CN116715736A - 噬菌体尾部纤维蛋白在o2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴定中的应用 - Google Patents

噬菌体尾部纤维蛋白在o2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴定中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116715736A
CN116715736A CN202310985753.1A CN202310985753A CN116715736A CN 116715736 A CN116715736 A CN 116715736A CN 202310985753 A CN202310985753 A CN 202310985753A CN 116715736 A CN116715736 A CN 116715736A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fibrin
complex
tail
escherichia coli
bacteriophage tail
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202310985753.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN116715736B (zh
Inventor
陈义宝
刘玉庆
李璐璐
胡明
赵敏
张庆
赵效南
骆延波
张志鹏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute Animal Science and Veterinary Medicine of Shandong AAS
Original Assignee
Institute Animal Science and Veterinary Medicine of Shandong AAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute Animal Science and Veterinary Medicine of Shandong AAS filed Critical Institute Animal Science and Veterinary Medicine of Shandong AAS
Priority to CN202310985753.1A priority Critical patent/CN116715736B/zh
Publication of CN116715736A publication Critical patent/CN116715736A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116715736B publication Critical patent/CN116715736B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G01N33/56916—Enterobacteria, e.g. shigella, salmonella, klebsiella, serratia
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/585—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with a particulate label, e.g. coloured latex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2795/00—Bacteriophages
    • C12N2795/00011—Details
    • C12N2795/00022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2795/00—Bacteriophages
    • C12N2795/00011—Details
    • C12N2795/00033—Use of viral protein as therapeutic agent other than vaccine, e.g. apoptosis inducing or anti-inflammatory
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/24—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • G01N2333/245—Escherichia (G)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提出了噬菌体尾部纤维蛋白在O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴定中的应用，所述噬菌体尾部纤维蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明的噬菌体尾部纤维蛋白可以特异性地结合O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，从而可以实现快速且准确鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，同时也可以用于富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，有助于致病性大肠杆菌研究、疾病诊断和治疗及疫苗研发，对防御并控制致病性大肠杆菌传播有重要意义。

Description

噬菌体尾部纤维蛋白在O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴 定中的应用
技术领域
本发明涉及生物领域。具体地，本发明涉及噬菌体尾部纤维蛋白在O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴定中的应用。
背景技术
禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli， APEC）可造成家禽呼吸道感染、卵黄囊感染、包心包肝、气囊炎和脑膜炎等，是危害家禽养殖业的重要病原菌之一，也是全世界家禽养殖业面临的比较严重的细菌性疾病。APEC也能感染人类，造成尿路感染和新生儿脑膜炎等。
目前，已超过196种大肠杆菌O-抗原血清型的报道，不同致病性大肠杆菌的优势血清型也不同。我国与APEC相关的主要流行血清型为O1、O2和O78。因此，亟需建立一种快速既能识别大肠杆菌又能确定其血清型的方法。
传统鉴定APEC血清型的方法包括凝集试验、PCR技术、环介导等温扩增技术等。但这些方法面临耗费时间长、检测灵敏度低等缺点。
因此，目前针对O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴定方法仍有待研究。
发明内容
本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题。
需要说明的是，本发明是基于发明人的如下发明构思而完成的：
发明人尝试选择以噬菌体的受体结合蛋白作为研究对象，期望寻求一种可以特异性结合O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的噬菌体受体结合蛋白。经过大量理论分析发现，噬菌体上的一种尾部纤维蛋白可以特异性识别O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，从而可以实现快速且准确鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，同时也可以用于富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，有助于致病性大肠杆菌研究、疾病诊断和治疗及疫苗研发，对防御并控制致病性大肠杆菌传播有重要意义。在本文中，将该噬菌体尾部纤维蛋白命名为“噬菌体尾纤蛋白pO2”。
为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种噬菌体尾部纤维蛋白。根据本发明的实施例，所述噬菌体尾部纤维蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
在本发明的另一方面，本发明提出了一种复合物。根据本发明的实施例，所述复合物包括：前面所述噬菌体尾部纤维蛋白；以及标记物，所述标记物用于标记所述噬菌体尾部纤维蛋白。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种分离的核酸分子。根据本发明的实施例，所述分离的核酸分子编码前面所述噬菌体尾部纤维蛋白或者所述复合物。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种表达载体。根据本发明的实施例，所述表达载体含有前面所述分离的核酸分子。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例，重组细胞中含有下列至少之一：前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子和所述表达载体。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括下列至少之一：前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子、所述表达载体和所述重组细胞。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种药物。根据本发明的实施例，所述药物包括下列至少之一：前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子和所述重组细胞；用于预防或治疗因O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌所引发的疾病的药物。
在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子、所述表达载体、所述重组细胞和所述试剂盒中的至少一种在非诊断目的鉴定和/或富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌中的应用。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种非诊断目的鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：使前面所述噬菌体尾部纤维蛋白与待测微生物接触；基于所述噬菌体尾部纤维蛋白与所述待测微生物是否结合，确定所述待测微生物是否为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子、所述表达载体和所述重组细胞中的至少一种在制备试剂盒中的用途。根据本发明的实施例，所述试剂盒用于诊断因感染O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌所引发的疾病。
在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子、所述表达载体和所述重组细胞中的至少一种在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，所述药物用于预防或治疗因感染O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌所引发的疾病。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将待处理样品与前面所述复合物接触，所述待测样品中的O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌可与所述复合物中的噬菌体尾部纤维蛋白相结合，所述复合物中的标记物选自磁珠探针；通过磁力吸附所述磁珠探针，以便从所述待处理样品中富集出O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明一个实施例的纯化后蛋白电泳图；
图2显示了根据本发明一个实施例的Western-Blot检测电泳图；
图3显示了根据本发明一个实施例的不同pH值下蛋白活性示意图；
图4显示了根据本发明一个实施例的不同温度下蛋白活性示意图；
图5显示了根据本发明一个实施例的适用的O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌检测浓度分析示意图；
图6显示了根据本发明一个实施例的适用于检测O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的蛋白浓度分析示意图；
图7显示了根据本发明一个实施例的鉴定方法特异性分析示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
在本文中，术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
本发明提出了噬菌体尾部纤维蛋白、复合物、分离的核酸分子、表达载体、重组细胞、试剂盒、药物、非诊断目的鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的方法和富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的方法，下面将分别对其进行详细描述。
噬菌体尾部纤维蛋白
在本发明的一个方面，本发明提出了噬菌体尾部纤维蛋白。根据本发明的实施例，噬菌体尾部纤维蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
EARRIAESIREAGLIGYITRRSFEKGYNVTTWSEVLLWEEDGDYYRWDGTLPKNVPAGSTPETSGGIGLGAWVSVGDAALRSQISNPEGAILYPELQMARWRDEGDVRGWGAKGDGSADDTEAFKAALATGKNLYIPVGIYIIKETLYFKNQVIKGGGISPSPSLGTILAISHNEAAFKYDVNSGYSMGGYLGGLFIDYGENKPDNYGGRKGIDIGDASQTAWPSQFIIENIIVRGAYFGIHDVTGAFQYTMRNVLAINCWEGFRKHIGTTVLMDTCYALNCYQAFNFANVYNMTMNNCAMDGCNDIQGLQAFDINNCKGMVINGMYSENCEIHHNGHASIYIHGDSTVTLNGYALHSHKVLASSGEAYFLRAHESSRVTVDGIFFGEDLTSTAVFMYPVLSSGDARVKLGTTRLKLWTGATGGASLAALGNSLIEYDNTVFVPTVTVGWCSNNGVVAKGTLAVNTALEPGADLNAGNITLTGDYKPTKGDVLVYGATFDVKSCSIILKPIGENLCNVYIKNLSAGGSVTLLGDLMVQAIRR*（SEQ ID NO：1）
在本发明中，术语“噬菌体尾部纤维蛋白”属于噬菌体受体结合蛋白，可识别细菌表面受体（脂多糖、外膜蛋白、荚膜、鞭毛和菌毛等），最终将细菌裂解。本发明的发明人发现，噬菌体尾部纤维蛋白pO2可以特异性地结合O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，而不结合其他抗原血清型的大肠杆菌或者其他非大肠杆菌，因此可以实现快速且准确鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，同时也可以用于富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，有助于致病性大肠杆菌研究、疾病诊断和治疗及疫苗研发，对防御并控制致病性大肠杆菌传播有重要意义。
本发明对于噬菌体尾部纤维蛋白的来源不做严格限定，对于任何类型的噬菌体的受体结合蛋白均适用于本发明，例如大肠杆菌噬菌体、沙门杆菌噬菌体等等，只要是具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列即可。
本发明同样保护一种噬菌体尾部纤维蛋白，该噬菌体尾部纤维蛋白与SEQ ID NO：1所示氨基酸序列具有至少80%同源性。
本文提及的“同源性”是指核苷酸序列或者氨基酸序列之间的相似程度，同时本文所说的具有(一定程度)同源性的核苷酸序列或者氨基酸序列对应的蛋白至少在用于本发明的功能方面具有相同或更好的活性。
在本发明中，术语“至少80%同源性”指与各参考序列至少为80%，可为81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、99.9%的相似程度。
尽管本发明采用的是由SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列为SEQID NO:1的pO2蛋白，但是可以理解，pO2蛋白的任何功能等效变体均适用于本发明中，所述功能等效变体相较于SEQ ID NO:1所示的pO2蛋白可以具有一个或者多个氨基酸的插入、替换和/或缺失，但是依然具有SEQ ID NO:1所示的pO2蛋白的相同功能/作用。
复合物
在本发明的另一方面，本发明提出了一种复合物。根据本发明的实施例，该复合物包括：前面所述噬菌体尾部纤维蛋白；以及标记物，所述标记物与所述噬菌体尾部纤维蛋白结合，用于标记所述噬菌体尾部纤维蛋白。通过采用标记物以标记噬菌体尾部纤维蛋白，从而判断噬菌体尾部纤维蛋白是否结合到O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
根据本发明的实施例，所述标记物包括：荧光指示物或者磁珠探针。将复合物与待测菌接触，收集菌并检测荧光信号，当待测菌为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌时，其会与复合物中的噬菌体尾部纤维蛋白结合，间接携带着标记物，产生可检测的荧光信号。或者，将复合物与含有待测菌的样品接触，当待测菌为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌时，其会与复合物中的噬菌体尾部纤维蛋白结合，间接携带着磁珠探针，通过磁力吸附可以富集出O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
在本发明中，术语“荧光物”是指可产生可检测的荧光信号的物质，本发明不做严格限定，可以为GFP蛋白、mCherry蛋白或者与氨基反应的异硫氰酸酯衍生物或者琥珀酰亚胺酯，如FITC、TRITC、NHS-荧光素或NHS-罗丹明等。
需要说明的是，前面针对噬菌体尾部纤维蛋白所描述的特征和优点，同样适用于该复合物，在此不再赘述。
分离的核酸分子、表达载体、重组细胞
在本发明的又一方面，本发明提出了一种分离的核酸分子。根据本发明的实施例，所述分离的核酸分子编码前面所述噬菌体尾部纤维蛋白或者所述复合物。由此，根据本发明实施例的分离的核酸分子编码的蛋白可以特异性地结合O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，可以实现快速且准确鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，同时也可以用于富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，有助于致病性大肠杆菌研究、疾病诊断和治疗及疫苗研发，对防御并控制致病性大肠杆菌传播有重要意义。
根据本发明的实施例，所述分离的核酸分子的核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示，或者与SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列具有至少80%同源性。
gaagcacgacgaatcgctgagagtatcagggaggctggtctaattggttatattacccgtcgctccttcgagaaaggctacaacgttacaacatggagcgaggtcctgctatgggaagaggatggtgattattaccgctgggatggtacgcttccaaagaacgttcctgctggttcaactcctgaaacttccggtgggattggattaggtgcgtgggttagtgttggtgatgctgctttaagaagtcagatttcaaacccggaaggggcaatactctacccagaattacagatggcacgctggcgagatgagggtgatgttcgcggatggggtgctaaaggtgatggttctgcggatgatacagaggctttcaaggcagcactagcaacaggaaagaatctatatatccccgttggtatatacatcattaaagagactttgtactttaagaaccaagttattaaaggtgggggaatatctccatcaccaagtcttggtacaatcctagcaatctctcacaatgaagcagcttttaagtatgacgttaactctggatactccatgggtggatacttaggcggtttattcattgattatggtgagaacaagccagacaactatggtggtcgcaaaggtattgatattggtgatgcatcgcagacagcatggccttcacaatttatcattgagaacatcatagtacgtggtgcgtactttggtattcatgacgtgacaggggcttttcagtataccatgcgtaacgtattggcgattaattgctgggaaggtttccgtaagcatattggtactacagtcctaatggatacatgctacgcacttaattgttatcaggcgttcaattttgcaaacgtgtacaacatgactatgaacaattgtgcaatggacggctgtaatgatatacaaggtctacaggcttttgatattaacaactgtaaaggtatggtaataaatggcatgtacagcgagaactgtgagattcatcataatggacatgcctctatatatattcatggggactcaacagtaacacttaacggatatgcactacattcccacaaagttctggctagttctggggaggcttacttcttacgagcacatgaaagttctcgcgttactgttgatggtatcttcttcggggaagacctgacgtctactgctgtattcatgtacccagtcctgtcttctggggatgctagagttaagcttggaactactagattgaagttgtggactggtgctacgggtggggcgtcactggctgcactaggtaacagtttgattgagtatgacaacacagtctttgttccaacagtcacggtcggatggtgtagcaacaacggagttgtagccaaaggtactcttgcagttaacactgcgcttgaaccaggtgctgacctgaatgccggtaatattaccctcactggtgactacaagccaactaagggggatgtgcttgtgtatggtgctacctttgatgttaagtcatgttcaattattctcaagccaataggggagaatttatgtaatgtgtacattaagaacttaagtgcaggtggtagtgttactcttcttggtgacttgatggtacaggccatccgacgctag（SEQ ID NO：2）
根据本发明的实施例，当标记物为蛋白时，例如GFP蛋白、mCherry蛋白，则分离的核酸分子既可以编码噬菌体尾部纤维蛋白，也可以编码含有噬菌体尾部纤维蛋白和标记物的复合物。当标记物为非蛋白时，例如FITC、TRITC、NHS-荧光素或NHS-罗丹明，则分离的核酸分子仅能编码噬菌体尾部纤维蛋白，而复合物则不能通过编码表达的方式获得，可以通过化学反应将噬菌体尾部纤维蛋白和标记物结合。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种表达载体。根据本发明的实施例，所述表达载体含有前面所述分离的核酸分子。由此，根据本发明实施例的表达载体可以将分离的核酸分子表达为噬菌体尾部纤维蛋白或复合物，从而可以特异性地结合O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，可以实现快速且准确鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，同时也可以用于富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，有助于致病性大肠杆菌研究、疾病诊断和治疗及疫苗研发，对防御并控制致病性大肠杆菌传播有重要意义。
在本发明中，术语“表达载体”通常是指能够插入在合适的宿主中自我复制的核酸分子，其将插入的核酸分子转移到宿主细胞中和/或宿主细胞之间。所述表达载体可包括主要用于将DNA插入细胞中的载体、主要用于复制DNA的载体，以及主要用于DNA的转录和/或翻译的表达的载体。示例性地，表达载体可以为质粒、噬菌体、粘粒或病毒等。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种重组细胞。根据本发明的实施例，重组细胞中含有下列至少之一：前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子和所述表达载体。通过培养该重组细胞可以获得噬菌体尾部纤维蛋白，可以实现快速且准确鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，同时也可以用于富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，有助于致病性大肠杆菌研究、疾病诊断和治疗及疫苗研发，对防御并控制致病性大肠杆菌传播有重要意义。
在本文中，术语“重组细胞”通常是指采用基因工程技术或细胞融合技术对宿主细胞的遗传物质进行修饰改造或重组，获得具有稳定遗传的独特性状的细胞。其中，术语“宿主细胞”是指可导入表达载体的原核细胞或真核细胞。
需要说明的是，前面针对噬菌体尾部纤维蛋白和复合物所描述的特征和优点，同样适用于该分离的核酸分子、表达载体和重组细胞，在此不再赘述。
试剂盒和用途
在本发明的又一方面，本发明提出了一种试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括下列至少之一：前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子、所述表达载体和所述重组细胞。由此，利用根据本发明实施例的试剂盒可以实现快速且准确鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，同时也可以用于富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子、所述表达载体、所述重组细胞和所述试剂盒中的至少一种在非诊断目的鉴定和/或富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌中的应用。由此，利用根据本发明实施例的试剂盒可以实现快速且准确鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，同时也可以用于富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子、所述表达载体和所述重组细胞中的至少一种在制备试剂盒中的用途。根据本发明的实施例，所述试剂盒用于诊断因感染O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌所引发的疾病。
根据本发明的实施例，所述疾病选自呼吸道感染、卵黄囊感染、包心包肝、气囊炎、脑膜炎、尿路感染和/或新生儿脑膜炎。
需要说明的是，前面针对噬菌体尾部纤维蛋白、复合物、分离的核酸分子、表达载体或者重组细胞所描述的特征和优点，同样适用于该试剂盒和用途，在此不再赘述。
药物和用途
在本发明的又一方面，本发明提出了一种药物。根据本发明的实施例，所述药物包括下列至少之一：前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子、所述表达载体和所述重组细胞。由此，利用噬菌体尾部纤维蛋白可以特异性结合O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，可以将治疗药物靶向至机体内的O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，从而高效地杀伤O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，达到较好的预防和治疗效果。
根据本发明的实施例，所述药物进一步包括药学上可接受的辅料。
在本发明中，术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物化学上和/或毒理学上相容。优选地，本发明所述的“药学上可接受的”是指联邦监管机构或国家政府批准的或美国药典或其他一般认可药典上列举的在动物中使用的。
在本发明中，术语“药学上可接受的辅料”均可包括任何溶剂、固体赋形剂、稀释剂或其他液体赋形剂等等，适合于特有的目标剂型。除了任何常规的辅料与本发明的化合物不相容的范围，例如所产生的任何不良的生物效应或与药学上可接受的组合物的任何其他组分以有害的方式产生的相互作用，它们的用途也是本发明所考虑的范围。
在本发明的又一方面，本发明提出了前面所述噬菌体尾部纤维蛋白、所述复合物、所述分离的核酸分子、所述表达载体和所述重组细胞中的至少一种在制备药物中的用途。根据本发明的实施例，所述药物用于预防或治疗因感染O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌所引发的疾病。
在本发明中，术语“治疗”是指用于指获得期望的药理学和/或生理学效果。所述效果就完全或部分预防疾病或其症状而言可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或疾病导致的不良作用而言可以是治疗性的。本发明使用的“治疗”涵盖动物的疾病，包括：(a)在容易患病但是尚未确诊得病的个体中预防疾病或病症发生；(b)抑制疾病，例如阻滞疾病发展；或(c)缓解疾病，例如减轻与疾病相关的症状。本发明使用的“治疗”涵盖将药物给予个体以治疗、治愈、缓解、改善、减轻或抑制个体的疾病的任何用药，包括但不限于将含本发明所述噬菌体尾部纤维蛋白的药物给予有需要的个体。
在本发明中，术语“给药”指将预定量的物质通过某种适合的方式引入病患。本发明的噬菌体尾部纤维蛋白可以通过任何常见的途径被给药，只要它可以到达预期的组织。给药的各种方式是可以预期的，包括腹膜、静脉、肌肉、皮下、皮层、口服、局部、鼻腔、肺部和直肠，但是本发明不限于这些已举例的给药方式。然而，由于口服给药时，肽被消化，肽键断裂，因此口服给药的药物的活性成分应该被包被或被配制以防止其在胃部被降解或破坏。优选地，本发明的药物可以注射制剂被给药。此外，本发明的药物可以使用将活性成分传送到靶细胞的特定器械来给药。
本发明的药物的给药频率和剂量可以通过多个相关因素被确定，该因素包括要被治疗的疾病类型、给药途径、病患年龄、性别、体重和疾病的严重程度以及作为活性成分的药物类型。根据本发明的一些实施例，日剂量可分为适宜形式的1剂、2剂或多剂，以在整个时间段内以1次、2次或多次给药，只要达到治疗有效量即可。
需要说明的是，前面针对噬菌体尾部纤维蛋白、复合物、分离的核酸分子、表达载体或者重组细胞所描述的特征和优点，同样适用于该药物和用途，在此不再赘述。
鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的方法
在本发明的又一方面，本发明提出了一种鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：使前面所述噬菌体尾部纤维蛋白与待测微生物接触；基于所述噬菌体尾部纤维蛋白与所述待测微生物是否结合，确定所述待测微生物是否为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
根据本发明的实施例，所述噬菌体尾部纤维蛋白与待测微生物结合，则确定所述待测微生物为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌；所述噬菌体尾部纤维蛋白不与待测微生物结合，则确定所述待测微生物不为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
根据本发明的实施例，所述噬菌体尾部纤维蛋白是以前面所述复合物的形式与待测微生物接触的，通过检测标记物以便确定所述噬菌体尾部纤维蛋白与所述待测微生物是否结合。通过采用标记物以标记噬菌体尾部纤维蛋白，从而判断噬菌体尾部纤维蛋白是否结合到O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。具体地，将复合物与待测菌接触，收集菌并检测荧光信号，当待测菌为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌时，其会与复合物中的噬菌体尾部纤维蛋白结合，间接携带着标记物，产生可检测的荧光信号。或者，将复合物与含有待测菌的样品接触，当待测菌为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌时，其会与复合物中的噬菌体尾部纤维蛋白结合，间接携带着磁珠探针，通过磁力吸附可以富集出O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
在本发明的又一方面，本发明提出了一种富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将待处理样品与前面所述复合物接触，所述待测样品中的O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌可与所述复合物中的噬菌体尾部纤维蛋白相结合，所述复合物中的标记物选自磁珠探针；通过磁力吸附所述磁珠探针，以便从所述待处理样品中富集出O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。由此，有助于O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的科学研究。
根据本发明的实施例，接触时反应溶液的pH值为3~10，温度为4~42℃。在此条件下尾纤蛋白pO2的活性好，有助于特异性结合O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，实现准确鉴定和高效富集的目的。
需要说明的是，前面针对噬菌体尾部纤维蛋白或者复合物所描述的特征和优点，同样适用于该方法，在此不再赘述。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
下述实施例中，采用的主要材料如下：
pET-28a-sumo载体：购买于Invitrogen公司。
pET-28a-sumo-eGFP载体：本实验室构建。
BL21(DE3)感受态细胞：购买于Invitrogen公司。
洗涤液洗脱液配方：Tris 20mmol/L、NaCl 500mmol/L、咪唑50-500mmol、甘油5%、Tween0.05%。
实施例1 重组质粒的构建与蛋白表达
1. 按照SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列合成得到目的片段基因pO2。
2. 构建重组质粒pET-28a-sumo-eGFP-pO2
（1）将目的片段与pET-28a-sumo-eGFP载体分别与限制性内切酶SacI和XhoI在37℃酶切1.5h；
（2）将酶切后的产物在T4连接酶的作用下4℃过夜连接，连接体系条件如下：
（3）取-80℃冻存的感受态细胞于冰上融化后，取100µL于无菌的1.5mL EP管中，加入10µL连接产物，混匀，于冰上放置30min；
（4）42℃水浴热击90s，再放回冰上2min；
（5）加入400µL LB液体培养基，37℃ 200rpm摇床培养35min；
（6）取100µL菌液涂卡那Kan（50mg/mL）抗性平板，37℃培养至单菌落出现。
鉴定碱基序列无误的重组质粒pET-28a-sumo-eGFP-pO2按照常规方法导入BL21(DE3)感受态细胞中。
3. pO2蛋白的表达
BL21-pET28a-SUMO-eGFP-pO2以1:100比例加入的1000mL LB肉汤培养基，加入终浓度为50μg/mL卡那抗生素，在37℃（180rpm）振荡培养至OD600=0.6时，加入终浓度为0.6mM的IPTG，16℃（140rpm），振荡培养14h。
收集菌体并利用超声破碎仪破碎菌体，设置超声3秒停4秒，总时间20min。12000rpm（4℃），离心3min，收集上清，置于4℃冰箱保存。
4. pO2蛋白的纯化与鉴定
（1）将上清与镍层析胶4℃摇床充分结合两个小时，过柱子，使用洗涤液（咪唑浓度20mmol）洗涤三次（每次1mL）后不同咪唑浓度的洗脱液洗脱（50mmol、100mmol、150mmol、200mmol、250mmol、300mmol、350mmol、400mmol、450mmol、500mmol），取上清、穿流液、洗脱液、分别跑SDS-PAGE。
（2）通过配置胶确定蛋白的表达量及大小。
（3）使用His标签镍柱将蛋白纯化。
（4）使用PBS（pH=9.0）透析咪唑，使用50-kDa蛋白浓缩柱浓缩目的蛋白。
结果如图1所示，纯化后pO2蛋白大小为96.5kDa，蛋白纯度检测结果为502µg/mL。
5. 重组蛋白的Western-Blot检测
（1）按照上述步骤制备SDS-PAGE胶。
（2）利用转膜仪转膜，设置参数电流400mA，时间20min。
（3）用PBST洗涤3-5次，每次5 min，洗完后加入5%的脱脂奶封闭2h，封闭结束后，用PBST洗涤3-5次，每次5 min，然后加入抗eGFP抗体，4℃孵育过夜。
（4）次日，PBST洗涤3-5次，每次5 min，然后再加入羊抗兔二抗，室温孵育2h。用PBST洗涤3-5次，每次5 min，立刻加入ECL化学发光液并观察。
结果如图2所示，Western-Blot检测pO2蛋白大小与预期结果一致，为96.5kDa。
实施例2pO2蛋白pH稳定性
（1）180μL 105CFU/ mL的APEC-JNO2（血清型为O2的禽致病性大肠杆菌，购买于公司），然后加入20μL的包被液，置4°C冰箱孵育过夜。对照组为无菌PBS（pH=9.0）缓冲液。
（2）次日，弃孔中的液体并拍干水分，每孔中加入200μL的PBST缓冲液，倒掉液体，重复3-5次。每孔中加入200μL的5%脱脂奶，37°C封闭2h。
（3）弃孔中液体，每孔中加入200μL的PBST缓冲液，倒掉液体，重复3-5次。
（4）取100μL pO2蛋白（360μg/mL）加入900μL不同pH溶液buffer溶解（pH=1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12），以PBS为对照，在37°C温箱孵育1h。每孔加入100μL pO2蛋白，37°C温箱孵育2h。
（5）弃孔中液体，每孔中加入200μL的PBST缓冲液倒掉液体，重复3-5次。每孔加入100μL 抗GFP抗体稀释液（1:5000），37°C温箱孵育1h。
（6）弃上述抗体稀释液，每孔中加入200μL的PBST缓冲液倒掉液体，重复3-5次。每孔加入100μL羊抗兔二抗稀释液（1:7000），37°C温箱孵育1h。
（7）弃二抗稀释液，每孔中加入200μL的PBST缓冲液倒掉液体，重复3-5次。每孔加入100μL显色液，避光，37°C温箱孵育30min。
（8）每孔加入50μL的2moL/L浓硫酸终止反应，测定OD450。
结果如图3所示，重组蛋白pO2在pH3-10保持较高的活性，其中，在pH为9时，蛋白活性最高。
实施例3 pO2蛋白的温度稳定性
pO2对不同温度的敏感性试验与上述pH试验方法一致，不同的是取100μL pO2蛋白（360μg/mL）加入900μL PBS (pH=9)，分别于4℃、25℃、37℃、42℃、55℃、65℃、75℃和85℃环境下孵育1 h，PBS为对照。每孔加入100μL pO2蛋白，37℃温箱孵育2h。最终测定OD450。
结果如图4所示，蛋白在4-42℃之间活性相对稳定。在55℃时，蛋白活性下降超过50%，而在75-85℃时，蛋白几乎没有活性。
实施例4细菌APEC-JNO2最低浓度
（1）180μL（2—0.2×108CFU，PBS为对照），即~1.1×101— 1.1×108CFU/ mL的APEC-JNO2，然后加入20μL的包被液，置4°C冰箱孵育过夜。对照组为无菌PBS（pH=9.0）缓冲液。
（2）次日，弃孔中的液体并拍干水分，每孔中加入200μL的PBST缓冲液，倒掉液体，重复3-5次。每孔中加入200μL的5%脱脂奶，37°C封闭2h。
（3）弃孔中液体，每孔中加入200μL的PBST缓冲液，倒掉液体，重复3-5次。
（4）每孔加入100μL pO2蛋白（360μg/mL），37°C温箱孵育2h。
（5）弃孔中液体，每孔中加入200μL的PBST缓冲液倒掉液体，重复3-5次。每孔加入100μL GFP一抗稀释液（1:5000），37°C温箱孵育1h。
（6）弃一抗稀释液，每孔中加入200μL的PBST缓冲液倒掉液体，重复3-5次。每孔加入100μL羊抗兔二抗稀释液（1:7000），37°C温箱孵育1h。
（7）弃二抗稀释液，每孔中加入200μL的PBST缓冲液倒掉液体，重复3-5次。每孔加入100μL显色液，避光，37°C温箱孵育30min。
（8）每孔加入50μL的2moL/L浓硫酸终止反应，测定OD450。prism 8.0软件比较各组间FL差异（***P＜0.001）。
结果如图5所示，pO2蛋白可检测的细菌浓度高达10 CFU/mL，其仍与PBS对照组存在显著差异。
实施例5蛋白的最低检测浓度
与上述pH试验方法一致，不同的是每孔加入100μL 不同浓度的pO2蛋白（1—2048μg/mL），37°C温箱孵育2h。最终测定OD450。prism 8.0软件比较各组间FL差异（***P＜0.001）。
结果如图6所示，pO2蛋白在浓度1μg/mL时，仍可以检测到APEC-JNO2细菌，与PBS对照组存在显著差异。
实施例6 pO2蛋白的特异性
（1）每孔分别加入180μL 105CFU/ mL的O1、O2（APEC-JNO2）、O78、O91、O103、O111、O119、O145、O153、O159、O169（以上11种不同O抗原大肠杆菌均购买于公司）、沙门氏菌ATCC14028、阴沟肠杆菌AS 1.181、福氏志贺氏菌ATCC 12022、链球菌CVCC 3307和金黄色葡萄球菌ATCC 49775，然后每孔加入20μL的包被液，置4°C冰箱孵育过夜。对照组为无菌PBS（pH=9.0）缓冲液。
（2）次日，弃孔中的液体并拍干水分，每孔中加入200μL的PBST缓冲液，倒掉液体，重复3-5次。每孔中加入200μL的5%脱脂奶，37°C封闭2h。
（3）弃孔中液体，每孔中加入200μL的PBST缓冲液，倒掉液体，重复3-5次。
（4）每孔加入100μL pO2蛋白（360μg/mL），37°C温箱孵育2h。
（5）弃孔中液体，每孔中加入200μL的PBST缓冲液倒掉液体，重复3-5次。每孔加入100μL 抗GFP抗体稀释液（1:5000），37°C温箱孵育1h。
（6）弃上述抗体稀释液，每孔中加入200μL的PBST缓冲液倒掉液体，重复3-5次。每孔加入100μL羊抗兔二抗稀释液（1:7000），37°C温箱孵育1h。
（7）弃二抗稀释液，每孔中加入200μL的PBST缓冲液倒掉液体，重复3-5次。每孔加入100μL显色液，避光，37°C温箱孵育30min。
（8）每孔加入50μL的2moL/L浓硫酸终止反应，测定OD450。
结果如图7所述，pO2蛋白仅作用于O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌，具有高度特异性，对其它10株不同O-抗原的大肠杆菌，包括O1、O78、O91、O103、O111、O119、O145、O153、O159、O169和5种其它细菌（沙门氏菌ATCC 14028、阴沟肠杆菌AS 1.181、福氏志贺氏菌ATCC 12022、链球菌CVCC 3307和金黄色葡萄球菌ATCC 49775）没有作用。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (17)

1.一种噬菌体尾部纤维蛋白，其特征在于，所述噬菌体尾部纤维蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种复合物，其特征在于，包括：
权利要求1所述噬菌体尾部纤维蛋白；以及
标记物，所述标记物与所述噬菌体尾部纤维蛋白结合，用于标记所述噬菌体尾部纤维蛋白。
3.根据权利要求2所述的复合物，其特征在于，所述标记物包括：荧光指示物或者磁珠探针。
4.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述分离的核酸分子编码权利要求1所述噬菌体尾部纤维蛋白或者权利要求2所述复合物。
5.根据权利要求4所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述分离的核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
6.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求4或5所述分离的核酸分子。
7.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞中含有下列至少之一：权利要求1所述噬菌体尾部纤维蛋白、权利要求2或3所述复合物、权利要求4或5所述分离的核酸分子和权利要求6所述表达载体。
8.一种试剂盒，其特征在于，包括下列至少之一：权利要求1所述噬菌体尾部纤维蛋白、权利要求2或3所述复合物、权利要求4或5所述分离的核酸分子、权利要求6所述表达载体和权利要求7所述重组细胞。
9.一种药物，其特征在于，包括下列至少之一：
权利要求1所述噬菌体尾部纤维蛋白、权利要求2或3所述复合物、权利要求4或5所述分离的核酸分子、权利要求6所述表达载体和权利要求7所述重组细胞。
10.权利要求1所述噬菌体尾部纤维蛋白、权利要求2或3所述复合物、权利要求4或5所述分离的核酸分子、权利要求6所述表达载体、权利要求7所述重组细胞和权利要求8所述试剂盒中的至少一种在非诊断目的鉴定和/或富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌中的应用。
11.一种非诊断目的鉴定O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的方法，其特征在于，包括：
使权利要求1所述噬菌体尾部纤维蛋白与待测微生物接触；
基于所述噬菌体尾部纤维蛋白与所述待测微生物是否结合，确定所述待测微生物是否为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
12.根据权利要求11所述方法，其特征在于，所述噬菌体尾部纤维蛋白与待测微生物结合，则确定所述待测微生物为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌；
所述噬菌体尾部纤维蛋白不与待测微生物结合，则确定所述待测微生物不为O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌；
所述噬菌体尾部纤维蛋白是以权利要求2或3所述复合物的形式与待测微生物接触的，通过检测标记物以便确定所述噬菌体尾部纤维蛋白与所述待测微生物是否结合。
13.权利要求1所述噬菌体尾部纤维蛋白、权利要求2或3所述复合物、权利要求4或5所述分离的核酸分子、权利要求6所述表达载体和权利要求7所述重组细胞中的至少一种在制备试剂盒中的用途，其特征在于，所述试剂盒用于诊断因感染O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌所引发的疾病。
14.权利要求1所述噬菌体尾部纤维蛋白、权利要求2或3所述复合物、权利要求4或5所述分离的核酸分子、权利要求6所述表达载体和权利要求7所述重组细胞中的至少一种在制备药物中的用途，其特征在于，所述药物用于预防或治疗因感染O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌所引发的疾病。
15.根据权利要求13或14所述的用途，其特征在于，所述疾病选自呼吸道感染、卵黄囊感染、包心包肝、气囊炎、脑膜炎、尿路感染和/或新生儿脑膜炎。
16.一种富集O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌的方法，其特征在于，包括：
将待处理样品与权利要求2或3所述复合物接触，所述待测样品中的O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌可与所述复合物中的噬菌体尾部纤维蛋白相结合，所述复合物中的标记物选自磁珠探针；
通过磁力吸附所述磁珠探针，以便从所述待处理样品中富集出O2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌。
17.根据权利要求11、12、16中任一项所述的方法，其特征在于，所述接触时反应溶液的pH值为3~10，温度为4~42℃。
CN202310985753.1A 2023-08-07 2023-08-07 噬菌体尾部纤维蛋白在o2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴定中的应用 Active CN116715736B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310985753.1A CN116715736B (zh) 2023-08-07 2023-08-07 噬菌体尾部纤维蛋白在o2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴定中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310985753.1A CN116715736B (zh) 2023-08-07 2023-08-07 噬菌体尾部纤维蛋白在o2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴定中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116715736A true CN116715736A (zh) 2023-09-08
CN116715736B CN116715736B (zh) 2023-11-14

Family

ID=87868253

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310985753.1A Active CN116715736B (zh) 2023-08-07 2023-08-07 噬菌体尾部纤维蛋白在o2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴定中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116715736B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117024531A (zh) * 2023-10-10 2023-11-10 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 噬菌体靶向蛋白分子及其在鉴定o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌中的应用
CN118217315A (zh) * 2023-12-26 2024-06-21 青岛润达生物科技有限公司 一种大肠杆菌噬菌体包埋方法及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2113476C1 (ru) * 1996-03-29 1998-06-20 Государственный научный центр прикладной микробиологии Штамм бактериофага pseudomonas aeruginosa гнц пм n 02, используемый при изготовлении поливалентного лечебного препарата против синегнойной палочки
CN103305627A (zh) * 2013-07-16 2013-09-18 中国农业科学院上海兽医研究所 一种大肠杆菌o1、o2、o18、o78血清型检测试剂盒及其检测方法
CN113423824A (zh) * 2018-11-27 2021-09-21 艾力格生物科技有限公司 用于细菌递送媒介物中的嵌合受体结合蛋白
WO2021235876A1 (ko) * 2020-05-22 2021-11-25 주식회사 라이센텍 신규한 폴리펩타이드, 융합 폴리펩타이드, 및 이를 포함하는 그람음성균에 대한 항생제

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2113476C1 (ru) * 1996-03-29 1998-06-20 Государственный научный центр прикладной микробиологии Штамм бактериофага pseudomonas aeruginosa гнц пм n 02, используемый при изготовлении поливалентного лечебного препарата против синегнойной палочки
CN103305627A (zh) * 2013-07-16 2013-09-18 中国农业科学院上海兽医研究所 一种大肠杆菌o1、o2、o18、o78血清型检测试剂盒及其检测方法
CN113423824A (zh) * 2018-11-27 2021-09-21 艾力格生物科技有限公司 用于细菌递送媒介物中的嵌合受体结合蛋白
WO2021235876A1 (ko) * 2020-05-22 2021-11-25 주식회사 라이센텍 신규한 폴리펩타이드, 융합 폴리펩타이드, 및 이를 포함하는 그람음성균에 대한 항생제

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
高崧, 刘秀梵, 张如宽, 焦新安, 文其乙, 吴长新, 唐一鸣, 朱晓波, 李琮, 陈娟, 崔力兵, 崔洪平: "我国部分地区禽病原性大肠杆菌的分离与鉴定", 畜牧兽医学报, no. 02 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117024531A (zh) * 2023-10-10 2023-11-10 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 噬菌体靶向蛋白分子及其在鉴定o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌中的应用
CN117024531B (zh) * 2023-10-10 2023-12-12 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 噬菌体靶向蛋白分子及其在鉴定o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌中的应用
CN118217315A (zh) * 2023-12-26 2024-06-21 青岛润达生物科技有限公司 一种大肠杆菌噬菌体包埋方法及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN116715736B (zh) 2023-11-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN116715736B (zh) 噬菌体尾部纤维蛋白在o2抗原血清型的禽致病性大肠杆菌鉴定中的应用
JP2770877B2 (ja) ヘモフィラス・インフルエンザワクチン
CN1609617B (zh) 诊断与预防严重急性呼吸道综合症（sars）的组合物和方法
US9562901B2 (en) A25 bacteriophage lysin
CN101143216A (zh) 大肠杆菌TolC抗体靶向作用提高耐药菌对抗生素敏感性的技术
JPH10513349A (ja) 微生物蛋白質と、この蛋白質を産生する微生物と、該蛋白質のワクチンおよび結核検出での利用
CN103059109B (zh) 一种肺炎支原体抗原、制备方法以及免疫检测试剂盒
JPH11503006A (ja) カチオン性ペプチドの製造方法
CN116003531B (zh) 噬菌体受体结合蛋白po86在大肠杆菌o抗原血清型分型鉴定中的应用
Jiang et al. PagR mediates the precise regulation of Salmonella pathogenicity island 2 gene expression in response to magnesium and phosphate signals in Salmonella Typhimurium
Yang et al. Transcriptional activator GmrA, encoded in genomic island OI-29, controls the motility of enterohemorrhagic Escherichia coli O157: H7
CN108956985B (zh) 一种检测新型鹅星状病毒抗体的间接elisa检测试剂盒及应用
US20040071713A1 (en) Psedomonas aeruginosa antigens
US20230029322A1 (en) Tools and methods to detect and isolate colibactin producing bacteria
CN116445448B (zh) 鲍曼不动杆菌plpfp重组蛋白、制备方法及应用
CN111621506A (zh) 牛支原体分泌蛋白MbovP0145及其应用
JP2003512048A (ja) ヘリコバクターカタラーゼのｃ−末端部分を含むポリペプチド断片
Walia et al. Purification and characterization of novel toxin produced by Vibrio cholerae O1
JP2001522605A (ja) 病原菌のｔｉｒ遺伝子によってコードされる、病原菌の宿主の膜受容体、ｈｐ９０
CN112457409B (zh) 一种TLN-58和hLYZ基因融合蛋白及抗菌活性和应用
CN114989266A (zh) 一种非洲猪瘟病毒pA104R蛋白免疫抑制相关氨基酸位点及其应用
CN113462675A (zh) 一种ApuA蛋白抗原多肽及应用
CN116903710B (zh) 噬菌体靶向蛋白分子及其在鉴定o103抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌中的应用
CN108339111B (zh) Mg53蛋白的医药用途
CN117024531B (zh) 噬菌体靶向蛋白分子及其在鉴定o111抗原血清型的产志贺毒素大肠杆菌中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant