CN116763914B - 猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗及其制备方法 - Google Patents
猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
通过设计和优化冻干保护剂配方,并对冻干工艺进行优化,制备得到了猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗(C株+GDr180株),该疫苗经冻干后仍保持了较高的病毒存活率,经耐热试验后,其也保持较高的病毒滴度,表明所述耐热冻干保护剂对于病毒具有很好的冻干保护作用,且短时间的常温运输、贮存均不会对疫苗活性产生大的影响。
Description
技术领域:
本发明属于兽用生物制品技术领域,具体涉及猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征(CSF-PRRS)二联耐热保护剂活疫苗及其制备方法。
背景技术:
猪瘟(Classical swine fever,CSF)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征(俗称蓝耳病,Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害集约化养猪业的两大重要传染病,在我国猪群中广泛存在,给养猪业造成巨大的经济损失。猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种急性败血性、高度接触性传染类疾病,以出现高热、全身组织弥散性出血为其典型症状与病理特征。CSF曾经给全世界养猪业造成重大经济损失,世界动物卫生组织将其规定为必须报告的动物传染病,我国也已将猪瘟定为一类烈性传染病,它属于危害严重、控制和扑灭的动物疫病、并且也需要采取紧急严厉、强制预防的疾病。猪繁殖与呼吸综合征是由PRRS病毒(PRRSV)引起的一种以妊娠母猪繁殖障碍以及仔猪呼吸道疾病为主要特征的重要传染病,主要临床症状是妊娠母猪繁殖障碍,表现为流产、产死胎、木乃伊胎、弱胎,各龄猪尤其是小猪出现呼吸道疾病,哺乳仔猪高死亡率、免疫抑制和持续性感染等,是目前严重影响世界养猪业健康发展的重要传染病之一,特别是2006年以来,我国及周边国家出现以高热、高发病率和高死亡率为主要特征的高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP PRRS),给我国的养猪业造成了重大的经济损失。
调查发现,猪养殖业发展中猪病的单一典型病例在逐渐减少,而混合感染逐渐增加,混合感染疾病发生率不断的提高和猪场卫生条件差、消毒不规范和病死猪没有无害化处理有很大的关系,猪瘟和猪蓝耳病同时发生的话将严重影响猪养殖业的发展。大部分猪在患有该2种病混合感染后体温会升高至40℃以上,病猪会精神萎靡、绝食、便秘等,病猪的眼屎会增加,而且腹部以及耳尖等部位会出现不同程度的蓝紫斑,在病情严重恶化时,病猪会有尖叫声出现,按压会有血斑病出现,而且淋巴结肿胀,用手触摸时患猪会有疼痛感,而且会发出尖叫声。怀孕母猪出现流产、弱胎等情况,甚至会发生难产。病猪的脾部会出现针尖状的出血等,这些都是混合感染的典型症状。
免疫接种是猪瘟和高致病性猪繁殖与呼吸综合征防制的重要措施。目前应用猪瘟兔化弱毒疫苗和高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗对这两种疫病的防制起了很大的作用,如我公司的猪瘟活疫苗(细胞源)、ST猪瘟活疫苗(传代细胞源)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(GDr180株)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)等均受到养殖者的欢迎,在两者传染病的防控中发挥了重要作用。但猪用疫苗品种很多,在实际操作中,多针次、多剂量、多种免疫程序难以合理安排,既繁琐、费时、费力、增加成本,且容易造成漏种,直接影响预防效果。采用多联(或多价)疫苗免疫接种,以达到预防多种传染病的目的,同时,这两种疫病采取的免疫程序比较接近,这为猪瘟与高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联活疫苗的研制提供了可能。为了达到一次免疫可有效预防和控制CSF与PRRS两种疫病的发生与流行,减轻免疫接种的工作量,减少免疫次数,避免因频繁免疫所造成的免疫麻痹,相应减少了对猪群的应激。目前市场上仅有中牧实业生产的威联-高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟二联活疫苗(TJM-F92株+C株),而我公司的猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂二联活疫苗(C株+GDr180株)也已进入新兽药注册阶段。
在生产过程中,活疫苗通常以真空冷冻干燥的方法进行冻干处理,因此在生产过程中需要使用冻干保护剂,冻干保护剂对活疫苗的效价、储存、运输和使用过程均有至关重要的影响。普遍使用的保护剂有牛奶蔗糖保护剂、蔗糖明胶保护剂等常规保护剂,传统的冻干保护剂冻干后需要在-15℃保存。在实际的临床使用中,运输和正规供应站可较好执行保存条件,养殖户或养殖企业多存在室温操作,接种用苗时间过长等问题,在此过程易造成少部分失效。对此,有必要完善猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征耐热保护剂二联活疫苗的生产技术,能够适当提高疫苗保存温度,减少使用过程的损失,提高疫苗的稳定性具有重要的意义。
发明内容:
为了满足养殖业对于良好运输和保存特性的猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联活疫苗的市场需求,本发明旨在提供一种猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗及其制备方法,通过添加耐热保护剂能够提高疫苗保存温度,减少使用过程的损失,提高疫苗的稳定性。
为解决以上技术问题,本发明采用如下技术方案:
一种猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗,包括猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂,其中所述耐热保护剂由以下成分组成:蔗糖12%、明胶2%、酶解酪蛋白11%、海藻糖3%、D-山梨醇2%、右旋糖苷1.5%、L-谷氨酸钠2%、L-精氨酸盐酸盐2%、乳糖酸钙0.5%、甘氨酸2%,余量为注射用水,其中百分含量为质量体积百分含量。
优选的,所述猪瘟半成品为病毒含量≥5×105RID/ml的猪瘟病毒兔化弱毒病毒液,所述猪瘟病毒兔化弱毒病毒为猪瘟病毒兔化弱毒C株。
优选的,所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品为病毒含量≥107.5TCID50/ml的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒GDr180株病毒液。
优选的,所述耐热保护剂的制备方法为:1)以配制1000mL耐热冻干保护剂为例,按百分含量(w/v)称取各活性成分;2)将称取的蔗糖、明胶、酶解酪蛋白、海藻糖和右旋糖苷于注射用水中加热溶解,冷却至室温后调节pH=7.2并用注射用水定容至800mL,而后121℃30min高压灭菌,得到甲液;3)将称取的D-山梨醇、乳糖酸钙、L-谷氨酸钠、L-精氨酸盐酸盐、甘氨酸用适量注射用水溶解后,调节pH=7.2并定容至200mL,过滤除菌得到乙液;4)使用时,将甲液和乙液混合即得到所述的耐热冻干保护剂。
所述猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗中猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂的体积比为1:2:2。
所述猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗的制备方法为:将猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂按1:2:2的体积比例混合均匀,分装后进行冻干,冻干曲线为:产品预冻阶段:常温进箱,1h内将板层温度降至-42℃并维持3h;升华干燥阶段:1h将板层温度从-42℃匀速升温至0℃并维持12h;解析干燥阶段:1h将板层温度从0℃升至28℃并维持6h;冻干结束,曲线全长约24h。
基于以上技术方案,本发明具有如下优点和有益效果:
首先,本发明在本公司相应研究的基础上筛选得到了适合猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗的耐热冻干保护剂配方,该配方对于猪瘟病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的冻干保护效力高,且在耐老化试验中也表现优异,在冻干后、耐老化试验后都保持相对较高的生物活性,且通过比较可知,即使对耐热保护剂的配方进行细微的调整,如调整其中各成分的配比或者对其中的乳糖酸钙进行取舍或替代均导致保护效力下降,即本发明通过特定的组成和配比取得了预料不到的保护效果。
其次,本发明在耐热冻干保护剂配方优化的基础上进一步对冻干曲线进行了优化,通过反复试验得到了合适的冻干曲线,其相对而言冻干仅需要24h,相比传统的冻干耗时31h缩短了7h。由此可见,通过冻干保护剂的优化可以缩短冻干的时间,相对传统的冻干工艺而言极大地提高了生产效率。
综上所述,本发明通过设计和优化冻干保护剂配方,并对冻干工艺进行优化,制备得到了猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗(C株+GDr180株),该疫苗经冻干后仍保持了较高的病毒存活率,经耐热试验后,其也保持较高的病毒滴度,表明所述耐热冻干保护剂对于病毒具有很好的冻干保护作用,且短时间的常温运输、贮存均不会对疫苗活性产生大的影响,本发明制备得到的猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗(C株+GDr180株)与高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟二联活疫苗(TJM-F92株+C株)的安全性与免疫效力无明显差异。
具体实施方式:
实施例1:疫苗原液的制备
1.1毒种来源:
制造本品用的毒种分别为猪瘟病毒兔化弱毒C株(CVCC AV1412)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒GDr180株;效检用强毒为猪瘟病毒石门系(CVCC AV1411)和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD株,系本公司疫苗生产用毒,均由中国兽医药品监察所鉴定、保管和供应。
1.2制苗毒液的制备
1.2.1猪瘟病毒兔化弱毒病毒液的制备
(1)接种:取已形成良好单层的ST细胞培养瓶,弃去生长液,接种含3%~5%(V/V)生产用细胞毒种的维持液,37℃继续培养。
(2)收获:接毒后5日作第1次收获换液,以后每隔4日收获换液1次,最高收毒次数不超过5次。
(3)保存:收获的毒液置-15℃以下保存;
1.2.2高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒(GDr180株)病毒液的制备
(1)接种:Marc-145细胞长成良好单层时,弃去生长液,按1%~2%(V/V)接种病毒,吸附60分钟,然后再加入含2%血清的细胞维持液,37℃继续培养48~72小时。
(2)收获:当细胞病变(CPE)达到70%左右时收获细胞病毒培养物,-20℃冻融1次。经离心或过滤除去细胞碎片,于-20℃冻存,作为疫苗制造用抗原。
(3)保存:收获的毒液置-20℃以下保存,应不超过6个月;-40℃以下保存,应不超过12个月。
1.3效力检验
1.3.1猪瘟病毒含量测定
将疫苗用无血清MEM细胞培养液稀释为1头份/ml,然后再作10倍系列稀释,取10-3、10-4、10-5 3个稀释度,分别接种已长成良好单层、弃去细胞生长液的T25 ST细胞培养瓶,每个稀释度接种6瓶,每瓶1.0ml,同时设正常细胞对照4瓶。置37℃、含5%CO2培养箱中吸附2小时后,每瓶加含2%新生牛血清MEM细胞维持液6.0ml,接毒后4日作第1次换液,以后每隔3日收获换液1次,应用ELISA方法检测第4收次毒液。根据Reed-Muench法计算TCID50。
1.3.2高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒(GDr180株)病毒含量测定
将疫苗用无血清MEM细胞培养液稀释成1头份/ml,再作10倍系列稀释,取10-3、10-4、10-5、10-6 4个稀释度,分别接种于已长成良好单层、弃去细胞生长液的96孔Marc-145细胞培养板,每个稀释度接种6孔,每孔0.1ml,同时设正常细胞对照2孔。置37℃、含5%CO2培养箱中吸附60分钟后,每孔补加含4%新生牛血清MEM细胞维持液0.1ml,继续培养并观察5~7日,根据Reed-Muench法计算TCID50。
1.4疫苗原液半成品
(1)猪瘟病毒兔化弱毒病毒液的制备:按“1.2.1猪瘟病毒兔化弱毒病毒液的制备”的方法进行制备与检验,经离心或过滤除去杂质,病毒含量≥5×105RID/ml。
(2)高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒(GDr180株)病毒液的制备:按“1.2.2高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒(GDr180株)病毒液的制备”的方法进行制备与检验,经离心或过滤除去细胞碎片和杂质,病毒含量≥107.5TCID50/ml。
实施例2:耐热保护剂的配制及疫苗的制备
2.1耐热冻干保护剂的配方。
在查阅相关专利和期刊文献资料的基础上,根据耐热冻干保护剂的基本组成成分分别选取小分子营养剂、高分子赋形剂及抗氧化剂进行搭配。其中低分子营养物质主要维持病毒存在于相对稳定的液体环境中利于冻干,具有脱水保护作用。赋形剂主要抑制蛋白质聚集,减少表面吸附,起骨架支撑作用。抗氧化剂主要是防止疫苗保存过程中可能出现的氧化反应。根据以上原则,本公司通过筛选,得到了较优的耐热冻干保护剂组成,其组成成分包括蔗糖、明胶、酶解酪蛋白、海藻糖、D-山梨醇、右旋糖苷、L-谷氨酸钠、L-精氨酸盐酸盐、乳糖酸钙、甘氨酸,本公司已经另案申请。在以上研究的基础上,本公司进一步针对CSF-PRRS二联活疫苗进行研究,以筛选得到适合CSF-PRRS二联活疫苗的耐热冻干保护剂配方。
选取具体成分设计了耐热冻干保护剂I-III等3组耐热冻干保护剂配方,具体配方如下表1所示:
表1耐热冻干保护剂配方
注:其中百分含量表示质量体积百分含量,如“蔗糖13%”表示相对1000mL冻干保护剂溶液,添加蔗糖130g。
2.2耐热冻干保护剂的配制。
耐热冻干保护剂的配制方法:1)以配制1000mL耐热冻干保护剂为例,按百分含量(w/v)称取各活性成分;2)将称取的蔗糖、明胶、酶解酪蛋白、海藻糖和右旋糖苷于注射用水中加热溶解,冷却至室温后调节pH=7.2并用注射用水定容至800mL,而后121℃30min高压灭菌,得到甲液;3)将称取的D-山梨醇、乳糖酸钙、L-谷氨酸钠、L-精氨酸盐酸盐、甘氨酸用适量注射用水溶解后,调节pH=7.2并定容至200mL,过滤除菌得到乙液;4)使用时,将甲液和乙液混合即得到所述的耐热冻干保护剂。
2.3疫苗的制备
分别将实施例2中的耐热冻干保护剂I~III的甲液和乙液混合均匀后得到相应的耐热冻干保护剂I~III。而后将猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂按1:2:2的比例混合均匀,同时以常规含5%蔗糖的脱脂牛奶冻干保护剂作为对照组。
2.4分装冻干
定量分装,每瓶3mL,分别采用冻干曲线A或B冻干制成疫苗,加盖密封。
其中冻干曲线A的参数如下:
产品预冻阶段:常温进箱,1h内将板层温度降至-42℃并维持3h;
升华干燥阶段:2h将板层温度从-42℃匀速升温至0℃并维持15h;
解析干燥阶段:2h将板层温度从0℃升至28℃并维持8h;
冻干结束,曲线全长约31h。
冻干曲线B的参数如下:
产品预冻阶段:常温进箱,1h内将板层温度降至-42℃并维持3h;
升华干燥阶段:1h将板层温度从-42℃匀速升温至0℃并维持12h;
解析干燥阶段:1h将板层温度从0℃升至28℃并维持6h;
冻干结束,曲线全长约24h。
实施例3:疫苗成品检验
3.1物理性状冻干的疫苗均呈海绵状疏松团块,易与瓶壁脱离,加稀释液后迅速溶解。
3.2无菌检验结果冻干的疫苗均无细菌、霉菌污染。
3.3支原体和外源病原污染结果冻干的疫苗均无支原体和外源病原污染。
3.4鉴别检验结果冻干的疫苗均符合规定。
3.5剩余水分测定按现行《中国兽药典》附录进行检验,冻干的疫苗剩余水分含量均小于4.0%。
3.6真空度测定按现行《中国兽药典》附录进行检验,冻干的疫苗均符合规定。
3.7安全检验
冻干的疫苗安全检验结果显示,所有免疫猪精神、食欲均正常,未出现接种疫苗引起的局部或全身不良反应;免疫前试验猪的基础体温均在39.4℃左右,最高没有超过39.8℃,在正常范围内,接种后21天内,所有猪的体温均未明显变化,维持在39.4℃左右,最高体温变化未超过0.4℃。证明冻干的疫苗对仔猪是安全的。
3.8效力检验
3.8.1猪瘟效力检验结果详见表2。
表2猪瘟病毒效力检验结果(单位:TCID50/头份)
3.8.2高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒(GDr180株)病毒含量测定结果详见表3。
表3高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒效力检验结果(单位:TCID50/头份)
3.9耐老化试验
将待检疫苗放置在37℃温箱中10日后进行病毒含量测定,结果见表4、5。
表4猪瘟病毒耐老化试验结果(单位:TCID50/头份)
表5高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒耐老化试验结果(单位:TCID50/头份)
由以上结果可知,采用耐热保护剂配方II和冻干曲线B冻干生产的猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗(C株+GDr180株)完全优于其他配方组合,通过该研究,最终确定了合适的耐热保护剂配方II和匹配的冻干曲线B用于生产猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗(C株+GDr180株)。
实施例4:
4.1试验用猪
广东永顺生物制药股份有限公司实验动物场自繁自养健康仔猪40头,28日龄左右,试验前经猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒RT-PCR检测试剂盒检测均为抗原阴性,以及猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒检测均为抗体阴性的猪。
4.2诊断试剂
猪瘟病毒采用北京世纪元亨动物防疫技术有限公司猪瘟病毒通用型RT-PCR检测试剂盒进行检测(lot:CSF20170106p,235bp)。
猪繁殖与呼吸综合征病毒采用北京世纪元亨动物防疫技术有限公司猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型RT-PCR检测试剂盒进行检测(lot:HPRRS20161216p)。
猪瘟病毒抗体采用美国IDEXX公司的猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测试剂盒进行检测(lot:H641)。
猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体采用美国IDEXX公司的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒进行检测(lot:H461)。
4.3试验用疫苗及强毒
4.3.1猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗(C株+GDr180株),广东永顺生物制药股份有限公司生产,批号:2016001(10头份/瓶)。
4.3.2高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟二联活疫苗(TJM-F92株+C株),中牧实业股份有限公司生产,批号:1608003-1(10头份/瓶)。
4.3.3猪瘟病毒石门系强毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD强毒由中国兽医药品监察所提供,广东永顺生物制药股份有限公司制备。
4.4效力试验
效力试验分组情况如下(详见表6):
表6效力试验分组情况
4.4.1免疫
按瓶签注明头份,将两种疫苗用灭菌生理盐水稀释成1头份/ml,各颈部肌肉注射10头猪,1头份/ml/头。
4.4.2猪瘟强毒攻毒
免疫后10日,每组疫苗分别取5头猪连同条件相同对照猪5头,各颈部肌肉注射猪瘟病毒石门系血毒1.0ml/头(含105MLD),每天定时测定直肠温度1次,连续观察16日。对照猪应全部发病,且至少死亡3头,免疫猪应全部保护,无猪瘟临床症状。具体结果如下(详见表7):
表7猪瘟石门系血毒攻毒猪免疫保护效果表
两种疫苗免疫猪分别用猪瘟石门系血毒攻毒后观察临床症状及猪发病死亡情况,结果显示两种疫苗免疫猪均能获得有效的免疫保护,对照猪全部(5/5)发病并死亡
4.4.3高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD强毒攻毒
免疫后28天,将免疫组和对照组分别剩余的5头猪各颈部肌肉注射高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD强毒3.0ml/头(105.25TCID50/ml),攻毒后,每天定时测定直肠温度1次,连续观察21日并解剖死亡猪和试验结束后所有存活猪,观察肺部组织病理变化,统计免疫保护结果。对照猪应全部发病,且至少2头死亡,免疫猪应至少4头保护。具体结果如下:
表8高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD强毒攻毒猪免疫保护效果
两种疫苗免疫猪用高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒GD强毒攻毒后观察临床症状及猪发病死亡情况,结果显示两种疫苗免疫猪均能获得有效的免疫保护,对照组全部发病(5/5)且3/5死亡。
以上试验结果表明:猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗(C株+GDr180株)与高致病性猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟二联活疫苗(TJM-F92株+C株)两种二联疫苗对猪均安全,免疫猪均能有效抵抗猪瘟病毒强毒和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒强毒的攻击,其安全性与免疫效力无明显差异。
Claims (2)
1.一种猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗,包括猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂,其中所述耐热保护剂由以下成分组成:蔗糖12%、明胶2%、酶解酪蛋白11%、海藻糖3%、D-山梨醇2%、右旋糖苷1.5%、L-谷氨酸钠2%、L-精氨酸盐酸盐2%、乳糖酸钙0.5%、甘氨酸2%,余量为注射用水,其中百分含量为质量体积百分含量;
所述耐热保护剂的制备方法为:1)以配制1000mL耐热冻干保护剂为例,按百分含量w/v称取各活性成分;2)将称取的蔗糖、明胶、酶解酪蛋白、海藻糖和右旋糖苷于注射用水中加热溶解,冷却至室温后调节pH=7.2并用注射用水定容至800mL,而后121℃30min高压灭菌,得到甲液;3)将称取的D-山梨醇、乳糖酸钙、L-谷氨酸钠、L-精氨酸盐酸盐、甘氨酸用适量注射用水溶解后,调节pH=7.2并定容至200mL,过滤除菌得到乙液;4)使用时,将甲液和乙液混合即得到所述的耐热冻干保护剂;
所述猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗中猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂的体积比为1:2:2;
所述猪瘟半成品为病毒含量≥5×105RID/ml的猪瘟病毒兔化弱毒病毒液,所述猪瘟病毒兔化弱毒病毒为猪瘟病毒兔化弱毒C株;
所述高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品为病毒含量≥107.5TCID50/ml的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒GDr180株病毒液。
2.根据权利要求1所述的猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗,其特征在于,所述猪瘟、高致病性猪繁殖与呼吸综合征二联耐热保护剂活疫苗的制备方法为:将猪瘟半成品、高致病性猪繁殖与呼吸综合征半成品和耐热保护剂按1:2:2的体积比例混合均匀,分装后进行冻干,冻干曲线为:产品预冻阶段:常温进箱,1h内将板层温度降至-42℃并维持3h;升华干燥阶段:1h将板层温度从-42℃匀速升温至0℃并维持12h;解析干燥阶段:1h将板层温度从0℃升至28℃并维持6h;冻干结束,曲线全长24h。
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