CN116806810A - 一种液基细胞保存液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种液基细胞保存液，包括如下材料：磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、无水乙醇、蒸馏水、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠。本发明涉及一种液基细胞保存液及其制备方法，具有降低成本、兼容性强、有效的对脱落细胞样本进行保存的特点。
Description
技术领域
本发明属于病理检验保存液技术领域，具体为一种液基细胞保存液及其制备方法。
背景技术
目前，正常人体活细胞在脱落前是具有生理学功能、生物学活性及完整的细胞形态结构，在生物学研究和医学检验中具有重要的价值。当细胞离开人体，脱落的细胞其生理学功能、生物学活性及细胞形态结构也将发生改变。因此，如何有效保存脱落细胞形态结构和生理功能是细胞学检测中需要考虑的问题。在传统的细胞学检查方法巴氏涂片法(即宫颈刮片)制成的涂片，存在大量细胞重叠现象及无检验价值的炎性细胞、粘液等成分，严重影响涂片质量，给病理诊断结果带来了一定的误差。
在常规的宫颈癌筛查中，有液基薄层细胞学、细胞免疫组化等技术方法。液基薄层细胞学检查(英文简称TCT)是常用的技术手段之一，目前在欧美和我国的大中城市，越来越广泛的应用于宫颈癌及宫颈癌前期病变的细胞学筛查中。TCT是一种现代化的宫颈细胞学涂片技术，通过采集人体宫颈表面的脱落细胞，经染色后用显微镜观察这些细胞的形态和结构，并做出细胞病理学诊断。有时还需进行免疫组化染色检查，通过细胞的核增殖表达及抑癌基因蛋白表达检测与TCT结合做出细胞病理学诊断。越来越多细胞学诊断采样TCT技术，如胸腹水、痰液等细胞病理学检查，大大提高细胞学病理诊断及时率及准确率。
但是从上述几种方法中可以看出都是采用脱落细胞样品进行检测，因而细胞保存液是检测前细胞保存的关键环节。目前临床应用的商品化液基细胞保存液及制片方法有多种，以美国FDA1996年批准的新柏氏(Cytye公司，Boxborough，MA，现称为Hologic公司)和1999年批准的Autocyte Prep(现称为SurePath，TripPath Imaging，Burlington，NC，现属于BD诊断公司)为代表。其细胞保存液是与其仪器(Thinpreper-2000)配套使用的专用试剂，但是价格昂贵，加重患者的治疗成本。因此，本发明是在主要解决目前现有技术存在以上不足的基础上研发出来的。因此，需要设计一种液基细胞保存液及其制备方法。
发明内容：
本发明的目的就在于为了解决上述问题而提供一种液基细胞保存液及其制备方法，解决了背景技术中提到的问题。
为了解决上述问题，本发明提供了一种液基细胞保存液及其制备方法技术方案：
一种液基细胞保存液，包括如下材料：磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、无水乙醇、蒸馏水、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠。
一种液基细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、准备材料，以重量计份，包括如下材料：磷酸二氢钠4.2-5份、磷酸氢二钾0.3-0.5份、氯化钠7-9份、无水乙醇8-12份、蒸馏水80-100份、葡萄糖5-7份、乙二胺四乙酸二钠0.5-0.7份；
步骤二、将纯净水放入到蒸馏水机中，通过高温对蒸馏水进行制备；
步骤三、将磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠放入搅拌器的内部，然后将步骤二中冷却完成后的蒸馏水放入到搅拌器的内部进行搅拌，得到混合溶液A；
步骤四、向步骤三中的混合溶液B中加入无水乙醇，充分搅拌后便可得到保存液；
步骤五、在步骤四中的保持液放入到恒温密封管的内部进行保存。
作为优选，所述步骤四中的保存液PH值6.4-7.5之间。
作为优选，所述步骤二中的蒸馏温度为130-150℃。
作为优选，所述步骤三中的搅拌时长为30-40min。
作为优选，所述步骤三中的搅拌速度为500-600r/min。
作为优选，所述步骤四中的搅拌速度为1000-1200r/min。
作为优选，所述步骤三和步骤中的搅拌温度为23-27℃。
本发明的有益效果是：本发明涉及一种液基细胞保存液及其制备方法，具有降低成本、兼容性强、有效的对脱落细胞样本进行保存的特点，在具体的使用中，与传统的液基细胞保存液及其制备方法相比较而言，本液基细胞保存液及其制备方法具有以下有益效果：
通过在配方的内部加设磷酸盐、葡萄糖和乙二胺四乙酸二钠等材料，使得保存液的兼容性强，该细胞保存液能在一定时间有效维持细胞内环境的稳定，易于后续同时进行免疫细胞化学检测及核酸检测研究，无需多次采样，成分简单、价格低廉、易于推广，使用简单，操作方便，大大节省了制备样品的时间。
具体实施方式：
本具体实施方式采用以下技术方案：
实施例1：
一种液基细胞保存液，包括如下材料：磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、无水乙醇、蒸馏水、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠。
一种液基细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、准备材料，以重量计g，包括如下材料：磷酸二氢钠4.2g、磷酸氢二钾0.3g、氯化钠7g、无水乙醇8g、蒸馏水80g、葡萄糖5g、乙二胺四乙酸二钠0.5g；
步骤二、将纯净水放入到蒸馏水机中，通过高温对蒸馏水进行制备；
步骤三、将磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠放入搅拌器的内部，然后将步骤二中冷却完成后的蒸馏水放入到搅拌器的内部进行搅拌，得到混合溶液A；
步骤四、向步骤三中的混合溶液B中加入无水乙醇，充分搅拌后便可得到保存液；
步骤五、在步骤四中的保持液放入到恒温密封管的内部进行保存。
其中，所述步骤四中的保存液PH值6.4-7.5之间。
其中，所述步骤二中的蒸馏温度为130-150℃。
其中，所述步骤三中的搅拌时长为30-40min。
其中，所述步骤三中的搅拌速度为500-600r/min。
其中，所述步骤四中的搅拌速度为1000-1200r/min。
其中，所述步骤三和步骤中的搅拌温度为23-27℃。
实施例2：
一种液基细胞保存液，包括如下材料：磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、无水乙醇、蒸馏水、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠。
一种液基细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、准备材料，以重量计g，包括如下材料：磷酸二氢钠4.6g、磷酸氢二钾0.4g、氯化钠8g、无水乙醇10g、蒸馏水90g、葡萄糖6g、乙二胺四乙酸二钠0.6g；
步骤二、将纯净水放入到蒸馏水机中，通过高温对蒸馏水进行制备；
步骤三、将磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠放入搅拌器的内部，然后将步骤二中冷却完成后的蒸馏水放入到搅拌器的内部进行搅拌，得到混合溶液A；
步骤四、向步骤三中的混合溶液B中加入无水乙醇，充分搅拌后便可得到保存液；
步骤五、在步骤四中的保持液放入到恒温密封管的内部进行保存。
其中，所述步骤四中的保存液PH值6.4-7.5之间。
其中，所述步骤二中的蒸馏温度为130-150℃。
其中，所述步骤三中的搅拌时长为30-40min。
其中，所述步骤三中的搅拌速度为500-600r/min。
其中，所述步骤四中的搅拌速度为1000-1200r/min。
其中，所述步骤三和步骤中的搅拌温度为23-27℃。
实施例3：
一种液基细胞保存液，包括如下材料：磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、无水乙醇、蒸馏水、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠。
一种液基细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、准备材料，以重量计g，包括如下材料：磷酸二氢钠5g、磷酸氢二钾0.4g、氯化钠8g、无水乙醇10g、蒸馏水90g、葡萄糖6g、乙二胺四乙酸二钠0.6g；
步骤二、将纯净水放入到蒸馏水机中，通过高温对蒸馏水进行制备；
步骤三、将磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠放入搅拌器的内部，然后将步骤二中冷却完成后的蒸馏水放入到搅拌器的内部进行搅拌，得到混合溶液A；
步骤四、向步骤三中的混合溶液B中加入无水乙醇，充分搅拌后便可得到保存液；
步骤五、在步骤四中的保持液放入到恒温密封管的内部进行保存。
其中，所述步骤四中的保存液PH值6.4-7.5之间。
其中，所述步骤二中的蒸馏温度为130-150℃。
其中，所述步骤三中的搅拌时长为30-40min。
其中，所述步骤三中的搅拌速度为500-600r/min。
其中，所述步骤四中的搅拌速度为1000-1200r/min。
其中，所述步骤三和步骤中的搅拌温度为23-27℃。
对比例1：
一种液基细胞保存液，包括如下材料：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、无水乙醇、蒸馏水。
一种液基细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、准备材料，以重量计g，包括如下材料：磷酸二氢钠4.2g、磷酸氢二钠0.3g、氯化钠7g、无水乙醇8g；
步骤二、将纯净水放入到蒸馏水机中，通过高温对蒸馏水进行制备；
步骤三、将磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠放入搅拌器的内部，然后将步骤二中冷却完成后的蒸馏水放入到搅拌器的内部进行搅拌，得到混合溶液A；
步骤四、向步骤三中的混合溶液B中加入无水乙醇，充分搅拌后便可得到保存液；
步骤五、在步骤四中的保持液放入到恒温密封管的内部进行保存。
其中，所述步骤二中的蒸馏温度为130-150℃。
其中，所述步骤三中的搅拌时长为30-40min。
其中，所述步骤三中的搅拌速度为500-600r/min。
其中，所述步骤四中的搅拌速度为1000-1200r/min。
其中，所述步骤三和步骤中的搅拌温度为23-27℃。
对比例2：
一种液基细胞保存液，包括如下材料：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、无水乙醇、蒸馏水。
一种液基细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、准备材料，以重量计g，包括如下材料：磷酸二氢钠4.6g、磷酸氢二钠0.4g、氯化钠8g、无水乙醇10g；
步骤二、将纯净水放入到蒸馏水机中，通过高温对蒸馏水进行制备；
步骤三、将磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠放入搅拌器的内部，然后将步骤二中冷却完成后的蒸馏水放入到搅拌器的内部进行搅拌，得到混合溶液A；
步骤四、向步骤三中的混合溶液B中加入无水乙醇，充分搅拌后便可得到保存液；
步骤五、在步骤四中的保持液放入到恒温密封管的内部进行保存。
其中，所述步骤二中的蒸馏温度为130-150℃。
其中，所述步骤三中的搅拌时长为30-40min。
其中，所述步骤三中的搅拌速度为500-600r/min。
其中，所述步骤四中的搅拌速度为1000-1200r/min。
其中，所述步骤三和步骤中的搅拌温度为23-27℃。
对比例3：
一种液基细胞保存液，包括如下材料：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、无水乙醇、蒸馏水。
一种液基细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、准备材料，以重量计g，包括如下材料：磷酸二氢钠5g、磷酸氢二钠0.5g、氯化钠9g、无水乙醇12g；
步骤二、将纯净水放入到蒸馏水机中，通过高温对蒸馏水进行制备；
步骤三、将磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠放入搅拌器的内部，然后将步骤二中冷却完成后的蒸馏水放入到搅拌器的内部进行搅拌，得到混合溶液A；
步骤四、向步骤三中的混合溶液B中加入无水乙醇，充分搅拌后便可得到保存液；
步骤五、在步骤四中的保持液放入到恒温密封管的内部进行保存。
其中，所述步骤二中的蒸馏温度为130-150℃。
其中，所述步骤三中的搅拌时长为30-40min。
其中，所述步骤三中的搅拌速度为500-600r/min。
其中，所述步骤四中的搅拌速度为1000-1200r/min。
其中，所述步骤三和步骤中的搅拌温度为23-27℃。
分别按照实施例1-3和对比例1-3对该保存液进行生产，其中对比例1-3中去除主要成分磷酸氢二钾、葡萄糖和乙二胺四乙酸二钠，实施例1-3和对比例1-3得出六组保存液，然后将六组制备完成的保存液放置到相同环境下并加入同一份细胞液，观察单位面积的细胞活性个数，然后计算死亡百分比，然后对六组保存液进行染色，观察颜色均匀程度得到如下结果：
通过以上表格，通过实施例1-3和对比例1-3可以看出，添加磷酸氢二钾、葡萄糖和乙二胺四乙酸二钠的保持液明显减少细胞的死亡率，实现了本发明的目的设计目的：通过本发明的配方设计，有效的增强了保存液对染色的分散程度，通过上述可以有效的降低了使用成本，有效的保护了细胞的结构完整性，避免细胞溶解和膨胀，易推广，兼容性强，节省了制备样品的时间。。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内，本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (8)
1.一种液基细胞保存液，包括如下材料：磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、无水乙醇、蒸馏水、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠。
2.一种液基细胞保存液的制备方法，包括如下步骤：
步骤一、准备材料，以重量计份，包括如下材料：磷酸二氢钠4.2-5份、磷酸氢二钾0.3-0.5份、氯化钠7-9份、无水乙醇8-12份、蒸馏水80-100份、葡萄糖5-7份、乙二胺四乙酸二钠0.5-0.7份；
步骤二、将纯净水放入到蒸馏水机中，通过高温对蒸馏水进行制备；
步骤三、将磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、氯化钠、葡萄糖、乙二胺四乙酸二钠放入搅拌器的内部，然后将步骤二中冷却完成后的蒸馏水放入到搅拌器的内部进行搅拌，得到混合溶液A；
步骤四、向步骤三中的混合溶液B中加入无水乙醇，充分搅拌后便可得到保存液；
步骤五、在步骤四中的保持液放入到恒温密封管的内部进行保存。
3.根据权利要求2所述的一种液基细胞保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤四中的保存液PH值6.4-7.5之间。
4.根据权利要求2所述的一种液基细胞保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤二中的蒸馏温度为130-150℃。
5.根据权利要求2所述的一种液基细胞保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤三中的搅拌时长为30-40min。
6.根据权利要求2所述的一种液基细胞保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤三中的搅拌速度为500-600r/min。
7.根据权利要求2所述的一种液基细胞保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤四中的搅拌速度为1000-1200r/min。
8.根据权利要求2所述的一种液基细胞保存液的制备方法，其特征在于：所述步骤三和步骤中的搅拌温度为23-27℃。
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