CN116669771A - 用于隔离患者体内不需要的抗peg抗体的化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种化合物，用于隔离患者体内不想要的抗聚乙二醇(PEG)抗体，这些抗体干扰由聚乙二醇活化剂(如PEG化的酶或抗体)进行的疗法。该化合物包含惰性生物聚合物支架和一条或多条PEG链。还提供了包含该化合物的药物组合物，以及隔离存在于个体中的一种或多种抗PEG抗体的方法和抑制对用PEG化活化剂进行的治疗的免疫反应的方法。

Description

用于隔离患者体内不需要的抗PEG抗体的化合物
发明领域
本发明的领域涉及用于隔离个体中不需要的抗聚乙二醇(抗PEG)抗体的化合物。
背景技术
PEG是一种多功能、高灵活度的亲水性聚合物，由重复的乙二醇聚醚亚基组成，可用于许多不同的产品和应用。PEG广泛用在化妆品行业中，用于基于脂质体和基于纳米颗粒的产品以及用于广泛多种生物应用。它还广泛用于医药领域，例如作为泻药，用于结肠镜检查或作为药物产品的赋形剂和增溶剂。
最近，PEG也被证明是一种非常有用的化学实体，能对现代生物制药产品进行功能修饰：PEG可以共价连接到药物上(“PEG化”)，从而改变其药理学和制剂特性。PEG化改变了数个生物学、药理学和生物物理学参数，包括稳定性、代谢、溶解度、吸附、药代动力学和药物分布。PEG化还用于掩蔽药物以避免体液和细胞免疫原性，这对于含有非人类氨基酸序列的大分子蛋白药物尤为重要。PEG还用于控制释放和减少药物注射量。
尽管PEG本身是一种非免疫原性、耐受性良好的化学实体，但已知工业化世界中相当一部分人口携带短暂或持久的抗PEG抗体(Garay等2012；Yang等2012；Lubich等2016)。抗PEG抗体不仅存在于接受过PEG化药物治疗的患者中，而且在高达25％的健康献血者中也存在，而20年前这一比例为0.2％(Armstrong综述2009)。观察到的人群中抗PEG抗体的增加可能部分归因于分析方法的改进，从而扭曲了我们的观点(Yang等2016)，但PEG的广泛暴露以及含有PEG的治疗性化合物和疫苗，在化妆品、加工食品或不明来源中的贡献仍有待确定。
抗PEG抗体可以是不同的同种型(主要是IgM和IgG；见Yang等2016；Lubich等2016)，它们可以优先靶向PEG、甲氧基-PEG或OH-PEG的不同部分(Sherman等2012；Saifer等2014)。
抗PEG抗体的存在导致药物中和，最重要的是，导致称为加速血液清除(ABC)的现象。发生ABC的著名例子是用PEG-天冬酰胺酶(PEG-ASNase；)治疗急性淋巴母细胞白血病、PEG-尿酸酶(Pegloticase；KrystexxaTM；用于慢性痛风患者)、PEG-IFN-a2b和PEG-IFN-a2a/>用于治疗丙型肝炎以及PEG-G-CSF(用于治疗中性粒细胞减少症)。聚合物-胶束载体系统的免疫原性和相互作用已Shiraishi由进行了广泛的综述(Shiraishi等2019)。
大多数PEG化药物是基于蛋白的生物制剂(包括抗体、Fab片段、酶、生长因子和细胞因子等)。然而，反复注射后，PEG化肽、PEG化适体(aptamer)、PEG化有机小分子或PEG-脂质体和基于胶束及基于纳米颗粒的药物和疫苗也可伴有ABC或中和性抗PEG抗体(Park等2019；Garay等2012)。此外，疫苗载体系统中掺入PEG的做法也被建议用于脂蛋白载体(Sekiya等2017)或用于多糖偶联疫苗(Zhang等2015)。另一例是，已证明病毒基因疗法载体也可以用PEG有效屏蔽以避开诱导的抗体或天然的抗体或其他血浆蛋白(Krutzke等2016)。总之，这指出了PEG对于许多治疗原则和适应症领域的广泛适用性和重要性。
其他PEG化蛋白质公开在例如Akbarzadehlaleh等2016、Yoshimoto等2013、Gaspar等2012、Kim等2012、Siekmann等2020和Chapman等2002中。WO 2019/226538A1公开了选择性Treg刺激剂组合物带有PEG化IL-2。Sharp等1986涉及合成和应用PEG-抗体亲和配体用于水性聚合物两相系统中的细胞分离。
WO 03/040211 A2涉及支化PEG聚合物以及与这些支化聚合物的偶联物。实施例6公开了二-PEG化溶菌酶和三-PEG化溶菌酶。
US 2004/062748 A1公开了PEG偶联物，据称有降低的抗原性，特别是通过具有羟基封端的PEG链。所公开的PEG化蛋白之一是猪尿酸酶。
迄今为止，PEG化药物主要服务于癌症疗法市场(>60％)，其次是痛风、血友病和肝炎等多种不同适应症。示例性应用和目前已获批药物产品概述于下表1，反映了应用的多样性。
表1目前已获批的PEG化活性剂
抗PEG抗体的出现给PEG基活性剂(即药物产品、疫苗或载体，包括PEG化蛋白、肽、寡核苷酸、有机小分子、纳米颗粒、含脂质或含糖药物等)带来了严重的问题尚待解决。迄今为止，尚无能在应用PEG化或含PEG的药物产品之前避免、去除或中和抗PEG抗体的可行方案或治疗性方法。抗PEG抗体会加速药物清除和药物中和，这也适用于PEG化疫苗和基因疗法载体。这已成为特定蛋白质药物的一个问题，例如治疗性PEG-天冬酰胺酶(用于ALL治疗)或PEG化尿酸酶(用于重症难治性痛风)。此外，PEG化适体、脂质体或纳米颗粒在临床前模型和临床中得到广泛研究。近期综述见Hoang Thi等和Abu Lila等(Hoang Thi TT等2020；AbuLila 2018，书籍章节[doi.org/10.1016/B978-0-08-101750-0.00003-9])。抗PEG抗体的后果包括改变PEG化药物的药代动力学和生物分布特征。抗PEG抗体存在于接受过治疗的个体和未接触过PEG的个体(或以其他方式接触过PEG的个体)中。
迫切需要一种方法或治疗剂以去除或灭活血液循环中这种特殊类型的药物中和性抗体，因为抗PEG抗体对PEG化或含PEG的药物、疫苗或基因疗法载体的整个市场产生负面影响。因此，抗PEG介导的对PEG化或含PEG的活性剂的清除已成为该领域的一个主要挑战。
有人建议在施用PEG化药物之前，通过应用2.2mg/kg 10kDa PEG或550mg/kg20kDa或40kDa PEG阻断或去除抗PEG的抗药抗体(McSweeney等2019)。发现数小时后较小分子量PEG仍不能恢复PEG化活性剂的循环，而高分子量PEG被声称可有效恢复所述活性剂的活性。然而，使用的剂量非常高，甚至变成550mg/kg体重的剂量引起抗PEG抗体的负面诱导。WO 2019/046185 A1(也是McSweeney等)公开了一种类似的基于高分子量游离PEG的方法。
发明内容
因此，本发明的一个目的是提供用于减少、消耗或隔离抗PEG抗体的化合物和方法，其不具有上述的一种或多种缺点和/或具有改进的效力或安全性。
本发明提供了一种化合物(用于体内隔离(或体内消除)个体中的至少一种抗PEG抗体)，其包含
-生物聚合物支架和
-一或多种PEG链。
进一步，本发明提供了药物组合物，其包含上述化合物和至少一种药学可接受的赋形剂。优选地，该药物组合物是用于疗法中。
在另一方面，本发明提供了一种隔离(或消耗)存在于个体中的一或多种抗体的方法，包括获得本文定义的药物组合物，该组合物在该个体中是非免疫原性的，其中所述一或多种抗体是抗PEG抗体；并将药物组合物施用于该个体。
在另一方面，本发明涉及药物组合物，其包含本文定义的化合物、还包含活性剂和任选的至少一种药学上可接受的赋形剂。所述活性剂优选是载体、基于病毒的疫苗载体或蛋白质或肽，特别是选自酶、酶抑制剂、抗体、抗体片段、抗体模拟物、抗体-药物偶联物、激素、生长因子、凝血因子和细胞因子，或核酸-脂质颗粒，核酸-聚合物颗粒，核酸-脂质-聚合物颗粒，或核酸。
在又一方面，本发明提供了一种在需要活性剂治疗的个体中抑制对该活性剂治疗的免疫反应的方法，包括获得包含所述化合物和活性剂的药物组合物；所述药物组合物的化合物在所述个体中为非免疫原性的，并且将所述药物组合物施用于所述个体。
在另一方面，本发明提供了一种化合物，其包含生物聚合物支架和一种或多种选自PEG化、XTEN化、PAS化、甲基化、糖基化和聚唾液酸化的修饰。此外，本发明提供包含该化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。优选地，该药物组合物用于疗法中。本发明还提供了一种隔离(或消除)个体中存在的一种或多种抗体的方法，包括获得这种药物组合物，该组合物在个体中为非免疫原性的，其中所述一种或多种抗体特异于所述一种或多种修饰；将药物组合物施用于个体。本发明还涉及药物组合物，其包含该化合物并且还包含活性剂和任选的至少一种药学上可接受的赋形剂。本发明还提供了一种在需要活性剂治疗的个体中抑制对活性剂治疗的免疫反应的方法，包括获得包含化合物和活性剂的所述药物组合物；其中药物组合物的化合物在个体中为非免疫原性的，并且将药物组合物施用于个体。
在本发明的过程中，意外发现本文使用的生物聚合物支架在降低个体不需要的抗体的滴度方面特别有效。此外，与具有相当大的免疫原性风险(这与抗PEG抗体减少剂的预期正好相反)的高分子量和高剂量游离PEG相比，本发明的化合物具有更有利的安全性，特别是它被证明为非免疫原性。此外，意外发现10kDa或更小的PEG半分子(moiety)比高分子量PEG更有效(参见实施例章节)。
除非明确排除，否则下面给出的详细描述涉及本发明的所有上述方面。
一般而言，抗体是体液免疫系统的重要组成部分，可防止细菌、病毒、真菌或寄生虫等外来生物感染。然而，在某些情况下—包括自身免疫病、器官移植、输血或在施用生物分子药物或基因递送载体时—抗体可以靶向患者自身的身体(或外来组织或细胞或刚刚施用的生物分子药物或载体)，从而变成有害或致病的实体。某些抗体也会干扰用于诊断成像的探针。在下文中，此类抗体统称为“已经不需要的(undesired)抗体”或“可以不需要的(undesirable)抗体”。
除了少数例外，选择性去除不需要的抗体还没有达到临床实践。目前仅限于极少数适应症：一种选择性去除抗体的已知技术(尽管尚未广泛建立)是免疫单采血浆术(immunoapheresis)。与免疫单采血浆术(去除免疫球蛋白)相反，选择性免疫单采血浆术涉及通过体外选择性抗体吸附柱过滤血浆，该柱将根据与其抗原结合位点的选择性结合而消耗(deplete)不需要的抗体。选择性免疫单采血浆术例如已用于在ABO不相容移植之前或针对输血医学的适应症而从血液中去除抗A或抗B抗体(Teschner等2012)。选择性单采血浆术也在其他适应症中进行了实验应用，例如神经免疫学适应症(Tetala等)或重症肌无力(Lazaridis等)，但尚未成为临床常规。选择性免疫单采血浆术限于犹豫地应用的一个原因是，它是一种费用高且扰人的干预程序，需要专门的医疗护理。此外，现有技术中尚不知如何快速有效地消耗不需要的抗体。
与单采血浆术无关，Morimoto等公开了葡聚糖作为一种普遍适用的多价支架，用于提高肽和拟肽配体如FLAG肽的免疫球蛋白-结合亲和力。WO 2011/130324A1涉及预防细胞损伤的化合物。EP3 059 244A1涉及C-met蛋白激动剂。
如上所述，单采血浆术是在体外应用的。相比之下，现有技术中还提出了几种在体内消除不需要的抗体的方法，主要与某些涉及自身抗体或抗药物抗体的自身免疫病有关：
Lorentz等公开了一种技术，通过该技术，红细胞被原位加载导致耐受的有效载荷(payload)以引起抗原特异性T细胞的删除。这应该最终导致针对模型抗原的不希望的体液应答减少。Pishesha等提出了一种类似的方法。在该方法中，红细胞在体外装载了一种与表面共价结合的肽-抗原构建体，并重新注射到动物模型中以诱导全身免疫耐受。
WO 92/13558A1涉及稳定的非免疫原性聚合物和免疫原类似物的偶联物，所述类似物具有该免疫原的特异性B细胞结合能力，并且当引入个体时，诱导对该免疫原的体液无应答性。因此，公开了这些偶联物可用于治疗由外来或自身免疫原引起的抗体介导的病理状况。在这方面，还参见EP0 498 658A2。
Taddeo等公开了使用与卵清蛋白模型抗原融合的抗CD138抗体衍生物选择性消耗抗体生成型浆细胞，从而在体外选择性地在表达抗模型抗原的抗体的那些细胞中诱导受体交联和细胞自杀。
Apitope International NV(比利时)目前正在开发可溶性致耐受性T细胞表位肽，其可导致那些诱导耐受的抗原呈递细胞表达低水平的协同刺激分子，从而抑制抗体应答(参见例如Jansson等)。这些产品目前正在进行临床前和早期临床评估，例如针对多发性硬化症、格雷夫氏病、中间葡萄膜炎(intermediate uveitis)和其他自身免疫病以及因子VIII不耐受。
同样，Selecta Biosciences,Inc.(美国)目前正在寻求通过所谓的合成疫苗颗粒(SVP)诱导耐受的策略。SVP-雷帕霉素被认为通过选择性诱导调节性T细胞来阻止不需要的抗体生成从而诱导耐受(参见Mazor等)。
Mingozzi等公开了吸附抗体但不能进入靶细胞的诱饵腺相关病毒(AAV)衣壳。
WO 2015/136027 A1公开了呈递最小人类自然杀伤-1(HNK-1)表位的与抗MAG(髓鞘相关糖蛋白)IgM抗体结合的碳水化合物配体，以及它们在诊断和治疗抗-MAG神经病方面的用途。WO 2017/046172 A1公开了另外的碳水化合物配体和半分子(moieties)，它们模拟由神经系统的鞘糖脂所包含、被神经疾病相关抗聚糖抗体结合的糖表位。该文件进一步涉及这些碳水化合物配体/半分子在诊断以及治疗与抗聚糖抗体相关的神经系统疾病中的用途。
US 2004/0258683 A1公开了治疗系统性红斑狼疮(SLE)包括肾SLE的方法和降低患有SLE的个体的肾衰风险的方法，以及监测这类治疗的方法。一种披露的治疗SLE包括肾SLE和降低患有SLE的个体的肾衰风险的方法涉及给个体施用有效量的用于降低抗双链DNA(dsDNA)抗体水平的药剂，例如作为呈递表位的载体或呈递表位的滴度平台分子的形式的dsDNA表位。
US专利号5,637,454涉及自身免疫病的测定和治疗。用于治疗的药剂可包括与所指定的抗原性分子模拟序列同源的肽。公开了可以将这些肽递送给患者以减少具有特定特异性的循环抗体的量。
US 2007/0026396 A1涉及针对引起冷不耐受的抗体的肽及其用途。据教导，通过使用所公开的肽，不需要的自身抗体的体内(in vivo)或离体(ex vivo)中和是可能的。WO1992/014150 A1或WO 1998/030586 A2中公开了类似的方法。
WO 2018/102668 A1公开了一种用于选择性降解致病抗体或其他不需要的抗体的融合蛋白。所述融合蛋白(称为“Seldeg”)包括在接近中性pH值下与细胞表面受体或其他细胞表面分子特异性结合的靶向组分，以及与靶向组分直接或间接融合的抗原组分。还公开了一种通过向患者施用具有配置为特异性结合靶抗原特异性抗体的抗原成分的Seldeg来从患者中消耗靶抗原特异性抗体的方法。
WO 2015/181393 A1涉及嫁接到向日葵胰蛋白酶抑制剂(SFTI-)和环肽基支架中的肽。这些肽被披露对自身免疫病有效，例如嫁接到SFTI支架中的瓜氨酸纤维蛋白原序列已显示封闭类风湿性关节炎中的自身抗体并抑制炎症和疼痛。这些支架被公开为非免疫原性的。
Erlandsson等公开了用抗独特型抗体及其衍生物在体内清除独特型抗体。
Berlin Cures Holding AG(德国)提出了一种用于治疗扩张型心肌病和其他GPCR-自身抗体相关疾病的静脉内广谱中和剂DNA适体(aptamer)(参见例如WO 2016/020377A1和WO 2012/000889 A1)，认为其高剂量时通过竞争性结合自身抗体的抗原结合区来封闭自身抗体。总体上，适体尚未取得突破，还处于临床研发的初级阶段。主要关注点仍然是生物稳定性和生物利用度，诸如核酸酶敏感性、毒性、小尺寸和肾清除等限制。关于它们用作选择性抗体拮抗剂的一个具体问题是它们刺激先天免疫应答的倾向。
WO 00/33887A2公开了降低抗体(特别是疾病相关抗体)的循环水平的方法。这些方法需要向个体施用有效量的表位呈递载体。此外，还公开了降低抗体的循环水平的离体方法，其使用表位呈递型载体。
US 6,022,544 A涉及通过向哺乳动物施用不含高分子量免疫刺激分子的非免疫原性构建体来减少哺乳动物中不需要的抗体应答的方法。公开的构建体含有至少两个拷贝的B细胞膜免疫球蛋白受体表位，该表位与药学上可接受的非免疫原性载体结合。
然而，现有技术中公开的体内消耗不需要的抗体的方法具有许多缺点。特别是，它们都未被批准用于常规临床使用，更不用说用于隔离抗PEG抗体的临床使用。
本发明中使用的生物聚合物支架可以是哺乳动物生物聚合物，例如人生物聚合物、非人灵长类生物聚合物、绵羊生物聚合物、猪生物聚合物、狗生物聚合物或啮齿动物生物聚合物。特别地，生物聚合物支架是蛋白质，尤其是(未修饰或就其氨基酸序列而言未修饰的)血浆蛋白。优选地，生物聚合物支架是哺乳动物蛋白质，例如人蛋白质、非人灵长类动物蛋白质、绵羊蛋白质、猪蛋白质、狗蛋白质或啮齿动物蛋白质。通常，生物聚合物支架为非免疫原性和/或无毒性蛋白质，其优选在健康(人)个体的血浆中循环并且可以例如被清除受体有效清除或回收，例如存在于骨髓细胞或肝窦内皮细胞上(Sorensen等2015综述)。
根据特别优选方面，生物聚合物支架(优选)是(人)球蛋白，优选选自免疫球蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白和β-球蛋白，特别是免疫球蛋白G、触珠蛋白(haptoglobin)和转铁蛋白。
生物聚合物支架还可以(优选)是(人)白蛋白、血红素结合蛋白(hemopexin)、α-1-抗胰蛋白酶、C1酯酶抑制剂、乳铁蛋白或所有上述蛋白包括球蛋白的非免疫原性(即在待治疗个体中为非免疫原性)片段。
在另一优选方案中，生物聚合物支架是抗CD163抗体(即特异于CD163蛋白的抗体)或其CD163结合片段。
人CD163(分化簇163)是一种130kDa膜糖蛋白(以前称为M130)和原型(prototypic)I类清道夫受体，其细胞外部分由九个负责配体结合的清道夫受体半胱氨酸富集(SRCR)域组成。CD163是存在于巨噬细胞和单核细胞上的内吞受体，它从血液中去除血红蛋白/触珠蛋白复合物，但它也在抗炎过程和伤口愈合中发挥作用。CD163的最高表达水平可见于组织巨噬细胞(例如肝脏中的Kupffer细胞)以及脾脏和骨髓中的某些巨噬细胞上。由于其组织-和细胞-特异性表达，并且与不需要的抗体的消耗完全无关，因此CD163被认为是递送例如免疫毒素、脂质体或其他治疗性化合物类别等药物的巨噬细胞靶标(Skytthe等,2020)。
单克隆抗CD163抗体及其结合的SRCR域公开于例如Madsen等,2004，特别是图7。其他抗CD163抗体及其片段公开于例如WO 2002/032941 A2或WO 2011/039510A2。至少两种结构不同的配体结合位点通过使用域特异性抗体例如单克隆抗体(mAB)EDhu1而被作图(参见Madsen等,2004)。该抗体结合CD163的第三个SRCR，并与血红蛋白/触珠蛋白竞争结合CD163。许多其他针对CD163不同域的抗体先前在文献中有描述，包括Mac2-158、KiM8、GHI/61和RM3/1，分别靶向SRCR域1、3、7和9。此外，绘制了保守的细菌结合位点图，证明某些抗体能够抑制细菌结合但不能抑制血红蛋白/触珠蛋白复合物结合，反之亦然。这指出了CD163的结合和配体相互作用的不同模式(Fabriek等,2009；亦见其引文)。
CD163与不需要的抗体的消耗完全无关，由于其生理特性，CD163被提议作为细胞特异性药物递送的靶标。肿瘤相关巨噬细胞是目前探索CD163靶向的潜在益处的主要靶标之一。值得注意的是，许多肿瘤和恶性病显示与CD163表达水平相关，这支持使用该靶标进行肿瘤治疗。其他拟议的应用包括在慢性炎症和神经炎症中通过抗药物偶联物(ADC)靶向CD163(综述于Skytthe等,2020)。因此，CD163被ADC靶向，尤其是与地塞米松或隐形脂质体偶联，代表了目前正在研究的治疗原理(Graversen等,2012；Etzerodt等,2012)。
在此方面，有参考文献表明抗CD163抗体在体内应用时可以被胞吞作用快速内化。这可见于例如mAB Ed-2(Dijkstra等,1985年；Graversen等,2012)或mAB Mac2-158/KN2/NRY(Granfeldt等,2013)。基于这些观察，结合在本发明的过程中进行的观察(见具体实施例部分)，抗CD163抗体和CD163结合被证明是非常适合用于去除/隔离不需要的抗体的生物聚合物支架。
许多抗CD163抗体及其CD163结合片段是本领域已知的(参见例如上文)。这些适合用作本发明的生物聚合物支架。例如，本文或WO 2011/039510 A2(其以引用方式并入本文)中提及的任何抗CD163抗体或其片段均可用作本发明中的生物聚合物支架。优选地，本发明化合物的生物聚合物支架是WO 2011/039510中公开的抗体Mac2-48、Mac2-158、5C6-FAT、BerMac3或E10B10，特别是WO 2011/039510A2中公开的人源化Mac2-48或Mac2-158。
在一个优选实施方式中，抗CD163抗体或其CD163结合片段包含重链可变(VH)区，其包含选自WO 2011/039510 A2的SEQ ID NO:11-13的一个或多个互补决定区(CDR)序列。
此外，或作为其替代，在一个优选实施方式中，抗-CD163抗体或其CD163结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含选自WO 2011/039510 A2的SEQ ID NO:14-16或选自WO 2011/039510 A2的SEQ ID NO:17-19的一个或多个CDR序列。
在又一优选实施方式中，抗CD163抗体或其CD163结合片段包含重链可变(VH)区，其包含WO 2011/039510 A2的SEQ ID NO:20的氨基酸序列或由该氨基酸序列组成。
此外，或作为其替代，在一个优选实施方式中，抗-CD163抗体或其CD163结合片段包含轻链可变区(VL)，其包含WO 2011/039510 A2的SEQ ID NO:21的氨基酸序列或由该氨基酸序列组成。
在又一优选实施方式中，抗-CD163抗体或其CD163结合片段包含重链可变(VH)区，其包含WO 2011/039510 A2的SEQ ID NO：22的氨基酸序列或由该氨基酸序列组成。
此外，或作为其替代，在一个优选实施方式中，抗CD163抗体或其CD163结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含WO 2011/039510 A2的SEQ ID NO:23的氨基酸序列或由该氨基酸序列组成。
在又一优选实施方式中，抗CD163抗体或其CD163结合片段包含重链可变(VH)区，其包含WO 2011/039510 A2的SEQ ID NO：24的氨基酸序列或由该氨基酸序列组成。
此外，或作为其替代，在一个优选实施方式中，抗CD163抗体或其CD163结合片段包含轻链可变(VL)区，其包含WO 2011/039510 A2的SEQ ID NO:25的氨基酸序列或由该氨基酸序列组成。
在本发明的上下文中，抗CD163抗体可以是哺乳动物抗体例如人源化抗体或人抗体、非人灵长类动物抗体、绵羊抗体、猪抗体、狗抗体或啮齿动物抗体。在各个实施方式中，抗CD163抗体可以是单克隆的。
根据优选，抗CD163抗体选自IgG、IgA、IgD、IgE和IgM。
根据进一步的优选，CD163结合片段选自Fab、Fab'、F(ab)2、Fv、单链抗体、纳米抗体和抗原结合域。
CD163氨基酸序列公开于例如WO 2011/039510 A2(其以引用方式并入本文)。在本发明上下文中，抗CD163抗体或其CD163结合片段优选特异于人CD163，尤其具有WO 2011/039510 A2的SEQ ID NO：28-31中任一个的氨基酸序列。
在又一优选实施方式中，抗-CD163抗体或其CD163结合片段特异于CD163的细胞外区域(例如对于人CD163：分别是UniProt Q86VB7的氨基酸42-1050，序列版本2)，优选特异于CD163的SRCR域，更优选特异于CD163的SRCR域1-9中的任何一个(例如，对于人CD163：UniProt Q86VB7的氨基酸51-152、159-259、266-366、373-473、478-578、583-683、719-819、824-926和929-1029，序列版本2)，甚至更优选特异于CD163的SRCR域1-3中的任何一个(例如，对于人CD163：分别是UniProt Q86VB7的氨基酸51-152、159-259、266-366和373-473，序列版本2)，特别是特异于CD163的SRCR域1(特别是具有WO 2011/039510A2的SEQ ID NOs:1-8中任一个的氨基酸序列，尤其是WO 2011/039510A2的SEQ ID NO：1)。
在特别优选的情况下，抗CD163抗体或其CD163结合片段能够与(优选人)血红蛋白-触珠蛋白复合物竞争结合(优选人)CD163(例如在ELISA中)。
在另一个特别优选的情况下，抗CD163抗体或其CD163结合片段能够与本文公开的任何抗人CD163 mAb，特别是WO2011/039510A2中公开的Mac2-48或Mac2-158竞争结合人CD163。
在另一个特别优选的情况下，抗-CD163抗体或其CD163结合片段能够与下述抗体竞争结合人CD163(例如在ELISA中)，所述抗体具有由以下氨基酸序列组成的重链可变(VH)区
DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYITYSGITNYNPSLKSQISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVSGTYYFDYWGQGTTLTVSS(SEQ ID NO：1)，
并具有由以下氨基酸序列组成的轻链可变(VL)区
SVVMTQTPKSLLISIGDRVTITCKASQSVSSDVAWFQQKPGQSPKPLIYYASNRYTGVPDRFTGSGYGTDFFTISSVQAEDLAVYFCGQDYTSPRTFGGGTKLEIKRA(SEQ ID NO：2)。
关于竞争性结合实验的细节是本领域技术人员已知的(例如基于ELISA)并且公开于例如WO 2011/039510 A2(其以引用方式并入本文)。
绘制了WO 2011/039510中公开的抗体E10B10和Mac2-158的表位图(参见实施例章节)。这些表位特别适合结合本发明化合物的抗CD163抗体(或其CD163结合片段)。
相应地，在特别优选的实施方式中，抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于由7-25个、优选8-20个、甚至更优选9-15个、特别是10-13个氨基酸组成的肽，所述肽包含氨基酸序列CSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEA(SEQ ID NO：3)或其7-24个氨基酸的片段。优选地，该肽包含氨基酸序列GRVEVKVQEEW(SEQ ID NO：4)、WGTVCNNGWS(SEQ ID NO：5)或WGTVCNNGW(SEQID NO：6)。更优选地，该肽包含选自以下的氨基酸序列：EWGTVCNNGWSME(SEQ ID NO:7)、QEEWGTVCNNGWS(SEQ ID NO:8)、WGTVCNNGWSMEA(SEQ ID NO:9)、EEWGTVCNNGWSM(SEQ IDNO:10)、VQEEWGTVCNNGW(SEQ ID NO：11)、EWGTVCNNGW(SEQ ID NO：12)和WGTVCNNGWS(SEQID NO：5)。甚至更优选地，该肽由选自以下的氨基酸序列组成：EWGTVCNNGWSME(SEQ ID NO：7)、QEEWGTVCNNGWS(SEQ ID NO：8)、WGTVCNNGWSMEA(SEQ ID NO：9)、EEWGTVCNNGWSM(SEQ IDNO：10)，VQEEWGTVCNNGW(SEQ ID NO:11)、EWGTVCNNGW(SEQ ID NO:12)和WGTVCNNGWS(SEQID NO:5)，任选地具有N-端和/或C-端半胱氨酸残基。
相应地，在另一特别优选的实施方式中，抗-CD163抗体或其CD163结合片段特异于由7-25个、优选8-20个、甚至更优选9-15个、特别是10-13个氨基酸组成的肽，所述肽包含氨基酸序列DHVSCRGNESALWDCKHDGWG(SEQ ID NO：13)或其7-20个氨基酸的片段。优选地，该肽包含氨基酸序列ESALW(SEQ ID NO：14)或ALW。更优选地，该肽包含选自下组的氨基酸序列：ESALWDC(SEQ ID NO:15)、RGNESALWDC(SEQ ID NO:16)、SCRGNESALW(SEQ ID NO:17)、VSCRGNESALWDC(SEQ ID NO:18)、ALWDCKHDGW(SEQ ID NO：19)、DHVSCRGNESALW(SEQ ID NO：20)、CRGNESALWD(SEQ ID NO：21)、NESALWDCKHDGW(SEQ ID NO：22)和ESALWDCKHDGWG(SEQID NO：23)。还更优选地，该肽由选自下组的氨基酸序列组成：ESALWDC(SEQ ID NO:15)、RGNESALWDC(SEQ ID NO:16)、SCRGNESALW(SEQ ID NO:17)、VSCRGNESALWDC(SEQ ID NO:18)、ALWDCKHDGW(SEQ ID NO:19)、DHVSCRGNESALW(SEQ ID NO:20)、CRGNESALWD(SEQ IDNO:21)、NESALWDCKHDGW(SEQ ID NO:22)和ESALWDCKHDGWG(SEQ ID NO:23)，任选地具有N-端和/或C-端半胱氨酸残基。
相应地，在另一个特别优选的实施方式中，抗-CD163抗体或其CD163结合片段特异于由7-25个、优选8-20个、甚至更优选9-15个、特别是10-13个氨基酸组成的肽，所述肽包含氨基酸序列SSLGGTDKELRLVDGENKCS(SEQ ID NO：24)或其7-19个氨基酸的片段。优选地，该肽包含氨基酸序列SSLGGTDKELR(SEQ ID NO：25)或SLGG(SEQ ID NO：26)。更优选地，该肽包含选自以下的氨基酸序列：SSLGGTDKELR(SEQ ID NO:25)、SSLGGTDKEL(SEQ ID NO:28)、SSLGGTDKE(SEQ ID NO:29)、SSLGGTDK(SEQ ID NO:30)、SSLGGTD(SEQ ID NO：31)、SSLGGT(SEQ ID NO：32)和SSLGG(SEQ ID NO：26)。还更优选地，该肽由选自下组的氨基酸序列组成：SSLGGTDKELR(SEQ ID NO:25)、SSLGGTDKEL(SEQ ID NO:28)、SSLGGTDKE(SEQ ID NO:29)、SSLGGTDK(SEQ ID NO:30)、SSLGGTD(SEQ ID NO：31)、SSLGGT(SEQ ID NO：32)和SSLGG(SEQ ID NO：26)，任选地具有N-端和/或C-端半胱氨酸残基。
所述一或多种PEG链(或PEG半分子)优选借助本领域已知的(非免疫原性)接头与生物聚合物支共价偶联(或共价结合)，例如借助N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯。例如，NHS功能化的PEG(PEG-NHS)被广泛商用。或者，或此外，例如双功能接头(如N-γ-马来酰亚氨丁酰基-氧磺基琥珀酰亚胺酯，GMBS)可以借助形成酰胺键而直接附着至生物聚合物支架。随后，例如一种含有半胱氨酸和一或多个氨基的肽，或半胱氨酸本身可以借助形成硫醚键而与双功能接头偶联。例如，NHS-PEG最终可以与接头肽(或接头半胱氨酸)的氨基反应，将PEG链连接到生物聚合物支架上。
根据特别优选，所述一或多种PEG链(或PEG半分子)的至少一部分借助至少一个接头与生物聚合物支架共价偶联(或共价结合)。优选地，该至少一个接头包含肽或单个氨基酸，特别是半胱氨酸。这是因为，在本发明的过程中，令人惊奇地发现，当使用肽/氨基酸接头时，支架上的修饰如PEG的密度增加(具体参见实施例15)。
优选地，生物聚合物支架和/或一条或多条PEG链(或其他修饰)直接共价偶联(或共价结合)到肽(也见实施例15)或单个氨基酸例如半胱氨酸。有多种不同偶联方法可为技术人员所用。例如，生物聚合物支架和/或一条或多条PEG链可以偶联至肽的赖氨酸残基、酪氨酸残基、半胱氨酸残基、N端或C端(例如，在一个实施方式中，生物聚合物支架可偶联至N-端，而一条或多条PEG链可偶联至C-端，反之亦然)。在单个氨基酸的情形中，N-端和C-端可用于偶联，侧链也是(例如半胱氨酸情形中的硫醇基)。与氨基酸和肽的合适的选择性偶联(生物偶联)详见例如Koniev和Wagner2015综述。与天然氨基酸的偶联可以(也)借助赖氨酸、N-端氨、半胱氨酸、色氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸、组氨酸、主链酰胺或羧酸来进行。此外，通过扩展遗传密码而并入非天然氨基酸和生物正交化学也可用于接头的肽，见例如Elia2020综述。
多种不同的氨基酸序列和序列长度都适用于接头的肽(如果存在)。所述肽可以例如还包含非天然氨基酸或具有修饰的侧链(例如有生物素)。然而，在任何情形中，优选所述肽不与(待治疗的个体，例如人的)任何HLA I类或HLA II类分子结合，以防止由T-细胞受体在体内呈递和刺激，并由此诱导免疫反应。因此，为了尽可能地避免T细胞表位活性，所述肽优选满足以下一个或多个特征：
-为了降低所述肽与II类或I类HLA分子结合的可能性，所述肽优选长度为4-8个氨基酸，但长度稍短或稍长(尤其2-13个氨基酸，优选3-11个氨基酸，更优选4-9个氨基酸)仍然是可以接受的。
-为了进一步降低此类肽与HLA II类或I类分子结合的可能性，优选通过HLA结合预测算法如NetMHCII-2.3(Jensen等2018年综述)来测试候选肽序列。优选地，所述肽具有(预测的)至少500nM的HLA结合(IC50)。更优选地，HLA结合(IC50)大于1000nM，尤其是大于2000nM(参见例如Peters等2006)。为了降低HLA I类结合的可能性，也可以应用NetMHCpan4.0(Jurtz等2017)进行预测。
-为了进一步降低此类肽与HLA I类分子结合的可能性，可以将NetMHCpan的Rank百分位阈值根据等2018设置成本底水平为10％。优选地，根据NetMHCpan算法，所述肽因此具有大于3、优选大于5、更优选大于10的％Rank值。
-为了进一步降低此类肽与HLAII类分子结合的可能性，进行本领域常用的体外HLA结合测定，例如重折叠测定、iTopia、肽拯救测定或基于阵列的肽结合测定是有益的。或者，或此外，可以使用基于LC-MS的分析，例如由Gfeller等2016年综述。
所述接头的肽可以是线性的或环化的/约束的(constrained)。数种常用技术可用于肽的环化/约束，见例如Ong等2017或等2021。
还如上所述，非常优选所述接头的肽(如果存在)在哺乳动物中，优选在人、非人灵长类动物、绵羊、猪、狗或啮齿动物中为非免疫原性和/或生物学惰性。优选地，这类非免疫原性肽针对HLA-DRB1_0101具有高于100nM的IC50，优选高于500nM，甚至更优选高于1000nM，尤其高于2000nM，是由NetMHCII-2.3算法预测。NetMHCII-2.3算法详见Jensen等，在此通过引用将其并入。公众可在http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCII-2.3/获得该算法。甚至更优选地，所述肽在体内(例如在哺乳动物中，优选在人、非人灵长类动物、绵羊、猪、狗或啮齿动物中；或在要治疗的个体中)不结合任何HLA和/或MHC分子。
或者，或除此之外，该肽优选不包含B细胞表位。适用于B细胞表位预测的计算机模拟方法，例如基于支持向量机法或决策树法最近由例如Sun等2019或Galanis等2021综述。
特别是，由于赖氨酸、酪氨酸和半胱氨酸残基可用于PEG链(或其他修饰)的分支连接——即单个肽可能能够将数个PEG链(或其他修饰)连接至生物聚合物支架——优选所述肽包含至少一个赖氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，特别是至少五个赖氨酸残基；和/或肽含有至少一个酪氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，特别是至少五个酪氨酸残基；和/或所述肽含有至少一个半胱氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，特别是至少五个半胱氨酸残基。PEG链(或其他修饰)可与上述残基中的每一个结合。
因此，在另一优选实施方式中，至少两个、优选至少三个、更优选至少四个、特别是至少五个PEG链结合至所述至少一个接头中的单个接头，优选结合至所述接头的肽。
为了使所述接头的肽具有更高的灵活性，该肽可以含有至少一个甘氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，特别是至少五个甘氨酸残基。
根据另一优选，所述接头的肽具有末端(即N-端和/或C-端)半胱氨酸残基，以更方便偶联。举例来说，生物聚合物支架可以连接到此肽的末端半胱氨酸(例如，通过用磺基-GMBS激活生物聚合物支架的赖氨酸残基)，然后PEG可以通过与NHS-PEG一起保温而连接到此肽的游离N-端(见实施例15)。
在特别优选的方面，所述肽包含氨基酸序列(X1-(X2)m)n，其中m是1-5、优选2-4的整数，n是1-5、优选2-5的整数。优选地，独立地对于每次出现，X1是赖氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、组氨酸或半胱氨酸，并且，独立地对于每次出现，X2为并非X1的任何其他氨基酸，优选甘氨酸。
本发明的化合物可以包括例如至少两个，优选3-40个PEG链(具有相同或不同的分子量)。
优选地，每条PEG链共价结合到生物聚合物支架上。
在本发明的过程中，PEG链的某些分子量范围被证明是特别有利的(也参见实施例章节)。因此，在一个优选方面，所述一条或多条PEG链中的至少一条，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一条具有100-10000Da、优选200-8000Da、更优选300-6000Da、还更优选400-5000Da、甚至更优选500-4000Da，甚至更优选600-3000Da，特别是700-2500Da或甚至1500-2500Da的分子量。
为了更进一步增加隔离效率，优选一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选在至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个具有游离甲氧基端基或游离羟基端基。本文中的“游离”是指该PEG端基未与另一个分子(例如另一肽或另一官能团或保护基团)共价结合。
高度优选的是，本发明的化合物在哺乳动物中，优选在人、非人灵长类动物、绵羊、猪、狗或啮齿动物中为非免疫原性。
在本发明的上下文中，非免疫原性化合物优选是这样的化合物，其中生物聚合物支架(如果它是蛋白质)针对HLA-DRB1_0101的IC50高于100nM、优选高于500nM、甚至更优选高于1000nM、特别是高于2000nM，是用NetMHCII-2.3算法预测。NetMHCII-2.3算法详见Jensen等，在此通过引用将其并入。公众可在http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCII-2.3/获得该算法。甚至更优选地，所述肽在体内(例如在哺乳动物中，优选在人、非人灵长类动物、绵羊、猪、狗或啮齿动物中；或在要治疗的个体中)不结合任何HLA和/或MHC分子。
根据另一优选，该化合物用于个体中(优选该个体的血流中)至少一种抗PEG抗体的体内隔离(或体内消耗)，和/或用于个体中(优选该个体的血流中)至少一种抗PEG抗体的滴度的降低。
一方面，本发明涉及包含本发明化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
在多个实施方式中，组合物被制备用于腹膜内、皮下、肌肉内和/或静脉内施用。特别地，该组合物用于重复给药(因为它通常是非免疫原性的)。
在一优选中，PEG链与生物聚合物支架的摩尔比为2:1至100:1，优选3:1至90:1，更优选4:1至80:1，甚至更优选地从5:1到70:1，再更优选地从6:1到60:1，尤其是从7:1到50:1或甚至从8:10到40:1。
在另一方面，本发明的化合物用于疗法中。
在本发明的过程中，发现本发明化合物降低不需要的抗体的体内动力学往往非常快，有时会尾随不需要的抗体的轻微反弹。因此，特别优选的是，化合物(或包含该化合物的药物组合物)在96小时窗口期内(优选在72小时内，更优选在48小时窗口期内，甚至更优选在36小时窗口期内，甚至更优选在24小时窗口期内，尤其是在18小时窗口期内或甚至在12小时窗口期内)给药至少两次；尤其是，在此窗口期之后的24小时内，优选12小时内(但通常在至少6小时后)给药下文所述的活性剂。例如，可以在-24小时和-12小时施用药物组合物，然后在0小时施用活性剂。
具体地，所述化合物用于抑制个体对活性剂治疗的免疫反应，所述活性剂包含至少一种PEG，尤其是所述活性剂被PEG化。优选在给予活性剂之前或同时给予所述药物组合物。
根据另一优选，所述化合物用于抑制个体中对活性剂的中和，尤其加速的血液清楚，所述活性剂包含至少一种PEG，尤其是所述活性剂被PEG化。优选在给予活性剂之前或同时给予所述药物组合物。
通常，在本发明的上下文中，活性剂是蛋白质或肽，优选活性剂选自酶、酶抑制剂、抗体、抗体片段、抗体模拟物、抗体-药物偶联物、激素、生长因子、凝血因子和细胞因子；或者活性剂可以是病毒载体，例如用于基因疗法或基于病毒的载体疫苗接种的病毒载体。PEG化病毒载体参见例如Balakrishnan等2019或Barry等2020。
最通常地，在本发明的整个上下文中，活性剂具有本发明化合物或生物聚合物支架所不具有的(生物)活性(例如酶活性和/或治疗效应)。
作为另一个例子，腺病毒载体用PEG屏蔽，以使它们的免疫原性更弱或更不易被事先存在的或被诱导的抗体清除(O'Riordan等1999，Kim等2012)。相同的概念也应用在AAV上(Lee等2005，Weaver等2008)。因此，特别优选活性剂是包含PEG的腺病毒载体(vector或carrier)或包含PEG的AAV载体(vector或carrier)。
尤其，活性剂选自上表1中列出的活性剂(由INN指定)、pegvorhyaluronidasealfa、pegunigalsidase alfa、PEG化精氨酸酶(例如BCT-100)、PEG化精氨酸脱氨酶(例如ADI PEG-20)和PEG化甲硫氨酸酶。
PEG还用于修饰和配制用于代谢性疾病和癌症的疗法，以及用于酶替代疗法(通常用于罕见的遗传性疾病)的酶。酶替代疗法通常应用于由于结构缺陷、低表达或缺乏代谢途径所需的酶而缺乏内源性酶活性的遗传代谢病症。这些病症通常与受影响的途径的底物或中间体的积累有关，由此导致疾病状态。作为替代，酶疗法也可用于增强内源性途径的未受损(intact)酶，例如下表2中所列的酶(一些PEG化酶亦见上表1)的酶活性。酶的其他应用包括癌症、神经肌肉功能障碍、止血，甚至美容干预。
已有的PEG化酶的例子包括苯丙氨酸氨裂解酶(Sarkissian等2008)、L-天冬酰胺酶(Meneguetti 2019)或腺苷脱氨酶(Booth等2009)、用于Fabry病的Pegunigalsidase(Kant 2020)或PEG化天冬酰胺酶Crisantaspase(Trres-Obreque2019)。
因此，进一步优选地，活性剂是酶的PEG化形式，优选酶选自下表2。
表2其他治疗酶
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此外，对临床和临床前阶段的(候选)PEG化药物清单的深度综述见Park等(2019)，Swierczewska等(2015)或Kang&Stevens 2009。对溶酶体酶替代疗法的综述见Solomon和Muro 2017。本段引用的出版物中提到的所有酶(或其PEG化形式，当它们未被披露为PEG化时)也可以作为活性剂用在本发明中。
酶可以与PEG脂质体等制剂组合使用(综述参见Solomon&Muro 2017)。然而，当PEG脂质体诱导抗PEG抗体时可能会出现问题(Ishida 2006)。因此，本发明特别适用于此类应用。相应地，包含PEG的脂质-酶粒子也可以在本发明中用作活性剂。
一般来说，基因转移到细胞和组织中的主要问题是被核酸酶快速清除和降解以及有限的组织分布。DNA和RNA通常经历快速的核酸酶降解，快速的肝肾清除，并且它们由于即为亲水性又有高分子量而通常不能进入细胞。病毒载体是另一类有吸引力的遗传物质生物载体，但主要限制是装载量、载体生成和规模扩大。重要的是，最大的障碍是它们的免疫原性。
因此，由脂质、聚合物和/或肽与核酸组合而成的非病毒性的基因转移载体目前在不同组合下进行深入研究。例如，多聚复合物(polyplexes)或纳米复合物是研究最透彻且用途广泛的核酸载体之一。它们保护其装载的核酸免受核酸内切酶消化，从而增加稳定性和体内循环时间，它们也可用作疫苗佐剂。
特别是，阳离子纳米载体通常包含PEG以减少不需要的细胞摄取或粘膜佐剂效应，就像在例如与糖蛋白抗原组合时的PEI(聚乙烯亚胺)中所见(Wegmann2012)。PEG结构的修饰，例如刷状、星状或胶束状PEG被开发出来用于改善生物分布、细胞摄取和基因表达，并用于减少不良副作用。关于PEG化递送聚合物的深度综述见Suk等2016，Yang等2015年和Sun等2019。
尽管PEG在药物和疫苗递送(特别是DNA和RNA递送)、生物偶联或含PEG的制剂(例如含PEG或包被PEG的脂质体和纳米颗粒制剂)的研发方面具有多个总体优势(见Inglut2020综述)，此类与核酸的复合物(以及PEG化核酸本身)的PEG免疫原性引起的问题在现有技术中尚未解决。本发明也适于解决这些问题。
因此，在本发明的一个特别优选的实施方式中，活性剂是核酸-脂质颗粒、核酸-聚合物颗粒(其中聚合物可以例如是蛋白质或肽)、核酸-脂质-聚合物颗粒(其中聚合物可以是例如蛋白质或肽)、或核酸。所述(颗粒的)核酸可以是DNA或RNA。因此，活性剂可以例如是RNA-脂质颗粒、RNA-聚合物颗粒、RNA-脂质-聚合物颗粒、或RNA。在其他实施方式中，活性剂可以例如是DNA-脂质颗粒、DNA-聚合物颗粒、DNA-脂质-聚合物颗粒、或DNA。对于本领域技术人员显而易见的是，本文用作活性剂的颗粒可以例如是其组分(即核酸、和脂质和/或聚合物)的非共价复合物。
重要的是，将在后续几年内对数亿人进行接种的抗SARS-CoV-2的信使核糖核酸(mRNA)疫苗，例如mRNA-1273(Moderna Inc.)和BNT162b2(Biontech SE/Pfizer Inc.)也都是基于含PEG的脂质纳米颗粒(LNP)，这是一种核酸-脂质颗粒形式，具有mRNA(由Aldosari等2021综述)。SARS-Cov-2疫苗研发，包括基于LNP的mRNA疫苗，由例如Dong等2020和Kaur等2020综述。LNP也参见例如美国专利US 7,404,969、US 8,058,069、US 9,364,435和US 9,404,127。此外，其他mRNA疫苗也都基于含有PEG的LNP。
这些基于含PEG的LNP、针对SARS-CoV-2的mRNA疫苗的临床使用导致一些人出现严重的过敏反应(参见例如Worm等2021，其也披露了疫苗的成分)。与这些疫苗相关的过敏反应也在Turk 2021中综述。疫苗中存在的PEG被认为是过敏反应最可能的罪魁祸首。
因此，在优选实施方式中，核酸是mRNA。相应地，活性剂可以例如是mRNA-脂质颗粒、mRNA-聚合物颗粒、mRNA-脂质-聚合物颗粒、或mRNA。
PEG也用于递送DNA和RNA寡核苷酸，包括反义-和剪接-校正的寡核苷酸、小分子干扰RNA(siRNA)和microRNA(miRNA)(Lu等2019综述)。因此，在一优选实施方式中，(颗粒的)核酸选自反义-寡核苷酸、剪接-校正的寡核苷酸、小分子干扰RNA(siRNA)和microRNA(miRNA)。
此外，PEG用于适体递送，包括DNA适体、RNA适体和spiegelmers(Jain等2020综述)。因此，在另一优选的实施方式中，(所述颗粒的)核酸是适体。
在另一优选实施方式中，核酸-聚合物颗粒是核酸-PEG-PEI共聚物颗粒，例如Lutz等2008所述，或核酸-肽颗粒(例如，其中核酸与PEG化阳离子肽复合)，例如Qiu 2019所述。
在另外的优选实施方式中，核酸-脂质颗粒是阳离子-脂质辅助的颗粒(cationiclipid-assisted nanoparticle，CLAN)，优选地，其中核酸是CRISPR/Cas9DNA质粒，例如Luo等2018所述。
在本发明的上下文中，活性剂还可以选自Park等(2019)公开的表1-4以及Swierczewska等(2015)的表1和表2中的任一个。
在多个实施方式中，个体中存在一种或多种抗PEG抗体。
高度优选的是，组合物在个体中是非免疫原性的(例如，它不包含刺激先天性或适应性免疫系统的佐剂或免疫刺激物质，例如佐剂或T细胞表位)。
本发明的组合物可以以每kg个体体重1-900mg，优选2-500mg，更优选3-250mg，甚至更优选4-100mg，尤其是5-50mg化合物的剂量给药，优选其中组合物被重复施用。这种给药可以是腹膜内、皮下、肌肉内或静脉内。
在一个方面，本发明涉及一种隔离(或消耗)个体中存在的一种或多种抗体的方法，包括
获得如本文所定义的药物组合物，其中该组合物在个体中是非免疫原性的，并且其中的一种或多种抗体是抗PEG抗体；和
向个体施用(特别是重复施用，例如至少两次，优选至少三次，更优选至少五次)药物组合物。
在本发明的上下文中，个体(待治疗)可以是非人动物，优选非人灵长类动物、绵羊、猪、狗或啮齿动物，特别是小鼠。
优选地，生物聚合物支架相对于个体是自体的，优选地其中生物聚合物支架是自体蛋白质(即当个体是小鼠时使用鼠白蛋白)。
在另一方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含本发明的化合物，并进一步包含本文公开的活性剂和任选的至少一种药学上可接受的赋形剂。
所述药物组合物优选是用于抑制针对活性剂的不需要的免疫反应，优选抗PEG抗体介导的免疫反应。
该组合物还优选在个体中是非免疫原性的。
在又一方面，本发明涉及在需要活性剂治疗的个体中抑制对活性剂治疗的(体液)免疫反应的方法，包括获得上述药物组合物；其中所述药物组合物的化合物在该个体中为非免疫原性的，和给该个体施用(优选重复施用)所述药物组合物。
在本发明的上下文中，为了提高生物利用度，优选本发明化合物在25℃水中的溶解度为至少0.1μg/ml，优选至少1μg/ml，更优选至少10μg/ml，甚至更优选至少100μg/ml，尤其是至少1000μg/ml。
如本文所用，术语“预防(preventing/prevention)”是指完全或几乎完全或至少在一种(优选显著的)程度上阻止疾病状态或病症在患者或受试者中发生，尤其是当患者或受试者或个体易患这种疾病状态或病症时。
本发明的药物组合物优选以(通常为水性)溶液、(通常为水性)悬浮液或(通常为水性)乳液形式提供。适用于本发明药物组合物的赋形剂是本领域技术人员在阅读本说明书后已知的，例如水(尤其是注射用水)、盐水、Ringer溶液、葡萄糖溶液、缓冲液、Hank溶液、囊泡形成性化合物(例如脂质)、不挥发油、油酸乙酯、含5％葡萄糖的盐水、增强等渗性和化学稳定性的物质、缓冲剂和防腐剂。其他合适的赋形剂包括本身不诱导患者(或个体)产生对患者(或个体)有害的抗体的任何化合物。例子是良好耐受的蛋白质、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚氨基酸和氨基酸共聚物。该药物组合物可以(作为药物)通过技术人员已知的适当程序(在阅读本说明书后)给予有需要的患者或个体(即患有或具有发生本文所述疾病的风险的患者或个体)。所述药物组合物的优选给药途径是肠胃外给药，特别是通过腹膜内、皮下、肌肉内和/或静脉内给药。对于肠胃外给药，本发明的药物组合物优选以可注射的剂量单位形式提供，例如作为溶液(通常为水溶液)、悬浮液或乳液，与上述定义的药学上可接受的赋形剂一起配制。然而，给药的剂量和方法取决于个体患者或待治疗的个体。所述药物组合物可以以从其他生物剂量方案中已知的任何合适的剂量施用或针对给定个体进行具体评估和优化。例如，所述病毒载体可以以1mg至10g，优选50mg至2g，特别是100mg至1g的量存在于药物组合物中。通常的剂量也可以根据患者的公斤体重来确定，例如优选的剂量范围是0.1mg至100mg/kg体重，尤其是1至10mg/kg体重(每次给药)。给药可以例如每天一次、隔天一次、每周一次或每两周一次。由于本发明药物组合物的优选给药方式是肠胃外给药，因此本发明的药物组合物优选为液体或易于溶解在液体中，例如无菌水、去离子水或蒸馏水或无菌等渗磷酸盐缓冲液(PBS)。优选地，1000μg(干重)的这种组合物包含或组成为0.1-990μg、优选1-900μg、更优选10-200μg化合物和任选1-500μg、优选1-100μg、更优选5-15μg(缓冲)盐(优选在最终体积中产生等渗缓冲液)，和任选0.1-999.9μg，优选100-999.9μg，更优选200-999μg其他赋形剂。优选地，将100mg这样的干组合物溶于无菌水、去离子/蒸馏水或无菌等渗磷酸盐缓冲液(PBS)中以产生0.1-100ml，优选0.5-20ml，更优选1-10ml的最终体积。
对技术人员显而易见的是，本文所述的活性剂和药物也可以以盐形式(即作为活性剂的药学上可接受的盐)给药。因此，本文对活性剂的任何提及也应包括其任何药学上可接受的盐形式。
在本发明上下文中，用于将PEG链连接至生物聚合物支架(例如，通过“Bioconjugate Techniques”,Greg T.Hermanson所述的技术)的结合/偶联化学也可以选自本领域技术人员已知的反应。生物聚合物支架本身可以重组生产或从天然来源获得。
在本文中，术语“特异于”—如“分子A特异于分子B”—意指分子A对分子B比对个体体内的其他分子有结合优势。通常，这意味着分子A(例如抗体)对于分子B(例如抗原，特别是其结合表位)的解离常数(也称为“亲和力”)低于(即“强于”)1000nM，优选低于100nM，更优选低于50nM，甚至更优选低于10nM，尤其低于5nM。
本发明还涉及以下实施方式：
实施方式1.一种化合物，包含
-生物聚合物支架和
-一个或多个PEG链。
实施方式2.实施方式1的化合物，其中所述一个或多个PEG链包含至少两个、优选至少三个、更优选至少五个、甚至更优选至少十个或甚至至少二十个PEG链。
实施方式3.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有100-10000Da的分子量。
实施方式4.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有200-8000Da的分子量。
实施方式5.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有300-6000Da的分子量。
实施方式6.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有400-5000Da的分子量。
实施方式7.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有500-4000Da的分子量。
实施方式8.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有600-3000Da的分子量。
实施方式9.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有700-2500Da的分子量。
实施方式10.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有小于10000Da的分子量。
实施方式11.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有小于9000Da的分子量。
实施方式12.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有小于8000Da的分子量。
实施方式13.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有小于7000Da的分子量。
实施方式14.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有小于6000Da的分子量。
实施方式15.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有小于5000Da的分子量。
实施方式16.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有小于4000Da的分子量。
实施方式17.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有小于3000Da的分子量。
实施方式18.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有小于2500Da的分子量。
实施方式19.实施方式1或2的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有1500-2500Da的分子量。
实施方式20.实施方式1至19中任一项的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有游离甲氧基端基或游离羟基端基。
实施方式21.实施方式1至19中任一项的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有游离甲氧基端基。
实施方式22.实施方式1至19中任一项的化合物，其中所述一个或多个PEG链中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其是每一个，具有游离羟基端基。
实施方式23.实施方式1至22中任一项所述的化合物，其中所述生物聚合物支架是蛋白质，优选哺乳动物蛋白质，例如人蛋白质、非人灵长类动物蛋白质、绵羊蛋白质、猪蛋白质、狗蛋白质或啮齿动物蛋白质。
实施方式24.实施方式23的化合物，其中所述生物聚合物支架为球蛋白。
实施方式25.实施方式24的化合物，其中所述生物聚合物支架选自免疫球蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白和β-球蛋白。
实施方式26.实施方式25的化合物，其中所述生物聚合物支架选自免疫球蛋白G、触珠蛋白和转铁蛋白。
实施方式27.实施方式26的化合物，其中所述生物聚合物支架为转铁蛋白。
实施方式28.实施方式23的化合物，其中所述生物聚合物支架为白蛋白。
实施方式29.实施方式23的化合物，其中的生物聚合物支架是抗-CD163抗体(即特异于CD163蛋白的抗体)或其CD-163结合片段。
实施方式30.实施方式29的化合物，其中抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于人CD163和/或特异于CD163的胞外区，优选特异于CD163的SRCR域，更优选特异于CD163的SRCR域1-9中的任一个，甚至更优选特异于CD163的SRCR域1-3中的任一个，尤其是特异于CD163的SRCR域1。
实施方式31.实施方式29的化合物，其中抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于以下肽之一：
由7-25个、优选8-20个、甚至更优选9-15个、特别是10-13个氨基酸组成的肽，其中该肽包含氨基酸序列CSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEA(SEQ ID NO:3)或其7-24个氨基酸的片段，
由7-25个、优选8-20个、甚至更优选9-15个、尤其是10-13个氨基酸组成的肽，其中该肽包含氨基酸序列DHVSCRGNESALWDCKHDGWG(SEQ ID NO：13)或其7-20个氨基酸的片段，或
由7-25个、优选8-20个、甚至更优选9-15个、尤其是10-13个氨基酸组成的肽，其中该肽包含氨基酸序列SSLGGTDKELRLVDGENKCS(SEQ ID NO:24)或其7-19个氨基酸的片段。
实施方式32.实施方式31的化合物，其中抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于包含氨基酸序列ESALW(SEQ ID NO:14)或ALW的肽。
实施方式33.实施方式31的化合物，其中抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于包含氨基酸序列GRVEVKVQEEW(SEQ ID NO:4)、WGTVCNNGWS(SEQ ID NO:5)或WGTVCNNGW(SEQID NO：6)的肽。
实施方式34.实施方式31的化合物，其中抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于包含氨基酸序列SSLGGTDKELR(SEQ ID NO:25)或SSLGG(SEQ ID NO:26)的肽。
实施方式35.实施方式1至34中任一项的化合物，其中所述化合物在哺乳动物，优选在人、非人灵长类、绵羊、猪、狗或啮齿动物中，是非免疫原性的。
实施方式36.实施方式1至35中任一项的化合物，其中所述化合物用于在个体中，优选在个体的血流中体内隔离(或体内消耗或体内阻断)至少一种抗PEG抗体和/或者用于在该个体中，优选在该个体血流中，降低至少一种抗PEG抗体的滴度。
实施方式37.实施方式1至36中任一项所述的化合物，其中一个或多个PEG链中的每一个共价结合至生物聚合物支架，优选各自通过接头结合。
实施方式38.实施方式1至36中任一项的化合物，其中一个或多个PEG链的至少一部分经由至少一个接头共价结合至生物聚合物支架。
实施方式39.实施方式37或38的化合物，其中的接头包含肽或单个氨基酸例如半胱氨酸。
实施方式40.实施方式39的化合物，其中的接头包含肽。
实施方式41.实施方式40的化合物，其中所述肽的序列长度为2-13个氨基酸，优选3-11个氨基酸，更优选4-9个氨基酸，尤其是5-8个氨基酸。
实施方式42.实施方式40或41的化合物，其中肽是线性的或环化的。
实施方式43.实施方式40至42中任一项的化合物，其中所述肽在哺乳动物中，优选在人、非人灵长类、绵羊、猪、狗或啮齿动物中，是非免疫原性的。
实施方式44.实施方式40至43中任一项的化合物，其中所述肽含有至少一个赖氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，特别是至少五个赖氨酸残基；或其中所述肽含有至少一个酪氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，特别是至少五个酪氨酸残基；或者其中所述肽包含至少一个半胱氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，尤其是至少五个半胱氨酸残基。
实施方式45.实施方式40至44中任一项的化合物，其中所述肽含有至少一个甘氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，特别是至少五个甘氨酸残基。
实施方式46.实施方式40至45中任一项的化合物，其中所述肽具有末端半胱氨酸残基。
实施方式47.实施方式40至46中任一项的化合物，其中肽包含氨基酸序列(X1-(X2)m)n，其中m是1至5、优选2至4的整数，其中n是1至5、优选2至5的整数；
实施方式48.实施方式47的化合物，其中独立地对于每次出现，X1是赖氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、组氨酸或半胱氨酸，并且独立地对于每次出现，X2是并非X1的任何其他氨基酸，优选甘氨酸。
实施方式49.实施方式38至48中任一项的化合物，其中所述部分占所述一个或多个PEG链的至少10％，优选至少20％，更优选至少30％，甚至更优选至少40％，还甚至更优选至少50％，甚至75％，尤其是全部。
实施方式50.实施方式38至49中任一项的化合物，其中至少两个、优选至少三个、更优选至少四个、特别是至少五个PEG链结合至所述至少一个接头中的单个接头，优选结合至所述接头的肽。
实施方式51.实施方式1至50中任一项的化合物，其中生物聚合物支架是人转铁蛋白。
实施方式52.实施方式1至51中任一项的化合物，其中所述化合物在人体内为非免疫原性的。
实施方式53.一种药物组合物，包含实施方式1至52中任一项所述的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。
实施方式54.实施方式53的药物组合物，其中所述组合物制备用于腹膜内、皮下、肌肉内和/或静脉内给药和/或其中所述组合物用于重复给药。
实施方式55.实施方式53或54的药物组合物，其中组合物中PEG链与生物聚合物支架的摩尔比为2:1至100:1，优选3:1至90:1，更优选4:1到80:1，甚至更优选5:1到70:1，再更优选6:1到60:1，尤其是7:1到50:1或甚至8:10到40:1。
实施方式56.实施方式53至55中任一项的药物组合物，用于疗法中。
实施方式57.实施方式56的用途的药物组合物，用于抑制个体对活性剂治疗的免疫反应，其中活性剂包含至少一种PEG，特别是其中活性剂被PEG化；优选其中药物组合物先于活性剂或与活性剂同时施用，更优选其中药物组合物在96小时窗口期内、优选在72小时窗口期内、更优选在48小时窗口期内、甚至更优选在36小时窗口期内、甚至更优选在24小时窗口期内、尤其是在18小时窗口期内或甚至在12小时窗口期内给药至少两次；尤其在该窗口期之后的24小时内，优选12小时内给予活性剂。
实施方式58.实施方式56的用途的药物组合物，用于在个体中抑制对活性剂的中和，特别是加速血液清除，其中该活性剂包含至少一种PEG，特别是其中该活性剂被PEG化；优选地，其中药物组合物先于活性剂或与活性剂同时施用，更优选其中药物组合物在96小时窗口期内、优选在72小时窗口期内、更优选在48小时窗口期内、甚至更优选在36小时窗口期内、甚至更优选在24小时窗口期内、尤其是在18小时窗口期内或甚至在12小时窗口期内给药至少两次；尤其在该窗口期之后的24小时内，优选12小时内给予活性剂。
实施方式59.实施方式57或58的用途的药物组合物，其中活性剂是蛋白质或肽，优选活性剂选自酶、酶抑制剂、抗体、抗体片段、抗体模拟物、抗体-药物偶联物、激素、生长因子、凝血因子和细胞因子；或其中活性剂是核酸-脂质颗粒、核酸-聚合物颗粒、核酸-脂质-聚合物颗粒、或核酸，或其中活性剂是病毒载体，例如用于基因疗法或疫苗接种的病毒载体；特别地，活性剂选自表1中列出的活性剂(由INN指定)、pegvorhyaluronidase alfa、pegunigalsidase alfa、PEG化精氨酸酶(如BCT-100)、PEG化精氨酸脱氨酶(如ADI PEG-20)、PEG化甲硫氨酸酶和表2列出的PEG化形式的酶。
实施方式60.实施方式57至59中任一项的用途的药物组合物，其中所述个体中存在一种或多种抗PEG抗体。
实施方式61.实施方式57至60中任一项的药物组合物，其中所述组合物在所述个体中是非免疫原性的。
实施方式62.实施方式57至61中任一项的药物组合物，其中所述组合物的给药剂量为所述个体每公斤体重有1-900mg、优选2-500mg、更优选3-250mg、甚至更优选4-100mg、尤其是5-50mg的化合物。
实施方式63.实施方式57至62中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物通过腹膜内、皮下、肌肉内或静脉内给药。
实施方式64.一种隔离(或消耗)个体中存在的一种或多种抗体的方法，包括
获得实施方式53至63中任一项所定义的药物组合物，其中所述组合物在个体中是非免疫原性的，并且其中的一种或多种抗体是抗PEG抗体；和
向该个体施用所述药物组合物；
优选所述施用在施用活性剂之前或同时，所述活性剂诸如病毒载体或蛋白质或肽，特别是选自酶、酶抑制剂、抗体、抗体片段、抗体模拟物、抗体-药物偶联物、激素、生长因子、凝血因子和细胞因子(尤其活性剂选自表1中列出的由INN指定的活性剂、pegvorhyaluronidase alfa、pegunigalsidase alfa、PEG化精氨酸酶(如BCT-100)、PEG化精氨酸脱氨酶(如ADI PEG-20)、PEG化甲硫氨酸酶和表2列出的PEG化形式的酶)，或诸如核酸-脂质颗粒、核酸-聚合物颗粒、核酸-脂质-聚合物颗粒、或核酸，并且其中活性剂包含至少一种PEG，尤其活性剂是PEG化的。
实施方式65.实施方式64的方法，其中所述个体为非人动物，优选非人灵长类动物、绵羊、猪、狗或啮齿动物，尤其是小鼠。
实施方式66.实施方式64或65的方法，其中所述生物聚合物支架相对于个体而言是自体的，优选所述生物聚合物支架是自体蛋白质。
实施方式67.实施方式64至66中任一项的方法，其中所述组合物经腹膜内、皮下、肌内或静脉内施用。
实施方式68.一种药物组合物，其包含实施方式1至52中任一项的化合物，还包含活性剂，其中所述活性剂包含至少一种PEG，尤其所述活性剂是PEG化的。
实施方式69.实施方式68的药物组合物，其中活性剂是核酸-脂质颗粒、核酸-聚合物颗粒、核酸-脂质-聚合物颗粒、或核酸，或者是病毒载体或蛋白质或肽，特别是选自酶、酶抑制剂、抗体、抗体片段、抗体模拟物、抗体-药物偶联物、激素、生长因子、凝血因子和细胞因子；尤其活性剂选自表1中列出的活性剂(由INN指定)、pegvorhyaluronidase alfa、pegunigalsidase alfa、PEG化精氨酸酶(如BCT-100)、PEG化精氨酸脱氨酶(如ADI PEG-20)、PEG化甲硫氨酸酶和表2列出的PEG化形式的酶。
实施方式70.实施方式68或69任一项的药物组合物，所述组合物制备用于静脉内给药。
实施方式71.实施方式68至71任一项的药物组合物，所述组合物为水溶液。
实施方式72.实施方式68至71任一项的药物组合物，用于抑制针对所述活性剂的免疫反应，优选抗PEG抗体介导的免疫反应。
实施方式73.实施方式72的用途的药物组合物，其中所述组合物在所述个体中是非免疫原性的。
实施方式74.一种在需要活性剂治疗的个体中抑制对活性剂治疗的免疫反应的方法，包括
获得实施方式68至74中任一项所定义的疫苗或基因疗法组合物；其中所述疫苗或基因疗法组合物的化合物在个体中是非免疫原性的，和
向个体施用该疫苗或基因疗法组合物。
实施方式75.实施方式74的方法，其中所述个体为人。
实施方式76.实施方式75或76的方法，其中所述生物聚合物支架对于所述个体而言是自体的，优选所述生物聚合物支架是自体蛋白质。
实施方式77.实施方式74至76任一项的方法，其中所述组合物经腹膜内、皮下、肌内或静脉内施用。
由于相当一部分患者中事先存在的和被诱导的抗PEG抗体，本领域提出了替代的蛋白质修饰，以降低免疫原性和增加生物药物的稳定性，并避免加速的血液清除。具体地，有人建议用失序(disordered)和亲水性的多肽修饰活性剂(即通过XTEN化或PAS化)，通过聚唾液酸化、或通过甲基化(特别是赖氨酸的还原甲基化，这可以增加蛋白质药物的胞质稳定性)来修饰活性剂。此外，还有人提出碳水化合物附着蛋白质(糖基化)。尽管通常认为在需要保护蛋白质药物免受免疫系统影响时是有益的，但这些修饰中有多个仍然被免疫系统识别为外来的，有可能与事先存在的抗体结合或诱导特异性抗体(由Zinsli 2020综述)。
XTEN化例如在Podust等以及WO 2013/130683 A2中详述。如本文所用，XTEN化被理解为用多肽进行修饰，所述多肽具有以下特征：
a.所述多肽包含36至3000个氨基酸残基；和
b.甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)和脯氨酸(P)残基的总和构成所述多肽总体氨基酸残基的约90％以上。
此外，所述多肽优选具有至少一个，更优选至少两个，甚至更优选至少三个，尤其是全部的特征c-f(也参见WO 2013/130683 A2)：
c.多肽序列基本上是非重复的，致使(i)多肽序列不包含三个相同的连续氨基酸，除非氨基酸是丝氨酸，并且(ii)多肽序列的至少80％由非重叠序列基序组成，每个序列基序包含至少9至14个氨基酸残基，并且每个基序由4至6个选自甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、谷氨酸(E)和脯氨酸(P)的氨基酸组成，其中任何两个连续的氨基酸残基在每个序列基序中的出现不超过两次；
d.多肽序列具有大于90％的随机卷曲形成，如GOR算法所确定；
e.多肽序列具有不到2％的alpha螺旋和2％的beta-折叠，如Chou-Fasman算法所确定的；和
f.多肽序列用TEPITOPE算法分析时缺少预测的T细胞表位，其中对XTEN序列内部表位的TEPITOPE算法预测是基于-6的评分。
优选应用WO 2013/130683 A2公开的GOR算法、Chou-Fasman算法和TEPITOPE算法。
PAS化例如在Binder和Skerra,2017以及WO 2008/155134 A1和WO 2011/144756A1中详述。如本文所用，PAS化被理解为用多肽修饰，该多肽包含至少50个、优选至少100个氨基酸残基的氨基酸序列形成随机卷曲构象。特别地，该氨基酸序列由丙氨酸、脯氨酸、和任选的丝氨酸残基组成。在此上下文中，术语“随机卷曲”应如WO 2008/155134 A1中定义的那样理解。
事实证明，原本为含有PEG的活性剂研发的发明概念也可以应用于这些其他修改。携带这些上述半分子的本发明化合物非常适合通过与这些上述屏蔽半分子结合而去除导致修饰的活性剂(特别是被这些半分子屏蔽的生物制品)被加速血液清除的抗体。
因此，本发明还涉及以下实施方式：
实施方式A1.一种化合物包含
-生物聚合物支架和
-一个或多个选自PEG化、XTEN化、PAS化、甲基化、糖基化和聚唾液酸化的修饰。
实施方式A2.实施方式A1的化合物，其中所述一个或多个修饰包括至少两个、优选至少三个、更优选至少五个、甚至更优选至少十个或甚至至少二十个修饰。
实施方式A3.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有100-10000Da的分子量。
实施方式A4.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有200-8000Da的分子量。
实施方式A5.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有300-6000Da的分子量。
实施方式A6.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有400-5000Da的分子量。
实施方式A7.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有500-4000Da的分子量。
实施方式A8.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有600-3000Da的分子量。
实施方式A9.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有700-2500Da的分子量。
实施方式A10.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有小于10000Da的分子量。
实施方式A11.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有小于9000Da的分子量。
实施方式A12.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有小于8000Da的分子量。
实施方式A13.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有小于7000Da的分子量。
实施方式A14.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有小于6000Da的分子量。
实施方式A15.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有小于5000Da的分子量。
实施方式A16.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有小于4000Da的分子量。
实施方式A17.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有小于3000Da的分子量。
实施方式A18.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有小于2500Da的分子量。
实施方式A19.实施方式A1或A2的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有1500-2500Da的分子量。
实施方式A20.实施方式A1至A19中任一项的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有游离端基，例如游离甲氧基端基或游离羟基端基。
实施方式A21.实施方式A1至A19中任一项的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有游离氨基端基或游离羧基端基。
实施方式A22.实施方式A1至A19中任一项的化合物，其中所述一个或多个修饰中的至少一个，优选至少10％，更优选至少20％，甚至更优选至少40％，还更优选至少60％，还甚至更优选至少80％或甚至至少90％，尤其每一个具有游离碳水化合物端基或游离唾液酸端基。
实施方式A23.实施方式A1至A22中任一项的化合物，其中生物聚合物支架是蛋白质，优选哺乳动物蛋白质，例如人蛋白质、非人灵长类蛋白质、绵羊蛋白质、猪蛋白质、狗蛋白质或啮齿动物蛋白质。
实施方式A24.实施方式A23的化合物，其中生物聚合物支架是球蛋白。
实施方式A25.实施方式A24的化合物，其中生物聚合物支架选自免疫球蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白和β-球蛋白。
实施方式A26.实施方式A25的化合物，其中生物聚合物支架选自免疫球蛋白G、触珠蛋白和转铁蛋白。
实施方式A27.实施方式A26的化合物，其中生物聚合物支架是转铁蛋白。
实施方式A28.实施方式A23的化合物，其中生物聚合物支架是白蛋白。
实施方式A29.实施方式A23的化合物，其中生物聚合物支架是抗CD163抗体(即特异于CD163蛋白的抗体)或其CD163结合片段。
实施方式A30.实施方式A29的化合物，其中抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于人CD163和/或特异于CD163的胞外区，优选特异于CD163的SRCR结构域，更优选特异于CD163的SRCR结构域1-9中的任一个，甚至更优选CD163的SRCR结构域1-3中的任一个，尤其是CD163的SRCR结构域1。
实施方式A31.实施方式A29的化合物，其中抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于以下肽之一：
由7-25个、优选8-20个、甚至更优选9-15个、特别是10-13个氨基酸组成的肽，其中该肽包含氨基酸序列CSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEA(SEQ ID NO:3)或其7-24个氨基酸的片段，
由7-25个、优选8-20个、甚至更优选9-15个、尤其是10-13个氨基酸组成的肽，其中该肽包含氨基酸序列DHVSCRGNESALWDCKHDGWG(SEQ ID NO：13)或其7-20个氨基酸的片段，或
由7-25个、优选8-20个、甚至更优选9-15个、尤其是10-13个氨基酸组成的肽，其中该肽包含氨基酸序列SSLGGTDKELRLVDGENKCS(SEQ ID NO:24)或其7-19个氨基酸的片段。
实施方式A32.实施方式A31的化合物，其中抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于含氨基酸序列ESALW(SEQ ID NO：14)或ALW的肽。
实施方式A33.实施方式A31的化合物，其中抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于含氨基酸序列GRVEVKVQEEW(SEQ ID NO：4)、WGTVCNNGWS(SEQ ID NO：5)或WGTVCNNGW(SEQID NO：6)的肽。
实施方式A34.实施方式A31的化合物，其中抗CD163抗体或其CD163结合片段特异于含氨基酸序列SSLGGTDKELR(SEQ ID NO：25)或SSLGG(SEQ ID NO：26)的肽。
实施方式A35.实施方式A1至A34中任一项的化合物，其中所述化合物在哺乳动物中，优选在人、非人灵长类、绵羊、猪、狗或啮齿动物中是非免疫原性的。
实施方式A36.实施方式A1至A35中任一项的化合物，其中所述化合物用于体内隔离(或体内消耗或体内阻断)特异于个体中，优选该个体的血流中的一个或多个修饰的至少一种抗体，和/或用于降低特异于个体中，优选该个体的血流中的一个或多个修饰的至少一种抗体的滴度。
实施方式A37.实施方式A1至A36中任一项的化合物，其中所述一个或多个修饰中的每一个都共价结合至生物聚合物支架，优选各自通过接头结合。
实施方式A38.实施方式A1至A36中任一项的化合物，其中所述一个或多个修饰的至少一部分经由至少一个接头共价结合至生物聚合物支架。
实施方式A39.实施方式A37或A38的化合物，其中所述接头包含肽或单个氨基酸例如半胱氨酸。
实施方式A40.实施方式A39的化合物，其中所述接头包含肽。
实施方式A41.实施方式A40的化合物，其中所述肽的序列长度为2-13个氨基酸，优选3-11个氨基酸，更优选4-9个氨基酸，尤其是5-8个氨基酸。
实施方式A42.实施方式A40或A41的化合物，所述肽是线性或环化的。
实施方式A43.实施方式A40至A42中任一项的化合物，其中所述肽在哺乳动物中，优选在人、非人灵长类、绵羊、猪、狗或啮齿动物中是非免疫原性的。
实施方式A44.实施方式A40至A43中任一项的化合物，其中所述肽含有至少一个赖氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，特别是至少五个赖氨酸残基；或其中所述肽含有至少一个酪氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，特别是至少五个酪氨酸残基；或者其中所述肽含有至少一个半胱氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，特别是至少五个半胱氨酸残基。
实施方式A45.实施方式A40至A44中任一项的化合物，其中所述肽含有至少一个甘氨酸残基，优选至少两个，更优选至少三个，甚至更优选至少四个，尤其是至少五个甘氨酸残基。
实施方式A46.实施方式A40至A45中任一项的化合物，其中所述肽具有末端半胱氨酸残基。
实施方式A47.实施方式A40至A46中任一项的化合物，其中肽包含氨基酸序列(X1-(X2)m)n，其中m是1至5、优选2至4的整数，其中n是1至5、优选2至5的整数；
实施方式A48.实施方式A47的化合物，其中独立地对于每次出现，X 1是赖氨酸、酪氨酸、色氨酸、甲硫氨酸、组氨酸或半胱氨酸，并且独立地对于每次出现，X2是并非X1的任何其他氨基酸，优选甘氨酸。
实施方式A49.实施方式A38至A48中任一项的化合物，其中所述部分包含所述一个或多个修饰中的至少10％，优选至少20％，更优选至少30％，甚至更优选至少40％，还甚至更优选至少50％或甚至75％，尤其是全部。
实施方式A50.实施方式A38至A49中任一项的化合物，其中至少两个、优选至少三个、更优选至少四个、特别是至少五个修饰与所述至少一个接头中的单个接头、优选该接头的肽结合。
实施方式A51.实施方式A1至A50中任一项的化合物，其中生物聚合物支架是人转铁蛋白。
实施方式A52.实施方式A1至A51中任一项的化合物，其中所述化合物在人类中是非免疫原性的。
实施方式A53.一种药物组合物，其包含实施方式A1至A52中任一项的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。
实施方式A54.实施方式A53的药物组合物，其中该组合物被制备用于腹膜内、皮下、肌内和/或静脉内施用和/或其中该组合物用于重复施用。
实施方式A55.实施方式A53或A54的药物组合物，其中所述组合物中修饰与生物聚合物支架的摩尔比为2:1至100:1，优选3:1至90:1，更优选4:1至80:1，甚至更优选5:1至70:1，甚至更优选6:1至60:1，尤其是7:1至50:1或甚至8:10至40:1。
实施方式A56.实施方式A53至A55中任一项的药物组合物，用于疗法中。
实施方式A57.实施方式A56的用途的药物组合物，用于抑制个体对活性剂治疗的免疫反应，所述活性剂包含一个或多个修饰中的至少一个；优选其中药物组合物先于活性剂或与活性剂同时施用，更优选药物组合物在96小时窗口期内、优选在72小时窗口期内、更优选在48小时窗口期内、甚至更优选在36小时窗口期内、甚至更优选在24小时窗口期内、尤其是在18小时窗口期内或甚至在12小时窗口期内给药至少两次；尤其在该窗口期之后的24小时内，优选12小时内给予所述活性剂。
实施方式A58.实施方式A56的用途的药物组合物，用于在个体中抑制对活性剂的中和，特别是加速的血液清除，其中所述活性剂包含一个或多个修饰中的至少一个；优选所述药物组合物先于活性剂或与活性剂同时施用，更优选所述药物组合物在96小时窗口期内、优选在72小时窗口期内、更优选在48小时窗口期内、甚至更优选在36小时窗口期内、甚至更优选在24小时窗口期内、尤其是在18小时窗口期内或甚至在12小时窗口期内给药至少两次；尤其在该窗口期之后的24小时内，优选12小时内给予活性剂。
实施方式A59.实施方式A57或A58的用途的药物组合物，其中活性剂是蛋白质或肽，优选活性剂选自酶、酶抑制剂、抗体、抗体片段、抗体模拟物、抗体-药物偶联物、激素、生长因子、凝血因子和细胞因子；或活性剂是核酸-脂质颗粒、核酸-聚合物颗粒、核酸-脂质-聚合物颗粒、或核酸，或活性剂是病毒载体，例如用于基因疗法或疫苗接种的病毒载体；尤其活性剂选自表1中列出的活性剂(由INN指定)、pegvorhyaluronidase alfa、pegunigalsidase alfa、PEG化精氨酸酶(如BCT-100)、PEG化精氨酸脱氨酶(如ADI PEG-20)、PEG化甲硫氨酸酶和表2列出的PEG化形式的酶。
实施方式A60.实施方式A57至A59中任一项的用途的药物组合物，其中特异于所述一个或多个修饰的一种或多种抗体存在于所述个体中。
实施方式A61.实施方式A57至A60中任一项的用途的药物组合物，其中该组合物在所述个体中是非免疫原性的。
实施方式A62.实施方式A57至A61中任一项的用途的药物组合物，其中所述组合物以所述个体每公斤体重1-900mg、优选2-500mg、更优选3-250mg、甚至更优选4-100mg、尤其5-50mg化合物的剂量施用。
实施方式A63.实施方式A57至A62中任一项的用途的药物组合物，其中该组合物通过腹膜内、皮下、肌内或静脉内施用。
实施方式A64.隔离(或消耗)存在于个体中的一种或多种抗体的方法，包括
获得实施方式A53至A63中任一项所定义的药物组合物，其中该组合物在该个体中是非免疫原性的、并且所述一种或多种抗体特异于一个或多个修饰；和
向该个体施用该药物组合物；
优选所述施用在施用活性剂之前或同时，所述活性剂诸如病毒载体或蛋白质或肽，特别是选自酶、酶抑制剂、抗体、抗体片段、抗体模拟物、抗体-药物偶联物、激素、生长因子、凝血因子和细胞因子(尤其活性剂选自表1中列出的由INN指定的活性剂、pegvorhyaluronidase alfa、pegunigalsidase alfa、PEG化精氨酸酶(如BCT-100)、PEG化精氨酸脱氨酶(如ADI PEG-20)、PEG化甲硫氨酸酶和表2列出的PEG化形式的酶)，或诸如核酸-脂质颗粒、核酸-聚合物颗粒、核酸-脂质-聚合物颗粒、或核酸，并且活性剂包含所述一个或多个修饰中的至少一个。
实施方式A65.实施方式A64的方法，其中所述个体是非人类动物，优选非人类灵长类、绵羊、猪、狗或啮齿动物，特别是小鼠。
实施方式A66.实施方式A64或A65的方法，其中生物聚合物支架相对于所述个体是自体的，优选生物聚合物支架是自体蛋白质。
实施方式A67.实施方式A64至A66中任一项的方法，其中所述组合物经腹膜内、皮下、肌内或静脉内施用。
实施方式A68.药物组合物，其包含实施方式A1至A52中任一项的化合物且还包含活性剂，所述活性剂包含一个或多个修饰中的至少一个。
实施方式A69.实施方式A68的药物组合物，其中活性剂是核酸-脂质颗粒、核酸-聚合物颗粒、核酸-脂质-聚合物颗粒、或核酸、或病毒载体或蛋白质或肽，尤其选自酶、酶抑制剂、抗体、抗体片段、抗体模拟物、抗体-药物偶联物、激素、生长因子、凝血因子和细胞因子；尤其活性剂选自表1中列出的活性剂(由INN指定)、pegvorhyaluronidase alfa、pegunigalsidase alfa、PEG化精氨酸酶(如BCT-100)、PEG化精氨酸脱氨酶(如ADI PEG-20)、PEG化甲硫氨酸酶和表2列出的PEG化形式的酶。
实施方式A70.实施方式A68至A69中任一项的药物组合物，其中所述组合物被制备用于静脉内施用。
实施方式A71.实施方式A68至A71中任一项的药物组合物，其中所述组合物是水溶液。
实施方式A72.实施方式A68至A71中任一项的药物组合物，用于抑制免疫反应，优选由针对活性剂的、特异于一个或多个修饰的抗体介导的免疫反应。
实施方式A73.实施方式A72的用途的药物组合物，其中该组合物在该个体中是非免疫原性的。
实施方式A74.在需要活性剂治疗的个体中抑制对活性剂治疗的免疫反应的方法，包括
获得实施方式A68至A74中任一项所定义的药物组合物；其中所述药物组合物的化合物在所述个体中是非免疫原性的，并且
向所述个体施用所述药物组合物。
实施方式A75.实施方式A74的方法，其中所述个体是人。
实施方式A76.实施方式A74或A75的方法，其中生物聚合物支架相对于所述个体是自体的，优选生物聚合物支架是自体蛋白质。
实施方式A77.实施方式A74至A76中任一项的方法，其中所述组合物经腹膜内、皮下、肌内或静脉内施用。
本发明通过以下附图和实施例进一步举例说明，但不限于此。在以下附图和实施例的上下文中，本发明的化合物也称为“选择性抗体消耗化合物”(SADC)。
图1：SADCs成功地降低了不需要的抗体的滴度。每种SADC在时间点0给已经被抗指定抗原的肽预免疫的Bal b/c小鼠腹腔注射。每页的上图显示根据检测相应抗体的标准ELISA测得的相对于OD值(y轴)的抗肽滴度(0.5x逐步稀释；X轴显示log(X)稀释度)。每页的下图显示注射每种SADC之前(即-48h和-24h的滴度)和施用每种SADC之后(即+24h、+48h和+72h；示于x轴)的滴度Log IC50(y轴))。(A)以白蛋白作为生物聚合物支架的化合物结合抗EBNA1的抗体(与先兆子痫相关)。小鼠用携带EBNA-1模型表位的肽疫苗进行预免疫。(B)以白蛋白作为生物聚合物支架的化合物结合抗人AChR蛋白MIR衍生肽的抗体(与重症肌无力相关)。小鼠用携带AChR MIR模型表位的肽疫苗进行预免疫。(C)以免疫球蛋白作为生物聚合物支架的化合物结合抗EBNA1的抗体(与先兆子痫相关)。小鼠用携带EBNA-1模型表位的肽疫苗进行预免疫。(D)以触珠蛋白作为生物聚合物支架的化合物结合抗EBNA1的抗体(与先兆子痫相关)。小鼠用携带EBNA-1模型表位的肽疫苗进行预免疫。(E)使用相同的基于免疫球蛋白的与针对图C实验中所用的EBNA1的抗体结合的SADC证明选择性。用无关的氨基酸序列预先免疫小鼠。没有发生滴度降低，证明了该化合物的选择性。
图2：SADCs是非免疫原性的，并且在重复注射到小鼠体内后不诱导抗体形成。动物C1-C4以及动物C5-C8腹腔注射两种不同的SADC。对照动物C接种了源自人AChR蛋白MIR的KLH-肽。分别使用BSA偶联肽探针T3-1、T9-1和E005(灰色条，如图所示)，在1:100稀释度用标准ELISA检测抗体滴度，可以证明，与疫苗处理的对照动物C相比，在用SADC处理的动物中不存在抗体诱导(y轴，OD 450nm)。
图3：用携带多拷贝的单价或二价肽的SADC在体外成功消耗抗体。携带单价或二价肽的SADC非常适合吸附抗体并因此消耗掉它们。“单价”表示肽单体与生物聚合物支架结合(即n＝1)，而“二价”表示肽二聚体与生物聚合物支架结合(即n＝2)。在本例中，二价肽是“同型二价”，即SADC的肽n-聚体是E006–间隔臂–E006)。
图4：用各种SADC生物聚合物支架在小鼠体内快速、选择性地消耗抗体。与模拟处理的对照组SADC-CTL(含有无关肽)相比，处理组在24小时时已经表现出快速且显著的抗体减少(特别是SADC-TF)。SADC具有白蛋白支架—SADC-ALB，SADC具有免疫球蛋白支架—SADC-IG，SADC具有触珠蛋白支架—SADC-HP，和SADC具有转铁蛋白支架—SADC-TF。
图5：在SADC注射后24小时通过SADC的肽部分检测血浆中的SADC。两种基于触珠蛋白支架的SADC(SADC-HP和SADC-CTL)均表现出相对较短的血浆半衰期，这代表了相比于具有其他生物聚合物支架的SADC(如SADC-ALB、SADC-IG或SADC-TF)的优势。SADC具有白蛋白支架—SADC-ALB，SADC具有免疫球蛋白支架—SADC-IG，SADC具有触珠蛋白支架—SADC-HP，和SADC具有转铁蛋白支架—SADC-TF。
图6：SADC注射后24小时检测血浆中的SADC-IgG复合物。基于触珠蛋白的SADC相比于具有其他生物聚合物支架的SADC的清除速度更快。SADC具有白蛋白支架—SADC-ALB，SADC具有免疫球蛋白支架—SADC-IG，SADC具有触珠蛋白支架—SADC-HP，和SADC具有转铁蛋白支架—SADC-TF。
图7：体外分析SADC-IgG复合物的形成。动物SADC-TF和–ALB显示出明显的免疫复合物形成和与C1q的结合，反映为强信号以及在1000ng/ml SADC-TF时因从抗原-抗体平衡过渡到抗原过量导致信号急剧下降。相比之下，在本试验中测量时，与SADC-HP或SADC-IG体外形成免疫复合物的效率要低得多。这些发现证实了以下发现：触珠蛋白支架优于其他SADC生物聚合物支架，因为其激活补体系统的倾向降低。SADC具有白蛋白支架—SADC-ALB，SADC具有免疫球蛋白支架—SADC-IG，SADC具有触珠蛋白支架—SADC-HP，和SADC具有转铁蛋白支架—SADC-TF。
图8：体外测定SADC对IgG的捕获。SADC-HP显示出比SADC-TF或SADC-ALB显著降低的体外抗体结合能力。SADC具有白蛋白支架—SADC-ALB，SADC具有免疫球蛋白支架—SADC-IG，SADC具有触珠蛋白支架—SADC-HP，和SADC具有转铁蛋白支架—SADC-TF。
图9：基于抗CD163抗体的生物聚合物支架的血液清除率。在小鼠模型中，mAbE10B10(特异于鼠CD163)比mAb Mac2-158(特异于人CD163而非鼠CD163，故作为本实验的阴性对照)更快地从血液循环中清除。
图10：PEG有效偶联至转铁蛋白生物聚合物支架以产生本发明的化合物。2.5μg人脱铁转铁蛋白(apo-transferrin)与PEG(10kDa、5kDa、2kDa、750Da)偶联，用SDS page分析。所有偶联物都显示依赖于其偶联的PEG分子大小的完全位移(泳道3-6，PEG大小分别为10kDa、5kDa、2kDa、750Da)，是与未偶联的脱铁转铁蛋白(泳道2)相比，后者勾画了未偶联的支架蛋白的迁移。起始人脱铁转铁蛋白带(泳道2)在偶联PEG后彻底消失(泳道3-6)，从而为使用PEG-SADC的功能性动物实验提供了质量证明和一致性检查。泳道1包含蛋白质序列梯。
图11：本发明化合物在体内选择性消除抗PEG抗体。出乎意料的，2kDa、5kDa和750Da PEG-SADC提供了有效且快速的抗PEG抗体信号降低。2kDa PEG-SADC配制剂最有效，导致持久的抗PEG抗体减少，直至时间点(T)为120小时处(T120)结束实验时为止。相比之下，10kDa PEG-SADC配制剂效果较差。重要的是，之前建议的游离PEG 10kDa配制剂(“PEG10k Da”，无生物聚合物支架)在相当的剂量下没有显示抗体信号的任何减弱。单独的生物聚合物支架(“hu-apo-TF”)也没有显示抗体信号的任何减弱。
图12：本发明的化合物是非免疫原性的。PEG-SADC在反复注射后未诱导任何可检测的抗PEG抗体增加。
图13：2kDa PEG-SADC和10kDa PEG-SADC的比较。在更长的观察期内，一项独立实验证实了图11所示的令人惊讶的结果。2kDa PEG-SADC配制剂最有效，导致持久的抗PEG抗体减少。相比之下，10kDa PEG-SADC配制剂仍可减少抗PEG抗体，但效果较差。
实施例
实施例1-8表明SADC非常适合选择性去除不需要的抗体(如结合肽表位的抗体所示，即在肽基SADC的基础上)。实施例9-11包含抗CD163抗体支架的更多细节。最后，SADC概念成功扩展到不需要的抗PEG抗体，如实施例12-16所示。
实施例1：SADCs有效地降低了不需要的抗体的滴度。
动物模型:为了提供人类适应症中具有可测量滴度的原型的(prototypic)不需要的抗体的体内模型，BALB/c小鼠用源自已建立的人类自身抗原或抗药物抗体的KLH偶联肽疫苗经标准实验性疫苗接种进行免疫。在通过标准肽ELISA进行滴度评估后，免疫动物用相应的测试SADC处理以证明SADC处理选择性降低了抗体。所有实验均按照相应动物伦理当局的指导方针进行。
用模型抗原免疫小鼠:雌性BALB/c小鼠(8-10周龄)由Janvier(法国)提供，维持12小时光照/12小时黑暗的循环，可以自由进食和饮水。皮下免疫接种KLH载体偶联的肽疫苗，以两周一次的间隔注射3次。KLH偶联物是用肽T3-2(SEQ ID NO.33:CGRPQKRPSCIGCKG)产生的，它代表了病毒抗原(EBNA-1)和内源性人类受体抗原(即胎盘GPR50蛋白，显示与先兆子痫有关(Elliott等人))之间的分子模拟的一个例子。为了证实这种方法的普遍性，使用源自自身免疫病重症肌无力的较大抗原肽对具有人类自身表位的小鼠进行免疫接种。与肽T3-2类似，动物用源自人类AChR蛋白的MIR(主要免疫原性区域)的肽T1-1(SEQ ID NO.34：LKWNPDDYGGVKKIHIPSEKGC)进行免疫，该肽在所述疾病的发病机制中起重要作用(Luo等)。T1-1肽用于以人类AChR自身抗原的替代性部分模型表位对小鼠进行免疫。肽T8-1(SEQ IDNO.35：DHTLYTPYHTHPG)用于免疫对照小鼠以提供对照滴度以证明该系统的选择性。为了制备疫苗偶联物，KLH载体(Sigma)根据制造商的说明用磺基GMBS(Cat.Nr.22324Thermo)激活，然后添加N-端或C-端半胱氨酸化的肽T3-2和T1-1，最后添加再注射至所述动物的肋腹。疫苗T3-2和T1-1的剂量为每次注射100ul体积中的15μg偶联物，所含(InvivoGen VAC-Alu-250)的终浓度为每剂1％。
产生原型SADCs:为了测试T3-2和T1-1 SADC免疫的小鼠的选择性抗体降低活性，SADC用小鼠血清白蛋白(MSA)或小鼠免疫球蛋白(小鼠-Ig)作为生物聚合物支架来制备，以提供自体型生物聚合物支架(即不会诱导小鼠的任何免疫反应)，或以非自体型人类触珠蛋白作为生物聚合物支架(其在一次性注射后72小时内不会诱导同种异体反应)。N-端半胱氨酸化的SADC肽E049(SEQ ID NO.13：GRPQKRPSCIG)和/或C-端半胱氨酸化的SADC肽E006(SEQID NO.36：VKKIHIPSEKG)使用磺基-GMBS(Cat.Nr.22324Thermo)激活的MSA(Sigma；Cat.Nr.A3559)或-小鼠-Ig(Sigma,I5381)或-人触珠蛋白(Sigma H0138)根据制造商的说明而连接到所述支架，从而提供基于MSA、Ig和触珠蛋白的SADC，它们携带相应的半胱氨酸化肽，这些肽共价连接至相应的生物聚合物支架的赖氨酸。除了通过双功能氨基-至-巯基交联剂将半胱氨酸化肽与赖氨酸偶联外，所添加的半胱氨酸化SADC肽中的一部分直接与白蛋白支架蛋白的半胱氨酸的巯基反应，这可以通过用DTT处理所述偶联物、随后使用质谱法或任何其他检测游离肽的分析方法检测游离肽来检测。最后，这些SADC偶联物使用Pur-A-LyzerTM(Sigma)对水透析，然后冻干。在注射到动物体内之前，将冻干材料重悬于PBS中。
SADC的体内功能测试:将原型SADC、SADC-E049和SADC-E006腹腔注射(i.p.；作为人类和大型动物静脉注射的替代)到先前已用肽疫苗T3-2(携带EBNA-1模型表位)和肽疫苗T1-1(携带AChR MIR模型表位)免疫的小鼠中。应用剂量为50μl PBS中的30μg SADC偶联物。在腹腔注射SADC之前(-48h、-24h)和之后(+24h、+48h、+72h等)，分别使用毛细管微血细胞比容管，通过下颌下静脉穿刺进行采血。使用ELISA分析(见下文)，发现在本动物模型中，两种原型SADC都能够在至少72小时内明显降低滴度。因此可以得出结论，SADC可用于体内有效降低滴度。
滴度分析：肽ELISA按标准程序进行，使用96孔板(Nunc Medisorp板；Thermofisher，Cat Nr 467320)，室温包被BSA偶联肽(30nM，溶于PBS中)1小时，以及用合适的缓冲液(封闭缓冲液，1％ BSA，1x PBS；洗涤缓冲液，1xPBS/0,1％吐温；稀释缓冲液，1xPBS/0.1％ BSA/0,1％吐温)振荡保温。血清保温(在PBS中以1:50开始稀释；通常以1:3或1:2逐步滴定)后，结合的抗体用辣根过氧化物酶偶联山羊抗小鼠IgG(Fc)(JacksonImmunoresearch,115-035-008)检测。终止反应后，板在450nm处用TMB测量20分钟。使用以4参数逻辑回归模型拟合的曲线(GraphPad Prism)，根据厂商建议，从读数值计算EC50。相应地设置了上限和下限值的约束参数，提供了R2>0.98的曲线拟合质量水平。
图1A显示了小鼠模型中基于白蛋白的原型SADC候选物的体内选择性血浆降低活性的体内证据，该候选物结合抗EBNA1抗体，该抗体作为先兆子痫中自身抗体和模拟物的模型(Elliott等)。为了这些小鼠实验，使用了小鼠白蛋白，以避免对源自外来物种的蛋白质的任何反应。在6月龄Balb/c小鼠中通过标准的肽疫苗接种来诱导抗体滴度。下图表明，SADC注射前的滴度Log IC50(y轴)(即在-48小时和-24小时处的滴度)高于施用SADC后的滴度Log IC50(即注射后+24小时、+48小时和+72小时的滴度；时间显示在x轴)。
图1B显示了一个类似的例子，使用了针对另一疾病适应症的肽抗体结合部分的替代例子。小鼠模型中基于白蛋白的SADC的抗体降低活性，该小鼠模型已事先用源自人AChR蛋白MIR区域的另一种肽(Luo等)免疫，以模拟重症肌无力的情况。诱导的抗AChR-MIR区域的抗体滴度用作已知在重症肌无力中起致病作用的抗AChR-MIR自身抗体(Vincent等综述)的替代物。在施用SADC后观察到明显的滴度降低。
图1C和1D证实了包含备选生物聚合物支架的SADC变体的功能。具体地，图1C显示可以成功使用免疫球蛋白支架，而图1D证实了用触珠蛋白支架构建SADC。两个例子都显示了携带共价结合示例肽E049的SADC选择性降低抗体的体内证据。
尽管自体支架蛋白是首选，但用人触珠蛋白作为替代物产生了基于触珠蛋白的SADC。为了避免形成抗人-触珠蛋白抗体，在本实验条件下，每只小鼠仅单次注射SADC非自体支架触珠蛋白。正如预期的那样，在本实验条件下(即单次施用)，未观察到针对本替代性触珠蛋白同系物的抗体反应性。
图1E证实了SADC系统的选择性。携带肽E049的基于免疫球蛋白的SADC(即与图1C相同)不能降低由具有无关氨基酸序列、被指定为肽T8-1(SEQ ID NO.35：DHTLYTPYHTHPG)的肽疫苗诱导的Ig滴度。该示例显示了所述系统的选择性的体内证据。上图显示根据标准ELISA测得的、相对于OD值(y轴)的抗肽T8-1滴度(从1:50到1:102400进行0.5x逐步稀释；X轴显示log(X)稀释度)。T8-1滴度不受施用SADC-Ig-E049的影响。下图表明，SADC注射前(即-48小时和-24小时)的初始滴度Log IC50(y轴)当与SADC施用后(即+24h、+48h和+72h；如x轴所示)的滴度Log IC50相比，不受SADC-Ig-E049施用(箭头)的影响，从而证明该系统的选择性。
实施例2:SADC的免疫原性
为了排除SADC的免疫原性，测试了原型候选SADC在重复注射时诱导抗体的倾向。用肽T3-1和T9-1进行该测试。T3-1是一种10个氨基酸的肽，源自血管紧张素受体的参考表位，针对该表位形成的激动性自身抗体形成于先兆子痫动物模型中(Zhou等)；T9-1是一种12个氨基酸的肽，源自人类IFNγ的参考抗药抗体表位(Lin等)。这些对照SADC偶联物以每两周一次、共注射8次的方案给完全未接触过所述抗原的、未被免疫过的8-10周龄以上雌性BALB/c小鼠腹腔注射。
动物C1-C4腹腔注射SADC T3-1(如实施例1所述)。动物C5-C8腹腔注射携带肽T9-1的SADC。作为ELISA分析的参考信号，使用被KLH-肽T1-1(源自AChR-MIR，在实施例1中解释)接种3次的对照动物的血浆。分别使用BSA偶联的肽探针T3-1、T9-1和E005(SEQ ID NO.37：GGVKKIHIPSEK)，通过标准ELISA在1:100稀释度检测抗体滴度，可以证明与疫苗处理的对照动物C相比，SADC处理组动物中未出现抗体诱导(见图2)。血浆通过下颌下采血获得，分别在第三次疫苗注射的1周后(对照动物C)和以2周的间隔连续8次SADC注射的最后一次的1周后(动物C1-C8)。因此，证明了SADC是非免疫原性的，在重复注射小鼠后不会诱导抗体形成。
实施例3:用携带多拷贝单价或二价肽的SADC成功在体外消耗了抗体。
以E006-KLH(VKKIHIPSEKG(SEQ ID NO:36)带C端半胱氨酸)接种的小鼠的血浆，在包被了2.5μg/ml(250ng/孔)SADC或5μg/ml(500ng/孔)白蛋白作为阴性对照的微量滴定板的单个的孔中，连续四次(10分钟/孔)用稀释缓冲液(PBS+0.1％w/v BSA+0.1％吐温20)稀释至1:3200并保温(100μl，室温)。
为了确定保温前后存在于SADC包被孔上的游离、未结合的抗体的量，在消耗之前及之后取50μl稀释过的血清，用E006-BSA包被板(10nM肽)经标准ELISA定量，并以山羊抗小鼠IgG bio(Southern Biotech，1:2000稀释)检测。随后，生物素化的抗体用链霉亲和素-HRP(Thermo Scientific，1:5000稀释)以TMB作为底物进行检测。信号生成用0.5M硫酸终止。
ELISA在OD 450nm(y轴)处测量。结果，抗体被包被的含肽E006(序列VKKIHIPSEKGC，SEQ ID NO:36)带C端半胱氨酸的单价或二价SADC有效吸附(之前＝未消耗的起始材料；单价—二价对应于SADC表面展示的肽；阴性对照是白蛋白；在x轴上显示)。参见图3。(“单价”表示肽单体与生物聚合物支架结合(即n＝1)，而“二价”表示肽二聚体与生物聚合物支架结合(即n＝2)。在本例中，二价肽是“同型二价”，即SADC的肽n-聚体是E006–S–E006。)
这表明携带单价或二价肽的SADC非常适合吸附抗体并因此消耗它们。
实施例4:用各种SADC生物聚合物支架在小鼠中进行的快速、选择性抗体消耗。
雌性Balb/c小鼠(每个处理组5只动物；9-11周龄)腹腔注射10μg模型不需要的抗体mAB anti V5(Thermo Scientific)，在初始抗体给药48小时后，静脉注射50μg SADC(不同的生物聚合物支架，结合了标记的V5肽，见下文)。每隔24小时从下颌下静脉收集血液。时间点0小时的血样在即将给药SADC前采集。
每24小时收集一次血液，直到SADC给药后120小时的时间点(x轴)。SADC给药后血浆抗-V5 IgG水平的衰减和降低通过抗V5滴度读数确定，使用标准ELISA程序和包被的V5-肽-BSA(肽序列IPNPLLGLDC–SEQ ID NO:57)，以山羊抗小鼠IgG bio(Southern Biotech，1:2000稀释)检测，如图4所示。此外，还分析了SADC水平(参见实施例6)和免疫复合物形成(参见实施例7)。
EC50[OD450]值使用4参数逻辑曲线拟合来确定，计算初始水平(设置为1，在时间点0)和后续时间点(x轴)之间的相对信号衰减作为EC50值(y-轴，倍数信号减少EC50)。所有SADC肽都包含用于直接检测血浆样品中SADC和免疫复合物的标签；用于SADC的肽序列为：IPNPLLGLDGSGSGDYKDDDDKGK(SEQ ID NO:38)-(BiotinAca)GC(SADC带白蛋白支架–SADC-ALB、SADC带免疫球蛋白支架–SADC-IG、SADC带触珠蛋白支架–SADC-HP和SADC带转铁蛋白支架–SADC-TF)和无关肽VKKIHIPSEKGGSGDYKDDDDKGK(SEQ ID NO:39)-(BiotinAca)GC作为阴性对照SADC(SADC-CTR)。
不同的5只动物的处理组的SADC支架以黑色/灰色阴影显示(参见图4的插图)。
与模拟处理的对照组SADC-CTL相比，处理组在24小时时已经表现出快速且显著的抗体减少(特别是SADC-TF)。SADC-CTR被用作正常抗体衰减的参考，因为它没有抗体降低活性，因为它的肽序列不被施用的抗V5抗体识别。SADC-CTR的衰减因此用趋势线标记，强调了处理组动物和模拟处理组动物之间的抗体水平差异。
为了确定在这些实验条件下选择性降低抗体的效力，用Dunnett多重比较检验进行双向ANOVA检验。在SADC给药的48小时后，所有SADC组与SADC-CTR参考组(趋势线)相比，抗体EC50均显著降低(p<0.0001)。在SADC给药的120小时后，抗体降低在SADC-ALB和SADC-TF组非常显著(均p<0.0001)，在SADC-HP组显著(p＝0.0292)，而在SADC-IG组显示在SADC给药的120小时后朝向EC50降低的趋势(P＝0.0722)。值得注意的是，在SADC给药后的所有测试时间点，SADC-ALB和SADC-TF组的选择性抗体降低非常显著(p<0.0001)。
得出的结论是，所有SADC生物聚合物支架都能够选择性地降低抗体水平。滴度降低在SADC-ALB和SADC-TF组最为明显，直到最后一个时间点都未检测到抗体水平的反弹或再循环，表明不需要的抗体如预期的那样被降解了。
实施例5:SADC注射的24小时后的血浆SADC检测。
Balb/c小鼠静脉注射后24小时之时不同SADC变体的血浆水平。检测实施例5所述动物的血浆中SADC-ALB、-IG、-HP、-TF和阴性对照SADC-CTR(x轴)的血浆水平(y轴)。已注射的血浆SADC水平通过标准ELISA检测，其中SADC通过它们的肽的生物素部分结合链霉亲和素包被板(Thermo Scientific)来捕获。捕获的SADC通过小鼠抗Flag-HRP抗体(ThermoScientific，1:2,000稀释)来检测，所述抗Flag-HRP抗体检测Flag标记的肽(也参见实施例7)：
假设静脉注射50μg SADC后血液中的理论量约为25μg/ml，则SADC注射的24小时后，SADC可检测量的范围在SADC-ALB或SADC-IG组为799至623ng/ml，在SADC-TF组高达约5000ng/ml。然而令人惊讶的是，相比之下，SADC-HP和对照SADC-CTR(它也是SADC-HP变体，但在这种情况下携带无关的阴性对照肽E006，参见前面的实施例)在注射的24小时后从循环中完全消失，并且不再被检测到。见图5。
这表明，在本实施例中测试的基于触珠蛋白支架的SADC((即SADC-HP和SADC-CTR)表现出相对较短的血浆半衰期，这代表了，在归因于体内免疫复合物形成之风险的补体依赖性血管和肾脏损伤中的潜在作用方面，是优于例如SADC-ALB、SADC-IG或SADC-TF等SADC的。SADC-HP的另一个优点是，在需要快速疗效的病例中，它们更快速地清除不需要的靶抗体。这些结果表明，无论血液中是否存在SADC结合抗体，基于触珠蛋白的SADC支架(以SADC-HP和SADC-CTR为代表)都可以从血液中快速清除，从而最大限度地减少不需要的免疫复合物形成并显示出快速有效的清除。基于触珠蛋白的SADC，例如本实施例中的SADC-HP，因此提供了优于其他SADC生物聚合物支架的疗效相关优势，如SADC-TF或SADC-ALB所证明的那样，在所述条件下注射后24小时时仍可检测到这两种支架，而SADC-HP或SADC-CTR在注射后24小时时均被完全清除。
实施例6:SADC注射的24小时后的血浆中SADC-IgG复合物的检测。
为了确定体内与SADC结合的IgG量，静脉注射10μg抗V5 IgG(ThermoScientific)，48小时后静脉注射SADC-ALB、-HP、-TF和-CTR(50μg)，SADC注射的24小时后，从下颌下静脉收集血浆，在链霉亲和素板上保温，以便借助它们的生物素化的SADC-V5-肽从血浆捕获SADC，所述生物素化的SADC-V5-肽是指IPNPLLGLDGGSGDYKDDDDKGK(SEQ ID NO:38)(BiotinAca)GC,或在SADC-CTR的情况下，是指阴性对照肽VKKIHIPSEKGGSGDYKDDDDKGK(SEQ ID NO:39)(BiotinAca)GC。与链霉亲和素捕获的SADC结合的IgG通过ELISA检测，使用山羊抗小鼠IgG HRP抗体(Jackson Immuno Research，1:2,000稀释)，其用于检测SADC注射的24小时后血浆中存在的SADC-抗体复合物。从测试组的OD450nm值(x轴)中减去未处理组动物的阴性对照血清的OD450nm值(y轴)以进行本底校正。
如图6所示，明显的抗V5抗体信号可见于注射了SADC-ALB和SADC-TF的小鼠(黑柱代表1:25稀释时经过本底校正的OD值，5只小鼠的平均值；标准偏差条)，而抗体信号不可见于注射了SADC-HP或对照SADC-CTR的动物的血浆(SADC-CTR是携带不被任何抗V5抗体识别的无关肽bio-FLG-E006[VKKIHIPSEKGGSGDYKDDDDKGK(SEQ ID NO:39)(BiotinAca)GC]的阴性对照)。这表明，静脉施用SADC的24小时后，血浆中不存在可检测量的SADC-HP/IgG复合物。
因此，与SADC-ALB或SADC-TF相比，SADC-HP在事先注射了抗V5的小鼠中被加速清除。
实施例7:SADC-免疫球蛋白复合物形成的体外分析
分析SADC-抗体复合物的形成，方法是，将1μg/ml的人抗V5抗体(抗V5表位标签[SV5-P-K]，人IgG3，Absolute Antibody)与在PBS+0.1％w/v BSA+0.1％v/v吐温20中浓度递增的SADC-ALB、-IG、-HP、-TF和-CTR(显示在x轴上)一起在室温预保温2小时，以便允许在体外形成免疫复合物。待复合物形成后，样品在已用10μg/ml人C1q(CompTech)室温包被1小时的ELISA板上保温，以允许捕获体外形成的免疫复合物。复合物随后使用抗人IgG(Fab特异性)-过氧化物酶(Sigma，1:1,000稀释)通过ELISA进行检测。在OD450nm的测量信号(y轴)反映了抗体-SADC复合物的体外形成。
如图7所示，SADC-TF和-ALB显示出明显的免疫复合物形成和与C1q的结合，反映为强信号以及反映为在1000ng/ml SADC-TF的情形中由于从抗原-抗体平衡转变为抗原过量而出现的信号急剧降低。相比之下，在本试验中测量时，用SADC-HP或SADC-IG导致的体外免疫复合物形成的效率要低得多。
连同体内数据(前面的实施例)，这些发现证实了以下发现：触珠蛋白支架优于其他SADC生物聚合物支架，因为它降低了激活补体系统的倾向。相比之下，SADC-TF或SADC-ALB显示出更高水平的复合物化，因此有激活C1复合物、启动经典补体途径的风险(但在某些情况下这种风险可能是可以容忍的)。
实施例8:体外测定SADC的IgG捕获
免疫复合物被允许在体外形成，与前面的实施例类似，使用1μg/ml小鼠抗V5抗体(Thermo Scientific)结合递增量的SADC(显示在x轴上)。SADC-抗体复合物通过生物素化的SADC-肽(参见前面的实施例)捕获在链霉亲和素包被的ELISA板上，然后使用抗小鼠IgG-HRP(Jackson Immuno Research，1:2,000稀释)检测结合的抗V5。
在这些测定条件下，与SADC-TF或SADC-ALB相比，SADC-HP显示显著降低的体外抗体结合能力(见图8，A)。为了检测SADC上的IgG而计算的EC50值，对于SADC-TF、-ALB和-HP分别为7.0ng/ml、27.9ng/ml和55.5ng/ml(见图8，B)。
这一体外发现与观察结果(见前面的实施例)一致，即与SADC-TF或SADC-ALB相比，SADC-HP具有较低的免疫复合物形成能力，这被认为是其消耗不需要的抗体的治疗用途方面的安全性优势。
实施例9：基于抗CD163抗体的SADC生物聚合物支架的体内功能
抗小鼠CD163 mAB E10B10(在WO 2011/039510 A2中公开)的快速体内血液清除。mAB E10B10用小鼠IgG2a骨架重新合成。50μg mAb E10B10和Mac2-158(WO 2011/039510 A2中公开的人类特异性抗CD163 mAb，在本例中作为阴性对照，因为它不结合小鼠CD163)给小鼠静脉注射，在12、24、36、48、72、96小时后通过ELISA测量确定血液清除率。
mAb E10B10比对照mAb Mac2-158更快地从血液循环中清除，见图9，因为E10B10结合小鼠CD163、而Mac2-158是人类特异性的，尽管两者都表达为小鼠IgG2a同种型可以直接比较。
总之，抗CD163抗体因其清除特性而非常适合作为SADC支架。具有此类支架的SADC将从血液循环快速清除不需要的抗体。
具体方法：50ug生物素化单克隆抗体E10B10和生物素化Mac2-158给小鼠静脉注射，在12、24、36、48、72、96小时后通过ELISA测量确定清除率：链霉亲和素板与在PBS+0.1％BSA+0.1％ Tween20中稀释的血浆样品在室温保温1小时(50μl/孔)。洗(用PBS+0.1％Tween20洗3次)后，结合的生物素化抗体用抗小鼠IgG+IgM-HRP抗体在1:1000稀释时检测。洗后，加入TMB底物，用TMB终止液终止底物的显影。读取OD450 nm处的信号。EC 50值通过非线性递归法用4参数曲线拟合约束曲线和最小二乘递归法来计算。时间点T12(这是抗体注射后的第一个测量时间点)的EC50值设置为100％，所有其他EC50值与T12的水平进行比较。
实施例10：抗CD163 mAb的表位作图
mAB E10B10提供小鼠体内CD163介导的、加速的血液清除(参见实施例11)。该抗体的表位用来源于小鼠CD163的环化肽阵列进行精细作图。结果，鉴定出被mAB E10B10识别的肽簇(见实施例13)。
相同的以环化肽进行表位作图的程序用mAB Mac2-158(在WO 2011/039510A2中公开)执行。mAB Mac2-158的表位作图结果产生了两个肽簇(见实施例13)，这允许进一步划分CD163表位区域，这些区域与结合所述受体的配体和抗体的内化特别相关。
因此，这些新表征的Mac2-158和E10B10表位揭示了抗CD163抗体的三个优选结合区。基于精细表位作图工作，合成线性或优先环化肽并用于诱导、生产和选择多克隆或单克隆抗体或其他靶向CD163的CD163结合型SADC支架。
实施例11：抗CD163 mAb的表位作图
与人CD163的SRCR域(domain)1对齐的肽选自mAB Mac2-158环化表位作图肽的前20个肽命中，最优选的序列选自两个位于人CD163的SRCR-1的N端(terminus)和C端的肽对齐簇。因此，以下序列(以及源自它们的基序)是非常适合的用作SADC生物聚合物支架的抗CD163抗体及其片段的表位：
肽簇1：
肽簇2：
像对MAC2-158那样，对mAb E10B10进行精细表位作图。用mAB E10B10筛选出1068个环化肽(大小为7、10和13个氨基酸)，衍生自小鼠CD163序列的SRCR-1到SRCR-3(UniProKBQ2VLH6.2)，获得以下最佳结合肽(以相对信号强度排序)。将人CD163序列与这个簇对齐，揭示了另一个高度合适的表位：
肽簇3：
簇3的小鼠肽01-13的人类同系物具有成熟人CD163蛋白(UniProtKB:Q86VB7)N端部分的以下序列：
这些同系物肽代表了另一些非常适合用于抗CD163抗体支架的表位。
实施例12：本发明化合物的生产和质量分析
人脱铁转铁蛋白(即生物聚合物支架)与PEG的偶联：将9nmol人脱铁转铁蛋白(Sigma Aldrich)与567nmol PEG在50mM HEPES缓冲液pH 8中室温振荡保温4小时。该偶联使用了4种PEG大小：甲氧基-PEG-NHS 10kDa(RAPP聚合物)、甲氧基-PEG-NHS 5kDa(RAPP聚合物)、甲氧基-PEG-NHS 2kDa(RAPP聚合物)和甲氧基-PEG-NHS 750Da(RAPP聚合物)。保温后，用Ultra-4离心过滤装置-50kDa截留(Sigma Aldrich)将缓冲液更换为1xPBS，用Qubit 4荧光计(Thermo Scientific)测量蛋白浓度。
偶联的人脱铁转铁蛋白的质量控制：结合的蛋白质偶联物通过SDS page分析对进行质量检查。将2.5μg蛋白加载到4-15％梯度TGX胶上，在还原条件下追随SDS page分析(250V，约20分钟)。蛋白用PageBlueTM蛋白染色液(Thermo Scientific)观察。
图10显示了被SDS page分析的与PEG(10kDa、5kDa、2kDa、750Da)偶联的2.5μg蛋白。所有偶联物都显示依赖于其偶联的PEG分子大小的完全位移(泳道3-6，PEG大小分别为10kDa、5kDa、2kDa、750Da)，是与未偶联的脱铁转铁蛋白(泳道2)相比，后者勾画了未偶联的支架蛋白的迁移。起始人脱铁转铁蛋白带(泳道2)在偶联PEG(不同大小示于泳道3-6)后彻底消失，从而为使用PEG-SADC的功能性动物实验提供了质量证明和一致性检查。
总之，PEG有效地偶联至人脱铁转铁蛋白以产生本发明的化合物。
实施例13：本发明化合物在体内选择性消除抗PEG抗体
每组4只雌性Balb/c小鼠，总体年龄为9-11周，注射10μg兔抗PEG抗体(abcam，ab190652)，然后在时间点(T)24小时之时，注射100μl体积的50μg PEG-SADC(制备方法见实施例12)。先前已为该实验确定兔IgG的半衰期在5天的范围内。在不同时间点取血，用ELISA检测抗PEG抗体。
出乎意料的是，发现2kDa、5kDa和750Da PEG-SADC提供了有效且快速的抗PEG抗体信号减弱。2kDa PEG-SADC配制剂最有效，直至时间点(T)120小时(T120)的实验终点长时间持久减少抗PEG抗体。相比之下，10kDa PEG-SADC配制剂效果较差。重要的是，之前建议的游离PEG 10kDa配制剂(参见WO 2019/046185A1和McSweeney等)在相当的剂量下没有显示抗体信号的任何减弱。作为参考，在即将应用SADC之前将抗PEG抗体的相对水平设为100％，并从每个ELISA板的参考抗体浓度(抗体2倍滴定，始于200ng/ml)推导出来。柱图表示几何平均值，误差条对应于几何标准差。图11显示了750Da PEG-SADC、2kDa PEG-SADC和5kDa PEG-SADC的有效抗体减少，而10kDa PEG-SADC配制剂的效力较低。PEG-单独的配制剂(PEG10kDa)在所用的可比剂量下未显示任何抗体减少(人脱铁转铁蛋白(hu-apo-TF)用作阴性对照，并划定大约5天时小鼠中兔IgG的自然衰变)。
方法细节：将PEG-SADC制剂重悬于PBS中，静脉注射，通常在初次施用抗PEG抗体(abcam，ab190652)的24小时后。所用抗体剂量为10ug在100ul PBS中(除非另有说明)。在SADC注射之前(以负小时数表示)或之后(以正小时数表示)，通过颌下静脉穿刺进行采血。选择性抗体减少的效力通过标准ELISA测量，使用生物素化PEG(20kDa PEG-生物素，Creative PEGWorks)，在链霉亲和素板(PierceTMStreptavidin Coated High CapacityPlates,Clear,96-Well,Thermo Scientific)上。对板上的血清(稀释于PBS+0.1％ BSA+0.01％ Tween20中)保温，用PBS+0.01％ Tween 20洗板。结合的抗体用抗兔IgG-HRP(过氧化物酶亲和纯山羊抗-兔IgG，Fc片段特异性，Jackson Immuno Research)检测。洗后，以TMB为底物，用TMB终止液终止显色反应。信号在450nm处读取。
实施例14：本发明的化合物是非免疫原性的
目的是确定静脉注射PEG-SADC是否会导致体内抗PEG抗体的增加。三只雌性Balb/c小鼠(9-11周龄)注射了具有不同PEG链长的PEG-SADC。PEG-SADC免疫方案是每周一次静脉注射50μg PEG-SADC。每种PEG-SADC总共注射4次。在第一次注射前以及每次注射的一周后收集血液。
抗PEG IgG和IgM的分析通过针对20kDa PEG-生物素(Creative PEGWorks)的ELISA进行。将2μg/ml 20kDa PEG-生物素与链霉亲和素板(PierceTM链霉亲和素包被的高通量板，透明，96孔，Thermo Scientific)结合1小时。作为阳性对照，将2μg/ml生物素化小鼠IgM固定在链霉亲和素板(Sigma)上。小鼠IgM抗体的生物素化用EZ-LinkTMNHS-PEG4生物素化试剂盒(Thermo Scientific)进行。用PBS+0.01％ Tween20洗板3次后，将小鼠血清以1:100的稀释度(在PBS+0.1％ BSA+0.01％ Tween20中)一式三份在板上保温。结合的小鼠抗体用1:1000稀释的山羊抗小鼠IgG+IgM-HRP抗体(Jackson Immuno Research)检测。洗涤后，以TMB为底物，用TMB终止液终止显色反应。信号在450nm处读取。
在图12中，单个小鼠的平均值(OD 450nm值)显示为散点印迹，包括阳性对照的4个信号以突出此ELISA的饱和范围作为技术对照。
在重复注射PEG-SADC后，PEG-SADC未诱导任何可检测的抗PEG抗体增加(参见图12)。这突出了本发明的PEG-SADC在体内，即使是在重复给药的情况下，也适合于减少不需要的抗PEG抗体。
实施例15：用肽基接头增加PEG偶联密度
测试了基于肽的接头是否可以提供改进的PEG与生物聚合物支架的偶联。
将生物聚合物支架(人脱铁转铁蛋白)与75摩尔过量的Sulfo-GMBS(N-γ-马来酰亚胺丁酰基-氧磺基琥珀酰亚胺酯)在室温保温1小时，过量Sulfo-GMBS通过凝胶过滤去除。随后，加入40摩尔过量的肽CGK(生物素-Aca)GGGGNPGY-NH 2(SEQ ID NO：58)，混合物在室温保温1小时(Aca是ε-氨基己酸)。过量的间隔肽用50-kDa截留膜的超滤去除。随后，加入80摩尔过量的2kDa NHS-PEG，混合物在室温保温1小时，得到最终化合物S3，一式两份进行分析(样品3、4；见表3)。
为了比较，将生物聚合物支架(人脱铁转铁蛋白)与80摩尔过量的2kDa NHS-PEG一起保温(1小时，室温)，得到化合物S5(一式两份进行分析)。
创建了其他的比较构建体S1、S2和S4(见下表3)。
为确定共价结合的PEG分子的量，配有在线多角度光散射的大小排阻层析(SEC-MALS)如下进行：注射前，样品以10,000g离心10分钟。使用Malvern Panalytical OMNISEC系统，将样品以0.5ml/min注入Superdex 200increase 10/300GL大小排阻柱。PBS用作层析液。BSA用于校准和确认由折射率、紫外/可见光和光散射检测器组成的检测系统。数据用OMNISEC 5.12版软件以蛋白偶联分析方法进行分析。
令人惊讶的是，发现基于肽的接头适合增加PEG偶联密度，同时保持化合物的抗体消耗功能。表3(见下文)显示，通过使用这类基于短肽的接头，与生物聚合物支架偶联的PEG的量显著增加，增加了约68％(见化合物S3和S5之间的比较)。
表3
实施例16：2kDa PEG-SADC和10kDa PEG-SADC的比较
每组4只雌性小鼠(BALB/c)，已在0小时的时间点通过眼眶后途径(r.o.)静脉注射了10μg兔抗甲氧基PEG抗体(abcam，ab190652；浓度0.1mg/mL)，在24小时的时间点注射50μg2kDa-和10kDa-甲氧基-PEG-人脱铁-转铁蛋白和人脱铁-转铁蛋白对照。每24小时采血一次，如X轴所示。
结果见图13。血清游离兔抗PEG使用甲氧基-PEG-生物素包被的链霉亲和素ELISA板(CreativePEGworks)通过标准ELISA检测；Y轴表示用GraphPad Prism从EC50计算的相对抗PEG减少(以％表示)，与在其他实验中一样。
该独立实验在更长的观察期内证实了实施例13的意外结果。2kDa PEG-SADC配制剂最有效并引起持久的抗PEG抗体减少。相反，10kDa PEG-SADC配制剂仍实现了抗PEG抗体的减少，但效果较差。
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序列表
<110> 艾柏力维亚生技有限公司(Ablevia biotech GmbH)
<120> 用于隔离患者体内不需要的抗 PEG 抗体的化合物
<130> R 78307
<160> 58
<150> 20197699.0
<151> 2020-09-23
<150> 21167124.3
<151> 2021-04-07
<170> BiSSAP 1.3
<210> 1
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变(VH)区
<400> 1
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ile Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Gln Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
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85 90 95
Val Ser Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变(VL)区
<400> 2
Ser Val Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Ser Leu Leu Ile Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Gln Asp Tyr Thr Ser Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala
100 105
<210> 3
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 3
Cys Ser Gly Arg Val Glu Val Lys Val Gln Glu Glu Trp Gly Thr Val
1 5 10 15
Cys Asn Asn Gly Trp Ser Met Glu Ala
20 25
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 4
Gly Arg Val Glu Val Lys Val Gln Glu Glu Trp
1 5 10
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
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<210> 6
<211> 9
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<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 6
Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 7
Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser Met Glu
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 8
Gln Glu Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 9
Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser Met Glu Ala
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<210> 10
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 10
Glu Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser Met
1 5 10
<210> 11
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 11
Val Gln Glu Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp
1 5 10
<210> 12
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 12
Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp
1 5 10
<210> 13
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 13
Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys Lys
1 5 10 15
His Asp Gly Trp Gly
20
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 14
Glu Ser Ala Leu Trp
1 5
<210> 15
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 15
Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys
1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 16
Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 17
Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 18
Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 19
Ala Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp
1 5 10
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 20
Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp
1 5 10
<210> 21
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 21
Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asp
1 5 10
<210> 22
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 22
Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp
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<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 23
Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp Gly
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<220>
<223> 肽
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Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys Glu Leu Arg Leu Val Asp Gly Glu
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<220>
<223> 肽
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Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys Glu Leu Arg
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<211> 5
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<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
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<220>
<223> 肽
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Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys Glu Leu Arg
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
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Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys Glu Leu
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<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
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<220>
<223> 肽
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Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys
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<220>
<223> 肽
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Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 32
Ser Ser Leu Gly Gly Thr
1 5
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 33
Cys Gly Arg Pro Gln Lys Arg Pro Ser Cys Ile Gly Cys Lys Gly
1 5 10 15
<210> 34
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 34
Leu Lys Trp Asn Pro Asp Asp Tyr Gly Gly Val Lys Lys Ile His Ile
1 5 10 15
Pro Ser Glu Lys Gly Cys
20
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 35
Asp His Thr Leu Tyr Thr Pro Tyr His Thr His Pro Gly
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<213> 人工序列
<220>
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Val Lys Lys Ile His Ile Pro Ser Glu Lys Gly
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<220>
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<400> 37
Gly Gly Val Lys Lys Ile His Ile Pro Ser Glu Lys
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<220>
<223> 肽
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Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Gly Gly Ser Gly Asp Tyr Lys
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Asp Asp Asp Asp Lys Gly Lys
20
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<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 39
Val Lys Lys Ile His Ile Pro Ser Glu Lys Gly Gly Ser Gly Asp Tyr
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Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Lys
20
<210> 40
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 40
Cys Ser Gly Arg Val Glu Val Lys Val Gln Glu Glu Trp
1 5 10
<210> 41
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 41
Asp Gly Glu Asn Lys Cys Ser Gly Arg Val Glu Val Lys Val Gln Glu
1 5 10 15
Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser Met Glu Ala Val Ser
20 25 30
Val Ile Cys Asn
35
<210> 42
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<220>
<223> 肽
<400> 42
Arg Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu
1 5 10 15
Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp Gly Lys His Ser Asn Cys Thr His
20 25 30
Gln
<210> 43
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 43
Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys Glu Leu Arg
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<211> 13
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<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 44
Ala Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys
1 5 10
<210> 45
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 45
Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 46
Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 47
Gly Ser Ala Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met
1 5 10
<210> 48
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 48
Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys Glu Leu
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<211> 13
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<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 49
Ser Ala Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys
1 5 10
<210> 50
<211> 13
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<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 50
Ser Gly Ser Ala Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu
1 5 10
<210> 51
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 51
Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys
1 5 10
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 52
Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met
1 5 10
<210> 53
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 53
Ala Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu
1 5 10
<210> 54
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 54
Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys Glu
1 5 10
<210> 55
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 55
Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys Glu
1 5 10
<210> 56
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 56
Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys Glu Leu Arg Leu Ala Gly
1 5 10 15
Gly Glu Asn Asn Cys Ser
20
<210> 57
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 57
Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Cys
1 5 10
<210> 58
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽
<400> 58
Cys Gly Lys Gly Gly Gly Gly Asn Pro Gly Tyr
1 5 10

Claims (19)

1.一种化合物，包括
-生物聚合物支架和
-一条或多条聚乙二醇(PEG)链。
2.权利要求1的化合物，其中所述一条或多条PEG链包含至少两条PEG链，这两条PEG链中每一条的分子量为100-10000Da，优选200-8000Da，更优选300-6000Da，还更优选400-5000Da，甚至更优选500-4000Da，甚至更优选600-3000Da，尤其是700-2500Da。
3.权利要求2的化合物，其特征在于，所述分子量为1500-2500Da。
4.权利要求1至3中任一项的化合物，其中所述一条或多条PEG链包含至少一条具有游离甲氧基端基或游离羟基端基的PEG链。
5.权利要求1至4中任一项的化合物，其中所述生物聚合物支架选自α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和白蛋白的组，特别是所述生物聚合物支架是触珠蛋白或转铁蛋白，尤其是转铁蛋白；或者所述生物聚合物支架是特异于CD163蛋白的抗体，或其CD163-结合片段。
6.权利要求1至5中任一项的化合物，其中所述一条或多条PEG链的至少一部分经由至少一个接头共价结合至所述生物聚合物支架，其中所述接头包含肽或单个氨基酸例如半胱氨酸。
7.权利要求1至6中任一项的化合物，其中所述化合物在哺乳动物中，优选在人、非人灵长类动物、绵羊、猪、狗或啮齿动物中，为非免疫原性。
8.一种药物组合物，其包含权利要求1至7中任一项的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。
9.权利要求8所述的药物组合物，所述组合物在人体内为非免疫原性。
10.权利要求8或9的药物组合物，是用于治疗的药物组合物。
11.权利要求10的药物组合物，用于抑制个体对活性剂治疗的免疫反应，其中所述活性剂包含至少一种PEG，特别是其中所述活性剂被PEG化；优选地，其中所述药物组合物在96小时的窗口期内被给药至少两次，其中在该窗口期之后的24小时内给药活性剂。
12.权利要求10的药物组合物，用于抑制活性剂在个体中的中和，特别是活性剂在个体中加速的血液清除，其中所述活性剂包含至少一种PEG，特别是其中所述活性剂被PEG化；优选地，其中所述药物组合物在96小时的窗口期内被给药至少两次，其中在该窗口期之后的24小时内给药活性剂。
13.权利要求11或12的药物组合物，其中所述活性剂是蛋白或肽，优选所述活性剂选自酶、酶抑制剂、抗体、抗体片段、抗体模拟物、抗体-药物偶联物、激素、生长因子、凝血因子和细胞因子；或者所述活性剂是病毒载体，例如用于基因治疗或疫苗接种的病毒载体。
14.权利要求11或12中任一项的药物组合物，其中所述活性剂是核酸-脂质颗粒、核酸-聚合物颗粒、核酸-脂质-聚合物颗粒、或核酸；优选地，所述核酸是RNA，特别是mRNA或siRNA，或DNA。
15.一种隔离存在于个体中的一种或多种抗体的方法，包括
获得权利要求8或9所定义的药物组合物，其中该组合物在个体中为非免疫原性，并且其中的一种或多种抗体为抗PEG抗体；和
向该个体施用所述药物组合物。
16.一种药物组合物，包含权利要求1至7中任一项的化合物，并进一步包含活性剂和任选的至少一种药学上可接受的赋形剂，
其中该活性剂包含至少一种PEG，特别是该活性剂是PEG化的。
17.权利要求16的药物组合物，其中所述活性剂是病毒载体或蛋白或肽，特别是选自酶、酶抑制剂、抗体、抗体片段、抗体模拟物、抗体-药物偶联物、激素、生长因子、凝血因子和细胞因子。
18.权利要求16的药物组合物，其中所述活性剂是核酸-脂质颗粒、核酸-聚合物颗粒、核酸-脂质-聚合物颗粒、或核酸；优选地，所述核酸是RNA，特别是mRNA或siRNA，或DNA。
19.一种在需要活性剂治疗的个体中抑制对活性剂治疗的免疫反应的方法，包括
获得权利要求16至18中任一项所定义的药物组合物；其中该药物组合物的化合物在个体中为非免疫原性，并且
向该个体施用所述药物组合物。
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