CN116829524A - 酸性官能团的烷基化方法 - Google Patents

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土屋智史
野村研一
江村岳
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Abstract

根据本发明，可以提供一种具有经过烷基化的酸性官能团的化合物的制造方法，该制造方法包括如下的操作，即，在包含2种以上的具有酸性官能团的化合物作为底物的混合物中，在碱的存在下，使选自以式A、式B、或式C表示的化合物中的烷基化剂与所述化合物反应，将酸性官能团烷基化。

Description

酸性官能团的烷基化方法
技术领域
本发明涉及一种酸性官能团的烷基化方法。进一步而言，本发明涉及一种包括将酸性官能团烷基化的工序的化合物的制造方法。
背景技术
酸性官能团的烷基化是在化合物的合成中广泛地使用的反应。例如在对作为酸性官能团的酚性羟基进行烷基化的情况下，已知有使用碘代甲烷作为烷基化剂、使用碳酸钾作为碱的方法(非专利文献1)，然而在将作为目标的酚性羟基烷基化的基础上，还作为副反应将叔胺烷基化(非专利文献2)。
为了将酚性羟基选择性地烷基化，可以举出使用反应性更低的烷基化剂、例如三烷基磷酸酯作为烷基化剂的方法、使用四烷基铵盐作为烷基化剂的方法。这些现有技术中，使用碳酸钾(专利文献1)、氢氧化钾(专利文献2)等无机碱作为碱。
在将作为酸性官能团的羧基烷基化(即酯化)的情况下，例如已知有在醇中利用酸催化剂加热到高温并进行脱水缩合的方法。作为在更低温度下进行的方法，已知有使用碘代甲烷作为烷基化剂、使用碳酸钾作为碱的方法(非专利文献3)。然而已知与酚性羟基的烷基化同样地也是将叔胺烷基化的反应条件(非专利文献2)。
作为反应性更低的烷基化剂，可以举出使用三烷基磷酸酯作为烷基化剂的方法。这些现有技术中先制备羧酸的钠盐后进行反应(非专利文献4、5)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：US4453017
专利文献2：日本特开2006-213692
非专利文献
非专利文献1：J.Am.Chem.Soc.2007，129，15830.
非专利文献2：Bioorg.Med.Chem.Lett.2004,14,3013.
非专利文献3：J.Med.Chem.2011,54,1752.
非专利文献4：J.Am.Chem.Soc.1990,112,297.
非专利文献5：J.Chem.Soc.PERKIN TRANS.I,1989,807.
发明内容
发明所要解决的课题
在化合物库的制造中，从固相中切出时产生的酸性官能团的结构转变不仅控制化合物库中的化合物组的物性，而且还牵涉到结构多样性的扩大。酸性官能团的烷基化是结构转变方法之一，特别是在以化合物的混合物为底物进行烷基化的情况下，在反应体系内存在多种多样的官能团，因而需要用于仅将目标酸性官能团烷基化的选择性极高的方法。
虽然已知有几种将酸性官能团烷基化的方法，然而为了应用于高品质的化合物库的制造，需要考虑以下所示的(1)～(3)。
(1)在烷基化后的后处理中，能够将试剂及从试剂中产生的杂质从作为目标的化合物库中利用简便的方法(液液萃取、减压蒸馏除去或使用固相试剂的方法)除去。
(2)在用于烷基化的试剂的溶解度低的情况下，成为在以化合物的混合物为底物时的反应性方面产生波动的原因。
(3)成为底物的化合物有时包含目标酸性官能团以外的能够烷基化的官能团，例如担忧若以具有醇性羟基及含氮结构(酰胺、叔胺、吡啶、哒嗪等)的化合物为底物则还会作为副反应进行对醇性羟基、含氮结构(酰胺、叔胺、吡啶、哒嗪等)的烷基化。
例如，在库合成中以包含多种化合物的混合物为底物的烷基化中，从获得高品质的化合物库的观点出发，要求有具有更高的反应性及选择性的烷基化方法。即，在基于专利文献1及2的记载进行酚性羟基的烷基化的情况下，收率低或不稳定，无法获得要求的结果。作为低反应性及再现性低的原因，判明搅拌效率是1个因素，因此推测原因在于反应混合物中用于烷基化的试剂的溶解度低。本发明以提供新型的烷基化方法作为目的之一，特别是以提供具有高收率和高位置选择性的烷基化方法作为目的之一。进一步而言，本发明以提供如下的酸性官能团的烷基化方法作为目的之一，其具有宽的底物适应范围，特别是在化合物库合成中能够利用包含多种化合物的混合物作为底物。
用于解决课题的手段
本发明人等发现了具有优选的反应性的烷基化方法，从而完成了本发明。本发明人等发现该方法能够应用包含多种化合物的混合物作为底物，确认例如在化合物库的制造中能够应用于从固相中切出时产生的酸性官能团的选择性的烷基化。
在本发明的一个方面中，提供以下的发明。
[1]一种方法，是具有经过烷基化的酸性官能团的化合物的制造方法，
该制造方法包括如下的操作，即，在包含具有酸性官能团的2种以上的化合物作为底物的混合物中，在碱的存在下，使选自以式A、式B、或式C表示的化合物中的烷基化剂与上述化合物反应，将酸性官能团烷基化，上述碱为选自乙腈中的共轭酸的pKa为23～34的有机碱以及水中的共轭酸的pKa为9～20的无机碱中的碱。
[化1]
[式中，R1独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基、或C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R3独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代。]
[2]根据[1]中记载的方法，其包括在烷基化后除去杂质的操作。
[3]根据[1]或[2]中记载的方法，其中，碱在二甲基甲酰胺(DMF)中的溶解度在25℃为120mg/mL以上。
[4]根据[1]～[3]中任一项记载的方法，其中，碱选自有机碱。
[5]根据[1]～[4]中任一项记载的方法，其中，碱选自磷腈类。
[6]一种方法，是制造具有烷氧基取代芳香环的化合物的方法，
该方法包括如下的操作，即，使包含取代于芳香环的羟基的化合物在碱的存在下与选自以式A、式B、或式C表示的化合物中的烷基化剂反应，将取代于芳香环的羟基烷基化，上述碱选自磷腈类。
[化2]
[式中，R1独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基、或C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R3独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代。]
[7]一种方法，是制造酯化合物的方法，该方法包括如下的操作，即，使包含羧基的化合物在碱的存在下，与选自以式A、式B、或式C表示的化合物中的烷基化剂反应，将羧基烷基化，上述碱选自磷腈类。
[化3]
[式中，R1独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基、或C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R3独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代。]
[8]根据[1]～[7]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自技术方案1中记载的以式A及B表示的烷基化剂。
[9]根据[1]～[8]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自磷酸三甲酯、磷酸三乙酯及磷酸三烯丙酯。
[10]根据[1]～[9]中任一项记载的方法，其中，碱为选自1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2Et)、1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)、叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦(P1tBu)、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷(BEMP)、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)中的至少一种。
[11]根据[1]～[10]中任一项记载的方法，其中，酸性官能团为取代于芳香环的羟基和/或羧基。
[12]根据[1]～[11]中任一项记载的方法，其中，酸性官能团为取代于芳香环的羟基。
[13]根据[1]～[12]中任一项记载的方法，其中，底物含有包含作为酸性官能团的酚性羟基和能够被烷基化的氮原子的1种以上的化合物，在该底物中烷基化最大程度地推进的具有氮原子的化合物中，基于酚性羟基的烷基化(烷基化A)和氮原子的烷基化(烷基化C)得到的产物的生成比(烷基化A/烷基化C)为1.5以上。
[14]根据[1]～[10]中任一项记载的方法，其中，酸性官能团为羧基。
[15]根据[1]～[10]以及[14]中任一项记载的方法，其中，底物含有包含作为酸性官能团的羧基和能够被烷基化的氮原子的1种以上的化合物，在该底物中烷基化最大程度地推进的具有氮原子的化合物中，基于羧基的烷基化(烷基化D)和氮原子的烷基化(烷基化E)得到的产物的生成比(烷基化D/烷基化E)为1.5以上。
[16]根据[1]～[15]中任一项记载的方法，其中，烷基化C或烷基化D为选自二芳基胺、烷基芳基胺、苯胺、叔胺、酰胺、磺酰胺、酰基磺酰胺以及吡啶中的含氮结构中含有的氮原子的烷基化。
[17]一种方法，是构成化合物库的化合物的制造方法，该方法包括制造利用[1]～[16]中任一项记载的方法烷基化了的化合物的操作。
[18]根据[1]～[17]中任一项记载的方法，其中，以包含10种以上的化合物的混合物的形式进行制造。
[19]一种烷基化剂，其含有以式A、式B、或式C表示的化合物，用于在经过烷基化的化合物的制造方法中使用，该方法为[1]～[18]中任一项记载的方法。
[化4]
[式中，R1独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基、或C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R3独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代。]
[A1]一种方法，是具有经过烷基化的酸性官能团的化合物的制造方法，
该制造方法包括如下的操作，即，在包含具有酸性官能团的2种以上的化合物作为底物的混合物中，在碱的存在下，使选自以式A、式B、或式C表示的化合物中的烷基化剂与上述化合物反应，将酸性官能团烷基化，上述碱为选自乙腈中的共轭酸的pKa为23～34的有机碱以及水中的共轭酸的pKa为9～20的无机碱中的碱。
[化5]
[式中，R1独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基中，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基、或C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R3独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代。]
[A2]根据[A1]中记载的方法，其包括在烷基化后除去杂质的操作。
[A3]根据[A2]中记载的方法，其中，上述杂质的除去为选自液液分离、减压蒸馏除去、使用固相试剂的方法中的至少一种。
[A4]根据[A2]或[A3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为液液分离。
[A5]根据[A2]或[A3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为减压蒸馏除去。
[A6]根据[A2]或[A3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为使用固相试剂的方法。
[A7]根据[A2]～[A6]中任一项记载的方法，其中，上述杂质为选自烷基化后残留的烷基化剂、碱、烷基化剂来源的杂质、碱来源的杂质以及溶剂中的至少一种。
[A8]根据[A1]～[A7]中任一项记载的方法，其中，碱在二甲基甲酰胺(DMF)中的溶解度在25℃为120mg/mL以上。
[A9]根据[A1]～[A8]中任一项记载的方法，其中，碱选自有机碱。
[A10]根据[A1]～[A9]中任一项记载的方法，其中，上述碱为选自乙腈中的共轭酸的pKa为24～34、25～34、或28～34的有机碱中的碱。
[A11]根据[A1]～[A10]中任一项记载的方法，其中，上述碱为选自乙腈中的共轭酸的pKa为2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍(BTMG)的pKa值以上且/或1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)的pKa值以下的有机碱中的碱。
[A12]根据[A1]～[A9]中任一项记载的方法，其中，碱选自磷腈类。
[A13]根据[A1]～[A12]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生的烷氧基具有-CH2-O-的结构。
[A14]根据[A1]～[A13]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生的烷氧基为甲氧基、乙氧基或烯丙氧基。
[A15]根据[A1]～[A14]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生具有-CH2-O-(C＝O)-的结构的酯。
[A16]根据[A1]～[A15]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生甲酯、乙酯或烯丙酯。
[A17]根据[A1]～[A16]中任一项记载的方法，其中，在溶剂中进行上述反应。
[A18]根据[A17]中记载的方法，其中，上述溶剂包含选自四氢呋喃(THF)、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢吡喃、1,4-二氧六环、1,2-二甲氧基乙烷(DME)、叔丁基甲基醚(TBME)、环戊基甲基醚(CPME)、异山梨醇二甲基醚等醚系溶剂、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、GVL(γ-戊内酯)等酯系溶剂、二氯甲烷(DCM)、1,2-二氯乙烷(DCE)、氯仿等卤素系溶剂以及N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-乙基-2-吡咯烷酮(NEP)、N-丁基-2-吡咯烷酮(NBP)等酰胺系溶剂、N,N,N’，N’-四甲基脲(TMU)、N,N’-二甲基丙撑脲(DMPU)、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)等脲系溶剂、二甲亚砜(DMSO)等亚砜系溶剂、茴香醚、甲苯、α,α,α-三氟甲苯、1,2-二氯苯、苯等芳香族系溶剂中的至少一种溶剂。
[A19]根据[A1]～[A18]中任一项记载的方法，其中，上述反应在25～130℃、40～120℃、60～100℃、或75～85℃进行。
[A20]根据[A1]～[A19]中任一项记载的方法，其中，相对于酸性官能团，以1.0～100.0当量、2.0～50.0当量、3.0～30.0当量、5.0～25.0当量、10.0～20.0当量、或12.5～17.5当量使用烷基化剂。
[A21]根据[A1]～[A20]中任一项记载的方法，其中，相对于酸性官能团，以1.0～100.0当量、1.5～50.0当量、1.5～30.0当量、3.0～25.0当量、8.0～20.0当量、或12.5～17.5当量使用碱。
[A22]根据[A1]～[A21]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自[A1]中记载的以式A及B表示的化合物。
[A23]根据[A1]～[A22]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自[A1]中记载的以式A表示的化合物。
[A24]根据[A1]～[A23]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自磷酸三甲酯、磷酸三乙酯及磷酸三烯丙酯。
[A25]根据[A1]～[A24]中任一项记载的方法，其中，碱为选自1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2Et)、1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)、叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦(P1tBu)、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷(BEMP)、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)、1,1,3,3-四甲基胍(TMG)、2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍(BTMG)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、7-甲基-1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(MTBD)、1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(TBD)及碳酸铯(Cs2CO3)中的至少一种。
[A26]根据[A1]～[A25]中任一项记载的方法，其中，酸性官能团为取代于芳香环的羟基。
[A27]根据[A1]～[A26]中任一项记载的方法，其中，酸性官能团为取代于苯环或吡啶环的羟基。
[A28]根据[A1]～[A27]中任一项记载的方法，其中，底物含有包含作为酸性官能团的酚性羟基和能够被烷基化的氮原子的1种以上的化合物，在该底物中烷基化最大程度地推进的具有氮原子的化合物中，基于酚性羟基的烷基化(烷基化A)和氮原子的烷基化(烷基化C)得到的产物的生成比(烷基化A/烷基化C)为1.5以上、3以上、5以上、7以上、9以上、10以上、12以上、15以上、20以上、30以上、或50以上。
[A29]根据[A1]～[A28]中任一项记载的方法，其中，烷基化C为选自二芳基胺、烷基芳基胺、苯胺、叔胺、酰胺、磺酰胺、酰基磺酰胺以及吡啶中的含氮结构中含有的氮原子的烷基化。
[A30]根据[A1]～[A25]中任一项记载的方法，其中，酸性官能团为羧基。
[A31]根据[A1]～[A25]及[A30]中任一项记载的方法，其中，底物含有包含作为酸性官能团的羧基和能够被烷基化的氮原子的1种以上的化合物，在该底物中烷基化最大程度地推进的具有氮原子的化合物中，基于羧基的烷基化(烷基化D)和氮原子的烷基化(烷基化E)得到的产物的生成比(烷基化D/烷基化E)为1.5以上、3以上、5以上、7以上、9以上、10以上、12以上、15以上、20以上、30以上、或50以上。
[A32]根据[A31]中记载的方法，其中，烷基化E为选自二芳基胺、烷基芳基胺、苯胺、叔胺、酰胺、磺酰胺、酰基磺酰胺以及吡啶中的含氮结构中含有的氮原子的烷基化。
[A33]根据[A1]～[A32]中任一项记载的方法，其中，底物中作为酸性官能团包含1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基，将1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基的任意酸性官能团烷基化。
[A34]根据[A1]～[A33]中任一项记载的方法，其中，在作为酸性官能团包含1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基的底物中，在将1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基的酸性官能团均烷基化后，进一步包括将1个以上的烷基化了的羧基转变为羧基的操作。
[A35]根据[A1]～[A34]中任一项记载的方法，其中，在作为酸性官能团包含1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基的底物中，在将1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基的酸性官能团均烷基化后，将1个以上的烷基化了的羧基转变为羧基，由此仅将1个以上的酚性羟基烷基化。
[A36]根据[A1]～[A35]中任一项记载的方法，其用于制造构成化合物库的化合物。
[A37]根据[A1]～[A36]中任一项记载的方法，其中，上述混合物中作为底物包含10种以上的化合物。
[A38]根据[A1]～[A37]中任一项记载的方法，其中，进一步包括通过从固相载体中切出而制备具有酸性官能团的化合物的操作。
[B1]一种方法，是制造具有烷氧基取代芳香环的化合物的方法，
该方法包括如下的操作，即，使包含取代于芳香环的羟基的化合物在碱的存在下与选自以式A、式B、或式C表示的化合物中的烷基化剂反应，将取代于芳香环的羟基烷基化，上述碱选自磷腈类。
[化6]
[式中，R1独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基、或C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R3独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代。]
[B2]根据[B1]中记载的方法，其包括在烷基化后除去杂质的操作。
[B3]根据[B1]中记载的方法，其中，上述杂质的除去为选自液液分离、减压蒸馏除去、使用固相试剂的方法中的至少一种。
[B4]根据[B2]或[B3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为液液分离。
[B5]根据[B2]或[B3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为减压蒸馏除去。
[B6]根据[B2]或[B3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为使用固相试剂的方法。
[B7]根据[B1]～[B6]中任一项记载的方法，其中，上述杂质为选自烷基化后残留的烷基化剂、碱、烷基化剂来源的杂质、碱来源的杂质、溶剂中的至少一种。
[B8]根据[B1]～[B7]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生的烷氧基具有-CH2-O-的结构。
[B9]根据[B1]～[B8]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生的烷氧基为甲氧基、乙氧基或烯丙氧基。
[B10]根据[B1]～[B9]中任一项记载的方法，其中，在溶剂中进行上述反应。
[B11]根据[B1]～[B10]中任一项记载的方法，其中，上述溶剂为选自四氢呋喃(THF)、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢吡喃、1,4-二氧六环、1,2-二甲氧基乙烷(DME)、叔丁基甲基醚(TBME)、环戊基甲基醚(CPME)、异山梨醇二甲基醚等醚系溶剂、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、GVL(γ-戊内酯)等酯系溶剂、二氯甲烷(DCM)、1,2-二氯乙烷(DCE)、氯仿等卤素系溶剂以及N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-乙基-2-吡咯烷酮(NEP)、N-丁基-2-吡咯烷酮(NBP)等酰胺系溶剂、N,N,N′,N′-四甲基脲(TMU)、N,N’-二甲基丙撑脲(DMPU)、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)等脲系溶剂、二甲亚砜(DMSO)等亚砜系溶剂、茴香醚、甲苯、α,α,α-三氟甲苯、1,2-二氯苯、苯等芳香族系溶剂中的至少一种。
[B12]根据[B1]～[B11]中任一项记载的方法，其中，上述反应在25～130℃、40～120℃、60～100℃、或75～85℃进行。
[B13]根据[B1]～[B12]中任一项记载的方法，其中，相对于羟基，以1.0～100.0当量、2.0～50.0当量、3.0～30.0当量、5.0～25.0当量、10.0～20.0当量、或12.5～17.5当量使用烷基化剂。
[B14]根据[B1]～[B13]中任一项记载的方法，其中，相对于羟基，以1.0～100.0当量、1.5～50.0当量、1.5～30.0当量、3.0～25.0当量、8.0～20.0当量、或12.5～17.5当量使用碱。
[B15]根据[B1]～[B14]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自[B1]中记载的以式A及B表示的烷基化剂。
[B16]根据[B1]～[B15]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自磷酸三甲酯、磷酸三乙酯及磷酸三烯丙酯。
[B17]根据[B1]～[B16]中任一项记载的方法，其中，碱为选自1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2Et)、1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)、叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦(P1tBu)、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷(BEMP)及叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)中的至少一种。
[B18]根据[B1]～[B17]中任一项记载的方法，其中，取代于芳香环的羟基为取代于选自苯环、吡啶环、嘧啶环、吡嗪环、三嗪环、吡唑环、咪唑环、呋喃环、噻吩环、噁唑环、噻唑环、萘环、喹啉环、吲哚环、吲唑环、异喹啉环中的芳香环的羟基。
[B19]根据[B1]～[B18]中任一项记载的方法，其中，取代于芳香环的羟基为取代于苯环或吡啶环的羟基。
[B20]根据[B1]～[B19]中任一项记载的方法，其中，以2种以上的化合物作为底物进行反应，该底物含有包含作为酸性官能团的酚性羟基和能够被烷基化的氮原子的1种以上的化合物，在该底物中烷基化最大程度地推进的具有氮原子的化合物中，基于酚性羟基的烷基化(烷基化A)和氮原子的烷基化(烷基化C)得到的产物的生成比(烷基化A/烷基化C)为1.5以上、3以上、5以上、7以上、9以上、10以上、12以上、15以上、20以上、30以上、或50以上。
[B21]根据[B1]～[B20]中任一项记载的方法，其用于制造构成化合物库的化合物。
[B22]根据[B1]～[B21]中任一项记载的方法，其中，上述混合物中作为底物包含10种以上的化合物。
[B23]根据[B1]～[B22]中任一项记载的方法，其中，进一步包括通过从固相载体中切出而制备具有羟基的化合物的操作。
[C1]一种方法，是构成化合物库的化合物的制造方法，该制造方法包括制造利用[A1]～[A38]、[B1]～[B23]及[E1]～[E21]中任一项记载的方法烷基化了的化合物的操作。
[C2]根据[C1]中记载的方法，其中，以包含10种以上、50种以上、100种以上、500种以上或1000种以上的化合物的混合物的形式进行制造。
[D1]一种烷基化剂，其用于在含有以式A、式B、或式C表示的化合物的、经过烷基化的化合物的制造方法中使用，该方法为[A1]～[A38]、[B1]～[B23]以及[E1]～[E21]中任一项记载的方法。
[化7]
[式中，R1独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基、或C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R3独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代。]
[E1]一种方法，是制造酯化合物的方法，包括如下的操作，即，使包含羧基的化合物在碱的存在下与选自以式A、式B、或式C表示的化合物中的烷基化剂反应，将羧基烷基化，上述碱选自磷腈类。
[化8]
[式中，R1独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基、或C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R3独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代。]
[E2]根据[E1]中记载的方法，其包括在烷基化后除去杂质的操作。
[E3]根据[E1]中记载的方法，其中，上述杂质的除去为选自液液分离、减压蒸馏除去、使用固相试剂的方法中的至少一种。
[E4]根据[E2]或[E3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为液液分离。
[E5]根据[E2]或[E3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为减压蒸馏除去。
[E6]根据[E2]或[E3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为使用固相试剂的方法。
[E7]根据[E1]～[E6]中任一项记载的方法，其中，上述杂质为选自烷基化后残留的烷基化剂、碱、烷基化剂来源的杂质、碱来源的杂质、溶剂中的至少一种。
[E8]根据[E1]～[E7]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生的酯具有-CH2-O-(C＝O)-的结构。
[E9]根据[E1]～[E8]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生的酯为甲酯、乙酯或烯丙酯。
[E10]根据[E1]～[E9]中任一项记载的方法，其中，在溶剂中进行上述反应。
[E11]根据[E1]～[E10]中任一项记载的方法，其中，上述溶剂为选自四氢呋喃(THF)、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢吡喃、1,4-二氧六环、1,2-二甲氧基乙烷(DME)、叔丁基甲基醚(TBME)、环戊基甲基醚(CPME)、异山梨醇二甲基醚等醚系溶剂、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、GVL(γ-戊内酯)等酯系溶剂、二氯甲烷(DCM)、1,2-二氯乙烷(DCE)、氯仿等卤素系溶剂以及N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-乙基-2-吡咯烷酮(NEP)、N-丁基-2-吡咯烷酮(NBP)等酰胺系溶剂、N,N,N′,N′-四甲基脲(TMU)、N,N’-二甲基丙撑脲(DMPU)、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)等脲系溶剂、二甲亚砜(DMSO)等亚砜系溶剂、茴香醚、甲苯、α,α,α-三氟甲苯、1,2-二氯苯、苯等芳香族系溶剂中的至少一种。
[E12]根据[E1]～[E11]中任一项记载的方法，其中，上述反应在25～130℃、40～120℃、60～100℃、或75～85℃进行。
[E13]根据[E1]～[E12]中任一项记载的方法，其中，相对于羟基，以1.0～100.0当量、2.0～50.0当量、3.0～30.0当量、5.0～25.0当量、10.0～20.0当量、或12.5～17.5当量使用烷基化剂。
[E14]根据[E1]～[E13]中任一项记载的方法，其中，相对于羟基，以1.0～100.0当量、1.5～50.0当量、1.5～30.0当量、3.0～25.0当量、8.0～20.0当量、或12.5～17.5当量使用碱。
[E15]根据[E1]～[E14]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自[B1]中记载的以式A及B表示的烷基化剂。
[E16]根据[E1]～[E15]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自磷酸三甲酯、磷酸三乙酯及磷酸三烯丙酯。
[E17]根据[E1]～[E16]中任一项记载的方法，其中，碱为选自1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2Et)、1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)、叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦(P1tBu)、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷(BEMP)及叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)中的至少一种。
[E18]根据[E1]～[E17]中任一项记载的方法，其中，以2种以上的化合物作为底物进行反应，该底物含有包含作为酸性官能团的羧基和能够被烷基化的氮原子的1种以上的化合物，在该底物中烷基化最大程度地推进的具有氮原子的化合物中，基于羧基的烷基化(烷基化D)和氮原子的烷基化(烷基化E)得到的产物的生成比(烷基化D/烷基化E)为1.5以上、3以上、5以上、7以上、9以上、10以上、12以上、15以上、20以上、30以上、或50以上。
[E19]根据[E1]～[E18]中任一项记载的方法，其用于制造构成化合物库的化合物。
[E20]根据[E1]～[E19]中任一项记载的方法，其中，上述混合物中作为底物包含10种以上的化合物。
[E21]根据[E1]～[E20]中任一项记载的方法，其进一步包括通过从固相载体中切出而制备具有羧基的化合物的操作。
[F1]一种方法，是具有包含经过烷基化的酸性官能团的侧链的固相合成用树脂的制造方法，
该制造方法包括如下的操作，即，含有包含具有酸性官能团的2种以上的侧链的树脂作为底物，在碱的存在下，使选自以式A、式B、或式C表示的化合物中的烷基化剂与上述树脂反应，将酸性官能团烷基化，上述碱为选自乙腈中的共轭酸的pKa为23～34的有机碱以及水中的共轭酸的pKa为9～20的无机碱中的碱。
[化9]
[式中，R1独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基、或C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代；
R3独立地选自可以由选自X中的1个以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处上述芳基可以由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1个以上的取代基取代。]
[F2]根据[F1]中记载的方法，其包括在烷基化后除去杂质的操作。
[F3]根据[F2]中记载的方法，其中，上述杂质的除去为选自液液分离、减压蒸馏除去、使用固相试剂的方法中的至少一种。
[F4]根据[F2]或[F3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为液液分离。
[F5]根据[F2]或[F3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为减压蒸馏除去。
[F6]根据[F2]或[F3]中记载的方法，其中，除去上述杂质的工序为使用固相试剂的方法。
[F7]根据[F2]～[F6]中任一项记载的方法，其中，上述杂质为选自烷基化后残留的烷基化剂、碱、烷基化剂来源的杂质、碱来源的杂质以及溶剂中的至少一种。
[F8]根据[F1]～[F7]中任一项记载的方法，其中，碱在二甲基甲酰胺(DMF)中的溶解度在25℃为120mg/mL以上。
[F9]根据[F1]～[F8]中任一项记载的方法，其中，碱选自有机碱。
[F10]根据[F1]～[F9]中任一项记载的方法，其中，上述碱为选自乙腈中的共轭酸的pKa为24～34、25～34、或28～34的有机碱中的碱。
[F11]根据[F1]～[F10]中任一项记载的方法，其中，上述碱为选自乙腈中的共轭酸的pKa为2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍(BTMG)的pKa值以上且/或1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)的pKa值以下的有机碱中的碱。
[F12]根据[F1]～[F9]中任一项记载的方法，其中，碱选自磷腈类。
[F13]根据[F1]～[F12]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生的烷氧基具有-CH2-O-的结构。
[F14]根据[F1]～[F13]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生的烷氧基为甲氧基、乙氧基或烯丙氧基。
[F15]根据[F1]～[F14]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生具有-CH2-O-(C＝O)-的结构的酯。
[F16]根据[F1]～[F15]中任一项记载的方法，其中，通过烷基化而产生甲酯、乙酯或烯丙酯。
[F17]根据[F1]～[F16]中任一项记载的方法，其中，在溶剂中进行上述反应。
[F18]根据[F17]中记载的方法，其中，上述溶剂包含选自四氢呋喃(THF)、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢吡喃、1,4-二氧六环、1,2-二甲氧基乙烷(DME)、叔丁基甲基醚(TBME)、环戊基甲基醚(CPME)、异山梨醇二甲基醚等醚系溶剂、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、GVL(γ-戊内酯)等酯系溶剂、二氯甲烷(DCM)、1,2-二氯乙烷(DCE)、氯仿等卤素系溶剂以及N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-乙基-2-吡咯烷酮(NEP)、N-丁基-2-吡咯烷酮(NBP)等酰胺系溶剂、N,N,N’,N’-四甲基脲(TMU)、N,N’-二甲基丙撑脲(DMPU)、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)等脲系溶剂、二甲亚砜(DMSO)等亚砜系溶剂、茴香醚、甲苯、α,α,α-三氟甲苯、1,2-二氯苯、苯等芳香族系溶剂中的至少一种溶剂。
[F19]根据[F1]～[F18]中任一项记载的方法，其中，上述反应在25～130℃、40～120℃、60～100℃、或75～85℃进行。
[F20]根据[F1]～[F19]中任一项记载的方法，其中，相对于酸性官能团，以1.0～100.0当量、2.0～50.0当量、3.0～30.0当量、5.0～25.0当量、10.0～20.0当量、或12.5～17.5当量使用烷基化剂。
[F21]根据[F1]～[F20]中任一项记载的方法，其中，相对于酸性官能团，以1.0～100.0当量、1.5～50.0当量、1.5～30.0当量、3.0～25.0当量、8.0～20.0当量、或12.5～17.5当量使用碱。
[F22]根据[F1]～[F21]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自[F1]中记载的以式A及B表示的化合物。
[F23]根据[F1]～[F22]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自[F1]中记载的以式A表示的化合物。
[F24]根据[F1]～[F23]中任一项记载的方法，其中，烷基化剂选自磷酸三甲酯、磷酸三乙酯及磷酸三烯丙酯。
[F25]根据[F1]～[F24]中任一项记载的方法，其中，碱为选自1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2Et)、1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)、叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦(P1tBu)、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷(BEMP)、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)、1,1,3,3-四甲基胍(TMG)、2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍(BTMG)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、7-甲基-1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(MTBD)、1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(TBD)及碳酸铯(Cs2CO3)中的至少一种。
[F26]根据[F1]～[F25]中任一项记载的方法，其中，酸性官能团为取代于芳香环的羟基。
[F27]根据[F1]～[F26]中任一项记载的方法，其中，酸性官能团为取代于苯环或吡啶环的羟基。
[F28]根据[F1]～[F27]中任一项记载的方法，其中，固相合成用树脂含有包含作为酸性官能团的酚性羟基和能够被烷基化的氮原子的1条以上的侧链，该树脂中烷基化最大程度推进的具有氮原子的化合物中，基于酚性羟基的烷基化(烷基化A)和氮原子的烷基化(烷基化C)得到的产物的生成比(烷基化A/烷基化C)为1.5以上、3以上、5以上、7以上、9以上、10以上、12以上、15以上、20以上、30以上、或50以上。
[F29]根据[F1]～[F28]中任一项记载的方法，其中，烷基化C为选自二芳基胺、烷基芳基胺、苯胺、叔胺、酰胺、磺酰胺、酰基磺酰胺以及吡啶中的含氮结构中含有的氮原子的烷基化。
[F30]根据[F1]～[F25]中任一项记载的方法，其中，酸性官能团为羧基。
[F31]根据[F1]～[F25]及[F30]中任一项记载的方法，其中，固相合成用树脂含有包含作为酸性官能团的羧基和能够被烷基化的氮原子的1条以上的侧链，该树脂中烷基化最大程度推进的具有氮原子的侧链中，基于羧基的烷基化(烷基化D)和氮原子的烷基化(烷基化E)得到的产物的生成比(烷基化D/烷基化E)为1.5以上、3以上、5以上、7以上、9以上、10以上、12以上、15以上、20以上、30以上、或50以上。
[F32]根据[F31]中记载的方法，其中，烷基化E为选自二芳基胺、烷基芳基胺、苯胺、叔胺、酰胺、磺酰胺、酰基磺酰胺以及吡啶中的含氮结构中含有的氮原子的烷基化。
[F33]根据[F1]～[F32]中任一项记载的方法，其中，固相合成用树脂在侧链中包含1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基作为酸性官能团，将1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基的任意酸性官能团烷基化。
[F34]根据[F1]～[F33]中任一项记载的方法，其进一步包括如下的操作，即，在包含1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基作为酸性官能团的固相合成用树脂中，在将1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基的酸性官能团均烷基化后，将1个以上的烷基化了的羧基转变为羧基。
[F35]根据[F1]～[F34]中任一项记载的方法，其中，在包含1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基作为酸性官能团的固相合成用树脂中，在将1个以上的酚性羟基及1个以上的羧基的酸性官能团均烷基化后，将1个以上的烷基化了的羧基转变为羧基，由此仅将1个以上的酚性羟基烷基化。
[F36]根据[F1]～[F35]中任一项记载的方法，其用于制造构成化合物库的化合物。
[F37]根据[F1]～[F36]中任一项记载的方法，其中，侧链具有使具有酸性官能团的化合物经由接头键合于树脂的化学结构，接头能够分解。
[F38]根据[F37]中任一项记载的方法，其进一步包括如下的操作，即，对接头利用酸性条件下的反应、碱性条件下的反应、加氢反应、使用氧化剂的反应、或与路易斯酸的反应进行分解，由此制造包含经过烷基化的酸性官能团的化合物。
[F37]根据[F37]或[F38]中记载的方法，其中，上述树脂包含经由接头键合于树脂的10种以上的化合物。
[F38]根据[F1]～[F37]中任一项记载的方法，其中，在1个单元的固相合成用树脂经由接头键合1种化合物，以不同的化合物所键合的树脂的混合物作为底物。
[F39]根据[F1]～[F37]中任一项记载的方法，其中，以在1个单元的固相合成用树脂经由接头键合2种以上的不同的化合物的树脂作为底物。
发明效果
根据本说明书，能够提供可以应用包含多种化合物的混合物作为底物的高反应性及高选择性的烷基化方法。
附图说明
图1是对利用本发明的方法制造的构成库的化合物表示“核心区的多样性”和“接头的多样性”的图，是表示实施例6中制造的化合物的图。
图2是表示实施例6-6中制造的1000种化合物的结构的图。
图3是表示实施例6-8中制造的500种化合物的结构的图。
具体实施方式
在本发明的一个方面中，涉及一种具有经过烷基化的酸性官能团的化合物的制造方法。此处烷基化没有特别限定，例如可以举出形成C1-6烷氧基的烷基化，具体而言，可以举出形成甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、1-戊氧基以及1-己氧基等的烷基化，更具体而言可以举出形成甲氧基、乙氧基等的烷基化。
作为酸性官能团，只要是具有酸性的质子的基团就没有特别限定，例如可以举出取代于芳香环的羟基、羧酸等。此处芳香环可以为碳环，也可以为包含杂原子的杂环，也可以为与芳香环的稠合环、与非芳香环的稠合环。作为芳香环，例如可以举出5～10元的单环或稠合环的芳香环，作为其例子，例如可以举出吡咯环、噻吩环、呋喃环、吡啶环、噻唑环、异噻唑环、吡唑环、噁唑环、异噁唑环、咪唑环、三唑环、嘧啶环、尿苷环、吡嗪环、哒嗪环、喹啉环、异喹啉环、4H-喹嗪环、酞嗪环、萘啶环、喹喔啉环、喹唑啉环、噌啉环、喋啶环、吲哚环、吲哚啉环、苯并噻吩环、1-甲基-1H-吲哚环、苯并呋喃环、苯并异噻唑环、苯并异噁唑环、吲唑环、苯并咪唑环、苯并三唑环、氮杂吲哚环、咪唑并吡啶环等。在本发明的一个方式中，酸性官能团为取代于芳香环的羟基，例如为取代于苯环、吡啶环、吲哚环、喹啉环、吡唑环的羟基，具体而言，为取代于苯环、或吡啶环的羟基。
本说明书中所谓“C1-6烷基”，是从碳数1～6的直链状及支链状的饱和脂肪族烃中去掉1个任意的氢原子而衍生的1价的基团。具体而言，可以举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、1-甲基丙基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、1,1-二甲基丙基、1-乙基丙基、己基、4-甲基戊基以及2-乙基丁基等。
本说明书中所谓“C1-4烷基”，是从碳数1～4的直链状及支链状的饱和脂肪族烃中去掉任意的氢原子而衍生的1价的基团。具体而言，可以举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基以及1-甲基丙基等。
本说明书中所谓“C1-6烷氧基”，是指C1-6烷基-O-基，此处C1-6烷基如前定义所示。具体例包括甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、1-戊氧基以及1-己氧基等。
本说明书中所谓“C1-4烷氧基”，是指C1-4烷基-O-基，此处C1-4烷基如前定义所示。具体例包括甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基以及叔丁氧基等。
本说明书中所谓“C3-6环烷基”，是指碳数为3～6的环状的饱和脂肪族烃基。具体而言，可以举出环丙基、环丁基、环戊基以及环己基等。
本说明书中所谓“C2-7烯基”，是指碳数2～7的直链或支链状的烯基，例如包括次乙基(乙烯基)、1-丙烯基、2-丙烯基(烯丙基)、丙烯-2-基以及3-丁烯基(高烯丙基)等。
本说明书中所谓“C2-7炔基”，是指碳数2～7的直链或支链状的炔基，例如包括乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基以及3-丁炔基等。
本发明中所谓“C6-10芳基”，是指1价的芳香族烃环基。作为C6-10芳基，例如可以举出苯基、1-萘基以及2-萘基等。
本说明书中所谓“卤素原子”，是指氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。本发明中在卤素原子成为芳基、杂芳基等的取代基的情况下，作为优选的卤素原子，可以举出氟原子、氯原子及溴原子。本发明中在卤素原子成为烷基、或在其一部分包含烷基的基团(烷氧基、烯基、烷硫基等)的取代基的情况下，作为优选的卤素原子，可以举出氟原子。作为具有卤素原子作为取代基的基团的具体例，可以举出三氟甲基、五氟乙基、三氟甲氧基、五氟乙氧基、三氟甲硫基以及五氟乙硫基等。
在本说明书的式A、式B、或式C的定义中，在给定的基团由1个以上的取代基取代的情况下，该基团的数目只要是1～能够取代的部位数的范围即可，例如可以为1～5的、1～4的、1～3的、1或2的、或1个取代基。
本说明书中构成芳香族杂环的杂原子例如可以为选自氮原子、氧原子、硫原子中的1个以上、具体而言为1～3个原子。
本发明中，可以使用选自式A、式B、或式C中的化合物作为烷基化剂。例如，可以使用式A中R2为-OR1的化合物。式B中的R3例如可以举出芳基，具体而言可以举出苯基。
作为R1，例如可以举出C1-6烷基，具体而言可以举出C1-5烷基，更具体而言，可以举出C1-4烷基。
作为以式A表示的烷基化剂，可以举出磷酸三甲酯、磷酸三乙酯、苯基膦酸二甲酯、苯基膦酸二乙酯、二苯基次膦酸甲酯、二苯基次膦酸乙酯等，它们当中，优选举出磷酸三甲酯、磷酸三乙酯、磷酸三丙酯、磷酸三烯丙酯等。
作为以式B表示的烷基化剂，可以举出三甲基苯基氯化铵、三甲基苯基溴化铵、三甲基苯基碘化铵、三乙基苯基氯化铵、三乙基苯基溴化铵、三乙基苯基碘化铵、四甲基氯化铵、四甲基溴化铵、四甲基碘化铵、四乙基氯化铵、四乙基溴化铵、四乙基碘化铵、苄基三甲基氯化铵、苄基三甲基溴化铵、苄基三甲基碘化铵、苄基三乙基氯化铵、苄基三乙基溴化铵、苄基三乙基碘化铵等，它们当中，优选举出三甲基苯基氯化铵、三乙基苯基碘化铵等。
作为以式C表示的烷基化剂，可以举出碳酸二甲酯、碳酸二乙酯、碳酸二正丙酯、碳酸二异丙酯、碳酸二正丁酯、碳酸二叔丁酯等，它们当中，优选举出碳酸二甲酯、碳酸二乙酯等。
在本发明的一个方式中，制造方法包括在烷基化后除去杂质的操作。杂质除去可以利用本发明的技术领域中通常实行的方法来进行。此处杂质可以举出来自于反应中消耗的反应试剂的杂质、未反应的反应试剂、因反应而产生的分解物、共存的碱由烷基化剂烷基化了的产物、反应溶剂等。特别是具体而言，作为杂质，可以举出磷酸三乙酯、磷酸二乙酯、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)、BTPP的烷基化体、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)等。作为杂质的除去方法，例如可以举出液液分离、减压蒸馏除去、使用固相试剂的方法、基于正相、或反相硅胶柱色谱的纯化、基于GPC(分子筛)的纯化等。
用于杂质除去的液液分离可以利用本发明的技术领域中通常实行的方法来进行。液液分离只要是出于将所期望的产物组与杂质(无用物)组分离的目的而分离为多个层的溶剂的组合，就没有特别限制。例如可以将选自乙酸乙酯、乙酸异丙酯等酯系溶剂、二乙基醚、二异丙基醚、叔丁基甲基醚(TBME)、环戊基甲基醚(CPME)、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢吡喃等醚系溶剂、二氯甲烷、氯仿、1,2-二氯乙烷等卤素系溶剂、苯、甲苯等芳香族烃系溶剂、己烷、环己烷、庚烷等烃系溶剂等中的溶剂与选自水、盐酸水溶液等酸性水溶液、碳酸氢钠水溶液等碱性水溶液中的溶剂组合地进行。可以使用单一的溶剂，也可以使用组合有多个溶剂的混合溶剂。另外，在符合将所期望的产物组与杂质(无用物)组分离的目的的情况下，可以利用己烷与乙腈的组合等在进行层分离的有机溶剂之间组合地进行。
用于杂质除去的减压蒸馏除去可以利用本发明的技术领域中通常实行的方法来进行。减压蒸馏除去的条件可以根据所要除去的杂质来恰当地设定，例如压力可以为100～400mbar、50～100mbar、5～50mbar或0.1～5mbar等，温度可以为20～100℃、25～50℃、或35～45℃等。
使用了固相试剂的杂质的除去可以利用本发明的技术领域中通常实行的方法来进行。此处作为固相试剂例如可以举出大孔性三乙基铵甲基聚苯乙烯碳酸盐、大孔性聚苯乙烯磺酸、胺担载硅胶、羧酸担载硅胶等。
在本发明的一个方面中，烷基化反应中使用的碱可以使用选自乙腈中的共轭酸的pKa为23～34的有机碱以及水中的共轭酸的pKa为9～20的无机碱中的碱。此处乙腈中的碱的共轭酸的pKa可以利用公知文献J.Org.Chem.1998，63,7868-7874中记载的方法在测定温度25℃进行测定。另外，无机碱的共轭酸的水中的pKa可以使用利用实验化学讲座5《热的测定及平衡》、460页(日本化学会编、丸善株式会社发行)中记载的方法在25℃测定的值。另外，作为参考值，可以恰当地参照使用Advanced Chemistry Development(ACD/Labs)Software V11.02(1994-2019ACD/Labs)、ADMET predictor(version 9.5)得到的计算值、公知文献Eur.J.Org.Chem.2019，6735-6748、Org.Biomol.Chem.2017，15,4081-4085、Chem.Eur.J.2020，Accepted Article(DOI:Chem.Eur.J10.1002/chem.202003580，2020/12/25现在)中记载的值、或Sigma-Aldrich公司的产品目录记载的值。对于Sigma-Aldrich公司的产品目录记载的MeCN中的共轭酸的pKa值，例如就磷腈碱而言，1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2Et)为32.9，1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)为33.5，叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦(P1tBu)为26.9，2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷(BEMP)为27.6，此外叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)为28.4。另外，对于公知文献Eur.J.Org.Chem.2019，6735-6748中记载的MeCN中的共轭酸的pKa值，就脒碱而言，1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)为24.3，就胍碱类而言，1,1,3,3-四甲基胍(TMG)为23.4，7-甲基-1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(MTBD)为25.5，1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(TBD)为26.0。公知文献Chem.Eur.J.2020，Accepted Article(DOI:Chem.Eur.J10.1002/chem.202003580，2020/12/25现在)中记载的2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍(BTMG)的MeCN中的共轭酸的pKa值为23.6。公知文献Org.Biomol.Chem.2017，15，4081-4085中记载的Cs2CO3的水中的共轭酸的pKa值为10.3。
在本发明的一个方式中，烷基化反应中使用的碱优选在二甲基甲酰胺(DMF)中的溶解度在25℃为120mg/mL以上。溶解度可以利用本发明的技术领域中通常实行的方法来进行测定。此处碱例如可以使用有机碱。另外，公知文献J.Org.Chem.1984，49，1122-1125中记载的Cs2CO3在二甲基甲酰胺(DMF)中的溶解度在25℃为119mg/mL。
在本发明的一个方式中，在烷基化反应中可以使用磷腈类、脒类或胍类作为碱。磷腈类、脒类或胍类只要是能够作为碱使用的物质，就没有特别限定。在本发明的一个方式中，对于烷基化反应中使用的碱，就磷腈类而言选自1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2Et)、1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)、叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦(P1tBu)、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷(BEMP)及叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)中，就脒类而言为1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)，就胍类而言选自1,1,3,3-四甲基胍(TMG)、2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍(BTMG)、7-甲基-1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(MTBD)、1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(TBD)中。
使用式A的烷基化剂的烷基化反应可以基于本说明书的记载选择恰当条件来实施。在本发明的一个方式中，使用式A的烷基化剂的烷基化反应例如可以在选自四氢呋喃(THF)、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢吡喃、1,4-二氧六环、1,2-二甲氧基乙烷(DME)、叔丁基甲基醚(TBME)、环戊基甲基醚(CPME)、异山梨醇二甲基醚等醚系溶剂、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、GVL(γ-戊内酯)等酯系溶剂、二氯甲烷(DCM)、1,2-二氯乙烷(DCE)、氯仿等卤素系溶剂以及N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-乙基-2-吡咯烷酮(NEP)、N-丁基-2-吡咯烷酮(NBP)等酰胺系溶剂、N,N,N′,N′-四甲基脲(TMU)、N,N’-二甲基丙撑脲(DMPU)、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)等脲系溶剂、二甲亚砜(DMSO)等亚砜系溶剂、茴香醚、甲苯、α,α,α-三氟甲苯、1,2-二氯苯、苯等芳香族系溶剂中的溶剂中(可以使用单一的溶剂，也可以使用组合有多个溶剂的混合溶剂)，在40～120℃、60～100℃、或75～85℃的温度，使用选自1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2Et)、1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)、叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦(P1tBu)、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷(BEMP)、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)、1,1,3,3-四甲基胍(TMG)、2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍(BTMG)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、7-甲基-1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(MTBD)、1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(TBD)及碳酸铯(Cs2CO3)中的碱来进行。
使用式B的烷基化剂的烷基化反应可以基于本说明书的记载恰当选择条件来实施。在本发明的一个方式中，使用式B的烷基化剂的烷基化反应例如可以在选自四氢呋喃(THF)、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢吡喃、1,4-二氧六环、1,2-二甲氧基乙烷(DME)、叔丁基甲基醚(TBME)、环戊基甲基醚(CPME)、异山梨醇二甲基醚等醚系溶剂、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、GVL(γ-戊内酯)等酯系溶剂、二氯甲烷(DCM)、1,2-二氯乙烷(DCE)、氯仿等卤素系溶剂以及N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-乙基-2-吡咯烷酮(NEP)、N-丁基-2-吡咯烷酮(NBP)等酰胺系溶剂、N,N,N′,N′-四甲基脲(TMU)、N,N’-二甲基丙撑脲(DMPU)、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)等脲系溶剂、二甲亚砜(DMSO)等亚砜系溶剂、茴香醚、甲苯、α,α,α-三氟甲苯、1,2-二氯苯、苯等芳香族系溶剂中的溶剂中(可以使用单一的溶剂，也可以使用组合有多个溶剂的混合溶剂)，在40～120℃、60～100℃、或75～85℃的温度，使用选自1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2Et)、1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)、叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦(P1tBu)、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷(BEMP)、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)、1,1,3,3-四甲基胍(TMG)、2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍(BTMG)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、7-甲基-1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(MTBD)、1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(TBD)及碳酸铯(Cs2CO3)中的碱来进行。
使用式C的烷基化剂的烷基化反应可以基于本说明书的记载恰当地选择条件来实施。在本发明的一个方式中，使用式C的烷基化剂的烷基化反应例如可以在选自四氢呋喃(THF)、2-甲基四氢呋喃、4-甲基四氢吡喃、1,4-二氧六环、1,2-二甲氧基乙烷(DME)、叔丁基甲基醚(TBME)、环戊基甲基醚(CPME)、异山梨醇二甲基醚等醚系溶剂、乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、乙酸异丁酯、GVL(γ-戊内酯)等酯系溶剂、二氯甲烷(DCM)、1,2-二氯乙烷(DCE)、氯仿等卤素系溶剂以及N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-乙基-2-吡咯烷酮(NEP)、N-丁基-2-吡咯烷酮(NBP)等酰胺系溶剂、N,N,N′,N′-四甲基脲(TMU)、N,N’-二甲基丙撑脲(DMPU)、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)等脲系溶剂、二甲亚砜(DMSO)等亚砜系溶剂、茴香醚、甲苯、α,α,α-三氟甲苯、1,2-二氯苯、苯等芳香族系溶剂中的溶剂中(可以使用单一的溶剂，也可以使用组合有多个溶剂的混合溶剂)，在40～120℃、60～100℃、或75～85℃的温度，使用选自1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2Et)、1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)(P2tBu)、叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦(P1tBu)、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷(BEMP)、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦(BTPP)、1,1,3,3-四甲基胍(TMG)、2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍(BTMG)、1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、7-甲基-1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(MTBD)、1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯(TBD)及碳酸铯(Cs2CO3)中的碱来进行。
在本发明的一个方面中，在存在能够被烷基化的氮原子的底物中可以选择性地将酚性羟基烷基化，以高收率得到目标化合物，可以抑制副产物的产生。在一个方式中，底物含有包含作为酸性官能团的酚性羟基和能够被烷基化的氮原子的1种以上的化合物，在该底物中烷基化最大程度地推进的具有氮原子的化合物中，基于酚性羟基的烷基化(烷基化A)和氮原子的烷基化(烷基化C)得到的产物的生成比(烷基化A/烷基化C)为1.5以上、3以上、5以上、7以上、9以上、10以上、12以上、15以上、20以上、30以上、或50以上。此处，生成比可以通过对基于烷基化A得到的产物和基于烷基化C得到的产物的各自的生成量利用通常实行的分析方法、例如使用HPLC的定量分析来求出。能够被烷基化的氮原子只要是因本发明的烷基化反应的条件而推进烷基化的氮原子，就没有特别限定，例如可以例示出吡啶环的环氮原子、叔胺的氮原子、酰基磺酰胺的氮原子、二芳基胺的氮原子、烷基芳基胺的氮原子、苯胺的氮原子、酰胺的氮原子、磺酰胺的氮原子等。特别是确认因吡啶环的环氮原子的烷基化而产生副产物，在本发明的一个方式中，烷基化C为吡啶环的环氮原子的烷基化。烷基化A与烷基化C的生成比可以在反应结束时确认，例如可以在具有酚性羟基的烷基化A的原料消失的时刻测定生成比。
以下，使用参考例及实施例对本发明进一步详细说明，然而本发明并不限定于这些实施例。需要说明的是，本说明书中，在记作“苯酚”的情况下，在苯酚本身的基础上，有时还指在苯酚骨架的任意的部位具有任意的取代基的化合物。此外，本说明书中，在记作“吡啶酚”的情况下，是指在吡啶环的任意的碳上具有羟基的化合物，该化合物有时在任意的部位具有任意的取代基。
实施例
所有的起始物质、试剂及溶剂从商业性供货商处获取，或者使用公知的方法合成。试剂及溶剂具有试剂品质或其以上的品质，只要没有另行记载，则直接使用从各种各样的商业性供货商获得的产品。
在化合物的HPLC纯化时使用UV-Direcred AutoPurification System、MS-Direcred AutoPurification System(Waters制，2545，2545-SQD2&2545-SQD2-ELSD)或Trilution(Gilson公司制)等进行。
柱层析的硅胶恰当地使用SHOKO Scientific Purif-Pack(注册商标)SI(60μm)、SHOKO Purif-Pack(注册商标)-EX SI(50μm)、Biotage(注册商标)SNAP Cartridge KP-Sil、Biotage(注册商标)、SNAP Ultra、Biotage(注册商标)Sfaer D(Duo)(60μm)或Biotage(注册商标)Sfaer HC D(Duo)(20μm)等。
柱层析的氨基硅胶恰当地使用SHOKO Purif-Pack(注册商标)-EX NH(50μm)、Biotage(注册商标)SNAP Isolute NH2(50μm)或Biotage(注册商标)SNAP Cartridge KP-NH等。
柱层析的反相硅胶恰当地使用SHOKO Purif-Pack(注册商标)-EX ODS(50μm)、Biotage(注册商标)SNAP Ultra C18(25μm)或Biotage(注册商标)Sfaer C18(30μm)等。
1H-NMR、13C-NMR谱图使用Me4Si作为内标物、或者不使用内标物地恰当地使用ECP-400(JEOL公司制)、Agilent400-MR(安捷伦科技公司制)、AVANCE3Cryo-TCI、AVANCE3 400、AVANCE3HD 400、AVANCE NEO 400、AVANCE3HD 300、AVANCE3 300、AVANCE2300或AVANCE NEO300(Bruker公司制)等进行测定(s＝单峰、brs＝宽单峰、d＝二重峰、t＝三重峰、q＝四重峰、dd＝双二重峰、ddd＝双双二重峰、dt＝双三重峰、td＝三二重峰、m＝多重峰)。
反应追踪以及纯度测定只要没有特别记载，则可以通过使用质谱装置、SQD(Waters制)或2020(Shimadzu制)利用以下的表中所示的分析条件实施保留时间的测定和质谱分析来进行。
实施例中使用以下的简写符号。
[表1]
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LCMS的分析条件记载于表LC01、表LC02以及表LC03中。
[表2]
[表LC01]
[表3]
[表4]
[表LC02]
[表5]
[表LC03]
实施例中的LCMS的分析结果中表述的m/z[M+H]+及(M+H)+这样的记载只要没有特别记载，则全都记载以正离子模式检测出的值。另外，LCMS中的UV面积％只要没有特别记载，则表示PDA(190-400nm、或210-400nm)处的值。在记载有特定的波长(例如290nm)的情况下，记载以所记载的波长为中心直至+/-4nm为止的波长处的UV面积％。
“浓缩”、“减压浓缩”或“减压下浓缩”这样的表达表示基于旋转蒸发仪、机械式油式真空泵或机械式无油真空泵的减压下的溶剂的蒸发除去。
“利用Genevac将溶剂在减压下蒸馏除去”或“蒸馏除去”这样的表达表示单独、或同时对多种试样使用了离心蒸发仪系统(Genevac公司制、EZ-2Elite、HT-6或HT-12)的溶剂的蒸发除去。
“在减压下干燥一夜”这样的表达表示基于旋转蒸发仪、机械式油式真空泵或机械式无油真空泵的减压下的溶剂的蒸发除去。
“一夜”、“彻夜”这样的表达只要没有特别记载，则是指8～14小时左右，然而并不限定于此。
固相反应可以在任意的恰当的容器、例如能够利用具备特氟龙密封件的帽盖紧的玻璃小瓶、具有烧结过滤芯及恰当的堵头的色谱柱中实施。对于容器尺寸，考虑到对于溶剂存在足够的空间，并且当用有机溶剂处理某种一定的树脂时有可能显著地溶胀，因而恰当地选择对于有效地搅拌树脂有充分的余地的尺寸。
固相反应中的搅拌是对于树脂上的反应的成功而言通常被认为重要的因子，恰当的使用适于确保充分的混合的搅拌器(例如东京理化机械公司、EYELA、MMS-320、MMS-220H、或Asone、MyBL-100CS、或TAITEC、M·BR-104)以50-200rpm来实施。
在固相反应中底物为混合物时的试剂类的当量表示相对于固相侧的混合物的各化合物所具有的反应中使用的官能团的摩尔数的总和使用多少倍(多少当量)的摩尔数的试剂。例如，在记作10当量的情况下，表示相对于固相侧的混合物的各化合物所具有的反应中使用的官能团的摩尔数的总和使用10倍(10当量)的摩尔数的试剂。
另外，在液相反应中底物为混合物时的试剂类的当量表示相对于混合物的各化合物所具有的反应中使用的官能团的摩尔数的总和使用多少倍(多少当量)的摩尔数的试剂。例如，在记作10当量的情况下，表示相对于混合物的各化合物所具有的反应中使用的官能团的摩尔数的总和使用10倍(10当量)的摩尔数的试剂。
需要说明的是，对于混合物的摩尔数，例如可以考虑以下的情况。只要没有特别记载，则可以采用任意的值。在将预先判明了摩尔数的一个个化合物混合的情况下，可以将其总和看作混合物的摩尔数。另外，在固相合成中合成混合物的情况下，可以将对于所制备的固相担载底物的担载量(mmol/g)乘以所使用的固相担载底物的量而得的值相加，将所得的总和看作混合物的摩尔数。此时，在固相上的反应中经过多个工序的情况下，也可以将各个工序的转换率设为100％(即理论量)来考虑，另外，在从固相中切出时，可以将切出效率设为100％(即切出理论量)来考虑，继续进行液相中的反应。
对于固相反应中的溶剂的使用量，利用相对于反应中使用的树脂的重量为任意的倍量的容量(v/w)。例如，在使用20mg的树脂、并使用20v/w的溶剂的情况下，使用20mg×20v/w＝400μL的溶剂。
对于清洗反应后的树脂时使用的溶剂的使用量，利用相对于反应中使用的树脂的重量为任意的倍量的容量(v/w)。例如，在使用20mg的树脂、使用20v/w的溶剂的情况下，使用20mg×20v/w＝400μL的溶剂。
为了监测固相上的反应的推进，需要从反应容器中采集树脂。此时，使用安装有从前端切断恰当长度后的移液器吸头的微量移液器，以必须包含树脂的方式抽吸大约5-20μL，由此采集树脂，转移到带有滤芯的移液器吸头(例如Thermo Scientific、ART带有滤芯的吸头ART20P、2149P-05)的滤芯上。其后，利用针对滤芯上的树脂的下述的代表性的步骤从树脂切割担载于树脂上的化合物。用NMP连续清洗3次，用MeOH连续清洗3次，用DCM连续清洗3次，其后，例如将包含0.05M三甲基苯的10％TFA/DCM溶液(50μL)加入滤芯吸头，对树脂浸渍3-10分钟。从滤芯吸头上施加空气或氮气压力而过滤溶液，使滤液溶解于NMP或DMI(250μL)中。将该溶液(50μL)用乙腈(250μL)稀释，由此制备LC样品，利用UPLC-MS测定进行分析，测定出反应进度。
从固相中的“切出”这样的表达表示担载于树脂的化合物从树脂的脱离，例如表示利用包含0.05M三甲基苯的10％TFA/DCM溶液等对树脂进行处理、向溶液中回收担载化合物。
实施例中使用的化合物编号以任意的字母与数字以及记号的组合表示。对于担载于固相上的状态的化合物，在末尾附加“R”，例如表示为“ZZ001-01R”。与之不同，将从固相中切出的化合物表示为去掉了“-01R”的“ZZ001”。
以实施例中的化学结构表述来使用。
[化10]
以及/>
的表述表示聚苯乙烯树脂，表示化合物担载于固相上的状态。
表示实施例中使用的担载于固相的化合物出现的“-01R”当中的数字表示所用的树脂的种类。例如，“-01R”的“01”表示担载于溴化(brominated)Wang树脂、4-(溴甲基)苯氧基甲基聚苯乙烯(例如Merck公司、4-(苄氧基)溴化苄，聚合物担载)的状态的化合物。“-02R”的“02”表示担载于4-(溴甲基)苯氧基乙基聚苯乙烯(例如Merck公司、2-(4-溴甲基苯氧基)乙基聚苯乙烯、实施例中有时也表述为修饰Wang树脂)的状态的化合物。
“-01R”表述例
[化11]
“-02R”的表述例
[化12]
固相合成中使用的固相担载化合物中表示有担载量(mmol/g)，该值表示将起始物质担载于固相时算出的担载量(初始的担载量)。由于构成单元(building block)的连结反应使分子量产生变化，因此反应后的担载量有时与初始担载量不同，然而在合成工序中使用初始的担载量。
即使在被固相担载的化合物相同的情况下，根据批次的不同也有担载量不同的情况，然而对于化合物编号有时也使用相同的化合物编号。
实施例1：本说明书中使用的化合物的合成
实施例1-1：联烯醇化合物(日文：アレノール化合物)B-001～B-015的合成法
首先从联烯醇化合物(B-001～B-015)的合成中使用的构成单元BB-1～BB-6和中间体(INT1～INT7)的合成法开始给出实施例2以后使用的底物(联烯醇、模型化合物)的合成法。
实施例1-1-1：构成单元BB-1～BB-6的合成
2-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲醛：BB-1的合成
[化13]
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入3-羟基-5-溴吡啶(1)(0.5g，2.9mmol，1.0eq)、2-甲酰基苯硼酸(R-1)(861.7mg，5.7mmol，2.0eq)、Na2CO3(456.8mg，4.3mmol，1.5eq)与DME/EtOH/H2O(4.0/4.0/1.7mL)的混合溶液。向该悬浮液中加入PdCl2(PPh3)2(100.8mg，140.0μmol，0.05eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌3小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～80％乙酸乙酯/石油醚)，以褐色固体的形式得到2-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲醛(BB-1)(300mg，51.4％)。
LCMS(ESI，m/z)：200[M+H]+。
保留时间：0.367分钟。
分析条件：PH-FA-01。
5-溴吡啶-3-甲酸：BB-2的合成
[化14]
在氮气气氛下向200mL烧瓶中加入5-溴吡啶-3-甲酸乙酯(2)(5.0g，21.8mmol，1.0eq)与MeOH/THF/H2O(40mL/40mL/40mL)的混合溶液。向该溶液中加入NaOH(2.6g，65.5mmol，3.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时，在减压下浓缩。
将残渣溶解于水(50mL)中，使用柠檬酸将pH调节为5-6的酸性。过滤所得的固体，将过滤器上的固体用水(20mL)清洗3次，在减压下，使用恒温干燥机在30℃干燥16小时，以灰白色固体的形式得到5-溴吡啶-3-甲酸(BB-2)(3.4g)。将所得的固体不进行进一步的纯化地用于下一工序。
LCMS(ESI，m/z)：202,204[M+H]+。
保留时间：0.673分钟。
分析条件：PH-FA-02。
4-溴-3-氟苯甲酸：BB-3的合成
[化15]
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入4-溴-3-氟苯甲酸甲酯(3)(1.0g，4.3mmol，1.0eq)与MeOH/THF/H2O(7.0mL/7.0mL/7.0mL)的混合溶液。向该溶液中加入NaOH(0.5g，12.9mmol，3.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时，在减压下浓缩。
将残渣溶解于水(20mL)中，使用2M HCl将pH调节为5-6的酸性。过滤所得的固体，将过滤器上的固体用水(10mL)清洗3次，在减压下使用恒温干燥机在50℃干燥16小时，以灰白色固体的形式得到4-溴-3-氟苯甲酸(BB-3)(0.9g，95.8％)。
LCMS(ESI，m/z)：没有检测出母离子。
保留时间：0.874分钟。
分析条件：PH-FA-02。
三甲基-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]硅烷：BB-4的合成
[化16]
第一工序：5-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)吡啶-3-酚：化合物4的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入3-羟基-5-溴吡啶(1)(1.0g，5.7mmol，1.0eq)、TEA(8.0mL)和THF(10mL)。向该溶液中加入三甲基甲硅烷基乙炔(R-2)(850mg，8.6mmol，1.5eq)、CuI(110mg，0.6mmol，0.1eq)、PPh3(150mg，0.6mmol，0.1eq)和PdCl2(PPh3)2(400mg，0.6mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在65℃搅拌16小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗7次。在减压下浓缩滤液，将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～10％MeOH/DCM)，以褐色固体的形式得到5-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)吡啶-3-酚(化合物4)(5.1g，66.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：192[M+H]+。
保留时间：0.818分钟。
分析条件：PH-FA-01。
第二工序：三甲基-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]硅烷：化合物BB-4的合成
在氮气气氛下向200mL烧瓶中加入5-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)吡啶-3-酚(化合物4)(2.6g，13.6mmol，1.0eq)、DHP(R-3)(8.0g，95.1mmol，7.0eq)和THF(50mL)。向该溶液中加入PPTS(170mg，0.7mmol，0.05eq)，将所得的反应混合物在70℃搅拌16小时。冷却到室温后，在减压下浓缩反应液。将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～80％乙酸乙酯/石油醚)，以黄色油的形式得到三甲基-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]硅烷(BB-4)(2.7g，72.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：276(M+H)+。
保留时间：1.214分钟。
分析条件：PH-FA-02。
三甲基-[2-[4-(氧杂环己烷-2-基氧基)苯基]乙炔基]硅烷：BB-5的合成
[化17]
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入4-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)苯酚(化合物6)(2.0g，10.5mmol，1.0eq)、DHP(R-3)(2.6g，7.0eq)和THF(20mL)。向该溶液中加入PPTS(132.3mg，0.5mmol，0.05eq)，将所得的反应混合物在70℃搅拌16小时。冷却到室温后，在减压下浓缩反应液。将残渣用硅胶柱色谱(0～20％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，以褐色油的形式得到三甲基-[2-[4-(氧杂环己烷-2-基氧基)苯基]乙炔基]硅烷(BB-5)(2.2g，76.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：没有检测出母离子。
保留时间：1.313分钟。
分析条件：PH-FA-02。
3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯磺酰胺：BB-6的合成
[化18]
第一工序：4-溴-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-甲基苯磺酰胺(化合物8)的合成
在氮气气氛下向500mL烧瓶中加入4-溴-3-甲基苯磺酰氯(7)(10.0g，37.1mmol，1.0eq)和DCM(220mL)。向该溶液中加入(PMB)2NH(R-4)(1.4g，55.6mmol，1.5eq)、TEA(7.5g，74.2mmol，2.0eq)和DMAP(453.2mg，3.7mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中添加水(100mL)，用DCM(150mL)萃取3次。
将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～40％乙酸乙酯/石油醚)，以灰白色固体的形式得到4-溴-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-甲基苯磺酰胺(化合物8)(9.0g，89.9％)。
LCMS(ESI，m/z)：没有检测出母离子。
保留时间：1.235分钟。
分析条件：PH-FA-02。
第二工序：N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯磺酰胺(化合物9)的合成
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入4-溴-N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-甲基苯磺酰胺(化合物8)(9.0g，18.3mmol，1.0eq)、2-(苯硫基)乙胺(R-5)(3.5g，22.9mmol，1.25eq)、Cs2CO3(17.9g，55.0mmol，3.0eq)和甲苯(30mL)。向该悬浮液中加入Pd2(dba)3-CHCl3(1.9g，1.8mmol，0.2eq)和BINAP(2.3g，3.7mmol，0.2eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下、在100℃搅拌16小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～80％乙酸乙酯/石油醚)，以褐色油的形式得到N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯磺酰胺(化合物9)(10.0g，67.8％)。
LCMS(ESI，m/z)：563.6[M+H]+。
保留时间：1.630分钟。
分析条件：PH-TFA-01。
第三工序：3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯磺酰胺：BB-6的合成
在氮气气氛下向500mL烧瓶中加入N,N-双[(4-甲氧基苯基)甲基]-3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯磺酰胺(化合物9)(10.0g，17.8mmol，1.0eq)和DCM(50mL)。向该溶液中加入TFA(180mL)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时，在减压下浓缩反应液。将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/水)，以浅黄色固体的形式得到3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯磺酰胺(BB-6)(2.5g，43.6％)。
LCMS(ESI，m/z)：323[M+H]+。
保留时间：1.179分钟。
分析条件：PH-AC-01。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.53-7.30(m，6H)，7.29-7.16(m，1H)，6.19(d，J＝2.4Hz，2H)，6.54(d，J＝8.4Hz，1H)，5.78(m，1H)，3.40(m，2H)，3.18(m，2H)，2.10(s，3H)。
实施例1-1-2：中间体(INT1～INT7)的合成
4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸：INT1的合成
[化19]
第一工序：4-哌嗪-1-基苯甲酸甲酯(化合物11)的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入4-氟-苯甲酸甲酯(10)(1.0g，6.5mmol，1.0eq)和DMSO(10mL)。向该溶液中加入哌嗪(R-6)(1.7g，19.5mmol，3.0eq)，将所得的反应混合物在120℃搅拌16小时。向反应液中添加水(20mL)，通过过滤回收析出的固体，以灰白色固体的形式得到4-哌嗪-1-基苯甲酸甲酯(化合物11)(1.3g)。将所得的固体不进行进一步的纯化地用于下一工序。
LCMS(ESI，m/z)：221[M+H]+。
保留时间：0.521分钟。
分析条件：PH-TFA-09。
第二工序：4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸甲酯(化合物12)的合成
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入4-哌嗪-1-基苯甲酸甲酯(化合物11)(1.1g，5.0mmol，1.0eq)和DCE(25mL)。向该溶液中加入2-溴苯甲醛(R-7)(1.8g，9.9mmol，2.0eq)和AcOH(0.6mL)，将所得的反应混合物在室温搅拌1小时。向该反应液中加入NaBH(OAc)3(4.2g，20.0mmol，4.0eq)，在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(20mL)，用乙酸乙酯(50mL)萃取3次。
将有机溶剂混合，用饱和NaHCO3水溶液(100mL)和brine(100mL)清洗，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～50％乙酸乙酯/石油醚)，以灰白色固体的形式得到4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸甲酯(化合物12)(0.9g，46.3％)。
LCMS(ESI，m/z)：389，391[M+H]+。
保留时间：0.623分钟。
分析条件：PH-TFA-09。
第三工序：4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸：INT1的合成
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸甲酯(化合物12)(1.1g，2.7mmol，1.0eq)和MeOH/THF/H2O(6.0mL/6.0mL/6.0mL)的混合溶液。向该溶液中加入NaOH(0.3g，8.2mmol，3.0eq)，将所得的反应混合物在80℃搅拌16小时，将反应液冷却到室温后，在减压下浓缩。
将残渣溶解于水(20mL)中，使用浓盐酸将pH调节为2-3的酸性。过滤回收所得的固体。将回收的固体使用石油醚利用粉碎清洗进行纯化，以灰白色固体的形式得到4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸(INT1)(0.9g，93.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：375，377[M+H]+。
保留时间：0.599分钟。
分析条件：PH-TFA-09。
N-苄基磺酰基-4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：INT2的合成
[化20]
在氮气气氛下向200mL烧瓶中加入4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸(INT1)(6.0g，16.0mmol，1.0eq)、苯甲磺酰胺(R-8)(2.0g，11.7mmol，0.7eq)、DMAP(1.5g，12.7mmol，0.7eq)和DCM(50mL)。向该溶液中加入EDCI·HCl(4.8g，25.1mmol，2.0eq)和DIPEA(6.4g，49.6mmol，3.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(50mL)，用DCM(50mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～80％乙酸乙酯/石油醚)，以灰白色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(INT2)(4.2g，68.1％)。
LCMS(ESI，m/z)：528，530[M+H]+。
保留时间：1.052分钟。
分析条件：PH-TFA-02。
N-苄基磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺：INT3的合成
[化21]
第一工序：4-(4-甲氧基羰基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯：化合物13的合成
在氮气气氛下向200mL烧瓶中加入4-氟-苯甲酸甲酯(10)(5.0g，32.4mmol，1.0eq)、K2CO3(6.7g，48.6mmol，1.5eq)和DMSO(50mL)。向该悬浮液中加入Boc-哌嗪(R-9)(6.0g，32.4mmol，1.0eq)，将所得的反应混合物在120℃搅拌16小时。向反应液中添加水(50mL)，过滤析出的固体。将过滤出的固体用水(20mL)清洗3次，在减压下，使用恒温干燥机在30℃干燥16小时，以浅黄色固体的形式得到4-(4-甲氧基羰基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物13)(3.7g)。将所得的固体不进行进一步的纯化地用于下一工序。
LCMS(ESI，m/z)：321[M+H]+。
保留时间：1.090分钟。
分析条件：PH-AC-03。
第二工序：4-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]苯甲酸：化合物14的合成
在氮气气氛下向200mL烧瓶中加入4-(4-甲氧基羰基苯基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物13)(3.7g，11.5mmol，1.0eq)和MeOH/THF/H2O(25mL/25mL/25mL)的混合溶液。在35℃向该溶液中加入NaOH(1.4g，34.6mmol，3.0eq)，将所得的反应混合物在35℃搅拌16小时。将反应液冷却到室温后，在减压下浓缩。
将残渣溶解于水(50mL)中，使用柠檬酸将pH调节为5-6的酸性。过滤析出的固体，将过滤器上的固体用水(25mL)清洗3次。将所得的固体在减压下使用恒温干燥机在50℃干燥16小时，以灰白色固体的形式得到4-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]苯甲酸(化合物14)(3.3g)。将所得的固体不进行进一步的纯化地用于下一工序。
LCMS(ESI，m/z)：307[M+H]+。
保留时间：0.601分钟。
分析条件：PH-AC-03。
第三工序：4-[4-(苄基磺酰基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯：化合物15的合成
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入4-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]苯甲酸(化合物14)(1.5g，4.9mmol，1.0eq)、苯甲磺酰胺(R-8)(0.8g，4.9mmol，1.0eq)、DMAP(0.6g，4.9mmol，1.0eq)和DCM(30mL)。向该溶液中加入EDCI·HCl(1.9g，9.8mmol，2.0eq)和DIPEA(2.5g，19.6mmol，4.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(30mL)，用DCM(40mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～80％乙酸乙酯/石油醚)，以浅黄色固体的形式得到4-[4-(苄基磺酰基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物15)(870mg，38.7％)。
LCMS(ESI，m/z)：460[M+H]+。
保留时间：0.749分钟。
分析条件：PH-AC-03。
第四工序：N-苄基磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺：INT3的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入4-[4-(苄基磺酰基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物15)(0.9g，1.9mmol，1.0eq)和DCM(2.0mL)。向该溶液中加入4M-HCl的1,4-二氧六环溶液(15mL)，将所得的反应混合物在室温搅拌1小时。在减压下浓缩反应液，将所得的残渣溶解于水(15mL)中，使用氨水将pH调节为8-9的碱性。过滤析出的固体，将所得的固体用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/0.5g/L碳酸氢铵水溶液)，以灰白色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(INT3)(0.3g，45.6％)。
LCMS(ESI，m/z)：360[M+H]+。
保留时间：0.639分钟。
分析条件：PH-FA-02。
N-苄基磺酰基-4-[4-(5-溴吡啶-3-羰基)哌嗪-1-基]苯甲酰胺：INT4的合成
[化22]
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(INT3)(2.0g，5.6mmol，1.0eq)、5-溴吡啶-3-甲酸(BB-2)(1.4g，6.7mmol，1.2eq)、DMAP(0.7g，5.6mmol，1.0eq)和DCM(30mL)。向该溶液中加入EDCI·HCl(2.1g，11.1mmol，2.0eq)和DIPEA(2.9g，22.3mmol，4.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(30mL)，用DCM(50mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(30～80％CH3CN/水)，以浅黄色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-(5-溴吡啶-3-羰基)哌嗪-1-基]苯甲酰胺(INT4)(1.1g，34.6％)。
LCMS(ESI，m/z)：543,545[M+H]+。
保留时间：0.923分钟。
分析条件：PH-FA-02。
N-苄基磺酰基-4-[4-(4-溴-3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]苯甲酰胺：INT5的合成
[化23]
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(INT3)(0.9g，2.4mmol，1.0eq)、N-苄基磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(BB-3)(0.7g，3.2mmol，1.3eq)、DMAP(0.3g，2.4mmol，1.0eq)和DCM(20mL)。向该溶液中加入EDCI·HCl(0.9g，4.9mmol，2.0eq)和DIPEA(1.3g，9.8mmol，4.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(30mL)，用DCM(50mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～100％乙酸乙酯/石油醚、其后为0～10％MeOH/DCM)，以浅黄色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-(4-溴-3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]苯甲酰胺(INT5)(1.2g，71.7％)。
LCMS(ESI，m/z)：560，562[M+H]+。
保留时间：1.002分钟。
分析条件：PH-FA-02。
N-苄基磺酰基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺：INT6的合成
[化24]
第一工序：6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸甲酯：化合物17的合成
在氮气气氛下向1L烧瓶中加入6-氯哒嗪甲酸甲酯(16)(20g，116.3mmol，1.0eq)、K2CO3(40g，290.7mmol，2.5eq)和1,4-二氧六环(400mL)。向该悬浮液中加入Boc-哌嗪(R-9)(32.4g，174.4mmol，1.5eq)，将所得的反应混合物在100℃搅拌16小时。过滤反应混合物，将过滤出的固体用DCM(100mL)清洗3次。将滤液用水(250mL)清洗3次后，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～80％乙酸乙酯/石油醚)，以浅黄色固体的形式得到6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸甲酯(化合物17)(11.4g，30.5％)。
LCMS(ESI，m/z)：323[M+H]+。
保留时间：0.852分钟。
分析条件：PH-FA-02。
第二工序：6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸：化合物18的合成
在氮气气氛下向500mL烧瓶中加入6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸甲酯(化合物17)(11.4g，35.4mmol，1.0eq)和MeOH(200mL)。向该溶液中加入5M-NaOH水溶液(35.4mL，177.1mmol，5.0eq)，将所得的反应混合物在40℃搅拌16小时。将反应液冷却到室温后，在减压下浓缩。
将残渣溶解于水(200mL)中，使用2M-HCl水溶液将pH调节为5-6的酸性。过滤析出的固体，将过滤器上的固体用水(100mL)清洗3次。将回收的固体在减压下使用恒温干燥机在50℃干燥16小时，以浅黄色固体的形式得到6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸(化合物18)(5.4g)。将所得的固体不进行进一步的纯化地用于下一工序。
LCMS(ESI，m/z)：309[M+H]+。
保留时间：0.704分钟。
分析条件：PH-FA-02。
在实施例1-1、INT6的合成中例示了合成法的化合物18在本说明书内有时也表述为化合物AC-012。
第三工序：6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸：化合物19的合成
在氮气气氛下向300mL烧瓶中加入6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸(化合物18)(5.4g，17.5mmol，1.0eq)、苯甲磺酰胺(R-8)(4.5g，26.3mmol，1.5eq)和DCM(120mL)。向该溶液中加入HATU(10.0g，26.3mmol，1.5eq)和DIPEA(9.1g，70.1mmol，4.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(75mL)，用DCM(100mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～100％乙酸乙酯/石油醚、其后为0～10％MeOH/DCM)，以浅黄色固体的形式得到6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸(化合物19)(5.1g，63.1％)。
LCMS(ESI，m/z)：462[M+H]+。
保留时间：1.220分钟。
分析条件：PH-TFA-10。
第四工序：N-苄基磺酰基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺：INT6的合成
在氮气气氛下向300mL烧瓶中加入6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸(化合物19)(5.1g，11.1mmol，1.0eq)和DCM(30mL)。向该溶液中加入4M-HCl的1,4-二氧六环溶液(60mL)，将所得的反应混合物在室温搅拌1小时。在减压下浓缩反应液，将所得的残渣溶解于水(50mL)中，使用氨水将pH调节为8-9的碱性。过滤析出的固体，将所得的固体用水(30mL)清洗3次。将回收的固体在减压下使用恒温干燥机在50℃干燥16小时，以灰白色固体的形式得到N-苄基磺酰基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(INT6)(3.7g)。将所得的固体不进行进一步的纯化地用于下一工序。
LCMS(ESI，m/z)：362[M+H]+。
保留时间：0.594分钟。
分析条件：PH-FA-02。
N-苄基磺酰基-6-[4-(5-溴吡啶-3-羰基)哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：INT7的合成
[化25]
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(INT6)(2.0g，5.5mmol，1.0eq)、5-溴吡啶-3-甲酸(BB-2)(1.4g，6.6mmol，1.2eq)和DCM(40mL)。向该溶液中加入HATU(3.2g，8.3mmol，1.5eq)和DIPEA(2.9g，22.1mmol，4.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(30mL)，用DCM(50mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～10％MeOH/DCM)，以浅黄色固体的形式得到N-苄基磺酰基-6-[4-(5-溴吡啶-3-羰基)哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(INT7)(1.6g，50.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：545，547[M+H]+。
保留时间：1.075分钟。
分析条件：PH-TFA-11。
N-苄基磺酰基-6-[4-(4-溴-3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：INT8的合成
[化26]
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(INT6)(1.1g，3.0mmol，1.0eq)和4-溴-3-氟苯甲酸(BB-3)(0.9g，4.0mmol，1.3eq)和DCM(20mL)。向该溶液中加入HATU(1.7g，4.6mmol，1.5eq)和DIPEA(1.6g，12.2mmol，4.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(20mL)，用DCM(40mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～100％乙酸乙酯/石油醚、其后为0～10％MeOH/DCM)，以浅黄色固体的形式得到N-苄基磺酰基-6-[4-(4-溴-3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(INT8)(1.3g，74.8％)。
LCMS(ESI，m/z)：562,564[M+H]+。
保留时间：0.887分钟。
分析条件：PH-TFA-10。
实施例1-1-3：联烯醇化合物B-001～B-015的合成
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-001的合成
[化27]
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸(INT-2)(0.5g，0.9mmol，1.0eq)、4-羟基苯硼酸(R-10)(261mg，1.9mmol，2.0eq)、Na2CO3(130mg，1.2mmol，1.3eq)和DME/EtOH/H2O(4.0mL/4.0mL/4.0mL)的混合溶液。向该悬浮液中加入PdCl2(PPh3)2(66.4mg，0.09mmol，0.10eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌3小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(50mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～100％乙酸乙酯/石油醚、其后为0～10％MeOH/DCM)。将所得的混合物进一步利用反相分配HPLC(XBridge Prep OBD C18色谱柱)进行纯化(34～54％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以无色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-001)(263mg，51.2％)。
LCMS(ESI，m/z)：542[M+H]+。
保留时间：1.457分钟。
分析条件：PH-TFA-03。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.54(s，1H)，9.45(s，1H)，7.79(d，J＝6.0Hz，2H)，7.54-7.50(m，1H)，7.37-7.27(m，7H)，7.26-7.19(m，3H)，6.91(d，J＝6.0Hz，2H)，6.81(d，J＝6.0Hz，2H)，4.70(s，2H)，3.43(s，2H)，3.30-3.23(m，4H)，2.46-2.38(m，4H)。
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-002的合成
[化28]
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(INT-3)(0.3g，0.9mmol，1.0eq)和EtOH/DMSO(5.0mL/5.0mL)的混合溶液。向该溶液中加入2-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲醛(BB-1)(0.3g，1.7mmol，2.0eq)和AcOH(0.8mL)，将所得的反应混合物在室温搅拌1小时。向该反应液中加入NaBH3CN(0.1g，1.7mmol，2.0eq)，在室温搅拌16小时。在减压下浓缩反应液，将所得的残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/水)，进一步利用反相分配HPLC(XBridge Prep OBD C18色谱柱)进行纯化(19～39％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以灰白色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-002)(146.5mg，30.5％)。
LCMS(ESI，m/z)：543[M+H]+。
保留时间：0.752分钟。
分析条件：PH-AC-01。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.52(s，1H)，9.94(s，1H)，8.07(dd，J＝24.9，2.1Hz，2H)，7.77(d，J＝8.7Hz，2H)，7.57-7.19(m，10H)，6.87(d，J＝8.7Hz，2H)，4.65(s，2H)，3.39(s，2H)，3.26-3.15(m，4H)，2.45-2.33(m，4H)。
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-003的合成
[化29]
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物20的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-(5-溴吡啶-3-羰基)哌嗪-1-基]苯甲酰胺(INT-4)(0.5g，0.9mmol，1.0eq)、三甲基-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]硅烷(BB-4)(380.1mg，1.4mmol，1.5eq)和TEA/THF/NMP(4.0mL/5.0mL/3.0mL)的混合溶液。向该溶液中加入CuI(17.5mg，0.09mmol，0.1eq)、PPh3(24.1mg，0.09mmol，0.1eq)、PdCl2(PPh3)2(64.6mg，0.09mmol，0.1eq)和TMAF(182.2mg，1.1mmol，1.2eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在65℃搅拌5小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～10％MeOH/DCM)，以褐色油的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(化合物20)(0.6g，92.6％)。
LCMS(ESI，m/z)：666[M+H]+。
保留时间：1.020分钟。
分析条件：PH-FA-02。
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-003的合成
在氮气气氛下向30mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(化合物20)(0.6g，0.9mmol，1.0eq)和EtOH/NMP(5.0mL/3.0mL)的混合溶液。向该溶液中加入PPTS(0.5g，1.9mmol，2.0eq)，将所得的反应混合物在55℃搅拌3小时。在减压下浓缩反应液，将所得的残渣利用反相分配HPLC(Xselect CSH OBD色谱柱)进行纯化(23～53％CH3CN/0.1％甲酸水溶液)，以浅黄色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)(171.2mg，30.5％)。
LCMS(ESI，m/z)：582[M+H]+。
保留时间：1.426分钟。
分析条件：PH-TFA-03。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.61(s，1H)，10.35(s，1H)，8.87(d，J＝2.1Hz，1H)，8.69(d，J＝2.1Hz，1H)，8.26(d，J＝1.8Hz，1H)，8.23-8.13(m，1H)，8.12(d，J＝2.1Hz，1H)，7.83(d，J＝9.0Hz，2H)，7.34(m，J＝8.8，5.6，2.7Hz，6H)，6.98(d，J＝9.0Hz，2H)，4.83(s，2H)，3.77(s，2H)，3.46(d，J＝20.7Hz，6H)。
N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-004的合成
[化30]
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-(4-溴-3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]苯甲酰胺(INT-5)(0.3g，0.6mmol，1.0eq)、3-羟基-5-吡啶硼酸频哪醇酯(R-11)(276.1mg，1.2mmol，2.0eq)、Na2CO3(86.0mg，0.8mmol，1.3eq)和DME/EtOH/H2O(6.0mL/6.0mL/6.0mL)的混合溶液。向该悬浮液中加入PdCl2(PPh3)2(43.8mg，0.06mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌3小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将所得的残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/水)，进一步利用反相分配HPLC(YMC-Actus Triart C18)进行纯化(20～50％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以灰白色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)(168.4mg，46.5％)。
LCMS(ESI，m/z)：575[M+H]+。
保留时间：2.138分钟。
分析条件：PH-TFA-04。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.61(s，1H)，10.18(s，1H)，8.25-8.20(m，2H)，7.82(d，J＝8.7Hz，2H)，7.65(t，J＝8.1Hz，1H)，7.49-7.30(m，8H)，6.93(d，J＝8.7Hz，2H)，4.64(s，2H)，3.76-3.32(m，8H)。
N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：B-005的合成
[化31]
N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：化合物21的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-6-[4-(5-溴吡啶-3-羰基)哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(INT-7)(0.5g，0.9mmol，1.0eq)、三甲基-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]硅烷(BB-4)(387mg，1.4mmol，1.5eq)和TEA/THF/NMP(4.0mL/5.0mL/3.0mL)的混合溶液。向该溶液中加入CuI(17.8mg，0.09mmol，0.1eq)、PPh3(24.5mg，0.09mmol，0.1eq)、PdCl2(PPh3)2(66.0mg，0.09mmol，0.1eq)和TMAF(185.2mg，1.1mmol，1.2eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在65℃搅拌5小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(30～95％CH3CN/水)，以黄色固体的形式得到N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(化合物21)(0.4g，57.6％)。
LCMS(ESI，m/z)：668[M+H]+。
保留时间：0.983分钟。
分析条件：PH-FA-02。
N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：B-005的合成
在氮气气氛下向30mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-[5-(氧杂环己烷-2-基氧基)吡啶-3-基]乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(化合物21)(0.4g，0.6mmol，1.0eq)与EtOH/NMP(5.0mL/3.0mL)的混合溶液。向该溶液中加入PPTS(0.3g，1.2mmol，2.0eq)，将所得的反应混合物在55℃搅拌3小时。在减压下浓缩反应液，将所得的残渣利用反相分配HPLC(XBridge C18OBD制备柱)进行纯化(33～50％CH3CN/0.1％甲酸水溶液)，以浅黄色固体的形式得到N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-005)(88.9mg，25.3％)。
LCMS(ESI，m/z)：584[M+H]+。
保留时间：1.350分钟。
分析条件：PH-TFA-03。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.95(br，1H)，10.36(s，1H)，8.88-8.70(m，2H)，8.48-8.05(m，2H)，7.95(d，J＝9.6Hz，1H)，7.65-7.20(m，6H)，4.83(s，2H)，4.18-3.67(m，5H)，3.46-3.01(m，3H)。
N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]·哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：B-006的合成
[化32]
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-6-[4-(4-溴-3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(INT-8)(0.3g，0.6mmol，1.0eq)、3-羟基-5-吡啶硼酸频哪醇酯(R-11)(275.0mg，1.2mmol，2.0eq)、Na2CO3(85.8mg，0.8mmol，1.3eq)和DME/EtOH/H2O(5.0mL/5.0mL/5.0mL)的混合溶液。向该悬浮液中加入PdCl2(PPh3)2(43.9mg，0.06mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌5小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将所得的残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/水)，进一步利用反相分配HPLC(XBridge Prep OBD C18色谱柱)进行纯化(10～41％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以淡褐色固体的形式得到N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-006)(66.9mg，18.6％)。
LCMS(ESI，m/z)：577[M+H]+。
保留时间：2.573分钟。
分析条件：PH-TFA-05。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.18(s，1H)，8.26-8.19(m，2H)，7.89(d，J＝9.6Hz，1H)，7.68(t，J＝8.1Hz，1H)，7.53-7.21(m，10H)，4.66(s，2H)，3.90-3.44(m，8H)。
N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(4-羟基苯基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：B-007的合成
[化33]
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-6-[4-(4-溴-3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(INT-8)(0.5g，1.0mmol，1.0eq)、4-羟基苯硼酸(R-10)(269.8mg，2.0mmol，2.0eq)、Na2CO3(134.7mg，1.3mmol，1.3eq)与DME/EtOH/H2O(7.0mL/7.0mL/7.0mL)的混合溶液。向该悬浮液中加入PdCl2(PPh3)2(68.6mg，0.1mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌5小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(50mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/水)。将所得的混合物进一步利用反相分配HPLC(XBridge Prep Phenyl OBD色谱柱)进行纯化(44～60％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以灰白色固体的形式得到N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(4-羟基苯基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-007)(59.8mg，10.6％)。
LCMS(ESI，m/z)：576[M+H]+。
保留时间：2.018分钟。
分析条件：PH-TFA-06。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.73(s，1H)，7.92(d，J＝6.6Hz，1H)，7.60-7.54(m，1H)，7.44-7.34(m，10H)，6.90-6.87(m，2H)，4.78(s，2H)，3.92-3.51(m，8H)。
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-008的合成
[化34]
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-[4-(氧杂环己烷-2-基氧基)苯基]乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物22的合成
在氮气气氛下向30mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-(5-溴吡啶-3-羰基)哌嗪-1-基]苯甲酰胺(INT-4)(0.5g，0.9mmol，1.0eq)、三甲基-[2-[4-(氧杂环己烷-2-基氧基)苯基]乙炔基]硅烷(BB-5)(378.8mg，1.4mmol，1.5eq)与TEA/THF/NMP(4.0mL/5.0mL/3.0mL)的混合溶液。向该溶液中加入CuI(17.5mg，0.09mmol，0.1eq)、PPh3(24.1mg，0.09mmol，0.1eq)、PdCl2(PPh3)2(64.6mg，0.09mmol，0.1eq)和TMAF(182.0mg，1.4mmol，1.2eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在65℃搅拌5小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～10％MeOH/DCM)，以褐色油的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-[4-(氧杂环己烷-2-基氧基)苯基]乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(化合物22)(0.7g，95.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：665[M+H]+。
保留时间：1.744分钟。
分析条件：PH-FA-03。
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-008的合成
在氮气气氛下向30mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-[4-(氧杂环己烷-2-基氧基)苯基]乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(化合物22)(0.7g，1.0mmol，1.0eq)和4M-HCl的1,4-二氧六环溶液(5mL)。将该溶液在室温搅拌1小时。在减压下浓缩反应液，将所得的残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～10％MeOH/DCM)，进一步利用反相分配HPLC(XBridge Prep OBD C18色谱柱)进行纯化(46～63％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以浅黄色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-008)(94.7mg，15.5％)。
LCMS(ESI，m/z)：581[M+H]+。
保留时间：0.816分钟。
分析条件：PH-AC-01。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.61(s，1H)，10.05(s，1H)，8.79(d，J＝2.0Hz，1H)，8.62(d，J＝2.1Hz，1H)，8.02(t，J＝2.1Hz，1H)，7.83(d，J＝8.5Hz，2H)，7.44(d，J＝8.2Hz，2H)，7.32(s，5H)，7.30(d，J＝6.3Hz，1H)，6.96(d，J＝8.6Hz，2H)，6.83(d，J＝8.3Hz，2H)，4.70(s，2H)，3.77(s，2H)，3.42(m，5H)。
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-009的合成
[化35]
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(INT-2)(2.0g，3.8mmol，1.0eq)、5-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)吡啶-3-酚(化合物4)(2.9g，15.1mmol，4.0eq)、Cs2CO3(3.7g，11.2mmol，3.0eq)和NMP(20mL)。向该溶液中加入[PdCl(allyl)]2(69.2mg，0.2mmol，0.05eq)，tBu3P(153mg，0.8mmol，0.2eq)、CsF(1.1g，7.6mmol，2.0eq)和TMAF(749mg，4.5mmol，1.2eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在100℃搅拌2小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(5～95％CH3CN/水)，利用反相分配HPLC(Xselect CSH OBD色谱柱)进行纯化(14～39％CH3CN/0.1％甲酸水溶液)，进一步用硅胶柱色谱进行纯化(0～10％EtOH/DCM)，以灰白色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-009)(91mg，4.2％)。
LCMS(ESI，m/z)：567[M+H]+。
保留时间：0.772分钟。
分析条件：PH-AC-01。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.48(s，1H)，10.24(s，1H)，8.23(d，J＝1.6Hz，1H)，8.16(d，J＝2.8Hz，1H)，7.84-7.76(m，2H)，7.56(m，2H)，7.45(m，1H)，7.41-7.27(m，7H)，6.99-6.92(m，2H)，4.81(s，2H)，3.79(s，2H)，3.45-3.30(m，4H)，2.65-2.60(m，4H)。
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-010的合成
[化36]
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-[4-(氧杂环己烷-2-基氧基)苯基]乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物23的合成
在氮气气氛下向30mL烧瓶中加入INT-2(0.7g，1.3mmol，1.0eq)、BB-5(1.4g，5.3mmol，4.0eq)、Cs2CO3(1.3g，4.0mmol，3.0eq)和NMP(7.0mL)。向该溶液中加入[PdCl(allyl)]2(24.2mg，0.06mmol，0.05eq)，tBu3P(53.5mg，0.3mmol，0.2eq)、CsF(402mg，2.6mmol，2.0eq)和TMAF(262mg，1.6mmol，1.2eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在100℃搅拌2小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～100％乙酸乙酯/石油醚)，以褐色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-[4-(氧杂环己烷-2-基氧基)苯基]乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(化合物23)(680mg，63.2％)。
LCMS(ESI，m/z)：650[M+H]+。
保留时间：0.926分钟。
分析条件：PH-FA-02。
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-010的合成
在氮气气氛下向30mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-[4-(氧杂环己烷-2-基氧基)苯基]乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(化合物23)(0.4g，0.6mmol，1.0eq)和4M-HCl的1,4-二氧六环溶液(5.0mL)。将该溶液在室温搅拌1小时。在减压下浓缩反应液，将所得的残渣用反相分配HPLC(C18)进行纯化(25～55％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)并用反相硅胶柱色谱(XBridge Prep OBD C18色谱柱)进行纯化(5～95％CH3CN/水)，以浅黄色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-010)(92.5mg，23.5％)。
LCMS(ESI，m/z)：566[M+H]+。
保留时间：1.010分钟。
分析条件：PH-AC-01。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.50(s，1H)，9.93(s，1H)，7.81(d，J＝8.7Hz，2H)，7.51(d，J＝7.2Hz，2H)，7.43-7.27(m，9H)，6.96(d，J＝9.0Hz，2H)，6.82(d，J＝8.7Hz，2H)，4.81(s，2H)，3.79(s，2H)，3.33(s，4H)，2.63(s，4H)。
4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺：B-011的合成
[化37]
4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺：化合物24的合成
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸(INT1)(1.7g，4.6mmol，1.5eq)、3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯磺酰胺(BB-6)(1.0g，3.1mmol，1.0eq)、DMAP(0.4g，3.1mmol，1.0eq)和DCM(34mL)。向该溶液中加入EDCI·HCl(1.2g，6.2mmol，2.0eq)和DIPEA(1.6g，12.4mmol，4.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(30mL)，用DCM(40mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(20～100％乙酸乙酯/石油醚)，以浅黄色固体的形式得到4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物24)(1.1g，49.6％)。
LCMS(ESI，m/z)：679，681[M+H]+。
保留时间：1.242分钟。
分析条件：PH-TFA-01。
4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺：B-011的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物24)(0.3g，0.4mmol，1.0eq)、4-羟基苯硼酸(R-10)(121.8mg，0.9mmol，2.0eq)、Na2CO3(60.8mg，0.6mmol，1.3eq)和DME/EtOH/H2O(4.0mL/4.0mL/4.0mL)的混合溶液。向该悬浮液中加入PdCl2(PPh3)2(31.0mg，0.04mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌3小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(50mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～100％乙酸乙酯/石油醚、其后为0～10％MeOH/DCM)。将所得的粗纯化物进一步利用反相分配HPLC(XBridge Shield RP18OBD色谱柱)进行纯化(37～59％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以灰白色固体的形式得到4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-011)(37.9mg，12.3％)。
LCMS(ESI，m/z)：693[M+H]+。
保留时间：1.196分钟。
分析条件：PH-AC-01。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.66(s，1H)，9.46(s，1H)，7.72(d，J＝8.7Hz，2H)，7.61-7.56(m，1H)，7.52-7.46(m，2H)，7.40-7.28(m，6H)，7.26-7.14(m，4H)，6.89(d，J＝9.0Hz，2H)，6.86-6.75(m，2H)，6.57(d，J＝8.7Hz，1H)，5.99(bs，1H)，3.46-3.36(m，4H)，3.28-3.22(m，4H)，3.21-3.14(m，2H)，2.43-2.37(m，4H)，2.09(s，3H)。
4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺：B-012的合成
[化38]
4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺：化合物25的合成
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸(INT1)(1.1g，2.8mmol，1.4eq)、3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯磺酰胺(R-12)(0.7g，2.1mmol，1.0eq)、DMAP(0.3g，2.1mmol，1.0eq)和DCM(20mL)。向该溶液中加入EDCI·HCl(0.8g，4.2mmol，2.0eq)和DIPEA(1.1g，8.5mmol，4.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(20mL)，用DCM(30mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/0.5g/L碳酸氢铵水溶液)，以黄色固体的形式得到4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物25)(554.7mg，36.8％)。
LCMS(ESI，m/z)：710，712[M+H]+。
保留时间：1.166分钟。
分析条件：PH-TFA-02。
需要说明的是，在实施例1-1-3、化合物25的合成法中使用的化合物R-12在本说明书内有时也表述为化合物BB41。
4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺：B-012的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物25)(0.3g，0.4mmol，1.0eq)、4-羟基苯硼酸(R-10)(72.8mg，0.5mmol，1.5eq)、Na2CO3(48.5mg，0.5mmol，1.3eq)和DME/EtOH/H2O(5.0mL/5.0mL/5.0mL)的混合溶液。向该悬浮液中加入PdCl2(PPh3)2(24.7mg，0.03mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌3小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(50mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/水)。将所得的粗纯化物进一步利用反相分配HPLC(C18)进行纯化(34～54％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以黄色固体的形式得到4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-012)(35.4mg，13.8％)。
LCMS(ESI，m/z)：724[M+H]+。
保留时间：2.248分钟。
分析条件：PH-AC-02。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，9.44(s，1H)，8.66(s，1H)，8.55(d，J＝2.1Hz，1H)，7.88(dd，J＝9.0，2.4Hz，1H)，7.72(d，J＝8.7Hz，2H)，7.55-7.46(m，1H)，7.41-7.34(m，2H)，7.30(m，3H)，7.26-7.07(m，6H)，6.91-6.76(m，4H)，3.70-3.57(m，2H)，3.43(s，2H)，3.28-3.19(m，6H)，2.42(s，4H)。
4-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺：B-013的合成
[化39]
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物25)(0.2g，0.3mmol，1.0eq)、3-羟基苯硼酸(R-13)(89.3mg，0.6mmol，2.0eq)、Na2CO3(44.6mg，0.4mmol，1.3eq)与DME/EtOH/H2O(1/1/1，5.0mL)的混合溶液。向该悬浮液中加入PdCl2(PPh3)2(22.7mg，0.03mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌3小时。冷却到室温后将反应液用EtOAc(100mL)稀释，用水(50mL)清洗3次。将有机溶剂用Na2SO4干燥，过滤后在减压下浓缩滤液。将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(5～40％CH3CN/水)。将所得的粗纯化物进一步利用反相分配HPLC(YMC-Actus Triart C18)进行纯化(40～70％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以黄色固体的形式得到4-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-013)(28.6mg，12.2％)。
LCMS(ESI，m/z)：724[M+H]+。
保留时间：2.382分钟。
分析条件：PH-TFA-07。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.92(s，1H)，9.44(s，1H)，8.70(d，J＝6.0Hz，1H)，8.55(d，J＝2.1Hz，1H)，7.91-7.84(m，1H)，7.71(d，J＝9.0Hz，2H)，7.58-7.48(m，1H)，7.40-7.07(m，10H)，6.87(d，J＝9.0Hz，2H)，6.80-6.69(m，3H)，3.66-3.64(m，2H)，3.46(s，2H)，3.30-3.25(m，6H)，2.41(s，4H)。
N-(苯磺酰基)-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-014的合成
[化40]
第一工序：4-[4-(苯磺酰基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯：化合物26的合成
在氮气气氛下向200mL烧瓶中加入4-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]苯甲酸(化合物14)(3.0g，9.8mmol，1.0eq)、苯磺酰胺(R-14)(1.5g，9.8mmol，1.0eq)、DMAP(1.2g，9.8mmol，1.0eq)和DCM(60mL)。向该溶液中加入EDCI·HCl(3.7g，19.6mmol，2.0eq)和DIPEA(5.1g，39.2mmol，4.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(60mL)，用DCM(60mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～10％MeOH/DCM)，以浅黄色固体的形式得到4-[4-(苯磺酰基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物26)(2.2g，50.4％)。
LCMS(ESI，m/z)：446[M+H]+。
保留时间：1.023分钟。
分析条件：PH-FA-02。
第二工序：N-(苯磺酰基)-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺：化合物27的合成
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入4-[4-(苯磺酰基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物26)(2.2g，4.9mmol，1.0eq)和DCM(8.0mL)。向该溶液中加入4M-HCl的1,4-二氧六环溶液(40mL)，将所得的反应混合物在室温搅拌1小时。在减压下浓缩反应液，将所得的残渣溶解于水(40mL)中，使用氨水将pH调节为8-9的碱性。过滤析出的固体，将所得的固体用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/0.5g/L碳酸氢铵水溶液)，以浅黄色固体的形式得到N-(苯磺酰基)-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(化合物27)(1.4g，79.2％)。
LCMS(ESI，m/z)：346[M+H]+。
保留时间：0.612分钟。
分析条件：PH-FA-02。
第三工序：N-(苯磺酰基)-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-014的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入N-(苯磺酰基)-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(化合物27)(0.4g，1.0mmol，1.0eq)与EtOH/DMSO(4.0mL/6.0mL)的混合溶液。向该溶液中加入2-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲醛(BB-1)(0.4g，2.0mmol，2.0eq)和AcOH(1.0mL)，将所得的反应混合物在室温搅拌1小时。向该反应液中加入NaBH3CN(0.1g，2.0mmol，2.0eq)，在室温搅拌16小时，在减压下浓缩反应液。
将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/水)，进一步利用反相分配HPLC(XBridge Shield RP18OBD色谱柱)进行纯化(19～33％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以灰白色固体的形式得到N-(苯磺酰基)-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-014)(248.3mg，45.4％)。
LCMS(ESI，m/z)：529[M+H]+。
保留时间：0.666分钟。
分析条件：PH-AC-01。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.04(s，1H)，9.93(s，1H)，8.11(d，J＝2.7Hz，1H)，8.02(d，J＝1.8Hz，1H)，7.96-7.87(m，2H)，7.71(d，J＝8.7Hz，2H)，7.65-7.46(m，4H)，7.44-7.30(m，2H)，7.29-7.19(m，2H)，6.86(d，J＝8.7Hz，2H)，3.39(s，2H)，3.26-3.12(m，4H)，2.44-2.30(m，4H)。
N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(4-羟基苯基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：B-015的合成
[化41]
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-(4-溴-3-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基]苯甲酰胺(INT-5)(0.5g，0.8mmol，1.0eq)、3-羟基苯硼酸(R-10)(221.5mg，1.6mmol，2.0eq)、Na2CO3(110.6mg，1.0mmol，1.3eq)与DME/EtOH/H2O(7.0mL/7.0mL/7.0mL)的混合溶液。向该悬浮液中加入PdCl2(PPh3)2(56.4mg，0.08mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌3小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(50mL)清洗3次。在减压下浓缩滤液，将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～80％CH3CN/水)。将所得的粗纯化物进一步利用反相分配HPLC(XBridge Prep OBD C18色谱柱)进行纯化(19～39％CH3CN/10mmol/L碳酸氢铵水溶液)，以灰白色固体的形式得到N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(4-羟基苯基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-015)(187.7mg，40.8％)。
LCMS(ESI，m/z)：574[M+H]+。
保留时间：1.483分钟。
分析条件：PH-TFA-08。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.60(s，1H)，9.72(s，1H)，7.81(d，J＝8.7Hz，2H)，7.55(t，J＝8.1Hz，1H)，7.46-7.37(m，2H)，7.36-7.23(m，6H)，7.16-7.00(m，1H)，6.96-6.83(m，4H)，4.59(s，2H)，3.91-3.48(m，4H)，3.45-3.32(m，4H)。
实施例1-2：模型底物合成
实施例1-2-1：化合物B-016(4-[4-[(4-氟苯基)甲基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯)的合成
[化42]
在氮气气氛下，使4-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]苯甲酸(化合物14，CAS：162046-66-4)(0.5g，1.5mmol)和DIPEA(784.0μL，4.5mmol，3.0当量)悬浮于NMP(6.0mL)中。在室温下慢慢地向该悬浮液中加入HATU(856.0mg，2.3mmol，1.5当量)。搅拌5分钟后，向反应液中滴加4-氟苯基甲基胺(343.0μL，3.0mmol，2.0当量)。将所得的反应溶液在室温搅拌2.5小时。
反应结束后，在室温向反应液中滴加水(40mL)，使用加热块将反应液在80℃搅拌5分钟。将所得的悬浮溶液从加热块取下，在室温下搅拌10分钟。使用桐山漏斗过滤所得的沉淀，将所得的固体用水(20mL)清洗5次，用混合溶剂(CH3CN-H2O，1：1，20mL)清洗2次。在减压下干燥所得的固体，得到浅红色固体的标题化合物(4-[4-[(4-氟苯基)甲基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯)(化合物B-016)(543.0mg，88.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：414.1[M+H]+。
保留时间：1.173分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.770(t，J＝5.7Hz，1H)，7.782(d，J＝9.0Hz，2H)，7.782(dd，J＝5.8，8.8Hz，2H)，7.133(t，J＝8.8Hz，2H)，6.969(d，J＝9.0Hz，2H)，4.421(d，J＝5.7Hz，2H)，3.454(t，J＝5.1Hz，4H)，3.237(t，J＝5.1Hz，4H)，1.422(s，9H)。
实施例1-2-2：4-[4-[(4-氟苯基)甲基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯：化合物B-044的合成
[化43]
在氮气气氛下，使4-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]苯甲酸(化合物14，CAS：162046-66-4)(0.4g，1.3mmol)和DIPEA(653.0μL，3.8mmol，3.0当量)悬浮于NMP(5.0mL)中。在室温下慢慢地向该悬浮液中滴加HATU(713.0mg，1.9mmol，1.5当量)。搅拌5分钟后，向反应液中滴加2,2,2-三氟乙基胺(196.0μL，2.5mmol，2.0当量)。将所得的反应溶液在室温搅拌15小时。
反应结束后，在室温向反应液中滴加水(40mL)，使用加热块将反应液在80℃搅拌5分钟。将所得的悬浮溶液从加热块取下，在室温下搅拌10分钟。将所得的沉淀使用桐山漏斗过滤。将所得的固体用水(20mL)清洗5次，用混合溶剂(CH3CN-H2O，1：1，20mL)清洗2次。在减压下干燥所得的固体，得到无色固体的标题化合物(4-[4-[(4-氟苯基)甲基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯)(化合物B-044)(406.7mg，84.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：388.1[M+H]+。
保留时间：1.104分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.761(t，J＝6.4Hz，1H)，7.788(d，J＝9.2Hz，2H)，6.984(d，J＝9.2Hz，2H)，4.084-3.996(m，2H)，3.455(t，J＝5.2Hz，4H)，3.265(t，J＝5.2Hz，4H)，1.423(s，9H)。
实施例1-2-3：6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸：化合物AC-012的合成
[化44]
向50mL的梨形烧瓶中加入6-氯哒嗪-3-甲酸(B-R-32，CAS：5096-73-1)(1.0g，6.3mmol)、1-Boc哌嗪(R-9，CAS：57260-71-6)(1.8g，9.5mmol，1.5当量)、DIPEA(3.3mL，18.9mmol，3.0当量)和CH3CN(15mL)，将烧瓶减压脱气后，通过导入氮气将反应混合物内变换为氮气气氛下。将反应液在100℃加热16小时。将反应溶液冷却到室温后，在减压下浓缩反应溶剂。将所得的残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(15-50％，0.1％甲酸CH3CN/0.1％甲酸水溶液)，得到浅黄色无定形的标题化合物(6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸)(AC-012)(1.3g，66.3％)。
LCMS(ESI，m/z)：309.2[M+H]+。
保留时间：0.702分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.011(d，J＝9.8Hz，1H)，6.987(d，J＝9.0Hz，1H)，3.814(bs，4H)，3.616(bs，4H)，1.489(s，9H)。
实施例1-2-4：4-[6-(2,2,2-三氟乙基氨基甲酰基)哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯：化合物B-045的合成
[化45]
在氮气气氛下，使6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸(化合物AC-012)(0.3g，1.0mmol)和DIPEA(523.0μL，3.0mmol，3.0当量)悬浮于NMP(5.0mL)中。在室温下慢慢地向该悬浮液中加入HATU(570.0mg，1.5mmol，1.5当量)。搅拌5分钟后，向反应液中滴加2,2,2-三氟乙基胺(196.0μL，2.5mmol，2.5当量)。将所得的反应溶液在室温搅拌15小时。
反应结束后，在室温向反应液中滴加水(40mL)，使用加热块将反应液在80℃搅拌5分钟。将所得的悬浮溶液从加热块取下，在室温下搅拌10分钟。将所得的沉淀使用桐山漏斗过滤。将所得的固体用水(20mL)清洗5次，用混合溶剂(CH3CN-H2O，1：1，20mL)清洗2次。在减压下干燥所得的固体，得到无色固体的标题化合物(4-[6-(2,2,2-三氟乙基氨基甲酰基)哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯)(化合物B-045)(259.0mg，66.5％)。
LCMS(ESI，m/z)：390[M+H]+。
保留时间：1.029分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.399(t，J＝6.4Hz，1H)，7.895(d，J＝9.6Hz，1H)，7.366(d，J＝9.6Hz，1H)，4.118-4.029(m，2H)，3.744(t，J＝5.4Hz，4H)，3.480(t，J＝5.4Hz，4H)，1.432(s，9H)。
实施例1-2-5：2-氟-N-(2-氟苯基)苯胺：B-046的合成
[化46]
在氮气气氛下向10mL小瓶中加入2-氟溴苯(B-R-22)(273.0μL，2.5mmol)、2-氟苯胺(B-R-23)(290.0μL，3.0mmol，1.2当量)、Xantphos Pd G4(96.0mg，0.1mmol，4mol％)、NaOtBu(360.0mg，3.7mmol，1.5当量)和1,4-二氧六环(5.0mL)，将反应混合物在100℃搅拌21小时。用硅藻土过滤反应液，用乙酸乙酯(20mL)清洗4次，在减压下浓缩滤液。将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～20％乙酸乙酯/己烷)，得到无色油的标题化合物(2-氟-N-(2-氟苯基)苯胺)(化合物B-046)(375.3mg，73.2％)。
LCMS(ESI，m/z)：205.9[M+H]+。
保留时间：1.236分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.719(bs，1H)，7.207(dd，J＝8.2，1.4Hz，1H)，7.177(dd，J＝8.2，1.4Hz，1H)，7.071(ddd，J＝7.4，7.4，1.4Hz，2H)，7.015-6.917(m，4H)。
实施例1-2-6：N-苯基吡啶-3-胺：B-047的合成
[化47]
使用3-溴吡啶(B-R-24)(241.0μL，2.5mmol)、苯胺(B-R-25)(273.0μL，3.0mmol，1.2当量)，利用与实施例1-2-5同样的方法进行合成，得到灰白色固体的标题化合物(N-苯基吡啶-3-胺)(化合物B-047)(358.0mg，84.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：170.9[M+H]+。
保留时间：0.471分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.335(bs，2H)，8.019(dd，J＝4.6，1.4Hz，1H)，7.457(ddd，J＝8.0，1.4，1.4Hz，1H)，7.290-7.205(m，3H)，7.103-7.082(m，2H)，6.905-6.866(m，1H)。
实施例1-2-7：N-苯基嘧啶-5-胺：B-048的合成
[化48]
使用5-溴嘧啶(B-R-26)(397.0mg，2.5mmol)、苯胺(B-R-25)(273.0μL，3.0mmol，1.2当量)，利用与实施例1-2-5同样的方法进行合成，得到茶色固体的标题化合物(N-苯基嘧啶-5-胺)(化合物B-048)(73.9mg，17.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：171.9[M+H]+。
保留时间：0.725分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.630(s，1H)，8.54.0(s，2H)，8.522(s，1H)，7.304(dd，J＝8.0，7.2Hz，2H)，7.148(d，J＝8.0Hz，2H)，6.954(t，J＝7.2Hz，1H)。
实施例1-2-8：N-吡啶-3-基吡啶-3-胺：B-049的合成
[化49]
使用3-溴吡啶(B-R-24)(241.0μL，2.5mmol)、3-氨基吡啶(B-R-27)(282.0mg，3.0mmol，1.2当量)，利用与实施例1-2-5同样的方法进行合成，得到茶色固体的标题化合物(N-吡啶-3-基吡啶-3-胺)(化合物B-049)(354.8mg，83.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：172[M+H]+。
保留时间：0.136分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.536(s，1H)，8.370(d，J＝2.4Hz，2H)，8.090(dd，J＝4.7，1.4Hz，2H)，7.504(ddd，J＝8.2，1.4，1.4Hz，2H)，7.266(dd，J＝8.2，4.7Hz，2H)。
实施例1-2-9：N-苯基吡啶-2-胺：B-050的合成
[化50]
使用2-溴吡啶(B-R-28)(238.0μL，2.5mmol)、苯胺(B-R-25)(273.0μL，3.0mmol，1.2当量)，利用与实施例1-2-5同样的方法进行合成，得到灰白色固体的标题化合物(N-苯基吡啶-2-胺)(化合物B-050)(57.5mg，13.5％)。
LCMS(ESI，m/z)：170.9[M+H]+。
保留时间：0.434分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.980(s，1H)，8.144(dd，J＝5.0，1.0Hz，1H)，7.675(d，J＝9.6Hz，2H)，7.569-7.526(m，1H)，7.252(dd，J＝7.6，7.6Hz，2H)，6.892-6.853(m，1H)，6.830(d，8.0Hz、1H)，6.742-6.711(m，1H)。
实施例1-2-10：5-(4-甲基苯基)吡啶-2-胺：B-051的合成
[化51]
在氮气气氛下向12mL小瓶中加入2-氨基-5-溴吡啶(B-R-30)(346.0mg，2.0mmol)、对甲苯硼酸(B-R-29)(326.0mg，2.4mmol，1.2当量)、PdCl2(dppf)·DCM(82.0mg，0.1mmol，5mol％)、K2CO3(691.0mg，5.0mmol，2.5当量)、1,4-二氧六环(7.0mL)和H2O(1.0mL)，将反应混合物在100℃搅拌3小时。用硅藻土过滤反应液，用乙酸乙酯(20mL)清洗4次，在减压下浓缩滤液。将残渣用氨基修饰硅胶柱色谱进行纯化(0～100％乙酸乙酯/己烷)，得到灰白色固体的标题化合物(5-(4-甲基苯基)吡啶-2-胺)(化合物B-051)(282.3mg，77.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：184.9[M+H]+。
保留时间：0.580分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.205(d，J＝2.5Hz，1H)，7.656(dd，J＝8.6，2.5Hz，1H)，7.441(d，J＝8.0Hz，2H)，7.203(d，J＝8.0Hz，2H)，6.511(d，J＝8.6Hz，1H)，5.993(s，2H)，2.308(s，3H)。
实施例1-2-11：6-(4-甲基苯基)吡啶-3-胺：B-052的合成
[化52]
使用3-氨基-6-溴吡啶(B-R-31)(346.0mg，2.0mmol)，利用与实施例1-2-10同样的方法进行合成，得到灰白色固体的标题化合物(6-(4-甲基苯基)吡啶-3-胺)(化合物B-052)(246.7mg，66.9％)。
LCMS(ESI，m/z)：185.0[M+H]+。
保留时间：0.527分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.013(d，J＝2.6Hz，1H)，7.804(d，J＝8.2Hz，2H)，7.576(d，J＝8.4Hz，1H)，7.190(d，J＝8.2Hz，2H)，6.985(dd，J＝8.4，2.6Hz，1H)，5.399(s，2H)，2.310(s，3H)。
实施例1-2-12：4-哌嗪-1-基苯甲酸烯丙酯：BB27的合成
[化53]
向50mL的梨形烧瓶中加入烯丙醇(10mL)和KOtBu(96.0mg，0.8mmol，0.2当量)，在氮气气氛下搅拌10分钟。向该混合物中一次性地加入4-哌嗪-1-基苯甲酸乙酯化合物(B-R-32，CAS：80518-57-6)(1.0g，4.3mmol，1.0当量)，将所得的混合物在100℃加热1小时。将反应溶液冷却到室温后，在减压下浓缩反应溶剂。向所得的残渣中加入烯丙醇(12mL)并在100℃进一步加热16.5小时。将反应溶液冷却到室温后，在减压下浓缩反应溶剂。将所得的残渣用氨基修饰硅胶柱色谱进行纯化(50-100％乙酸乙酯/己烷)，得到无色蜡状固体的标题化合物(4-哌嗪-1-基苯甲酸烯丙酯)(BB27)(720mg，69.0％)。
LCMS(ESI，m/z)：247.1[M+H]+。
保留时间：0.595分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.795(d，J＝9.0Hz，2H)，6.956(d，J＝9.0Hz，2H)，6.072-5.977(m，1H)，5.387-5.332(m，1H)，5.262-5.225(m，1H)，4.737-4.716(m，2H)，3.229-3.204(m，4H)，2.816-2.790(m，4H)，2.323(bs，1H)。
实施例1-3：模型底物的乙基化体标准物质：B-053～B075的合成
利用实施例1-3-1至1-3-4所示的4种方法合成模型底物的乙基化体标准物质，利用LCMS进行保留时间的测定和质谱分析。
实施例1-3-1：使用NaH作为碱的乙基化反应：合成法A
作为使用NaH作为碱的乙基化反应的代表例给出针对模型底物(4-[4-(2,2,2-三氟乙基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯：B-044)的反应。
[化54]
在氮气气氛下，向1.5mL玻璃小瓶中加入4-[4-(2,2,2-三氟乙基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(B-044)(39.0mg，0.1mmol)和NMP(0.5mL)。在室温下向该溶液中加入NaH(6.0mg，0.15mmol，1.5当量)。搅拌5分钟后，向反应液中加入碘乙烷(20.0μL，0.25mmol，2.5当量)。将所得的反应溶液在室温搅拌2小时。
反应追踪
从反应开始起经过2小时时，在手套袋中对反应液取样5μL后用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。利用LCMS进行保留时间的测定和质谱分析。
依照合成法A，使用表1-3所示的底物量、溶剂进行反应，利用LCMS进行保留时间的测定和质谱分析。
实施例1-3-2：使用K2CO3作为碱的乙基化反应：合成法B
作为使用K2CO3作为碱的乙基化反应的代表例给出针对试剂(N-丁基苯胺：B-R-11)的反应。
[化55]
在氮气气氛下，向2.0mL玻璃小瓶中加入N-丁基苯胺(B-R-11)(75.0mg，0.5mmol)、K2CO3(104.0mg，0.75mmol，1.5当量)和NMP(1.3mL)。向该悬浮液中加入碘乙烷(48.0μL，0.6mmol，1.2当量)。将所得的反应溶液在100℃搅拌3小时。
反应追踪
从反应开始起经过3小时时，在手套袋中对反应液取样5μL后用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。利用LCMS进行保留时间的测定和质谱分析。
依照合成法B，在表1-3所示的底物量、溶剂、反应温度下进行反应，利用LCMS进行保留时间的测定和质谱分析。
实施例1-3-3：不使用碱的乙基化反应：合成法C
[化56]
在氮气气氛下，向2.0mL玻璃小瓶中加入N,N-二甲基苄基胺(B-R-15)(68.0mg，0.5mmol)和CH3CN(1.0mL)。向该悬浮液中加入碘乙烷(20.0μL，0.25mmol，0.5当量)。将所得的反应溶液在80℃搅拌1.5小时。
反应追踪
从反应开始起经过1.5小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。利用LCMS进行保留时间的测定和质谱分析。
实施例1-3-4：使用KtOBu作为碱的乙基化反应：合成法D
作为使用KtOBu作为碱的乙基化反应的代表例给出针对试剂(苄醇：B-R-16)的反应。
[化57]
在氮气气氛下，在3.0mL玻璃小瓶中，向苄醇(B-R-16)(27.0mg，0.25mmol)和THF(1.0mL)的溶液中加入KOtBu(34.0mg，0.3mmol，1.2当量)并搅拌5分钟。向所得的反应液中加入碘乙烷(40.0μL，0.5mmol，2.0当量)，将反应溶液在室温搅拌1小时。
反应追踪
从反应开始起经过1小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。利用LCMS进行保留时间的测定。
依照合成法D，以表1-3所示的底物量进行反应，利用LCMS进行保留时间的测定。
将它们的结果表示于表1-3中。
[表6]
[表1-3]
[表7]
[M]+
需要说明的是，表1-3中，Run1、2的乙基化体以N-乙基体的形式表述，然而也有O-乙基体的可能性。另外，在Run5～10中也以二芳基胺-N-乙基体的形式表述，然而由于有2个以上的反应点，因此也有N-乙基体以外的可能性。特别是在Run5～8中，由于观测到2种单乙基体，因此表述有2个保留时间。
实施例1-4：联烯醇化合物B-080(6-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺)的合成法
[化58]
第一工序：4-[6-[(4-甲氧基苯基)氨基甲酰基]哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯：化合物30的合成
在氮气气氛下向200mL烧瓶中加入6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸(化合物18)(6.0g，19.5mmol，1.0eq)、4-甲氧基苯胺(2.4g，19.5mmol，1.0eq)和DCM(60mL)。向该溶液中加入EDCI·HCl(7.5g，38.9mmol，2.0eq)、DMAP(2.4g，19.5mmol，1.0eq)和DIPEA(1.0g，77.8mmol，4.0eq)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和NH4Cl水溶液(50mL)，用DCM(100mL)萃取3次。将有机溶剂混合，用Na2SO4干燥后过滤，在减压下浓缩滤液。
将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～60％乙酸乙酯/石油醚)，以黄色固体的形式得到4-[6-[(4-甲氧基苯基)氨基甲酰基]哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物30)(1.4g，16.5％)。
LCMS(ESI，m/z)：414[M+H]+。
保留时间：1.283分钟。
分析条件：PH-TFA-14。
第二工序：N-(4-甲氧基苯基)-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺：化合物31的合成
在氮气气氛下向100mL烧瓶中加入4-[6-[(4-甲氧基苯基)氨基甲酰基]哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(化合物30)(1.4g，3.4mmol，1.0eq)和DCM(30mL)。向该溶液中加入4M-HCl的1,4-二氧六环溶液(20mL)，将所得的反应混合物在室温搅拌16小时。在减压下浓缩反应液，将所得的残渣溶解于水(20mL)中，使用氨水将pH调节为8-9的碱性。过滤析出的固体，将所得的固体用水(20mL)清洗3次。将回收的固体在减压下使用恒温干燥机在50℃干燥16小时，以黄色固体的形式得到N-(4-甲氧基苯基)-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(化合物31)(890mg)。将所得的固体不进行进一步的纯化地用于下一工序。
LCMS(ESI，m/z)：314[M+H]+。
保留时间：0.915分钟。
分析条件：PH-TFA-14。
第三工序：6-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺：化合物32的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入N-(4-甲氧基苯基)-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(化合物31)(0.9g，2.9mmol，1.0eq)和EtOH/DMSO(9.0mL/9.0mL)的混合溶液。向该溶液中加入2-溴苯甲醛(1.1g，5.7mmol，2.0eq)和AcOH(0.5mL，7.5mmol，2.7eq)，将所得的反应混合物在35℃搅拌16小时。向该反应液中加入NaBH3CN(361mg，5.7mmol，2.0eq)，在35℃搅拌16小时。在减压下浓缩反应液，将所得的残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～60％乙酸乙酯/石油醚)，以灰白色固体的形式得到6-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺(化合物32)(0.9g，59.8％)。
LCMS(ESI，m/z)：482，484[M+H]+。
保留时间：1.429分钟。
分析条件：PH-AC-04。
第四工序：6-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺：联烯醇化合物B-080的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入6-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺(化合物32)(1.4g，2.9mmol，1.0eq)、3-羟基苯硼酸(1.6g，11.6mmol，4.0eq)、Na2CO3(922.8mg，8.7mmol，3.0eq)与DMF/H2O(14.0mL/1.4mL)的混合溶液。向该悬浮液中加入PdCl2(dppf)(127.4mg，0.2mmol，0.06eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌16小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(50mL)清洗3次。将滤液用水(50mL)清洗3次，用Na2SO4干燥。过滤固体后在减压下浓缩滤液。将残渣用硅胶柱色谱进行纯化(0～10％MeOH/DCM)，以黄色固体的形式得到6-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺(B-080)(564.9mg，38.5％)。
LCMS(ESI，m/z)：496[M+H]+。
保留时间：1.381分钟。
分析条件：PH-TFA-15。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.57(s，1H)，9.45(s，1H)，7.92(d，J＝9.6Hz，1H)，7.87-7.76(m，2H)，7.57(d，J＝7.2Hz，1H)，7.39-7.31(m，3H)，7.24-7.20(m，2H)，6.97-6.87(m，2H)，6.84-6.72(m，3H)，3.74-3.70(m，6H)，3.45(s，2H)，2.48-2.43(m，4H)。
实施例1-5：羧酸化合物B-082(3-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]苯甲酸)的合成法
[化59]
3-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]苯甲酸：羧酸化合物B-082的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物25)(0.4g，0.6mmol，1.0eq)、3-羧基苯硼酸(186.8mg，1.1mmol，2.0eq)、Na2CO3(179.0mg，1.7mmol，3.0eq)与DMF/H2O(8.0mL，10：1)的混合溶液。向该悬浮液中加入Pd(PPh3)2Cl2(39.5mg，0.06mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌3小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(50mL)清洗3次。将滤液用水(50mL)清洗3次，用Na2SO4干燥。过滤固体后在减压下浓缩滤液。将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～45％CH3CN/0.1％NH4HCO3水溶液)，进一步利用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～30％CH3CN/0.1％甲酸水溶液)，以黄色固体的形式得到3-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]苯甲酸(B-082)(138.3mg，32.3％)。
LCMS(ESI，m/z)：752[M+H]+。
保留时间：1.171分钟。
分析条件：PH-TFA-16。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.93(s，1H)，11.92(s，1H)，8.73(t，J＝6.0Hz，1H)，8.56(d，J＝2.3Hz，1H)，8.12(t，J＝1.8Hz，1H)，7.94-7.86(m，2H)，7.73-7.61(m，3H)，7.59-7.47(m，2H)，7.42-7.14(m，9H)，6.89-6.86(m，2H)，3.67-3.60(m，2H)，3.36-3.24(m，8H)，2.48-2.41(m，4H)。
实施例1-6：羧酸化合物B-084(5-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]吡啶-3-甲酸)的合成法
[化60]
第一工序：5-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]吡啶-3-甲酸甲酯：化合物33的合成
在氮气气氛下向50mL烧瓶中加入4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物25)(0.2g，0.3mmol，1.0eq)、(5-甲氧基羰基吡啶-3-基)硼酸(0.3g，1.4mmol，5.0eq)、Na2CO3(89.5mg，0.8mmol，3.0eq)与DMF/H2O(4.0mL，10：1)的混合溶液。向该悬浮液中加入Pd(PPh3)2Cl2(19.8mg，0.03mmol，0.1eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在80℃搅拌16小时。冷却到室温后将反应液用硅藻土过滤，将硅藻土用乙酸乙酯(25mL)清洗3次。将滤液用水(25mL)清洗3次，用Na2SO4干燥。过滤固体后在减压下浓缩滤液。将残渣利用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(5～70％CH3CN/0.1％甲酸水溶液)，以黄色固体的形式得到5-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]吡啶-3-甲酸甲酯(化合物33)(193.0mg，89.6％)。
LCMS(ESI，m/z)：767[M+H]+。
保留时间：0.823分钟。
分析条件：PH-FA-08。
第二工序：5-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]吡啶-3-甲酸：羧酸化合物B-084的合成
在氮气气氛下向30mL烧瓶中加入5-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]吡啶-3-甲酸甲酯(化合物33)(0.4g，0.5mmol，1.0eq)和THF(8.0mL)。向该反应液中加入LiOH水溶液(2mL，62.5mg，2.6mmol，5eq)，将所得的反应混合物在氮气气氛下在50℃搅拌1.5小时。冷却到室温后在减压下浓缩反应液。将残渣用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～45％CH3CN/0.1％NH4HCO3水溶液)，进一步利用反相硅胶柱色谱(C18)进行纯化(0～30％CH3CN/0.1％甲酸水溶液)，以黄色固体的形式得到5-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]吡啶-3-甲酸(B-084)(100.0mg，25.2％)。
LCMS(ESI，m/z)：753[M+H]+。
保留时间：1.428分钟。
分析条件：PH-TFA-17。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ13.37(s，1H)，11.98(s，1H)，9.04(d，J＝2.0Hz，1H)，8.81-8.78(m，2H)，8.57-8.54(m，2H)，7.88(dd，J＝9.2，2.3Hz，1H)，7.71(d，J＝8.8Hz，2H)，7.45-7.33(m，6H)，7.27-7.13(m，4H)，6.89-6.86(m，2H)，3.67-3.61(m，2H)，3.36-3.22(m，8H)，2.48-2.40(m，4H)。
实施例2：对在分子中具有各种官能团的底物进行的联烯醇的O-选择性甲基化研 究
实施例2-1：使用化合物B-001：N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲 基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(苯酚)作为底物的各种甲基化剂的研究
在对具有各种官能团的底物进行联烯醇的O-选择性甲基化的情况下，甲基化剂(亲电试剂)的选择是重要的。首先对能够应用的甲基化剂的范围进行确认。需要说明的是，本说明书中，在记作“苯酚”的情况下，在表示苯酚本身的基础上，有时还将在苯酚骨架的任意的部位附加有任意的取代基的化合物记作“苯酚”。
实施例2-1-1：使用了三甲基苯基氯化铵B-R-01的苯酚的甲基化
[化61]
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-001)(2.7mg，5.0μmol，1.0当量)和DMF(50.0μL)。向所得的溶液中加入K2CO3(2.1mg，15.0μmol，3.0当量)并混合15～20秒后，加入三甲基苯基氯化铵(B-R-01)(4.3mg，25.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物在80℃以1400rpm搅拌。需要说明的是，rpm是“rotations per minute”的简写，表示1分钟的转速。所谓“以1400rpm搅拌”表示以1分钟内1400转进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过3小时时，在氮气气氛下对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表2-1、Run1所示。
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(4-甲氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-018。
LCMS(ESI，m/z)：556[M+H]+。
保留时间：0.62分钟(分析条件SQD-FA05-2)。
(原料ArOH的保留时间为0.55分钟(分析条件SQD-FA05-2)。)
实施例2-1-2：使用了碳酸二甲酯B-R-02、磷酸三甲酯B-R-03、对甲苯磺酸甲酯B- R-04的苯酚的甲基化
利用与实施例2-1-1同样的方法，取代三甲基苯基氯化铵(B-R-01)而分别使用碳酸二甲酯(B-R-02)(2.3mg，25.0μmol，5.0当量)、磷酸三甲酯(B-R-03)(2.9μL，25.0μmol，5.0当量)、对甲苯磺酸甲酯(B-R-04)(4.7mg，25.0μmol，5.0当量)进行反应。
反应追踪
利用与实施例2-1-1同样的方法测定出反应进度。
将反应进度的结果表示于表2-1中。
[表8]
[表2-1]
根据以上的结果可以确认，作为一般性甲基化剂使用的对甲苯磺酸甲酯(B-R-04)因其高反应性而使官能团选择性降低，在底物内2个部位被甲基化(对于在分子的哪个位置将2个部位甲基化没有鉴定)。因此，可以确认基于本目的的对甲苯磺酸甲酯(B-R-04)的使用是不合适的(表2-1、Run4)。另一方面，对于甲基铵盐、磷酸三甲酯、碳酸二甲酯，确认即使在分子内具有叔胺、酰基磺酰胺的底物中也能够实现高选择性的联烯醇的O-甲基化(表2-1、Run1～3)。
实施例2-2：使用化合物B-002：N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯 基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(吡啶酚)作为底物的各种甲基化剂与碱的组合研究
在实施例2-1中，可以确定适合的甲基化剂的范围。本实施例中，使用与底物B-001(苯酚)相比进一步增加了其他官能团的种类的底物B-002(吡啶酚)，对确定了的范围的甲基化剂及碱进行确认。
需要说明的是，本说明书中，在记作“吡啶酚”的情况下，是指在吡啶环的任意的碳上具有羟基的化合物。此时，也指在构成吡啶环的该碳以外的碳上附加有任意的取代基的化合物。
实施例2-2-1：使用了三甲基苯基氯化铵(B-R-01)的吡啶酚B-002：N-苄基磺酰基- 4-[4-[[2-(4-甲氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺的甲基化(搅拌子的大小与基 于转速的差别的转换率的相关性)(表2-2、Run1(350rpm))
[化62]
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(4-甲氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-002)(3.8mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入Cs2CO3(6.8mg，21.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入三甲基苯基氯化铵(B-R-01)(6.0mg，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以350rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过3小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-甲氧基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-019。
LCMS(ESI，m/z)：557.2[M+H]+。
保留时间：0.745分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.648分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基-1-甲基吡啶-1-鎓-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-020。
LCMS(ESI，m/z)：557.2[M+H]+。
保留时间：0.600分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
实施例2-2-2：使用了三甲基苯基氯化铵B-R-01的吡啶酚B-002：N-苄基磺酰基-4- [4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺的甲基化(搅拌子的大小与基 于转速的差别的转换率的相关性)(表2-2、Run2(1400rpm))
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-002)(3.8mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入Cs2CO3(6.8mg，21.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入三甲基苯基氯化铵(B-R-01)(6.0mg，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以1400rpm的转速在80℃搅拌3小时。
反应追踪
利用与实施例2-2-1同样的方法测定出反应进度。
实施例2-2-3：使用了三甲基苯基氯化铵B-R-01的吡啶酚B-002：N-苄基磺酰基-4- [4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺的甲基化(磷腈碱研究)(表2- 2、Run3-5)
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-002)(3.8mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入磷腈碱P1tBu(5.3μL，21.0μmol，3.0当量，Run3)，在确认混合后，加入三甲基苯基氯化铵(B-R-01)(6.0mg，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以1400rpm的转速在80℃搅拌3小时。
需要说明的是，也同样地实施了取代上记磷腈碱P1tBu而使用BEMP(6.1μL，21.0μmol，3.0当量，Run4)、或P2Et(7.0μL，21.0μmol，3.0当量，Run5)的反应。
反应追踪
利用与实施例2-2-1同样的方法测定出反应进度。
实施例2-2-4：使用P2Et作为碱的吡啶酚B-002：N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基 吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：的甲基化(甲基化剂研究)(表2-2、Run6-7)
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-002)(3.8mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入P2Et(7.0μL，21.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，向小瓶中加入磷酸三甲酯(B-R-03)(4.1μL，35.0μmol，5.0当量，Run6)作为甲基化剂。将所得的反应混合物以1400rpm的转速在80℃搅拌表2-2所示的反应时间。
需要说明的是，也同样地实施了取代上记磷酸三甲酯(B-R-03)而使用碳酸二甲酯(B-R-02)(3.0μL，35.0μmol，5.0当量，Run7)的反应。
反应追踪
利用与实施例2-2-1同样的方法测定出反应进度。
将反应进度的结果表示于表2-2中。需要说明的是，表2-2中表述的CH3CN中的pKBH+值转引自Aldrich公司网Phosphazene Bases站点(https://www.sigmaaldrich.com/chemistry/chemical-synthesis/technology-spotlights/phosphazenes.html)(2020年12月2日阅览)。
[表9]
[表2-2]
a:5mm搅拌棒，350rpm
根据本结果显示，在使用碳酸铯作为碱时，虽然加入的碱没有完全溶解，然而利用搅拌数的控制可以提高反应速度的再现性(表2-2、Run1&2)。另一方面，通过使用完全溶解的有机碱，可以去除对于反应的再现性的担心(表2-2、Run3～7)。
另外显示，在作为甲基化剂的甲基铵盐、磷酸三甲酯、碳酸二甲酯、作为碱的碳酸盐、磷腈碱的各种组合中，可以提供良好的结果(表2-2、Run5～7)。
特别是在使用三甲基苯基铵盐或磷酸三甲酯作为甲基化剂、使用Cs2CO3或P2Et作为碱时，在3小时以内反应结束，可以确认目的物(化合物B-019)和N-甲基化体(化合物B-020)的选择性良好(表2-2、Run2、5、6)。
实施例2-3：使用化合物B-003：N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙 炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(吡啶酚)作为底物的甲基化的研究
对于实施例2-2中确认的甲基化的反应条件，进一步使用底物B-003：N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺确认反应的官能团选择性。
[化63]
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)(4.1mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入P2Et(7.0μL，21.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三甲酯(B-R-03)(4.1μL，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以1400rpm的转速在80℃搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过2小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定(分析条件SMD-FA05-1)而测定出反应进度。其结果是，确认目的物(B-021)的生成为89.1area％、N-甲基化体(B-022)的生成为8.3area％。
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-甲氧基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-021。
LCMS(ESI，m/z)：596.1[M+H]+。
保留时间：1.011分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.888分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基-1-甲基吡啶-1-鎓-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-022。
LCMS(ESI，m/z)：596.1[M+H]+。
保留时间：0.714分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
以上的结果显示，在使用了包含乙炔基、吡啶环的底物B-003(吡啶酚：N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺)的情况下，本反应条件也能够作为高选择性的联烯醇的O-甲基化法应用。
以上显示，在实施例2中，对于具有多个能够被甲基化的官能团(具体而言为吡啶环、叔胺、酰基磺酰胺)的底物，能够实现联烯醇的O-选择性甲基化。该结果显示，不仅适用于在分子内具有各种官能团的单一的底物，而且对于包含含有这些官能团组的多个底物的化合物库而言也能够实现高选择性的O-选择性甲基化。
实施例3：对在分子中具有各种官能团的底物进行的联烯醇的O-选择性乙基化研 究
可以像实施例2中所示那样通过使用有机碱/三甲基铵盐或磷酸三甲酯作为甲基化剂来实现联烯醇的O-选择性甲基化。基于该见解，使用铵盐、磷酸三乙酯对O-选择性乙基化进行了研究。
实施例3-1：使用化合物B-002：N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯 基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(吡啶酚)作为底物的吡啶酚的O-选择性乙基化
实施例3-1-1：使用铵盐作为乙基化剂的化合物B-002：N-苄基磺酰基-4-[4-[[2- (5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(吡啶酚)的O-选择性乙基化
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-002)(3.8mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入P2Et(7.0μL，21.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入三乙基苯基碘化铵(B-R-07)(10.7mg，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
从反应开始起经过9.5小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-1、Run1中所示。
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-023。
LCMS(ESI，m/z)：571.2[M+H]+。
保留时间：0.789分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.658分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(1-乙基-5-羟基吡啶-1-鎓-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-024。
LCMS(ESI，m/z)：571.2[M+H]+。
保留时间：0.626分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
实施例3-1-2：使用磷酸三乙酯作为乙基化剂的底物B-002：N-苄基磺酰基-4-[4- [[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟 基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(吡啶酚)的O-选择性乙基化
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-002)(3.8mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入P2Et(7.0μL，21.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(6.0μL，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过1、2.5、5、19小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-1、Run2中所示。
实施例3-1-3：使用体积大的作为磷腈碱的P2tBu、并使用磷酸三乙酯作为乙基化 剂的底物B-002：N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲 酰胺(吡啶酚)的O-选择性乙基化
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-002)(3.8mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入P2tBu(10.5μL，2.0mol/L，21.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(6.0μL，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过1、2.5、5、21小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-1、Run3中所示。
需要说明的是，表3-1中表述的CH3CN中的pKBH+值转引自Aldrich公司网Phosphazene Bases站点(https://www.sigmaaldrich.com/chemistry/chemical-synthesis/technology-spotlights/phosphazenes.html)(2020年12月2日阅览)。
需要说明的是，表3-1中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体(B-023)的area％)/(N-乙基化体(B-024)的area％)算出。
将实施例3-1的结果表示于表3-1中。
[表10]
[表3-1]
如表3-1中所示，在使用了磷酸三乙酯/P2Et的反应条件中，底物B-002实现了O-选择性乙基化(表3-1、Run2)。另外，通过使用碱性(pKBH+值)为相同程度且与P2Et相比体积更大的P2tBu作为碱，也可以实现O-选择性乙基化(表3-1、Run3)。
需要说明的是，在上记条件下还确认O-选择性随时间推移而提高。虽然并不限定于特定的理论，然而认为该选择性提高源于如下的结果，即，在反应体系中N-乙基化体B-024因碱的作用而推进脱离反应，其结果是，被转变为作为原料的B-002，再次进行O-乙基化。
实施例3-2：使用化合物B-004：N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基) 苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺作为底物的吡啶酚的O-选择性乙基化
[化65]
实施例3-2-1：使用铵盐作为乙基化剂的底物B-004：N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟- 4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺)(吡啶酚)的O-选择性乙基化
在进行了氮气置换的手套袋中，在0.6mL的螺帽小瓶中使用N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺)(B-004)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)，利用与实施例3-1-1同样的方法实施反应，测定出反应进度。结果如表3-2、Run1中所示。
N-苄基磺酰基-4-[4-[4-(5-乙氧基吡啶-3-基)-3-氟苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-025。
LCMS(ESI，m/z)：603.2[M+H]+。
保留时间：1.052分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.831分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
N-苄基磺酰基-4-[4-[4-(1-乙基-5-羟基吡啶-1-鎓-3-基)-3-氟苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-026。
LCMS(ESI，m/z)：603.2[M+H]+。
保留时间：0.756分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
实施例3-2-2：使用磷酸三乙酯作为乙基化剂的底物B-004：吡啶酚，N-苄基磺酰 基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺的O-选择性乙基化
在进行了氮气置换的手套袋中，在0.6mL的螺帽小瓶中使用吡啶酚、即N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)，利用与实施例3-1-2同样的方法实施反应，测定出反应进度。结果如表3-2、Run2中所示。
将实施例3-2的结果表示于表3-2中。需要说明的是，表3-2中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体(B-025)的area％)/(N-乙基化体(B-026)的area％)算出。
[表11]
[表3-2]
如表3-2中所示，在使用了磷酸三乙酯/P2Et的反应条件下，显示底物B-004也能够实现O-选择性乙基化(表3-2、Run2)。虽然并不限定于特定的理论，然而认为相对于底物B-002，底物B-004的吡啶因相邻的苯环上的氟基及酰胺基(羰基)的影响而更加电子不足，由于该影响而抑制了N-乙基化。其结果是，O-选择性与以B-002作为底物的情况相比提高。
实施例3-3：使用底物B-003：N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔 基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺、B-005：N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶- 3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺作为具有乙炔官能团的化合物的吡 啶酚的O-选择性乙基化
[化66]
实施例3-3-1：使用磷酸三乙酯作为乙基化剂的底物B-005：N-苄基磺酰基-6-[4- [5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(吡啶酚)的O- 选择性乙基化
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-005)(4.1mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入P2Et(7.0μL，21.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(6.0μL，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过3、5、20小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-3、Run1中所示。
N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：化合物B-027。
LCMS(ESI，m/z)：612.1[M+H]+。
保留时间：1.014分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.831分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-(1-乙基-5-羟基吡啶-1-鎓-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：化合物B-028。
LCMS(ESI，m/z)：612.2[M+H]+。
保留时间：0.693分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
化合物B-031(B-027-P2Et加成物：显示出在B-027加成有P2Et的MS(精确分子量：951.44)的化合物，结构未确定)。
LCMS(ESI，m/z)：951.4[M]+。
保留时间：0.909分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
实施例3-3-2：使用P2Et作为碱的基于磷酸三乙酯的底物B-003：N-苄基磺酰基-4- [4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(吡啶酚)的O-选 择性乙基化
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)(4.1mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入P2Et(7.0μL，21.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(6.0μL，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过2.5、5、21小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-3、Run2中所示。
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-029。
LCMS(ESI，m/z)：610.2[M+H]+。
保留时间：1.069分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.889分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(1-乙基-5-羟基吡啶-1-鎓-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-030。
LCMS(ESI，m/z)：610[M+H]+。
保留时间：0.737分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
化合物B-032(B-029-P2Et加成物：显示出在B-029加成有P2Et的MS(精确分子量：949.45)的化合物，结构未确定)。
LCMS(ESI，m/z)：949.4[M]+。
保留时间：0.929分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
根据实施例3-3-1及实施例3-3-2的结果，当对这些具有乙炔的底物(B-005，B-003)使用P2Et作为碱进行乙基化时，虽然结构未确定，然而观测到推测为在目标化合物的O-乙基化体B-027、或B-029加成有P2Et的副产物(分别为B-031、或B-032)。为了避免这些副反应，使用共轭酸的pKa(pKBH+)为与P2Et相同程度、体积大的P2tBu作为碱研究乙基化。
实施例3-3-3：使用体积大的作为磷腈碱的P2tBu、并使用磷酸三乙酯作为乙基化 剂的底物B-003：N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌 嗪-1-基]苯甲酰胺(吡啶酚)的O-选择性乙基化(避免碱加成物的生成)
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)(4.1mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向所得的溶液中加入P2tBu(10.5μL，2mol/L，21.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(6.0μL，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过2.5、5、21小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-3、Run3中所示。
将实施例3-3的结果表示于表3-3中。需要说明的是，表3-3中表述的CH3CN中的pKBH+值转引自Aldrich公司网Phosphazene Bases站点(https://www.sigmaaldrich.com/chemistry/chemical-synthesis/technology-spotlights/phosphazenes.html)(2020年12月2日阅览)。
需要说明的是，表3-3中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体的area％)/(N-乙基化体的area％)算出。
[表12]
[表3-3]
如表3-3、Run3中所示，显示通过使用体积大的碱能够避免被认为是由磷腈碱向乙炔的加成反应所致的杂质(B-032)的生成，并且能够实现O-选择性乙基化。
实施例3-4：乙基化时的对酰胺基的选择性的确认实验
确认此前给出的基于与磷酸三乙酯/磷腈碱的组合的联烯醇的O-选择性乙基化条件是否能够在酰胺基存在下实施。具体而言，不是像实施例3-1～3-3中确认的那样利用在一个分子内共存有联烯醇和其他官能团的底物进行选择性的评价，此处使用酰胺底物(4-[4-[(4-氟苯基)甲基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯)(B-016)作为模型底物，在能够将联烯醇选择性地乙基化的实施例3-3中发现的条件下，显示酰胺底物B-016无法被乙基化，由此确认。
[化67]
实施例3-4-1：使用P2tBu作为碱、使用磷酸三乙酯作为乙基化剂的4-[4-[(4-氟苯 基)甲基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(B-016)(酰胺模型底物)的乙基化
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入4-[4-[(4-氟苯基)甲基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(B-016)(4.1mg，10.0μmol，1.0当量)和DMF(100.0μL)。向所得的溶液中加入P2tBu(15.0μL，2.0mol/L，30.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(8.5μL，50.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过1.5、3、5小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-4、Run1中所示。
4-[4-[乙基-[(4-氟苯基)甲基]氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯：化合物B-033。
LCMS(ESI，m/z)：442[M+H]+。
保留时间：1.308分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料酰胺的保留时间为1.172分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
实施例3-4-2：使用P2Et作为碱、使用磷酸三乙酯作为乙基化剂的4-[4-[(4-氟苯 基)甲基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(B-016)(酰胺模型底物)的乙基化
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入4-[4-[(4-氟苯基)甲基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(B-016)(4.1mg，10.0μmol，1.0当量)和DMF(100.0μL)。向所得的溶液中加入P2Et(10.0μL，30.0μmol，3.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(8.5μL，50.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过1.5、3、5小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-4、Run2中所示。
实施例3-4-3：使用pKBH+(共轭酸的pKa)为30以下的磷腈(BEMP，P1tBu)作为碱、使 用磷酸三乙酯作为乙基化剂的4-[4-[(4-氟苯基)甲基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁 酯(B-016)(酰胺模型底物)的乙基化
利用与实施例3-4-2同样的方法，取代P2Et而分别使用BEMP(8.7μL，30.0μmol，3.0当量，Run3)、P1tBu(7.6μL，30.0μmol，3.0当量，Run4)进行反应。
反应追踪
利用与实施例3-4-2同样的方法测定出反应进度。结果如表3-4、Run3、4中所示。
将实施例3-4的结果表示于表3-4中。需要说明的是，表3-4中表述的CH3CN中的pKBH+值转引自Aldrich公司网Phosphazene Bases站点(https://www.sigmaaldrich.com/chemistry/chemical-synthesis/technology-sp otlights/phosphazenes.html)(2020年12月2日阅览)。
[表13]
[表3-4]
在如表3-4、Run1&2中所示那样存在pKBH+(共轭酸的pKa)为30以上的碱性高的碱的情况下，酰胺与磷酸三乙酯反应，提供N-或O-乙基化体。这显示出在pKBH+为30以上的碱性条件下酰胺官能团无法耐受乙基化条件。
另一方面，在如Run3&4中所示那样在反应中存在pKBH+为30以下的碱的情况下，不进行酰胺的乙基化。
本实验的结果显示，在底物具有酰胺键的情况下，若使用pKBH+(共轭酸的pKa)为30以下的碱，则即使在共存有酰胺基的底物中也能够进行高选择性的联烯醇的O-选择性乙基化。
实施例3-5：设想为在底物内具有酰胺键的情况下的、乙基化反应的最佳条件确认
使用如实施例3-4中所示的pKBH+(共轭酸的pKa)为30以下的碱，使用N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)和N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)作为底物研究联烯醇的O-选择性乙基化。
实施例3-5-1：使用N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基] 哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)(吡啶酚)作为底物的O-选择性乙基化中的最佳碱研究
[化68]
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向该溶液中加入P1tBu(5.3μL，21.0μmol，3.0当量，Run1)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(6.0μL，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。需要说明的是，取代P1tBu而使用BEMP(6.1μL，21.0μmol，3.0当量，Run2)、或BTPP(6.4μL，21.0μmol，3.0当量，Run3)实施了同样的反应。
反应追踪
途中，从反应开始起经过2.5、5、23、29小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。
将实施例3-5-1的结果表示于表3-5-1中。需要说明的是，表3-5-1中表述的CH3CN中的pKBH+值转引自Aldrich公司网Phosphazene Bases站点(https://www.sigmaaldrich.com/chemistry/chemical-synthesis/technology-spotlights/phosphazenes.html)(2020年12月2日阅览)。
另外，表3-5-1中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体(B-025)的area％)/(N-乙基化体(B-026)的area％)算出。
[表14]
[表3-5-1]
实施例3-5-2：使用具有乙炔键的N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基) 乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)(吡啶酚)作为底物的O-选择性乙基化 中的最佳碱研究
[化69]
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)(4.1mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向该溶液中加入P1tBu(5.3μL，21.0μmol，3.0当量，Run1)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(6.0μL，35.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。需要说明的是，取代P1tBu而使用BEMP(6.1μL，21.0μmol，3.0当量，Run2)、或BTPP(6.4μL，21.0μmol，3.0当量，Run3)实施了同样的反应。
反应追踪
途中，从反应开始起经过1、5、22、30小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。
将实施例3-5-2的结果表示于表3-5-2中。需要说明的是，表3-5-2中表述的CH3CN中的pKBH+值转引自Aldrich公司网Phosphazene Bases站点(https://www.sigmaaldrich.com/chemistry/chemical-synthesis/technology-spotlights/phosphazenes.html)(2020年12月2日阅览)。
另外，表3-5-2中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体(B-029)的area％)/(N-乙基化体(B-030)的area％)算出。
[表15]
[表3-5-2]
以上的结果显示，在(表3-5-1、3-5-2)、pKBH+(共轭酸的pKa)为30以下的碱中，在确保大范围的官能团选择性的基础上，能够实现反应的高转换率。在具有能够被乙基化的酰胺键的情况下，使用pKBH+(共轭酸的pKa)(乙腈中)为30以下的碱作为反应中所用的碱这一点如实施例3-4中所示。实施例3-5的结果显示，在反应中所用的碱选择pKBH+30以下时体积大的碱、特别是BTPP作为碱的情况下，能够实现对于合成而言充分的反应速度和高O-选择性(表3-5-1、Run3、表3-5-2、Run3)。
实施例3-5-3：使用N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基] 哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-006)作为具有哒嗪的底物的O-选择性乙基化中的最佳碱研 究
[化70]
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-006)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)和DMI(101.0μL)。向该溶液中加入P2Et(34.9μL，105.0μmol，15.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(17.9μL，105.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
另外，取代P2Et而使用BTPP(32.1μL，105.0μmol，15.0当量，Run2)、P1tBu(26.7μL，105.0μmol，15.0当量，Run3)、TBD(1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯)(14.6mg，105.0μmol，15.0当量，Run4)、MTBD(7-甲基-1,5,7-三氮杂双环[4.4.0]十碳-5-烯)(15.1μL，105.0μmol，15.0当量，Run5)、DBU(1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯)(15.7μL，105.0μmol，15.0当量，Run6)、BTMG(2-叔丁基-1,1,3,3-四甲基胍)(20.9μL，105.0μmol，15.0当量，Run7)、DIPEA(二异丙基乙胺)(18.3μL，105.0μmol，15.0当量，Run8)，同样地实施了反应。
反应追踪
途中，从反应开始起经过1.5、21小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-5-3、Run1中所示。
N-苄基磺酰基-6-[4-[4-(5-乙氧基吡啶-3-基)-3-氟苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：化合物B-034。
LCMS(ESI，m/z)：605.1[M+H]+。
保留时间：0.984分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.764分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
N-苄基磺酰基-6-[4-[4-(1-乙基-5-羟基吡啶-1-鎓-3-基)-3-氟苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：化合物B-035。
LCMS(ESI，m/z)：605.1[M+H]+。
保留时间：0.707分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
将实施例3-5-3的结果表示于表3-5-3中。需要说明的是，表3-5-3中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体(B-034)的area％)/(N-乙基化体(B-035)的area％)算出。另外，表3-5-3中表述的CH3CN中的pKBH+值转引自Aldrich公司网Phosphazene Bases站点(https://www.sigmaaldrich.com/chemistry/chemical-synthesis/technology-spotlights/phosphazenes.html)(2020年12月2日阅览)、以及非专利文献(Chem.Eur.J.2021,27,4216-4229)。
[表16]
[表3-5-3]
如表3-5-3中所示，在使用CH3CN中的pKBH+值大于28的碱(P2Et，BTPP)的情况下，观测到在21h时原料消失的反应速度，在CH3CN中的pKBH+值为23～28的碱(BTMG，MTBD，TBD，P1tBu)的情况下，虽然反应速度与BTPP相比降低，然而确认O-选择性乙基化推进。另外，在CH3CN中的pKBH+值为18.8的DIPEA的情况下，也确认反应没有推进。在使用了CH3CN中的pKBH+值为23～28的范围内的DBU的反应中，与其他的pKBH+值为范围内的碱的反应相比，反应推进变慢。虽然不限定于特定的理论，然而认为这源于如下的结果，即，DBU与磷酸三乙酯反应而消耗乙基化剂，由此阻碍反应的推进。
实施例3-6：设想为作为多种底物混合物的化合物库的、相对底物大幅度过量地使 用试剂时的影响确认
在混合了多种底物的情况下，相对于每一种底物而言的试剂大幅度过量地存在。以下，使用N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)作为底物确认了试剂大幅度过量地存在时的影响。
实施例3-6-1：使用N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基] 哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)(吡啶酚)作为底物的过量试剂条件下的O-选择性乙基化研究
[化71]
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(70.0μL)。向该溶液中加入BTPP(19.3μL，63.0μmol，9.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(17.9μL，105.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。结果如表3-6、Run1中所示。
反应追踪
途中，从反应开始起经过2.5、7、23小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。
实施例3-6-2：使用N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基] 哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)(吡啶酚)作为底物、使用DMI作为反应溶剂的O-选择性乙基化 研究
[化72]
使用DMI(70.0μL)作为反应溶剂，利用与实施例3-6-1同样的方法实施了反应。
反应追踪
途中，从反应开始起经过2.5、5、23小时时，利用与实施例3-6-1同样的方法测定出反应进度。结果如表3-6、Run2中所示。
实施例3-6-3：使用N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基] 哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)(吡啶酚)作为底物、使用DMI作为反应溶剂的过量试剂条件下 的O-选择性乙基化研究
[化73]
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)和DMI(101.0μL)。向该溶液中加入BTPP(32.1μL，105.0μmol，15.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(17.9μL，105.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过2.5、5、23小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-6、Run3中所示。
将实施例3-6的结果表示于表3-6中。需要说明的是，表3-6中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体(B-025)的area％)/(N-乙基化体(B-026)的area％)算出。
[表17]
[表3-6]
根据以上的结果可以确认，在相对于1种底物存在大幅度过量的试剂的情况下，也观察不到官能团选择性的降低，能够没有问题地实施向作为多种底物混合物的化合物库中的应用(表3-6、Run1～3)。
需要说明的是，即使在DMF的基础上还使用DMI作为溶剂，也可以确认反应的选择性、反应的转换率能够都不逊色地实施(表3-6、Run2～3)。
实施例3-7：实施例3-6-3中设定的反应条件下的底物普遍性的确认
将实施例3-6-3中设定的反应条件应用于具有各种官能团的底物，确认了底物普遍性。
实施例3-7-1：使用N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基] 哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-006)作为具有哒嗪的底物的O-选择性乙基化确认
[化74]
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-006)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)和DMI(101.0μL)。向该溶液中加入BTPP(32.1μL，105.0μmol，15.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(17.9μL，105.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过2.5、5、21小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-7-1、Run1中所示。
N-苄基磺酰基-6-[4-[4-(5-乙氧基吡啶-3-基)-3-氟苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：化合物B-034。
LCMS(ESI，m/z)：605.2[M+H]+。
保留时间：0.986分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.764分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
N-苄基磺酰基-6-[4-[4-(1-乙基-5-羟基吡啶-1-鎓-3-基)-3-氟苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：化合物B-035。
LCMS(ESI，m/z)：605.1[M+H]+。
保留时间：0.707分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
将实施例3-7-1的结果表示于表3-7-1中。需要说明的是，表3-7-1中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体(B-034)的area％)/(N-乙基化体(B-035)的area％)算出。
[表18]
[表3-7-1]
实施例3-7-2：使用N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(4-羟基苯基)苯甲酰基]哌嗪- 1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-007)作为具有哒嗪的底物的O-选择性乙基化确认
[化75]
使用N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(4-羟基苯基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-007)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)与实施例3-7-1同样地实施反应，测定出反应进度。结果如表3-7-2、Run1中所示。
N-苄基磺酰基-6-[4-[4-(4-乙氧基苯基)-3-氟苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺：B-036。
LCMS(ESI，m/z)：604.2[M+H]+。
保留时间：1.225分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为1.000分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
将实施例3-7-2的结果表示于表3-7-2中。
[表19]
[表3-7-2]
实施例3-7-3：使用N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶- 3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-005)和N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3- 基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)作为具有乙炔官能团的底物的吡啶 酚的O-选择性乙基化
[化76]
使用N-苄基磺酰基-6-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-005)(4.1mg，7.0μmol，1.0当量，表3-7-3，Run1)、或N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)(4.1mg，7.0μmol，1.0当量，表3-7-3，Run2)与实施例3-7-1同样地实施反应，测定出反应进度。结果如表3-7-3、Run1、Run2中所示。
将实施例3-7-3的结果表示于表3-7-3中。需要说明的是，表3-7-3中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体的area％)/(N-乙基化体的area％)算出。
[表20]
[表3-7-3]
实施例3-7-4：使用N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-羰 基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-008)作为具有乙炔官能团的底物的苯酚的O-选择性乙基化
[化77]
使用N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-008)(4.1mg，7.0μmol，1.0当量)与实施例3-7-1同样地实施反应，测定出反应进度。结果如表3-7-4、Run1中所示。
N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(4-乙氧基苯基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-037。
LCMS(ESI，m/z)：609.2[M+H]+。
保留时间：1.229分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为1.011分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
将实施例3-7-4的结果表示于表3-7-4中。
[表21]
[表3-7-4]
实施例3-7-5：使用N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]苯 基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-009)作为具有乙炔官能团的底物的吡啶酚的O-选择性乙 基化
[化78]
使用N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-009)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)与实施例3-7-1同样地实施反应，测定出反应进度。结果如表3-7-5、Run1中所示。
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-038。
LCMS(ESI，m/z)：595.2[M+H]+。
保留时间：0.879分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.749分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-039。
LCMS(ESI，m/z)：595.2[M+H]+。
保留时间：0.636分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
将实施例3-7-5的结果表示于表3-7-5中。需要说明的是，表3-7-5中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体(B-038)的area％)/(N-乙基化体(B-039)的area％)算出。
[表22]
[表3-7-5]
实施例3-7-6：使用N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]苯基]甲 基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-010)作为具有乙炔官能团的底物的苯酚的O-选择性乙基化
[化79]
使用N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(4-羟基苯基)乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-010)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)与实施例3-7-1同样地实施反应，测定出反应进度。结果如表3-7-6、Run1中所示。
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-[2-(4-乙氧基苯基)乙炔基]苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-040。
LCMS(ESI，m/z)：594.2[M+H]+。
保留时间：0.976分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.846分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
将实施例3-7-6的结果表示于表3-7-6中。
[表23]
[表3-7-6]
实施例3-7-7：使用4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-甲基- 4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-011)、4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲 基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-012)和4- [4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基] 磺酰基苯甲酰胺(B-013)作为具有苯胺NH基的底物的苯酚的O-选择性乙基化
[化80]
使用4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-011)(4.8mg，7.0μmol，1.0当量，表3-7-7，Run1)、4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-012)(5.1mg，7.0μmol，1.0当量，表3-7-7，Run2)、或4-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-013)(5.1mg，7.0μmol，1.0当量，表3-7-7，Run3)与实施例3-7-1同样地实施反应，测定出反应进度。结果如表3-7-7、Run1～Run3中所示。
4-[4-[[2-(4-乙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-甲基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺：化合物B-041。
LCMS(ESI，m/z)：721.2[M+H]+。
保留时间：1.068分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.954分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
4-[4-[[2-(4-乙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺：化合物B-042。
LCMS(ESI，m/z)：752.2[M+H]+。
保留时间：1.070分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.953分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
4-[4-[[2-(3-乙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺：B-043。
LCMS(ESI，m/z)：752.2[M+H]+。
保留时间：1.077分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.960分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
利用实施例3-7-7中例示的反应生成的B-043在本说明书内有时也表述为化合物B2Q045-01、或AG005。
将实施例3-7-7的结果表示于表3-7-7中。
[表24]
[表3-7-7]
以上，如表3-7-1～3-7-7中所示，确认实施例3-6-3中设定的反应条件能够对具有各种官能团的联烯醇来O-选择性地进行乙基化。具体而言，发现了在叔胺、酰基磺酰胺、苯胺、炔、吡啶环之类的官能团共存下的、联烯醇的O-选择性乙基化条件。需要说明的是，本发明的本方法并不限定于本实施例中例示的官能团，是能够广泛应用的方法。
实施例3-7-8：使用6-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基 苯基)哒嗪-3-甲酰胺(B-080)作为具有哒嗪酰胺NH基的底物的苯酚的O-选择性乙基化中的 乙醇的添加效果
[化81]
Run 1：DMF溶剂反应
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入6-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺(B-080)(3.5mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(100.0μL)。向该溶液中加入BTPP(32.1μL，105.0μmol，15.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(17.9μL，105.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过2、21小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-7-8、Run1中所示。
6-[4-[[2-(3-乙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺：化合物B-081。
LCMS(ESI，m/z)：524.2[M+H]+。
保留时间：0.901分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.751分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
Run 2：DMF-EtOH混合溶剂反应
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入6-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺(B-080)(3.5mg，7.0μmol，1.0当量)、DMF(84.0μL)和EtOH(17.0μL)(DMF：EtOH＝5：1)。与实施例3-7-8、Run1同样地实施反应，测定出反应进度。结果如表3-7-8、Run1～Run2中所示。
将实施例3-7-8的结果表示于表3-7-8中。
[表25]
[表3-7-8]
如表3-7-8中所示，确认即使添加EtOH作为溶剂，也能够实施联烯醇的O-选择性乙基化。
实施例3-8：实施例3-6-3中设定的反应条件下的进一步的官能团选择性的确认
在实施例3-7中，可以确认实施例3-6-3中设定的反应条件即使在共存有多个官能团的情况下也能够选择性地进行联烯醇的O-乙基化。本反应条件中，进行了进一步的官能团选择性的确认。确认的方法是，将具有官能团的化合物添加到苯酚的模型底物(4-羟基-4’-甲氧基联苯(B-R-21)(pKaa＝9.94))的乙基化反应中，研究具有官能团的化合物的乙基化是否推进。即，对于所添加的具有官能团的化合物，在4-羟基-4’-甲氧基联苯(B-R-21)的羟基被选择性地乙基化的情况下，则确认官能团选择性。
a：利用ADMET predictor(version9.5)算出
实施例3-8-1：在酸性度与苯酚相同程度的酰胺存在下的乙基化反应确认
作为显示出与苯酚相同程度的酸性度的官能团的一例可以举出仲酰胺官能团的NH基。在实施例3-6-3中设定的反应条件下，研究了仲酰胺官能团的NH基被乙基化的可能性。
[化82]
表3-8-1、Run1：在进行了氮气置换的手套袋中，向1.5mL的螺帽小瓶中加入4-羟基-4’-甲氧基联苯(B-R-21)(7.0mg，35.0μmol，1.0当量)、具有酰胺基的化合物4-[4-(2,2,2-三氟乙基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(B-044)(6.8mg，18.0μmol，0.5当量)和DMI(0.5mL)。向该溶液中加入BTPP(161.0μL，525.0μmol，15.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(89.0μL，525.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
从反应开始起经过20小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-8-1、Run1中所示。
1-乙氧基-4-(4-甲氧基苯基)苯：化合物B-076。
保留时间：1.340分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.993分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
表3-8-1、Run2中，取代4-[4-(2,2,2-三氟乙基氨基甲酰基)苯基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(B-044)而使用4-[6-(2,2,2-三氟乙基氨基甲酰基)哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(B-045)(6.8mg，18.0μmol，0.5当量)，与表3-8-1、Run1同样地实施反应，测定出反应进度。结果如表3-8-1、Run2中所示。
将实施例3-8-1的结果表示于表3-8-1中。需要说明的是，表3-8-1中所示的转化率(％)(B-R-21/B-076)作为(B-R-21，area％)/〔(B-R-21，area％)+(B-076，area％)〕×100算出。另外，转化率(％)(添加物)作为(添加物的乙基化体，area％)/〔(添加物的乙基化体，area％)+(添加物，area％)〕×100算出。添加物被乙基化时的标准物质如实施例1-3中所示地合成，在参照表1-3的保留时间和检出MS的同时进行确认。
[表26]
[表3-8-1]
a：利用ADMET predictor(version9.5)算出
如表3-8-1中所示，虽然苯酚的模型底物(B-R-21)在本条件下进行了乙基化，然而所添加的酰胺体(B-044、B-045)均没有进行反应。由此确认，在某一方式中，通过应用本条件，对于具有与苯酚相同程度的酸性度的酰胺官能团，能够对联烯醇来O-选择性地进行烷基化。
实施例3-8-2：二芳基胺存在下的乙基化反应确认
研究了在反应中存在二芳基仲胺的NH基的情况下的、二芳基胺的N-乙基化的可能性。以下作为一例例示出二芳基胺官能团的能够应用的范围的确定方法。
[化83]
在进行了氮气置换的手套袋中，向1.5mL的螺帽小瓶中加入4-羟基-4’-甲氧基联苯(B-R-21)(7.0mg，35.0μmol，1.0当量)、二苯基胺(B-R-08)(5.9mg，35.0μmol，1.0当量，Run1)和DMI(0.5mL)。向该溶液中加入BTPP(161.0μL，525.0μmol，15.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(89.0μL，525.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
另外，取代二苯基胺(B-R-08)而使用2-氟-N-(2-氟苯基)苯胺(B-46)(7.2mg，35.0μmol，1.0当量，Run2)、N-苯基吡啶-3-胺(B-47)(6.0mg，35.0μmol，1.0当量，Run3)、4-苯胺基吡啶(B-R-09)(6.0mg，35.0μmol，1.0当量，Run4)、N-苯基嘧啶-5-胺(B-048)(6.0mg，35.0μmol，1.0当量，Run5)、N-吡啶-3-基吡啶-3-胺(B-049)(6.0mg，35.0μmol，1.0当量，Run6)、N-苯基吡啶-2-胺(B-050)(6.0mg，35.0μmol，1.0当量，Run7)、2,2’-二吡啶基胺(B-R-10)(6.0mg，35.0μmol，1.0当量，Run8)同样地实施反应。
反应追踪
从反应开始起经过20小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-8-2中所示。
将实施例3-8-2的结果表示于表3-8-2中。需要说明的是，表3-8-2中所示的转化率(％)(B-R-21/B-076)作为(B-R-21，area％)/〔(B-R-21，area％)+(B-076，area％)〕×100算出。另外，转化率(％)(添加物)作为(添加物的乙基化体，area％)/〔(添加物的乙基化体，area％)+(添加物，area％)〕×100算出。添加物被乙基化时的标准物质如实施例1-3所示地合成，在参照表1-3的保留时间和检出MS的同时进行确认。
[表27]
[表3-8-2]
a：利用ADMET predictor(version 9.5)算出
如表3-8-2中所示，确认虽然4-羟基-4’-甲氧基联苯(B-R-21)在本条件下进行了乙基化，然而所添加的二芳基胺体为5％以下的反应转换率。该结果显示，本发明的本方法中，即使在不限定于本实施例中例示的二芳基胺地在反应体系中存在二芳基胺体的情况下，对联烯醇也能够O-选择性地实施烷基化。
实施例3-8-3：各种胺存在下的乙基化反应确认
研究了在反应中存在各种胺的情况下的、胺的N-乙基化的可能性。以下作为一例例示出各种胺官能团的能够应用的范围的确定方法。
[化84]
在进行了氮气置换的手套袋中，向1.5mL的螺帽小瓶中加入4-羟基-4’-甲氧基联苯(B-R-21)(7.0mg，35.0μmol，1.0当量)、N-丁基苯胺(B-R-11)(11.0μL，70.0μmol，2.0当量)和DMI(0.5mL)。向该溶液中加入BTPP(161.0μL，525.0μmol，15.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(89.0μL，525.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
另外，取代N-丁基苯胺(B-R-11)而使用5-溴吲哚啉(B-R-12)(10.4mg，53.0μmol，1.5当量，Run2)、(3-苯基丙基)甲基胺(B-R-13)(14.0μL，88.0μmol，2.5当量，Run3)、4-哌嗪-1-基苯甲酸烯丙酯(BB-27)(8.6mg，35.0μmol，1.0当量，Run4)、5-(4-甲基苯基)吡啶-2-胺(B-051)(6.5mg，35.0μmol，1.0当量，Run5)、6-(4-甲基苯基)吡啶-3-胺(B-052)(6.5mg，35.0μmol，1.0当量，Run6)、3-苯基-1-丙基胺(B-R-14)(12.0μL，88.0μmol，2.5当量，Run7)、N,N-二甲基苄基胺(B-R-15)(13.0μL，88.0μmol，2.5当量，Run8)同样地实施反应。
反应追踪
从反应开始起经过20小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表3-8-3中所示。
将实施例3-8-3的结果表示于表3-8-3中。需要说明的是，表3-8-3中所示的转化率(％)(B-R-21/B-076)作为(B-R-21，area％)/〔(B-R-21，area％)+(B-076，area％)〕×100算出。另外，转化率(％)(添加物)作为(添加物的乙基化体，area％)/〔(添加物的乙基化体，area％)+(添加物，area％)〕×100算出。添加物被乙基化时的标准物质如实施例1-3所示地合成，在参照表1-3的保留时间和检出MS的同时进行确认。
[表28]
[表3-8-3]
虽然并不限定于特定的理论，然而认为在胺官能团自身的反应性高的情况下(例如非环状仲胺、环状仲胺、伯胺)，在本条件下观测到胺官能团的烷基化(表3-8-3、Run3、Run4、Run7)。显示出这些胺官能团在进行联烯醇的烷基化的情况下需要保护。
另外，这些胺官能团以外的胺官能团(仲苯胺、伯苯胺、叔胺)在本条件下烷基化的进行也为5％以下，因此确认，即使不限定于本实施例中例示的胺官能团地存在胺官能团，也能够将联烯醇选择性地烷基化。
实施例3-8-4：各种醇存在下的乙基化反应确认
研究了在反应中存在各种醇的情况下的、醇的O-乙基化的可能性。以下，作为一例例示出各种醇官能团的能够应用的范围的确定方法。
[化85]
在进行了氮气置换的手套袋中，向1.5mL的螺帽小瓶中加入4-羟基-4＇-甲氧基联苯(B-021)(7.0mg，35.0μmol，1.0当量)、苄醇(B-R-16)(3.6μL，35.0μmol，1.0当量)和DMI(0.5mL)。向该溶液中加入BTPP(161.0μL，525.0μmol，15.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(89.0μL，525.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃搅拌16.5小时。
另外，取代苄醇(B-R-16)而使用1-苯基乙醇(B-R-17)(4.2μL，35.0μmol，1.0当量，Run2)、2-苯基乙醇(B-R-18)(4.2μL，35.0μmol，1.0当量，Run3)、1-苯基-2-丙醇(B-R-19)(4.9μL，35.0μmol，1.0当量，Run4)、3-苯基-1-丙醇(B-R-20)(4.8μL，35.0μmol，1.0当量，Run5)同样地实施反应。
反应追踪
从反应开始起经过16.5小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。
将实施例3-8-4的结果表示于表3-8-4中。需要说明的是，表3-8-4中所示的转化率(％)(B-R-21/B-076)作为(B-R-21，area％)/〔(B-R-21，area％)+(B-076，area％)〕×100算出。另外，转化率(％)(添加物)作为(添加物的乙基化体，area％)/〔(添加物的乙基化体，area％)+(添加物，area％)〕×100算出。添加物被乙基化时的标准物质如实施例1-3所示地合成，在参照表1-3的保留时间的同时进行确认。
[表29]
[表3-8-4]
如表3-8-4中所示，由于醇官能团即使在本条件下烷基化的进行也为5％以下，因此确认，即使不限定于本实施例中例示的醇官能团地存在醇官能团，也能够将联烯醇选择性地烷基化。
以上，由实施例3-8的结果确认，即使在不限定于本实施例中例示的酰胺、二芳基胺、仲苯胺、伯苯胺、叔胺、醇等官能团地共存有这些官能团的情况下，也能够官能团选择性地进行联烯醇的O-乙基化。
实施例3-9：3种底物的混合物中的联烯醇的O-选择性乙基化利用实施例3中的见解，实际上对底物的混合物、N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)、N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-006)，N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(4-羟基苯基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-007)尝试了联烯醇的O-选择性乙基化。
[化86]
在进行了氮气置换的手套袋中，向1.5mL的螺帽小瓶中加入(N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-004)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)、N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(5-羟基吡啶-3-基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-006)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)、N-苄基磺酰基-6-[4-[3-氟-4-(4-羟基苯基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺(B-007)(4.0mg，7.0μmol，1.0当量)和DMF(210.0μL)。向该溶液中加入P2Et(21.0μL，63.0μmol，9.0当量)，在确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(17.9μL，105.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
反应追踪
途中，从反应开始起经过1、2.5、5、21小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。
将实施例3-9的结果表示于表3-9中。需要说明的是，表3-9中所示的Ratio(O-/N-)作为(O-乙基化体的area％)/(N-乙基化体的area％)算出。
[表30]
[表3-9]
本结果显示，即使底物在实际上为混合物，也如基于使用单一底物时的研究结果的设想那样，能够在共存有多个官能团的条件下实现联烯醇的O-选择性乙基化。本反应条件中，没有看到来源于混合多个底物的问题。
实施例4：对多个底物混合物进行乙基化时的残留试剂、试剂来源杂质的除去研究
在对多个底物混合物进行反应时，在设定官能团选择性的反应条件的基础上，还需要恰当地进行残留试剂、试剂来源杂质的除去。例如，在一个方式中，实验室中普遍利用的借助正相及反相色谱柱的纯化不一定能够作为最佳的分离法来应用。以下，对无用试剂类的除去进行了研究。
实施例4-1：在多个底物的混合物中进行乙基化时的减压蒸馏除去及使用了固相 试剂的无用试剂的除去研究
在使用表4-1中所示的多个底物、N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)、4-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-013)、N-(苯磺酰基)-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-014)、N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(4-羟基苯基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-015)的混合物进行乙基化反应后，实施了对于除去试剂的方法的研究。在所使用的底物中，从实施例6中记载的库中含有的化合物当中选择显示出大范围的酸性度(cpKa)及共轭酸的酸性度(cpKBH+)的化合物。需要说明的是，cpKa及cpKBH+表示pKa的计算值及pKBH+的计算值，利用了使用ADMET predictor(version 9.5)计算的值。另外，在实施乙基化时设想为库合成的利用，使有可能混入乙基化中使用的底物的酸成分(此处作为一例设想为在Wang树脂担载有联烯醇化合物的情况，是从固相的切出工序中有可能普遍使用的TFA)共存而实施乙基化。给出操作的一例。
[表31][表4-1
在进行了氮气置换的手套袋中，向4.0mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-羟基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-003)(4.8mg，83.0μmol)、4-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-013)(6.0mg，83.0μmol)、N-(苯磺酰基)-4-[4-[[2-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-014)(4.4mg，83.0μmol)、N-苄基磺酰基-4-[4-[3-氟-4-(4-羟基苯基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-015)(4.7mg，83.0μmol)和DMI(550.0μL)。向该溶液中加入BTPP(151.0μL，495.0μmol)，确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(84.0μL，495.0μmol)。将所得的反应液在80℃搅拌30小时。30小时后，对反应液取样3μL并用MeCN(1000μL)稀释，制备出LC样品，进行LCMS测定。使用该溶液作为试剂除去操作时的初始溶液。其后，向反应液中加入均三甲苯(151.0μL，33.0μmol)，对反应液取样10μL，用DMSO-d6(580.0μL)稀释，作为基于1H-NMR的试剂残存量确认用的初始溶液。
一边用MeCN(250.0μL)洗涤反应液一边出于吸附除去反应中使用的碱(BTPP)的目的使反应液吸附于羧酸担载硅胶(Biotage公司制ISOLUTE(注册商标)CBA，1g/6mL，0.7meq/g)，静置10分钟。加入MeCN(1.0mL)，进行加压并用试管回收滤液。将羧酸担载硅胶用MeCN(1.0mL)清洗2次并加压过滤，将所有的滤液集中在一起，制成溶液A。另外，出于评价底物组(B-003，B-013，B-014，B-015)或产物组(N-苄基磺酰基-4-[4-[5-[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)乙炔基]吡啶-3-羰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-029)，4-[4-[[2-(3-乙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-043)，N-(苯磺酰基)-4-[4-[[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-077)，N-苄基磺酰基-4-[4-[4-(4-乙氧基苯基)-3-氟苯甲酰基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-078))在羧酸担载硅胶上的吸附所致的损失的程度的目的，将羧酸担载硅胶用2M TEA的MeCN溶液(1.0mL)清洗3次并加压过滤，将所有的滤液集中在一起，制成溶液B。将溶液A和B的容积用MeCN稀释至相同程度为止后，取样25μL并用MeCN(1000μL)稀释。制备出LC样品，进行LCMS测定，由此算出溶液A以及B中含有的化合物的比例，作为能够用溶液A回收的各化合物的回收率。向试管吹送氮气而将一部分的溶剂蒸馏除去后，利用离心蒸发仪(Genevac公司)(在40℃以50-200mbar减压至检测到低沸点溶剂的蒸馏除去结束后，在40℃以低于0.5mbar蒸馏16小时)在减压下蒸馏除去溶剂，以油状物质的形式得到表4-2中所示的化合物(B-029，B-043，B-077，B-078)的混合物。将所得的物质溶解于DMSO-d6中，测定1H-NMR，由此对试剂的残存进行比较。
[表32]
[表4-2]利用乙基化得到的化合物的结构
对于进行羧酸担载硅胶处理时的基于LCMS的分析结果表示于表4-3中。
[表33]
[表4-3]
确认羧酸担载硅胶处理后得到的溶液A中的UV面积％与初始溶液中的各化合物的UV面积％相比没有显著的变化。显示出没有特定的化合物特异性地吸附于硅胶的情况。另外，对溶液A中以及B中的各化合物的UV面积进行比较，算出在溶液A中的回收率＝溶液A中的UV面积(310nm)/{溶液A中的UV面积(310nm)+溶液B中的UV面积(310nm)}。其结果表明，各化合物都能够在溶液A中回收98.1％以上。由以上的结果表明，尽管在各化合物间具有各种各样的酸性度、碱性度，即使进行羧酸担载硅胶处理也能够不被吸附地回收。
对于进行羧酸担载硅胶处理时的基于1H-NMR的分析结果表示于表4-4中。
[表34]
[表4-4]
反应结束后根据所制备的初始溶液中的1H-NMR数据的分析可以确认，相对于4-[4-[[2-(3-乙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(B-043)存在大幅度过量的BTPP(87.6倍左右的摩尔数)以及Et3PO4(84.2倍左右的摩尔数)。另一方面，根据由实施了羧酸担载硅胶处理以及浓缩操作的油状物质制备的溶液的1H-NMR数据的分析可以确认，检测不到BTPP的游离体，可以完全地除去。另外可以确认，可以将BTPP的与TFA的盐减少至相对于B-043为0.94倍左右的摩尔数，将Et3PO4大幅度地除去至以0.835倍左右的摩尔数确认的程度。由于与预先共存于底物中的TFA形成盐，因此确认到一定量的BTPP，然而由于在利用本方法供给的化合物组的生物学的实验中的评价时使用缓冲液，因此影响极为轻微。此外在不存在TFA的条件下则不成为问题。需要说明的是，虽然并不限定于特定的理论，然而由于Et3PO4(沸点：216℃、东京化成公司网(https：//www.tcichemicals.com/JP/ja/p/P0270)、2020年11月18日阅览)为中性化合物，因此不是利用羧酸担载硅胶除去，而是利用减压浓缩除去。
如上所示，即使在多个底物的混合物中进行乙基化的情况下，也可以例示出通过利用固相试剂及实施减压蒸馏除去来实现无用试剂的除去。本发明中的乙基化的方法可以恰当地进行残留试剂、试剂来源杂质的除去，被确定为也能够应用于混合物库的合成的方法。
实施例4-2：在多个底物的混合物中进行乙基化时的基于液液分离及减压蒸馏除 去的无用试剂的除去研究
实施例4-2-1：使用乙酸乙酯作为有机溶剂、使用饱和氯化铵水溶液作为酸性溶液 的基于液液分离及减压蒸馏除去的无用试剂的除去
[化87]
在进行了氮气置换的手套袋中，向2.0mL的螺帽小瓶中加入3-溴喹啉-6-酚(B-092)(15.7mg，70.0μmol)和DMI(1.0mL)。向该溶液中加入BTPP(64.2μL，210μmol，3.0当量)，确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(59.5μL，350μmol，5.0当量)。将所得的反应液在80℃搅拌22小时。
反应追踪
从反应开始起经过22小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定反应进度，其结果是，原料的3-溴喹啉-6-酚(B-092)消失，确认生成97.2area％的3-溴-6-乙氧基喹啉(B-093)。
3-溴-6-乙氧基喹啉：化合物B-093。
LCMS(ESI，m/z)：251.9，253.9[M+H]+。
保留时间：1.176分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.789分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
液液分离
在将反应液用乙酸乙酯(10mL，相对于DMI为10倍量)稀释的同时转移至50mL分液漏斗，出于将反应中使用的碱(BTPP)用酸性水溶液清洗除去的目的加入饱和氯化铵水溶液(3mL，相对于DMI为3倍量)而进行液液分离。排出水溶液后，针对乙酸乙酯溶液加入饱和氯化铵水溶液(3mL，相对于DMI为3倍量)并反复进行8次基于清洗的液液分离(共计清洗9次)。
从9次清洗后的乙酸乙酯溶液中取样100μL并用CH3CN(750μL)稀释，制备出LC样品。从第9次的清洗水溶液中取样200μL并用水(800μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定来测定乙酸乙酯溶液中的BTPP的残存状况、以及水溶液中的BTPP的除去程度，其结果是，在有机溶液中没有观测到BTPP的m/z。另外，在水溶液中观测到BTPP的m/z。
将乙酸乙酯溶液用水(5mL)清洗后，用硫酸钠干燥，在减压下浓缩过滤后的滤液。从所得的75.8mg的液体状的残渣中取样10mg并用DMSO-d6(750.0μL)稀释，进行1H-NMR测定而确认试剂残存量。将结果表示于表4-5中。如表4-5的液液分离浓缩体的摩尔比栏中所示，确认通过用饱和氯化铵水溶液清洗反应溶液的乙酸乙酯溶液，使BTPP的残存量减少至相对于B-093为摩尔比0.02倍左右。另一方面，观测到作为中性化合物的磷酸三乙酯和DMI相对于B-093分别残存摩尔比为3.4倍左右、1.6倍左右。
回收液液分离后的实施了1H-NMR测定的样品，出于除去残存于液液分离浓缩体中的中性化合物(磷酸三乙酯和DMI)的目的，利用离心蒸发仪(Genevac公司)(在40℃以50-200mbar减压至检测到低沸点溶剂的蒸馏除去结束后，在40℃以低于0.5mbar蒸馏16小时)在减压下蒸馏除去溶剂，以蜡样固体物质的形式得到B-093。将所得的物质溶解于DMSO-d6中，测定1H-NMR，由此对试剂的残存进行确认。
将由浓缩处理后的蜡样固体物质制备的1H-NMR数据的分析结果表示于表4-5中。由分析结果可以确认，检测不到磷酸三乙酯，可以完全地除去。可以确认相对于3-溴-6-乙氧基喹啉(B-093)将BTPP除去至以0.06倍左右的摩尔比确认的程度，另外将DMI除去至以0.085倍左右的摩尔比确认的程度。
[表35]
[表4-5]
实施例4-2-2：使用乙酸乙酯作为有机溶剂、使用5％硫酸氢钾水溶液作为酸性溶 液的基于液液分离及减压蒸馏除去的无用试剂的除去
[化88]
在进行了氮气置换的手套袋中，向2.0mL的螺帽小瓶中加入4-(4-羟基苯基)-N,N-二甲基苯甲酰胺(B-094)(16.9mg，70.0μmol)和DMI(1.0mL)。向该溶液中加入BTPP(64.2μL，210μmol，3.0当量)，确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(59.5μL，350μmol，5.0当量)。将所得的反应液在80℃搅拌22小时。确认反应进行后，向反应液中加入BTPP(257.0μL，840μmol，12.0当量)和磷酸三乙酯(B-R-05)(119.0μL，700μmol，10.0当量)并在80℃搅拌21小时。
反应追踪
从反应开始起经过22小时和追加试剂后21小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度，其结果是确认，从反应开始时起22小时时，作为原料的4-(4-羟基苯基)-N,N-二甲基苯甲酰胺(B-094)残存15.5area％，生成83.3area％的4-(4-乙氧基苯基)-N,N-二甲基苯甲酰胺(B-095)。追加试剂后21小时时，作为原料的4-(4-羟基苯基)-N,N-二甲基苯甲酰胺(B-094)消失，生成98.3area％的4-(4-乙氧基苯基)-N,N-二甲基苯甲酰胺(B-095)。
4-(4-乙氧基苯基)-N,N-二甲基苯甲酰胺：化合物B-095。
LCMS(ESI，m/z)：270.1[M+H]+。
保留时间：1.063分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.760分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
液液分离
在将反应液用乙酸乙酯(15mL，相对于DMI为15倍量)稀释的同时转移到50mL分液漏斗中，出于将反应中使用的碱(BTPP)用酸性水溶液清洗除去的目的加入5％硫酸氢钾水溶液(4mL，相对于DMI为4倍量)而进行液液分离。排出水溶液后，对乙酸乙酯溶液加入5％硫酸氢钾水溶液(4mL，相对于DMI为4倍量)而反复进行5次的基于清洗的液液分离(共计清洗6次)。
从6次清洗后的乙酸乙酯溶液中取样100μL并用CH3CN(750μL)稀释，制备出LC样品。从第6次的清洗水溶液中取样200μL并用水(800μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定乙酸乙酯溶液中的BTPP的残存状况、以及水溶液中的BTPP的除去程度，其结果是，在有机溶液中没有观测到BTPP的m/z。另外，在水溶液中观测到BTPP的m/z。
将乙酸乙酯溶液用水(5mL)清洗后，用硫酸钠干燥，在减压下浓缩过滤后的滤液。从所得的132.5mg的蜡状的残渣中取样10mg并用DMSO-d6(750.0μL)稀释，进行1H-NMR测定而确认试剂残存量。将结果表示于表4-6中。
如表4-6的液液分离浓缩体的摩尔比栏中所示，确认通过用5％硫酸氢钾水溶液清洗反应溶液的乙酸乙酯溶液而将BTPP的残存量减少至相对于B-095为摩尔比0.03倍左右。另一方面，观测到作为中性化合物的磷酸三乙酯和DMI相对于B-095分别残存有摩尔比为3.5倍左右、0.2倍左右。
回收液液分离后的实施了1H-NMR测定的样品，出于除去残存于液液分离浓缩体中的中性化合物(磷酸三乙酯和DMI)的目的，利用离心蒸发仪(Genevac公司)(在40℃以50-200mbar减压至检测到低沸点溶剂的蒸馏除去结束后，在40℃以低于0.5mbar蒸馏16小时)在减压下蒸馏除去溶剂，以蜡样固体物质的形式得到B-095。将所得的物质溶解于DMSO-d6中，测定1H-NMR，由此对试剂的残存进行确认。
将由浓缩处理后的蜡样固体物质制备的1H-NMR数据的分析结果表示于表4-6中。由分析结果可以确认，没有检测到磷酸三乙酯，可以完全地除去。可以确认相对于4-(4-乙氧基苯基)-N,N-二甲基苯甲酰胺(B-095)将BTPP除去至以0.05倍左右的摩尔比确认的程度，另外可以将DMI除去至以0.15倍左右的摩尔比确认的程度。
[表36]
[表4-6]
实施例4-2-3：在多个底物的混合物中进行乙基化时的基于液液分离及减压蒸馏 除去的无用试剂的除去
[化89]
在进行了氮气置换的手套袋中，向3.0mL的螺帽小瓶中加入4-羟基-4’-甲氧基联苯(B-R-21)(14.0mg，70.0μmol，1.0当量)、6-羟基喹啉-3-甲酸乙酯(B-090)(15.0mg，70.0μmol，1.0当量)、4-(4-羟基苯基)-N,N-二甲基苯甲酰胺(B-094)(17.0mg，70.0μmol，1.0当量)和DMI(1.0mL)。向该溶液中加入BTPP(321.0μL，1.05mmol，15.0当量)，确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(179.0μL，1.05mmol，15.0当量)。将所得的反应液在80℃搅拌24小时。
反应追踪
从反应开始起经过2、24小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度，其结果是，24小时时作为原料的4-羟基-4’-甲氧基联苯(B-R-21)残存1.3area％，确认到6-羟基喹啉-3-甲酸乙酯(B-090)和4-(4-羟基苯基)-N,N-二甲基苯甲酰胺(B-094)的消失。另外，确认生成24.1area％的1-乙氧基-4-(4-甲氧基苯基)苯(B-076)、49.5area％的6-乙氧基喹啉-3-甲酸乙酯(B-091)、23.1area％的4-(4-乙氧基苯基)-N,N-二甲基苯甲酰胺(B-095)。
6-乙氧基喹啉-3-甲酸乙酯：化合物B-091。
LCMS(ESI，m/z)：246.1[M+H]+。
保留时间：1.076分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.708分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
液液分离
在将反应液用乙酸乙酯(15mL，相对于DMI为15倍量)稀释的同时转移到50mL分液漏斗中，出于将反应中使用的碱(BTPP)用酸性水溶液清洗除去的目的加入5％硫酸氢钾水溶液(4mL，相对于DMI为4倍量)并进行液液分离。排出水溶液后，对乙酸乙酯溶液加入5％硫酸氢钾水溶液(4mL，相对于DMI为4倍量)并反复进行5次基于清洗的液液分离(共计清洗6次)。
从清洗6次后的乙酸乙酯溶液中取样100μL并用CH3CN(750μL)稀释，制备出LC样品。从第6次的清洗水溶液中取样200μL并用水(800μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出乙酸乙酯溶液中的BTPP的残存状况、以及水溶液中的BTPP的除去程度，其结果是，在有机溶液中没有观测到BTPP的m/z。另外，在水溶液中观测到BTPP的m/z。
将乙酸乙酯溶液用水(5mL)清洗后，用硫酸钠干燥，在减压下浓缩过滤后的滤液。从所得的193.0mg的蜡状固体的残渣中取样10mg并用DMSO-d6(750.0μL)稀释，进行1H-NMR测定并确认试剂残存量。将结果表示于表4-7中。
如表4-7的液液分离浓缩体的摩尔比栏中所示，确认通过用5％硫酸氢钾水溶液清洗反应溶液的乙酸乙酯溶液而将BTPP的残存量减少至相对于B-091为摩尔比0.05倍左右。另一方面，观测到作为中性化合物的磷酸三乙酯和DMI相对于B-091分别残存摩尔比为8.7倍左右、1.3倍左右。
回收液液分离后的实施了1H-NMR测定的样品，出于除去残存于液液分离浓缩体中的中性化合物(磷酸三乙酯和DMI)的目的，利用离心蒸发仪(Genevac公司)(在40℃以50-200mbar减压至检测到低沸点溶剂的蒸馏除去结束后，在40℃以低于0.5mbar蒸馏16小时)在减压下蒸馏除去溶剂，以蜡样固体物质的形式得到B-076、B-091和B-095的混合物。将所得的物质溶解于DMSO-d6中，测定1H-NMR，由此对试剂的残存进行确认。
将由浓缩处理后的蜡样固体物质制备的1H-NMR数据的分析结果表示于表4-7中。由分析结果可以确认，没有检测到磷酸三乙酯，可以完全地除去。可以确认相对于6-乙氧基喹啉-3-甲酸乙酯(B-091)将BTPP除去至以0.05倍左右的摩尔比确认的程度，另外将DMI除去至以1.0倍左右的摩尔比确认的程度。
[表37]
[表4-7]
如上所示，即使在多个底物的混合物中进行乙基化的情况下，也可以例示出通过在用有机溶剂稀释后利用与酸性水溶液的液液分离及实施减压蒸馏除去来实现无用试剂的除去。本发明中的乙基化的方法可以恰当地进行残留试剂、试剂来源杂质的除去，被确定为也能够应用于混合物库的合成的方法。
实施例5：针对在分子中具有多个反应性官能团的底物的联烯醇的O-选择性烯丙 基化研究
[化90]
在进行了氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(4-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(B-001)(2.7mg，5.0μmol，1.0当量)和DMF(50.0μL)。向所得的溶液中加入K2CO3(2.1mg，15.0μmol，3.0当量)并混合15～20秒后，加入磷酸三烯丙酯(5.1μL，25.0μmol，5.0当量)。将所得的反应混合物以1400rpm在80℃搅拌46小时。
反应追踪
途中，从反应开始起经过46小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。其结果是，观测到100area％的N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(4-烯丙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺(化合物B-079)的生成。
N-苄基磺酰基-4-[4-[[2-(4-烯丙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]苯甲酰胺：化合物B-079。
LCMS(ESI，m/z)：582[M+H]+。
保留时间：0.66分钟(分析条件SQD-FA05-2)。
(原料ArOH的保留时间为0.55分钟(分析条件SQD-FA05-2)。)
以上的结果显示，作为针对具有多个反应性官能团的底物的联烯醇的O-选择性烷基化，也可以应用烯丙基化。
实施例6：使用了联烯醇的O-选择性乙基化法的、官能团具有多样性的化合物库的 制造例
实施例6中，利用实施例2～5中得到的见解，给出通过对具有各种反应性官能团的联烯醇进行高选择性乙基化、实施无需利用色谱柱的纯化操作的后处理来应用于官能团具有多样性的化合物库的合成的一例。出于例示出使用本发明的方法制备的化合物库能够实际应用、并且证明可以获得所期望的化合物组的目的，实施了所合成的混合物的使用了AS-MS的与Bcl-2的结合评价(实施例7)、利用AS-MS鉴定的Bcl-2结合化合物的单独合成(实施例8)、单独合成的化合物的基于表面等离子体共振(SPR)的与Bcl-2的结合评价(实施例9)。对于构成库中含有的化合物的核心区以及接头表示于图1中。
图1中，
[化91]
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在基于图1所示的核心区及接头的组合的多样的化合物中，作为一例设定1200种化合物作为库化合物，实施混合物库的合成。需要说明的是，出于确认利用本方法提供的混合物库在利用AS-MS的评价时恰当地发挥作用的目的，设定为在该库化合物中包含事先利用实施例8中所示的方法合成、并进行了实施例9中所示的基于SPR的结合评价的4种化合物即B2Q045-01(KD＝1.2μM)、B2Q046-01(KD＝8.1μM)、B2R045-01(KD≥20μM)、B2R046-01(KD≥20μM)。事先评价了结合能力的化合物B2Q045-01、B2Q046-01、B2R045-01、B2R046-01是根据公知文献(Expert Opinion on Drug Discovery 2008，3(9)，1123-1143.J.Med.Chem.2008，51，6902-6915.)推测可以维持对Bcl-2的结合能力的化合物，实际中可以确认结合。
在库合成时，利用如下的方法进行，即，在各构成单元的导入后、即接头形成反应后，对存在于构成单元上的反应性官能团的每个种类制备混合物，实施接下来的接头形成反应。
以下给出其方法，作为具有接头的多样性的混合物库合成方法的一例给出。
以下所示的库合成中，使用了[表LBB02]中所示的构成单元。
[表38]
[表LBB02]
[表38-1]
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本实施例6中，对溴化修饰Wang树脂：4-(溴甲基)苯氧基乙基聚苯乙烯、例如Merck公司、2-(4-溴甲基)苯氧基乙基聚苯乙烯，使用担载的化合物，在担载于固相的化合物的化合物编号的末尾表述“-02R”。实施例6中的表中，有时也在被固相担载的化合物的转变的反应中仅表述切出后的化合物名，有时也以去掉“-02R”的化合物编号表述。
实施例6-1-1-A：混合物mixEG01-02R～mixEG04-02R、mixEG18-02R的合成
[化92]
在氮气气氛下，向4mL的玻璃小瓶中加入化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)、化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)、NMP(1.95mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲酸甲酯(BB01)(107mg，0.387mmol)、K3PO4水溶液(1.7M，228μL，0.387mmol)、P(Cy)3Pd G3的NMP溶液(0.04M，323μL，13μmol)，在90℃振荡20小时。将反应液与树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗3次、用加入NAC(10mg/mL)的NMP：水(1：1)溶液(2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后在减压下干燥树脂，得到[表EG01]中所示的标题化合物。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物表示于[表EG01]中。
在氮气气氛下，使用5mL的容量瓶，将K3PO4(1.8g，8.48mmol)用蒸馏水定容而制备出1.7M的K3PO4水溶液。
在氮气气氛下，在2mL的玻璃小瓶中向P(Cy)3Pd G3(26mg，0.04mmol)中加入NMP(1mL)并振荡，由此将其溶解而制备出0.04M的P(Cy)3Pd G3的NMP溶液。
实施例6-1-1-B：混合物mixEG02-02R～mixEG04-02R、mixEG18-02R的合成
使用化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)、化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)和[表LBB02]中所示的硼酸或硼酸酯试剂(BB02～04、18)，利用与实施例6-1-1-A同样的方法合成出[表EG01]中所示的标题化合物。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物、反应时间表示于[表EG01]中。
[表39]
[表EG01]
实施例6-1-2-A：混合物mixEG05-02R的合成
[化93]
在氮气气氛下，向4mL的玻璃小瓶中加入化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)和化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)、NMP(1.95mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入(4-甲氧基羰基萘-1-基)硼酸(BB05)(178mg，0.774mmol)、K3PO4水溶液(1.7M，228μL，0.387mmol)、P(Cy)3Pd G3的NMP溶液(0.04M，323μL，13μmol)，在90℃振荡20小时。将反应液与树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗3次、用加入NAC(10mg/mL)的NMP：水(1：1)溶液(2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后在减压下干燥树脂，得到[表EG05]中所示的标题化合物。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物、反应时间表示于[表EG05]中。
实施例6-1-2-B：混合物mixEG06-02R的合成
使用化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)、化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)和[表LBB02]中所示的[1-[3-乙氧基羰基-5-(三氟甲基)苯基]吡唑-4-基]硼酸(BB06)，利用与实施例6-1-2-A同样的方法合成出[表EG05]中所示的标题化合物。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物、反应时间表示于[表EG05]中。
[表40]
[表EG05]
实施例6-1-3-A：混合物mixEG07-02R的合成
[化94]
在氮气气氛下，向3mL的玻璃小瓶中加入化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)、化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)、NMP(1.4mL)和水(72μL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入(4-甲酰基-2-甲基苯基)硼酸(BB07)(63.5mg，0.387mmol)、Na2CO3(41mg，0.387mmol)、P(Cy)3Pd G3的NMP溶液(0.04M，323μL，13μmol)，在90℃振荡21小时。将反应液与树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗3次、用加入NAC(10mg/mL)的NMP：水(1：1)溶液(2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后在减压下干燥树脂，得到[表EG07]中所示的标题化合物。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物、反应时间表示于[表EG07]中。
实施例6-1-3-B：混合物mixEG08-02R～mixEG17-02R的合成
使用化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)、化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)和[表LBB02]中所示的硼酸或硼酸酯试剂(BB08～17)，利用与实施例6-1-3-A同样的方法合成出[表EG07]中所示的标题混合物。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物、反应时间表示于[表EG07]中。
[表41]
[表EG07]
实施例6-1-4-A：混合物mixEG19-02R的合成
[化95]
在氮气气氛下，向4mL的玻璃小瓶中加入化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)和化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)、1,4-二氧六环(1.8mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入(2-氟-4-甲酰基苯基)硼酸(BB19)(65mg，0.387mmol)、K3PO4-H2O(89mg，0.387mmol)、频哪醇(45.7mg，0.387mmol)、P(Cy)3Pd G3的1,4-二氧六环溶液(0.04M，323μL，13μmol)，在90℃振荡22小时。将反应液与树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗3次、用加入NAC(10mg/mL)的NMP：水(1：1)溶液(2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后在减压下干燥树脂，得到[表EG19]中所示的标题化合物。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物、反应时间表示于[表EG19]中。
在氮气气氛下，在2mL的玻璃小瓶中向P(Cy)3Pd G3(26mg，0.04mmol)中加入1,4-二氧六环(1mL)并振荡，由此将其溶解而制备出0.04M的P(Cy)3Pd G3的1,4-二氧六环溶液。
实施例6-1-4-B：混合物mixEG20-02R的合成
使用化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)、化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)和[表LBB02]中所示的3-氟-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)苯甲酸甲酯(BB20)，利用与实施例6-1-4-A同样的方法合成出[表EG19]中所示的标题化合物。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物、反应时间表示于[表EG19]中。
[表42]
[表EG19]
实施例6-1-5：混合物mixEG21-02R的合成
[化96]
在氮气气氛下，向4mL的玻璃小瓶中加入化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)、化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)和4-MeTHP(1.8mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入[3-甲酰基-5-(三氟甲基)苯基]硼酸(BB21)(84mg，0.387mmol)、Na2CO3(41mg，0.387mmol)、0.04M P(Cy)3Pd G3的4-MeTHP溶液(323μL，13μmol)和水(75μL，4.16mmol)，在90℃振荡22小时。将反应液与树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗3次、用加入NAC(10mg/mL)的NMP：水(1：1)溶液(2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后在减压下干燥树脂，得到[表EG21]中所示的标题混合物mixEG21-02R。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物、反应时间表示于[表EG21]中。
在氮气气氛下，在2mL的玻璃小瓶中向P(Cy)3Pd G3(26mg，0.04mmol)中加入4-MeTHP(1mL)并振荡，由此将其溶解而制备出0.04M的P(Cy)3Pd G3的4-MeTHP溶液。
[表43]
[表EG21]
实施例6-1-6：混合物mixEG22-02R的合成
使用化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)、化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)和[表LBB02]中所示的硼酸试剂(BB22)，利用与实施例6-1-5同样的方法进行合成，得到[表EG22]中所示的标题混合物mixEG22-02R。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物、反应时间表示于[表EG22]中。
[表44]
[表EG22]
实施例6-1-7-A：混合物mixEG23-02R的合成
[化97]
在氮气气氛下，向3mL的玻璃小瓶中加入化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)、化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)、NMP(1.11mL)和二异丙基胺(188μL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入2-乙炔基苯甲醛(BB23)(174mg，1.34mmol)、XPhos Pd G4(0.1M，200μL，20μmol)的NMP溶液后，在80℃振荡39小时。将反应液与树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗3次、用加入NAC(10mg/mL)的NMP：水(1：1)溶液(2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后在减压下干燥树脂，得到[表EG23]中所示的标题化合物。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物表示于[表EG23]中。
在氮气气氛下，在3mL的玻璃小瓶中向XPhos Pd G4(86mg，0.1mmol)中加入NMP(1mL)并振荡，由此将其溶解而制备出0.1M的XPhos Pd G4的NMP溶液。
实施例6-1-7-B：混合物mixEG24-02R～mixEG26-02R的合成
使用化合物EF01-01-02R(57mg，担载量0.556mmol/g，0.032mmol)、化合物EF01-02-02R(43mg，担载量0.733mmol/g，0.032mmol)和[表LBB02]中所示的乙炔试剂(BB23～26)，利用与实施例6-1-7-A同样的方法合成出[表EG23]中所示的标题混合物。对于使用的构成单元和所得的混合物中含有的化合物、反应时间表示于[表EG23]中。
[表45]
[表EG23]
实施例6-2-1：混合物mixEH01-02R的合成
[化98]
在氮气气氛下，向10mL的玻璃小瓶中加入[表EGH01]中所示的混合物mixEGH01-02R(220mg，担载量0.651mmol/g，0.143mmol)、NMP(5.3mL)和甲醇(1.3mL)，在室温振荡1小时。加入5M氢氧化钠水溶液(198μL，0.992mmol)并在室温振荡17小时。将反应液与树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(4mL)反复清洗3次、用水(4mL)反复清洗3次、用NMP(4mL)反复清洗3次、用HOAt/NMP溶液(0.2M、4mL)反复清洗3次、用NMP(4mL)反复清洗3次、用MeOH(4mL)反复清洗3次、用DCM(3mL)反复清洗3次、用庚烷(4mL)反复清洗3次后在减压下干燥树脂，得到[表EH01]中所示的标题的混合物(mixEH01-02R)。对于所得的混合物中含有的化合物表示于[表EH01]中。
[表46]
[表EGH01]：混合物mixEGH01-02R
[表47]
[表EH01]混合物编号：mixEH01-02R，切出后的混合物编号：mixEH01
实施例6-2-2：混合物mixEH02-02R的合成
[化99]
在氮气气氛下，向8mL的玻璃小瓶中加入[表EH01]中所示的混合物mixEH01-02R(173mg，担载量0.651mmol/g，0.113mmol)和NMP(4.4mL)，在室温振荡1小时。加入4-(哌嗪-1-基)苯甲酸烯丙酯(BB27，83mg，0.339mmol)、DIC(106μL，0.677mmol)和HOAt(92mg，0.677mmol)，在40度振荡20小时。将反应液与树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(4mL)反复清洗3次、用MeOH(4mL)反复清洗3次、用DCM(4mL)反复清洗3次、用庚烷(4mL)反复清洗3次后在减压下干燥树脂，得到[表EH02]中所示的标题的混合物。对于所得的混合物中含有的化合物表示于[表EH02]中。
该酰胺化反应中，[表EH02]中记载的化合物当中的2种化合物(EH02-07-02R和EH02-08-02R)有可能缺损。
[表48]
[表EH02]混合物编号：mixEH02-02R，切出后的混合物编号：mixEH02
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实施例6-2-3：混合物mixEH03-02R的合成
[化100]
利用与实施例6-2-2同样的方法，使用6-(哌嗪-1-基)哒嗪-3-甲酸烯丙酯(BB28)和[表EH01]中所示的混合物mixEH01-02R(175mg，担载量0.651mmol/g，0.114mmol)，得到[表EH03]中所示的标题的混合物。对于所得的混合物中含有的化合物表示于[表EH03]中。
在该酰胺化反应中，[表EH03]中记载的化合物当中的2种化合物(EH03-07-02R和EH03-08-02R)有可能缺损。
[表49]
[表EH03]混合物编号：mixEH03-02R，切出后的混合物编号：mixEH03
/>
实施例6-2-4：混合物mixEH04-02R的合成
[化101]
在氮气气氛下，将[表EGH04]中所示的mixEG07-02R(20.3mg)、mixEG08-02R(21.0mg)、mixEG09-02R(21.6mg)、mixEG10-02R(19.8mg)、mixEG13-02R(20.6mg)、mixEG14-02R(21.1mg)、mixEG15-02R(20.5mg)、mixEG16-02R(20.5mg)、mixEG17-02R(20.5mg)、mixEG19-02R(20.1mg)、mixEG21-02R(21.9mg)、mixEG22-02R(20.4mg)、mixEG23-02R(20.6mg)转移到10mL的螺帽小瓶中，得到本实施例中使用的被固相担载的芳香族醛的混合物：mixEGH04-02R(265mg，担载量0.651mmol/g，0.172mmol)。加入DCE(5.57mL，21v/w)，在室温下振荡1小时。在氮气气氛下，加入6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酸叔丁酯(BB29)(137mg)、Ti(OtBu)4(333μL)，将混合物在60℃振荡1小时。其后，在氮气气氛下，加入三乙酰氧基氢化硼钠(439mg)以及2v/v％AcOH的DCE溶液(2.39mL)，将混合物在室温振荡20小时。将MeOH(1mL)添加到反应液中后，将树脂的悬浮液使用MeOH(1mL)转移到带有滤芯的注射器中(共计反复进行6次)，用MeOH(5.3mL)反复清洗3次、用NMP(5.3mL)反复清洗3次、用NaHCO3溶液(0.15M，NMP：H2O＝1：5溶液，5.3mL)反复清洗3次、用水(5.3mL)反复清洗3次、用MeOH(5.3mL)反复清洗3次、用DCM(5.3mL)反复清洗3次、用庚烷(5.3mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到标题混合物mixEH04-02R。对于混合物中含有的化合物表示于[表EH04]中。
[表50]
[表EGH04]混合物编号：mixEGH04-02R，切出后的混合物编号：mixEGH04
/>
/>
[表51]
[表EH04]混合物编号：mixEH04-02R，切出后的混合物编号：mixEH04
/>
/>
实施例6-2-5：混合物mixEH05-02R的合成
[化102]
在氮气气氛下，将[表EGH04]中所示的mixEG07-02R(20.1mg)、mixEG08-02R(20.3mg)、mixEG09-02R(20.4mg)、mixEG10-02R(20.3mg)、mixEG13-02R(20.8mg)、mixEG14-02R(20.6mg)、mixEG15-02R(20.1mg)、mixEG16-02R(20.0mg)、mixEG17-02R(20.3mg)、mixEG19-02R(20.8mg)、mixEG21-02R(20.5mg)、mixEG22-02R(20.8mg)、mixEG23-02R(20.6mg)转移到10mL的螺帽小瓶中，得到本实施例中使用的被固相担载的芳香族醛的混合物：mixEGH04-02R(260mg，担载量0.651mmol/g)。加入DCE(5.46mL，21v/w)，在室温下振荡1小时。在氮气气氛下，加入6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酸烯丙酯(BB27)(125mg)、Ti(OtBu)4(317μL)，将混合物在60℃振荡1小时。其后，在氮气气氛下，加入三乙酰氧基氢化硼钠(430mg)以及2v/v％AcOH的DCE溶液(2.34mL)，将混合物在50℃振荡3小时。冷却到室温后，将树脂的悬浮液使用MeOH(1mL)转移到带有滤芯的色谱柱中(共计反复进行6次)，用MeOH(5.3mL)反复清洗3次、用NMP(5.3mL)反复清洗3次、用0.15M NaHCO3溶液(NMP：H2O＝1：5溶液，5.3mL)反复清洗3次、用水(5.3mL)反复清洗3次、用MeOH(5.3mL)反复清洗3次、用DCM(5.3mL)反复清洗3次、用庚烷(5.3mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到[表EH05]中所示的标题混合物mixEH05-02R。对于混合物中含有的化合物表示于[表EH05]中。
[表52]
[表EH05]混合物编号：mixEH05-02R，切出后的混合物编号：mixEH05
/>
实施例6-2-6：混合物mixEH06-02R的合成
[化103]
在氮气气氛下，向5mL的玻璃小瓶中加入[表EGH06]中所示的混合物mixEGH06-02R(60mg，担载量0.645mmol/g，0.039mmol)和茴香醚(2.25mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入4-(哌嗪-1-基)苯甲酸烯丙酯(BB27，114mg，0.464mmol)和Ti(OtBu)4(299μL，0.774mmol)，在140℃振荡20小时。将反应液冷却到室温后，在氮气气氛下加入三乙酰氧基氢化硼钠(246mg，1.16mmol)，在140℃振荡20小时。将反应容器冷却到室温，将MeOH(1.2mL)添加到反应液中。将所得的反应液和树脂的悬浮液使用MeOH转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(1.2mL)反复清洗3次、用Rochelle盐溶液(0.05M，NMP：水＝1：1溶液，1.2mL)反复清洗3次、用水(1.2mL)反复清洗3次、用半饱和NaHCO3溶液(1.2mL)反复清洗3次、用水(1.2mL)反复清洗3次、用NMP(1.2mL)反复清洗69次、用MeOH(1.2mL)反复清洗3次、用DCM(1.2mL)反复清洗3次、用庚烷(1.2mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到[表EH06]中所示的标题化合物。
对于所得的混合物中含有的化合物表示于[表EH06]中。
[表53]
[表EGH06]混合物编号：mixEGH06-02R，切出后的混合物编号：mixEGH06
[表54]
[表EH06]混合物编号：mixEH06-02R，切出后的混合物编号：mixEH06
实施例6-3-1：混合物mixEI01-02R的合成
[化104]
在氮气气氛下，向8mL的螺帽小瓶中加入[表EH02]中所示的混合物mixEH02-02R(174mg，担载量0.651mmol/g，0.113mmol)和THF(5.2mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入四(三苯基膦)钯(0)(39.3mg，34μmol)、吗啉(49.4μL，0.566mmol)，将混合物在室温振荡2小时45分钟。将树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的色谱柱中，用NMP(4mL)反复清洗3次、用MeOH(4mL)反复清洗3次、用NAC溶液(0.3M，NMP：水＝5：1溶液，4mL)反复清洗3次、用丙二酸的NMP溶液(0.05M，4mL)反复清洗3次、用HOAt的NMP溶液(0.2M，4mL)反复清洗3次、用NMP(4mL)反复清洗3次、用MeOH(4mL)反复清洗3次、用DCM(4mL)反复清洗3次、用庚烷(4mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到标题混合物。对于所得的混合物中含有的化合物表示于[表EI01]中。
[表55]
[表EI01]混合物编号：mixEI01-02R，切出后的混合物编号：mixEI01
/>
/>
实施例6-3-2：混合物mixEI02-02R的合成
[化105]
在氮气气氛下，向8mL的玻璃小瓶中加入[表EH03]中所示的混合物mixEH03-02R(174mg，担载量0.651mmol/g，0.113mmol)和THF(5.2mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入Pd(PPh3)4(6.6mg，5.66μmol)和吗啉(34.5μL，0.397mmol)，在室温振荡2小时45分钟。将树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的色谱柱中，用NMP(4mL)反复清洗3次、用MeOH(4mL)反复清洗3次、用NAC溶液(0.3M，NMP：水＝5：1溶液，4mL)反复清洗3次、用丙二酸的NMP溶液(0.05M，4mL)反复清洗3次、用HOAt的NMP溶液(0.2M，4mL)反复清洗3次、用NMP(4mL)反复清洗3次、用MeOH(4mL)反复清洗3次、用DCM(4mL)反复清洗3次、用庚烷(4mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到[表EI02]中所示的标题混合物。对于所得的混合物中含有的化合物表示于[表EI02]中。
[表56]
[表EI02]混合物编号mixEI02-02R，切出后的混合物编号mixEI02
/>
实施例6-3-3：混合物mixEI03-02R的合成
[化106]
在氮气气氛下，向10mL的螺帽小瓶中加入[表EH05]中所示的混合物mixEH05-02R(260mg，担载量0.651mmol/g，0.169mmol)和THF(7.8mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入四(三苯基膦)钯(0)(58.7mg，51μmol)、吗啉(73.7μL，0.846mmol)，将混合物在室温振荡2小时45分钟。将树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的色谱柱中，用NMP(6mL)反复清洗3次、用MeOH(6mL)反复清洗3次、用NAC溶液(0.3M，NMP：水＝5：1溶液，6mL)反复清洗3次、用丙二酸的NMP溶液(0.05M，6mL)反复清洗3次、用HOAt的NMP溶液(0.2M，6mL)反复清洗3次、用NMP(6mL)反复清洗3次、用MeOH(6mL)反复清洗3次、用DCM(6mL)反复清洗3次、用庚烷(6mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到标题混合物。对于所得的混合物中含有的化合物表示于[表EI03]中。
[表57]
[表EI03]混合物编号：mixEI03-02R，切出后的混合物编号：mixEI02
/>
/>
实施例6-3-4：混合物mixEI04-02R的合成
[化107]
在氮气气氛下，向8.0mL的螺帽小瓶中加入[表EH04]中所示的混合物mixEH04-02R(300mg，担载量0.651mmol/g)、THF(8.07mL，27v/w)和MeOH(807μL，2.7v/w)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入LiOH水溶液(2M，781μL)，将混合物在室温振荡8小时。将树脂的悬浮液使用MeOH转移到带有滤芯的色谱柱中，用NMP(6.0mL)反复清洗3次、用H2O(6.0mL)反复清洗3次、用NMP(6.0mL)反复清洗3次、用HOAt的NMP溶液(0.2M，6.0mL)反复清洗3次、用NMP(6.0mL)反复清洗3次、用MeOH(6.0mL)反复清洗3次、用DCM(6.0mL)反复清洗3次、庚烷(6.0mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到标题混合物mixEI04-02R。对于所得的混合物中含有的化合物表示于[表EI04]中。
[表58]
[表EI04]混合物编号：mixEI04-02R，切出后的混合物编号：mixEI04
/>
/>
实施例6-3-5：混合物mixEI05-02R的合成
[化108]
在氮气气氛下，向2mL的螺帽小瓶中加入[表EH06]中所示的混合物mixEH06-02R(50mg，担载量0.645mmol/g，32μmol)和THF(1.5mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入四(三苯基膦)钯(0)(11.2mg，9.68μmol)、吗啉(14.1μL，0.161mmol)，将混合物在室温振荡3小时。将树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的色谱柱中，用NMP(1mL)反复清洗3次、用MeOH(1mL)反复清洗3次、用NAC溶液(0.3M，NMP：水＝5：1溶液，1mL)反复清洗3次、用丙二酸的NMP溶液(0.05M，1mL)反复清洗3次、用HOAt的NMP溶液(0.2M，1mL)反复清洗3次、用NMP(1mL)反复清洗3次、用MeOH(1mL)反复清洗3次、用DCM(1mL)反复清洗3次、用庚烷(1mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到标题混合物。对于所得的混合物中含有的化合物名表示于[表EI05]中。
[表59]
[表EI05]混合物编号：mixEI05-02R，切出后的混合物编号：mixEI05
实施例6-3-6：混合物mixEI06-02R的合成
[化109]
将[表EI01]、[表EI02]、[表EI03]、[表EI04]、[表EI05]中所示的混合物mixEI01-02R(155.9mg，担载量0.651mmol/g，0.101mmol)、mixEI02-02R(153.5mg，担载量0.651mmol/g，99.9μmol)、mixEI03-02R(182.5mg，担载量0.651mmol/g，0.119mmol)、mixEI04-02R(182.9mg，担载量0.651mmol/g，0.119mmol)、mixEI05-02R(28.6mg，担载量0.645mmol/g，18.4μmol)转移到带有滤芯的色谱柱中，用NMP(14mL)反复清洗3次、用MeOH(14mL)反复清洗3次、用DCM(14mL)反复清洗3次、用庚烷(14mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到[表EI06]中所示的标题混合物mixEI06-02R(703mg，担载量0.648mmol/g，0.456mmol)。
[表60]
[表EI06]混合物编号：mixEI06-02R，切出后的混合物编号：mixEI06
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/>
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/>
实施例6-3-7-A：混合物mixEI07-02R的合成
[化110]
向2mL的玻璃小瓶中加入[表EI06]中所示的混合物mixEI06-02R(50mg，担载量0.648mmol/g，0.0324mmol)和NMP(1.28mL)，在室温振荡1小时。加入二乙基胺(BB30，10.1μL，0.097mmol)、DIC(30.3μL，0.194mmol)和HOAt(26.5mg，0.194mmol)，在40℃振荡22小时。将反应液与树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(1.2mL)反复清洗3次、用MeOH(1.2mL)反复清洗3次、用DCM(1.2mL)反复清洗3次、用庚烷(1.2mL)反复清洗3次后在减压下干燥树脂，得到[表EI07]中所示的标题混合物。将所得的混合物中含有的化合物名表示于[表EI07]中。
[表61]
[表EI07]混合物编号：mixEI07-02R，使用的胺试剂：BB30，切出后的混合物编号：mixEI07
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实施例6-3-7-B：混合物mixEI08-02R～mixEI10-02R的合成
使用[表EI06]中所示的混合物mixEI06-02R(50mg，担载量0.648mmol/g，0.0324mmol)和胺试剂(BB31～BB33)，利用与实施例6-3-7-A同样的方法合成，得到[表EI08]～[表EI10]中所示的标题混合物。将所得的混合物中含有的化合物名表示于[表EI08]～[表EI10]中。
[表62]
[表EI08]混合物编号：mixEI08-02R，使用的胺试剂：BB31，切出后的混合物编号：mixEI08
/>
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[表63]
[表EI09]混合物编号：mixEI09-02R，使用的胺试剂：BB32，切出后的混合物编号：mixEI09
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[表64]
[表EI10]混合物编号：mixEI10-02R，使用的胺试剂：BB33，切出后的混合物编号：mixEI10
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/>
实施例6-3-8：混合物mixEI11-02R的合成
[化111]
向2mL的玻璃小瓶中加入[表EI06]中所示的混合物mixEI06-02R(50mg，担载量0.648mmol/g，0.0324mmol)和NMP(1.28mL)，在室温振荡1小时。加入1-金刚烷基甲胺盐酸盐(BB34，19.6mg，97μmol)、DIC(30.3μL，0.194mmol)、HOAt(26.5mg，0.194mmol)和DIPEA(17μL，97μmol)，在40℃振荡22小时。将反应液和树脂的悬浮液使用NMP溶液转移到带有滤芯的注射器中。用NMP(1.2mL)反复清洗3次、用MeOH(1.2mL)反复清洗3次、用DCM(1.2mL)反复清洗3次、用庚烷(1.2mL)反复清洗3次后在减压下干燥树脂，得到[表EI11]中所示的标题混合物。将所得的混合物中含有的化合物名表示于[表EI11]中。
[表64-1]
[表EI11]混合物编号：mixEI11-02R，使用的胺试剂：BB34，切出后的混合物编号：mixEI11
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实施例6-3-9：混合物mixEI12-02R的合成
[化112]
使用[表EI06]中所示的混合物mixEI06-02R(50mg，担载量0.648mmol/g，0.0324mmol)和1-(1-金刚烷基)-N-甲基甲胺(BB35)，利用与实施例6-3-8同样的方法进行合成，得到[表EI12]中所示的标题混合物。将所得的混合物中含有的化合物名表示于[表EI12]中。
[表64-2]
[表EI12]混合物编号：mixEI12-02R，使用的胺试剂：BB35，切出后的混合物编号：mixEI12
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实施例6-3-10-A：混合物mixEI13-02R的合成
[化113]
向2mL的玻璃小瓶中加入[表EI06]中所示的混合物mixEI06-02R(50mg，担载量0.648mmol/g，0.0324mmol)和NMP(1.13mL)，在室温振荡1小时。在室温加入HATU(73.9mg，0.194mmol)和2,6-二甲基吡啶(22.6μL，0.194mmol)，在40℃振荡3小时。在室温加入甲磺酰胺(BB36，21.6mg，0.227mmol)和磷腈碱P1tBu(124μL，0.486mmol)，在40℃振荡18小时。在室温加入正丙胺(27μL，0.324mmol)，振荡1小时。将反应液与树脂的悬浮液使用NMP转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(1.2mL)反复清洗3次、用HOAt/NMP(0.2M，1.2mL)反复清洗3次、用NMP(1.2mL)反复清洗3次、用MeOH(1.2mL)反复清洗3次、用DCM(1.2mL)反复清洗3次、用庚烷(1.2mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到[表EI13]中所示的标题混合物。将所得的混合物中含有的化合物名表示于[表EI13]中。
[表65]
[表EI13]混合物编号：mixEI13-02R，使用的胺试剂：BB36，切出后的混合物编号：mixEI13
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实施例6-3-10-B：混合物mixEI14-02R～mixEI18-02R的合成
使用[表EI06]中所示的混合物mixEI06-02R(50mg，担载量0.648mmol/g，0.0324mmol)和胺试剂(BB37～38、40～42)，利用与实施例6-3-10-A同样的方法进行合成，得到[表EI14]～[表EI18]中所示的标题混合物。将所得的混合物中含有的化合物名表示于[表EI14]～[表EI18]中。
[表66]
[表EI14]mixEI14-02R，使用的胺试剂：BB37，切出后的混合物编号：mixEI14
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[表67]
[表EI15]mixEI15-02R，使用的胺试剂：BB38，切出后的混合物编号：mixEI15
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[表68]
[表EI16]mixEI16-02R，使用的胺试剂：BB40，切出后的混合物编号：mixEI16
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[表69]
[表EI17]mixEI17-02R，使用的胺试剂：BB41，切出后的混合物编号：mixEI17
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[表70]
[表EI18]mixEI18-02R，使用的胺试剂：BB42，切出后的混合物编号：mixEI18
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实施例6-4-1：混合物mixEJ01的合成
[化114]
在氮气气氛下，向1.6mL的玻璃小瓶中加入[表EI07]中所示的混合物mixEI07-02R(可能包含100种化合物的混合物，49.2mg，担载量0.648mmol/g，31.9μmol)和1,2,3-三甲基苯/DCM(0.23M，700μL)，在室温振荡1小时。加入TFA(300μL，3.89mmol)，在室温振荡3小时。将反应液和树脂的悬浮液使用DCM溶液转移到带有滤芯的注射器中，对加入了DMI(0.5mL)的试管施加氮压而进行过滤。用DCM(0.5mL)反复清洗两次、用DMI(0.5mL)反复清洗两次、用DCM(0.5mL)反复清洗两次、用DMI(0.5mL)反复清洗两次。将滤液利用Genevac(在40℃以50-200mbar减压至检测到低沸点溶剂的蒸馏除去结束后、在40℃以低于0.5mbar蒸馏16小时)在减压下蒸馏除去溶剂，得到[表EIJ01]中所示的标题混合物mixEJ01。利用分析条件SMD-FA05-long-25min进行分析，在UV波长290nm确认UV面积。需要说明的是，对于混合物的分析结果表示于[表EJ01]中。
[表71]
[表EIJ01]
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[表EJ01]中，记载有观测到的UV峰的保留时间(min)、在该UV峰中观测到的(M+H)+、MS色谱图中的MS峰的保留时间、归属于UV峰以及MS峰的化合物的编号。由于在实施例6-2-2中有可能缺损2种化合物以及在实施例6-2-3中有可能缺损2种化合物，因此表[EJ01]中所示的100种化合物当中有可能缺损4种化合物。
[表72]
[表EJ01]
实施例6-4-2：混合物mixEJ02～mixEJ12的合成
使用[表EI08]～[表EI18]中所示的混合物mixEI08-02R～mixEI18-02R)，利用与实施例6-4-1同样的方法进行合成，得到[表EIJ02]～[表EIJ12]中所示的标题混合物mixEJ02～mixEJ12。利用分析条件SMD-FA05-long-25min进行分析，在UV波长290nm确认UV面积。需要说明的是，对于混合物的分析结果表示于[表EJ02]～[表EJ12]中。
[表73]
[表EIJ02]
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[表74]
[表EIJ03]
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[表75]
[表EIJ04]
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[表76]
[表EIJ05]
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[表77]
[表EIJ06]
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[表78]
[表EIJ07]
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[表79]
[表EIJ08]
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[表80]
[表EIJ09]
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[表81]
[表EIJ10]
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[表82]
[表EIJ11]
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[表83]
[表EIJ12]
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[表EJ02]～[表EJ12]中，记载有观测到的UV峰的保留时间(min)、在该UV峰中观测到的(M+H)+、MS色谱图中的MS峰的保留时间、归属于UV峰以及MS峰的化合物的编号。由于在实施例6-2-2中有可能缺损2种化合物以及在实施例6-2-3中有可能缺损2种化合物，因此[表EIJ02]～[表EIJ12]中所示的1100种化合物当中有可能缺损44种化合物。
[表84]
[表EJ02]
[表85]
[表EJ03]
[表86]
[表EJ04]
[表87]
[表EJ05]
[表88]
[表EJ06]
[表89]
[表EJ07]
[表90]
[表EJ08]
[表91]
[表EJ09]
[表92]
[表EJ10]
[表93]
[表EJ1]
[表94]
[表EJ12]
实施例6-5：从固相中切出后的后处理以及联烯醇部分的选择性乙基化反应
对从树脂中切出的混合物实施除去TFA的操作后，对所得的化合物的联烯醇部分实施选择性乙基化，进行官能团转变。使用实施例6-4-1和实施例6-4-2中得到的[表EIJ01]～[表EIJ12]中所示的混合物mixEJ01～mixEJ12，利用下面所示的方法实施。对于使用mixEJ-11除去TFA后实施乙基化、得到mixAI-B2Q-01的实验操作作为一例给出。
实施例6-5-1：混合物mixAI-B2Q-01的合成
[化115]
向mixEJ11(假定为35.3μmol)中加入DMI(1mL)、氟苯(作为内标、添加30μL)，利用涡旋搅拌使之完全溶解。将该溶液转移到填充有经过固相担载的吗啉(Merck，cat.No.493813，吗啉，聚合物担载200-400目，标记范围：2.75-3.25mmol/g loading，1％交联，300mg)的注射器色谱柱中，用MeCN(250μL)洗涤2次后，静置10分钟。进行加压而将滤液从色谱柱下方用试管回收。将经过固相担载的吗啉用MeCN(1mL)清洗3次，进行加压过滤，将所有的滤液集中在一起。将集中的溶液利用Genevac在减压下蒸馏除去溶剂(在40℃以50-200mbar减压至检测到低沸点溶剂的蒸馏除去结束后，在40℃以低于0.5mbar蒸馏16小时)。向残渣中加入DMI(500μL)并进行搅拌而使之溶解后，转移到玻璃小瓶中，用DMI(250μL)洗涤2次。将所得的溶液利用Genevac在减压下蒸馏除去溶剂(在40℃以50-200mbar减压至检测到低沸点溶剂的蒸馏除去结束)，得到接下来的乙基化中使用的浓缩物。
在氮气气氛下，向加入了所得的浓缩物(假定为31.9μmol)的玻璃小瓶中加入DMI(550μL)、BTPP(151μL)、Et3PO4(151μL)，在80℃搅拌30小时。冷却到室温后，使反应液吸附于羧酸担载硅胶柱(Biotage 公司制CBA SPE色谱柱，1g/6mL，0.7meq/g，产品编号：520-0100-C)，静置10分钟。加入MeCN(1mL)，进行加压，将滤液用试管回收。将羧酸担载硅胶用MeCN(1mL)清洗2次，进行加压过滤，收集滤液。加入DMSO(1mL)后，利用Genevac(在40℃以50-200mbar减压至检测到低沸点溶剂的蒸馏除去结束后，在40℃以低于0.5mbar蒸馏16小时)在减压下蒸馏除去溶剂，以油状物质的形式得到[表AI-03-B2Q-01]中所示的标题的混合物mixAI-B2Q-01(25.0mg)。
实施例6-5-2：对其他11种的混合物的TFA除去及乙基化的实施
对[表EJ01]～[表EJ10]及[表EJ12]中所示的混合物mixEJ01～mixEJ10及mixEJ12也实施与实施例6-5-1同样的操作，得到[表AI-03-B4J-01]、[表AI-03-B1M-01]、[表AI-03-B1K-01]、[表AI-03-B1O-01]、[表AI-03-B1A-01]、[表AI-03-B3A-01]、[表AI-03-B2I-01]、[表AI-03-B2L-01]、[表AI-03-B2N-01]、[表AI-03-B2A-01]、[表AI-03-B2R-01]中所示的混合物。
对于所用的原料的混合物编号、由各个原料的混合物得到的目的物的混合物编号以及目的物的混合物中可能含有的化合物的编号、所得的混合物的重量表示于[表AI-03-01]中。
[表95]
[表AI-03-01]
表AI-03-01
原料的混合物编号 目的物的混合物编号 目的物的混合物中可能含有的化合物的编号 所得的化合物的重量(mg)
mixEJ01 mixAI-B4J-01 B4J001-01～B4J100-01 21.9
mixEJ02 mixAI-B1M-01 B1M001-01～B1M100-01 22.2
mixEJ03 mixAI-B1K-01 B1K001-01～B1K100-01 24.3
mixEJ04 mixAI-B1O-01 B1O001-01～B1O100-01 22.3
mixEJ05 mixAI-B1A-01 B1A001-01～B1A100-01 18.3
mixEJ06 mixAI-B3A-01 B3A001-01～B3A100-01 27.5
mixEJ07 mixAI-B2I-01 B2I001-01～B2I100-01 30.9
mixEJ08 mixAI-B2L-01 B2L001-01～B2L100-01 28.1
mixEJ09 mixAI-B2N-01 B2N001-01～B2N100-01 25.6
mixEJ10 mixAI-B2A-01 B2A001-01～B2A100-01 23.3
mixEJ11 mixAI-B2Q-01 B2Q001-01～B2Q100-01 25.0
mixEJ12 mixAI-B2R-01 B2R001-01～B2R100-01 28.2
[表96]
[表AI-03-B2Q-01]
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[表97]
[表AI-03-B4J-01]
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[表98]
[表AI-03-B1M-01]
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[表99]
[表AI-03-B1K-01]
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[表100]
[表AI-03-B1O-01]
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[表101]
[表AI-03-B1A-01]
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[表102]
[表AI-03-B3A-01]
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[表103]
[表AI-03-B2I-01]
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[表104]
[表AI-03-B2L-01]
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[表105]
[表AI-03-B2N-01]
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[表106]
[表AI-03-B2A-01]
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[表107]
[表AI-03-B2R-01]
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实施例6-5-3：混合物溶液的制备以及基于LCMS的分析
对于实施例6-5-1及实施例6-5-2中所得的混合物12种，分别加入DMSO，制备出12种大约10mM的DMSO溶液。将其中的100μL用于实施例7中所示的基于AS-MS的与Bcl-2的结合评价实验。另外，将12种10mM的DMSO溶液的一部分用MeCN稀释，利用LCMS进行分析。对于分析结果表示于[表AI-03-02]中。
[表108]
[表AI-03-02]
[表109]
[表110]
[表111]
[表112]
[表113]
[表114]
[表115]
[表116]
[表117]
[表118]
[表119]
[表AI-03-02]中给出归属各化合物的UV以及MS峰的保留时间、在该时间带中检测出的m/z(M+H)+的值。由于在实施例6-2-2中有可能缺损2种化合物以及在实施例6-2-3中有可能缺损2种化合物，因此对于由这些共计4种化合物衍生的48种化合物而言也有可能缺损。由此，如“表AI-03-02”中所示，可以确定与作为库化合物设定的1200种化合物当中的1152种化合物相当的m/z(M+H)+峰。
由以上的结果显示，通过在本实施例内给出的反应条件下，对具有各种反应性官能团的联烯醇进行高选择性乙基化，另外，实施无需色谱柱纯化的后处理，能够构建出化合物数大于1000、且其95％以上能够利用LC-MS的保留时间及质荷比(m/z)检出的、高品质且官能团具有多样性的化合物库。
实施例6-6：使用了联烯醇的O-选择性乙基化法的、官能团具有多样性的化合物库 的制造例2
在实施例6-1～6-5中给出通过进行针对混合有100种化合物的12种混合物中的联烯醇的高选择性乙基化、实施无需利用色谱柱的纯化操作的后处理来应用于官能团具有多样性的化合物库的合成的一例。在实施例6-6中给出通过对包含1000种化合物的混合物实施针对联烯醇的高选择性乙基化反应来构建库的例子。
对于实施例6-6中实施的该库中包含的“核心区的多样性”和“接头的多样性”表示于图2中，将作为原料另行制备的混合物2-1-m1E01-1中可能包含的化合物表示于[表6-6-2]中。
对表中的表述方法进行说明。[表6-6-2]中，将混合物2-1-m1E01-1中可能包含的各个化合物用ID表示，将混合物2-1-m1E01-1的结构中的核心区与接头的组合用记号、或化学式表示。记号与具体的结构的对应表示于图2中。[表6-6-2]中以化学式表示。
[化116]
例如，在ID为2-1-m1E01-1-0181的情况下，[表6-6-1]中给出下述结构式。
[化117]
2-1-m1E01-1-0181
[表120]
[表6-6-1]ID表述(2-1-m1E01-1-0181)中的化合物结构
[表121]
[表6-6-2]混合物2-1-m1E01-1中可能包含的化合物
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将使用另行制备的混合物2-1-m1E01-1进行乙基化反应时的反应式例示如下。
[化118]
使用另行制备的混合物2-1-m1E01-1，如下所示地合成混合物2-1-m1E01-2。
向加入到0.5-2mL的微波容器中的混合物2-1-m1E01-1(9.6mg，13.5μmol)中，加入DMF(154μL)、EtOH(38.6μL)、BTPP(41.3μL，0.135mmol)和Et3PO4(34.4μL，0.203mmol)，在70℃振荡27小时。将反应液使用2次的MeCN(0.2mL)转移到填充有CBA(0.7mmol/g，189mg)的6mL的带有滤芯的色谱柱中。10分钟后，用MeCN(0.5mL)清洗5次，对合并的滤液进行减压蒸馏除去(使用Genevac减压浓缩装置)，得到混合物2-1-m1E01-2。将混合物2-1-m1E01-2的详情表示于[表6-6-4]中。
对[表6-6-4]中的表述方法进行说明。[表6-6-4]中，将混合物2-1-m1E01-2中可能包含的各个化合物用ID表示，将混合物2-1-m1E01-2的结构中的核心区与接头的组合用记号、或化学式表示。记号与具体的结构的对应表示于图2中。[表6-6-4]中以化学式表示。
[化119]
例如，在ID为2-1-m1E01-2-0001的情况下，[表6-6-3]中给出下述结构式。
[化120]
2-1-m1E01-2-0001
[表122]
[表6-6-3]ID表述中的化合物的结构
将混合物2-1-m1E01-2中可能包含的化合物表示于[表6-6-4]中。
[表123]
[表6-6-4]混合物2-1-m1E01-2中可能包含的化合物
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实施例6-7：混合物的分析
对实施例6-6中合成的混合物利用以下所示的分析条件实施保留时间的测定和质谱分析，使用Compound Discoverer 3.2(Thermo Fisher Scientific)进行分析。
[表124]
反相LC/MS条件
对于各混合物的分析结果表示于[表6-7-1]中。
[表125]
[表6-7-1]混合物2-1-m1E01-2中可能包含的化合物
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实施例6-8：使用了联烯醇的O-选择性乙基化法的、官能团具有多样性的化合物库 的制造例3
在实施例6-8中给出通过对包含500种化合物的混合物实施乙基化反应来构建库的例子。对于实施例6-8中实施的该库中包含的“核心区的多样性”和“接头的多样性”表示于图3中，将包含作为原料的联烯醇的另行制备的混合物2-2-d1E01-1表示于[表6-8-2]中。
对表中的表述方法进行说明。[表6-8-2]中，将混合物2-2-d1E01-1中可能包含的各个化合物用ID表示，将混合物2-2-d1E01-1的结构中的核心区与接头的组合用记号、或化学式表示。记号与具体的结构的对应表示于图3中。[表6-8-2]中以化学式表示。
[化121]
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例如，在ID为2-2-d1E01-1-0001的情况下，[表6-8-1]中给出下述结构式。
[化122]
2-2-d1E01-1-0001
[表126]
[表6-8-1]ID表述中的化合物表述例
[表127]
[表6-8-2]混合物2-2-d1E01-1中可能包含的化合物
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将使用另行制备的混合物2-2-d1E01-1进行乙基化反应时的反应式例示如下。
[化123]
向加入到0.5-2mL的微波容器中的混合物2-2-d1E01-1(8.75μmol)中加入DMF(100μL)、EtOH(25.0μL)、BTPP(26.8μL，0.088mmol)和Et3PO4(22.3μL，0.131mmol)，在70℃振荡27小时。将反应液使用2次的MeCN(0.2mL)转移到CBA(200mg，0.7mmol/g)中。10分钟后，用MeCN(0.5mL)清洗3次，在15mm＊75mm的试管中接收合并的滤液。对溶液进行减压蒸馏除去(使用Genevac减压浓缩装置)，得到混合物2-2-d1E01-2。将混合物2-2-d1E01-2的详情表示于[表6-8-4]中。
对表中的表述方法进行说明。[表6-8-4]中，将混合物2-2-d1E01-2中可能包含的各个化合物用ID表示，将混合物2-2-d1E01-2的结构中的核心区与接头的组合用记号或化学式表示。记号与具体的结构的对应表示于图3中。[表6-8-4]中以化学式表示。
[化124]
例如，在ID为2-2-d1E01-2-0001的情况下，[表6-8-3]中给出下述结构式。
[化125]
2-2-d1E01-2-0001
[表128]
[表6-8-3]ID表述中的化合物结构表述例
将混合物2-2-d1E01-2中可能包含的化合物表示于[表6-8-4]中。
[表129]
[表6-8-4]混合物2-2-d1E01-2中可能包含的化合物
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实施例6-9：混合物的分析
对实施例6-8中合成的混合物利用以下所示的分析条件实施保留时间的测定和质谱分析，使用Compound Discoverer 3.2(Thermo Fisher Scientific)进行分析。
[表130]
反相LC/MS条件
对于各混合物的分析结果表示于[表6-9-1]中。表中给出观测到的MS峰的m/z和保留时间、以及能够归属于各MS峰的化合物的编号。
[表131]
[表6-9-1]混合物2-2-d1E01-2中可能包含的化合物
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以上的结果显示，在本实施例内给出的反应条件下，通过对具有各种反应性官能团的联烯醇进行高选择性乙基化，另外，实施无需色谱柱等的操作的后处理，能够构建混合有官能团具有多样性的500种化合物、或1000种化合物的化合物库。
需要说明的是，出于像前述(实施例6-5-1、6-5-2)所示那样例示出利用本发明的方法乙基化的化合物组能够在实际中作为混合物库应用、并且证明可以获得所期望的化合物组的目的，实施了所合成的混合物的使用了AS-MS的与Bcl-2的结合评价(实施例7)、利用AS-MS鉴定的Bcl-2结合化合物的单独合成(实施例8)、单独合成的化合物的基于表面等离子体共振(SPR)的与Bcl-2的结合评价(实施例9)。
实施例7：使用了AS-MS的与Bcl-2的合成混合物库化合物(实施例6-5-1和实施例 6-5-2中制备的、确认有1152种化合物的存在的混合物库)的结合评价
对于MICROPLATE、96孔、PP、V-BOTTOM(Greiner bio-one，651201)的1孔，分别移液实施例6中所示的[表AI-03-B4J-01]、[表AI-03-B1M-01]、[表AI-03-B1K-01]、[表AI-03-B1O-01]、[表AI-03-B1A-01]、[表AI-03-B3A-01]、[表AI-03-B2I-01]、[表AI-03-B2L-01]、[表AI-03-B2N-01]、[表AI-03-B2A-01]、[表AI-03-B2Q-01]、[AI-03-B2R-01]中记载的各自混合有100种化合物的12种混合物即mixAI―B4J-01、mixAI―B1M-01、mixAI―B1K-01、mixAI―B1O-01、mixAI―B1A-01、mixAI―B3A-01、mixAI―B2I-01、mixAI―B2L-01、mixAI―B2N-01、mixAI―B2A-01、mixAI―B2Q-01、mixAI―B2R-01的DMSO溶液(基于根据各混合物的平均分子量的计算制备成大约0.58mM)，共计移液到12孔中。使用LABCYTE ECHO(注册商标)555声波移液系统(BECKMAN COULTER)，从12孔中各自将70nL集中到任选的1孔中，制备出混合有1200种化合物(在实施例6-5-3中进行制备时已经确定1152种化合物存在)的状态的样品溶液。(本说明书中将该集中在1孔中的混合物称作1个库。)继而将预先使用Tris-HCl缓冲液(25mM Tris-HCl pH7.4，150mM NaCl，0.025％Tween-20，1mM DTT)制备成20.9μM的Bcl-2蛋白质(Novus，NBP2-34889，Recombinant Human Bcl-2Protein(重组人Bcl-2蛋白)，Lot E60145051)(19.2μL)加入移液有1200种化合物(在实施例6-5-3中进行制备时已经确定1152种化合物存在)的孔中(最终化合物浓度20nm，最终Bcl-2浓度20μM)，在暗处在23℃孵化1小时。然后使用溶胀了的96孔MacroSpin柱、P-2Material(Harvard，74-5655)利用分析缓冲液(25mM Tris-HCl pH7.4，150mM NaCl，0.025％Tween-20，1mM DTT)200μL、2000×G、4℃、2分钟离心进行3次，实施96孔MacroSpin柱的预处理。然后，将孵化后的样品20μL添加到预处理完成后的96孔MacroSpin柱、P-2Material中，利用2000×G、2分钟离心进行SEC处理。向来自SEC的通液中加入32μL的乙腈与甲醇(LC/MS级，富士胶片和光纯药工业(株))1：1的混合液，进行1800×G、4℃、5分钟离心，将上清液设为分析样品ASMS(A)，对利用同样的操作以1200种化合物/孔制备、没有加入Bcl-2蛋白而仅加入Tris-HCl缓冲液的样品在同一条件下进行孵化，不进行96孔MacroSpin柱处理，加入相同的有机溶剂，将利用离心操作得到的上清液设为STD(B)。然后对利用同样的操作以1200种化合物/孔制备、没有加入Bcl-2蛋白而仅加入Tris-HCl缓冲液的样品在同一条件下进行孵化，同样地实施96孔MacroSpin柱处理，加入相同的有机溶剂，将利用离心操作得到的上清液设为BK(C)，利用反相LC/MS进行测定。
此后，利用TraceFinder5.1(Thermo Fisher Scientific)及CHANCE Software(in-house)对样品A、B及C进行1200种化合物的分析，利用以下的计算式算出ASMS Ratio(％)。
计算式ASMS Ratio(％)＝(A-C)/B×100
[表132]
反相LC/MS条件
将结果表示于[表AJ-01]中。
[表133]
[表AJ-01]
na＝not available
[表134]
na＝not available
[表135]
na＝not available
[表136]
na＝not available
[表137]
na＝not available
[表138]
na＝not available
[表139]
na＝not available
[表140]
na＝not available
[表141]
na＝not available
在作为阳性对照含有的2种化合物B2Q045-01(49.9％，49.9％)、B2Q046-01(20.3％，20.5％)的基础上，还对多种化合物检测出与Bcl-2的结合。对于这些化合物当中的11种化合物，即B2Q047-01(142.5％，326.4％)、B2Q097-01(142.5％，326.4％)、B2Q048-01(61.6％，90.8％)、B2Q098-01(61.6％，90.8％)、B2Q053-01(22.4％，15.5％)、B2Q054-01(44.1％，65.0％)、B2Q066-01(40.7％，36.9％)、B1A075-01(31.3％，28.6％)、B3A073-01(31.3％，28.6％)、B2R074-01(22.4％，25.4％)、B2Q012-01(21.4％，22.5％)，另行单独合成(记载于实施例8中)，在实施例9中实施了基于SPR的结合确认实验。
实施例8：利用AS-MS实验鉴定出的Bcl-2结合化合物的单独化合物合成
实施例8-1-1：4-[4-[[4-(3-乙氧基苯基)-3-甲基苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3- 硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[AG016(B2Q047-01)]的合成
[化126]
将N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(AG014，CAS：406233-75-8)(150.00mg，0.277mmol)和4-(3-乙氧基苯基)-3-甲基苯甲醛(AG015，CAS：1506205-91-9)(79.86mg，0.332mmol)、乙酸(0.20mL，3.490mmol)的DMSO/乙醇＝1/1(3.00mL)溶液在室温搅拌2小时。加入氰基硼氢化钠(34.81mg，0.554mmol)，在室温搅拌2小时。浓缩混合物后，将所得的残渣用反相柱层析(C18，5-75％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化。将所得的粗产物利用分配HPLC(Xselect CSH OBD柱，49-59％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物AG016(50mg，23.1％)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ8.88(s，1H)，8.67(s，1H)，8.15(d，J＝9.0Hz，1H)，7.69(d，J＝8.4Hz，2H)，7.45-7.30(m，5H)，7.24(d，J＝12.9Hz，4H)，6.92-6.80(m，5H)，4.08(q，J＝7.2Hz，2H)，3.66-3.56(m，4H)，3.38-3.20(m，4H)，3.21(s，2H)，2.71(s，4H)，2.29(s，3H)，1.45(t，J＝6.9Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 766[M+H]+。
实施例8-1-1中例示出合成法的AG016在本说明书内有时也表述为化合物B2Q047-01。
实施例8-2-1：4-[4-[[4-(5-乙氧基吡啶-3-基)-3-甲基苯基]甲基]哌嗪-1-基]- N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[AG018(B2Q048-01)]的合成
[化127]
/>
将N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(AG014，CAS：406233-75-8)(100.00mg，0.185mmol)和4-(5-乙氧基吡啶-3-基)-3-甲基苯甲醛(AG017，CAS：1545014-81-0)(89.10mg，0.370mmol)、乙酸(0.05mL，0.873mmol)的DMSO/乙醇(1mL/1mL)溶液在室温搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(23.20mg，0.370mmol)，在室温搅拌16小时。浓缩混合物后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-100％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化。将所得的粗产物利用分配HPLC(XBridge Shield RP18OBD柱，42-61％乙腈/10mM碳酸氢铵+0.05％5M氨水溶液)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物AG018(64.1mg，43.87％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.68(s，1H)，8.55(d，J＝2.0Hz，1H)，8.28(d，J＝2.8Hz，1H)，8.14(d，J＝2.0Hz，1H)，7.91-7.85(m，1H)，7.75(d，J＝8.8Hz，2H)，7.42-7.34(m，3H)，7.28-7.25(m，5H)，7.19-7.09(m，1H)，7.11(d，J＝9.6Hz，1H)，6.90(d，J＝8.8Hz，2H)，4.16(q，J＝8.0Hz，2H)，3.68-3.61(m，4H)，3.33-3.25(m，6H)，2.70-2.51(m，4H)，2.26(s，3H)，1.32(t，J＝8.0Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 767[M+H]+。
实施例8-2-1中例示出合成法的AG018在本说明书内有时也表述为化合物B2Q048-01。
实施例8-3-1：4-(5-乙氧基吡啶-3-基)-2-甲氧基苯甲醛(AG021)的合成
[化128]
在氮气气氛下，向2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯甲醛(AG019，CAS：956431-01-9)(300mg，1.145mmol)的1,4-二氧六环/水(6mL/0.6mL)溶液中加入3-溴-5-乙氧基吡啶(AG020，CAS：17117-17-8)(277.5mg，1.374mmol)和乙酸钾(224.7mg，2.290mmol)、Pd(dppf)Cl2(83.8mg，0.115mmol)，在90℃搅拌3小时。过滤混合物，浓缩滤液后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-20％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG021(250mg，80.7％)。
LCMS(ESI)：m/z 258[M+H]+。
保留时间：0.845分钟(分析条件PH-TFA-13)。
实施例8-3-2：4-[4-[[4-(5-乙氧基吡啶-3-基)-2-甲氧基苯基]甲基]哌嗪-1- 基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[AG022(B2Q054-01)]的合 成
[化129]
将N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(AG014，CAS：406233-75-8)(150mg，0.277mmol)和4-(5-乙氧基吡啶-3-基)-2-甲氧基苯甲醛(AG021)(106.9mg，0.416mmol)、乙酸(0.20mL，3.490mmol)的DMSO/乙醇(3mL/3mL)溶液在室温搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(34.81mg，0.554mmol)，在室温搅拌16小时。浓缩混合物后，将所得的残渣利用反相柱层析(C18，0-80％乙腈/水)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG022(30mg，13.5％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.25(s，1H)，8.69(t，J＝6.0Hz，1H)，8.59-8.52(m，2H)，8.28(d，J＝2.7Hz，1H)，7.91-7.87(m，1H)，7.74(d，J＝8.7Hz，2H)，7.64-7.63(m，1H)，7.49-7.46(m，1H)，7.39-7.31(m，4H)，7.30-7.24(m，2H)，7.20-7.09(m，2H)，6.91(d，J＝8.7Hz，2H)，4.20(q，J＝6.9Hz，2H)，3.92(s，3H)，3.79-3.74(m，2H)，3.67-3.60(m，2H)，3.39-3.23(m，6H)，2.72-2.68(m，4H)，1.37(t，J＝6.9Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 783[M+H]+。
实施例8-3-2中例示出合成法的AG022在本说明书内有时也表述为化合物B2Q054-01。
实施例8-4-1：4-(5-乙氧基吡啶-3-基)萘-1-甲醛(AG024)的合成
[化130]
在氮气气氛下，将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)萘-1-甲醛(AG023，CAS：1008361-71-4)(300mg，1.063mmol)和3-溴-5-乙氧基吡啶(AG020，CAS：17117-17-8)(179mg，0.886mmol)、Pd(dppf)Cl2·DCM(72.2mg，0.089mmol)、乙酸钾(173.89mg，1.772mmol)的1,4-二氧六环/水(6mL/0.60mL)溶液在90℃搅拌2小时。过滤混合物，浓缩滤液后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-40％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，以淡黄色液体的形式得到标题化合物AG024(240mg，91％)。
LCMS(ESI)：m/z 278[M+H]+。
保留时间：0.769分钟(分析条件PH-FA-05)。
实施例8-4-2：4-[4-[[4-(5-乙氧基吡啶-3-基)萘-1-基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3- 硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[AG025(B2Q066-01)]的合成
[化131]
将N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(AG014，CAS：406233-75-8)(180mg，0.332mmol)和4-(5-乙氧基吡啶-3-基)萘-1-甲醛(AG024)(184mg，0.664mmol)、乙酸(0.05mL，0.873mmol)的DMSO/乙醇(2mL/2mL)溶液在室温搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(41.77mg，0.664mmol)，在室温搅拌16小时。浓缩混合物后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-100％乙酸乙酯/石油醚、接下来用0-10％甲醇/二氯甲烷)进行纯化。将所得的粗产物利用分配HPLC(XBridge Prep OBD C18柱，41-71％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物AG025(49.1mg，17.9％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.73(s，1H)，8.58(d，J＝2.3Hz，1H)，8.43(d，J＝8.4Hz，1H)，8.38(d，J＝2.8Hz，1H)，8.24(d，J＝1.7Hz，1H)，7.89(dd，J＝9.2，2.3Hz，1H)，7.76(dd，J＝12.7，8.9Hz，3H)，7.66-7.49(m，3H)，7.50-7.42(m，2H)，7.41-7.33(m，2H)，7.27(t，J＝7.6Hz，2H)，7.20-7.11(m，2H)，6.92(d，J＝8.7Hz，2H)，4.18(q，J＝7.0Hz，2H)，4.07-4.00(m，2H)，3.68-3.60(m，2H)，3.32-3.21(m，6H)，2.68-2.60(m，4H)，1.37(t，J＝6.9Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 803[M+H]+。
实施例8-4-2中例示出合成法的AG025在本说明书内有时也表述为化合物B2Q066-01。
实施例8-5-1：4-[4-[[2-(3-乙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4- (2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[AG005(B2Q045-01)]的合成
[化132]
在氮气气氛下，将4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物25)(250mg，0.352mmol)和(3-乙氧基苯基)硼酸(AG004，CAS：90555-66-1)(116.8mg，0.704mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(24.7mg，0.035mmol)、碳酸钠(48.5mg，0.457mmol)的二甲氧基乙烷/乙醇/水＝1/1/1(5mL)溶液在80℃搅拌3小时。过滤混合物，将滤液用乙酸乙酯稀释，加入水。萃取有机层，用硫酸钠干燥。浓缩后，将所得的残渣利用反相柱层析(C18，5-60％乙腈/水)进行纯化。将所得的粗产物利用分配HPLC(YMC-Actus Triart C18，50-80％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物AG005(45mg，0.060mmol，16.9％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.93(s，1H)，8.72(s，1H)，8.55(d，J＝2.4Hz，1H)，7.92-7.83(m，1H)，7.71(d，J＝8.7Hz，2H)，7.52(d，J＝7.2Hz，1H)，7.46-7.16(m，8H)，7.21-7.06(m，2H)，7.05-6.69(m，5H)，4.03(q，J＝6.9Hz，2H)，3.63(d，J＝6.6Hz，2H)，3.45(s，2H)，3.26(t，J＝6.6Hz，6H)，2.41(s，4H)，1.30(t，J＝6.9Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 752[M+H]+。
实施例8-5-1中例示出合成法的AG005在本说明书内有时也表述为化合物B2Q045-01。
实施例8-6-1：4-[4-[[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝 基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[AG007(B2Q046-01)]的合成
[化133]
在氮气气氛下，将4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物25)(350mg，0.492mmol)和3-乙氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(AG006，CAS：1171892-40-2)(245.4mg，0.985mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(34.6mg，0.049mmol)、碳酸钠(68.5mg，0.640mmol)的二甲氧基乙烷/乙醇/水＝1/1/1(6mL)溶液在80℃搅拌3小时。过滤混合物，将滤液用乙酸乙酯稀释，加入水。萃取有机层，用硫酸钠干燥。浓缩后，将所得的残渣利用反相柱层析(C18，5-80％乙腈/水)进行纯化。将所得的粗产物利用分配HPLC(XBridge Shield RP18OBD柱，37-52％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物AG007(28.4mg，0.038mmol，7.6％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.97(s，1H)，8.68(s，1H)，8.53(d，J＝2.1Hz，1H)，8.25(d，J＝2.7Hz，1H)，8.16(d，J＝1.8Hz，1H)，7.90-7.83(m，1H)，7.71(d，J＝9.0Hz，2H)，7.59-7.46(m，2H)，7.46-7.17(m，7H)，7.17-6.95(m，2H)，6.85(d，J＝8.7Hz，2H)，4.11(q，J＝6.9Hz，2H)，3.68-3.56(m，2H)，3.42(s，2H)，3.23(s，5H)，2.39(s，4H)，1.32(t，J＝6.9Hz，3H)。
LRMS(ESI)：m/z 753[M+H]+。
实施例8-6-1中例示出合成法的AG007在本说明书内有时也表述为化合物B2Q046-01。
实施例8-7-1：4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺[AG010(BB42)] 的合成
[化134]
向2-苯基硫基乙胺(R-5，CAS：2014-75-7)(3.00g，19.48mmol)和4-氟-3-(三氟甲基)苯磺酰胺(AG009，CAS：1008304-87-7)(4.76g，19.48mmol)的DMSO(30mL)溶液中加入DIPEA(5.06g，38.96mmol)，在70℃搅拌16小时。将混合物利用反相柱层析(C18，5-80％乙腈/水)进行纯化，得到标题化合物AG010(3.8g，10.1mmol，50.5％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ7.82(d，J＝2.0Hz，1H)，7.79-7.73(m，1H)，7.45-7.38(m，2H)，7.36-7.30(m，2H)，7.26-7.19(m，1H)，7.15(s，2H)，6.89(d，J＝8.0Hz，1H)，6.37(t，J＝4.0Hz，1H)，3.52-3.44(m，2H)，3.32-3.14(m，2H)。
LCMS(ESI)：m/z 377[M+H]+。
实施例8-7-1中例示出合成法的AG010在本实施例内有时也表述为化合物BB42。
实施例8-7-2：4-[6-[[4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基氨基 甲酰基]哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(AG027)的合成
[化135]
向6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸(AC-012，CAS：1690948-00-5)(400mg，1.297mmol)和4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺(BB42)(488mg，1.297mmol)、EDCI(497mg，2.594mmol)、DMAP(158mg，1.297mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入DIPEA(671mg，5.188mmol)，在室温搅拌16小时。向混合物中加入水，将有机层用乙酸乙酯萃取3次，用硫酸钠干燥。浓缩后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-100％乙酸乙酯/石油醚、接下来用0-10％甲醇/二氯甲烷)进行纯化，以淡黄色固体的形式得到标题化合物AG027(400mg，43.9％)。
LCMS(ESI)：m/z 667[M+H]+。
保留时间：1.185分钟(分析条件PH-FA-06)。
实施例8-7-3：N-[4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基-6-哌嗪- 1-基哒嗪-3-甲酰胺(AG028)的合成
[化136]
向4-[6-[[4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(AG027)(200.00mg，0.300mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入HCl的1,4-二氧六环溶液(4M，2mL)，在室温搅拌16小时。浓缩混合物后，溶解于水中，加入碳酸氢钠水溶液而设为pH8。过滤所产生的固体后，用水清洗，在50℃干燥16小时，以淡茶色固体的形式得到标题化合物AG028(150mg)。
LCMS(ESI)：m/z 567[M+H]+。
保留时间：0.883分钟(分析条件PH-FA-06)。
实施例8-7-4：6-[4-[4-(3-乙氧基苯基)-3-氟苯甲酰基]哌嗪-1-基]-N-[4-(2-苯 基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基哒嗪-3-甲酰胺[AG030(B2R005-01)]的合成
[化137]
向N-[4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(AG028)(70mg，0.124mmol)和4-(3-乙氧基苯基)-3-氟苯甲酸(AG029，CAS：1261964-16-2)(32.2mg，0.124mmol)、EDCI(47.4mg，0.248mmol)、DMAP(15.1mg，0.124mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入DIPEA(63.9mg，0.496mmol)，在室温搅拌16小时。浓缩混合物后，将所得的残渣利用反相柱层析(C18，0-50％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化。将所得的粗产物利用分配HPLC(XBridge Prep OBD C18柱，36-66％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG030(20mg，19.6％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.97(s，1H)，7.85(t，J＝12.6Hz，2H)，7.64(t，J＝8.1Hz，1H)，7.56-7.20(m，8H)，7.24-7.04(m，3H)，7.00(d，J＝8.1Hz，1H)，6.86(d，J＝9.0Hz，1H)，6.45(s，1H)，4.09(q，J＝7.2Hz，2H)，3.85-3.73(m，5H)，3.59-3.45(m，5H)，3.20-3.13(m，2H)，1.35(t，J＝6.9Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 809[M+H]+。
实施例8-7-4中例示出合成法的AG030在本说明书内有时也表述为化合物B2R005-01。
实施例8-8-1：6-[4-[3-(3-乙氧基苯基)-5-(三氟甲基)苯甲酰基]哌嗪-1-基]-N- [4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基哒嗪-3-甲酰胺[AG032(B2R017- 01)]的合成
[化138]
向N-[4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(AG028)(70mg，0.124mmol)和3-(3-乙氧基苯基)-5-(三氟甲基)苯甲酸(AG031，CAS：1261907-60-1)(69.00mg，0.223mmol)、EDCI(47.37mg，0.248mmol)、DMAP(15.09mg，0.124mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入DIPEA(63.87mg，0.496mmol)，在室温搅拌16小时。浓缩混合物后，将所得的残渣利用反相柱层析(C18，0-45％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化。将所得的粗产物利用分配HPLC(Xselect CSH OBD柱，68-83％乙腈/0.1％甲酸水溶液)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG032(30mg，28.2％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.22(s，1H)，8.12(d，J＝11.7Hz，1H)，8.06(s，1H)，8.00(d，J＝2.1Hz，1H)，7.94-7.87(m，1H)，7.82(d，J＝9.6Hz，2H)，7.50-7.27(m，8H)，7.24-7.17(m，1H)，7.05-6.98(m，1H)，6.93(d，J＝9.0Hz，1H)，6.64(s，1H)，4.14(q，J＝6.9Hz，2H)，3.96-3.76(m，6H)，3.59-3.43(m，4H)，3.22-3.13(m，2H)，1.36(t，J＝6.9Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 859[M+H]+。
实施例8-8-1中例示出合成法的AG032在本实施例内有时也表述为化合物B2R017-01。
实施例8-9-1：4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[4-(2-苯基硫基乙基氨 基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(AG011)的合成
[化139]
向4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯磺酰胺(BB42)(0.80g，2.125mmol)和4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]苯甲酸(INT1)(1.20g，3.188mmol)、EDCI(0.81g，4.251mmol)、DMAP(0.26g，2.125mmol)的二氯甲烷(16mL)溶液中加入DIPEA(1.10g，8.501mmol)，在室温搅拌16小时。向混合物中加入氯化铵水溶液。将有机层用二氯甲烷萃取3次，用硫酸钠干燥。浓缩后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-100％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物AG011(1.3g，1.77mmol，83.4％)。
LCMS(ESI)：m/z 733[M+H]+。
保留时间：1.319分钟(分析条件PH-FA05-2)。
实施例8-9-2：4-[4-[[2-(3-乙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[4-(2-苯基 硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[AG012(B2R045-01)]的合成
[化140]
/>
在氮气气氛下，将4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(AG011)(165mg，0.225mmol)和(3-乙氧基苯基)硼酸(AG004，CAS：90555-66-1)(74.7mg，0.450mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(15.8mg，0.022mmol)、碳酸钠(31.0mg，0.292mmol)的二甲氧基乙烷/乙醇/水＝1/1/1(4mL)溶液在80℃搅拌3小时。过滤混合物，将滤液用乙酸乙酯稀释，加入水。萃取有机层，用硫酸钠干燥。浓缩后，将所得的残渣利用反相柱层析(C18，5-90％乙腈/水)进行纯化。将所得的粗产物利用分配HPLC(YMC-Actus Triart C18，53-83％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG012(19.7mg，0.025mmol，11.3％)。
1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ11.84(s，1H)，7.94(d，J＝2.0Hz，1H)，7.89-7.84(m，1H)，7.72(d，J＝8.0Hz，2H)，7.57-7.50(m，1H)，7.45-7.25(m，7H)，7.26-7.17(m，2H)，7.05-6.81(m，6H)，6.60(s，1H)，4.04(q，J＝8Hz，2H)，3.57-3.42(m，4H)，3.26(t，J＝4Hz，4H)，3.22-3.12(m，2H)，2.42(d，J＝5.7Hz，4H)，1.32(t，J＝8Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 775[M+H]+。
实施例8-9-2中例示出合成法的AG012在本说明书内有时也表述为化合物B2R045-01。
实施例8-10-1：4-[4-[[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-[4- (2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[AG013(B2R046-01)]
[化141]
在氮气气氛下，将4-[4-[(2-溴苯基)甲基]哌嗪-1-基]-N-[4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(AG011)(250mg，0.341mmol)和3-乙氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(AG006，CAS：1171892-40-2)(169.8mg，0.682mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(23.9mg，0.034mmol)、碳酸钠(47.0mg，0.443mmol)的二甲氧基乙烷/乙醇/水＝1/1/1(5mL)溶液在80℃搅拌16小时。过滤混合物，将滤液用乙酸乙酯稀释，加入水。萃取有机层，用硫酸钠干燥。蒸馏除去溶剂后，将所得的残渣利用反相柱层析(C18，5-80％乙腈/水)进行纯化。将所得的粗产物利用分配HPLC(XBridge Prep OBD C18柱，45-75％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化，以灰色固体的形式得到标题化合物AG013(34.2mg，0.044mmol，12.8％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.98(s，1H)，8.25(d，J＝2.7Hz，1H)，8.16(d，J＝1.8Hz，1H)，7.89(d，J＝2.1Hz，1H)，7.80(d，J＝9.3Hz，1H)，7.70(d，J＝8.7Hz，2H)，7.55-7.47(m，2H)，7.48-7.23(m，7H)，7.22-7.15(m，1H)，6.83(d，J＝8.6Hz，3H)，6.37(s，1H)，4.12(q，J＝6.9Hz，2H)，3.40(s，4H)，3.17(s，4H)，3.13(d，J＝8.4Hz，2H)，2.38(s，4H)，1.32(t，J＝7.2Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 776[M+H]+。
实施例8-10-1中例示出合成法的AG013在本说明书内有时也表述为化合物B2R046-01。
实施例8-11-1：4-[6-(1-金刚烷基甲基氨基甲酰基)哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁 酯(AG034)的合成
[化142]
向6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸(AC-012，CAS：1690948-00-5)(200mg，0.649mmol)和1-金刚烷基甲胺(AG033，CAS：17768-41-1)(160.8mg，0.973mmol)、EDCI(248.7mg，1.297mmol)、DMAP(79.24mg，0.649mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入DIPEA(335.3mg，2.596mmol)，在室温搅拌16小时。向混合物中加入氯化铵水溶液。将有机层用二氯甲烷萃取3次，用硫酸钠干燥。浓缩后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-100％乙酸乙酯/石油醚、接下来用0-10％甲醇/二氯甲烷)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG034(180mg，60.9％)。
LCMS(ESI)：m/z 456[M+H]+。
保留时间：1.238分钟(分析条件PH-TFA-13)。
实施例8-11-2：N-(1-金刚烷基甲基)-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(AG035)的合成
[化143]
向4-[6-(1-金刚烷基甲基氨基甲酰基)哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(AG034)(180mg，0.395mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入HCl的1,4-二氧六环溶液(4M，5mL)，在室温搅拌1小时。浓缩混合物后，溶解于水中，加入碳酸氢钠水溶液而设为pH8-9。过滤所产生的固体后，用水清洗3次，在50℃干燥16小时，以灰色固体的形式得到标题化合物AG035(100mg，85％)。
LCMS(ESI)：m/z356[M+H]+。
保留时间：0.917分钟(分析条件PH-TFA-13)。
实施例8-11-3：4-(3-乙氧基苯基)-2-乙基苯甲醛(AG037)的合成
[化144]
将4-溴-2-乙基苯甲醛(AG036，CAS：1114808-89-7)(1.00g，4.693mmol)和(3-乙氧基苯基)硼酸(AG004，CAS：90555-66-1)(1.01g，6.085mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(329.42mg，0.469mmol)、碳酸钠(646.65mg，6.101mmol)的二甲氧基乙烷/乙醇/水＝1/1/1(20mL)溶液在80℃搅拌3小时。向混合物中加入氯化铵水溶液，将有机层用乙酸乙酯萃取3次，用硫酸钠干燥。浓缩后，将所得的残渣利用分配TLC(20％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，以淡黄色液体的形式得到标题化合物AG037(900mg，73.9％)。
LCMS(ESI)：m/z 255[M+H]+。
保留时间：1.184分钟(分析条件PH-FA-06)。
实施例8-11-4：N-(1-金刚烷基甲基)-6-[4-[[4-(3-乙氧基苯基)-2-乙基苯基]甲 基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酰胺[AG038(B1A075-01)]的合成
[化145]
将N-(1-金刚烷基甲基)-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(AG035)(150mg，0.422mmol)和4-(3-乙氧基苯基)-2-乙基苯甲醛(AG037)(128.8mg，0.506mmol)、乙酸(0.2mL)的DMSO/乙醇(3mL/3mL)溶液在室温搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(53.03mg，0.844mmol)，在室温搅拌16小时。浓缩混合物后，将所得的残渣利用反相柱层析(C18，0-80％乙腈/水)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG038(38.2mg，14.9％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.52(t，J＝6.6Hz，1H)，7.83(d，J＝9.6Hz，1H)，7.50-7.43(m，2H)，7.38-7.31(m，3H)，7.23-7.15(m，2H)，6.92-6.89(m，1H)，4.09(q，J＝6.9Hz，2H)，3.72-3.67(m，4H)，3.55(s，2H)，3.32-3.28(m，1H)，3.02(d，J＝6.6Hz，2H)，2.82-2.75(m，2H)，2.56-2.50(m，3H)，1.92(s，3H)，1.68-1.55(m，6H)，1.50-1.46(m，6H)，1.35(t，J＝6.9Hz，3H)，1.24(t，J＝7.8Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 594[M+H]+。
实施例8-11-4中例示出合成法的AG038在本说明书内有时也表述为化合物B1A075-01。
实施例8-12-1：4-[6-[1-金刚烷基甲基(甲基)氨基甲酰基]哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲 酸叔丁酯(AG040)
[化146]
向6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸(AC-012，CAS：1690948-00-5)(150mg，0.486mmol)和1-(1-金刚烷基)-N-甲基甲胺盐酸盐(BB35，CAS：1773-99-5)(174.5mg，0.973mmol)、EDCI(186.52mg，0.973mmol)、DMAP(59.4mg，0.486mmol)的二氯甲烷(6mL)溶液中加入DIPEA(251.5mg，1.946mmol)，在室温搅拌16小时。向混合物中加入氯化铵水溶液。将有机层用二氯甲烷萃取3次，用硫酸钠干燥。浓缩后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-100％乙酸乙酯/石油醚、接下来用0-10％甲醇/二氯甲烷)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG040(150mg，63％)。
LCMS(ESI)：m/z 470[M+H]+。
保留时间：1.155分钟(分析条件PH-TFA-13)。
实施例8-12-2：N-(1-金刚烷基甲基)-N-甲基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺 (AG041)的合成
[化147]
向4-[6-[1-金刚烷基甲基(甲基)氨基甲酰基]哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(AG040)(150mg，0.319mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液中加入HCl的1,4-二氧六环溶液(4M，6mL)，在室温搅拌1小时。浓缩混合物后，溶解于水中，加入碳酸氢钠水溶液而将pH设为8-9。过滤所产生的固体后，用水清洗3次，在50℃干燥16小时，以黄色固体的形式得到标题化合物AG041(100mg)。
LCMS(ESI)：m/z 370[M+H]+。
保留时间：0.882分钟(分析条件PH-TFA-13)。
实施例8-12-3：N-(1-金刚烷基甲基)-6-[4-[[4-(3-乙氧基苯基)-3-甲基苯基]甲 基]哌嗪-1-基]-N-甲基哒嗪-3-甲酰胺[AG042(B3A073-01)]的合成
[化148]
将N-(1-金刚烷基甲基)-N-甲基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(AG041)(180mg，0.487mmol)和4-(3-乙氧基苯基)-3-甲基苯甲醛(AG015，CAS：1506205-91-9)(175.6mg，0.731mmol)、乙酸(0.6mL)的DMSO/乙醇(3mL/3mL)溶液在室温搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(61.2mg，0.974mmol)，在室温搅拌16小时。浓缩混合物后，将所得的残渣利用反相柱层析(C18，0-80％乙腈/水)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG042(70mg，23.7％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ7.56-7.51(m，1H)，7.35-7.29(m，2H)，7.25-7.23(m，1H)，7.21-7.16(m，2H)，6.92-6.83(m，3H)，4.05(q，J＝6.9Hz，2H)，3.70-3.65(m，4H)，3.53(s，3H)，3.33(s，2H)，3.11-3.06(m，3H)，2.53-2.50(m，2H)，2.31(s，3H)，1.97-1.91(m，2H)，1.84(s，1H)，1.70-1.45(m，11H)，1.33(t，J＝6.9Hz，3H)，1.27-1.23(m，2H)。
LCMS(ESI)：m/z 594[M+H]+。
实施例8-12-3中例示出合成法的AG042在本说明书内有时也表述为化合物B3A073-01。
实施例8-13-1：4-(3-乙氧基苯基)-2-甲氧基苯甲醛(AG044)的合成
[化149]
在氮气气氛下，将4-溴-2-甲氧基苯甲醛(AG043，CAS：43192-33-2)(200mg，0.930mmol)和(3-乙氧基苯基)硼酸(AG004，CAS：90555-66-1)(308.7mg，1.860mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(65.28mg，0.093mmol)、碳酸钠(128.14mg，1.209mmol)的二甲氧基乙烷/乙醇/水＝1/1/1(6mL)溶液在80℃搅拌3小时。过滤混合物，浓缩滤液。将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-20％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，以黄色液体的形式得到标题化合物AG044(214.0mg，54.0％)。
LCMS(ESI)：m/z 257[M+H]+。
保留时间：0.839分钟(分析条件PH-FA-05)。
实施例8-13-2：4-[4-[[4-(3-乙氧基苯基)-2-甲氧基苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N- [3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[AG045(B2Q053-01)]的合成
[化150]
将N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基-4-哌嗪-1-基苯甲酰胺(AG014，CAS：406233-75-8)(100.00mg，0.185mmol)和4-(3-乙氧基苯基)-2-甲氧基苯甲醛(AG044)(94.64mg，0.369mmol)、乙酸(0.05mL)和DMSO/乙醇(2mL/2mL)溶液在室温搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(23.2mg，0.369mmol)，在室温搅拌16小时。浓缩混合物后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-95％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化。将所得的粗产物利用反相柱层析(C18，10-70％乙腈/水)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物AG045(37mg，25.4％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.68(s，1H)，8.55(d，J＝2.1Hz，1H)，7.89(d，J＝9.6Hz，1H)，7.76(d，J＝8.7Hz，2H)，7.49-7.33(m，4H)，7.33-7.14(m，7H)，7.11(d，J＝9.3Hz，1H)，6.93-6.87(m，3H)，4.11(q，J＝6.9Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.81-3.78(m，2H)，3.77-3.68(m，2H)，3.68-3.58(m，2H)，3.30-3.25(m，4H)，2.78-2.69(m，4H)，1.36(t，J＝6.9Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 782[M+H]+。
实施例8-13-3中例示出合成法的AG045在本说明书内有时也表述为化合物B2Q053-01。
实施例8-14-1：3-[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)苯基]丙酸甲酯(AG047)的合成
[化151]
/>
向3-[2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基]丙酸甲酯(AG046，CAS：1282660-71-2)(250mg，0.862mmol)的1,4-二氧六环/水(6mL/0.6mL)溶液中加入3-溴-5-乙氧基吡啶(AG020，CAS：17117-17-8)(191.5mg，0.948mmol)和乙酸钾(169.1mg，1.724mmol)、Pd(dppf)Cl2(63.0mg，0.086mmol)，在90℃搅拌3小时。过滤混合物，浓缩滤液后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-20％乙酸乙酯/石油醚)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG047(200mg，77.2％)。
LCMS(ESI)：m/z 286[M+H]+。
保留时间：0.877分钟(分析条件PH-FA-02)。
实施例8-14-2：3-[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)苯基]丙酸(AG048)的合成
向3-[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)苯基]丙酸甲酯(AG047)(330mg，1.157mmol)的甲醇/水(30mL/3mL)溶液中加入氢氧化锂(276.9mg，11.570mmol)，在35℃搅拌16小时。浓缩混合物后，溶解于水中，加入柠檬酸而设为pH5-6。过滤所产生的固体后，用水清洗3次，在50℃干燥16小时，以灰色固体的形式得到标题化合物AG048(200mg)。
LCMS(ESI)：m/z 272[M+H]+。
保留时间：0.765分钟(分析条件PH-FA-07)。
实施例8-14-3：4-[6-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰 基]哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(AG049)的合成
[化153]
向6-[4-[(2-甲基丙烷-2-基)氧基羰基]哌嗪-1-基]哒嗪-3-甲酸(AC-012，CAS：1690948-00-5)(200mg，0.649mmol)和3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯磺酰胺(R-12，CAS：406233-13-4)(344.0mg，0.974mmol)、EDCI(249.3mg，1.298mmol)、DMAP(79.2mg，0.64mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入DIPEA(334.9mg，2.596mmol)，在室温搅拌16小时。向混合物中加入氯化铵水溶液。将有机层用二氯甲烷萃取3次，用硫酸钠干燥。浓缩后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-100％乙酸乙酯/石油醚、接下来用0-10％甲醇/二氯甲烷)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG049(240mg，57.6％)。
LCMS(ESI)：m/z 644[M+H]+。
保留时间：1.211分钟(分析条件PH-TFA-13)。
实施例8-14-4：N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基-6-哌嗪-1-基 哒嗪-3-甲酰胺(AG050)的合成
[化154]
向4-[6-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(AG049)(50.0mg，0.078mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入HCl的1,4-二氧六环溶液(4M，4mL)，在室温搅拌1小时。浓缩混合物后，溶解于水中，加入碳酸氢钠水溶液而设为pH8-9。过滤所产生的固体后，用水清洗3次，在50℃干燥16小时，以灰色固体的形式得到标题化合物AG050(50mg)。
LCMS(ESI)：m/z 544[M+H]+。
保留时间：0.960分钟(分析条件PH-FA-02)。
实施例8-14-5：6-[4-[3-[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)苯基]丙酰基]哌嗪-1-基]-N- [3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基哒嗪-3-甲酰胺[AG051(B2Q012-01)]的合 成
[化155]
向N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(AG050)(100mg，0.184mmol)和3-[2-(5-乙氧基吡啶-3-基)苯基]丙酸(AG048)(74.9mg，0.276mmol)、EDCI(70.5mg，0.368mmol)、DMAP(22.5mg，0.184mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入DIPEA(95.1mg，0.736mmol)，在室温搅拌16小时。向混合物中加入氯化铵水溶液。将有机层用二氯甲烷萃取3次，用硫酸钠干燥。浓缩后，将所得的残渣利用硅胶柱层析(0-100％乙酸乙酯/石油醚、接下来用0-10％甲醇/二氯甲烷)进行纯化，以白色固体的形式得到标题化合物AG051(40mg，26.7％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.54-8.48(m，1H)，8.29-8.24(m，1H)，8.13-8.07(m，1H)，7.89-7.76(m，1H)，7.45-7.26(m，7H)，7.22-7.12(m，2H)，7.03-7.92(m，3H)，4.18-4.08(m，2H)，3.63-3.51(m，5H)，3.45-3.38(m，2H)，3.28-3.22(m，2H)，2.81-2.71(m，2H)，2.59-2.50(m，6H)，1.35-1.25(m，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 797[M+H]+。
实施例8-14-5中例示出合成法的AG051在本说明书内有时也表述为化合物B2Q012-01。
实施例8-15-1：6-[4-[[4-(5-乙氧基吡啶-3-基)-3-甲基苯基]甲基]哌嗪-1-基]- N-[4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基哒嗪-3-甲酰胺[AG052(B2R074- 01)]的合成
[化156]
将N-[4-(2-苯基硫基乙基氨基)-3-(三氟甲基)苯基]磺酰基-6-哌嗪-1-基哒嗪-3-甲酰胺(AG028)(310.00mg，0.547mmol)和4-(5-乙氧基吡啶-3-基)-3-甲基苯甲醛(AG017，CAS：1545014-81-0)(264.02mg，1.094mmol)、乙酸(0.05mL)、DMSO/乙醇(3mL/3mL)溶液在室温搅拌1小时。加入氰基硼氢化钠(68.76mg，1.094mmol)，在室温搅拌16小时。将混合物利用反相柱层析(C18，5-70％乙腈/水)进行纯化。将所得的粗产物利用分配HPLC(XBridge Prep OBD C18柱，34-64％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化，以灰色固体的形式得到标题化合物AG052(37.7mg，8.6％)。
1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.26(d，J＝2.7Hz，1H)，8.12(d，J＝1.8Hz，1H)，7.99-7.96(m，1H)，7.90-7.85(m，1H)，7.80-7.49(m，1H)，7.41-7.36(m，2H)，7.35-7.26(m，5H)，7.25-7.17(m，3H)，6.87(d，J＝9.0Hz，1H)，6.55-6.49(m，1H)，4.15(q，J＝6.9Hz，2H)，3.78-3.71(m，4H)，3.58(s，2H)，3.51-3.43(m，3H)，3.19-3.12(m，2H)，2.59-2.53(m，4H)，2.13(s，3H)，1.35(t，J＝6.9Hz，3H)。
LCMS(ESI)：m/z 792[M+H]+。
实施例8-15-1中例示出合成法的AG052在本说明书内有时也表述为化合物B2R074-01。
实施例8-16-1：固相担载ArBr(化合物D043-02R)的合成
[化157]
在氮气气氛下，向150mL玻璃小瓶中加入修饰Wang树脂(化合物D041-02R，53447，Sigma-Aldrich，BROMINATED，100-200目，担载量：1.25mmol/g，共聚物(苯乙烯-1％DVB)，5.00g，6.25mmol)和NMP(50mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入3-溴苯酚(化合物D042，CAS：591-20-8，2.16g，12.5mmol)和叔丁醇钾(1.33g，11.9mmol)，在室温振荡20小时。使用NMP(100mL)将反应液转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(100mL)进行2次树脂的清洗。继而用NMP/水(1/1，100mL)反复清洗3次、用水(100mL)反复清洗3次、用NMP(100mL)反复清洗3次、用甲醇(100mL)反复清洗3次、用DCM(100mL)反复清洗3次、用庚烷(100mL)反复清洗3次，进行树脂的清洗，使所得的树脂在减压下干燥一夜，由此得到标题化合物D043-02R(4.95g)。
实施例8-16-2：固相担载ArBr(化合物D043-02R)的担载量利用以下的方法确定。
[化158]
在氮气气氛下，在3mL玻璃小瓶中在包含化合物D043-02R(22.6mg)和三甲基苯的30％TFA/DCM(0.08M，1mL)中浸渍15分钟。过滤切出液，将树脂用NMP(500μL)清洗。基于所得的3-溴苯酚(D042)的UV面积，使用标准曲线将3-溴苯酚(D042)的浓度定量，求出担载于树脂的3-溴苯酚(D042)的量。其结果使，算出D043-02R的担载量为0.532mmol/g。
化合物D042
保留时间：0.893分钟(分析条件SMD-FA05-1，290nm)。
极大吸收波长：276nm。
实施例8-16-3：固相担载ArBr(化合物D045-02R)的合成
[化159]
使用5-溴吡啶-3-酚(化合物D044，CAS：74115-13-2，2.18g，12.5mmol)，利用与实施例8-12-1中的化合物D043-02R同样的方法进行合成，得到固相担载ArBr(化合物D045-02R)(5.01g)。
实施例8-16-4：固相担载ArBr(化合物D045-02R)的担载量利用以下的方法确定。
[化160]
使用化合物D045-02R(22.6mg)，利用与实施例8-12-2(化合物D042)同样的方法算出D044的担载量。其结果是，算出D045-02R的担载量为0.735mmol/g。
化合物D044
LCMS：m/z 174[M+H]+。
保留时间：0.573分钟(分析条件SMD-FA05-1，290nm)。
实施例8-16-5：固相担载酮(化合物D047-02R)的合成
[化161]
在氮气气氛下，向4mL的玻璃小瓶中加入固相担载ArBr(化合物D043-02R)(100mg，担载量0.532mmol/g，0.0532mmol)和NMP(1.9mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入(4-乙酰基苯基)硼酸(BB18，CAS：149104-90-5)(52.3mg，0.319mmol)、K3PO4水溶液(1.7M，188μL，0.319mmol)、P(Cy)3Pd G3的NMP溶液(0.04M，266μL，10.6μmol)，在90℃振荡2小时。将反应液和树脂的悬浮液使用NMP(2mL)转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗2次、用加入有NAC(0.05M)的NMP：H2O(1：1)溶液(2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用NMP(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后，在减压下干燥树脂，得到标题化合物D047-02R(107.6mg)。将化合物D047-02R的一部分树脂转移到带有滤芯的微量移液器吸头上，在包含0.08M五甲基苯的10％TFA/DCM溶液(50μL)中浸渍5分钟。过滤切出液，用NMP(50μL)清洗固相。将所得的滤液用MeCN(500μL)稀释，由此制备出LC样品，进行LCMS测定，由此确认D047的生成。
[化162]
化合物D047
LCMS：m/z 213[M+H]+。
保留时间：0.927分钟(分析条件SMD-FA05-1，290nm)。
实施例8-16-6：固相担载酮(化合物D048-02R)的合成
[化163]
使用固相担载ArBr(化合物D045-02R，担载量：0.735mmol/g，100mg)，利用与实施例8-16-5(化合物D047-02R)同样的方法进行合成，得到标题化合物D048-02R(108.3mg)。进行与实施例8-16-5同样的切出操作，确认D048的生成。
[化164]
化合物D048
LCMS：m/z 214[M+H]+。
保留时间：0.534分钟(分析条件SMD-FA05-1，290nm)。
实施例8-16-7：固相担载烯丙酯(化合物D050-02R)的合成
[化165]
在氮气气氛下，向3mL的玻璃小瓶中加入固相担载酮(化合物D047-02R，100mg，担载量0.532mmol/g，0.0532mmol)和茴香醚(3.75mL)，在室温振荡1小时。在氮气气氛下，加入4-哌嗪-1-基苯甲酸烯丙酯(BB-27，157mg，0.638mmol)和Ti(OtBu)4(0.411mL，1.06mmol)，在140℃振荡19小时。将反应液冷却到室温后，在氮气气氛下加入三乙酰氧基硼氢化钠(338mg，1.60mmol)，在140℃振荡17小时。将反应容器冷却到室温，向反应液中添加MeOH(2mL)。将所得的反应液和树脂的悬浮液使用MeOH(2mL)转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗3次、用0.05M Rochelle盐溶液(NMP：水＝1：1，2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用NMP(2mL)反复清洗3次、用半饱和NaHCO3溶液(2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用NMP(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后，在减压下干燥树脂，得到标题化合物D050-02R(103.2mg)。进行与实施例8-16-5同样的切出操作，确认D050的生成。
[化166]
化合物D050
LCMS：m/z 443[M+H]+。
保留时间：0.797分钟(分析条件SMD-FA05-1，290nm)。
实施例8-16-8：固相担载烯丙酯(化合物D051-02R)的合成
[化167]
使用固相担载酮(化合物D048-02R，担载量：0.735mmol/g，100mg)，利用与实施例8-16-7(化合物D050-02R)同样的方法进行合成，得到标题化合物D051-02R(105.8mg)。进行与实施例8-16-5同样的切出操作，确认D051的生成。
[化168]
化合物D051
LCMS：m/z 444[M+H]+。
保留时间：0.610分钟(分析条件SMD-FA05-1，290nm)。
实施例8-16-9：固相担载羧酸(化合物D052-02R)的合成
[化169]
在氮气气氛下，向3mL的玻璃小瓶中加入固相担载烯丙酯(化合物D050-02R，99.4mg，担载量0.532mmol/g，0.0532mmol)、NMP(1.2mL)和MeOH(0.30mL)，在室温振荡1小时。加入氢氧化钠水溶液(2M，250μL，0.660mmol)并在80℃振荡7小时。将所得的反应液和树脂的悬浮液使用NMP(2mL)转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用NMP(2mL)反复清洗3次、用加入有HOAt的NMP溶液(0.2M，2mL)反复清洗3次、用NMP(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后，在减压下干燥树脂，得到标题化合物D052-02R(82.6mg)。进行与实施例8-16-5同样的切出操作，确认D052的生成。
[化170]
化合物D052
LCMS：m/z 403[M+H]+。
保留时间：0.649分钟(分析条件SMD-FA05-1，290nm)。
实施例8-16-10：固相担载羧酸(化合物D053-02R)的合成
[化171]
在氮气气氛下，向3mL的玻璃小瓶中加入固相担载烯丙酯(化合物D051-02R，100.2mg，担载量：0.736mmol/g，0.0737mmol)、NMP(1.2mL)和MeOH(0.30mL)，在室温振荡1小时。加入氢氧化钠水溶液(2M，250μL，0.660mmol)，在室温振荡7小时。在氮气气氛下，向反应溶液中加入氢氧化钠水溶液(2M，250μL，0.660mmol)，在室温振荡11小时。将所得的反应液和树脂的悬浮液使用NMP(2mL)转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗3次、用水(2mL)反复清洗3次、用NMP(2mL)反复清洗3次、用加入有HOAt的NMP溶液(0.2M，2mL)反复清洗3次、用NMP(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后，在减压下干燥树脂，得到标题化合物D053-02R(90.1mg)。进行与实施例8-16-5同样的切出操作，确认D053的生成。
[化172]
化合物D053
LCMS：m/z 404[M+H]+。
保留时间：0.457(分析条件SMD-FA05-1，290nm。)
实施例8-16-11：化合物D055-02R的合成
[化173]
在氮气气氛下，向3mL的玻璃小瓶中加入固相担载羧酸(化合物D052-02R，81.5mg，担载量0.532mmol/g，0.0434mmol)和NMP(1.8mL)，在室温振荡1小时。在室温加入HATU(99.0mg，0.260mmol)和2,6-二甲基吡啶(30.3μL，0.260mmol)，在40℃振荡3小时。在室温加入3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯磺酰胺(R-12，107mg，0.304mmol)和P1-tBu(165μL，0.650mmol)，在40℃振荡3小时。将所得的反应液和树脂的悬浮液使用NMP(2mL)转移到带有滤芯的注射器中，用NMP(2mL)反复清洗2次、用加入有HOAt的NMP(0.2M，2mL)反复清洗3次、用NMP(2mL)反复清洗3次、用MeOH(2mL)反复清洗3次、用DCM(2mL)反复清洗3次、用庚烷(2mL)反复清洗3次后在减压下干燥，得到标题化合物D055-02R(82.4mg)。进行与实施例8-16-5同样的切出操作，确认D055的生成。
[化174]
化合物D055
LCMS：m/z 738[M+H]+。
保留时间：0.932分钟(分析条件SMD-FA05-1，290nm)。
实施例8-16-12：化合物D056-02R的合成
[化175]
使用固相担载羧酸(化合物D053-02R，担载量：0.735mmol/g，67.1mg)，利用与实施例8-16-12(化合物D055-02R)同样的方法进行合成，得到标题化合物D056-02R(73.4mg)。进行与实施例8-16-5同样的切出操作，确认D056的生成。
[化176]
化合物D056
LCMS：m/z 739[M+H]+。
保留时间：1.866分钟(分析条件SMD-TFA05-long，290nm)。
实施例8-16-13：4-[4-[1-[4-(3-羟基苯基)苯基]乙基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基- 4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物D055)的合成
在氮气气氛下，向3mL的玻璃小瓶中加入化合物D055-02R(81.2mg，担载量0.532mmol/g，0.0432mmol)和加入有1,2,3-三甲基苯的DCM(0.23M，1.14mL)，在室温振荡1小时。加入TFA(487μL，6.32mmol)和1-溴-4-碘苯(D057，12.2mg，0.043mmol，作为内标添加)，在室温振荡3小时。将所得的反应液和树脂的悬浮液使用DCM(0.8mL)转移到带有滤芯的注射器中，进行过滤。将树脂用DCM(0.8mL)清洗，向所得的滤液中加入DMSO(0.8mL)和H2O(0.2mL)，在减压下浓缩。将所得的残渣利用反相柱层析(C18，0-100％0.1％TFA乙腈溶液/0.1％TFA水溶液)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物D055(15.1mg，0.020mmol，47.4％)。
实施例8-16-14：4-[4-[1-[4-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]乙基]哌嗪-1-基]-N-[3- 硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(化合物D056)的合成
[化178]
在氮气气氛下，向3mL的玻璃小瓶中加入化合物D056-02R(85.9mg，担载量0.735mmol/g，0.0631mmol)和加入有1,2,3-三甲基苯的DCM(0.23M，1.20mL)，在室温振荡1小时。加入TFA(515μL，6.69mmol)和1-氟-4-(4-氟苯基)苯(D058，12.0mg，0.063mmol，作为内标添加)，在室温振荡3小时。将所得的反应液和树脂的悬浮液使用DCM(0.8mL)转移到带有滤芯的注射器中，进行过滤。将树脂用DCM(0.8mL)清洗。向滤液中加入DMSO(0.8mL)和水(0.2mL)，在减压下浓缩。将所得的残渣利用反相柱层析(C18，0-100％0.1％TFA乙腈溶液/0.1％TFA水溶液)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物D056(13.4mg，0.0181mmol，28.7％)。
实施例8-16-15：4-[4-[1-[4-(3-乙氧基苯基)苯基]乙基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝 基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[D059(B2Q097-01)]的合成
[化179]
在氮气气氛下，向1mL的螺帽小瓶中加入4-[4-[1-[4-(3-羟基苯基)苯基]乙基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(D055，15.1mg，0.020mmol)和DMI(0.29mL)。向该溶液中加入BTPP(94.0μL，0.307mmol)和磷酸三乙酯(B-R-05，52.3μL，307mmol)，在80℃搅拌30小时。向所得的残渣中加入甲酸(17.8μL，0.409mmol)，利用反相柱层析(C18，0-80％0.1％甲酸乙腈溶液/0.1％甲酸水溶液)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物D059(2.0mg，2.6μmol，13％)。
[化180]
化合物D059
1H-NMR(400MHz，CD2Cl2)δ8.81(d，J＝2.0Hz，1H)，8.63(t，J＝5.2Hz，1H)，8.06(dd，J＝9.2，2.0Hz，1H)，7.64(d，J＝8.8Hz，2H)，7.56(d，J＝8.0Hz，2H)，7.41-7.39(m，4H)，7.35-7.22(m，4H)，7.16(d，J＝7.6Hz，1H)，7.11(t，J＝2.0Hz，1H)，6.88-6.81(m，4H)，4.08(q，J＝7.2Hz，2H)，3.59(q，J＝6.4Hz，2H)，3.50-3.45(m，1H)，3.32-3.31(m，2H)，3.23(t，J＝6.4Hz，2H)，3.09-3.04(m，2H)，2.68-2.64(m，2H)，2.58-2.52(m，2H)，1.44-1.40(m，6H)。
LCMS：m/z 766[M+H]+。
保留时间：1.044分钟(分析条件SMD-FA05-1，290nm)。
实施例8-16-15中例示出合成法的D059在本说明书内有时也表述为化合物B2Q097-01。
实施例8-16-16：4-[4-[1-[4-(5-乙氧基吡啶-3-基)苯基]乙基]哌嗪-1-基]-N- [3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺[D060(B2Q098-01)]的合成
[化181]
在氮气气氛下，向1mL的螺帽小瓶中加入4-[4-[1-[4-(5-羟基吡啶-3-基)苯基]乙基]哌嗪-1-基]-N-[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基苯甲酰胺(D056，13.4mg，0.018mmol)和DMI(0.26mL)。向该溶液中加入BTPP(83.0μL，0.272mmol)和磷酸三乙酯(B-R-05，46.4μL，272mmol)，在80℃搅拌22小时。向所得的残渣中加入碳酸氢铵(28.7mg，0.363mmol)，利用反相柱层析(C18，0-60％乙腈/10mM碳酸氢铵水溶液)进行纯化，以黄色固体的形式得到标题化合物D060(6.0mg，7.8μmol，43％)。
[化182]
化合物D060
1H-NMR(400MHz，CD2Cl2)δ8.69(d，J＝2.0Hz，1H)，8.42(d，J＝1.6Hz，1H)，8.36(t，J＝5.6Hz，1H)，8.23(d，J＝2.8Hz，1H)，8.03(dd，J＝8.8，2.0Hz，1H)，7.89(d，J＝8.8Hz，2H)，7.56(d，J＝8.4Hz，2H)，7.47-7.37(m，5H)，7.33-7.21(m，3H)，6.76(d，J＝9.2Hz，2H)，6.76(d，J＝9.2Hz，1H)，4.15(q，J＝7.2Hz，2H)，3.53(q，J＝6.8Hz，2H)，3.45(q，J＝6.8Hz，1H)，3.26-3.18(m，2H)，3.13-3.09(m，2H)，2.68-2.63(m，2H)，2.56-2.51(m，2H)，1.81-1.78(m，2H)，1.45(t，J＝6.8Hz，3H)，1.40(d，J＝6.8Hz，3H)。
LCMS：m/z 767[M+H]+。
保留时间：2.020分钟(分析条件SMD-TFA05-long，290nm)。
实施例8-16-16中例示出合成法的D060在本说明书内有时也表述为化合物B2Q098-01。
实施例9：基于表面等离子体共振(SPR)的与Bcl-2的化合物的结合评价
为了分析[表AK―01]中所示的实施例8中合成的化合物的与Bcl-2的化合物的结合亲和性，使用了表面等离子体共振法。使用Biacore T200(GE Healthcare)作为装置，运行缓冲液使用添加有1mM DTT、3mM EDTA、0.01％Tween20及4％DMSO的HBS(10mM HEPES-NaOH，150mM NaCl，pH7.4)。将人Bcl-2蛋白(Novus Biologicals)使用EZ-Link Sulfo-NHS-LC-LC-生物素(Thermofisher scientific)进行生物素化，固定化在Sensor Chip SA(GEHealthcare)的表面。其后，将多种浓度的化合物溶液及运行缓冲液(空白)添加到Bcl-2固定化表面，得到化合物的结合响应。在15℃进行测定。
对所得的传感图利用Biacore T200Evalution Software进行处理，依照以下的[表AK-02]、[表AK-03]所示地确定各化合物的对于Bcl-2的平衡解离常数KD。
[表142]
[表AK―01]：本实施例中使用的化合物的化合物的结构式
[表143]
[表144]
[表145]
[表AK-02]：库合成实施前合成的化合物的平衡解离常数KD
[表146]
[表AK-03]：利用合成库的AS-MS评价发现的化合物的平衡解离常数KD
如[表AK-02]以及[表AK-03]中所示，发现了与事先评价了与Bcl-2的结合能力的化合物B2Q045-01相比平衡解离常数KD小、与Bcl-2的结合高的化合物(B2Q047-01、B2Q048-01)。
从实施例6-5-1、6-5-2中使用本发明的方法将联烯醇乙基化而得的混合物库中，在实施例7中利用AS-MS发现具有与Bcl-2的结合能力的化合物的做法如前所述。基于依据该结果在实施例8中单独合成的化合物，可以利用SPR确认与Bcl-2的结合能力。换言之意味着，可以利用实施例6中的本发明的乙基化，来高官能团选择性地提供目标的化合物组。即，确证了本发明能够提供可以在多种底物的存在下、高官能团选择性地将所期望的酸性官能团烷基化的实用的方法。另外显示，可以将本发明应用于混合物库的制备，该混合物库可以用于医药品的苗头化合物探索。
实施例10：针对在分子中具有多种反应性官能团的底物的羧酸的O-选择性乙基化 研究
实施例10-1：使用3-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基 氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]苯甲酸(B-082)和5-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2- 苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]吡啶-3-甲酸 (B-084)作为具有苯胺NH基的底物的羧酸的O-选择性乙基化
[化183]
在经过氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入3-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]苯甲酸(B-082)(7.5mg，10.0μmol，1.0当量，表10-1，Run1)和DMI(188.0μL)。向所得的溶液中加入BTPP(45.9μL，150.0μmol，15.0当量)并混合15～20秒后，加入磷酸三乙酯(25.6μL，150.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃搅拌43小时。
另外，表10-1、Run2中使用5-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]吡啶-3-甲酸(B-084)(7.5mg，10.0μmol，1.0当量，表10-1，Run2)与Run1同样地实施反应，测定出反应进度。
反应追踪
途中，从反应开始起经过1.5、26、43小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表10-1、Run1～Run2中所示。
3-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]苯甲酸乙酯：化合物B-083。
LCMS(ESI，m/z)：780.2[M+H]+。
保留时间：1.085分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArCO2H的保留时间为0.940分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
5-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]吡啶-3-甲酸乙酯：化合物B-085。
LCMS(ESI，m/z)：781.2[M+H]+。
保留时间：1.040分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArCO2H的保留时间为0.900分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
[表147]
[表10-1]
以上，如表10-1中所示，确认实施例3-6-3中设定的反应条件对于具有各种官能团的羧酸能够O-选择性地进行乙基化。具体而言，发现了在叔胺、酰基磺酰胺、苯胺、吡啶环之类的官能团共存下的、羧酸的O-选择性乙基化条件。需要说明的是，本发明的本方法是能够不限定于本实施例中例示的官能团地广泛地应用的方法。
实施例10-2：实施例3-6-3中设定的反应条件下的进一步的官能团选择性的确认
在实施例10-1中，可以确认实施例3-6-3中设定的反应条件在共存有多个官能团的情况下也可以选择性地进行羧酸的O-乙基化。在本反应条件下，进行了进一步的官能团选择性的确认。确认的方法为，将具有官能团的化合物添加到羧酸的模型底物(喹啉-3-甲酸(B-086)(pKaa＝1.15)、或[1,1’-联苯基]-3-甲酸(B-088)(pKaa＝4.19)的乙基化反应中，研究具有官能团的化合物的乙基化是否进行。即，对于所添加的具有官能团的化合物，在羧酸的模型底物(B-086或B-088)的羧酸被选择性地乙基化的情况下，则确认官能团选择性。
a：ADMET predictor(version9.5)(可能变更的参数全都直接使用初始值)
实施例10-2-1：以喹啉-3-甲酸(B-086)作为底物的各种NH基存在下的乙基化反应 确认
研究了在反应中存在各种NH基的情况下的、NH基的N-乙基化的可能性。以下作为一例例示出各种NH官能团的能够应用的范围的确定方法。
[化184]
在经过氮气置换的手套袋中，向1.5mL的螺帽小瓶中加入喹啉-3-甲酸(B-086)(6.1mg，35.0μmol，1.0当量)、二苯基胺(B-R-08)(5.9mg，35.0μmol，1.0当量)和DMI(0.5mL)。向该溶液中加入BTPP(161.0μL，525.0μmol，15.0当量)并确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(89.0μL，525.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
另外，取代二苯基胺(B-R-08)而使用4-[6-(2,2,2-三氟乙基氨基甲酰基)哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(B-045)(6.8mg，18.0μmol，0.5当量，Run2)、N-丁基苯胺(B-R-11)(14.0μL，88.0μmol，2.5当量，Run3)，同样地实施反应。
反应追踪
从反应开始起经过21小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表10-2-1中所示。
喹啉-3-甲酸乙酯：化合物B-087。
LCMS(ESI，m/z)：202.1[M+H]+。
保留时间：0.939分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArCO2H的保留时间为0.521分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
将实施例10-2-1的结果表示于表10-2-1中。需要说明的是，表10-2-1中所示的转化率(％)(B-087/B-086)作为(B-087，area％)/〔(B-086，area％)+(B-087，area％)〕×100算出。另外，转化率(％)(添加物)作为(添加物的乙基化体，area％)/〔(添加物的乙基化体，area％)+(添加物，area％)〕×100算出。添加物被乙基化时的标准物质如实施例1-3所示地合成，在参照表1-3的保留时间和检出MS的同时确认。
[表148]
[表10-2-1]
/>
如表10-2-1中所示，虽然喹啉-3-甲酸(B-086)在本条件下进行了乙基化，然而确认所添加的二芳基胺体(B-R-08)、酰胺体(B-045)、仲苯胺(B-R-11)为0.1％以下的反应转换率。该结果显示，本发明的本方法在不限定于本实施例中例示的存在下地在反应体系中存在各种胺NH基的情况下对羧酸也能够O-选择性地实施烷基化。
实施例10-2-2：以[1,1’-联苯基]-3-甲酸(B-088)作为底物的各种NH基存在下的 乙基化反应确认
使用pKaa＝4.19的羧酸[1,1’-联苯基]-3-甲酸(B-088))作为底物，研究在反应中存在各种NH基的情况下的、NH基的N-乙基化的可能性。以下作为一例例示出以[1,1’-联苯基]-3-甲酸作为底物的各种NH官能团的能够应用的范围的确定方法。
[化185]
在经过氮气置换的手套袋中，向1.5mL的螺帽小瓶中加入[1,1’-联苯基]-3-甲酸(B-088)(6.9mg，35.0μmol，1.0当量)、二苯基胺(B-R-08)(5.9mg，35.0μmol，1.0当量)和DMI(0.5mL)。向该溶液中加入BTPP(161.0μL，525.0μmol，15.0当量)并确认混合后，加入磷酸三乙酯(B-R-05)(89.0μL，525.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃进行搅拌。
另外，取代二苯基胺(B-R-08)而使用4-[6-(2,2,2-三氟乙基氨基甲酰基)哒嗪-3-基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(B-045)(6.8mg，18.0μmol，0.5当量，Run2)、N-丁基苯胺(B-R-11)(14.0μL，88.0μmol，2.5当量，Run3)，同样地实施反应。
反应追踪
从反应开始起经过21小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表10-2-1中所示。
3-苯基苯甲酸乙酯：化合物B-089。
保留时间：1.356分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArCO2H的保留时间为1.016分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
将实施例10-2-2的结果表示于表10-2-2中。需要说明的是，表10-2-2中所示的转化率(％)(B-089/B-088)作为(B-089，area％)/〔(B-089，area％)+(B-0088，area％)〕×100算出。另外，转化率(％)(添加物)作为(添加物的乙基化体，area％)/〔(添加物的乙基化体，area％)+(添加物，area％)〕×100算出。添加物被乙基化时的标准物质如实施例1-3所示地合成，在参照表1-3的保留时间和检出MS的同时确认。
[表149]
[表10-2-2]
如表10-2-2中所示，虽然[1,1'-联苯基]-3-甲酸(B-088)在本条件下进行了乙基化，然而确认所添加的二芳基胺体(B-R-08)、酰胺体(B-045)、仲苯胺(B-R-11)为0.1％以下的反应转换率。该结果显示，本发明的本方法在不限定于本实施例中例示的存在下地在反应体系中存在各种胺NH基的情况下对羧酸也能够O-选择性地实施烷基化。
与实施例3-8中确认的联烯醇的O-乙基化反应中的官能团选择性的结果同样，各种NH官能团(二芳基胺、酰胺、仲苯胺、伯苯胺、叔胺)在本条件下烷基化的进行也为5％以下，因此确认在不限定于本实施例中例示的胺官能团地存在胺官能团的情况下也能够将羧酸选择性地烷基化。
实施例10-3：通过在具有各种官能团的联烯醇和羧酸存在的体系中对联烯醇和羧 酸的任一方都实施烷基化、仅将羧酸的烷基化体水解而将羧酸再生的合成法(作为羧酸的 保护的烷基化/作为脱保护的水解)
[化186]
/>
第一工序：烷基化
在经过氮气置换的手套袋中，向0.6mL的螺帽小瓶中加入6-[4-[[2-(3-羟基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺(B-080)(3.5mg，7.0μmol，1.0当量)、3-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]苯甲酸(B-082)(5.3mg，7.0μmol，1.0当量)和DMI(100.0μL)。向所得的溶液中加入BTPP(32.1μL，105.0μmol，15.0当量)并混合15～20秒后，加入磷酸三乙酯(17.9μL，105.0μmol，15.0当量)。将所得的反应混合物以800rpm的转速在80℃搅拌42小时。
反应追踪
途中，从反应开始起经过21、42小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表10-3-1、Run1中所示。
6-[4-[[2-(3-乙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺：化合物B-081。
LCMS(ESI，m/z)：524.3[M+H]+。
保留时间：0.901分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArOH的保留时间为0.751分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
3-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]苯甲酸乙酯：化合物B-083。
LCMS(ESI，m/z)：780.2[M+H]+。
保留时间：1.095分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArCO2H的保留时间为0.957分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
第二工序：水解
在经过氮气置换的手套袋中，向利用第一工序的烷基化得到的0.6mL的螺帽小瓶的反应混合液中加入四丁基氢氧化铵(0.1M，21.0μL，21.0μmol，3.0当量)和2-甲基2-丁醇(28.5μL)。将所得的反应混合物在25℃搅拌19小时。
反应追踪
途中，从反应开始起经过19小时时，在手套袋中对反应液取样5μL并用CH3CN(1000μL)稀释，制备出LC样品。通过进行LCMS测定而测定出反应进度。结果如表10-3-1、Run2中所示。
6-[4-[[2-(3-乙氧基苯基)苯基]甲基]哌嗪-1-基]-N-(4-甲氧基苯基)哒嗪-3-甲酰胺：化合物B-081。
LCMS(ESI，m/z)：524.3[M+H]+。
保留时间：0.901分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
3-[2-[[4-[4-[[3-硝基-4-(2-苯基硫基乙基氨基)苯基]磺酰基氨基甲酰基]苯基]哌嗪-1-基]甲基]苯基]苯甲酸(B-082)。
LCMS(ESI，m/z)：752.1[M+H]+。
保留时间：0.952分钟(分析条件SMD-FA05-1)。
(原料ArCO2Et的保留时间为1.095分钟(分析条件SMD-FA05-1)。)
[表150]
[表10-3]
以上，如表10-3中所示，确认实施例3-6-3、10-1中设定的反应条件下，对于具有各种官能团的联烯醇和羧酸的混合物可以进行联烯醇的O-选择性、以及羧酸的O-选择性的乙基化。具体而言，发现了在叔胺、酰基磺酰胺、苯胺、吡啶环之类的官能团共存下的、联烯醇和羧酸的O-选择性乙基化条件。另外，还发现羧酸的烷基化体通过联烯醇的O-烷基体、其他的官能团共存下的选择性水解能够转变为羧酸。该结果显示本方法能够作为羧酸的保护基利用。需要说明的是，本发明的方法是能够不限定于本实施例中例示的结构地广泛地应用的方法。

Claims (17)

1.一种化合物的制造方法，是具有经过烷基化的酸性官能团的化合物的制造方法，
所述制造方法包括如下的操作，即，在包含具有酸性官能团的2种以上的化合物作为底物的混合物中，在碱的存在下，使所述化合物与选自以式A、式B或式C表示的化合物中的烷基化剂反应，将酸性官能团烷基化，所述碱为选自乙腈中的共轭酸的pKa为23～34的有机碱以及水中的共轭酸的pKa为9～20的无机碱中的碱；
式中，R1独立地选自任选由选自X中的1种以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基或C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代；
R3独立地选自任选由选自X中的1种以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代。
2.根据权利要求1所述的方法，其包括在烷基化后除去杂质的操作。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，
碱在二甲基甲酰胺即DMF中的溶解度在25℃为120mg/mL以上。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中，
碱选自有机碱。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，
碱选自磷腈类。
6.一种化合物的制造方法，是制造具有烷氧基取代芳香环的化合物的方法，
所述制造方法包括如下的操作，即，使包含取代于芳香环的羟基的化合物在碱的存在下与选自以式A、式B或式C表示的化合物中的烷基化剂反应，将取代于芳香环的羟基烷基化，所述碱选自磷腈类；
式中，R1独立地选自任选由选自X中的1种以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基或C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代；
R3独立地选自任选由选自X中的1种以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代。
7.一种酯化合物的制造方法，是制造酯化合物的方法，
所述制造方法包括如下的操作，即，使包含羧基的化合物在碱的存在下与选自以式A、式B或式C表示的化合物中的烷基化剂反应，将羧基烷基化，所述碱选自磷腈类；
式中，R1独立地选自任选由选自X中的1种以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基或C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代；
R3独立地选自任选由选自X中的1种以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其中，
烷基化剂选自权利要求1所述的以式A及B表示的烷基化剂。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其中，
烷基化剂选自磷酸三甲酯、磷酸三乙酯及磷酸三烯丙酯。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其中，
碱为选自1-乙基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)即P2Et、1-叔丁基-2,2,4,4,4-五(二甲基氨基)-2λ5,4λ5-连二(磷腈)即P2tBu、叔丁基亚氨基-三(二甲基氨基)正膦即P1tBu、2-叔丁基亚氨基-2-二乙基氨基-1,3-二甲基全氢-1,3,2-二氮杂磷即BEMP、叔丁基亚氨基-三(吡咯烷)正膦即BTPP中的至少一种。
11.根据权利要求1～10中任一项所述的方法，其中，
酸性官能团为羧基或取代于芳香环的羟基。
12.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，
底物含有包含作为酸性官能团的酚性羟基和能够被烷基化的氮原子的1种以上的化合物，在所述底物中烷基化最大程度地推进的具有氮原子的化合物中，基于酚性羟基的烷基化即烷基化A和氮原子的烷基化即烷基化C得到的产物的生成比即烷基化A/烷基化C为1.5以上。
13.根据权利要求1～11中任一项所述的方法，其中，
底物含有包含作为酸性官能团的羧基和能够被烷基化的氮原子的1种以上的化合物，在所述底物中烷基化最大程度地推进的具有氮原子的化合物中，基于羧基的烷基化即烷基化D和氮原子的烷基化即烷基化E得到的产物的生成比即烷基化D/烷基化E为1.5以上。
14.根据权利要求1～13中任一项所述的方法，其中，
烷基化C或烷基化D为选自二芳基胺、烷基芳基胺、苯胺、叔胺、酰胺、磺酰胺、酰基磺酰胺以及吡啶中的含氮结构中包含的氮原子的烷基化。
15.一种化合物的制造方法，是构成化合物库的化合物的制造方法，所述制造方法包括制造利用权利要求1～14中任一项所述的方法烷基化了的化合物的操作。
16.根据权利要求1～15中任一项所述的方法，其中，
以包含10种以上的化合物的混合物的形式进行制造。
17.一种烷基化剂，其含有以式A、式B或式C表示的化合物，用于在经过烷基化的化合物的制造方法中使用，所述制造方法为权利要求1～14中任一项所述的方法；
式中，R1独立地选自任选由选自X中的1种以上的取代基取代的C1-6烷基；
X独立地选自C3-6环烷基、C2-7烯基、C2-7炔基以及C6-10芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基或C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代；
R2独立地选自-OR1及芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基及C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代；
R3独立地选自任选由选自X中的1种以上的取代基取代的C1-6烷基以及芳基，此处所述芳基任选由独立地选自卤素原子、C1-4烷基以及C1-4烷氧基中的1种以上的取代基取代。
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