CN116836818A - 一株青霉菌f8816及其应用 - Google Patents
一株青霉菌f8816及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116836818A CN116836818A CN202310940732.8A CN202310940732A CN116836818A CN 116836818 A CN116836818 A CN 116836818A CN 202310940732 A CN202310940732 A CN 202310940732A CN 116836818 A CN116836818 A CN 116836818A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- penicillium
- ginsenoside
- compound
- strain
- rare
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 title claims abstract description 35
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 claims abstract description 44
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 33
- 229940089161 ginsenoside Drugs 0.000 claims abstract description 32
- FVIZARNDLVOMSU-IRFFNABBSA-N ginsenoside C-K Chemical compound O([C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O FVIZARNDLVOMSU-IRFFNABBSA-N 0.000 claims abstract description 25
- TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rb2 Natural products CC(=CCCC(OC1OC(COC2OCC(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C TXEWRVNOAJOINC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 21
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 19
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 19
- UFNDONGOJKNAES-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rb1 Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(COC2OC(CO)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CC(O)C45C)C UFNDONGOJKNAES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- GZYPWOGIYAIIPV-JBDTYSNRSA-N ginsenoside Rb1 Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GZYPWOGIYAIIPV-JBDTYSNRSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 9
- 241000138811 Penicillium murcianum Species 0.000 claims abstract description 7
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims abstract description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 25
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- FVIZARNDLVOMSU-UHFFFAOYSA-N ginsenoside K Natural products C1CC(C2(CCC3C(C)(C)C(O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O FVIZARNDLVOMSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 claims description 8
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 claims description 8
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 claims description 8
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 claims description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- 239000003517 fume Substances 0.000 claims description 5
- 238000005185 salting out Methods 0.000 claims description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 4
- 241001052560 Thallis Species 0.000 claims description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 101000874334 Dalbergia nigrescens Isoflavonoid 7-O-beta-apiosyl-glucoside beta-glycosidase Proteins 0.000 abstract description 7
- 101000757733 Enterococcus faecalis (strain ATCC 700802 / V583) Autolysin Proteins 0.000 abstract description 7
- 101000757734 Mycolicibacterium phlei 38 kDa autolysin Proteins 0.000 abstract description 7
- ZTQSADJAYQOCDD-UHFFFAOYSA-N ginsenoside-Rd2 Natural products C1CC(C2(CCC3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC(C(C(O)C1O)O)OC1COC1OCC(O)C(O)C1O ZTQSADJAYQOCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 6
- FBFMBWCLBGQEBU-RXMALORBSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[[(3s,5r,6s,8r,9r,10r,12r,13r,14r,17s)-3,12-dihydroxy-4,4,8,10,14-pentamethyl-17-[(2s)-6-methyl-2-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyhept-5-en-2-yl]-2,3,5,6,7,9,11,12,13,15,16,17-dodecah Chemical compound O([C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(C[C@@H]([C@H]4C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)C)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O FBFMBWCLBGQEBU-RXMALORBSA-N 0.000 abstract description 5
- FBFMBWCLBGQEBU-GYMUUCMZSA-N 20-gluco-ginsenoside-Rf Natural products O([C@](CC/C=C(\C)/C)(C)[C@@H]1[C@H]2[C@H](O)C[C@H]3[C@](C)([C@]2(C)CC1)C[C@H](O[C@@H]1[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)[C@H]1C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@]31C)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 FBFMBWCLBGQEBU-GYMUUCMZSA-N 0.000 abstract description 5
- HYPFYJBWSTXDAS-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Rd Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O)C2CCC3(C)C4CCC5C(C)(C)C(CCC5(C)C4CC(O)C23C)OC6OC(CO)C(O)C(O)C6OC7OC(CO)C(O)C(O)C7O)C HYPFYJBWSTXDAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- NODILNFGTFIURN-GZPRDHCNSA-N ginsenoside Rb2 Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NODILNFGTFIURN-GZPRDHCNSA-N 0.000 abstract description 5
- PFSIGTQOILYIIU-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Rb3 Natural products CC(=CCCC(C)(O)C1CCC2(C)C3CCC4C(C)(C)C(CCC4(C)C3CC(OC5OC(COC6OCC(O)C(O)C6O)C(O)C(O)C5O)C12C)OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C PFSIGTQOILYIIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 5
- UOJAEODBOCLNBU-UHFFFAOYSA-N vinaginsenoside R4 Natural products C1CC(C2(CC(O)C3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O UOJAEODBOCLNBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- CNHRRMQBWQJRPN-UHFFFAOYSA-N chikusetsusaponin LM5 Natural products C1CC(C2(CC(O)C3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC(C(C(O)C1O)O)OC1COC1OC(CO)C(O)C1O CNHRRMQBWQJRPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- JDCPEKQWFDWQLI-LUQKBWBOSA-N ginsenoside Rc Chemical compound C([C@H]1O[C@H]([C@@H]([C@@H](O)[C@@H]1O)O)O[C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)O[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@H]1O JDCPEKQWFDWQLI-LUQKBWBOSA-N 0.000 abstract description 4
- SPFXZQZPHXUJSR-UHFFFAOYSA-N ginsenoside-Rc Natural products CC(=CCCC(C)(OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC2OC(CO)C(O)C2O)C3CCC4(C)C3C(O)CC5C6(C)CCC(OC7OC(CO)C(O)C(O)C7OC8OC(CO)C(O)C(O)C8O)C(C)(C)C6CCC45C)C SPFXZQZPHXUJSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 23
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 5
- 150000002009 diols Chemical group 0.000 description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 5
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 4
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 4
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 4
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 4
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IFBHRQDFSNCLOZ-IIRVCBMXSA-N 4-nitrophenyl-α-d-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-IIRVCBMXSA-N 0.000 description 3
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 3
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 3
- 239000012084 conversion product Substances 0.000 description 3
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 3
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 244000153158 Ammi visnaga Species 0.000 description 1
- 235000010585 Ammi visnaga Nutrition 0.000 description 1
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- SWIROVJVGRGSPO-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside F2 Natural products C1CC(C2(CCC3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O SWIROVJVGRGSPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVTXSAWPGCSYFO-UHFFFAOYSA-N Ginsenoside Ia Natural products C1CC(C2(CC(O)C3C(C)(C)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O AVTXSAWPGCSYFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- PVLHOJXLNBFHDX-XHJPDDKBSA-N Panaxadiol Chemical group C[C@]1([C@H]2CC[C@@]3([C@@H]2[C@H](O)C[C@H]2[C@]3(CC[C@H]3C(C)(C)[C@@H](O)CC[C@@]32C)C)C)CCCC(C)(C)O1 PVLHOJXLNBFHDX-XHJPDDKBSA-N 0.000 description 1
- SYFJYASKXNAXKC-UHFFFAOYSA-N Panaxadiol Natural products CC1(C)CCCC(O1)C2CCC3(C)C2C(O)CC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC34C SYFJYASKXNAXKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222481 Schizophyllum commune Species 0.000 description 1
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229960002413 ferric citrate Drugs 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- SWIROVJVGRGSPO-JBVRGBGGSA-N ginsenoside F2 Chemical compound O([C@@](C)(CCC=C(C)C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@]([C@@]3(CC[C@H]4C(C)(C)[C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)CC[C@]4(C)[C@H]3C[C@H]2O)C)(C)CC1)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SWIROVJVGRGSPO-JBVRGBGGSA-N 0.000 description 1
- CJFGBCWGOQRURQ-UHFFFAOYSA-N ginsenoside Mc Natural products C1CC(C2(CCC3C(C)(C)C(O)CCC3(C)C2CC2O)C)(C)C2C1C(C)(CCC=C(C)C)OC(C(C(O)C1O)O)OC1COC1OC(CO)C(O)C1O CJFGBCWGOQRURQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K iron(III) citrate Chemical compound [Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- -1 panaxadiol saponins Chemical class 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004080 punching Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2445—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/20—Preparation of steroids containing heterocyclic rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01021—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/80—Penicillium
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Botany (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一株青霉菌F8816，涉及微生物筛选及稀有人参皂苷转化技术领域，青霉菌(Penicillium murcianum)F8816于2023年5月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.40638，分类命名为Penicillium murcianum，该菌株可发酵产β‑糖苷酶，得到的β‑糖苷酶能够耐受0～10％的有机溶剂，并且可以将人参皂苷Rb1，Rb2，Rc，Rd转化为稀有人参皂苷Compound K，转化特异性强，在大量发酵生产人参皂苷Compound K的过程中存在明显的优势。
Description
技术领域
本发明涉及微生物筛选及稀有人参皂苷转化技术领域，更具体的说是涉及一株青霉菌F8816及其应用。
背景技术
人参皂苷是参属名贵药用植物的主要活性成分，在医药、保健品、营养品和化妆品开发领域有着广泛的应用前景，特别是稀有人参皂苷具有显著的抗肿瘤、保护神经系统、保肝护肝等药理活性。而稀有人参皂苷是指在人参中含量极低或者不存在的皂苷，但其药理活性优于上述高含量人参皂苷。例如，稀有人参皂苷Compound K具有很好的抗细胞突变、抑制肿瘤细胞转移、诱导肿瘤细胞凋亡、逆转肿瘤细胞耐药性、抗过敏和抗炎活性。
稀有人参皂苷Compound K属二醇组人参皂苷，尽管大量的实验已经表明稀有人参皂苷Compound K具有很高的药用价值，但由于它们在自然界中含量极其稀少，很难通过传统的方法从人参等植物中分离得到，这对稀有人参皂苷的生产造成很大限制。目前，制备稀有人参皂苷的方法主要是直接酸水解法和微生物/酶转化法。直接酸水解法通常选择性较差、产率低、同时容易造成环境污染。微生物/酶转化法则具备区域选择性、立体选择性和基团选择性高、靶向性好、得率高、副产物少、无污染和容易工业化生产等优点，能完成一些用化学方法难以进行的反应，获得化学法难以得到的稀有人参皂苷Compound K，被认为是生产稀有人参皂苷最具有潜力的方法。
现有关于人参皂苷Compound K生物法制备的专利主要集中在对人参皂苷Rb1的转化，例如，CN 115449536 B中提出利用黑曲霉发酵液转化人参皂苷Rb1为Compound K的方法；CN109536561A中介绍了一种人参内生菌催化人参皂苷Rb1制备稀有人参皂苷CompoundK，人参皂苷Rb1底物浓度为0.25mg/mL，继续振荡培养5～10天，得到稀有人参皂苷CompoundK；CN105296587A介绍了一种来自Bifidobacterium breve ATCC 15700双歧杆菌的β-葡萄糖苷酶，人参皂苷Rb1浓度10g/L，CK转化率62～68％，但中间涉及到β-葡萄糖苷酶的纯化步骤，较为繁琐。尽管也有专利报道微生物将二醇组人参皂苷转化为稀有人参皂苷CompoundK，例如，CN107746871B报道了一种裂褶菌生物转化人参皂苷制备人参稀有皂苷F2、Compound K、Compound O、Compound Y、Compound Mc1、CompoundMc、C-Mx1和C-Mx的方法；然而，关于青霉菌转化二醇组大量人参皂苷转化稀有人参皂苷CompoundK，目前仍然未有文献报道。
青霉菌广泛存在于自然界，环境适应性极强，因此，从青霉菌中获得的生物酶理论上也应该具有极强的环境适应性。人参皂苷在转化过程中因为溶解性的问题，在转化中引入有机溶剂能够提高转化效率，但是有机溶剂对酶是具有抑制作用的，因此，寻找能发酵生产高效、酶学特性稳定、特异性降解人参皂苷提取物生产人参皂苷Compound K的糖苷水解酶的菌株是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种青霉菌F8816及其应用，该菌株能够将人参皂苷提取物转化为稀有人参皂苷CompoundK，酶学特性稳定。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一株青霉菌F8816，所述青霉菌(Penicillium murcianum)F8816于2023年5月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.40638，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为Penicillium murcianum。
作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护所述的青霉菌F8816在发酵产β-糖苷酶中的应用。
优选地，β-糖苷酶能够耐受0～10％的有机溶剂。
作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护所述的青霉菌F8816在对人参皂苷Rb1、Rb2，Rc，Rd转化为稀有人参皂苷Compound K中的应用。
优选地，人参皂苷Rb1，Rb2，Rc，Rd转化为稀有人参皂苷Compound K的转化途径分别为：Rb1→Rd→F2→Compound K；Rb2→CY→Compound K；Rc→C-Mc→Compound K；Rd→Compound K。
作为与上述技术方案相同的发明构思，本发明还请求保护一种生产稀有人参皂苷Compound K的方法，具体过程包括：
1)将青霉菌F8816菌株进行发酵，得到发酵液；
2)对步骤1)所得发酵液离心，去菌体，盐析获得粗蛋白、纯化、获得酶；
3)用pH 5.0的磷酸缓冲盐分别溶解酶样品和人参皂苷提取物，配制成200mg/L的酶溶液和1g/L的人参皂苷提取物溶液，然后将酶溶液与人参皂苷提取物溶液等体积混匀，置于温度为55℃的水浴锅中反应6h，反应结束后，用2倍体积的正丁醇对反应液进行萃取，将上层的正丁醇相移出到新的培养皿，然后将培养皿放置到通风橱进行挥干至恒重，得稀有人参皂苷Compound K。
优选地，步骤1)中，将青霉菌F8816菌株进行培养发酵的过程为：
将青霉菌F8816菌株接种在PDA培养基中，28℃培养5d，然后将菌块接种到液体培养液中，液体培养液的成分为：20g/L葡萄糖、10g/L酵母粉、0.5g/L NaNO3、1g/L KH2PO4、2g/L Na2HPO4、0.2g/L FeSO4、0.1g/L ZnSO4、0.2g/LCuSO4、1g/L CaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O，初始pH6.5，在培养温度28℃，转速180rpm的条件下培养96h。
优选地，步骤2)中，所述离心为8000rpm/mim；所述盐析为70％的硫酸铵进行盐析，4℃过夜，离心获得粗蛋白；所述纯化为将粗蛋白溶于水，透析袋进行脱盐。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一株青霉菌F8816菌株，该菌株能够将人参皂苷提取物转化至已商品化且附加值高的稀有人参皂苷CompoundK，酶学特性稳定，目标产物明确，转化的特异性强，在大量发酵生产人参皂苷Compound K的过程中存在明显的优势。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为青霉菌F8816菌株菌落形态特征图；
图2附图为产β-糖苷酶青霉菌F8816初筛结果图；
图3附图为青霉菌F8816菌株系统发育树图；
图4附图为青霉菌F8816菌株的发酵转化前后发酵液中人参皂苷Rb1和转化产物的HPLC检测图；
图5附图人参皂苷Rb1转化为稀有人参皂苷CompoundK的转化途径；
图6附图为青霉菌F8816发酵人参皂苷提取物，将人参提取物中的二醇组人参皂苷转化为稀有人参皂苷CompoundK；
图7附图为主要二醇组人参皂苷转化稀有人参皂苷Compound K的中间产物检测；
图8附图为不同有机溶剂浓度下获得的β糖苷酶的活性比较图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1青霉菌P.murcianum F8816的筛选与鉴定
1)菌株的分离与培养
该菌株为分离自秦岭扣子七植物的内生真菌，分离方法如下：野生扣子七的根组织→切小块→75％乙醇表面消毒1min→2.5％的次氯酸钠表面消毒2min→75％乙醇表面消毒1min→无菌水清洗3-5次→无菌镊子将组织块插入到含有100U/mL硫酸阿卡米星的PDA培养基平板上→28℃恒温培养箱中倒置培养5～7d，直至长出菌丝体。
2)β糖苷酶产生菌的筛选与分子鉴定
分离获得的菌株接种到含有七叶苷的R2A培养基上，于28℃恒温培养箱中倒置培养5～7d，七叶苷R2A琼脂培养基的组成为：1g/L七叶苷，0.5g/L柠檬酸铁，15.2g/L R2A商品培养基，培养基121℃灭菌20min。
在此培养基上筛选获得一株能够产生β-糖苷酶的菌株，将其命名为F8816菌株，其菌落特征见图1，产生β-糖苷酶的菌株能够将七叶苷水解，在菌株生长周围会产生红色的光圈(见图2)。
将该菌株送华大生物技术有限公司测序，测序结果在NCBI核酸数据库中进行Blast相似性分析，经Blast序列比对及进化树分析(见图3)，确定其为青霉菌P.murcianum；命名为F8816，该菌株于2023年5月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.40638，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为Penicillium murcianum。
实施例2青霉菌P.murcianum F8816对Rb1的发酵性能鉴定
预先在PDA培养基上培养5d的青霉菌P.murcianum F8816菌株，用无菌吸管打孔，用无菌牙签接种于液体培养液中，液体培养液的成分为：20g/L葡萄糖，10g/L酵母粉，0.5g/L NaNO3，1g/L KH2PO4，2g/L Na2HPO4，0.2g/LFeSO4，0.1g/L ZnSO4，0.2g/L CuSO4，1g/LCaCl2，0.5g/L MgSO4·7H2O，初始pH6.5，在培养温度28℃，转速180rpm的条件下培养72h。
用2％的甲醇水溶液溶解人参皂苷Rb1，配制成浓度为200mg/L的人参皂苷Rb1母液，过滤除菌之后，等体积加入到上述青霉菌P.murcianum F8816发酵72h后的发酵液中继续培养6h；取上清液2mL加入2倍体积的正丁醇进行萃取，然后将上层的正丁醇相移出到新的培养皿，将培养皿放置到通风橱进行挥干至恒重，得干燥物。
用甲醇溶解干燥物，然后进行液相HPLC检测，色谱条件为：色谱柱采用YMC-PackODS-AQ，规格为250mm×4.6mm，5μm；流动相采用A相-B相，A相为水，B相为23wt％乙腈，梯度洗脱方式为：0～12min，采用77wt％～48wt％A；12～35min，采用48wt％～25wt％A；35～36min，采用25wt％A；36～42min，采用25wt％～77wt％A。梯度洗脱过程的体积流量1mL/min，柱温30℃，进样量为10μL。所有样品均在203nm处进行吸收检测。
对菌株发酵Rb1产物进行HPLC检测，将其与标准品系列人参皂苷的HPLC谱图和数据进行比对(见图4)，在转化产物中，Rb1的含量降低，出现了人参皂苷Rd，F2，和CompoundK，确定菌株能够将人参皂苷Rb1转化为稀有皂苷Compound K，其转化的途径如图5所示，为Rb1→Rd→F2→Compound K。
实施例3青霉菌P.murcianum F8816对人参皂苷提取物发酵及发酵产物检测
将青霉菌P.murcianum F8816菌株培养在PDA培养基中，28℃培养5d，然后将菌块接种到液体培养液中，液体培养液的成分为：20g/L葡萄糖，10g/L酵母粉，0.5g/L NaNO3，1g/L KH2PO4，2g/L Na2HPO4，0.2g/L FeSO4，0.1g/LZnSO4，0.2g/L CuSO4，1g/L CaCl2，0.5g/LMgSO4·7H2O，初始pH6.5，在培养温度28℃，转速180rpm的条件下培养96h。
将上述培养结束后的发酵液8000rpm/mim离心去除菌体，上清中加入70％的硫酸铵进行盐析，4℃过夜，离心获得粗蛋白，将粗蛋白溶于水，透析袋进行脱盐，脱盐的酶液进行冻干获得酶样品；用pH 5.0的磷酸缓冲盐分别溶解酶样品和人参皂苷提取物，配制成200mg/L的酶溶液和1g/L的人参皂苷提取物溶液，然后将酶溶液与人参皂苷提取物溶液等体积混匀，置于温度为55℃的水浴锅中反应6h。反应结束后，用2倍体积的正丁醇对反应液进行萃取，将上层的正丁醇相移出到新的培养皿，然后将培养皿放置到通风橱进行挥干至恒重，得干燥物。
用甲醇溶解干燥物，然后进行液相HPLC检测，色谱条件为：色谱柱采用YMC-PackODS-AQ，规格为250mm×4.6mm，5μm；流动相采用A相-B相，A相为水，B相为23wt％乙腈，梯度洗脱方式为：0～12min，采用77wt％～48wt％A；12～35min，采用48wt％～25wt％A；35～36min，采用25wt％A；36～42min，采用25wt％～77wt％A。梯度洗脱过程的体积流量1mL/min，柱温30℃，进样量为10μL。所有样品均在203nm处进行吸收检测。
对菌株发酵人参皂苷提取物产物进行HPLC检测，将其与标准品系列人参皂苷的HPLC谱图和数据进行比对(见图6)，在转化产物中，大量二醇组人参皂苷完全被降解，仅检测出稀有人参皂苷CompoundK。
实施例4青霉菌P.murcianum F8816对二醇组大量人参皂苷Rb2，Rc，Rd转化特性的研究
为了研究该菌株对二醇组人参皂苷的转化途径，将上述实施例3获得酶样品用pH5.0的磷酸缓冲盐溶解配成200mg/L，人参皂苷Rb2，Rc，Rd等被配制成200mg/L，然后将酶溶液与人参皂苷提取物溶液等体积混匀，置于温度为55℃的水浴锅中反应1h。反应结束后，用2倍体积的正丁醇对反应液进行萃取，将上层的正丁醇相移出到新的培养皿，然后将培养皿放置到通风橱进行挥干至恒重，得干燥物。
用上述实施例3中的HPLC检测方法进行检测，并与标准品系列人参皂苷的HPLC谱图和数据进行比对(见图7)，在转化产物中，人参皂苷Rb2，Rc，Rd被逐步转化，其最终转化途径为，Rb2→CY→Compound K；Rc→C-Mc→CompoundK；Rd→CompoundK。
实施例5有机溶剂对P.murcianum F8816发酵产β-糖苷酶酶活的影响
分别使用浓度为0％、1％、2％、5％、10％的有机溶剂甲醇、乙醇、DMSO在60℃、pH5.00的条件下溶解上述实施例3获得酶样品，使用PNPG法测定酶活。
取1mL离心管，加入60uL粗酶液和60uL 50mg/mL的PNPG，于水浴锅内60℃反应10min，加入1M的碳酸钠溶液120uL终止反应。反应终止后取200uL混合液放置到96孔板内，在多功能微孔板检测仪中测OD405，每组重复3次。可根据实际情况对粗酶液进行适度稀释。
以有机溶剂0％的作为空白进行比较，有机溶剂对PNPG酶活的影响如图8所示。在有机溶剂浓度为10％时，该菌株产生的β糖苷酶仍保留50％以上的酶活力，展示出良好的有机溶剂耐受特性。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (8)
1.一株青霉菌F8816，其特征在于，所述青霉菌(Penicillium murcianu m)F8816于2023年5月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.40638，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，分类命名为Penicilliummurcianum。
2.权利要求1所述的青霉菌F8816在发酵产β-糖苷酶中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，β-糖苷酶能够耐受0～10％的有机溶剂。
4.权利要求1所述的青霉菌F8816在对人参皂苷Rb1、Rb2，Rc，Rd转化为稀有人参皂苷Compound K中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，人参皂苷Rb1，Rb2，Rc，Rd转化为稀有人参皂苷Compound K的转化途径分别为：Rb1→Rd→F2→Co mpound K；Rb2→CY→Compound K；Rc→C-Mc→Compound K；Rd→Com pound K。
6.一种生产稀有人参皂苷Compound K的方法，其特征在于，具体过程包括：
1)将青霉菌F8816菌株进行发酵，得到发酵液；
2)对步骤1)所得发酵液离心，去菌体，盐析获得粗蛋白、纯化、获得酶；
3)用pH 5.0的磷酸缓冲盐分别溶解酶样品和人参皂苷提取物，配制成200mg/L的酶溶液和1g/L的人参皂苷提取物溶液，然后将酶溶液与人参皂苷提取物溶液等体积混匀，置于温度为55℃的水浴锅中反应6h，反应结束后，用2倍体积的正丁醇对反应液进行萃取，将上层的正丁醇相移出到新的培养皿，然后将培养皿放置到通风橱进行挥干至恒重，得稀有人参皂苷Compound K。
7.根据权利要求6所述的一种生产稀有人参皂苷CompoundK的方法，其特征在于，步骤1)中，将青霉菌F8816菌株进行培养发酵的过程为：
将青霉菌F8816菌株接种在PDA培养基中，28℃培养5d，然后将菌块接种到液体培养液中，液体培养液的成分为：20g/L葡萄糖、10g/L酵母粉、0.5g/L NaNO3、1g/L KH2PO4、2g/LNa2HPO4、0.2g/L FeSO4、0.1g/L ZnSO4、0.2g/LCuSO4、1g/L CaCl2、0.5g/L MgSO4·7H2O，初始pH6.5，在培养温度28℃，转速180rpm的条件下培养96h。
8.根据权利要求6所述的一种生产稀有人参皂苷CompoundK的方法，其特征在于，步骤2)中，所述离心为8000rpm/mim；所述盐析为70％的硫酸铵进行盐析，4℃过夜，离心获得粗蛋白；所述纯化为将粗蛋白溶于水，透析袋进行脱盐。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310940732.8A CN116836818B (zh) | 2023-07-28 | 2023-07-28 | 一株青霉菌f8816及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310940732.8A CN116836818B (zh) | 2023-07-28 | 2023-07-28 | 一株青霉菌f8816及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116836818A true CN116836818A (zh) | 2023-10-03 |
| CN116836818B CN116836818B (zh) | 2024-03-22 |
Family
ID=88170814
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310940732.8A Active CN116836818B (zh) | 2023-07-28 | 2023-07-28 | 一株青霉菌f8816及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116836818B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117089465A (zh) * | 2023-08-22 | 2023-11-21 | 陕西省微生物研究所 | 一种疣梗曲霉及应用 |
| CN117247842A (zh) * | 2023-09-08 | 2023-12-19 | 云南师范大学 | 一种转化人参皂苷Rb1的间座壳属真菌X-Z-5及其应用 |
| CN117736884A (zh) * | 2023-12-22 | 2024-03-22 | 陕西省微生物研究所 | 一株赭曲霉f8509及其应用 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101012473A (zh) * | 2006-05-26 | 2007-08-08 | 沈阳药科大学 | 平滑青霉或者疣孢漆斑菌及用其制备人参皂苷f1的方法 |
| CN102782125A (zh) * | 2009-10-23 | 2012-11-14 | 韩国生命工学研究院 | 源自地杆菌属的新型人参皂苷糖苷酶及其用途 |
| KR20130134930A (ko) * | 2012-05-31 | 2013-12-10 | 한국과학기술원 | 신규한 진세노사이드 글리코시다제를 이용한 진세노사이드 ｆ2의 제조방법 |
| KR101411919B1 (ko) * | 2013-04-02 | 2014-07-02 | 건국대학교 산학협력단 | 페니실리움 아큘레튬 유래 신규한 베타-글루코시다제 및 그 용도 |
| CN104140931A (zh) * | 2013-12-06 | 2014-11-12 | 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 | 一种阿达青霉发酵原人参二醇制备稀有人参皂苷ck的方法 |
| CN104611313A (zh) * | 2015-01-19 | 2015-05-13 | 南京林业大学 | 一种β-葡萄糖苷酶及其制备方法与应用 |
| CN105199966A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-12-30 | 天津大学 | 一种转化人参皂苷Rb1生产Rd的曲霉及应用 |
| CN116426391A (zh) * | 2023-03-28 | 2023-07-14 | 陕西省微生物研究所 | 一株出芽短梗霉Aureobasidium pullulans P1及其应用 |
| CN116790386A (zh) * | 2023-06-15 | 2023-09-22 | 广西科学院 | 一株青霉属真菌Penicillium sp. YMS6及其应用 |
| CN117503782A (zh) * | 2023-11-17 | 2024-02-06 | 陕西省微生物研究所 | 人参皂苷ck在制备防治免疫性肝炎的药物中的应用 |
-
2023
- 2023-07-28 CN CN202310940732.8A patent/CN116836818B/zh active Active
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101012473A (zh) * | 2006-05-26 | 2007-08-08 | 沈阳药科大学 | 平滑青霉或者疣孢漆斑菌及用其制备人参皂苷f1的方法 |
| CN102782125A (zh) * | 2009-10-23 | 2012-11-14 | 韩国生命工学研究院 | 源自地杆菌属的新型人参皂苷糖苷酶及其用途 |
| KR20130134930A (ko) * | 2012-05-31 | 2013-12-10 | 한국과학기술원 | 신규한 진세노사이드 글리코시다제를 이용한 진세노사이드 ｆ2의 제조방법 |
| KR101411919B1 (ko) * | 2013-04-02 | 2014-07-02 | 건국대학교 산학협력단 | 페니실리움 아큘레튬 유래 신규한 베타-글루코시다제 및 그 용도 |
| CN104140931A (zh) * | 2013-12-06 | 2014-11-12 | 天津市尖峰天然产物研究开发有限公司 | 一种阿达青霉发酵原人参二醇制备稀有人参皂苷ck的方法 |
| CN104611313A (zh) * | 2015-01-19 | 2015-05-13 | 南京林业大学 | 一种β-葡萄糖苷酶及其制备方法与应用 |
| CN105199966A (zh) * | 2015-08-28 | 2015-12-30 | 天津大学 | 一种转化人参皂苷Rb1生产Rd的曲霉及应用 |
| CN116426391A (zh) * | 2023-03-28 | 2023-07-14 | 陕西省微生物研究所 | 一株出芽短梗霉Aureobasidium pullulans P1及其应用 |
| CN116790386A (zh) * | 2023-06-15 | 2023-09-22 | 广西科学院 | 一株青霉属真菌Penicillium sp. YMS6及其应用 |
| CN117503782A (zh) * | 2023-11-17 | 2024-02-06 | 陕西省微生物研究所 | 人参皂苷ck在制备防治免疫性肝炎的药物中的应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| GAO J等: "Efficient biotransformation for preparation of pharmaceutically active ginsenoside Compound Kby Penicillium oxalicum sp．68", ANNAL MICROBIOL, 17 April 2012 (2012-04-17), pages 139 - 149 * |
| 孙晓雨: "高产人参皂苷糖基水解酶菌株的筛选、发酵及初步纯化工艺研究", 中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑, 15 November 2015 (2015-11-15), pages 006 - 257 * |
| 张薇;孙晓东;张萍;吕国忠;: "专一转化人参二醇类皂苷Rb_1为Rd的真菌菌株的筛选", 菌物学报, no. 02, 15 March 2011 (2011-03-15), pages 162 - 168 * |
| 朱大伟等: "真菌β-葡萄糖苷酶在转化人参皂苷单体中的应用进展", 天然产物研究与开发, vol. 29, no. 6, 15 June 2017 (2017-06-15), pages 1053 - 1061 * |
| 沈慧玲等: "人参中稀有人参皂苷转化工艺研究进展", 食品安全导刊, 5 April 2023 (2023-04-05), pages 172 - 174 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117089465A (zh) * | 2023-08-22 | 2023-11-21 | 陕西省微生物研究所 | 一种疣梗曲霉及应用 |
| CN117089465B (zh) * | 2023-08-22 | 2024-05-03 | 陕西省微生物研究所 | 一种疣梗曲霉及应用 |
| CN117247842A (zh) * | 2023-09-08 | 2023-12-19 | 云南师范大学 | 一种转化人参皂苷Rb1的间座壳属真菌X-Z-5及其应用 |
| CN117247842B (zh) * | 2023-09-08 | 2024-09-20 | 云南师范大学 | 一种转化人参皂苷Rb1的间座壳属真菌X-Z-5及其应用 |
| CN117736884A (zh) * | 2023-12-22 | 2024-03-22 | 陕西省微生物研究所 | 一株赭曲霉f8509及其应用 |
| CN117736884B (zh) * | 2023-12-22 | 2024-10-01 | 陕西省微生物研究所 | 一株赭曲霉f8509及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116836818B (zh) | 2024-03-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN116836818B (zh) | 一株青霉菌f8816及其应用 | |
| CN116426391B (zh) | 一株出芽短梗霉Aureobasidium pullulans P1及其应用 | |
| CN107746871B (zh) | 利用裂褶菌生物转化人参皂苷制备人参稀有皂苷的方法 | |
| CN101358173B (zh) | 黑曲霉zjut712及其在固态发酵炮制牛蒡子中的应用 | |
| CN117089465B (zh) | 一种疣梗曲霉及应用 | |
| KR20210058416A (ko) | 진세노사이드 컴파운드 케이 전환 효소를 생산하는 신규 누룩균 아스퍼질러스 나이거 c2-2 균주 및 이의 이용 | |
| CN117778479A (zh) | 一种微生物发酵法制备1,2-丙二醇的方法 | |
| CN117247842B (zh) | 一种转化人参皂苷Rb1的间座壳属真菌X-Z-5及其应用 | |
| CN104357332A (zh) | 黑曲霉jh-2及在生物转化合成积雪草酸中应用 | |
| CN103937691A (zh) | 一株产β-果糖苷酶的米曲霉菌株及其培养方法与应用 | |
| CN112852780A (zh) | 黄柄曲霉及其在制备单宁酶和降解单宁中的应用 | |
| CN107988109B (zh) | 一种黄杆菌突变株及其应用 | |
| CN107058409B (zh) | 一种用微生物全细胞催化天然花青素转化原儿茶酸的方法和应用 | |
| CN112646728B (zh) | 泡盛曲霉及其在制备单宁酶和降解单宁中的应用 | |
| CN102433289B (zh) | 一株产瓜氨酸的菌株及用该菌株生物合成瓜氨酸的方法 | |
| CN112662568B (zh) | 产黄青霉及其在制备单宁酶和降解单宁中的应用 | |
| CN112143681B (zh) | 一株可产阿魏酸酯酶的贝莱斯芽孢杆菌及其应用 | |
| WO2017197993A1 (zh) | 一种液化沙雷氏菌及其转化合成洋茉莉醛的方法 | |
| CN108949867B (zh) | 一种利用海洋细菌发酵制备海葵毒素的方法 | |
| KR102084980B1 (ko) | 신규한 아스퍼질러스 오리재 gbe174 균주 및 이를 이용한 인삼 열매 발효 추출물 제조 방법 | |
| CN105199966B (zh) | 一种转化人参皂苷Rb1生产Rd的曲霉及应用 | |
| CN117736884B (zh) | 一株赭曲霉f8509及其应用 | |
| CN110156807A (zh) | 黄曲霉oucmdz-2205次级代谢产物的用途 | |
| CN114369558B (zh) | 一株粘质沙雷氏菌及其在生产柚苷酶中的应用 | |
| CN117417869B (zh) | 一株约氏黄杆菌w24h及其生产2,3-丁二醇的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |