2-(4-(2,5-二氯-4-((5-氯-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(35mg)。
MS(ESI)M/Z:938.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.03(s,1H),8.45(s,1H),8.17-8.14(m,2H),8.07(s,1H),7.46(d,J＝10.8Hz,1H),7.38(d,J＝8.0Hz,2H),7.25(s,1H),7.07(s,1H),4.95-4.91(m,1H),3.65(d,J＝12.0Hz,2H),3.10(brs,4H),2.89-2.80(m,8H),2.64-2.61(m,2H),2.32(s,3H),2.28(s,3H),2.16-2.12(m,2H),2.01(s,3H),1.97(s,3H),1.86(d,J＝11.6Hz,2H),1.63-1.55(m,3H),1.50-1.42(m,2H).
实施例121:
3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)哌啶-2,6-二酮
反应流程:
反应步骤：
步骤1：室温下将6-苄基-2-(苄氧基)-3-溴吡啶(826mg,2.3mmol)和4-(2-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧代环戊硼烷-2-基)苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(900mg,2.2mmol，制备参考专利WO2014/6554A1)溶于二氧六环(20mL)和水(4mL)中,加入磷酸钾(946mg,4.4mmol)和二茂铁二氯化钯(162mg,0.21mmol)，反应体系在氮气氛围下加热至100℃搅拌3小时。LCMS监测反应结束，将反应液冷却至室温，用水(30mL)稀释后用乙酸乙酯(20mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤二次，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝50/1～5/1)得到4-(4-(2,6-二(苄氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(527mg，收率42％)。
MS(ESI)M/Z:567.3[M+H] +.
步骤2：室温下将4-(4-(2,6-二(苄氧基)吡啶-3-基)-2-氟苯基)-3,6-二氢吡啶-1(2H)-羧酸叔丁酯(400mg,0.71mmol)溶于甲醇/乙酸乙酯(5mL/5mL)中，加入10％湿钯炭(40mg)。反应体系在氢气球氛围下搅拌15小时。LCMS显示反应结束，反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(258mg，收率94％)。
MS(ESI)M/Z:391.2[M+H] +.
步骤3：将4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(110mg，0.28mmol)和5M HCl/dioxane(3mL)加入到DCM(5mL)中，室温下搅拌2小时。LCMS监测反应完成。反应液减压浓缩得到3-(3-氟-4-(哌啶-4-基)苯基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐(87mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:291.1[M+H] +.
步骤4：室温下将3-(3-氟-4-(哌啶-4-基)苯基)哌啶-2,6-二酮盐酸盐(87mg，粗品)、DIEA(194mg，1.5mmol)和2-溴乙酸叔丁酯(59mg，0.3mmol)依次加入到DMSO(2mL)中，升温至50℃搅拌3小时。LCMS监测原料消失，加入水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物用制备级TLC板纯化(洗脱剂：乙酸乙酯)得到2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯(78mg，二步收率69％)。
MS(ESI)M/Z:405.2[M+H] +.
步骤5：将2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸叔丁酯(47mg，0.12mmol)和三氟乙酸(1mL)加入到DCM(2mL)中，室温下搅拌1小时。LCMS监测反应完成。反应液减压浓缩得到2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三氟乙酸盐(47mg，粗品)。
MS(ESI)M/Z:349.2[M+H] +.
步骤6：室温下将2-(4-(4-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-2-氟苯基)哌啶-1-基)乙酸三氟乙酸盐(47mg，粗品)、(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦(72mg，0.11mmol)、HATU(86mg，0.23mmol)和DIEA(72mg，0.56mmol)依次加入到DMF(2mL)中，室温搅拌1小时。LCMS监测原料消失，加入水(10mL)稀释，乙酸乙酯(10mL×3)萃取。合并有机相，饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残留物经高效制备液相色谱纯化得到终产物3-(4-(1-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)哌啶-4-基)-3-氟苯基)哌啶-2,6-二酮(13.5mg，二步收率13％)。
MS(ESI)M/Z:969.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3):δ12.90(s,1H),10.43(brs,1H),8.26(s,1H),7.92(s,2H),7.82-7.61(m,2H),7.51(d, J＝12.4Hz,1H),7.11-6.79(m,2H),6.63(brs,2H),4.31-4.19(m,2H),3.96(s,3H),3.83(s,3H),3.78-3.69(m,4H),3.60-3.46(m,4H),3.23-3.13(m,2H),3.02-2.84(m,3H),2.69-2.77(m,2H),2.40-2.24(m,6H),2.11(s,3H),2.04-1.80(m,10H).
实施例122:
5-((R)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5-氟-6-((S)-3-(2-羟乙基)吡咯啉-1-基)异吲哚啉-1,3-二酮和(6-((5-溴-2-((2,5-二氯-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)喹喔啉-5-基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例105的操作步骤制备得到终产物5-((R)-3-(2-(4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)喹喔啉-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-2,5-二氯苯基)哌嗪-1-基)乙基)吡咯啉-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(10.2mg)。
MS(ESI)M/Z:992.1[M+H] +.
1H NMR(400MHz,CDCl 3/D 2O):δ8.93(dd,J＝9.4Hz,3.8HZ,1H),8.78(s,1H),8.73(s,1H),8.37(s,1H),8.31(s,1H),8.21(d,J＝9.2Hz,1H),7.39(d,J＝12.4Hz,1H),7.08(s,1H),7.02(d,J＝7.6Hz,1H),4.94-4.89(m,1H),3.78-3.60(m,3H),3.29-3.23(m,1H),3.14-3.01(m,4H),2.93-2.67(m,7H),2.63(brs,2H),2.40-2.25(m,1H),2.50-2.12(m,8H),1.75-1.62(m,3H).
实施例123:
5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例65的制备方法得到终产物5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(78mg)。
MS(ESI)M/Z:1061.5[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.93(s,1H),11.10(s,1H),8.12(s,1H),8.04-8.00(m,2H),7.90-7.85(m,1H),7.81(s,1H),7.64(d,J＝8.4Hz,1H),7.50(s,1H),6.79-6.76(m,2H),6.66-6.63(m,2H),5.09-5.04(m,1H),4.18-4.12(m,2H),3.84-3.80(m,8H),3.40-3.20(m,5H),2.90-2.84(m,8H),2.70-2.50(m,3H),2.20(s,3H),2.10(s,3H),2.10-2.00(m,1H),1.90-1.80(m,8H),1.73-1.60(m,2H),1.50-1.10(m,5H).
实施例124:
5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以(6-((2-((4-(4-(2-(1-(氮杂环丁烷-3-基)哌啶-4-基)乙基)哌嗪-1-基)-2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)氨基)-5-溴嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二甲基苯基)二甲基氧化膦为原料，参照实施例66的制备方法得到终产物5-(3-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲基膦酰基)-3,4-二甲基苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)哌啶-1-基)氮杂环丁烷-1-基)-2-(2,6-二氧哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(47mg)。
MS(ESI)M/Z:1079.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.93(s,1H),11.12(s,1H),8.12(d,J＝2.4Hz,1H),8.05-8.02(m,2H),7.79-7.88(m,1H),7.83(s,1H),7.64-7.61(m,2H),6.94-6.92(m,1H),6.77-6.60(m,2H),5.10-5.05(m,1H),4.24(brs,2H),3.97(brs,2H),3.84(s,3H),3.80(s,3H),3.55-3.45(m,1H),3.40-3.10(m,2H),3.00-2.80(m,6H),2.60-2.30(m,7H),2.20(s,3H),2.10(s,3H),2.10-2.04(m,1H),1.89-1.85(m,8H),1.75-1.60(m,2H),1.40-1.10(m,5H).
实施例125:
5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
将1-(1-(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1,3-二氧代异吲哚啉-5-基)氮杂环丁-3-基)哌啶-4-甲醛(30mg,0.07mmol)和(6-((5-溴-2-((2-甲氧基-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-4-(哌嗪-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)氨基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-5-基)二甲基氧化膦(40mg,0.06mmol)溶于四氢呋喃/N,N-二甲基甲酰胺(2.5mL/0.5mL)中，冰浴下加入三乙酰氧基硼氢化钠(32mg,0.18mmol)。反应体系在室温下搅拌2小时。LC-MS显示原料消失，反应液加水(10mL)淬灭，用二氯甲烷(10mL×3次)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(10mL×3次)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。所得残余物经高效制备液相色谱纯化得到终产物5-(3-(4-((4-(4-((5-溴-4-((5-(二甲膦酰基)-2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)甲基)哌啶-1-基)氮杂环丁-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉-1,3-二酮(三氟乙酸盐，28.7mg，收率40％)。
MS(ESI)M/Z:1077.4[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.93(brs,1H),11.10(s,1H),10.52(brs,1H),9.68(brs,1H),8.60(brs,1H),8.18(s,1H),8.09(s,1H),7.87(brs,2H),7.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.66(s,1H),6.91(s,1H),6.80-6.72(m,2H),5.11-5.06(m,1H),4.50-4.15(m,12H),3.87(s,3H),3.83(s,3H),3.66-3.50(m,4H),3.33-3.21(m,3H),3.07-3.01(m,2H),2.94-2.81(m,3H),2.68-2.54(m,2H),2.18-1.93(m,4H),1.82(s,3H),1.78(s,3H),1.54-1.37(m,2H).
实施例126:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮和2-(4-甲基哌啶-4-基)乙烷-1-醇(制备可参考文献Collection of Czechoslovak Chemical Communications,1953,vol.18,p.818,821)为原料，参照实施例55的操作步骤制备得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(三氟乙酸盐,30.8mg)。
MS(ESI)M/Z:1028.3[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.11(s,1H),10.94(s,1H),9.55(brs,1H),8.50(s,1H),8.27(brs,1H),8.22(s,1H),8.03(s,1H),7.90(s,1H),7.73(d,J＝11.6Hz,1H),7.65(s,1H),7.50-7.39(m,2H),6.76(s,1H),6.65(brs,1H),5.13-5.09(m,1H),3.86(s,3H),3.83(s,3H),3.61(d,J＝10.4Hz,2H),3.40-3.10(m,6H),2.98-2.84(m,3H),2.62-2.50(m,6H),2.09-1.98(m,1H),1.84-1.68(m,8H),1.64-1.51(m,4H),1.04(s,3H).
实施例127:
5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮
反应流程:
反应步骤：
以2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-5,6-二氟异吲哚啉-1,3-二酮和2-(4-氟哌啶-4-基)乙烷-1-醇为原料，参照实施例55的操作步骤制备得到终产物5-(4-(2-(4-(4-((5-溴-4-((2-(二甲膦酰基)-4-氟苯基)氨基)嘧啶-2-基)氨基)-5-甲氧基-2-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)哌嗪-1-基)乙基)-4-氟哌啶-1-基)-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-6-氟异吲哚啉-1,3-二酮(28.9mg)。
MS(ESI)M/Z:1032.2[M+H] +.
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6):δ11.11(s,1H),10.80(s,1H),8.34(brs,1H),8.30(s,1H),8.23(s,1H),8.01(s,1H),7.86(s,1H),7.75(d,J＝11.2Hz,1H),7.62(s,1H),7.52(d,J＝7.2Hz,1H),7.44-7.37(m,1H),6.78(s,1H),6.69(brs,1H),5.13-5.09(m,1H),3.85(s,3H),3.82(s,3H),3.53-3.49(m,3H),3.19-3.10(m,3H),3.01-2.79(m,6H),2.72-2.50(m,4H),2.09-1.84(m,7H),1.80-1.76(m,7H).
二、生物活性实验
测试例1：评价本发明化合物对稳定表达三突变表皮生长因子受体的Ba/F3细胞株的抑制增殖作用
本实验采用荧光法测定细胞内ATP含量来检测化合物对稳定表达三突变表皮生长因子受体(EGFR triple mutants)细胞株的抑制增殖作用，并得出化合物对三突变表皮生长因子受体(EGFR triple mutants)细胞株抑制增殖的半数抑制浓度IC50。
1.实验材料
RPMI-1640培养基，胎牛血清(FBS)，100X Pen/Strep，GlutaMAX-I Supplement购自GIBCO公司。Cell Titer-Glo发光法细胞活力检测试剂购自Promega公司。
2.实验方法
1)将稳定转染的Ba/F3(DEL19/T790M/C797S和L858R/T790M/C797S)细胞用细胞计数仪计数，按照每孔3000个细胞的密度将细胞接种于96孔培养板，每孔100μL。置于培养箱(37℃，5％CO 2)中孵育过夜。
2)Day 0：使用D300e(TECAN)向培养板细胞中加入500nL梯度稀释的待测化合物(起始浓度为30μM，10个浓度，1:3比例稀释)，DMSO终浓度为0.5％，将培养板置于细胞培养箱中孵育72小时(37℃，5％CO 2)。空白对照加入每孔500nL的DMSO。
3)Day 3：每孔加入100μL Cell Titer-Glo试剂，500rpm震荡2分钟，1000rpm离心1分钟，室温避光静置孵育10分钟稳定发光信号。
4)Envision酶标仪(PerkinElmer)检测发光信号。
5)使用GraphPad Prism 6软件进行数据分析，计算化合物的IC50。
经测定，本发明化合物对Ba/F3 Del19/T790M/C797S EGFR三突变细胞系和Ba/F3 L858R/T790M/C797S EGFR三突变细胞系的细胞增殖有着很好的抑制作用，其IC 50值一般低于1μM；部分本发明化合物的IC 50值低于0.5μM，更为优异的本发明化合物的IC 50值低于0.1μM，甚至低于0.015μM。本发明部分化合物对三突变表皮生长因子受体的Ba/F3细胞株的抑制结果见表1。
表1
各个数值代表以下范围：A:<100nM；100nM≤B＜500nM；500nM≤C＜1000nM；1000nM≤C＜2500nM；E≥2500nM；其中，<100nM的化合物又可以细分为AA:<15nM；15nM≤AB＜50nM；50nM≤AC＜100nM；
N.D.代表未测定。
测试例2：EGFR PROTAC ELISA实验
1.实验材料
HCC827细胞培养基(RPMI-1640培养基，10％胎牛血清(FBS)，100X Pen/Strep，GlutaMAX-I Supplement)均购自GIBCO公司。10×RIPA购自CST公司，蛋白酶抑制剂购自Roche公司。EGFR抗体及羊抗兔二抗来自Abcam公司，EGFR蛋白购自SignalChem公司。牛血清白蛋白(BSA)，TMB溶液及Tween-20来自Sigma公司。20×PBS及ELISA终止液购自生工生物。ELISA包被板购自Thermo公司。
2.实验方法
6)将HCC827细胞用细胞计数仪计数(85％以上活细胞才可用于后续实验)，按照每孔40000个细胞的密 度将细胞接种于96孔培养板，每孔100μL。置于培养箱(37℃，5％CO2)中孵育过夜。
7)Day 1：使用D300e(TECAN)向培养板细胞中加入梯度稀释的待测化合物(起始浓度为1μM，9个浓度，1:3比例稀释，3复孔)，DMSO终浓度为0.5％，空白对照加入每孔500nL的DMSO。将培养板置于细胞培养箱中孵育8小时(37℃，5％CO 2)，加入PBS洗细胞一次，每孔加入100μL含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液，放-80℃保存。
8)Day 2：每孔取10μL细胞裂解液，用PBS补齐到100μL，转移到ELISA包被板中，EGFR蛋白作为标准品，稀释后以最高浓度10ng/mL，7个浓度，1：2比例稀释，加入ELISA包被板中。将包被板放入4℃孵育过夜。
9)Day 3：每孔加入300μL洗涤缓冲液(含0.05％tween-20的PBS)洗涤4次。后加入200μL封闭缓冲液(1％BSA)，在室温下孵育1小时。加入300μL洗涤缓冲液洗涤4次后，加入100μL一抗(1:2000稀释在封闭缓冲液中)，并在室温下孵育2小时。继续300μL洗涤缓冲液洗涤4次后，加入100μL二抗(1:1000稀释在封闭缓冲液)，室温下孵育1小时。300μL洗涤缓冲液洗涤4次后，每孔加入100μL TMB溶液，避光在室温下孵育5-10分钟，每孔加入50μL终止液，震荡混匀后用酶标仪读取450nm处吸光值。
10)计算：以EGFR已知蛋白浓度做标准曲线，线性拟合，计算出对应样品孔的EGFR蛋白含量，以空白对照为参考，计算加药后的EGFR降解率。
EGFR％＝(处理组细胞EGFR蛋白水平/对照组细胞EGFR蛋白水平)×100％
用Prism软件，4参数法拟合曲线
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
计算出药物降解EGFR蛋白的DC 50。
从表2实验结果可以看出，本发明化合物能够显著的诱导EGFR蛋白的降解，优选地，本发明部分化合物的DC 50小于50nM，更优选地，部分化合物的DC 50小于10nM。
表2
实施例 DC 50(nM)
1 B’
4 A’
19 A’
22 A’
24 B’
32 A’
28 A’
35 A’
36 A’
49 A’
54 A’
55 B’
57 A’
66 A’
75 A’
92 B’
94 B’
98 A’
99 A’
100 A’
114 A’
115 A’
各个数值代表以下范围：A’:<10nM；B’:10-50nM；
本文已经详细地描述了本发明，其中也公开了其具体实施例方式，对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。

Claims (54)

  1. 一种双功能化合物，具有下式：
    或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，
    其中，
    R 1选自 或任选地被一个或多个R 9基团所取代的A；
    A选自3-7元杂环烷基、3-7元杂环烷基-O-、3-7元杂环烷基-NR a-、-(3-7元杂环烷基)-(3-7元杂环烷基)-、6-14元螺杂环基、6-14元桥杂环基、6-14元并杂环基；
    R 2选自C 6-10芳基、5-12元杂芳基、5-6元杂环烯基，其中所述C 6-10芳基、5-12元杂芳基，5-6元杂环烯基各自独立任选地被一个或多个R 10基团所取代；
    R 3选自H、卤素、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4卤代烷基、C 1-4卤代烷氧基；
    M选自N或者CR 11；
    R 4选自H、卤素、-CN、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、C 3-6环烷基；
    R 5选自-C(＝O)NR bR c、-S(＝O) 2R b、-P(＝O)R bR c、-P(＝O)R bNR cR d、-P(＝O)R bOR c、-P(＝O)OR bOR c、-P(＝S)R bR c、-P(＝S)R bNR cR d、-P(＝S)R bOR c、-P(＝S)OR bOR c、-S(＝O) 2NR bR c、-NR cS(＝O) 2R b、或-NR bC(O)R c；
    R 6、R 7、R 8各自独立地选自H、C 1-4烷基、卤素、C 3-6环烷基；
    或者，R 6、R 7和与其连接的原子一起环化成C 4-6环烷基、4-7元杂环烷基、5-7元杂芳基；
    或者R 7、R 8和与其连接的原子一起环化成C 4-6环烷基、4-7元杂环烷基、5-7元杂芳基；
    R 9任意地选自H、卤素、-OH、-NH 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4卤代烷基、-C 0-4烷基-NR aR b；
    R 10选自H、卤素、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、C 3-6环烷基磺酰基；
    R 11选自H、卤素、C 1-4烷基；
    R a选自H、C 1-4烷基；
    R b、R c、R d各自独立地选自H、C 1-4烷基、C 3-6环烷基；
    接头是与靶向配体中R 1基团和降解决定子共价结合的基团；
    降解决定子是能够与泛素连接酶结合的基团。
  2. 根据权利要求1所述的双功能化合物，其中，式(I)化合物中，
    R 1选自 或任选地被一个或多个R 9基团所取代的A；
    A选自3-7元杂环烷基、3-7元杂环烷基-O-、3-7元杂环烷基-NR a-、-(3-7元杂环烷基)-(3-7元杂环烷基)-、6-14元螺杂环基、6-14元桥杂环基、6-14元并杂环基；
    R 2选自C 6-10芳基、5-12元杂芳基、5-6元杂环烯基，其中所述C 6-10芳基、5-12元杂芳基，5-6元杂环烯基各自独立任选地被一个或多个R 10基团所取代；
    R 3选自H、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4卤代烷基、C 1-4卤代烷氧基；
    M选自N或者CR 11；
    R 4选自H、卤素、-CN、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、C 3-6环烷基；
    R 5选自-C(＝O)NR bR c、-S(＝O) 2R b、-P(＝O)R bR c、-P(＝O)R bNR cR d、-P(＝O)R bOR c、-P(＝O)OR bOR c、-P(＝S)R bR c、-P(＝S)R bNR cR d、-P(＝S)R bOR c、-P(＝S)OR bOR c、-S(＝O) 2NR bR c、-NR cS(＝O) 2R b、或-NR bC(O)R c；
    R 6、R 7、R 8各自独立地选自H、C 1-4烷基；
    或者，R 6与R 7和与其连接的原子一起环化成C 4-6环烷基、5-7元杂芳基；
    或者R 7与R 8和与其连接的原子一起环化成C 4-6环烷基、5-7元杂芳基；
    R 9任意地选自H、卤素、-OH、-NH 2、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、C 1-4卤代烷基、-C 0-4烷基-NR aR b；
    R 10选自H、卤素、C 1-4烷基、C 1-4卤代烷基、C 3-6环烷基磺酰基；
    R 11选自H、卤素、C 1-4烷基；
    R a选自H、C 1-4烷基；
    R b、R c、R d各自独立地选自H、C 1-4烷基、C 3-6环烷基；
    接头是与靶向配体中R 1基团和降解决定子共价结合的基团；
    降解决定子是能够与泛素连接酶结合的基团。
  3. 根据权利要求1所述的双功能化合物，其中，式(I)化合物中，
    R 1选自 或任选地被一个或多个R 9基团所取代的A；
    A选自3-7元杂环烷基、3-7元杂环烷基-O-、3-7元杂环烷基-NR a-、-(3-7元杂环烷基)-(3-7元杂环烷基)-、6-14元螺杂环基、6-14元并杂环基；
    R 2选自5-6元杂芳基，其中所述5-6元杂芳基任选地被一个或多个R 10基团所取代；
    R 3选自C 1-4烷氧基；
    M选自CR 11；
    R 4选自H、卤素、C 1-4烷基；
    R 5选自-P(＝O)R bR c、-NR cS(＝O) 2R b；
    R 6、R 7、R 8各自独立的选自H、C 1-4烷基；
    或者，R 6、R 7和与其连接的原子一起环化成5-7元杂芳基；
    R 9任意地选自H、卤素、-OH、-NH 2、C 1-4烷基；
    R 10选自H、C 1-4烷基；
    R 11选自H、卤素；
    R a选自H、C 1-4烷基；
    R b、R c各自独立的选自H、C 1-4烷基；
    接头是与靶向配体中R 1基团和降解决定子共价结合的基团；
    降解决定子是能够与泛素连接酶结合的基团。
  4. 根据权利要求1-3任一项所述的双功能化合物，M选自CH。
  5. 根据权利要求1-4任一项所述的双功能化合物，其中R 1选自
  6. 根据权利要求1-4任一项所述的双功能化合物，其中A选自
    R a如权利要求1-4任一项所定义。
  7. 根据权利要求6所述的双功能化合物，其中A选自
  8. 根据权利要求1-7任一项所述的双功能化合物，其中R 2选自
  9. 根据权利要求1-7任一项所述的双功能化合物，其中环R 2选自
  10. 根据权利要求1-9任一项所述的双功能化合物，其中R 3选自甲氧基。
  11. 根据权利要求1-9任一项所述的双功能化合物，其中R 3选自H、甲基。
  12. 根据权利要求1-11任一项所述的双功能化合物，其中R 4选自F、Cl、Br、甲基或三氟甲基。
  13. 根据权利要求12所述的双功能化合物，其中R 4选自Br。
  14. 根据权利要求1-13任一项所述的双功能化合物，其中R 5选自
  15. 根据权利要求14所述的双功能化合物，其中R 5选自
  16. 根据权利要求1-15任一项所述的双功能化合物，其中R 6、R 7、R 8选自H。
  17. 根据权利要求1-15任一项所述的双功能化合物，其中R 6、R 7、R 8各自独立地选自CH 3、环丙基、氟。
  18. 根据权利要求1-15任一项所述的双功能化合物，其中R 6、R 7和与其连接的原子一起环化成吡嗪环、吡啶环。
  19. 根据权利要求1-18任一项所述的双功能化合物，其中所述接头具有式LA：
    或其立体异构体，
    其中，p 1选自0-6的整数；p 2选自0-6的整数；p 3选自0-6的整数；
    U为键，或者选自C＝O、O、NH或NR 12；
    每个Q独立地选自键、CH 2、O、S、NH或NR 12；
    W为键，或者选自C＝O、O、NH、NR 12、C≡C；
    其中所述R 12选自C 1-4烷基；
    所述接头通过U基团与靶向配体TL中的R 1共价结合，W基团与降解决定子共价结合。
  20. 根据权利要求19所述的双功能化合物，其中，所述TL-LA选自：
    其中，p 1选自0-6的整数；p 2选自0-6的整数；p 3选自0-6的整数。
  21. 根据权利要求20所述的双功能化合物，其中，所述TL-LA选自：
  22. 根据权利要求20所述的双功能化合物，其中，所述TL-LA选自：
  23. 根据权利要求1-18任一项所述的双功能化合物，其中，所述接头具有式LB：
    或其立体异构体，
    其中，p 1选自0-6的整数；p 2选自0-6的整数；p 3选自0-6的整数，p 4选自0-6的整数；p 5选自0-6的整数；
    U为键，或者选自C＝O、O、NH或NR 13；
    每个Q独立地选自键、CH 2、O、S、NH或NR 13；；
    W为键，或者选自C＝O、O、NH、NR 13、C≡C；
    其中所述R 13选自C 1-4烷基；
    每个Z 1独立地选自不存在、苯基、C 3-6元环烷基、3-6元杂环烷基、5-6元杂芳基，其中所述苯基、C 3-6元环烷基、3-6元杂环烷基、5-6元杂芳基各自独立任选地被一个或多个R 14基团所取代，R 14选自卤素、C 1-4烷基、羟基；
    或每个Z 1各自独立地选自7-11元氮杂螺环，其中所述7-11元氮杂螺环任选地被一个或多个R 14基团所取代；R 14选自卤素、C 1-4烷基、羟基；
    所述接头通过U基团与靶向配体中的R 1共价结合，W基团与降解决定子共价结合。
  24. 根据权利要求23所述的双功能化合物，其中所述接头LB选自：
    其中，p 1、p 2、p 3、p 4、U、W、Z 1如权利要求23所定义。
  25. 根据权利要求24所述的双功能化合物，其中，TL-LB选自：
    其中，p 1、p 2、p 3、p 4、Z 1如权利要求24所定义。
  26. 根据权利要求25所述的双功能化合物，其中，所述TL-LB选自：
  27. 根据权利要求24所述的双功能化合物，其中，所述TL-LB选自：
  28. 根据权利要求24所述的双功能化合物，其中，所述TL-LB选自：
  29. 根据权利要求1-28任一项所述的双功能化合物，其中所述的降解决定子具有式D1：
    或其立体异构体，
    其中，每个R 15任意独立地选自C 1-4烷基；
    R 16选自H、氘；
    每个R 17任意独立地选自卤素、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基、羟基；
    Z 2选自CH 2或者C＝O；
    Y为键、O或者NH，其通过共价键与接头相连；
    m选自0-3的整数；
    n选自0-4的整数。
  30. 根据权利要求29所述的双功能化合物，所述的降解决定子D1中的Z 2选自C＝O。
  31. 根据权利要求29所述的双功能化合物，所述的降解决定子D1中Y选自键或者NH。
  32. 根据权利要求29所述的双功能化合物，所述的降解决定子D1选自：
  33. 根据权利要求1-28任一项所述的双功能化合物，其中，所述的降解决定子具有式D2：
    或其立体异构体，
    其中，每个R 15’任意独立地选自C 1-4烷基；
    R 16’选自H、氘；
    每个R 17’任意独立地选自卤素、C 1-4烷基、C 1-4烷氧基；
    Y’为键、O或者NH，其通过共价键与接头相连；
    m选自0-3的整数；
    n选自0-4的整数。
  34. 根据权利要求33所述的双功能化合物，其中，所述的降解决定子D2选自：
  35. 根据权利要求1-28任一项所述的双功能化合物，其中所述的降解决定子具有式D3：
    或其立体异构体，
    其中，R 18选自H、C 1-4烷基；
    每个R 19任意独立地选自C 1-4烷基；
    R 20选自H、C 1-4烷基；
    q选自0-4的整数。
  36. 根据权利要求35所述的双功能化合物，其中，所述的降解决定子D3中的R 18是甲基。
  37. 根据权利要求35所述的双功能化合物，其中，所述的降解决定子D3中的R 20是甲基。
  38. 根据权利要求35所述的双功能化合物，所述的降解决定子D3选自：
  39. 根据权利要求1-28任一项所述的双功能化合物，其中，所述的降解决定子具有式D4：
    或其立体异构体，
    Y为键、或者NH，其通过共价键与接头相连。
  40. 根据权利要求39所述的双功能化合物，其中，所述的降解决定子D4选自：
  41. 根据权利要求1-28任一项所述的双功能化合物，其中，所述的降解决定子具有式D5，
    其中，M选自NH、O或者S；
    V为键、NH或者O，其通过共价键与接头相连；
    R 21选自卤素；
    S选自0、1、2或3。
  42. 根据权利要求41所述的双功能化合物，其中，所述的降解决定子D5选自：
  43. 根据权利要求1-28任一项所述的双功能化合物，其中，所述的降解决定子选自：
  44. 根据权利要求1-43任一项所述的双功能化合物，其中，所述的靶向配体(TL)选自：
    所述靶向配体通过 与所述接头共价结合。
  45. 根据权利要求1-43任一项所述的双功能化合物，其中，所述的靶向配体(TL)选自：
  46. 根据权利要求1-45任一项所述的双功能化合物，其选自：
    其中，A、M、R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、Y、R 20、R 15、n、接头、降解决定子如权利要求1-45任一项所定义。
  47. 根据权利要求46所述的双功能化合物，其选自：
    R 2、R 3、R 4、R 5、R 6、R 7、R 8、Y、R 20、R 15、n、M、接头与降解决定子如权利要求46所定义。
  48. 根据权利要求47所述的双功能化合物，其选自：
    其中，R 6、R 7、R 15、Y、n、接头与降解决定子如权利要求47所定义。
  49. 根据权利要求48所述的双功能化合物，其选自：
    其中，接头、Y、R 20、R 15、n、如权利要求48所定义。
  50. 双功能化合物或其立体异构体、互变异构体或药学上可接受的盐、前药、水合物、溶剂合物、同位素标记衍生物，其选自：
  51. 一种药物组合物，其包含权利要求1-50任一项所述的双功能化合物，以及药学上可接受的载体。
  52. 权利要求1-50任一项所述的双功能化合物或权利要求51所述的药物组合物在制备治疗EGFR介导的癌症药物中的应用。
  53. 根据权利要求52所述的应用，其中，所述癌症选自淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、结肠直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、胶质瘤、胶质母细胞瘤，黑色素瘤、白血病、胃癌、子宫内膜癌、肺癌、肝细胞癌、胃肠道间质瘤(GIST)、急性髓细胞白血病(AML)、胆管癌、肾癌、甲状腺癌、间变性大细胞淋巴瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、黑色素瘤。
  54. 如权利要求1-50任一项所述的双功能化合物，其制备方法包括以下步骤：
    靶向配体与接头连接后，再与降解决定子连接得到：
    或者，接头与降解决定子连接后，再与靶向配体连接得到：
    其中，靶向配体，接头，降解决定子如权利要求1-50任一项所述。
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