CN116686987A - 一种含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品及制备方法 - Google Patents
一种含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品及制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及一种含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品及制备方法，合生元保健食品含以下成分：益生元、益生菌和绿茶茶多酚类提取物，其中的益生元包含乳糖和异麦芽低聚糖中的一种或多种；益生菌包含鼠李糖杆菌GG、干酪乳杆菌YRL577中的一种或多种，益生菌菌种还经过培养扩增；绿茶茶多酚类提取物是通过将绿茶叶进行提取分离制得，其成分含没食子酸酯(EGCG)、表儿茶酚没食子酸(ECG)、没食子酸(EGC)、表儿茶酸(EC)中的一种或多种。本发明提供的含茶多酚类提取物的合生元保健食品能够有效改善高血脂症状，能够调节肠道菌群，帮助缓解不同的肝脏炎症与损伤，改善身体健康。
Description
技术领域
本发明涉及保健食品领域，具体而言，涉及一种含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品及制备方法。
背景技术
合生元保健食品是一类具有调节人体生理功能、预防疾病以及促进身体健康的保健食品。其中常见的主要成分包括益生菌和益生元，这些成分在保证食品安全的前提下，可以为人体提供必需的营养物质，增强免疫力，改善肠道菌群平衡，有助于预防和改善多种疾病。而将天然植物提取物与益生元发酵液混合，是一种常用的保健食品研发思路。茶提取物作为一种具有多种生物活性的天然化合物，可以与合生元中的其他成分协同作用，提高保健食品的功效。而绿茶提取物较其他茶而言，所含的茶多酚类化合物如茶多酚、表茶多酚等含量更高。这些茶多酚类化合物具有降血脂、调控肠道菌群和保护肠道组织等作用，可用于开发功能性食品和保健食品。
但是，由于绿茶提取物中茶多酚类化合物含量还是较低，生物利用度差，不适合直接食用，需提高活性。目前还未见到以高活性绿茶茶多酚类提取物和合生元为主要原料的保健食品。
发明内容
本发明的一种目的：为了克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种含绿茶茶多酚
类提取物的合生元保健食品。
本发明的技术方案：一种含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，含以下成分：益生元、益生菌和绿茶茶多酚类提取物，其中的益生元包含乳糖和异麦芽低聚糖中的一种或多种；
益生菌包含鼠李糖杆菌GG、干酪乳杆菌YRL577中的一种或多种，益生菌菌种还经过培养扩增；
绿茶茶多酚类提取物是通过将绿茶叶进行提取分离制得，其成分含没食子酸酯(EGCG)、表儿茶酚没食子酸(ECG)、没食子酸(EGC)、表儿茶酸(EC)中的一种或多种。
优选的，绿茶选用高山绿茶。
优选的，提取分离技术为乙醇浸泡法和树脂吸附法中的一种或多种。
优选的，益生菌菌种的活菌数在109-1012CFU/mL。
优选的，含以下百分比成分：益生元45-60％、益生菌25-35％、绿茶茶多酚类提取物6-8％。
具体百分比成分如下：
益生元：乳糖30-40％、异麦芽低聚糖15-20％，其中10-20％的乳糖用作益生菌保护剂；
益生菌：鼠李糖乳杆菌GG 15-20％、干酪乳杆菌YRL57710-15％；
绿茶茶多酚类提取物：没食子酸酯(EGCG)2-3％、表儿茶酚没食子酸(ECG)1-1.5％、没食子酸(EGC)1.5-2.5％、表儿茶酸(EC)1.5-2.5％。
优选的，含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，其成分中还包含崩解剂和润滑剂，所述的崩解剂为羟丙基甲基纤维素，润滑剂为硬脂酸镁。
优选的，该合生元保健食品以液体饮料、粉末冲剂或胶囊制成口服形式。
本发明的另一种目的：为了克服现有技术的缺陷，本发明提供了一种含绿茶茶多
酚类提取物的合生元保健食品的制备方法。
本发明的技术方案：一种含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品的制备方法，包括步骤S、T以及U，
步骤S为绿茶茶多酚类提取物制备：选用新鲜的高山绿茶叶为原料,并采取乙醇浸泡法或树脂吸附法的提取分离技术,制备出绿茶茶多酚类提取物；
步骤T为益生菌冻干粉制备：将益生菌单菌培养物在培养基中培养到对数生长期，然后通过离心等方式收集益生菌单菌；将收集到的益生菌单菌悬浮液进行冻干处理，并通过研磨器等设备进行粉碎处理，得到均匀的益生菌粉末，菌种的活菌数在109-1012CFU/mL；
步骤U为茶多酚类提取物的合生元保健食品的制备：先将步骤S制备的绿茶茶多酚类提取物与益生元混合后，湿法制粒后磨成粉末，而后与益生菌冻干粉混均，以液体饮料、粉末冲剂或胶囊形式制备出合生元保健食品。
优选的，具体制备步骤如下，
步骤S(绿茶茶多酚类提取物制备)：
S1.将绿茶茶叶粉末按1g:10-50ml的比例溶解在浓度为60-100％乙醇中；
S2.在提取温度为60-100℃、提取超声波功率为40-80％(100-200W)下，超声波提取20-60min；
S3.用细胞筛过滤后得到上部茶溶解液，旋转蒸发后得到绿茶初提取物；
S4.将绿茶初提取物按照1g:1ml溶解于蒸馏水中，以1～1.5BV/h的流速通过食用乙醇作为平衡液的树脂柱，收集乙醇-水溶液；
S5.将乙醇-水溶液通过旋转蒸发浓缩和干燥，得到绿茶茶多酚类提取物粉末；
步骤T(益生菌冻干粉制备)：
T1.单菌培养与洗涤悬浮：分别将鼠李糖乳杆菌GG和干酪乳杆菌YRL577的单菌株(活菌数＞109CFU/m)接种到MRS液体培养基中(pH6.5-7)，于37-39℃厌氧培养箱内，160-180rpm条件下培养18-20h，接着以1.5-2％(v/v)接种量扩增培养24-26h后，4000-5000rpm，4-8℃离心15-30min收集菌体；
T2.将收集的益生菌用无菌生理盐水洗涤然后将益生菌悬浮在适量的生理盐水中，以去除未被利用的培养基成分；
T3.添加10％-20％的乳糖；
T4冻干：将含有鼠李糖乳杆菌GG的悬浮液及干酪乳杆菌YRL577的悬浮液分布额分装到容器中，然后将其放入-80～-100℃下冻结，将冻结的细菌悬浮液放入冻干机中，设置主真空度0.1-0.5mbar，冷凝器温度-50℃-80℃，冻干时间48-50h；
T5粉碎：通过研磨器等设备进行粉碎处理，得到均匀的益生菌粉末；
步骤U(茶多酚类提取物的合生元保健食品的制备)：
U1.将6-8％的绿茶茶多酚类提取物与益生元：乳糖、15-20％异麦芽低聚糖投入沸腾制粒器中充分混匀15-20min，以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度60-100℃，出风温度30-50℃，定时检测水分直至含水量在2-3％后磨成粉末；
U2.加入3-5％的羟丙基甲基纤维素和0.1-1％的硬脂酸镁，并在多向运动混合机中充分混匀；
U3.加入20％鼠李糖乳杆菌GG冻干粉和10％干酪乳杆菌YRL577冻干粉混匀，以液体饮料、粉末冲剂或胶囊形式制备出合生元保健食品。
本发明制备出的含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品功效说明如下：
乳糖是一种可溶性纤维素，无法自行合成乳糖加水解酶分解乳糖。鼠李糖乳杆菌GG产生的β-乳糖水解酶和干酪乳杆菌YRL577产生的α-乳糖水解酶可以将乳糖水解为葡萄糖和半乳糖酸,从而利用乳糖作为碳和能量来源，为其生长繁殖提供能量。
异麦芽低聚糖是多糖分子,是鼠李糖乳杆菌GG和干酪乳杆菌YRL577的优选能量来源,可为其提供丰富的碳和能量来源，提高这两种益生菌在肠道中的数量。同时鼠李糖乳杆菌GG和干酪乳杆菌YRL577可以发酵异麦芽低聚糖,产生短链脂肪酸,如乙酸和丙酸等,维持肠道微生态平衡。异麦芽低聚糖、鼠李糖乳杆菌GG和干酪乳杆菌YRL577可以相互促进,组成一个益生元网络,共同发挥益生健康作用。
鼠李糖乳杆菌GG和干酪乳杆菌YRL577在降低血脂，促进肠道黏膜免疫细胞的增殖，调节肠道菌群的组成方面有着重要作用。鼠李糖乳杆菌GG还可调节肝脏炎症反应，减轻肝病症状，降低肝功能损害的程度。剂量分散在两种益生菌上,相比单一大剂量的益生菌,副作用风险会更小,更安全。同时服用不同的菌种可以促进肠道微生物多样性，产生更广泛的益生效果,如降血脂、控制肝脏炎症等作用。
茶多酚类具有抗氧化和降低胆固醇水平功能，能够清除自由基，减缓细胞老化，增强免疫力，有助于保护人体健康。根据不同茶的发酵方式，以绿茶中的茶多酚类含量最高，大约占9％-13％。茶多酚和益生菌同时使用可以产生协同降脂、维持肠道健康效应。同时，茶多酚可以刺激益生菌的生长,而益生菌代谢产物也有利于茶多酚的吸收利用,所以同时使用可以产生相互促进的作用。
崩解剂(羟丙基甲基纤维素)可以改善食品的粘稠度、稳定性、口感和质地；润滑剂(硬脂酸镁)被用于降低食品的黏性和摩擦，以便更容易地进行加工、混合和包装。
本发明提供的含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，茶多酚类提取物高活性高、各组分原料相互配合，协同增效，使产品具有改善炎症，降低血脂水平，同时也对肠道菌群紊乱与肠道屏障损伤有治疗调节的作用，具有优异的保健养生效果。
附图说明
图1为不同提取条件下的制备例茶多酚提取率图；
图2为不同绿茶来源的制备例茶多酚提取率图；
图3为不同成分配比的合生元治疗下各组脂肪性肝炎小鼠血清谷丙转氨酶水图；
图4为不同成分配比的合生元治疗下各组脂肪性肝炎小鼠血清甘油三酯水平图；
图5为不同成分配比的合生元治疗下各组自身免疫性肝炎小鼠血清谷丙转氨酶水平图；
图6为合生元添加茶多酚类提取物后脂肪性肝炎小鼠血清转氨酶及甘油三酯水平图；
图7为合生元添加茶多酚类提取物后脂肪性肝炎小鼠肝脏伊红-苏木素染色和油红O染色图；
图8为合生元添加茶多酚类提取物后自身免疫性小鼠血清转氨酶水平及肝脏伊红-苏木素染色图；
图9为不同制备条件下的制备例DPPH自由基清除率图；
图10为合生元添加儿茶素类提取物后自身免疫性小鼠肠道菌群分布图。
具体实施方式
下面结合附图和实施方案，对本发明进行进一步详细说明：
一、含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品的制备方法，步骤S(绿茶茶多酚类提取物制备)：
S1.将绿茶茶叶粉末按1g:10-50ml的比例溶解在浓度为60-100％乙醇中；
S2.在提取温度为60-100℃、提取超声波功率为40-80％(100-200W)下，超声波提取20-60min；
S3.用细胞筛过滤后得到上部茶溶解液，旋转蒸发后得到绿茶初提取物；
S4.将绿茶初提取物按照1g:1ml溶解于蒸馏水中，以1～1.5BV/h的流速通过食用乙醇作为平衡液的树脂柱，收集乙醇-水溶液；
S5.将乙醇-水溶液通过旋转蒸发浓缩和干燥，得到绿茶茶多酚类提取物粉末；
步骤T(益生菌冻干粉制备)：
T1.单菌培养与洗涤悬浮：分别将鼠李糖乳杆菌GG和干酪乳杆菌YRL577的单菌株(活菌数＞109CFU/m)接种到MRS液体培养基中(pH6.5-7)，于37-39℃厌氧培养箱内，160-180rpm条件下培养18-20h，接着以1.5-2％(v/v)接种量扩增培养24-26h后，4000-5000rpm，4-8℃离心15-30min收集菌体；
T2.将收集的益生菌用无菌生理盐水洗涤然后将益生菌悬浮在适量的生理盐水中，以去除未被利用的培养基成分；
T3.添加10％-20％的乳糖；
T4冻干：将含有鼠李糖乳杆菌GG的悬浮液及干酪乳杆菌YRL577的悬浮液分布额分装到容器中，然后将其放入-80～-100℃下冻结，将冻结的细菌悬浮液放入冻干机中，设置主真空度0.1-0.5mbar，冷凝器温度-50℃-80℃，冻干时间48-50h；
T5粉碎：通过研磨器等设备进行粉碎处理，得到均匀的益生菌粉末；
步骤U(茶多酚类提取物的合生元保健食品的制备)：
U1.将6-8％的绿茶茶多酚类提取物与益生元：乳糖、15-20％异麦芽低聚糖投入沸腾制粒器中充分混匀15-20min，以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度60-100℃，出风温度30-50℃，定时检测水分直至含水量在2-3％后磨成粉末；
U2.加入3-5％的羟丙基甲基纤维素和0.1-1％的硬脂酸镁，并在多向运动混合机中充分混匀；
U3.加入20％鼠李糖乳杆菌GG冻干粉和10％干酪乳杆菌YRL577冻干粉混匀，以液体饮料、粉末冲剂或胶囊形式制备出合生元保健食品。
1.1、绿茶茶多酚类提取物制备(共有制备例25项)
其中的制备例1绿茶茶多酚类提取物，按照如下步骤制得：
S1.将西湖龙井(绿茶)茶叶粉末按1g:20ml的比例溶解在70％乙醇中；
S2.在提取温度为80℃、提取超声波功率为60％(150W)下，超声波提取30min；
S3.用细胞筛过滤后得到上部茶溶解液，旋转蒸发后得到绿茶初提取物；
S4.将初提取物按照1g:1ml溶解于蒸馏水中，以1～1.5BV/h的流速通过食用乙醇作为平衡液的树脂柱，收集乙醇-水溶液；
S5.将乙醇-水溶液通过旋转蒸发浓缩和干燥得到绿茶提取粉末。
其中的制备例2-21绿茶茶多酚类提取物，与制备例1的区别点在于，制备例2-5的提取乙醇浓度不同，制备例6-9的提取液料比不同，制备例10-13的提取温度不同，制备例的14-17提取功率不同，制备例18-21的提取时间不同，具体参数如下表1所示。
表1.茶多酚类提取物正交试验因素水平表
| 乙醇浓度 | 液料比 | 提取温度 | 提取功率 | 提取时间 |
| 60％ | 1g:10ml | 60℃ | 40％(100W) | 20min |
| 70％ | 1g:20ml | 70℃ | 50％(125W) | 30min |
| 80％ | 1g:30ml | 80℃ | 60％(150W) | 40min |
| 90％ | 1g:40ml | 90℃ | 70％(175W) | 50min |
| 100％ | 1g:50ml | 100℃ | 80％(200W) | 60min |
称取1克试样溶于25mL蒸馏水中,注入25mL容量瓶，加4mL蒸馏水和5mL酒石酸亚铁溶液,混合后加磷酸盐缓冲液定容。用10mm比色皿在540nm处测吸光度A。以试剂空白为参比。实验样品测出的茶多酚含量占GB/T 8313-2002规定的茶叶总茶多酚含量的百分比,为茶多酚提取率。结果如图1所示，采用制备例1的方法茶多酚提取率最高。
其中的制备例22-25绿茶茶多酚类提取物，与制备例1的区别点在于绿茶种类不同。制备例22选取铁观音，制备例23选取长叶量光绿茶、制备例24选取黄山毛峰绿茶、制备例25选取金骏眉绿茶。如图2所示，采用制备例1的方法提取不同种类绿茶茶多酚的效率相近。
通过紫外分光光度法测定制备例1茶多酚类提取物中茶酚类的含量，结果见表2。
表2.茶多酚类提取物的茶素和茶素含量
| 项目 | 英文简写 | 含量 |
| 茶多酚类(％) | 0.64±0.05 | |
| 儿茶酸(mg/L) | C | 318.35±8.37 |
| 表儿茶酸(mg/L) | EC | 455.22±5.41 |
| 没食子酸(mg/L) | EGC | 489.29±10.11 |
| 表儿茶酚没食子酸(mg/L) | ECG | 420.32±12.72 |
| 没食子酸酯(mg/L) | EGCG | 1090.23±28.46 |
1.2、益生菌冻干粉制备：
T1.单菌培养与洗涤悬浮：分别将鼠李糖乳杆菌GG和干酪乳杆菌YRL577的单菌株(活菌数＞109CFU/m)接种到MRS液体培养基中(pH6.5)，于37℃厌氧培养箱内，160rpm条件下培养18h，接着以1.5％(v/v)接种量扩增培养24h后，4000rpm，4℃离心15min收集菌体；
T2.将收集的益生菌用无菌生理盐水洗涤1-2次，然后将益生菌悬浮在适量的生理盐水中，以去除未被利用的培养基成分，提高冻干粉的纯度；
T3.为了在冻干过程中保护细菌细胞，需要添加适量的乳糖，乳糖的最终浓度在10％-20％；
T4.冻干：将含有鼠李糖乳杆菌GG的悬浮液及干酪乳杆菌YRL577的悬浮液分布额分装到适当的容器中(如冻干管)，然后将其放入-80℃的超低温冷冻库中进行快速冷冻至完全冻结，将冻结的细菌悬浮液放入冻干机中，设置主真空度0.1-0.5mbar，冷凝器温度-50℃至-80℃，冻干时间48小时。冻干完成后，立即将冻干管密封并储存在4℃、避光的环境中；
T5粉碎：通过研磨器等设备进行粉碎处理，得到均匀的益生菌粉末。
1.3、含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品的制备不同配比的合生元对脂肪性肝炎、自身免疫性肝炎的疗效对比
实验例1乳糖35％,异麦芽低聚糖17％,鼠李糖乳杆菌GG 17％,干酪乳杆菌YRL57713％。
实验例2异麦芽低聚糖17％,鼠李糖乳杆菌GG 17％,干酪乳杆菌YRL57713％。
实验例3乳糖40％,异麦芽低聚糖17％,鼠李糖乳杆菌GG 17％,干酪乳杆菌YRL57713％。
实验例4乳糖30％,异麦芽低聚糖17％,鼠李糖乳杆菌GG 17％,干酪乳杆菌YRL57713％。
实验例5乳糖35％,鼠李糖乳杆菌GG 17％,干酪乳杆菌YRL57713％。实验例6乳糖35％,异麦芽低聚糖15％,鼠李糖乳杆菌GG 17％,干酪乳杆菌YRL57713％。
实验例7乳糖35％,异麦芽低聚糖20％,鼠李糖乳杆菌GG 17％,干酪乳杆菌YRL57713％。
实验例8乳糖35％,异麦芽低聚糖17％,干酪乳杆菌YRL57713％。
实验例9乳糖35％,异麦芽低聚糖17％,鼠李糖乳杆菌GG 15％,干酪乳杆菌YRL57713％。
实验例10乳糖35％,异麦芽低聚糖17％,鼠李糖乳杆菌GG 20％,干酪乳杆菌YRL57713％。
实验例11乳糖35％,异麦芽低聚糖17％,鼠李糖乳杆菌GG 17％。
实验例12乳糖35％,异麦芽低聚糖17％,鼠李糖乳杆菌GG 17％,干酪乳杆菌YRL57710％。
实验例13乳糖35％,异麦芽低聚糖17％,鼠李糖乳杆菌GG 17％,干酪乳杆菌YRL57715％。
实验例14乳糖40％,异麦芽低聚糖20％,鼠李糖乳杆菌GG 20％,干酪乳杆菌YRL57715％。
实验例15乳糖30％,异麦芽低聚糖15％,鼠李糖乳杆菌GG 15％,干酪乳杆菌YRL57710％。
按照以上配比制备实验例1-15，用于治疗高脂饮食诱导的脂肪性肝炎与S100蛋白诱导的自身免疫性肝炎小鼠模型。
用于脂肪性肝炎试验
1组，对照组：小鼠普通饲料喂养至第12周。从第12周起，灌胃灭菌生理盐水1ml，隔天1次，喂养至16周。
2组，脂肪性肝炎模型组：小鼠高脂饲料喂养至第12周造成脂肪性肝炎模型。从第12周起，灌胃灭菌生理盐水1ml，隔天1次，喂养至16周。
3-17，合生元治疗组：小鼠高脂饲料喂养至第12周。从第12周开始，在高脂饮食的基础上分别加入实验例1-15治疗，每只小鼠的灌胃量为1ml，隔天1次，喂养至16周。
分别检测1-17组小鼠血清谷丙转氨酶水平(图3)和甘油三酯含量(图4)，脂肪性肝炎小鼠血清转氨酶和甘油三酯水平明显升高，而经过治疗后，血清转氨酶和甘油三酯含量均有下降，表明脂肪肝肝损伤减轻，脂质沉积得到了改善。其中实验例1、14、15治疗后脂肪性肝炎小鼠血清转氨酶和甘油三酯水平的下降最明显。
用于自身免疫性肝炎肝损伤试验
18组，对照组：小鼠在第1天和第7天腹腔注射1ml生理盐水。从第1天起，灌胃灭菌生理盐水1ml，隔天1次，喂养至4周。
19组，自身免疫性肝炎模型组：取下同批次小鼠肝脏在干净的预冷PBS中冲洗干净后，剪成小块，并在冰上充分匀浆。在150g 4℃下离心10分钟去除细胞核后，收集上清液至超速离心管，100000g离心1小时，得到的上清液为S100。上清液经Amicon Ultra-15过滤器浓缩后，用平衡好的90cm CL-6B Sepharose柱分离蛋白,收集减毒的第1峰的蛋白。将新鲜制备的第一峰的同基因S100抗原以1mg/mL的浓度乳化于等体积的完全弗氏佐剂中，充分搅拌混匀后备用。分别于第1天和第7天腹腔注射1ml混合液于小鼠。从第1天起，灌胃灭菌生理盐水1ml，隔天1次，喂养至4周。
20-34组，合生元治疗组：小鼠高脂饲料喂养至第12周。从第12周开始，在高脂饮食的基础上分别加入实验例1-15治疗，每只小鼠的灌胃量为1ml，隔天1次，喂养至4周。
分别检测18-34组小鼠血清谷丙转氨酶水平(图5)，自身免疫性肝炎小鼠血清转氨酶明显升高，而经过治疗后，各组血清转氨酶均有下降，其中以20、33、34组的下降最为明显，表明实验例1、14、15治疗对减轻自身免疫性肝炎肝损伤更有效。
合生元添加茶多酚类提取物后对脂肪性肝炎的疗效对比
将20只10周龄的健康雄性C57BL/6小鼠随机均分为以下4组：
1组，对照组：小鼠普通饲料喂养至第12周。从第12周起，灌胃灭菌生理盐水1ml，隔天1次，喂养至16周。
2组，脂肪性肝炎模型组：小鼠高脂饲料喂养至第12周造成脂肪性肝炎模型。从第12周起，灌胃灭菌生理盐水1ml，隔天1次，喂养至16周。
3组，合生元治疗组：小鼠高脂饲料喂养至第12周。从第12周开始，在高脂饮食的基础上加入实验例1合生元治疗，每只小鼠的灌胃量为1ml，隔天1次，喂养至16周。
4组，合生元联合茶多酚类提取物组：小鼠高脂饲料喂养至第12周。从第12周开始，在高脂饮食的基础上，予以溶有200mg/kg体重的茶多酚类提取物的实验例1合生元液体1ml治疗，隔天1次，喂养至16周。
分别检测各组小鼠血清转氨酶水平和甘油三酯含量(图6)，脂肪性肝炎小鼠血清转氨酶和甘油三酯水平明显升高，而经过治疗后，血清转氨酶和甘油三酯含量均有下降，尤其以后生元联合茶多酚类提取物组降脂效果最为明显。
用油红和伊红-苏木素染色肝脏(图7)，发现脂肪性肝炎模型组小鼠肝小叶正常结构破坏，汇管区大量炎性细胞浸润，肝细胞肿胀，胞质疏松，多数胞内空泡为小泡性脂肪变性；经过治疗后，肝内炎症与小泡性脂肪变性减轻。
合生元添加茶多酚类提取物后对自身免疫性肝炎的疗效对比将20只10周龄的健康雄性C57BL/6小鼠随机均分为以下4组：
1组，对照组：小鼠在第1天和第7天腹腔注射1ml生理盐水。从第1天起，灌胃灭菌生理盐水1ml，隔天1次，喂养至4周。
2组，自身免疫性肝炎模型组：小鼠在第1天和第7天腹腔注射1ml S100-完全弗氏佐剂混合液。从第1天起，灌胃灭菌生理盐水1ml，隔天1次，喂养至4周。
3组，合生元治疗组：小鼠在第1天和第7天腹腔注射1ml S100-完全弗氏佐剂混合液。从第1天起，灌胃实验例1合生元溶液1ml，隔天1次，喂养至4周。
4组，合生元联合茶多酚类提取物组：小鼠在第1天和第7天腹腔注射1ml S100-完全弗氏佐剂混合液。从第1天起，灌胃溶有200mg/kg体重的茶多酚类提取物的实验例1合生元溶液1ml，隔天1次，喂养至4周。
分别检测各组小鼠血清转氨酶水平并用油红和伊红-苏木素染色肝脏(图8)，发现与对照组相比，腹腔注射S100的小鼠血清ALT、AST和IgG水平明显高于对照组，肝脏病理改变表现为界面性肝炎、点灶状坏死、淋巴细胞和浆细胞浸润。而经过治疗后，血清转氨酶和免疫球蛋白G含量均有下降，肝脏炎症浸润减轻，尤其以后生元联合茶多酚类提取物组降脂效果最为明显。
上述实施例证明了乳糖30-40％，异麦芽低聚糖15-20％，鼠李糖乳杆菌GG 15-20％，干酪乳杆菌YRL57710-15％，茶多酚提取物6-8％具有良好的改善肝脏炎症、降低血脂水平的功能。
茶多酚类提取物与合生元保健食品的混合与制备制备例1:将2-3份乳糖、1.5-2份异麦芽低聚糖、0.6-0.8份茶多酚类提取物投入沸腾制粒器中充分混匀10分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度80℃，出风温度40℃，停止喷雾并干燥每小时检测水分，直至含水量在2-3％。
制备例2:与实施例1相同,但进风温度改为60℃,其他参数不变。制备例3:与实施例1相同,但进风温度改为100℃,其他参数不变。制备例4:与实施例1相同,但出风温度改为30℃,其他参数不变。
制备例5:与实施例1相同,但出风温度改为50℃,其他参数不变。制备例6:与实施例1相同,但混匀时间改为5分钟,其他参数不变。制备例7:与实施例1相同,但混匀时间改为20分钟,其他参数不变。
称取制备例1-7分别配制成2.5mg/mL溶液，再依次稀释为0.5、1.0、1.5、2.0mg/mL，随后再分别放进0.004％DPPH配制的甲醇溶液3mL，摇匀，遮光搁置20min，选用甲醇液为空白比对液，在517nm处检测吸光度值，选用蒸馏水为阴性比对液，选用VC溶液为阳性比对液，计算DPPH自由基清除率。如图9所示，制备例1较其他制备例而言有更高的DPPH自由基清除率，代表着制备例1中茶多酚的活性更高。
向所得颗粒加入0.3-0.5份崩解剂(羟丙基甲基纤维素)和0.01-0.1份润滑剂(硬脂酸镁)在多向运动混合机中充分混匀，得到粉末与2份鼠李糖乳杆菌GG冻干粉和1份干酪乳杆菌YRL577冻干粉混匀，制备成包含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品。
病例实验
经口动物毒理实验
将40只体重18～20g小鼠按体重随机分为对照组和测试组，20只/组，雌雄各半。禁食不禁水6小时后按小鼠按照5000mg/kg体重灌胃给予包含绿茶茶多酚类提取物的合生元粉末一次。对照组给与等量未处理的纯净水灌胃。灌胃后,观察并记录中毒作用体征出现和消失时间和死亡时间。观察期为14天。观察期内中毒死亡以及观察满期处死的动物均应进行大体解剖,肉眼观察,如发现组织或脏器出现异常,进一步组织病理学检查。同时分别在灌胃第0、1、3、7、14天称重并记录。动物在给予包含绿茶茶多酚类提取物的合生元粉末期间及14天观察期内均未见异常症状,体重增长,未见动物死亡。测试结束所有动物大体解剖,肉眼观察未见异常。具体体重变化见表2，在测试条件下,送检的样品对KM小鼠的急性经口毒性LD50>5000mg/kg体重,送检样品的经口毒性分级为微毒(实际无毒)级。
表3.包含绿茶茶多酚类提取物的合生元粉末经口毒理实验
合生元添加茶多酚类提取物后对自身免疫性肝炎肠道菌群分布的影响对比
如图10所示，对照组相比，自身免疫性肝炎小鼠肠道菌群Chao1丰富度值显著减少，而经过治疗后，Chao1丰富度值显著增加。同时，合生元联合茶多酚类提取物的治疗上调了乳杆菌属的比例，降低了肠球菌属的比例。
通过观察结果可知，本发明提供的含茶多酚类提取物的合生元保健食品能够有效改善高血脂症状，能够调节肠道菌群，帮助缓解不同的肝脏炎症与损伤，改善身体健康。
综上所述，本发明实施例提供的含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，该食品包含乳糖30-40％(其中10-20％作为益生菌保护剂)，异麦芽低聚糖15-20％，鼠李糖乳杆菌GG 15-20％，干酪乳杆菌YRL57710-15％，茶素提取物6-8％，各组分原料相互配合，协同增效，使产品具有改善炎症，降低血脂水平，同时也对肠道菌群紊乱与肠道屏障损伤有治疗调节的作用，具有优异的保健养生效果。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
Claims (9)
1.一种含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，含以下成分：益生元、益生菌和绿茶茶多酚类提取物，
其中的益生元包含乳糖和异麦芽低聚糖中的一种或多种，部分乳糖用作益生菌保护剂；
益生菌包含鼠李糖杆菌GG、干酪乳杆菌YRL577中的一种或多种，益生菌菌种还经过培养扩增；
绿茶茶多酚类提取物通过将绿茶叶进行提取分离制得，其成分含没食子酸酯(EGCG)、表儿茶酚没食子酸(ECG)、没食子酸(EGC)、表儿茶酸(EC)中的一种或多种。
2.根据权利要求1所述含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，绿茶选用高山绿茶。
3.根据权利要求1所述含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，提取分离技术为乙醇浸泡法和树脂吸附法中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，益生菌菌种的活菌数在109-1012CFU/mL。
5.根据权利要求1所述含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，含以下百分比成分：益生元45-60％、益生菌25-35％、绿茶茶多酚类提取物6-8％。
6.根据权利要求5所述含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，具体百分比成分如下：
益生元：乳糖30-40％、异麦芽低聚糖15-20％，其中10-20％的乳糖用作益生菌保护剂；
益生菌：鼠李糖乳杆菌GG 15-20％、干酪乳杆菌YRL57710-15％；
绿茶茶多酚类提取物：没食子酸酯(EGCG)2-3％、表儿茶酚没食子酸(ECG)1-1.5％、没食子酸(EGC)1.5-2.5％、表儿茶酸(EC)1.5-2.5％。
7.根据权利要求1-6任意项所述含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品，其成分中还包含崩解剂和润滑剂，所述的崩解剂为羟丙基甲基纤维素，润滑剂为硬脂酸镁。
8.一种上述权利要求1-7任意项含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品的制备方法，包括步骤S、T以及U，
步骤S为绿茶茶多酚类提取物制备：选用新鲜的高山绿茶叶为原料,并采取乙醇浸泡法或树脂吸附法的提取分离技术,制备出绿茶茶多酚类提取物；
步骤T为益生菌冻干粉制备：将益生菌单菌培养物在培养基中培养到对数生长期，然后通过离心等方式收集益生菌单菌；将收集到的益生菌单菌悬浮液进行冻干处理，并通过研磨器等设备进行粉碎处理，得到均匀的益生菌粉末，菌种的活菌数在109-1012CFU/mL；
步骤U为茶多酚类提取物的合生元保健食品的制备：先将步骤S制备的绿茶茶多酚类提取物与益生元混合后，湿法制粒后磨成粉末，而后与益生菌冻干粉混均，再制备成包含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品。
9.根据权利要求8所述含绿茶茶多酚类提取物的合生元保健食品的制备方法，
步骤S(绿茶茶多酚类提取物制备)：
S1.将绿茶茶叶粉末按1g:10-50ml的比例溶解在浓度为60-100％乙醇中；
S2.在提取温度为60-100℃、提取超声波功率为40-80％(100-200W)下，超声波提取20-60min；
S3.用细胞筛过滤后得到上部茶溶解液，旋转蒸发后得到绿茶初提取物；
S4.将绿茶初提取物按照1g:1ml溶解于蒸馏水中，以1～1.5BV/h的流速通过食用乙醇作为平衡液的树脂柱，收集乙醇-水溶液；
S5.将乙醇-水溶液通过旋转蒸发浓缩和干燥，得到绿茶茶多酚类提取物粉末；
步骤T(益生菌冻干粉制备)：
T1.单菌培养与洗涤悬浮：分别将鼠李糖乳杆菌GG和干酪乳杆菌YRL577的单菌株(活菌数＞109CFU/m)接种到MRS液体培养基中(pH6.5-7)，于37-39℃厌氧培养箱内，160-180rpm条件下培养18-20h，接着以1.5-2％(v/v)接种量扩增培养24-26h后，4000-5000rpm，4-8℃离心15-30min收集菌体；
T2.将收集的益生菌用无菌生理盐水洗涤,然后将益生菌悬浮在适量的生理盐水中，以去除未被利用的培养基成分；
T3.添加10％-20％的乳糖；
T4冻干：将含有鼠李糖乳杆菌GG的悬浮液及干酪乳杆菌YRL577的悬浮液分布额分装到容器中，然后将其放入-80～-100℃下冻结，将冻结的细菌悬浮液放入冻干机中，设置主真空度0.1-0.5mbar，冷凝器温度-50℃-80℃，冻干时间48-50h；
T5粉碎：通过研磨器等设备进行粉碎处理，得到均匀的益生菌粉末；
步骤U(茶多酚类提取物的合生元保健食品的制备)：
U1.将6-8％的绿茶茶多酚类提取物与益生元：乳糖、15-20％异麦芽低聚糖投入沸腾制粒器中充分混匀15-20min，以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度60-100℃，出风温度30-50℃，定时检测水分直至含水量在2-3％后磨成粉末；
U2.加入3-5％的羟丙基甲基纤维素和0.1-1％的硬脂酸镁，并在多向运动混合机中充分混匀；
U3.加入20％鼠李糖乳杆菌GG冻干粉和10％干酪乳杆菌YRL577冻干粉混匀，以液体饮料、粉末冲剂或胶囊形式制备出合生元保健食品。
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