KR20230074775A - 바이러스 벡터의 효능 증가를 위한 화합물 - Google Patents

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오스카 슴즈카
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아블레비아 바이오테크 게엠베하
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Abstract

본 발명은 환자에서 바이러스 벡터(백신 및 유전자 치료요법에 사용됨)에 대한 바람직하지 않은 중화 항체의 제거를 위한 화합물을 제공한다. 화합물은 불활성 생물중합체 스캐폴드 및 적어도 화학식 P ( - S - P ) (n-1) 의 제1의 펩타이드 n-머 및 화학식 P ( - S - P) (n-1) 의 제2의 펩타이드 n-머를 포함하고, 여기서, 각각의 발생에 대해 독립적으로, P는 2 내지 13개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드이고 S는 비-펩타이드 스페이서이고, 여기서, 각각의 펩타이드 n-머에 대해 독립적으로, n은 적어도 1의 정수이고, 여기서 펩타이드 n-머 각각은 생물중합체 스캐폴드에 결합된다. 각각의 발생에 대해 독립적으로, P는 바이러스 벡터의 캡시드 단백질 서열의 적어도 6개 아미노산 길이를 갖는 서열 단편을 포함하는 아미노산 서열을 갖는다. 또한, 화합물을 포함하는 약제학적 조성물뿐만 아니라 개체내 존재하는 하나 이상의 항체를 제거하는 방법 및 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 사용한 치료에 대한 바람직하지 않은 면역 반응을 억제하는 방법이 제공된다.

Description

바이러스 벡터의 효능 증가를 위한 화합물
본 발명의 분야는 백신 또는 유전자 치료요법에 사용되는 것과 같은 비-병원성 바이러스 벡터의 효능을 증가시키기 위한 화합물에 관한 것이다.
야생형 아데노 관련 바이러스(adeno-associated virus, AAV)는 일반적으로 비병원성이며 헬퍼 바이러스가 있는 경우에만 복제할 수 있다. 이 부류의 바이러스 유전자 치료 벡터의 큰 장점 중 하나는 숙주 세포에서 장기적이고 지속적인 유전자 발현을 유지하여 치료 유전자 전달에 이상적이라는 것이다. 생체내 및 시험관내에서 혈청학적 차이 및 독특한 향성(tropism)을 나타내는 수많은 천연 아형이 분리되었다. AAV 벡터는 상이한 세포 유형을 표적하는 데 매우 적합하다. 중요한 것은 일반적으로 이들은 숙주 세포의 게놈에 통합되지 않는다는 것이다(Colella 등, 2017).
현재까지 AAV2, AAV5 또는 AAV8을 포함하여 많은 상이한 혈청형 및 변이체가 잘 연구되었다. 예를 들어, Voretigene neparvove(Luxturna®; AAV2 기반) 또는 onasemnogene abeparvovec-xioi(Zolgensma®; AAV9 기반)와 같은 새로운 유전자 치료 조성물이 이 분야의 역동적인 발전을 반영하여 성공적으로 테스트되고 승인되었다. Li(Li 등, 2020)는 AAV 벡터에 대한 광범위한 리뷰를 제공한다. 캡시드 엔지니어링(capsid engineering)과 결합된 유전자 발현, 조직 특이성, 게놈 안정성을 개선하는 새로운 개념은 Domenger(Domenger 등, 2019)로부터 찾을 수 있다.
향성(tropism) 및 안전성을 포함한 생물학적 특성을 변경하기 위해 개선된 AAV 캡시드 변이체를 엔지니어링하는 데 많은 노력이 투자되었다. 그러나 환자의 기존 항체에 의한 항체 중화에 대한 감수성(susceptibility)은 여전히 주요 과제로 남아 있다(예를 들어, Costa Verdera 등, 2020 참고).
Kruzik 등(2019)은 상이한 환자 코호트에서 다양한 AAV 혈청형에 대한 중화 항체의 유병률(prevalence)을 조사하였다. 예를 들어, AAV2에 대한 중화 항체가 인구의 최대 74% 수준에서 가장 풍부한 것으로 밝혀졌다. AAV8에 대한 항체는 예를 들어 최대 63%에서 발견되었다. AAV5(최대 59%) 및 AAV1(27%)에 대한 천연 항체는 덜 풍부했다. 흥미롭게도, 검사를 받은 대부분의 사람들은 하나 이상의 혈청형에 대한 항체를 나타냈다. Ronzitti 등, 2020에 의해 포괄적인 리뷰가 공개되었다.
결과는, 예를 들어 AAV 벡터를 사용한 치료에 반응하지 않는 환자에서 AAV에 대한 기존 중화 항체 때문에 혈우병 B 유전자 치료 시험이 문제가 있는 것으로 판명되었다. Manno 등, 2006은, 예를 들어 중화 항체의 역가가 낮더라도 옵소닌화(opsonization)에 의해 바이러스 기능을 차단하여 유전자 치료의 유효성을 차단할 수 있음을 보여주었다.
Tseng 등, 2014는 사람 혈청 및 모노클로날 항체에서 발견된 항-AAV 항체의 에피토프를 리뷰했다. 기존 또는 유도된 항-AAV 항체와 바이러스 캡시드 단백질 사이의 상호작용이 돌연변이 분석, 펩타이드 삽입 또는 펩타이드 스캐닝에 의해 주로 조사되었으며, 향성을 개선하고 체액성 면역 반응을 회피하는 AAV 변이체를 개발하기 위하여 여러 접근법이 시험되었다. 이러한 전략에는 유도 진화, 구조 기반 접근법, 키메라 AAV 벡터의 조작(예: Bennett 등, 2020) 또는 AAV 벡터 표면의 펩타이드 전시(Borner 등, 2020)가 포함된다. 중화 항체의 부정적인 영향을 회피하기 위해 제안된 다른 전략에는 투여 경로 수정(Mimuro 등, 2013), 새로운 혈청형 및 변이체 발견(Salganik 등, 2015), 페길화)(PEGylation) 또는 폴리머 기술에 의한 면역원성 감소(Balakrishnan 등, 2019) 또는 캡시드 디코이 내부 (Mingozzi 등, 2013) 또는 체외(Bertin 등, 2020) 사용이 포함된다. 면역원성의 메커니즘과 임상적 영향은 Monahan 등, 2021에 의해 광범위하게 리뷰되었다.
제US 2013/0259885 A1호는 CD4+ 자연 살해 T 세포에 의해 인식되는 에피토프를 함유하는 펩타이드를 이용한 면역조절에 관한 것이다. 이는 유전자 치료의 효율성을 높이는 데 적합하다고 교시된다. 제WO 2005/023848 A2호는 아데노바이러스 벡터의 효율을 증가시키기 위한 환자에 대한 펩타이드 투여를 개시한다.
제WO 2019/018439 A1호는 대상체에게 이종 폴리뉴클레오티드를 포함하는 재조합 AAV를 투여하기 전 채집술(apheresis)에 의해 대상체로부터 AAV-중화 항체를 제거하는 것에 관한 것이다. Bertin 등, 2020은 유사한 채집 접근법을 공개한다. 추가의 유사한 라인으로, 제WO 00/20041 A2호는 AdV 서브유닛에 기초한 친화성 컬럼으로 항-AdV-항체의 체외 제거(즉, 선택적인 채집술)에 의해 치료용 바이러스 제제의 효과를 향상시키는 방법에 관한 것이다.
그러나 이러한 각 접근 방식에는 나름의 단점이 있다.
중화 항체는 AAV 기반 유전자 치료요법 또는 백신 벡터와 관련하여 문제가 된다. 현재까지 원형 아데노바이러스 벡터인 AdV(Adenovirus) 혈청형 5(Ad5)가 400개 이상의 임상 시험에서 테스트되었다. 놀랍게도, 인구의 최대 80%가 Ad5에 대한 중화 항체를 가지고 있으며, 이는 전이유전자(transgene) 발현 또는 병원체 또는 암에 대한 백신의 효능에 부정적인 영향을 미친다.
중요한 것은 중화 항체가 최근 SARS-CoV-2에 대한 백신 임상 시험에서 문제가 있는 것으로 밝혀졌다는 것이다: Zhu(Zhu 등, 2020)는 기존 Ad5 항체가 SARS-CoV-2 백신에 대한 면역 반응을 방해했을 수 있다고 결론지었다. 또한 바이러스 백신 벡터에 대한 기존의 중화 항체로 인해 백신에 의해 유발된 면역 반응의 지속 시간에 부정적인 영향이 있다는 결론을 내렸다.
예방 접종 및 유전자 치료요법을 위한 모든 유형의 AdV 및 기타 바이러스 벡터에 대한 중화 항체 및 에피토프는 이미 참고문헌 [예컨대, Tian 등, 2018; Wang 등, 2019; Fausther-Bovendo 등, 2014; and Mok 등, 2020]에 설명되었다. AAV 벡터와 마찬가지로, 아데노바이러스 벡터의 에피토프의 미세 매핑 및 엔지니어링을 통해 기존 항 벡터 면역을 우회하기 위해 많은 노력을 기울였다 (Roberts 등, 2006).
이러한 전략은 번거롭고 비용이 많이 들기 때문에 바이러스 벡터 중화 문제를 해결하기 위해서는 새로운 접근 방식이 필요하다.
따라서 본 발명의 목적은 바이러스 벡터 중화를 억제하는 화합물 및 방법을 제공하는 것이다. 이에 의해, 비병원성 바이러스 벡터(백신 또는 유전자 치료에 사용되는 것과 같은)의 효율성이 일반적으로 증가된다.
본 발명은
- 생물중합체 스캐폴드(biopolymer scaffold) 및 적어도
- 하기 화학식의 제1의 펩타이드 n-머(peptide n-mer):
P ( ― S ― P ) (n-1) 및
- 하기 화학식의 제2의 펩타이드 n-머:
P ( ― S ― P ) (n-1)
를 포함하는 화합물을 제공한다.
각각의 경우에 독립적으로, P는 6 내지 13개의 아미노산 서열 길이를 지닌 펩타이드이고, S는 비-펩타이드 스페이서(non-peptide spacer)이다. 각각의 펩타이드 n-머에 대해 독립적으로, n은 적어도 1, 바람직하게는 적어도 2, 보다 바람직하게는 적어도 3, 특히 적어도 4의 정수이다. 펩타이드 n-머 각각은, 바람직하게는 링커(linker) 각각을 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합된다. 또한, 각각의 경우에 독립적으로, P는 (비병원성) 바이러스 벡터(예를 들어, AAV 또는 AdV)의 캡시드 단백질 서열, 특히 AdV 헥손 단백질 서열, AdV 섬유 단백질 서열, AdV 펜톤 단백질 서열, AdV IIIa 단백질 서열, AdV VI 단백질 서열, AdV VIII 단백질 서열 또는 AdV IX 단백질 서열 또는 도 10 및 도 11에서 확인된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나 또는 Cearley 등, 2008에 나열된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 특히 적어도 9개 (또는 10, 11, 12 또는 13개)의 아미노산 길이를 갖는 서열 단편을 포함하는 아미노산 서열을 가진다. 임의로 서열 단편의 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다.
바람직하게는, P의 적어도 하나의 경우는 Pa이고/이거나, P의 적어도 하나의 경우는 Pb이다. Pa는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 9개 아미노산의 서열 길이로 정의된 펩타이드(즉, 정의된 서열의 펩타이드)이고, Pb는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 9개 아미노산의 서열 길이로 정의된 펩타이드(즉, 정의된 서열의 펩타이드)이다.
본 발명은 또한,
- 생물중합체 스캐폴드 및 적어도
- 화학식 P a - S - P a 또는 P a - S - P b 의 펩타이드 이량체인 제1의 펩타이드 n-머를 포함하는 화합물을 제공하며,
여기서 Pa는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 9개 아미노산의 서열 길이로 정의된 펩타이드(즉, 정의된 서열의 펩타이드)이고, Pb는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 9개 아미노산의 서열 길이로 정의된 펩타이드(즉, 정의된 서열의 펩타이드)이고, S는 비-펩타이드 스페이서이고, 여기서 제1의 펩타이드 n-머는, 바람직하게는 링커를 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합되어 있다. Pa는 (비병원성) 바이러스 벡터의 캡시드 단백질 서열, 특히 AdV 헥손 단백질 서열, AdV 섬유 단백질 서열, AdV 펜톤 단백질 서열, AdV IIIa 단백질 서열, AdV VI 단백질 서열, AdV VIII 단백질 서열 또는 AdV IX 단백질 서열 또는 도 10 및 도 11에서 확인된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나 또는 Cearley 등, 2008에 나열된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 특히 적어도 9개 (또는 10, 11, 12 또는 13개)의 아미노산 길이를 지닌 서열 단편을 포함하는 아미노산 서열을 가진다. 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 서열 단편의 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다.
이 화합물은 바람직하게는 화학식 P b - S - P b 또는 P a - S - P b 의 펩타이드 이량체인 제2의 펩타이드 n-머를 추가로 포함하고, 여기서 제2의 펩타이드 n-머는, 바람직하게는 링커를 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합된다. Pb는 (비병원성) 바이러스 벡터의 캡시드 단백질 서열, 특히 AdV 헥손 단백질 서열, AdV 섬유 단백질 서열, AdV 펜톤 단백질 서열, AdV IIIa 단백질 서열, AdV VI 단백질 서열, AdV VIII 단백질 서열 또는 AdV IX 단백질 서열 또는 도 10 및 도 11에서 확인된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나 또는 Cearley 등, 2008에 나열된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 특히 적어도 9개(또는 10, 11, 12 또는 13개)의 아미노산 길이를 갖는 서열 단편을 포함하는 아미노산 서열을 가진다. 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 서열 단편의 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다.
또한, 본 발명은 전술한 화합물 중 임의의 하나 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 이 약제학적 조성물은 특히 백신 접종 또는 유전자 치료요법과 조합하여 사용하기 위한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 정의된 약제학적 조성물(조성물은 개체에서 비-면역원성임)을 수득하는 단계; 및 약제학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에 존재하는 하나 이상의 항체(여기서, 개체에 존재하는 하나 이상의 항체가 적어도 하나의 경우의 P에 대해, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적임)를 제거(또는 고갈)시키는 방법을 제공한다.
여전히 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 정의된 화합물을 포함하고 바이러스 벡터 및 임의로 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물(즉, 백신 또는 유전자 치료요법 조성물)에 관한 것이다. 바이러스 벡터는 전형적으로 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 특히 적어도 9개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드 단편을 포함한다. 화합물의 펩타이드 P, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb의 적어도 하나의 경우의 서열은 상기 펩타이드 단편의 서열과 적어도 70% 동일하고, 바람직하게는 적어도 75% 동일하고, 보다 바람직하게는 적어도 80% 동일하고, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 85% 동일하고, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 90% 동일하고, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 95% 동일하고, 특히 완전히 동일하다. 바람직하게는, 이 약제학적 조성물은 백신 접종 또는 유전자 치료요법에 사용하기 위한 것 및/또는 바이러스 벡터에 대한 바람직하지 않은 면역 반응의 예방 또는 억제에 사용하기 위한 것이다.
심지어 여전히 다른 양태에서, 본 발명은 상기 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 수득하는 단계 (여기서 백신 또는 유전자 치료요법 조성물의 화합물은 개체에서 비면역원성이다), 및 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 개체에게 투여하는 (바람직하게는 반복적으로 투여하는) 단계를 포함하는, 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 사용한 치료가 요구되는 개체에서 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 사용한 치료에 대한 (바람직하지 않은) - 특히, 체액성 - 면역 반응을 억제하거나 또는 백신 또는 유전자 치료요법 조성물로 치료가 필요한 개체에 대해 백신 또는 유전자 치료요법 조성물에서 바이러스 벡터의 중화를 억제하는 방법을 제공한다.
본 발명의 과정에서, 생체 내에서 바이러스 벡터에 대한 항체를 고갈(또는 제거)할 수 있고 따라서 바이러스 벡터의 효율을 증가시키는데 적합한 화합물이 개발되었다.
또한, 놀랍게도 본 발명에서도 사용되는 접근법이 개체에서 바람직하지 않은 항체의 역가를 감소시키는데 특히 효과적이라는 것이 밝혀졌다. 특히, 이 화합물은 생체 내 모델에서 선택성, 역가 감소 기간 및/또는 역가 감소 수준과 관련하여 특히 우수한 결과를 달성하였다(실험예 참조).
하기 상세한 설명은 명시적으로 제외되지 않는 한 본 발명의 상기 측면 모두에 관한 것이다.
일반적으로, 항체는 세균, 바이러스, 진균 또는 기생충을 포함하는 외부 유기체에 의한 감염으로부터의 보호를 제공하는, 체액성 면역계의 필수 구성 성분이다. 그러나, 자가면역 질환, 기관 이식(organ transplantation), 수혈(blood transfusion) 또는, 생물분자 약물 또는 유전자 전달 벡터(gene delivery vector)의 투여시를 포함하는 - 특정의 상황하에서, 항체는 환자 자신의 신체(또는 바로 투여된 외부 조직 또는 세포 또는 생물분자 약물 또는 벡터)를 표적화함으로써, 유해하거나 질환을 유발하는 실체가 될 수 있다. 특정의 항체는 또한 진단 영상용 프로브(probe)를 방해할 수 있다. 이하에서, 이러한 항체는 일반적으로 "목적하지 않은 항체(undesired antibody)" 또는 "바람직하지 않은 항체(undesirable antibody)"로 지칭된다.
거의 예외없이, 목적하지 않은 항체의 선택적인 제거는 임상 실시에 도달하지 않았다. 이는 현재 매우 적은 증상(indications)에 한정된다: 선택적인 항체 제거에 대한 공지된 기술 중 하나(광범위하게 확립되어 있지 않다고 해도)는 면역채집술(immunoapheresis)이다. 면역채집술(이는 면역글로불린을 제거한다)과는 대조적으로, 선택적인 면역채집술은 이의 항원 결합 부위에 대한 선택적인 결합을 기반으로 목적하지 않은 항체를 고갈시킬 체외의, 선택적인 항체-흡수제 카트릿지(antibody-absorber cartridge)를 통한 혈장의 여과를 포함한다. 선택적인 면역채집술은 예를 들면, ABO-양립할 수 없는 이식(ABO-incompatible transplantation) 전에 또는 수혈의학의 처방과 관련하여 혈액으로부터 항-A 또는 항-B 항체를 제거하는데 사용되어 왔다(Teschner 등). 선택적인 채집술은 또한 다른 처방, 예를 들면, 신경면역학적 처방(Tetala 등) 또는 중증 근무력증(myasthenia gravis)(Lazaridis 등)에서 실험적으로 적용되었으나, 임상 실무에서 아직 확인되지 않고 있다. 선택적인 면역채집술이 단지 주저하며 적용되는 한가지 이유는 이것이 비용 집약적이고 전문화된 의학적 보호를 필요로하는 복잡한 중재 과정이라는 사실이다. 더욱이, 목적하지 않은 항체를 신속하게 및 효율적으로 고갈시키는 방법이 선행 기술에 알려져 있지 않다.
채집술(apheresis)과는 별도로, 모리모토(Morimoto) 등은 펩타이드 및 펩티도미메틱 리간드(peptidomimetic ligand), 예를 들면, FLAG 펩타이드의 면역글로불린-결합 친화성을 증진시키기 위한 일반적으로 적용가능한 다가 스캐폴드(miltivalent scaffold)로서의 덱스트란을 개시하고 있다. 제WO 2011/130324 A1호는 세포 손상의 예방용 화합물에 관한 것이다. 제EP 3 059 244 A1호는 C-met 단백질 효능제에 관한 것이다.
언급한 바와 같이, 채집술은 체외적으로 적용된다. 대조적으로, 또한 바람직하지 않은 항체를 고갈시키기 위한 수개의 접근법이, 대부분이 자가항체 또는 항-약물 항체를 포함하는 특정의 자가면역 질환과 관련하여, 선행 기술에서 제안되었다:
로렌츠(Lorentz) 등은 적혈구를 항원-특이적인 T 세포의 고갈을 유발하는 면역허용원성 페이로드를 사용하여 반응계내(in situ)에서 충전시키는 기술을 개시하고 있다. 이는 모델 항원에 대해 목적하지 않은 체액성 반응의 감소를 궁극적으로 초래하는 것으로 추정된다. 유사한 시도는 피쉐샤(Pishesha) 등에 제안되어 있다. 이러한 시도에서, 적혈구는 표면에 공유결합으로 결합된 펩타이드-항원 작제물로 생체외(ex vivo)에서 로딩되고 일반적인 면역내성 유도를 위해 동물 모델로 재주사된다.
제WO 92/13558 A1호는 면역원의 특이적인 B 세포 결합능을 지니고, 개체에게 도입된 경우, 면역원에 대해 체액성 아네르기(humoral anergy)를 유도하는 안정한 비면역원성 중합체 및 면역원의 유사체의 접합체(conjugate)에 관한 것이다. 따라서, 이러한 접합체는 외부- 또는 자가-면역원에 의해 유발된 항체-매개된 병리학을 치료하는데 유용한 것으로 개시되어 있다. 이와 관련하여, 또한 제EP 0 498 658 A2호를 참고한다.
탓데오(Taddeo) 등은 오브알부민(ovalbumin) 모델 항원에 융합된 항-CD138 항체 유도체를 사용하여 항체를 생산하는 혈장 세포를 선택적으로 고갈시킴으로써 모델 항원에 대해 항체를 발현하는 이러한 세포내에서 선택적으로 시험관내(in vitro)에서 수용체 가교결합 및 세포 자살을 유도하는 것을 개시하고 있다.
Apitope International NV(벨기에)는 현재 내성을 유발함으로써, 항체 반응을 억제하는 항원 제시 세포(antigen presenting cell)로부터 공-자극성 분자의 낮은 수준의 발현을 초래할 수 있는 가용성의 면역허용원성 T-세포 에피토프 펩타이드를 개발 중에 있다(참고: 예컨대, Jansson 등). 이러한 생성물(product)은 현재 예컨대, 다발경화증(multiple sclerosis), 그레이브스 질환(Grave's disease), 중간 포도막염(intermediate uveitis), 및 다른 자가면역 상태(autoimmune condition) 뿐만 아니라 인자 VIII 내성에 있어서, 전임상 및 조기 임상 평가 하에 있다.
유사하게, 문헌 [Selecta Biosciences, Inc. (USA)]은 현재 소위 합성 백신 입자(Synthetic Vaccine Particles)(SVPs)에 의한 내성 유도 전략을 추구하고 있다. SVP-라파마이신은 조절성 T 세포를 선택적으로 유도함을 통해 목적하지 않은 항체 생산을 방지함으로써 내성을 유도하는 것으로 제안되어 있다(참고: Mazor 등)
민고찌(Mingozzi) 등은 항체를 흡수하지만 표적 세포로 도입할 수 없는 데코이(decoy) 아데노-관련 바이러스(adeno-associated virus)(AAV) 캡시드를 개시하고 있다.
제WO 2015/136027 Al호는 항-MAG(myelin-associated glycoprotein) IgM 항체에 결합하는 최소의 사람 천연 킬러-1(Human Natural Killer-1)(HNK-1) 에피토프를 제시하는 탄수화물 리간드, 및 진단시 뿐만 아니라 항-MAG 신경병증(neuropathy)의 치료를 위한 이의 용도를 개시하고 있다. 제WO 2017/046172 Al호는 신경학적 질환과 관련된 항-글리칸 항체에 의해 결합된 신경계의 글리코스핑고리피드(glycosphingolipid)가 포함하는 당에피토프를 모사(mimicking)하는 추가의 탄수화물 리간드 및 모이어티(moiety)를 개시하고 있다. 이러한 문헌은 또한 진단 뿐만 아니라 항-글리칸 항체와 관련된 신경학적 질환의 치료를 위한 이러한 탄수화물 리간드/모이어티(moiety)의 용도에 관한 것이다.
제US 2004/0258683 Al호는 전신 홍반 루푸스(systemic lupus erythematosus)(SLE), 예를 들면, 신장 SLE를 치료하는 방법 및 SLE를 지닌 개체에서 신장 플래어(renal flare)의 위험을 감소시키는 방법을 개시하고 있다. 신장 SLE를 포함하는 SLE를 치료하고 SLE를 지닌 개체에서 신장 플래어의 위험을 감소시키는 하나의 개시된 방법은 항-이중 가닥 DNA(dsDNA) 항체, 예를 들면, 에피토프-제시 담체(epitope-presenting carrier) 또는 에피토프-제시 원자가 플랫폼 분자 (epitope-presenting valency platform molecule) 형태에서와 같은 dsDNA 에피토프를 개인에게 투여함을 포함한다.
미국 특허 제5,637,454호는 자가면역 질환의 검정 및 치료에 관한 것이다. 치료에 사용된 제제는 확인된 항원성의, 분자 미미크리 서열(molecular mimicry sequence)에 대해 상동성인 펩타이드를 포함할 수 있다. 이러한 펩타이드는 환자에게 전달되어 특수한 특이성을 지닌 순환하는 항체의 양을 감소시킬 수 있음이 개시되어 있다.
제US 2007/0026396 A1호는 감기-내성을 유발하는, 항체에 대해 지시된 펩타이드, 및 이의 용도에 관한 것이다. 개시된 펩타이드를 사용함으로써, 목적하지 않은 자가항체의 생체내 또는 생체외 중화가 가능함이 교시되어 있다. 비교가능한 접근법은 제WO 1992/014150 A1호 또는 제WO 1998/030586 A2호에 개시되어 있다.
제WO 2018/102668 A1호는 질환-유발 또는 달리 목적하지 않은 항체의 선택적인 분해를 위한 융합 단백질을 개시하고 있다. 융합 단백질("Seldeg"로 명명됨)은 거의 중성 pH에서 세포 표면 수용체 또는 다른 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 표적화 구성성분, 및 표적화 구성성분에 직접 또는 간접적으로 융합된 항원 구성성분을 포함한다. 또한 표적 항원-특이적인 항체에 특이적으로 결합하도록 구성된 항원 구성성분을 갖는 Seldeg를 환자에게 투여함으로써 환자로부터 표적 항원-특이적인 항체를 고갈시키는 방법이 개시되어 있다.
제WO 2015/181393 A1호는 해바라기 트립신 억제제(sunflower_trypsin-inhibitor-)(SFTI-) 및 사이클로타이드-기반 스캐폴드(cyclotide-based 스캐폴드) 내로 이식된 펩타이드에 관한 것이다. 이러한 펩타이드, 예를 들면, 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis)에서 자가항체를 차단하고 염증(inflammation) 및 통증(pain)을 억제하는 것으로 밝혀진 SFTI 스캐폴드 내로 이식된 시트룰린화된 (citrullinated) 피브리노겐 서열은 자가면역 질환에 효과적인 것으로 개시되어 있다. 이러한 스캐폴드는 비-면역원성인 것으로 개시되어 있다.
에를랜드슨(Erlandsson) 등은 항-이디오타입 항체(anti-idiotypic antibody) 및 이의 유도체를 생체내(in vivo)에서 청소하는 것(clearing)을 개시하고 있다.
Berlin Cures Holding AG(독일)는 고 투여량에서 자가항체의 항원 결합 영역에 대한 경쟁적 결합에 의해 자가항체를 차단하는 것으로 제안된 확장성 심근병증(dilated cardiomyopathy) 및 다른 GPCR-자가항체 관련 질환(GPCR-autoantibody related disease)의 치료를 위한 정맥내 광범위한 스펙트럼의 중화제 DNA 압타머(neutralizer DNA aptamer)(참고: 예컨대, 제WO 2016/020377 A1호 및 제 WO 2012/000889 A1호)를 제시하였다. 일반적으로, 압타머는 아직 돌파구를 달성하지 않았으며 여전히 임상 개발의 예비 단계에 있다. 주요 관심은 여전히 생물안정성 및 생이용가능성, 구속, 예를 들면, 뉴클레아제 민감성, 독성, 작은 크기 및 신장 청소(renal clearance)이다. 선택적인 항체 길항제로서 이의 용도와 관련된 특수한 문제는 선천성 면역 반응을 자극하는 이의 경향성이다.
제WO 00/33887 A2호는 항체, 특히 질환-관련된 항체의 순환 수준을 감소시키는 방법을 개시하고 있다. 방법은 유효량의 에피토프-제시 담체를 개체에게 투여함을 개시하고 있다. 또한, 에피토프-제시 담체를 사용하는 항체의 순환하는 수준을 감소시키기 위한 생체외 방법이 개시되어 있다.
제US 6,022,544 A호는 포유동물에게 고 분자량 면역자극성 분자가 없는 비-면역원성 작제물을 투여함으로써 포유동물에서 목적하지 않은 항체 반응을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 작제물(contruct)은 약제학적으로 허용되는 비-면역원성 담체에 결합된 B 세포 막 면역글로불린 수용체 에피토프의 적어도 2개의 카피를 함유하는 것으로 개시되어 있다.
그러나, 선행 기술에 개시된 체내적으로 바람직하지 않은 항체를 고갈시키려는 접근법은 많은 단점을 갖는다. 특히, 이들 중 어느 것도 정식 임상용으로 승인되지 않았다.
본 발명에 사용된 생물중합체 스캐폴드는 포유동물 생물중합체, 예를 들면, 사람 생물중합체, 비-사람 영장류 생물중합체, 양(sheep) 생물중합체, 돼지 생물중합체, 개 생물중합체 또는 설치류 생물중합체일 수 있다. 특히, 생물중합체 스캐폴드는 단백질, 특히 (비-변형된 또는 이의 아미노산 서열과 관련하여 비-변형된) 혈장 단백질이다. 바람직하게는, 생물중합체 스캐폴드는 포유동물 단백질, 예를 들면, 사람 단백질, 비-사람 영장류 단백질, 양 단백질, 돼지 단백질, 개 단백질 또는 설치류 단백질이다. 전형적으로, 생물중합체 스캐폴드는 바람직하게는 건강한(사람) 개인의 혈장내에서 순환하고 예컨대, 효율적으로 스캐빈징(scavenging)되거나 스캐빈징 수용체(scavenging receptor)에 의해 재순환될 수 있는, 예컨대, 골수 세포 또는 간 동모양 혈관 내피 세포에 존재하는 비-면역원성 및/또는 비-독성 단백질이다(참고: Sorensen 등, 2015).
특수한 선호도에 따라서, 생물중합체 스캐폴드는 바람직하게는 면역글로불린, 알파-글로불린, 알파2-글로불린 및 베타-글로불린, 특히 면역글로불린 G, 헤파토글로빈 및 트랜스페린으로 이루어진 그룹으로부터 선택된, (바람직하게는 사람) 글로불린이다. 특히 헤파토글로빈은, 실시예 5 내지 9에 나타낸 바와 같은, 수 개의 유리한 특성, 특히 유리한 안전성 프로파일을 갖는다.
생물중합체 스캐폴드는 또한 (바람직하게는 사람) 알부민, 헤모펙신, 알파-1-항트립신, C1 에스테라제 억제제, 락토페린 또는 전술한 단백질, 예를 들면, 글로불린 모두의 비-면역원성(즉, 치료될 개체에서 비-면역원성) 단편일 수 있다.
또 다른 선호도에서, 생물중합체 스캐폴드는 항-CD163 항체(즉, CD163 단백질에 특이적인 항체) 또는 이의 CD163-결합 단편이다.
사람 CD163(Cluster of Differentiation 163)은 리간드 결합을 담당하는 9개의 스캐빈저 수용체 시스테인 풍부(scavenger receptor cysteine-rich, SRCR) 도메인으로 구성된 세포외 부분을 가지는 130kDa 막 당단백질(이전에는 M130이라고 함) 및 프로토타입 클래스 I 스캐빈저 수용체이다. CD163은 대식세포 및 단핵구에 존재하는 세포내 이입 수용체(endocytic receptor)이며,혈액에서 헤모글로빈/합토글로빈 복합체를 제거하지만 항염증 과정과 상처 치유에도 역할을 한다. CD163의 가장 높은 발현 수준은 조직 대식세포(예: 간의 쿠퍼 세포)와 비장 및 골수의 특정 대식세포에서 발견된다. 조직 및 세포 특이적인 발현과 바람직하지 않은 항체의 고갈과는 전혀 관련이 없기 때문에, CD163은 예컨대, 면역독소, 리포좀 또는 기타 치료 화합물 부류의 약물 전달을 위한 대식세포 표적으로 간주된다(Skytthe 등, 2020).
모노클로날 항-CD163 항체 및 이들이 결합하는 SRCR 도메인은 예를 들어 Madsen 등, 2004, 특히 도 7에 개시되어 있다. 추가의 항-CD163 항체 및 이의 단편은 예를 들어 제WO 2002/032941 A2호 또는 제WO 2011/039510 A2호에 개시되어 있다. 도메인 특이적 항체, 예를 들어 모노클로날 항체(mAb) EDhu1를 사용하여 적어도 2개의 구조적으로 다른 리간드 결합 부위가 매핑되었다 (Madsen 등, 2004 참조). 이 항체는 CD163의 세 번째 SRCR에 결합하고 CD163에 결합하는 헤모글로빈/합토글로빈과 경쟁한다. SRCR 도메인 1, 3, 7 및 9를 각각 표적으로 하는 Mac2-158, KiM8, GHI/61 및 RM3/1을 포함하여 CD163의 다른 도메인에 대한 수많은 다른 항체가 이전에 문헌에 기술되었다. 또한, 보존된 박테리아 결합 부위가 매핑되었고 특정 항체가 박테리아 결합을 억제할 수 있지만 헤모글로빈/합토글로빈 복합체 결합은 억제할 수 없으며 그 반대도 가능하다는 것이 입증되었다. 이는 CD163의 다양한 결합 방식과 리간드 상호작용을 지시한다 (Fabriek 등, 2009; 또한, 그 인용 참조).
바람직하지 않은 항체의 고갈과는 전혀 관련이 없이, 그의 생리학적 특성 때문에 CD163은 세포 특이적 약물 전달의 표적으로 제안되었다. 종양 관련 대식세포는 현재 CD163 표적화의 잠재적 이점이 탐구되는 주요 표적 중 하나이다. 놀랍게도, 수많은 종양 및 악성종양이 CD163 발현 수준과 상관관계가 있는 것으로 나타났으며, 이는 종양 치료를 위한 이 표적의 사용을 뒷받침한다. 다른 제안된 응용에는 만성 염증 및 신경염증에서 항약물 결합체(ADC)에 의한 CD163 표적화가 포함된다 (Skytthe 등, 2020에서 검토됨). 따라서, 특히 덱사메타손 또는 스텔스 리포솜 접합체를 사용한 ADC에 의한 CD163 표적화는 현재 연구되고 있는 치료 원리를 나타낸다(Graversen 등, 2012; Etzerodt 등, 2012).
이러한 맥락에서, 항-CD163 항체가 생체 내에서 적용될 때 엔도사이토시스(endocytosis)에 의해 신속하게 내재화될 수 있음을 나타내는 참고 문헌이 있다. 이는 예를 들어 모노클로날 항체(mAb) Ed-2(Dijkstra 등, 1985; Graversen 등, 2012) 또는 mAb Mac2-158/KN2/NRY(Granfeldt 등, 2013)에 대해 나타났다. 본 발명(특정 실시예 섹션 참조)의 과정에서 이루어진 관찰과 조합된 이러한 관찰에 기초하여, 항-CD163 항체 및 CD163-결합은 바람직하지 않은 항체의 고갈/제거를 위한 매우 적합한 생물중합체 스캐폴드인 것으로 밝혀졌다.
수많은 항-CD163 항체 및 이의 CD163-결합 단편이 당업계에 공지되어 있다(예를 들어 상기 참조). 이들은 본 발명의 생물중합체 스캐폴드로 사용하기에 적합하다. 예를 들어, 본원 또는 제WO 2011/039510 A2호(본원에 참조로 포함됨)에 언급된 임의의 항-CD163 항체 또는 이의 단편은 본 발명에서 생체중합체 스캐폴드로 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명 화합물의 생물중합체 스캐폴드는 제WO 2011/039510 A2호에 개시된 항체 Mac2-48, Mac2-158, 5C6-FAT, BerMac3, 또는 E10B10이고, 특히 제WO 2011/039510 A2호에 개시된 사람화 Mac2-48 또는 Mac2-158이다.
바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 11-13으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR) 서열을 포함하는 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
추가로 또는 이에 대안적으로, 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 14-16으로 이루어진 그룹 또는 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 17-19로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역을 포함한다.
추가의 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
추가로 또는 이에 대안적으로, 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역을 포함한다.
추가의 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
추가로 또는 이에 대안적으로, 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역을 포함한다.
추가의 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
추가로 또는 이에 대안적으로, 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역을 포함한다.
본 발명의 맥락에서, 항-CD163 항체는 사람화 항체 또는 사람 항체, 비사람 영장류 항체, 양 항체, 돼지 항체, 개 항체 또는 설치류 항체와 같은 포유동물 항체일 수 있다. 구현예에서, 항-CD163 항체는 모노클로날일 수 있다.
선호도에 따라서, 항-CD163 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE 및 IgM에서 선택된다.
추가의 선호도에 따라서, CD163-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab)2, Fv, 단일 사슬 항체, 나노바디 및 항원 결합 도메인으로부터 선택된다.
CD163 아미노산 서열은 예를 들어 제WO 2011/039510 A2호(여기에 참조로 포함됨)에 개시되어 있다. 본 발명의 맥락에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 바람직하게는 사람 CD163에 대해 특이적이고, 특히 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 28-31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는다.
추가의 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 CD163의 세포외 영역 (예를 들어, 사람 CD163의 경우: UniProt Q86VB7의 아미노산 42-1050, 서열 버전 2)에 대해, 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인에 대해, 보다 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인 1-9 (예를 들어 사람 CD163의 경우: 각각 UniProt Q86VB7의 아미노산 51-152, 159-259, 266-366, 373-473, 478-578, 583-683, 719-819, 824-926 및 929-1029, 서열버전 2) 중 어느 하나에 대해, 심지어 보다 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인 1-3 (예를 들어, 사람 CD163에 경우, 각각 UniProt Q86VB7의 아미노산 51-152, 159-259, 266-366 및 373-473, 서열 버전 2) 중 어느 하나에 대해, 특히 CD163의 SRCR 도메인 1 (특히, 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 1-8 중 어느 하나의 아미노산 서열, 특히 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 1)에 대해 특이적이다.
특정 선호도에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 (바람직하게는 사람) CD163에 대한 결합에 대해 (바람직하게는 사람) 헤모글로빈-합토글로빈 복합체 (예컨대, ELISA에서)와 경쟁할 수 있다.
또 다른 특정 선호도에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 사람 CD163에 대한 결합에 대해 본원에 개시된 임의의 항-사람 CD163 mAb, 특히 제WO 2011/039510 A2호에 개시된 바와 같은 Mac2-48 또는 Mac2-158과 경쟁할 수 있다.
심지어 또 다른 특정 선호도에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 사람 CD163에 결합하기 위해
DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYIT
YSGITNYNPSLKSQISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVSGTYYFDYW
GQGTTLTVSS (서열번호 1) 아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역 및
SVVMTQTPKSLLISIGDRVTITCKASQSVSSDVAWFQQKPGQSPKPLIYYASNRY
TGVPDRFTGSGYGTDFTFTISSVQAEDLAVYFCGQDYTSPRTFGGGTKLEIKRA (서열번호 2)의 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역을 가지는 항체와 (예컨대, ELISA에서) 경쟁할 수 있다.
경쟁적 결합 실험(예를 들어 ELISA를 기반으로 함)에 대한 상세한 사항은 당업자에게 공지되어 있고 예를 들어 제WO 2011/039510 A2호(본원에 참조로 포함됨)에 개시되어 있다.
제WO 2011/039510 호에 개시된 바와 같은 항체 E10B10 및 Mac2-158의 에피토프를 맵핑하였다(실시예 섹션 참조). 이들 에피토프는 본 발명의 화합물의 항-CD163 항체(또는 이의 CD163-결합 단편)의 결합에 특히 적합하다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드에 특이적이며, 여기서 펩타이드는 아미노산 서열 CSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEA(서열번호 3) 또는 이의 7 내지 24개 아미노산 단편을 포함한다. 바람직하게는, 이 펩타이드는 아미노산 서열 GRVEVKVQEEW (서열번호 4), WGTVCNNGWS (서열번호 5) 또는 WGTVCNNGW (서열번호 6)를 포함한다. 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 EWGTVCNNGWSME (서열번호 7), QEEWGTVCNNGWS (서열번호 8), WGTVCNNGWSMEA (서열번호 9), EEWGTVCNNGWSM (서열번호 10), VQEEWGTVCNNGW (서열번호 11), EWGTVCNNGW (서열번호 12) 및 WGTVCNNGWS (서열번호 5)로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 심지어 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 EWGTVCNNGWSME (서열번호 7), QEEWGTVCNNGWS (서열번호 8), WGTVCNNGWSMEA (서열번호 9), EEWGTVCNNGWSM (서열번호10), VQEEWGTVCNNGW (서열번호 11), EWGTVCNNGW (서열번호 12) 및 WGTVCNNGWS (서열번호 5) 로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD 163-결합 단편은 7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드에 특이적이며, 여기서 펩타이드는 아미노산 서열 DHVSCRGNESALWDCKHDGWG (서열번호 13) 또는 이의 7 내지 20개 아미노산 단편을 포함한다. 바람직하게는, 이 펩타이드는 아미노산 서열 ESALW (서열번호 14) 또는 ALW을 포함한다. 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 ESALWDC (서열번호 15), RGNESALWDC (서열번호 16), SCRGNESALW (서열번호 17), VSCRGNESALWDC (서열번호 18), ALWDCKHDGW (서열번호 19), DHVSCRGNESALW (서열번호 20), CRGNESALWD (서열번호 21), NESALWDCKHDGW (서열번호 22) 및 ESALWDCKHDGWG (서열번호 23)로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 심지어 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 ESALWDC (서열번호 15), RGNESALWDC (서열번호 16), SCRGNESALW (서열번호 17), VSCRGNESALWDC (서열번호 18), ALWDCKHDGW (서열번호 19), DHVSCRGNESALW (서열번호 20), CRGNESALWD (서열번호 21), NESALWDCKHDGW (서열번호 22) 및 ESALWDCKHDGWG (서열번호 23)로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD 163-결합 단편은 7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드에 특이적이며, 여기서 펩타이드는 아미노산 서열 SSLGGTDKELRLVDGENKCS (서열번호 24) 또는 이의 7 내지 19개 아미노산 단편을 포함한다. 바람직하게는, 이 펩타이드는 아미노산 서열 SSLGGTDKELR (서열번호 25) 또는 SSLGG (서열번호 26)을 포함한다. 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 SSLGGTDKELR (서열번호 25), SSLGGTDKEL (서열번호 27), SSLGGTDKE (서열번호 28), SSLGGTDK (서열번호 29), SSLGGTD (서열번호 30), SSLGGT (서열번호 31) 및 SSLGG (서열번호 26)로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 심지어 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 SSLGGTDKELR (서열번호 25), SSLGGTDKEL (서열번호 27), SSLGGTDKE (서열번호 28), SSLGGTDK (서열번호 29), SSLGGTD (서열번호 30), SSLGGT (서열번호 31) 및 SSLGG (서열번호 26)로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
펩타이드(또는 펩타이드 n-머)는 바람직하게는 예를 들면, 아민-대-설프하이드릴 링커 및 이작용성 NHS-PEG-말레이미드 링커 또는 당해 분야에 공지된 다른 링커와 같이 당해 분야에 공지된 (비-면역원성) 링커를 통해 생물중합체 스캐폴드에 공유결합으로 접합(또는 공유결합으로 결합)된다. 대안적으로, 펩타이드(또는 펩타이드 n-머)는 예컨대, 단백질과 펩타이드(이는 또한 본원에서 "링커"로 지칭된다) 사이의 이황화물 결합의 형성에 의해, 또는 비-공유결합성 조립 기술, 자발적 이소펩타이드 결합 형성, 또는 유전 코드 확장 기술을 통한 생체-직교 화학용 비천연 아미노산을 사용하여 에피토프 담체 스캐폴드(epitope carrier scaffold)에 결합시킬 수 있다(참고: Howarth 등 2018 및 Lim 등 2016). 본 발명에 적합한 공유 및 비공유 생체접합 전략은 또한 예컨데, Sunasee 등, 2014에서 논의된다.
본 발명의 화합물은 예컨대, 하나 또는 수개의 상이한 펩타이드(이는 본원에 개시된 바와 같이 펩타이드 n-머의 상이한 형태로 존재할 수 있다)의 적어도 2개, 바람직하게는 3 내지 40개 카피를 포함할 수 있다. 화합물은 1개 유형의 에피토프성 펩타이드(epitopic peptide)(다시 말해서: 항체-결합 펩타이드 또는 파라토프-결합 펩타이드) 중 하나의 유형을 포함할 수 있지만, 하나의 생물중합체 스캐폴드 분자에 결합된 에피토프성 펩타이드의 다양성은 예컨대, 8개 이하의 상이한 에피토프성 펩타이드의 혼합물일 수 있다.
전형적으로, 본 발명에 존재하는 펩타이드는 선택된 목적하지 않은 항체에 특이적으로 결합하므로, 이의 서열을 일반적으로 선택하여 최적화함으로써 이는 특이적인 결합을 제공하여 혈액으로부터 목적하지 않은 항체 고갈의 선택성을 보장한다. 이러한 목적을 위해, 상기 펩타이드의 펩타이드 서열은 전형적으로 전체 에피토프 서열 또는 목적하지 않는 항체 에피토프의 부위에 상응한다. 본 발명에 사용된 펩타이드는 1개, 2개 또는 4개 이하의 아미노산 위치를 교환하고, 예컨대, 고갈시킬 필요가 있는 목적하지 않은 항체에 대한 결합 친화성을 조절하도록 함으로써 추가로 최적화시킬 수 있다. 증가된 결합 친화성을 지닌 "미모토프(mimotopes)를 제공할 수 있고 당해 분야에 공지된 이러한 단일 또는 다수의 아미노산 치환 전략이 파아지 디스플레이 전략 (phage display strategies) 또는 펩타이드 미세배열(peptide microarray)을 사용하여 앞서 개발되었다. 다시 말해서, 본 발명에 사용된 펩타이드는 목적하지 않은 항체의 천연 에피토프 서열과 완전히 동일하지 않아야만 한다.
전형적으로, 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드(예컨대, 펩타이드 P 또는 Pa 또는 Pb)는 포유동물 단백질 속에 일반적으로 존재하는 20개 아미노산 중 하나 이상으로 구성된다. 또한, 펩타이드에 사용된 아미노산 레퍼토리는 해독후 변형된 아미노산으로 확장되어, 예컨대, 단백질의 항원성, 예를 들면, 해독후 변형 (post translational modifications), 특히 산화성 해독후 변형(참고: 예컨대, Ryan 2014) 또는 펩타이드 골격에 대한 변형(참고: 예컨대, Muller 2018), 또는 비-천연 아미노산에 대한 변형(참고: 예컨대, Meister 등, 2018)에 영향을 미칠 수 있다. 이러한 변형은 또한 펩타이드에서 사용되어, 예컨대, 펩타이드와 목적하지 않은 항체의 가변 영역 사이의 결합 상호작용 및 특이성을 조정할 수 있다. 특히, 에피토프(및 따라서 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드)는 또한 예를 들면, 자가면역 질환에서와 같이 시트룰린(citrulline)을 함유할 수 있다. 또한, 펩타이드 서열내로 변형을 도입시킴으로써 HLA 분자에 대한 결합 성향을 감소시킬 수 있거나, 안정성 및 물리화학적 특성이 개선될 수 있거나 목적하지 않은 항체에 대한 친화성이 증가될 수 있다.
많은 경우에, 고갈시켜야 하는 목적하지 않은 항체는 올리고- 또는 폴리클로날(예컨대, 자가항체, ADA 또는 동종항체는 전형적으로 폴리- 또는 올리고 클로날이다)이고, 목적하지 않은(폴리클로날) 항체 에피토프는 표적 분자의 보다 큰 에피토프성 영역을 포함한다. 이러한 상황을 조정하기 위하여, 본 발명의 화합물은 2개 또는 수개의 에피토프성 펩타이드(다시 말해서: 항체-결합 펩타이드 또는 파라토프-결합 펩타이드)의 혼합물을 포함함으로써, 목적하지 않은 항체의 폴리클로날성(polyclonality) 또는 올리고클로날성(oligoclonality)을 조정하도록 한다.
본 발명의 이러한 폴리-에피토프성 화합물은 목적하지 않은 항체를 효과적으로 고갈시킬 수 있고 목적하지 않은 항체의 에피토프가 보다 큰 아미노산 서열 범위로 연장되는 경우에 모노-에피포트성 화합물보다 흔히 더 효과적이다.
이는 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드를 설계하여 이것이 고갈될 목적하지 않은 항체의 가변 영역에 의해 특이적으로 인식되도록 설계하는 경우에 유리하다. 본 발명에 사용된 펩타이드의 서열은 예컨대, 목적하지 않은 항체에서 미세한 에피토프 맵핑 기술(즉, 에피토프 웍스(epitope walks), 펩타이드 고갈 맵핑, 예를 들면, Carter 등, 2004, 및 Hansen 등, 2013에 기술된 바와 같은 펩타이드 배열을 사용한 아미노산 치환 스캐닝)을 적용함으로써 선택할 수 있다.
바람직한 구현예에 따라서, 바이러스 벡터는 바람직하게는 사람 숙주에 특이적인 AdV 벡터 또는 AAV 벡터이다.
또 다른 선호도에서는, 본원에 사용된 서열 단편은 AdV 캡시드 단백질 또는 AAV 캡시드 단백질(특히 여기서 AAV는 AAV-8, AAV-9, AAV-6, AAV-2 또는 AAV-5 중 하나임), 또는 이들의 UniProt 접근 코드:
A9RAI0, B5SUY7, O41855, O56137, O56139, P03135, P04133, P04882, P08362, P10269, P12538, P69353, Q5Y9B2, Q5Y9B4, Q65311, Q6JC40, Q6VGT5, Q8JQF8, Q8JQG0, Q98654, Q9WBP8, Q9YIJ1
에 의해 식별되는 바이러스 단백질 중 하나, 또는 AdV 헥손 단백질, AdV 섬유 단백질, AdV 펜톤 단백질, AdV IIIa 단백질, AdV VI 단백질, AdV VIII 단백질 또는 AdV IX 단백질 또는 도 10 및 도 11에서 확인된 캡시드 단백질 중 어느 하나 또는 Cearley 등, 2008에 나열된 캡시드 단백질 중 어느 하나의 에피토프 또는 에피토프 부분(예컨대, 적어도 6개, 특히 적어도 7개 또는 심지어 적어도 8개의 아미노산)을 포함한다(예컨대, 실시예 10 참조).
(AAV 및 AdV에 대한) 고갈 중화 항체에 특히 적합한 에피토프는 사람 혈청의 스크린 및 에피토프 스크린에서 발견되었다(특히 실시예 14-21 참조). 따라서, 선호도로서, 본원에 사용된 서열 단편은
ETGPPTVPFLTPPF (서열번호 32), HDSKLSIATQGPL (서열번호 33), LNLRLGQGPLFINSAHNLDINY (서열번호 34), VDPMDEPTLLYVLFEVFDVV (서열번호 35), MKRARPSEDTFNPVYPYD (서열번호 36), ISGTVQSAHLIIRFD (서열번호 37), LGQGPLFINSAHNLDINYNKGLYLF (서열번호 38), SYPFDAQNQLNLRLGQGPLFIN (서열번호 39), GDTTPSAYSMSFSWDWSGHNYIN (서열번호 40), VLLNNSFLDPEYWNFRN (서열번호 41), HNYINEIFATSSYTFSYIA (서열번호 42), DEAATALEINLEEEDDDNEDEVDEQAEQQKTH (서열번호 43), INLEEEDDDNEDEVDEQAEQ (서열번호 44), DNEDEVDEQAEQQKTHVF (서열번호 45), EWDEAATALEINLEE (서열번호 46), PKVVLYSEDVDIETPDTHISYMP (서열번호 47), YIPESYKDRMYSFFRNF (서열번호 48), DSIGDRTRYFSMW (서열번호 49), SYKDRMYSFFRNF (서열번호 50), and FLVQMLANYNIGYQGFY (서열번호 51)의 AdV 서열 그룹; 또는
WQNRDVYLQGPIWAKIP (서열번호 52), DNTYFGYSTPWGYFDFNRFHC (서열번호 53), MANQAKNWLPGPCY (서열번호 54), LPYVLGSAHQGCLPPFP (서열번호 55), NGSQAVGRSSFYCLEYF (서열번호 56), PLIDQYLYYL (서열번호 57), EERFFPSNGILIF (서열번호 58), ADGVGSSSGNWHC (서열번호 59), 서열번호 383 내지1891(표 1 참조) - 바람직하게는 표 1의 그룹 III, 보다 바람직하게는 표 1의 그룹 II, 특히 표 1의 그룹 I - 및 서열번호 1892 내지 2063(표 2 참조) - 바람직하게 표 2의 그룹 I - 및 표 3의 그룹 II 또는 III의 서열 (특히 서열번호: 2064 내지 2103), 보다 바람직하게는 표 3의 그룹 I의 서열의 AAV 서열 그룹; 또는
표 4의 서열 그룹, 특히 서열번호 2104 내지 2190에 의해 확인된 서열 그룹;
으로부터 선택되는 적어도 4개 또는 적어도 5개 또는 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 9개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개의 연속되는 아미노산의 서열을 포함한다.
특히 바람직하게는, Pa 및/또는 Pb 또는, 각각의 경우에 독립적으로, P는 GPPTVPFLTP (서열번호 60), ETGPPTVPFLTPP (서열번호 61), TGPPTVPFLT (서열번호 62), PTVPFLTPPF (서열번호 63), HDSKLSIATQGPL (서열번호 64), SIATQGP (서열번호 65), NLRLGQGPLF (서열번호 66), QGPLFINSAH (서열번호 67), PLFINSAHNLD (서열번호 68), LGQGPLF (서열번호 69), LNLRLGQGPL (서열번호 70), GQGPLFI (서열번호 71), NLRLGQGPLFINS (서열번호 72), LFINSAHNLDINY (서열번호 73), FINSAHNLDI (서열번호 74), LRLGQGPLFI (서열번호 75), GPLFINSAHN (서열번호 76), DEPTLLYVLFEVF (서열번호 77), TLLYVLFEVF (서열번호 78), DEPTLLYVLF (서열번호 79), TLLYVLFEVFDVV (서열번호 80), TLLYVLF (서열번호 81), MDEPTLLYVLFEV (서열번호 82), EPTLLYVLFE (서열번호 83), DPMDEPTLLYVLF (서열번호 84), LLYVLFEVFD (서열번호 85), YVLFEVFDVV (서열번호 86), PTLLYVLFEV (서열번호 87), PTLLYVLFEVFDV (서열번호 88), LYVLFEVFDV (서열번호 89), EPTLLYVLFEVFD (서열번호 90), LYVLFEV (서열번호 91), PMDEPTLLYVLFE (서열번호 92), LLYVLFE (서열번호 93), VDPMDEPTLLYVL (서열번호 94), YVLFEVF (서열번호 95), PTLLYVL (서열번호 96), MKRARPSEDTF (서열번호 97), KRARPSEDTF (서열번호 98), MKRARPSEDT (서열번호 99), MKRARPSEDTFN (서열번호 100), ARPSEDTFNP (서열번호 101), RARPSEDTFN (서열번호 102), RPSEDTF (서열번호 103), MKRARPSEDTFNP (서열번호 104), RARPSEDTFNPVY (서열번호 105), ARPSEDT (서열번호 106), EDTFNPVYPY (서열번호 107), RPSEDTFNPVYPY (서열번호 108), KRARPSEDTFNPV (서열번호 109), DTFNPVY (서열번호 110), RPSEDTFNPV (서열번호 111), PSEDTFNPVY (서열번호 112), DTFNPVYPYD (서열번호 113), VQSAHLIIRF (서열번호 114), AHLIIRF (서열번호 115), SGTVQSAHLIIRF (서열번호 116), TVQSAHLIIR (서열번호 117), HLIIRFD (서열번호 118), SAHLIIR (서열번호 119), QSAHLIIRFD (서열번호 120), ISGTVQSAHLIIR (서열번호 121), GTVQSAHLII (서열번호 122), GTVQSAHLIIRFD (서열번호 123), QSAHLII (서열번호 124), HNLDINY (서열번호 125), LFINSAHNLDINY (서열번호 126), NLDINYNKGLYLF (서열번호 127), FVSPNG (서열번호 128), NYINEIF (서열번호 129), NKGLYLF (서열번호 130), INYNKGLYLF (서열번호 131), NSAHNLDINY (서열번호 132), WDWSGHNYINEIF (서열번호 133), SGHNYINEIF (서열번호 134), LGTGLSF (서열번호 135), PFLTPPF (서열번호 136), LGQGPLF (서열번호 137), NLRLGQGPLF (서열번호 138), NQLNLRLGQGPLF (서열번호 139), GQGPLFI (서열번호 140), QLNLRLGQGPLFI (서열번호 141), SYPFDAQNQLNLR (서열번호 142), YPFDAQNQLNLRL (서열번호 143), LRLGQGPLFI (서열번호 144), NQLNLRL (서열번호 145), FDAQNQLNLR (서열번호 146), QNQLNLR (서열번호 147), QGPLFIN (서열번호 148), PFDAQNQLNLRLG (서열번호 149), DAQNQLNLRL (서열번호 150), RLGQGPLFIN (서열번호 151), QLNLRLG (서열번호 152), FDAQNQLNLRLGQ (서열번호 153), LNLRLGQGPLFIN (서열번호 154), AQNQLNLRLG (서열번호 155), AQNQLNL (서열번호 156), LNLRLGQ (서열번호 157), SYPFDAQNQL (서열번호 158), PFDAQNQLNL (서열번호 159), YSMSFSW (서열번호 160), TPSAYSMSFSWDW (서열번호 161), MSFSWDW (서열번호 162), PSAYSMSFSW (서열번호 163), DTTPSAYSMSFSW (서열번호 164), TTPSAYSMSF (서열번호 165), YSMSFSWDWS (서열번호 166), TGDTTPSAYSMSF (서열번호 167), FSWDWSGHNY (서열번호 168), SFSWDWS (서열번호 169), SAYSMSF (서열번호 170), SFSWDWSGHN (서열번호 171), SAYSMSFSWD (서열번호 172), SMSFSWD (서열번호 173), SWDWSGHNYI (서열번호 174), AYSMSFS (서열번호 175), SMSFSWDWSGHNY (서열번호 176), FSWDWSG (서열번호 177), SWDWSGH (서열번호 178), FLDPEYWNFR (서열번호 179), SFLDPEYWNF (서열번호 180), PEYWNFR (서열번호 181), LNNSFLDPEYWNF (서열번호 182), NNSFLDPEYWNFR (서열번호 183), FLDPEYW (서열번호 184), DPEYWNF (서열번호 185), NNSFLDPEYW (서열번호 186), VLLNNSFLDPEYW (서열번호 187), EYWNFRN (서열번호 188), LNNSFLDPEY (서열번호 189), LDPEYWNFRN (서열번호 190), LNNSFLD (서열번호 191), NSFLDPEYWN (서열번호 192), SSYTFSY (서열번호 193), FATSSYTFSY (서열번호 194), YINEIFATSSYTF (서열번호 195), SYTFSYI (서열번호 196), ATSSYTF (서열번호 197), EIFATSSYTF (서열번호 198), NEIFATSSYTFSY (서열번호 199), ATSSYTFSYI (서열번호 200), HNYINEIFATSSY (서열번호 201), IFATSSY (서열번호 202), INEIFATSSY (서열번호 203), NYINEIFATSSYT (서열번호 204), YINEIFA (서열번호 205), YTFSYIA (서열번호 206), EIFATSSYTFSYI (서열번호 207), ALEINLEEEDDDN (서열번호 208), ATALEINLEEEDD (서열번호 209), EAATALEINLEEE (서열번호 210), LEINLEE (서열번호 211), TALEINLEEEDDD (서열번호 212), EINLEEE (서열번호 213), ALEINLEEED (서열번호 214), LEINLEEEDD (서열번호 215), TALEINLEEE (서열번호 216), DEAATALEINLEE (서열번호 217), LEINLEEEDDDNE (서열번호 218), AATALEINLEEED (서열번호 219), EINLEEEDDD (서열번호 220), ATALEINLEE (서열번호 221), INLEEEDDDN (서열번호 222), NLEEEDDDNE (서열번호 223), DEVDEQA (서열번호 224), EDDDNEDEVDEQA (서열번호 225), DDNEDEVDEQAEQ (서열번호 226), EVDEQAE (서열번호 227), DNEDEVDEQA (서열번호 228), VDEQAEQ (서열번호 229), EDEVDEQAEQQKT (서열번호 230), EDEVDEQAEQ (서열번호 231), DEVDEQAEQQKTH (서열번호 232), NEDEVDEQAEQQK (서열번호 233), DEVDEQAEQQ (서열번호 234), EINLEEEDDDNED (서열번호 235), NLEEEDDDNEDEV (서열번호 236), INLEEED (서열번호 237), LEEEDDDNED (서열번호 238), INLEEEDDDNEDE (서열번호 239), DDDNEDEVDEQAE (서열번호 240), LEEEDDDNEDEVD (서열번호 241), DDNEDEVDEQ (서열번호 242), EDDDNED (서열번호 243), NLEEEDD (서열번호 244), DDNEDEV (서열번호 245), DDDNEDEVDE (서열번호 246), DDDNEDE (서열번호 247), EEEDDDNEDE (서열번호 248), EEDDDNE (서열번호 249), EDDDNEDEVD (서열번호 250), EDEVDEQ (서열번호 251), EEDDDNEDEVDEQ (서열번호 252), EEDDDNEDEV (서열번호 253), EEEDDDNEDEVDE (서열번호 254), EVDEQAEQQK (서열번호 255), DNEDEVDEQAEQQ (서열번호 256), VDEQAEQQKT (서열번호 257), EVDEQAEQQKTHV (서열번호 258), VDEQAEQQKTHVF (서열번호 259), ALEINLE (서열번호 260), WDEAATALEINLE (서열번호 261), AATALEINLE (서열번호 262), EWDEAATALEINL (서열번호 263), EAATALEINL (서열번호 264), LYSEDVDIET (서열번호 265), LYSEDVDIETPDT (서열번호 266), KVVLYSEDVDIET (서열번호 267), IETPDTH (서열번호 268), VDIETPDTHI (서열번호 269), VLYSEDVDIE (서열번호 270), DVDIETPDTHISY (서열번호 271), VVLYSEDVDIETP (서열번호 272), SEDVDIETPDTHI (서열번호 273), ETPDTHI (서열번호 274), VLYSEDVDIETPD (서열번호 275), DVDIETPDTH (서열번호 276), DIETPDTHIS (서열번호 277), EDVDIETPDTHIS (서열번호 278), IETPDTHISY (서열번호 279), YSEDVDIETPDTH (서열번호 280), VDIETPDTHISYM (서열번호 281), PKVVLYSEDVDIE (서열번호 282), DIETPDT (서열번호 283), DIETPDTHISYMP (서열번호 284), EDVDIETPDT (서열번호 285), ETPDTHISYM (서열번호 286), IETPDTHISYMP (서열번호 287), DRMYSFFRNF (서열번호 288), DRMYSFF (서열번호 289), YSFFRNF (서열번호 290), IPESYKDRMYSFF (서열번호 291), SYKDRMYSFF (서열번호 292), ESYKDRMYSF (서열번호 293), KDRMYSF (서열번호 294), YIPESYKDRMYSF (서열번호 295), PESYKDRMYSFFR (서열번호 296), YKDRMYSFFR (서열번호 297), TRYFSMW (서열번호 298), GDRTRYF (서열번호 299), DSIGDRTRYF (서열번호 300), DSIGDRTRYFSMW (서열번호 301), GDRTRYFSMW (서열번호 302), DRMYSFFRNF (서열번호 303), SYKDRMYSFFRNF (서열번호 304), NYNIGYQGFY (서열번호 305), ANYNIGYQGF (서열번호 306), MLANYNIGYQGFY (서열번호 307), IGYQGFY (서열번호 308), FLVQMLANYNIGY (서열번호 309), NIGYQGF (서열번호 310) 및 QMLANYNIGYQGF (서열번호 311)로 구성된 서열 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열을 포함하고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다.
또 다른 바람직한 구현예에서, Pa 및/또는 Pb 또는 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호 383 내지 1891(표 1 참조) - 바람직하게는 표 1의 그룹 III, 보다 바람직하게는 표 1의 그룹 II, 특히 표 1의 그룹 I - 및 서열번호 1892 내지 2063(표 2 참조) - 바람직하게 표 2의 그룹 I - 및 표 3의 그룹 II 또는 III의 서열(특히 서열번호 2064 내지 2103), 보다 바람직하게는 표 3의 그룹 I의 서열로 구성된 서열 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편 또는 심지어 11-아미노산-단편 또는 여전히 심지어 12-아미노산-단편, 특히 13-아미노산-단편을 포함하고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다.
또 다른 바람직한 구현예에서, Pa 및/또는 Pb, 또는 각각의 경우에 독립적으로, P는 표 4의 서열 그룹, 특히 서열번호 2104 내지 2190으로 확인되는 서열 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편 또는 심지어 11-아미노산-단편 또는 여전히 심지어 12-아미노산-단편, 특히 13-아미노산-단편을 포함하고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다
Pa 및/또는 Pb 또는, 각각의 경우에 독립적으로, P는 YLQGPIW (서열번호 312), VYLQGPI (서열번호 313), WQNRDVY (서열번호 314), DVYLQGP (서열번호 315), QNRDVYL (서열번호 316), LQGPIWA (서열번호 317), RDVYLQG (서열번호 318), NRDVYLQ (서열번호 319), YFGYSTPWGYFDF (서열번호 320), FGYSTPWGYF (서열번호 321), GYSTPWGYFD (서열번호 322), YSTPWGYFDF (서열번호 323), NTYFGYSTPWGYF (서열번호 324), TPWGYFDFNRFHC (서열번호 325), TYFGYSTPWGYFD (서열번호 326), DNTYFGYSTPWGY (서열번호 327), YFGYSTPWGY (서열번호 328), FGYSTPWGYFDFN (서열번호 329), NWLPGPC (서열번호 330), WLPGPCY (서열번호 331), QAKNWLPGPC (서열번호 332), AKNWLPGPCY (서열번호 333), MANQAKNWLPGPC (서열번호 334), QGCLPPF (서열번호 335), GCLPPFP (서열번호 336), VLGSAHQGCLPPF (서열번호 337), LPYVLGSAHQGCL (서열번호 338), YVLGSAHQGC (서열번호 339), CLPPFPA (서열번호 340), SAHQGCLPPF (서열번호 341), VLGSAHQGCL (서열번호 342), PYVLGSAHQGCLP (서열번호 343), GRSSFYC (서열번호 344), AVGRSSFYCLEYF (서열번호 345), AVGRSSFYCL (서열번호 346), QAVGRSSFYCLEY (서열번호 347), NGSQAVGRSSFYC (서열번호 348), DQYLYYL (서열번호 349), PLIDQYLYYL (서열번호 350), IDQYLYY (서열번호 351), FFPSNGILIF (서열번호 352), EERFFPSNGILIF (서열번호 353), VGSSSGNWHC (서열번호 354) and ADGVGSSSGNWHC (서열번호 355)로 구성된 서열 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체서열을 포함하고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되는 것이 추가로 특히 바람직하다.
추가의 선호도에 따라서, Pa 및/또는 Pb 또는 각각의 경우에 독립적으로, P는 바로 위의 4개 단락 중 하나에 제시된 서열 그룹에서 선택된 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열로 구성되고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
본 발명의 전체 맥락에서, 펩타이드 예를 들어 Pa 및/또는 Pb 또는 (각각의 경우에 독립적으로) 펩타이드 P가 표 1-4 중 어느 하나의 행에 나열된 서열로부터 선택된 적어도 4개의 연속 아미노산의 단편을 포함하는 경우(아래 실시예 섹션 참조), 이 단편은 펩타이드가 실제로 표의 동일한 행에 주어진 소스 단백질(source protein)의 더 긴 단편(예컨대, 적어도 6개 또는 적어도 7개 또는 적어도 8개 또는 적어도 9개 또는 적어도 10개 또는 적어도 11개 또는 적어도 12개 또는 13개의 아미노산 길이)을 포함하도록 (N-말단 또는 C-말단으로) 연장되는 것이 바람직하다. 다시 말해서, 펩타이드는 (표 1-4에 주어진 바와 같은) 단편 서열의 바이러스 소스 단백질 (viral source protein)의 5개 이상 또는 6개 이상 또는 7개 이상 또는 8개 이상 또는 9개 이상 또는 10개 이상 또는 11개 이상 또는 12개 또는 13개 이상의 연속 아미노산의 일부를 함유하는 것이 바람직하다.
또한 본 발명에 사용된 펩타이드가 임의의 HLA 제I 부류 또는 HLA 제II 부류 분자(즉, 치료될 개체, 예컨대 사람의)에 결합하지 않아, 생체내에서 T-세포 수용체를 통한 제시(presentation) 및 자극을 방지함으로서 면역 반응을 유도하는 것이 매우 바람직하다. 항원-특이적인 면역학적 내성화 접근법과는 대조적으로 임의의 억제성(또는 자극성) T-세포 반응을 포함시키는 것은 일반적으로 바람직하지 않다. 따라서, T-cell 에피토프 활성을 가능한 한 최대로 피하기 위하여, 본 발명의 화합물의 펩타이드(예컨대, 펩타이드 P 또는 Pa 또는 Pb)는 바람직하게는 다음의 특성 중 하나 이상을 충족한다:
- 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드가 HLA 제II 부류 또는 제I 부류 분자에 결합할 가능성을 감소시키기 위하여, 펩타이드(예컨대, 펩타이드 P 또는 Pa 또는 Pb)는, 어느 정도 더 짧거나 더 긴 길이가 여전히 허용될 수 있다고 해도, 4 내지 8개 아미노산 길이가 바람직하다.
- 이러한 펩타이드가 HLA 제II 부류 또는 제I 부류 분자에 결합하는 가능성을 추가로 감소시키기 위하여, HLA 결합 예측 알고리즘, 예를 들면, NetMHCII-2.3(참고: Jensen 등 2018)에 의해 후보물 펩타이드 서열을 시험하는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드(예컨대, 펩타이드 P 또는 Pa 또는 Pb)는 적어도 500 nM의 (예측된) HLA 결합(IC50)을 갖는다. 보다 바람직하게는, HLA 결합(IC50)은 1000 nM 이상, 특히 2000 nM 이상이다(참고: 예컨대, Peters 등 2006). HLA 제I 부류 결합의 경향성을 감소시키기 위하여, NetMHCpan 4.0을 또한 예측에 적용시킬 수 있다(Jurtz 등 2017).
- 이러한 펩타이드가 HLA 제I 부류 분자에 결합할 가능성을 추가로 감소시키기 위하여, 문헌:
Figure pct00001
에 따라 10%의 배경 수준으로 설정할 수 있다. 바람직하게는, 따라서, 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드(예컨대, 펩타이드 P)는 NetMHCpan 알고리즘에 따라 3 이상, 바람직하게는 5 이상, 보다 바람직하게는 10 이상의 순위 값%(%Rank value)를 갖는다.
- 이러한 펩타이드가 HLA 제II 부류 분자에 결합할 가능성을 추가로 감소시키기 위하여, 당해 분야에서 일반적으로 사용된 시험관내 HLA-결합 검정, 예를 들면, 리폴딩 검정(refolding assay), iTopia, 펩타이드 구제 검정(peptide rescuing assay) 또는 배열-기반 펩타이드 결합 검정(array-based peptide binding assay)을 수행하는 것이 유리하다. 대안적으로, 또는 이외에, 예컨대, Gfeller 등 2016에 고찰된 바와 같이, LC-MS 기반 분석을 사용할 수 있다.
목적하지 않은 항체의 역가의 보다 강력한 감소를 위해, 본 발명에 사용된 펩타이드를 환형화(circularization)시키는 것이 바람직하다(참고: 또한 실시예 4). 따라서, 바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 경우의 P는 환형화된 펩타이드이다. 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 10%는 환형화된 펩타이드이거나, 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 25%는 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 보다 바람직하게는 P의 모든 환형화된 경우의 적어도 50%는 환형화된 펩타이드이거나, 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 75%는 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 90%는 환형화된 펩타이드이거나 심지어 모든 경우의 P의 적어도 95%는 환형화된 펩타이드이고, 특히 P의 모든 경우은 환형화된 펩타이드이다. 수개의 일반적인 기술이 펩타이드의 환형화에 이용가능하다(참고: 예컨대, Ong 등 2017). 본원에 사용된 바와 같은 "환형화된 펩타이드"는 예컨대 문헌(참고: Ong 등)에 개시된 바와 같이, 펩타이드 자체가 환형화된 것으로 이해될 수 있음은 말할 필요가 없다(그리고, 예컨대, 서열 길이가 13개 아미노산 보다 긴 환형 스캐폴드에서 이식되지 않음). 이러한 펩타이드는 또한 본원에서 사이클로펩타이드로 지칭될 수 있다.
또한, 본 발명의 바람직한 구현예에서, 사용된 스캐폴드의 양에 대해 목적하지 않은 항체의 역가의 보다 강력한 감소를 위해, 독립적으로, 펩타이드 n-머 각각에 대해, n은 적어도 2, 보다 바람직하게는 적어도 3, 특히 적어도 4이다. 일반적으로, 제조 공정에서 복잡성을 피하기 위하여, 독립적으로 각각의 펩타이드 n-머에 대해, n은 10 미만, 바람직하게는 9 미만, 보다 바람직하게는 8 미만, 심지어 보다 바람직하게는 7 미만, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6 미만, 특히 5 미만이다. 목적하지 않은 항체의 2가 결합을 통한 보다 높은 항원항체결합력(avidity)으로부터 유리하기 위해, 펩타이드 n-머 각각에 대해, n이 2인 것이 매우 바람직하다.
목적하지 않은 항체의 다가 결합을 위해, 펩타이드 이량체 또는 n_머가 소수성의, 구조적으로 유연하고, 면역학적으로 불활성이며, 무독성이고 임상적으로 승인된 스페이서, 예를 들면, (헤테로-)이작용성 및 -삼작용성 폴리에틸렌글리콜(PEG) 스페이서 (예컨대, NHS-PEG-말레이미드)에 의해 이격되어 있는 것이 유리하다 - 광범위한 PEG 쇄가 이용가능하며 PEG는 FDA에 의해 승인되어 있다. PEG 링커의 대안, 예를 들면, 면역학적으로 불활성이고 무독성인 합성 중합체 또는 글리칸이 또한 적합하다. 따라서, 본 발명의 맥락에서, 스페이서(예컨대, 스페이서 S)는 바람직하게는 PEG 분자 또는 글리칸으로부터 선택된다. 예를 들면, 스페이서, 예를 들어, PEG가 펩타이드 합성 동안 도입될 수 있다. 이러한 스페이서(예컨대, PEG 스페이서)는 예컨대, 10000 달톤의 분자량을 가질 수 있다. 명백하게, 본 발명의 맥락 내에서, 링커 각각을 통한 생물중합체 스캐폴드에 대한 펩타이드 n-머의 공유결합성 결합은 예를 들면, 링커를 펩타이드 n-머의 스페이서(예컨대, 펩타이드 n-머의 펩타이드 대신에)에 직접 결합시킴으로써 달성할 수 있다.
바람직하게는, 펩타이드 n-머 각각은 바람직하게는 링커 각각을 통해 생물중합체 스캐폴드에 공유결합으로 결합된다.
본원에 사용된 바와 같이, 링커는 예컨대, 디설파이드 브릿지(difulphide bridge) 및 PEG 분자로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 화합물의 추가의 바람직한 구현예에 따라서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 Pa 또는 Pb이다.
또한, 제1의 펩타이드 n-머에서, P의 각각의 경우이 Pa이고, 제2의 펩타이드 n-머에서, P의 각각의 경우가 Pb인 것이 바람직하다. 대안적으로, 또는 이외에, Pa 및/또는 Pb는 환형화되어 있다.
항체 역가를 감소시키기 위해서는 2가 결합이 특히 적합하다. 따라서, 바람직한 구현예에서,
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이다.
특히 효능을 증가시키기 위하여, 바람직한 구현예에서 제1의 펩타이드 n-머는 제2의 펩타이드 n-머와는 상이하다. 유사한 이유로, 바람직하게는, 펩타이드 Pa는 펩타이드 Pb와는 상이하고, 바람직하게는 여기서 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb는 동일한 항원의 2개의 상이한 에피토프 또는 동일한 에피토프의 2개의 상이한 에피토프 부분이다.
특히 폴리클로날 항체의 보다 우수한 표적화를 위해, 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb가 동일한 아미노산 서열 단편을 동일한 아미노산 단편을 포함하는 경우가 유리하며, 여기서, 아미노산 서열 단편은 적어도 2개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 3개의 아미노산, 보다 바람직하게는 적어도 4개의 아미노산, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 5개의 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 6개의 아미노산, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 7개의 아미노산, 특히 적어도 8개의 아미노산 또는 심지어 적어도 9개의 아미노산의 길이를 갖는다.
또한, 사용된 스캐폴드의 양에 대해 목적하지 않은 항체의 역가의 보다 강력한 감소를 위해, 화합물은 다수의 상기 제1의 펩타이드 n-머(예컨대, 10개 또는 20개 또는 30개 이하) 및/또는 다수의 상기 제2의 펩타이드 n-머(예컨대, 10개 또는 20개 또는 30개 이하)를 포함한다.
또한 상기 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물이 포유동물, 바람직하게는 사람, 비-사람 영장류, 양, 돼지, 개 또는 설치류 내에서 비-면역원성인 경우가 매우 바람직하다.
본 발명의 맥락에서, 비-면역원성 화합물은 바람직하게는 생물중합체 스캐폴드(이것이 단백질인 경우) 및/또는 펩타이드(펩타이드 n-머의)가 NetMHCII-2.3 알고리즘에 의해 예측된 것으로서 HLA-DRB1_0101에 대해 100 nM 초과, 바람직하게는 500 nM 초과, 심지어 보다 바람직하게는 1000 nM 초과, 특히 2000 nM 초과의 IC50을 갖는 화합물이다. NetMHCII-2.3 알고리즘은 본원에 참고로 포함된 문헌: Jensen 등에 기술되어 있다. 알고리즘은 http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCII-2.3/ 하에 공공 이용가능하다. 심지어 보다 바람직하게는, 비-면역원성 화합물(또는 약제학적 조성물)은 생체내에서 어떠한 HLA 및/또는 MHC 분자에도 결합하지 않는다(예컨대, 포유동물 내에서, 바람직하게는 사람에서, 비-사람 영장류에서, 양에서, 돼지에서, 개에서 또는 설치류에서; 또는 치료할 개체에서).
추가의 선호도에 따라서, 화합물은 개체내, 바람직하게는 개체의 혈류내에서 적어도 하나의 (바이러스 벡터에 대한 또는 바이러스 벡터를 중화하는) 항체의 체내 제거(또는 체내 고갈)용 및/또는 개체내, 바람직하게는 개체의 혈류내에서 적어도 하나의 (바이러스 벡터에 대한 또는 바이러스 벡터를 중화하는) 항체의 역가의 감소용이다.
또 다른 바람직한 구현예에서, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인을 제외하고, P의 적어도 하나의 경우, 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 10%, 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 25%, 여전히 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 50%, 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 75%, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 90% 또는 심지어 모든 경우의 P의 적어도 95%, 특히 모든 경우의 P의 전체 서열은 단백질의 서열 단편과 동일하고, 여기서 단백질은 본원에 개시된 UniProt 수탁 코드 중 하나에 의해 확인되고; 임의로 여기서 서열 단편은 최대 5개, 바람직하게는 최대 4개, 보다 바람직하게는 최대 3개, 심지어 보다 바람직하게는 최대 2개, 특히 최대 1개의 아미노산 치환을 포함한다(예컨대, 미모토프를 생성하는 것과 같은 상기 언급한 목적을 위해서).
또 다른 바람직한 구현예에서, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인을 제외하고, 펩타이드 Pa의 전체 서열은 단백질의 서열 단편과 동일하고, 여기서 단백질은 본원에 개시된 UniProt 수탁 코드 중 하나에 의해 확인되고; 임의로 여기서 상기 서열 단편은 최대 5개, 바람직하게는 최대 4개, 보다 바람직하게는 최대 3개, 심지어 보다 바람직하게는 최대 2개, 특히 최대 1개의 아미노산 치환을 포함한다(예컨대, 미모토프를 생성하는 것과 같은 상기 언급한 목적을 위해서).
또 다른 바람직한 구현예에서, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인을 제외하고, 펩타이드 Pb의 전체 서열은 단백질의 서열 단편과 동일하고, 여기서 단백질은 본원에 개시된 UniProt 수탁 코드 중 하나에 의해 확인되고; 임의로 여기서 상기 서열 단편은 최대 5개, 바람직하게는 최대 4개, 보다 바람직하게는 최대 3개, 심지어 보다 바람직하게는 최대 2개, 특히 최대 1개의 아미노산 치환을 포함한다(예컨대, 미모토프를 생성하는 것과 같은 상기 언급한 목적을 위해서).
또 다른 바람직한 구현예에서, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인을 제외하고, 펩타이드 Pa의 전체 서열은 단백질의 서열 단편과 동일하고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인을 제외하고, 펩타이드 Pb의 전체 서열은 동일한 단백질의 동일하거나 다른, 바람직하게는 다른 서열 단편과 동일하고, 여기서 단백질은 본원에 나타낸 UniProt 수탁 코드 중 하나에 의해 확인되고; 임의로 여기서 상기 서열 단편 및/또는 상기 다른 서열 단편은 최대 5개, 바람직하게는 최대 4개, 보다 바람직하게는 최대 3개, 심지어 보다 바람직하게는 최대 2개, 특히 최대 1개의 아미노산 치환을 포함한다(예컨대, 미모토프를 생성하는 것과 같은 상기 언급한 목적을 위해서).
일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
구현예에서, 조성물은 복강내, 피하, 근육내 및/또는 정맥내 투여를 위해 제조한다. 특히, 조성물은 반복된 투여용이다(이는 전형적으로 비-면역원성 (non-immunogenic)이기 때문이다).
바람직하게는, 조성물 속의 펩타이드 P 또는 Pa 또는 Pb 대 생물중합체 스캐폴드의 몰 비는 2:1 내지 100:1, 바람직하게는 3:1 내지 90:1, 보다 바람직하게는 4:1 내지 80:1, 심지어 보다 바람직하게는 5:1 내지 70:1, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6:1 내지 60:1, 특히 7:1 내지 50:1 또는 심지어 8:10 내지 40:1이다.
다른 양태에서, 본 발명의 화합물은 치료요법에서 사용하기 위한 것이다.
본 발명의 과정에서, 본 발명의 화합물에 의해 저하되는 바람직하지 않은 항체의 생체내 동역학은 전형적으로 매우 빠르며, 때때로 바람직하지 않은 항체의 완만한 반동이 뒤따른다는 것이 밝혀졌다. 따라서 화합물(또는 화합물을 포함하는 약제학적 조성물)은 96시간 범위 내, 바람직하게는 72시간 범위 내, 보다 바람직하게는 48시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 36시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 24시간 범위 내, 특히 18시간 범위 내 또는 심지어 12시간 범위 내에서 2회 이상 투여되는 경우가 특히 바람직하고, 특허 여기서 이 범위는 24시간 이내, 바람직하게는 12시간 이내 (그러나 전형적으로 적어도 6시간 후)에 본원에 기재된 바와 같은 백신 또는 유전자 치료요법 조성물의 투여로 이어진다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 0 시간에 백신 또는 유전자 치료요법 조성물 대체 제품을 투여하기 전 -24시간 및 -12시간에 투여될 수 있다.
특수한 선호도에 따라서, 본 발명의 화합물은 개체에서 백신의 효능을 증가시키는데 사용하기 위한 것이며, 여기서 백신은 본원에 정의된 바와 같은 바이러스 벡터를 포함하고, 바람직하게는 약제학적 조성물이 백신의 투여 전 또는 그와 동시에 개체에게 투여된다.
추가의 특수한 선호도에 따라서, 본 발명의 화합물은 개체에서 유전자 치료요법 조성물의 효능을 증가시키는데 사용하기 위한 것이며, 여기서 유전자 치료요법 조성물은 본원에 정의된 바와 같은 바이러스 벡터를 포함하고, 바람직하게는 약제학적 조성물은 유전자 치료요법 조성물의 투여 전 또는 투여와 동시에 개체에게 투여된다.
구현예에서, 하나 이상의 항체는 펩타이드 P 중 적어도 하나의 경우에 대해, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적인 개체에 존재하고, 바람직하게는 여기서 상기 항체는 상기 바이러스 벡터에 대한 중화 항체이다.
조성물이 개체에서 비-면역원성인 것이 매우 바람직하다(예컨대, 이는 보조제 또는 선천성 또는 적응성 면역계(adaptive immune system)를 자극시키는 면역자극성 물질, 예컨대, 보조제 또는 T-세포 에피토프를 포함하지 않는다).
본 발명의 조성물은 개체의 체중 kg당 화합물을 1 내지 1000 mg, 바람직하게는 2 내지 500 mg, 보다 바람직하게는 3 내지 250 mg, 심지어 보다 바람직하게는 4 내지 100 mg, 특히 5 내지 50 mg의 용량으로 투여될 수 있고, 바람직하게는 여기서 조성물은 반복적으로 투여된다. 이러한 투여는 복강내, 피하, 근육내 또는 정맥내일 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은
본원에 정의된 바와 같은 약제학적 조성물을 수득하는 단계(여기서, 조성물은 개체에서 비-면역원성이고 여기서 개체내에 존재하는 하나 이상의 항체는 적어도 하나의 경우의 P에 대해, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적이다) 및
개체에게 약제학적 조성물을 투여하는 단계(특히 반복적으로 투여, 예컨대, 적어도 2회, 바람직하게는 적어도 3회, 보다 바람직하게는 적어도 5회 투여)를 포함하는, 개체 내에 존재하는 하나 이상의 항체(바람직하게는 상기 항체는 상기 바이러스 벡터에 대한 중화 항체임)를 제거(또는 고갈)시키는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 맥락에서, 개체(치료될)는 비-사람 동물, 바람직하게는 비-사람 영장류, 양, 돼지, 개 또는 설치류, 특히 마우스이다.
바람직하게는, 생물중합체 스캐폴드는 개체와 관련하여 자기유래 (autologous)이고, 바람직하게는 여기서 생물중합체 스캐폴드는 자기유래 단백질이다(즉, 개체가 마우스인 경우 쥐 알부민이 사용된다).
구현예에서, 개체는 건강한 개체이다
여전히 또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 정의된 화합물을 포함하고 바이러스 벡터 및 임의로 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함하는 약제학적 조성물(즉, 백신 또는 유전자 치료요법 조성물)에 관한 것이다. 바이러스 벡터는 전형적으로 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 특히 적어도 9개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드 단편을 포함한다. 화합물의 펩타이드 P, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb의 적어도 하나의 경우의 서열은 상기 펩타이드 단편의 서열과 적어도 70% 동일하고, 바람직하게는 적어도 75% 동일하고, 보다 바람직하게는 적어도 80% 동일하고, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 85% 동일하고, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 90% 동일하고, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 95% 동일하고, 특히 완전히 동일하다. 바람직하게는, 이 약제학적 조성물은 백신 접종 또는 유전자 치료요법에 사용하기 위한 것 및/또는 바이러스 벡터에 대한 바람직하지 않은 면역 반응의 예방 또는 억제에 사용하기 위한 것이다.
이 조성물은 또한 보다 바람직하게는 개체에서 비-면역원성이다.
심지어 여전히 또 다른 양태에서, 본 발명은 상기 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 수득하는 단계 (여기서 백신 또는 유전자 치료요법 조성물의 화합물은 개체에서 비면역원성이다), 및 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 개체에게 투여하는 (바람직하게는 반복적으로 투여하는) 단계를 포함하는, 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 사용한 치료가 요구되는 개체에서 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 사용한 치료에 대한 (바람직하지 않은) - 특히, 체액성 - 면역 반응을 억제하거나 또는 백신 또는 유전자 치료요법 조성물로 치료을 사용한 치료가 요구되는 개체에 대해 상기 정의된 바와 같은 백신 또는 유전자 치료요법 조성물에서 바이러스 벡터의 중화를 억제하는 방법을 제공한다.
일반적으로, 펩타이드 미모토프 자체에 대한 스크리닝은 당해 분야에 공지되어 있다(참고: 예를 들면, Shanmugam 등). 본 발명의 미모토프-기반 화합물은 야생형 에피토프를 기반으로 한 화합물보다 다음 2개의 장점을 갖는다: 첫째로, 일반적으로, 목적하지 않은 항체는 펩타이드 라이브러리(peptide library)를 스크리닝하여 발견된 미노토프에 대해 심지어 보다 높은 친화성을 가짐으로써, 미모토프-기반 화합물의 보다 높은 청소 효능(clearance efficiency)을 생성한다. 둘째로, 미모토프는 야생형 에피토프 서열이 T-세포 에피토프 활성을 유도하는 경우에 가능한 많은 T-세포 에피토프 활성을 추가로 피할 수 있다.
추가의 양태에서, 본 발명은 펩타이드에 관한 것으로, 여기서 펩타이드는 본 발명의 화합물 P, Pa, 또는 Pb의 적어도 2개의 펩타이드 중 임의의 하나에 대해 본원에 개시된 바와 같이 정의된다.
특정 구현예에서, 이러한 펩타이드는 순환하는 바이러스 벡터-중화 항체의 진단 분류(diagnostic typing) 및 분석을 위한 프로브로 사용될 수 있다. 펩타이드는 예를 들어 환자 계층화를 위한 진단 벡터-중화 항체 타이핑 또는 스크리닝 장치나 키트 또는 동반 진단과 같은 절차의 일부로서 또는 백신 접종 또는 유전자 치료요법 전, 동시 및/또는 후에 벡터-중화 항체 수준을 모니터링하기 위해 사용된다.
추가의 양태에서, 본 발명은
- 샘플을 본원에 개시된 바와 같이 정의된 펩타이드(예컨대, P, Pa, 또는 Pb에 대해)와 접촉시키는 단계, 및
- 샘플 내 항체의 존재 및/또는 농도를 검출하는 단계를 포함하는 생물학적 샘플에서 항체를 검출 및/또는 정량화하는 방법에 관한 것이다.
당업자는 생물학적 샘플에서 항체를 검출 및/또는 정량화하는 방법에 익숙합니다. 이 방법은 예를 들어 샌드위치 분석, 바람직하게는 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 또는 SPR(surface plasmon resonance) 분석이다.
당업자는 생물학적 샘플에서 항체를 검출 및/또는 정량화하는 방법에 익숙하다. 이 방법은 예를 들어 샌드위치 분석, 바람직하게는 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 또는 SPR(surface plasmon resonance) 분석일 수 있다.
바람직하게는, 펩타이드(특히 본 발명의 10개 이상, 보다 바람직하게는 100개 이상, 심지어 보다 바람직하게는 1000개 이상, 특히 10000개 이상의 상이한 펩타이드)는 고체 지지체, 바람직하게는 ELISA 플레이트 또는 SPR 칩 또는 전기화학, 형광, 자기, 전자, 중력 또는 광학 생체변환기를 갖춘 바이오센서 기반 진단 장치 상에 고정된다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 펩타이드(특히 적어도 10개, 보다 바람직하게는 적어도 100개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 1000개, 특히 적어도 10000개의 본 발명의 상이한 펩타이드)는 리포터 또는 단백질 단편 보완 분석(PCA)에 적합한 리포터 단편과 같은 리포터 단편에 커플링될 수 있다; 예컨대, Li 등, 2019, 또는 Kainulainen 등, 2021 참조.
바람직하게는, 샘플은 포유동물, 바람직하게는 사람으로부터 수득된다. 바람직하게는 샘플은 혈액 샘플, 바람직하게는 전혈, 혈청 또는 혈장 샘플이다.
본 발명은 또한 진단 분석, 바람직하게는 상기 본원에 개시된 바와 같은, 바람직하게는 ELISA에서, 본원에 개시된 바와 같이 정의된 펩타이드(예컨대, P, Pa, 또는 Pb에 대한)의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 추가의 양태는 바람직하게는 고체 지지체 상에 고정된, 본원에 개시된 바와 같이 정의된 펩타이드(예컨대, P, Pa, 또는 Pb에 대한)를 포함하는 진단 장치에 관한 것이다. 바람직하게는, 고체 지지체는 ELISA 플레이트 또는 표면 플라즈몬 공명 칩이다. 다른 바람직한 예에서, 진단 장치는 전기화학적, 형광, 자기, 전자, 중량 측정 또는 광학 생체변환기를 갖는 바이오센서 기반 진단 장치이다.
또 다른 바람직한 구현예에서, 진단 장치는 측면 유동 분석이다(lateral flow assay).
본 발명은 또한 본원에 개시된 바와 같이 정의된 (예컨대, P, Pa 또는 Pb) 펩타이드를 포함하는 진단 키트, 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 진단 장치에 관한 것이다. 바람직하게는 진단 키트는 버퍼, 시약, 설명서의 그룹에서 선택된 하나 이상을 추가로 포함한다. 바람직하게는 진단 키트는 ELISA 키트이다.
추가의 양태는 본원에 개시된 바와 같이 정의된 펩타이드(예를 들어, P, Pa 또는 Pb에 대해)를 포함하는 채집 장치에 관한 것이다. 바람직하게는 펩타이드는 고체 담체 상에 고정된다. 채집 장치가 본원에 개시된 바와 같이 정의된(예를 들어, P, Pa 또는 Pb에 대해) 적어도 2개, 바람직하게는 적어도 3개, 보다 바람직하게는 적어도 4개의 상이한 펩타이드를 포함하는 경우 특히 바람직하다. 바람직한 구현예에서 고체 담체는 본 발명의 화합물을 포함한다.
바람직하게는, 고체 담체는 혈액 또는 혈장 흐름과 접촉할 수 있다. 바람직하게는, 고체 담체는 멸균되고 발열원이 없는(pyrogen-free) 컬럼이다.
본 발명의 맥락에서, 개선된 생물이용능(bioavailability)을 위해, 본 발명의 화합물은 25℃에서 적어도 0.1 μg/ml, 바람직하게는 적어도 1 μg/ml, 보다 바람직하게는 적어도 10 μg/ml, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 100 μg/ml, 특히 적어도 1000 μg/ml의 수중 용해도를 갖는 것이 바람직하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "예방하는" 또는 "예방"은 환자 또는 대상체 또는 개체가 이러한 질환 상태(disease state) 또는 병태(condition)에 걸릴 위험에 취약하게 되는 경우, 환자 또는 대상체에서의 발생으로부터 질환 상태 또는 병태를 완벽하게 또는 거의 완벽하게 또는 적어도 (바람직하게는 유의적인) 정도로 정지시키는 것을 의미한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 바람직하게는 (전형적으로 수성) 액제, (전형적으로 수성) 현탁제(suspension) 또는 (전형적으로 수성) 유제(emulsion)로서 제공된다. 본 발명의 약제학적 조성물에 적합한 부형제는 당해 분야의 기술자에게 공지되어 있고, 본 명세서의 판독시, 예를 들면, 물(특히 주사용수), 염수, 링커액(Ringer's solution), 덱스트로즈 용액, 완충제, 행크 용액(Hank solution), 비히클 형성 화합물(예컨대, 지질), 고정 오일(fixed oil), 에틸 올레이트, 염수 중 5% 덱스트로즈, 등장성 및 화학 안정성을 향상시키는 물질, 완충제 및 방부제이다. 다른 적합한 부형제는 환자(또는 개체)에 대해 유해한 환자(또는 개체)에서 항체의 생산을 자체적으로 유도하지 않는 임의의 화합물이다. 예에는 잘 견딜 수 있는 단백질, 다당류, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체성 아미노산 및 아미노산 공중합체가 있다. 이러한 약제학적 조성물은 (약물로서) 당해 분야의 기술자에게 공지된 적절한 과정을 통해(본 명세서의 판독시) 이를 필요로 하는 환자 또는 개체(즉, 본원에서 언급한 질환 또는 상태를 갖거나 이로 발전할 위험을 가진 환자 또는 개체)에게 투여될 수 있다. 상기 약제학적 조성물의 바람직한 투여 경로는 특히 복강내, 피하, 근육내 및/또는 정맥내 투여를 통한 비경구 투여이다. 비경구 투여를 위해, 본 발명의 약제학적 조성물은 바람직하게는 상기 정의한 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 제형화된, 주사가능한 투여량 단위형, 예컨대, 액제(전형적으로 수성 액제), 현탁제 또는 유제로서 제공된다. 그러나, 투여량 및 투여방법은 치료될 개체 환자 또는 개체에 의존한다. 상기 약제학적 조성물은 다른 생물학적 투여량 요법(regimen)으로부터 공지된 임의의 적합한 투여량으로 투여될 수 있거나 주어진 개체에 대해 구체적으로 평가 및 최적화될 수 있다. 예를 들면, 활성제는 약제학적 조성물 속에 1 mg 내지 10 g, 바람직하게는 50 mg 내지 2 g, 특히 100 mg 내지 1 g의 양으로 존재할 수 있다. 일반적인 투여량은 또한 환자의 체중 kg을 기반으로 측정할 수 있고, 예를 들면, 바람직한 투여량은 0.1 mg 내지 100 mg/kg 체중, 특히 1 내지 10 mg/kg 체중(투여 기간 당)의 범위이다. 투여는 예컨대, 1일 1회, 격일에 1회, 주당 1회 또는 2주당 1회일 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여 방식은 비경구 투여이므로, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 바람직하게는 액체이거나 멸균, 탈이온화 또는 증류수 또는 멸균 등장성 인산염 완충된 염수(PBS)와 같은 액체 속에 용해될 준비가 되어 있다. 바람직하게는, 이러한 조성물 1000 μg(무수 중량)은 0.1 내지 990 μg, 바람직하게는 1 내지 900μg, 보다 바람직하게는 10 내지 200μg의 화합물, 및 임의로 1 내지 500 μg, 바람직하게는 1 내지 100 μg, 보다 바람직하게는 5 내지 15 μg(완충제) 염(바람직하게는 최종 용적으로 등장성 완충제를 수득하기 위하여), 및 임의로 0.1 내지 999.9 μg, 바람직하게는 100 내지 999.9 μg, 보다 바람직하게는 200 내지 999 μg의 다른 부형제를 포함하거나 이로 이루어진다. 바람직하게는, 이러한 무수 조성물 100 mg은 멸균된, 탈이온수/증류수 또는 멸균 등장성 인산염 완충된 염수(PBS) 속에 용해되어 0.1 내지 100 ml, 바람직하게는 0.5 내지 20 ml, 보다 바람직하게는 1 내지 10 ml의 최종 용적을 생성한다.
본원에 기술된 활성제 및 약물이 염 형태(즉, 활성제의 약제학적으로 허용되능 염)로 또한 투여될 수 있음은 기술자에게 명백하다. 따라서, 본원의 활성제의 임의의 언급은 또한 이의 임의의 약제학적으로 허용되는 염 형태를 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물에 대해 사용된 펩타이드의 화학적 합성 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 물론, 재조합 방법을 사용하여 펩타이드를 생산하는 것이 또한 가능하다. 펩타이드는 미생물, 예를 들면,세균, 효모 또는 진균, 진핵 세포, 예를 들면, 포유동물 또는 곤충 세포, 또는 재조합 바이러스 벡터, 예를 들면, 아데노바이러스, 폭스바이러스, 헤르페스바이러스, 심리키 포레스트 바이러스(Simliki forest virus), 바쿨로바이러스, 신드비스 바이러스(sindbis virus) 또는 센다이 바이러스(sendai virus)에서 생산될 수 있다. 펩타이드를 생산하기에 적합한 세균은 이. 콜라이(E. coli), 비. 서브틸리스(B. subtilis) 또는 이러한 펩타이드를 발현할 수 있는 임의의 다른 세균을 포함한다. 본 발명의 펩타이드를 발현하기에 적합한 효모 세균은 사카로마이세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae), 시크조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 칸디다(Candida), 피키아파스토리스(Pichiapastoris) 또는 펩타이드를 발현할 수 있는 임의의 다른 효모를 포함한다. 상응하는 수단 및 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 또한, 재조합적으로 생산된 펩타이드를 단리 및 정제하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 예컨대, 겔 여과, 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피 등을 포함한다.
유리하게는, 시스테인 잔기를 N- 및/또는 C-말단에서 펩타이드에 가하여 특히 생물중합체 스캐폴드에 대한 커플링을 촉진시킨다.
상기 펩타이드의 단리를 용이하게 하기 위하여, 융합 폴리펩타이드를 제조할 수 있고 여기서 펩타이드는 친화성 크로마토그래피에 의한 단리를 가능하도록 하는 이종 폴리펩타이드에 해독적으로 융합(공유결합으로 연결)된다. 대표적인 이종 폴리펩타이드는 His-Tag(예컨대, His6; 6 히스티딘 잔기), GST-Tag(글루타티온-S-트랜스퍼라제) 등이다. 융합 폴리펩타이드는 펩타이드의 정제를 촉진할 뿐만 아니라 정제 단계 동안 펩타이드의 분해를 방지할 수 있다. 정제 후 이종 폴리펩타이드를 제거하는 것이 요구되는 경우, 융합 폴리펩타이드는 펩타이드와 이종 폴리펩타이드 사이의 접합(junction)에서 절단 부위를 포함할 수 있다. 절단 부위는 이러한 부위에서 아미노산 서열에 대해 특이적인 효소(예컨대, 프로테아제)로 절단되는 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.
생물중합체 스캐폴드에 펩타이드/펩타이드 n-머를 연결(예컨대, 헤테로이작용성 화합물, 예를 들면, GMBS 및 물론 또한 문헌: "Bioconjugate Techniques", Greg T. Hermanson에 기술된 바와 같은 다른 것)시키는데 사용되거나 본 발명의 맥락에서 펩타이드에 스페이스를 접합시키는데 사용된 커플링/접합 화학은 또한 당해 분야의 기술자에게 공지된 반응으로부터 선택될 수 있다. 생물중합체 스캐폴드 자체는 재조합작으로 생산될 수 있거나 천연 공급원으로부터 수득될 수 있다.
여기서, "분자 B에 대해 특이적인 분자 A"에서와 같이 용어 "~에 대해 특이적인"은 분자 A가 개체의 체(body)내 다른 분자와 비교하여 분자 B에 대한 결합 선호도를 갖는다. 전형적으로, 이는 분자 A(예를 들면, 항체)는 (즉, 보다 더 강한") 1000 nM 미만, 바람직하게는 100 nM 미만, 보다 바람직하게는 50 nM 미만, 심지어 보다 바람직하게는 10 nM 미만, 특히 5 nM 미만인 분자 B(예를 들면, 항원, 특이적으로 이의 결합 에피토프)와 관련하여 해리 상수(또한 "친화성"으로 불림)를 갖는다.
여기서, "UniProt"은 Universal Protein Resource를 지칭한다. UniProt은 단백질 서열에 대한 포괄적인 자원 및 주석 데이타이다. UniProt는 유럽 생물정보 협회(European Bioinformatics Institute)(EMBL-EBI), SIB 스위스 생물정보 협회(SIB Swiss Institute)와 단백질 정보 자원(Protein Information Resource)(PIR) 사이의 공동 작업체이다. 3개의 협회에 걸쳐 100명 이상의 사람들이 상이한 업무, 예를 들면, 데이타베이스 큐레이션(database curation), 소프트웨어 개발 및 지원(software development and support)을 통해 포함된다. Website: http://www.uniprot.org/
UniProt 데이타베이스내 기입은 이의 수탁 코드(본원에서 예컨대, "UniProt 수탁 코드" 또는 요약하면 "UniProt"에 이은 수탁 코드로 지칭됨), 일반적으로 6개의 영숫자 문자(alphanumeric letter)의 코드(예컨대, "Q1HVF7")에 의해 확인된다. 달리 구체화되지 않는 경우, 본원에 사용된 수탁 코드는 UniProt의 단백질 지식베이스(UniProtKB)내 기입을 지칭한다. 달리 기술하지 않는 한, 본원에 지칭된 모든 기입에 대한 UniProt 데이타베이스 상태는 2020년 9월 23일부터이다(UniProt/UniProtKB Release 2020_04).
본원의 맥락에서, 서열 변이체(UniProt에서 "천연 변이체"로서 지정됨)는 UniProt 데이타베이스 기입을 지칭하는 경우 명확하게 포함된다.
참고 폴리펩타이드 또는 단백질 서열와 관련하여 "아미노산 서열 동일성(sequence identity) 퍼센트(%)" 또는 "X% 동일한"(예를 들면, "70% 동일한")은 필요한 경우 최대 서열 동일성 퍼센트를 달성하기 위하여, 서열을 정렬하고 갭(gap)을 도입한 후, 및 서열 동일성의 부분으로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고, 참고 폴리펩타이드 서열내 아미노산 잔기와 동일한 후보물 서열내 아미노산 잔기의 퍼센트로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 퍼센트를 측정할 목적을 위한 정렬은 당해 분야의 기술내 다양한 방식으로, 예를 들면, 공공 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예를 들면, BLAST, BLAST-2, ALIGN, ALIGN-2, Megalign(DNASTAR) 또는 EMBOSS 소프트웨어 패키지의 "니들(needle)" 쌍식 서열 정렬 적용을 사용하여 달성할 수 있다. 당해 분야의 기술자는 서열을 정렬하기에 적절한 매개변수, 예를 들면, 비교하는 서열의 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는데 요구되는 임의의 알고리즘을 측정할 수 있다. 그러나, 본원의 목적을 위해, 아미노산 서열 동일성 값%는 EMBOSS 소트트웨어 패키지(European Molecular Biology Laboratory로부터 공공 이용가능함; Rice 등, 2000)의 컴퓨터 프로그램 "니들"의 서열 정렬을 사용하여 계산한다.
니들 프로그램(needle program)은 웹 사이트 http://www.ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_needle/하에 수탁되거나 http://emboss.sourceforge.net/로부터 EMBOSS 패키지의 부분으로서 국소 설치를 위해 다운로드된다. 이는 많은 널리 사용된 Linux 같은 UNIX 운용 시스템에서 작동한다.
2개의 단백질 서열을 정렬하기 위하여, 니들 프로그램은 바람직하게는 다음의 매개변수로 작동한다:
명령행(Commandline): needle -auto -stdout -asequence SEQUENCE_FILE_A -bsequence SEQUENCE_FILE_B -datafile EBLOSUM62 -gapopen 10.0 -gapextend 0.5 -endopen 10.0 -endextend 0.5 -aformat3 pair -sprotein1 -sprotein2 (Align_format: pair Report_file: stdout)
주어진 아미노산 서열 B(이는 대안적으로 주어진 아미노산 서열 B에 대해, 이와, 또는 이에 대해 특정의 아미노산 서열 동일성%를 갖거나 이를 포함하는 주어진 아미노산 서열 A로서 대안적으로 표현될 수 있다)에 대해, 이와 함께, 또는 이에 대해 주어진 아미노산 서열 A의 아미노산 서열 동일성%는 다음과 같이 계산된다:
분획 X/Y 100배
여기서 X는 A 및 B의 이러한 프로그램 정렬에서 서열 정렬 프로그램 니들에 의한 동일한 매치로 기록된 아미노산 잔기의 수이고, 여기서 Y는 B에서 아미노산 잔기의 총 수이다. 아미노산 서열 A의 길이가 아미노산 서열 B의 길이와 동일하지 않을 경우, B에 대한 A의 아미노산 서열 동일성%는 A에 대한 B의 아미노산 서열 동일성%와 동일하지 않을 것임이 인식될 것이다. "A의 서열이 B의 전체 서열에 대해 N% 이상 동일한 경우, Y는 B의 전체 서열 길이이다(즉, B에서 아미노산 잔기의 전체 수). 구체적으로 달리 기술하지 않는 한, 본원에 사용된 아미노산 서열 동일성 값의 모든 %는 니들 컴퓨터 프로그램을 사용한 바로 위 단락에 기술된 바와 같이 수득된다.
본 발명은 또한 다음의 구현예에 관한 것이다:
구현예 1. - 생물중합체 스캐폴드(biopolymer scaffold) 및 적어도
- 하기 화학식의 제1의 펩타이드 n-머(peptide n-mer):
P ( ― S ― P ) (n-1) 및
- 하기 화학식의 제2의 펩타이드 n-머:
P ( ― S ― P ) (n-1)
를 포함하는 화합물로서,
여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 6 내지 13개의 아미노산 서열 길이를 지닌 펩타이드이고, S는 비-펩타이드 스페이서(non-peptide spacer)이고,
여기서 각각의 펩타이드 n-머에 대해 독립적으로, n은 적어도 1, 바람직하게는 적어도 2, 보다 바람직하게는 적어도 3, 특히 적어도 4의 정수이고,
여기서 펩타이드 n-머 각각은, 바람직하게는 링커(linker) 각각을 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합되고,
여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 바이러스 벡터의 캡시드 단백질 서열, 특히 AdV 헥손 단백질 서열, AdV 섬유 단백질 서열, AdV 펜톤 단백질 서열, AdV IIIa 단백질 서열, AdV VI 단백질 서열, AdV VIII 단백질 서열 또는 AdV IX 단백질 서열 또는 도 10 및 도 11에서 확인된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나 또는 Cearley 등, 2008에 나열된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나의 적어도 6개(바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 특히 적어도 9개)의 아미노산 길이를 갖는 서열 단편을 포함하는 아미노산 서열을 가지고,
임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 서열 단편의 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 2. 구현예 1의 화합물로서, 여기서 P의 적어도 하나의 경우는 환형화된 펩타이드이거나, 바람직하게는 여기서 모든 경우의 P의 적어도 10%는 환형화된 펩타이드이거나, 보다 바람직하게는 여기서 모든 경우의 P의 적어도 25%는 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 보다 바람직하게는 여기서 모든 경우의 P의 적어도 50%는 환형화된 펩타이드이거나, 심지어 보다 바람직하게는 여기서 모든 경우의 P의 적어도 75%는 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 여기서 P의 모든 경우의 적어도 90%는 환형화된 펩타이드이거나 심지어 여기서 모든 경우의 P의 적어도 95%는 환형화된 펩타이드이고, 특히 여기서 P의 모든 경우는 환형화된 펩타이드인 화합물.
구현예 3. 구현예 1 또는 2의 화합물로서, 여기서, 각각의 펩타이드 n-머에 대해 독립적으로, n은 적어도 2, 보다 바람직하게는 적어도 3, 특히 적어도 4인 화합물.
구현예 4. 구현예 1 내지 3 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 펩타이드 n-머 각각에 대해 독립적으로, n은 10 미만, 바람직하게는 9 미만, 보다 바람직하게는 8 미만, 심지어 보다 바람직하게는 7 미만, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6 미만, 특히 5 미만인 화합물.
구현예 5. 구현예 1 내지 4 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 각각의 펩타이드 n-머에 대해 n은 2인 화합물.
구현예 6. 구현예 1 내지 5 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, P의 적어도 1회 경우는 Pa이고/이거나 P의 적어도 1회 경우는 Pb이고,
여기서 Pa는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 9개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드이고,
여기서 Pb는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 9개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드인 화합물.
구현예 7. 구현예 1 내지 6 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 Pa 또는 Pb인 화합물.
구현예 8. 구현예 1 내지 7 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 제1의 펩타이드 n-머에서, P의 각각의 경우는 Pa이고, 제2의 펩타이드 n-머에서, P의 각각의 경우는 Pb인 화합물.
구현예 9. 구현예 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 인 화합물.
구현예 10. - 생물중합체 스캐폴드 및 적어도
- 화학식 P a - S - P a 또는 P a - S - P b 의 펩타이드 이량체인 제1의 펩타이드 n-머를 포함하는 화합물로서,
여기서 Pa는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 9개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드이고, Pb는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 9개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드이고, S는 비-펩타이드 스페이서이고,
여기서 제1의 펩타이드 n-머는, 바람직하게는 링커를 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합된 화합물로,
여기서 Pa는 (비병원성) 바이러스 벡터의 캡시드 단백질 서열,특히 AdV 헥손 단백질 서열, AdV 섬유 단백질 서열, AdV 펜톤 단백질 서열, AdV IIIa 단백질 서열, AdV VI 단백질 서열, AdV VIII 단백질 서열 또는 AdV IX 단백질 서열 또는 도 10 및 도 11에서 확인된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나 또는 Cearley 등, 2008에 나열된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 특히 적어도 9개(또는 10, 11, 12 또는 13개)의 아미노산 길이를 갖는 서열 단편을 포함하는 아미노산 서열을 가지고,
임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 서열 단편의 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 11. 구현예 10의 화합물로서, 화학식 P b - S - P b 또는 P a - S - P b 의 펩타이드 이량체인 제2의 펩타이드 n-머를 추가로 포함하고,
여기서 제2의 펩타이드 n-머는 바람직하게는 링커를 통해 생물중합체 스캐폴드에 결합되며,
여기서 Pb는 (비병원성) 바이러스 벡터의 캡시드 단백질 서열, 특히 AdV 헥손 단백질 서열, AdV 섬유 단백질 서열, AdV 펜톤 단백질 서열, AdV IIIa 단백질 서열, AdV VI 단백질 서열, AdV VIII 단백질 서열 또는 AdV IX 단백질 서열 또는 도 10 및 도 11에서 확인된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나 또는 Cearley 등, 2008에 나열된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 특히 적어도 9개(또는 10, 11, 12 또는 13개)의 아미노산 길이를 갖는 서열 단편을 포함하는 아미노산 서열을 가지고,
임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 서열 단편의 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 12. 구현예 1 내지 9 및 11 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 제1의 펩타이드 n-머는 제2의 펩타이드 n-머와는 상이한 화합물.
구현예 13. 구현예 6 내지 12 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 펩타이드 Pa는 펩타이드 Pb와 상이하고, 바람직하게는 여기서 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb는 동일한 캡시드 항원의 2개의 상이한 에피토프 또는 동일한 캡시드 에피토프의 2개의 상이한 에피토프 부분인 화합물.
구현예 14. 구현예 6 내지 13 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb는 동일한 아미노산 서열 단편을 포함하고, 여기서 아미노산 서열 단편은 적어도 2개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 3개의 아미노산, 보다 바람직하게는 적어도 4개의 아미노산, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 5개의 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 6개의 아미노산, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 7개의 아미노산, 특히 적어도 8개의 아미노산 또는 심지어 적어도 9개의 아미노산의 길이를 갖는 화합물.
구현예 15. 구현예 6 내지 14 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pa 및/또는 Pb가 환형화된 화합물.
구현예 16. 구현예 1 내지 15 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 화합물이 다수의 상기 제1의 펩타이드 n-머 및/또는 다수의 상기 제2의 펩타이드 n-머를 포함하는 화합물.
구현예 17. 구현예 1 내지 16 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 단백질, 바람직하게는 포유동물 단백질, 예를 들면, 사람 단백질, 비-사람 영장류 단백질, 양(sheep) 단백질, 돼지 단백질, 개 단백질 또는 설치류 단백질인 화합물.
구현예 18. 구현예 17의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 글로불린인 화합물.
구현예 19. 구현예 18의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 면역글로불린, 알파1-글로불린, 알파2-글로불린 및 베타-글로불린으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화합물.
구현예 20. 구현예 19의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 면역글로불린 G, 합토글로빈(haptoglobin) 및 트랜스페린으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화합물.
구현예 21. 구현예 20의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 합토글로빈인 화합물.
구현예 22. 구현예 17의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 알부민인 화합물.
구현예 23. 구현예 1 내지 22 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 화합물이 포유동물, 바람직하게는 사람, 비-사람 영장류, 양, 돼지, 개 또는 설치류에서 비-면역원성인 화합물.
구현예 24. 구현예 1 내지 23 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 화합물이 개체, 바람직하게는 개체의 혈류에서 (바이러스 벡터에 대한 또는 바이러스 벡터를 중화시키는) 적어도 하나의 항체의 체내 제거(또는 체내 고갈)용 및/또는, 개체, 바람직하게는 개체의 혈류에서 (바이러스 벡터에 대한 또는 바이러스 벡터를 중화시키는) 적어도 하나의 항체의 역가 감소용인 화합물.
구현예 25. 구현예 1 내지 24 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 바이러스 벡터는 아데노바이러스(AdV) 벡터 또는 아데노 관련 바이러스(AAV) 벡터인 화합물.
구현예 26. 구현예 1 내지 25 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인을 제외하고, P의 적어도 하나의 경우, 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 10%, 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 25%, 여전히 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 50%, 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 75%, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 90% 또는 심지어 모든 경우의 P의 적어도 95%, 특히 P의 경우의 모두의 전체 서열은 단백질의 서열 단편과 동일하고, 여기서 단백질은 다음의 UniProt 수탁 코드 중 하나에 의해 확인되고:
A9RAI0, B5SUY7, O41855, O56137, O56139, P03135, P04133, P04882, P08362, P10269, P12538, P69353, Q5Y9B2, Q5Y9B4, Q65311, Q6JC40, Q6VGT5, Q8JQF8, Q8JQG0, Q98654, Q9WBP8, Q9YIJ1, 또는 AdV 헥손 단백질, AdV 섬유 단백질, AdV 펜톤 단백질, AdV IIIa 단백질, AdV VI 단백질, AdV VIII 단백질 또는 AdV IX 단백질 또는 도 10 및 도 11에서 확인된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나 또는 Cearley 등, 2008에 나열된 캡시드 단백질 서열 중 임의의 하나;
임의로 여기서 서열 단편은 최대 3개, 심지어 보다 바람직하게는 최대 2개, 특히 최대 1개의 아미노산 치환을 포함한다.
구현예 27. 구현예 1 내지 26 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인을 제외하고, 펩타이드 Pa의 전체 서열은 단백질의 서열 단편과 동일하고, 여기서 단백질은 구현예 26에 나타낸 UniProt 수탁 코드 중 하나에 의해 확인되고;
임의로 여기서 상기 서열 단편은 최대 3개, 심지어 보다 바람직하게는 최대 2개, 특히 최대 1개의 아미노산 치환을 포함하는 화합물.임의로 여기서 상기 서열 단편은 최대 5개, 바람직하게는 최대 4개, 보다 바람직하게는 최대 3개, 심지어 보다 바람직하게는 최대 2개, 특히 최대 1개의 아미노산 치환을 포함하는 화합물.
구현예 28. 구현예 1 내지 27 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인을 제외하고, 펩타이드 Pb의 전체 서열은 단백질의 서열 단편과 동일하고, 여기서 단백질은 구현예 26에 나타낸 UniProt 수탁 코드 중 하나에 의해 확인되고;
임의로 여기서 상기 서열 단편은 최대 3개, 심지어 보다 바람직하게는 최대 2개, 특히 최대 1개의 아미노산 치환을 포함하는 화합물.
구현예 29. 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인을 제외하고, 펩타이드 Pa의 전체 서열은 단백질의 서열 단편과 동일하고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인을 제외하고, 펩타이드 Pb의 전체 서열은 동일한 단백질의 동일하거나 다른, 바람직하게는 다른 서열 단편과 동일하고, 여기서 단백질은 구현예 26에 나타낸 UniProt 수탁 코드 중 하나에 의해 확인되고;
임의로 여기서 상기 서열 단편 및/또는 상기 다른 서열 단편은 최대 3개, 심지어 보다 바람직하게는 최대 2개, 특히 최대 1개의 아미노산 치환을 포함하는 화합물.
구현예 30. 구현예 1 내지 29 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 서열 단편은 적어도 4 또는 적어도 5 또는 적어도 6, 바람직하게는 적어도 7, 보다 바람직하게는 적어도 8, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 9, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 다음으로부터 선택되는 적어도 10개의 연속 아미노산를 포함하는 서열:
ETGPPTVPFLTPPF (서열번호 32), HDSKLSIATQGPL (서열번호 33), LNLRLGQGPLFINSAHNLDINY (서열번호 34), VDPMDEPTLLYVLFEVFDVV (서열번호 35), MKRARPSEDTFNPVYPYD (서열번호 36), ISGTVQSAHLIIRFD (서열번호 37), LGQGPLFINSAHNLDINYNKGLYLF (서열번호 38), SYPFDAQNQLNLRLGQGPLFIN (서열번호 39), GDTTPSAYSMSFSWDWSGHNYIN (서열번호 40), VLLNNSFLDPEYWNFRN (서열번호 41), HNYINEIFATSSYTFSYIA (서열번호 42), DEAATALEINLEEEDDDNEDEVDEQAEQQKTH (서열번호 43), INLEEEDDDNEDEVDEQAEQ (서열번호 44), DNEDEVDEQAEQQKTHVF (서열번호 45), EWDEAATALEINLEE (서열번호 46), PKVVLYSEDVDIETPDTHISYMP (서열번호 47), YIPESYKDRMYSFFRNF (서열번호 48), DSIGDRTRYFSMW (서열번호 49), SYKDRMYSFFRNF (서열번호 50), 및 FLVQMLANYNIGYQGFY (서열번호 51)의 AdV 서열 그룹, 또는
WQNRDVYLQGPIWAKIP (서열번호 52), DNTYFGYSTPWGYFDFNRFHC (서열번호 53), MANQAKNWLPGPCY (서열번호 54), LPYVLGSAHQGCLPPFP (서열번호 55), NGSQAVGRSSFYCLEYF (서열번호 56), PLIDQYLYYL (서열번호 57), EERFFPSNGILIF (서열번호 58) ADGVGSSSGNWHC (서열번호 59), 서열번호 383 내지 1891 (표 1 참조) - 바람직하게는 표 1의 그룹 III, 보다 바람직하게는 표 1의 그룹 II, 특히 표 1의 그룹 I - 및 서열번호 1892 내지 2063(표 2 참조) - 바람직하게는 표 2의 그룹 I - 및 그룹 II의 서열 또는 표 3의 III(특히 서열번호 2064 내지 2103), 보다 바람직하게는 표 3의 그룹 I의 서열의 AAV 서열 그룹, 또는
표 4의 서열 그룹, 특히 서열번호 2104 내지 2190에 의해 확인된 서열 그룹;
임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 서열 단편의 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 31. 구현예 1 내지 30 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 GPPTVPFLTP (서열번호 60), ETGPPTVPFLTPP (서열번호 61), TGPPTVPFLT (서열번호 62), PTVPFLTPPF (서열번호 63), HDSKLSIATQGPL (서열번호 64), SIATQGP (서열번호 65), NLRLGQGPLF (서열번호 66), QGPLFINSAH (서열번호 67), PLFINSAHNLD (서열번호 68), LGQGPLF (서열번호 69), LNLRLGQGPL (서열번호 70), GQGPLFI (서열번호 71), NLRLGQGPLFINS (서열번호 72), LFINSAHNLDINY (서열번호 73), FINSAHNLDI (서열번호 74), LRLGQGPLFI (서열번호 75), GPLFINSAHN (서열번호 76), DEPTLLYVLFEVF (서열번호 77), TLLYVLFEVF (서열번호 78), DEPTLLYVLF (서열번호 79), TLLYVLFEVFDVV (서열번호 80), TLLYVLF (서열번호 81), MDEPTLLYVLFEV (서열번호 82), EPTLLYVLFE (서열번호 83), DPMDEPTLLYVLF (서열번호 84), LLYVLFEVFD (서열번호 85), YVLFEVFDVV (서열번호 86), PTLLYVLFEV (서열번호 87), PTLLYVLFEVFDV (서열번호 88), LYVLFEVFDV (서열번호 89), EPTLLYVLFEVFD (서열번호 90), LYVLFEV (서열번호 91), PMDEPTLLYVLFE (서열번호 92), LLYVLFE (서열번호 93), VDPMDEPTLLYVL (서열번호 94), YVLFEVF (서열번호 95), PTLLYVL (서열번호 96), MKRARPSEDTF (서열번호 97), KRARPSEDTF (서열번호 98), MKRARPSEDT (서열번호 99), MKRARPSEDTFN (서열번호 100), ARPSEDTFNP (서열번호 101), RARPSEDTFN (서열번호 102), RPSEDTF (서열번호 103), MKRARPSEDTFNP (서열번호 104), RARPSEDTFNPVY (서열번호 105), ARPSEDT (서열번호 106), EDTFNPVYPY (서열번호 107), RPSEDTFNPVYPY (서열번호 108), KRARPSEDTFNPV (서열번호 109), DTFNPVY (서열번호 110), RPSEDTFNPV (서열번호 111), PSEDTFNPVY (서열번호 112), DTFNPVYPYD (서열번호 113), VQSAHLIIRF (서열번호 114), AHLIIRF (서열번호 115), SGTVQSAHLIIRF (서열번호 116), TVQSAHLIIR (서열번호 117), HLIIRFD (서열번호 118), SAHLIIR (서열번호 119), QSAHLIIRFD (서열번호 120), ISGTVQSAHLIIR (서열번호 121), GTVQSAHLII (서열번호 122), GTVQSAHLIIRFD (서열번호 123), QSAHLII (서열번호 124), HNLDINY (서열번호 125), LFINSAHNLDINY (서열번호 126), NLDINYNKGLYLF (서열번호 127), FVSPNG (서열번호 128), NYINEIF (서열번호 129), NKGLYLF (서열번호 130), INYNKGLYLF (서열번호 131), NSAHNLDINY (서열번호 132), WDWSGHNYINEIF (서열번호 133), SGHNYINEIF (서열번호 134), LGTGLSF (서열번호 135), PFLTPPF (서열번호 136), LGQGPLF (서열번호 137), NLRLGQGPLF (서열번호 138), NQLNLRLGQGPLF (서열번호 139), GQGPLFI (서열번호 140), QLNLRLGQGPLFI (서열번호 141), SYPFDAQNQLNLR (서열번호 142), YPFDAQNQLNLRL (서열번호 143), LRLGQGPLFI (서열번호 144), NQLNLRL (서열번호 145), FDAQNQLNLR (서열번호 146), QNQLNLR (서열번호 147), QGPLFIN (서열번호 148), PFDAQNQLNLRLG (서열번호 149), DAQNQLNLRL (서열번호 150), RLGQGPLFIN (서열번호 151), QLNLRLG (서열번호 152), FDAQNQLNLRLGQ (서열번호 153), LNLRLGQGPLFIN (서열번호 154), AQNQLNLRLG (서열번호 155), AQNQLNL (서열번호 156), LNLRLGQ (서열번호 157), SYPFDAQNQL (서열번호 158), PFDAQNQLNL (서열번호 159), YSMSFSW (서열번호 160), TPSAYSMSFSWDW (서열번호 161), MSFSWDW (서열번호 162), PSAYSMSFSW (서열번호 163), DTTPSAYSMSFSW (서열번호 164), TTPSAYSMSF (서열번호 165), YSMSFSWDWS (서열번호 166), TGDTTPSAYSMSF (서열번호 167), FSWDWSGHNY (서열번호 168), SFSWDWS (서열번호 169), SAYSMSF (서열번호 170), SFSWDWSGHN (서열번호 171), SAYSMSFSWD (서열번호 172), SMSFSWD (서열번호 173), SWDWSGHNYI (서열번호 174), AYSMSFS (서열번호 175), SMSFSWDWSGHNY (서열번호 176), FSWDWSG (서열번호 177), SWDWSGH (서열번호 178), FLDPEYWNFR (서열번호 179), SFLDPEYWNF (서열번호 180), PEYWNFR (서열번호 181), LNNSFLDPEYWNF (서열번호 182), NNSFLDPEYWNFR (서열번호 183), FLDPEYW (서열번호 184), DPEYWNF (서열번호 185), NNSFLDPEYW (서열번호 186), VLLNNSFLDPEYW (서열번호 187), EYWNFRN (서열번호 188), LNNSFLDPEY (서열번호 189), LDPEYWNFRN (서열번호 190), LNNSFLD (서열번호 191), NSFLDPEYWN (서열번호 192), SSYTFSY (서열번호 193), FATSSYTFSY (서열번호 194), YINEIFATSSYTF (서열번호 195), SYTFSYI (서열번호 196), ATSSYTF (서열번호 197), EIFATSSYTF (서열번호 198), NEIFATSSYTFSY (서열번호 199), ATSSYTFSYI (서열번호 200), HNYINEIFATSSY (서열번호 201), IFATSSY (서열번호 202), INEIFATSSY (서열번호 203), NYINEIFATSSYT (서열번호 204), YINEIFA (서열번호 205), YTFSYIA (서열번호 206), EIFATSSYTFSYI (서열번호 207), ALEINLEEEDDDN (서열번호 208), ATALEINLEEEDD (서열번호 209), EAATALEINLEEE (서열번호 210), LEINLEE (서열번호 211), TALEINLEEEDDD (서열번호 212), EINLEEE (서열번호 213), ALEINLEEED (서열번호 214), LEINLEEEDD (서열번호 215), TALEINLEEE (서열번호 216), DEAATALEINLEE (서열번호 217), LEINLEEEDDDNE (서열번호 218), AATALEINLEEED (서열번호 219), EINLEEEDDD (서열번호 220), ATALEINLEE (서열번호 221), INLEEEDDDN (서열번호 222), NLEEEDDDNE (서열번호 223), DEVDEQA (서열번호 224), EDDDNEDEVDEQA (서열번호 225), DDNEDEVDEQAEQ (서열번호 226), EVDEQAE (서열번호 227), DNEDEVDEQA (서열번호 228), VDEQAEQ (서열번호 229), EDEVDEQAEQQKT (서열번호 230), EDEVDEQAEQ (서열번호 231), DEVDEQAEQQKTH (서열번호 232), NEDEVDEQAEQQK (서열번호 233), DEVDEQAEQQ (서열번호 234), EINLEEEDDDNED (서열번호 235), NLEEEDDDNEDEV (서열번호 236), INLEEED (서열번호 237), LEEEDDDNED (서열번호 238), INLEEEDDDNEDE (서열번호 239), DDDNEDEVDEQAE (서열번호 240), LEEEDDDNEDEVD (서열번호 241), DDNEDEVDEQ (서열번호 242), EDDDNED (서열번호 243), NLEEEDD (서열번호 244), DDNEDEV (서열번호 245), DDDNEDEVDE (서열번호 246), DDDNEDE (서열번호 247), EEEDDDNEDE (서열번호 248), EEDDDNE (서열번호 249), EDDDNEDEVD (서열번호 250), EDEVDEQ (서열번호 251), EEDDDNEDEVDEQ (서열번호 252), EEDDDNEDEV (서열번호 253), EEEDDDNEDEVDE (서열번호 254), EVDEQAEQQK (서열번호 255), DNEDEVDEQAEQQ (서열번호 256), VDEQAEQQKT (서열번호 257), EVDEQAEQQKTHV (서열번호 258), VDEQAEQQKTHVF (서열번호 259), ALEINLE (서열번호 260), WDEAATALEINLE (서열번호 261), AATALEINLE (서열번호 262), EWDEAATALEINL (서열번호 263), EAATALEINL (서열번호 264), LYSEDVDIET (서열번호 265), LYSEDVDIETPDT (서열번호 266), KVVLYSEDVDIET (서열번호 267), IETPDTH (서열번호 268), VDIETPDTHI (서열번호 269), VLYSEDVDIE (서열번호 270), DVDIETPDTHISY (서열번호 271), VVLYSEDVDIETP (서열번호 272), SEDVDIETPDTHI (서열번호 273), ETPDTHI (서열번호 274), VLYSEDVDIETPD (서열번호 275), DVDIETPDTH (서열번호 276), DIETPDTHIS (서열번호 277), EDVDIETPDTHIS (서열번호 278), IETPDTHISY (서열번호 279), YSEDVDIETPDTH (서열번호 280), VDIETPDTHISYM (서열번호 281), PKVVLYSEDVDIE (서열번호 282), DIETPDT (서열번호 283), DIETPDTHISYMP (서열번호 284), EDVDIETPDT (서열번호 285), ETPDTHISYM (서열번호 286), IETPDTHISYMP (서열번호 287), DRMYSFFRNF (서열번호 288), DRMYSFF (서열번호 289), YSFFRNF (서열번호 290), IPESYKDRMYSFF (서열번호 291), SYKDRMYSFF (서열번호 292), ESYKDRMYSF (서열번호 293), KDRMYSF (서열번호 294), YIPESYKDRMYSF (서열번호 295), PESYKDRMYSFFR (서열번호 296), YKDRMYSFFR (서열번호 297), TRYFSMW (서열번호 298), GDRTRYF (서열번호 299), DSIGDRTRYF (서열번호 300), DSIGDRTRYFSMW (서열번호 301), GDRTRYFSMW (서열번호 302), DRMYSFFRNF (서열번호 303), SYKDRMYSFFRNF (서열번호 304), NYNIGYQGFY (서열번호 305), ANYNIGYQGF (서열번호 306), MLANYNIGYQGFY (서열번호 307), IGYQGFY (서열번호 308), FLVQMLANYNIGY (서열번호 309), NIGYQGF (서열번호 310) and QMLANYNIGYQGF (서열번호 311)로 구성된 서열 그룹으로부터 선택된 전체 서열을 포함하고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 32. 구현예 1 내지 30 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 YLQGPIW (서열번호 312), VYLQGPI (서열번호 313), WQNRDVY (서열번호 314), DVYLQGP (서열번호 315), QNRDVYL (서열번호 316), LQGPIWA (서열번호 317), RDVYLQG (서열번호 318), NRDVYLQ (서열번호 319), YFGYSTPWGYFDF (서열번호 320), FGYSTPWGYF (서열번호 321), GYSTPWGYFD (서열번호 322), YSTPWGYFDF (서열번호 323), NTYFGYSTPWGYF (서열번호 324), TPWGYFDFNRFHC (서열번호 325), TYFGYSTPWGYFD (서열번호 326), DNTYFGYSTPWGY (서열번호 327), YFGYSTPWGY (서열번호 328), FGYSTPWGYFDFN (서열번호 329), NWLPGPC (서열번호 330), WLPGPCY (서열번호 331), QAKNWLPGPC (서열번호 332), AKNWLPGPCY (서열번호 333), MANQAKNWLPGPC (서열번호 334), QGCLPPF (서열번호 335), GCLPPFP (서열번호 336), VLGSAHQGCLPPF (서열번호 337), LPYVLGSAHQGCL (서열번호 338), YVLGSAHQGC (서열번호 339), CLPPFPA (서열번호 340), SAHQGCLPPF (서열번호 341), VLGSAHQGCL (서열번호 342), PYVLGSAHQGCLP (서열번호 343), GRSSFYC (서열번호 344), AVGRSSFYCLEYF (서열번호 345), AVGRSSFYCL (서열번호 346), QAVGRSSFYCLEY (서열번호 347), NGSQAVGRSSFYC (서열번호 348), DQYLYYL (서열번호 349), PLIDQYLYYL (서열번호 350), IDQYLYY (서열번호 351), FFPSNGILIF (서열번호 352), EERFFPSNGILIF (서열번호 353), VGSSSGNWHC (서열번호 354) 및 ADGVGSSSGNWHC (서열번호 355)로 구성된 서열 그룹으로부터 선택된 전체 서열을 포함하고,
임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되거나; 또는 여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호 383-1891 (표 1 참조)로 구성된 서열 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편을 포함하고, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편 또는 심지어 11-아미노산-단편 또는 심지어 12-아미노산-단편, 특히 13-아미노산-단편 - 바람직하게는 표 1의 그룹 III, 보다 바람직하게는 표 1의 그룹 II, 특히 표 1의 그룹 I - 및 서열번호 1892-2063(표 2 참조) - 바람직하게 표 2의 그룹 I - 및 표 3의 그룹 II 또는 III의 서열(특히 서열번호 2064-2103), 보다 바람직하게는 표 3의 그룹 I의 서열, 임의로 여기서 표 4의 서열 그룹, 특히 서열번호 2104-2190으로 확인되는 서열 그룹으로부터 선택되는 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 하나 이상의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되고; 또는 여기서 각 경우에 독립적으로 P는 하기 표 4의 서열 그룹으로부터 선택된 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편 또는 심지어 11-아미노산-단편 또는 심지어 12-아미노산-단편, 특히 13-아미노산-단편을 포함하고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된, 화합물.
구현예 33. 구현예 1 내지 32 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 각각의 경우에 독립적으로, P는 구현예 31에 기재된 서열 그룹으로부터 선택되거나 또는 구현예 32에 기재된 서열 그룹으로부터 선택된 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열로 구성되고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 가지는 화합물.
구현예 34. 구현예 1 내지 33 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 각각의 펩타이드 n-머는 바람직하게는 링커 각각을 통해 생물중합체 스캐폴드에 공유결합으로 결합된 화합물.
구현예 35. 구현예 1 내지 34 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 상기 링커 중 적어도 하나는 이황화물 브릿지 및 PEG 분자로부터 선택된 화합물.
구현예 36. 구현예 1 내지 35 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 스페이서 S 중 적어도 하나는 PEG 분자 또는 글리칸으로부터 선택된 화합물.
구현예 37. 구현예 1 내지 36 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pa는 구현예 31에 제시된 서열의 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열을 포함하고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 독립적으로 다른 아미노산으로 치환된 화합물.
구현예 38. 구현예 1 내지 37 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pb는 구현예 31에 제시된 서열의 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열을 포함하고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산은 독립적으로 다른 아미노산으로 치환된 화합물.
구현예 39. 구현예 1 내지 36 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pa는 구현예 32에 제시된 서열의 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열을 포함하고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산은 독립적으로 다른 아미노산으로 치환된 화합물.
구현예 40. 구현예 1 내지 37 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pb는 구현예 32에 제시된 서열의 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열을 포함하고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산은 독립적으로 다른 아미노산으로 치환된 화합물.
구현예 41. 구현예 6 내지 40 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 제1의 펩타이드 n-머가 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머가 P a - S - P b 인 화합물.
구현예 42. 구현예 6 내지 41 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb가 동일한 아미노산 서열 단편을 포함하고, 여기서 아미노산 서열 단편이 적어도 5개 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 6개 아미노산, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 7개 아미노산, 특히 적어도 8개 아미노산 또는 심지어 적어도 9개 아미노산의 길이를 갖는 화합물.
구현예 43. 구현예 1 내지 42 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pa는 구현예 31에 제시된 서열의 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열로 구성되고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산은 독립적으로 다른 아미노산으로 치환되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는 화합물.
구현예 44. 구현예 1 내지 43 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pb는 구현예 31에 제시된 서열의 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열로 구성되고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산은 독립적으로 다른 아미노산으로 치환되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는 화합물.
구현예 45. 구현예 1 내지 42 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pa는 구현예 32에 제시된 서열의 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열로 구성되고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산은 독립적으로 다른 아미노산으로 치환되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는 화합물.
구현예 46. 구현예 1 내지 43 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pb는 구현예 32에 제시된 서열의 그룹으로부터 선택되는 6-아미노산 단편, 바람직하게는 7-아미노산 단편, 보다 바람직하게는 8-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 9-아미노산 단편, 심지어 보다 바람직하게는 10-아미노산 단편, 특히 전체 서열로 구성되고, 임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산은 독립적으로 다른 아미노산으로 치환되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는 화합물.
구현예 47. 구현예 1 내지 46 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 제1의 펩타이드 n-머가 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머가 P a - S - P b 인 화합물.
구현예 48. 구현예 1 내지 47 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb가 동일한 아미노산 서열 단편을 포함하고, 여기서 아미노산 서열 단편이 적어도 5개 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 6개 아미노산, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 7개 아미노산, 특히 적어도 8개 아미노산 또는 심지어 적어도 9개 아미노산의 길이를 갖는 화합물.
구현예 49. 구현예 1 내지 48 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 바이러스 벡터는 (치료될 개체에서) 비-병원성인 화합물.
구현예 50. 구현예 1 내지 49 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드는 항-CD163 항체(즉, CD163 단백질에 특이적인 항체) 또는 이의 CD163-결합 단편인 화합물.
구현예 51. 구현예 50의 화합물로서, 여기서 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 사람 CD163에 특이적 및/또는 CD163의 세포외 영역, 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인, 보다 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인 1-9 중 어느 하나, 심지어 보다 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인 1-3 중 어느 하나, 특히 CD163의 SRCR 도메인 1에 특이적인 화합물.
구현예 52. 구현예 50 또는 51의 화합물로서, 여기서 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은
7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드로, 여기서 상기 펩타이드는 아미노산 서열 CSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEA (서열번호 3) 또는 이의 7 내지 24개 아미노산 단편을 포함하거나;
7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드로, 여기서 상기 펩타이드는 아미노산 서열 DHVSCRGNESALWDCKHDGWG(서열번호 13) 또는 이의 7 내지 20개 아미노산 단편을 포함하거나; 또는
7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드로, 여기서 상기 펩타이드는 아미노산 서열 SSLGGTDKELRLVDGENKCS(서열번호 24) 또는 이의 7 내지 19개의 아미노산 단편을 포함하는 펩타이드 중 하나에 특이적인 화합물.
구현예 53. 구현예 50 또는 51의 화합물로서, 여기서 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편이 아미노산 서열 ESALW(서열번호 14) 또는 ALW를 포함하는 펩타이드에 대해 특이적인 화합물.
구현예 54. 구현예 50 또는 51의 화합물로서, 여기서 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 아미노산 서열 GRVEVKVQEEW (서열번호 4), WGTVCNNGWS (서열번호 5) 또는 WGTVCNNGW (서열번호 6)을 포함하는 펩타이드에 특이적인 화합물.
구현예 55. 구현예 50 또는 51의 화합물로서, 여기서 항-CD163 항체 또는 그의 CD163-결합 단편은 아미노산 서열 SSLGGTDKELR(서열번호 25) 또는 SSLGG(서열번호 26)를 포함하는 펩타이드에 특이적인 화합물.
구현예 56. 구현예 1 내지 55 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 바이러스 벡터는 AAV1, AAV2, AAV3, AAV5, AAV7 또는 AAV8인 화합물.
구현예 57. 구현예 1 내지 55 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 바이러스 벡터는 AAV8인 화합물.
구현예 58. 구현예 1 내지 55 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 바이러스 벡터는 Ad5인 화합물.
구현예 59. 구현예 58 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 바이러스 벡터는 AdHu5인 화합물.
구현예 60. 구현예 1 내지 59 중 어느 하나의 화합무로서, 여기서 바이러스 벡터는 포유동물, 특히 사람에 특이적인 바이러스 벡터인 화합물.
구현예 61. 구현예 1 내지 60 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 사람 면역글로불린 및 사람 트랜스페린으로부터 선택된 화합물.
구현예 62. 구현예 1 내지 61 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 사람 트랜스페린인 화합물.
구현예 63. 구현예 49 내지 62 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 적어도 2개 펩타이드 중 적어도 하나가 환형화되어 있는 화합물.
구현예 64. 구현예 1 내지 63 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 화합물이 사람에서 비-면역원성인 화합물.
구현예 65. 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 화합물 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
구현예 66. 구현예 65의 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물이 복강내, 피하, 근육내 및/또는 정맥내 투여를 위해 제조되고/되거나, 여기서 조성물이 반복된 투여용인 약제학적 조성물.
구현예 67. 구현예 1 내지 66 중 어느 하나의 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물 속의 펩타이드 P 대 생물중합체 스캐폴드의 몰 비가 2:1 내지 100:1, 바람직하게는 3:1 내지 90:1, 보다 바람직하게는 4:1 내지 80:1, 심지어 보다 바람직하게는 5:1 내지 70:1, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6:1 내지 60:1, 특히 7:1 내지 50:1 또는 심지어 8:10 내지 40:1인 약제학적 조성물.
구현예 68. 구현예 6 내지 67 중 어느 하나의 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물 속의 펩타이드 Pa 대 생물중합체 스캐폴드의 몰 비가 2:1 내지 100:1, 바람직하게는 3:1 내지 90:1, 보다 바람직하게는 4:1 내지 80:1, 심지어 보다 바람직하게는 5:1 내지 70:1, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6:1 내지 60:1, 특히 7:1 내지 50:1 또는 심지어 8:10 내지 40:1인 약제학적 조성물.
구현예 69. 구현예 6 내지 68 중 어느 하나의 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물 속의 펩타이드 Pb 대 생물중합체 스캐폴드의 몰 비가 2:1 내지 100:1, 바람직하게는 3:1 내지 90:1, 보다 바람직하게는 4:1 내지 80:1, 심지어 보다 바람직하게는 5:1 내지 70:1, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6:1 내지 60:1, 특히 7:1 내지 50:1 또는 심지어 8:10 내지 40:1인 약제학적 조성물.
구현예 70. 치료요법에서 사용하기 위한, 구현예 65 내지 69 중 어느 하나의 약제학적 조성물.
구현예 71. 구현예 70에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 개체에서 백신의 효능을 증가시키는 데 사용하기 위한 것으로, 여기서 백신은 바이러스 벡터를 포함하고, 바람직하게는 여기서 약제학적 조성물은 백신의 투여 전 또는 백신의 투여와 동시에 개체에게 투여되는 약제학적 조성물.
구현예 72. 구현예 71에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 약제학적 조성물은 96시간 범위 내, 바람직하게는 72시간 범위 내, 보다 바람직하게는 48시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 36시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 24시간 범위 내, 특히 18시간 범위 또는 12시간 범위 내에서 적어도 2회 투여되고; 바람직하게는 이 범위 이후에 24시간 이내, 바람직하게는 12시간 이내의 백신이 뒤이어 투여되는 약제학적 조성물.
구현예 73. 구현예 70에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 개체에서 유전자 치료요법 조성물의 효능을 증가시키는데 사용하기 위한 것으로, 여기서 유전자 치료요법 조성물은 바이러스 벡터를 포함하고, 바람직하게는 여기서 약제학적 조성물은 유전자 치료요법 조성물의 투여 전 또는 유전자 치료요법 조성물의 투여와 동시에 개체에게 투여되는 약제학적 조성물.
구현예 74. 구현예 73에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 약제학적 조성물은 96시간 범위 내, 바람직하게는 72시간 범위 내, 보다 바람직하게는 48시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 36시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 24시간 범위 내, 특히 18시간 범위 또는 12시간 범위 내에서 적어도 2회 투여되고; 바람직하게는 이 범위 이후에 24시간 이내, 바람직하게는 12시간 이내의 유전자 치료요법 조성물이 뒤이어 투여되는 약제학적 조성물.
구현예 75. 구현예 71 내지 74 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 개체는 사람인 약제학적 조성물.
구현예 76. 구현예 70 내지 75 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 하나 이상의 항체가 펩타이드 P의 적어도 하나의 경우, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적인 개체에서 존재하고, 바람직하게는 여기서 상기 항체가 상기 바이러스 벡터에 대한 중화 항체인 약제학적 조성물.
구현예 77. 구현예 70 내지 76 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물이 개체내에서 비-면역원성인 약제학적 조성물.
구현예 78. 구현예 70 내지 77 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물이 개체의 체중 kg당 1 내지 1000 mg, 바람직하게는 2 내지 500 mg, 보다 바람직하게는 3 내지 250 mg, 심지어 보다 바람직하게는 4 내지 100 mg, 특히 5 내지 50 mg의 화합물의 용량으로 투여되는 약제학적 조성물.
구현예 79. 구현예 70 내지 78 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물이 복강내, 피하, 근육내 또는 정맥내 투여되는 약제학적 조성물.
구현예 80. 구현예 65 내지 69 중 어느 하나에서 정의한 바와 같은 약제학적 조성물을 수득하는 단계; 및
약제학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에 존재하는 하나 이상의 항체의 제거(또는 고갈) 방법으로서, 여기서 조성물은 개체에서 비-면역원성이고, 여기서 개체에 존재하는 하나 이상의 항체가 적어도 하나의 경우의 P에 대해, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적인 하나 이상의 항체의 제거(또는 고갈) 방법.
구현예 81. 구현예 80의 방법으로서, 여기서 개체가 비-사람 동물, 바람직하게는 비-사람 영장류, 양, 돼지, 개 또는 설치류, 특히 마우스인 방법.
구현예 82. 구현예 80 또는 81의 방법으로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 개체와 관련하여 자가이고, 바람직하게는 여기서 생물중합체 스캐폴드가 자가 단백질인 방법.
구현예 83. 구현예 80 내지 82 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 개체는 약제학적 조성물의 상기 투여 전, 동시에 및/또는 후에 바이러스 벡터를 포함하는 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 투여받는 방법.
구현예 84. 구현예 80 내지 83 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 개체는 비사람 동물인 방법.
구현예 85. 구현예 80 내지 82 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 개체는 바이러스 벡터를 포함하는 백신 또는 유전자 치료요법 조성물이 투여되고 여기서 개체에 존재하는 하나 이상의 항체가 상기 바이러스 벡터에 대해 특이적이며, 바람직하게는 여기서 상기 백신 또는 유전자 치료요법 조성물이 상기 약제학적 조성물의 투여 이전, 동시 및/또는 이후에 투여되는 방법.
구현예 86. 구현예 85의 방법으로서, 여기서 바이러스 벡터는 유전 물질을 함유하는 방법.
구현예 87. 구현예 80 내지 86 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 개체가 건강한 방법.
구현예 88. 구현예 80 내지 87 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 조성물이 복강내, 피하, 근육내 또는 정맥내 투여되는 방법.
구현예 89. 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 화합물을 포함하고, 바이러스 벡터(전형적으로 바이러스 벡터는 유전 물질을 포함함) 및 임의로 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함하는 백신 또는 유전자 치료요법 조성물로서;
바람직하게는 여기서 바이러스 벡터는 6-13개 아미노산, 바람직하게는 7-11개 아미노산, 보다 바람직하게는 7-9개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드 단편을 포함하고,
여기서 화합물의 펩타이드 P, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb의 적어도 하나의 경우의 서열은 상기 펩타이드 단편의 서열에 적어도 70% 동일, 바람직하게는 적어도 75% 동일, 보다 바람직하게는 적어도 80% 동일, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 85% 동일, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 90% 동일, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 95% 동일, 특히 완전히 동일한 백신 또는 유전자 치료요법 조성물
구현예 90. 구현예 89의 백신 또는 유전자 치료요법 조성물로서, 여기서 바이러스 벡터는 AdV 또는 AAV인 백신 또는 유전자 치료요법 조성물.
구현예 91. 구현예 89 또는 90의 백신 또는 유전자 치료요법 조성물로서, 여기서 백신은 보조제를 추가로 포함하는 백신 또는 유전자 치료요법 조성물.
구현예 92. 구현예 89 내지 90 중 어느 하나의 유전자 치료요법 조성물로서, 여기서 조성물이 정맥내 투여용으로 제조되는 조성물.
구현예 93. 구현예 89 내지 92 중 어느 하나의 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물이 수용액인 약제학적 조성물.
구현예 94. 구현예 89 내지 93 중 어느 하나의 약제학적 조성물로서, 활성제에 대한 면역 반응, 바람직하게는 항체-매개된 면역 반응의 억제시 사용하기 위한 약제학적 조성물.
구현예 95. 구현예 94에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물이 개체내에서 비-면역원성인 약제학적 조성물.
구현예 96. 구현예 89 내지 95 중 어느 하나에서 정의한 바와 같은 약제학적 조성물을 수득하는 단계, 및
약제학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하여, 활성제를 사용한 치료가 요구되는 개체에서 활성제를 사용한 치료에 대한 면역 반응을 억제하는 방법으로서, 여기서 약제학적 조성물의 화합물이 개체내에서 비-면역원성인 방법.
구현예 97. 구현예 96의 방법으로서, 여기서 개체가 사람인 방법.
구현예 98. 구현예 96 또는 97의 방법으로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 개체와 관련하여 자가이고, 바람직하게는 여기서 생물중합체 스캐폴드가 자가 단백질인 방법.
구현예 99. 구현예 96 내지 98 중 어느 하나의 방법으로서, 여기서 조성물이 복강내, 피하, 근육내 또는 정맥내 투여되는 방법.
구현예 100. 6 내지 50개의 아미노산, 보다 바람직하게는 6 내지 25개의 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 6 내지 20개의 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 6 내지 13개의 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드로, 여기서 펩타이드는
ETGPPTVPFLTPPF (서열번호 32), HDSKLSIATQGPL (서열번호 33), LNLRLGQGPLFINSAHNLDINY (서열번호 34), VDPMDEPTLLYVLFEVFDVV (서열번호 35), MKRARPSEDTFNPVYPYD (서열번호 36), ISGTVQSAHLIIRFD (서열번호 37), LGQGPLFINSAHNLDINYNKGLYLF (서열번호 38), SYPFDAQNQLNLRLGQGPLFIN (서열번호 39), GDTTPSAYSMSFSWDWSGHNYIN (서열번호 40), VLLNNSFLDPEYWNFRN (서열번호 41), HNYINEIFATSSYTFSYIA (서열번호 42), DEAATALEINLEEEDDDNEDEVDEQAEQQKTH (서열번호 43), INLEEEDDDNEDEVDEQAEQ (서열번호 44), DNEDEVDEQAEQQKTHVF (서열번호 45), EWDEAATALEINLEE (서열번호 46), PKVVLYSEDVDIETPDTHISYMP (서열번호 47), YIPESYKDRMYSFFRNF (서열번호 48), DSIGDRTRYFSMW (서열번호 49), SYKDRMYSFFRNF (서열번호 50), 및 FLVQMLANYNIGYQGFY (서열번호 51)의 AdV 서열 그룹 , 또는 WQNRDVYLQGPIWAKIP (서열번호 52), DNTYFGYSTPWGYFDFNRFHC (서열번호 53), MANQAKNWLPGPCY (서열번호 54), LPYVLGSAHQGCLPPFP (서열번호 55), NGSQAVGRSSFYCLEYF (서열번호 56), PLIDQYLYYL (서열번호 57), EERFFPSNGILIF (서열번호 58), ADGVGSSSGNWHC (서열번호 59), 서열번호 383 내지 1891 (표 1 참조) - 바람직하게는 표 1의 그룹 III, 보다 바람직하게는 표 1의 그룹 II, 특히 표 1의 그룹 I - 및 서열번호 1892 내지 2063(표 2 참조) - 바람직하게는 표 2의 그룹 I - 및 표 3의 그룹 II 또는 III의 서열(특히 서열번호 2064 내지 2103), 보다 바람직하게는 표 3의 그룹 I의 서열의 AAV 서열 그룹 ,
또는 표 4의 서열 그룹, 특히 서열번호 2104 내지 2190으로 식별되는 서열 그룹으로부터 선택되는 적어도 4개 또는 적어도 5개 또는 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개의 연속 아미노산 서열을 포함하고,
임의로 여기서 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 서열의 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되고;
바람직하게 여기서 펩타이드는 구현예 31, 32 또는 33에 정의된 펩타이드.
구현예 101. - 샘플을 구현예 100의 펩타이드와 접촉시키는 단계, 및
- 샘플 내 항체의 존재 및/또는 농도를 검출하는 단계;를 포함하는
생물학적 샘플에서 AdV- 또는 AAV-중화 항체를 검출 및/또는 정량하는 방법.
구현예 102. 구현예 101의 방법에 있어서, 펩타이드는 고체 지지체, 특히 전기화학, 형광, 자기, 전자, 중력 또는 광학 생체변환기를 갖는 바이오센서 기반 진단 장치 상에 고정 및/또는 펩타이드는 리포터 또는 리포터 단편, 예컨대 PCA에 적합한 리포터 단편에 커플링된, 방법.
구현예 103. 구현예 101 또는 102에 있어서, 상기 방법이 샌드위치 검정, 바람직하게는 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)인 방법.
구현예 104. 구현예 101 내지 103 중 어느 하나에 있어서, 상기 샘플은 포유동물, 바람직하게는 사람으로부터 얻어지는 방법.
구현예 105. 구현예 101 내지 104 중 어느 하나에 있어서, 샘플이 혈액 샘플, 바람직하게는 전혈, 혈청 또는 혈장인 방법.
구현예 106. 구현예 100에 따른 펩타이드의 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)에서의 용도로, 바람직하게는 구현예 101 내지 105 중 어느 하나에 정의된 방법을 위한 용도.
구현예 107. 구현예 100에 따른 펩타이드를 포함하는 진단 장치로, 펩타이드는 고체 지지체 상에 고정 및/또는 펩타이드는 리포터 또는 리포터 단편, 예컨대 PCA에 적합한 리포터 단편에 커플링된, 진단 장치.
구현예 108. 구현예 107에 있어서, 고체 지지체가 ELISA 플레이트 또는 표면 플라즈몬 공명 칩인 진단 장치.
구현예 109. 구현예 107에 따른 진단 장치로서, 상기 진단 장치는 전기화학적, 형광, 자기, 전자, 중력 또는 광학 생체변환기를 갖는 측면 흐름 분석 장치 또는 바이오센서 기반 진단 장치인, 진단 장치.
구현예 110. 구현예 100에 따른 펩타이드, 바람직하게는 구현예 107 내지 109 중 어느 하나에 따른 진단 장치, 및 바람직하게는 완충제, 시약, 설명서의 그룹으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 진단 키트.
구현예 111. 구현예 100에 따른 펩타이드를 포함하는 채집 장치(apheresis device)로, 바람직하게는 고체 담체 상에 고정된 채집 장치.
구현예 112. 구현예 111에 있어서, 고체 담체가 혈액 또는 혈장 흐름과 접촉할 수 있는 채집 장치.
구현예 113. 고체 담체가 구현예 1 내지 64 중 어느 하나에 따른 화합물을 포함하는, 구현예 111 또는 112에 따른 채집 장치.
구현예 114. 구현예 111 내지 113 중 어느 하나에 있어서, 고체 담체가 멸균되고 발열원이 없는 컬럼인 채집 장치.
구현예 115. 구현예 111 내지 114 중 어느 하나에 따른 채집 장치로서, 상기 채집 장치는 구현예 100에 따른 적어도 2개, 바람직하게는 적어도 3개, 보다 바람직하게는 적어도 4개의 상이한 펩타이드를 포함하는, 채집 장치.
본 발명을 이에 한정되지 않는, 다음의 도면 및 실시예로 추가로 나타낸다. 다음의 도면 및 실시예의 맥락에서, 본 발명의 접근법이 기반으로 하는 화합물은 또한 "선택적인 항체 고갈 화합물"(SADC)로 지칭된다.
도 1: SADC는 목적하지 않은 항체의 역가를 성공적으로 감소시킨다. 각각의 SADC는 정의된 항원에 대해 펩타이드 면역화에 의해 예비-면역화된 Balb/c 마우스내로 복강내 투여함으로써 0 시점에 적용시켰다. 각각의 상부 패널(top panel)은 상응하는 항체를 검출하는 표준 ELISA에 따라 OD 값(y_축)에 대한 항-펩타이드 역가(0.5x 희석 단계; X-축은 log(X) 희석을 나타낸다)를 나타낸다. 각각의 하부 패널은 각각의 SADC 주사 전 역가(즉, -48h 및 -24h에서의 역가) 및 각각의 SADC 적용 후(즉, 주사 후 +24h, +48h 및 +72h째 역가; x-축에 나타냄) LogIC50(y-축)를 나타낸다. (A) EBNA1(전자간증과 관련됨)에 대해 지시된 항체에 결합하는 생물중합체 스캐폴드로서 알부민을 지닌 화합물. 마우스를 EBNA-1 모델 에피토프를 수반하는 펩타이드 백신으로 예비-면역화시켰다. (B) 사람 AChR 단백질 MIR(중중 근무력증과 관련됨)로부터 유래된 펩타이드에 대해 지시된 항체에 결합하는 생물중합체 스캐폴드로서 알부민을 지닌 화합물. 마우스를 AChR MIR 모델 에피토르를 수반하는 펩타이드 백신으로 예비-면역화시켰다. (C) EBNA1(전자간증과 관련됨)에 대해 지시된 항체에 결합하는 생물중 합체 스캐폴드로서 면역글로불린을 지닌 화합물. 마우스를 EBNA-1 모델 에피토프를 수반하는 펩타이드 백신으로 예비-면역화시켰다. (D) EBNA1(전자간증과 관련됨)에 대해 지시된 항체에 결합하는 생물중합체 스캐폴드로서 합토글로빈을 지닌 화합물. 마우스를 EBNA-1 모델 에피토프를 수반하는 펩타이드 백신으로 예비-면역화시켰다. (E) 패널 C에 나타낸 실험에서 사용된 EBNA1에 대해 지시된 항체에 결합하는 동일한 면역글로불린-기반 SADC를 사용한 선택성의 증명. 마우스를 관련되지 않은 아미노산 서열로 예비-면역화시켰다. 역가 감소는 발생하지 않았고, 이는 화합물의 선택성을 입증하였다
도 2: SADC는 비-면역원성이고 마우스 내로 반복된 주사 후 항체 형성을 유도하지 않는다. 동물 C1-C4 뿐만 아니라 동물 C5-C8을 2개의 상이한 SADC로 복강내 처리하였다. 대조군 동물 C를 사람 AChR 단백질 MIR로부터 유래된 KLH-펩타이드로 예방접종하였다. 1:100의 희석에서 표준 ELISA에 의한 항체 역가 검출을 위해, BSA-접합된 펩타이드 프로브 T3-1, T9-1 및 E005(회색 바아, 그래프에서 나타낸 바와 같음)를 각각 사용하여, 백신-처리된 대조군 동물 C(y-축, OD450 nm)와 비교하는 경우, 항체 유도가 SADC로 처리한 동물에서 부재하였음이 입증될 수 있다.
도 3: 1가 또는 2가 펩타이드의 다중 카피를 수반하는 SADC를 사용한 항체의 성공적인 시험관내 고갈. 1가 또는 2가 펩타이드를 지닌 SADC는 항체를 흡수함으로써 이를 고갈시키는데 매우 적합하였다. "1가"는 펩타이드 단량체가 생물중합체 스캐폴드(즉, n=1)에 결합함을 의미하는 반면, "2가"는 펩타이드 이량체가 생물중합체 스캐폴드(즉, n=2)에 결합함을 의미한다. 본 경우에, 2가 펩타이드는 "단독2가 (homodivalent)"인데, 즉, SADC의 펩타이드 n-머는 E006 - 스페이서 - E006)이다.
도 4: 다양한 SADC 생물중합체 스캐폴드를 사용한 마우스에서 신속하고 선택적인 항체 고갈. 모의 처리된(mock treated) 대조군 그룹 SADC-CTL(관련되지 않은 펩타이드 함유)과 비교하는 경우 처리된 그룹은 이미 24 시간째에 신속하고 확실한 항체 감소를 나타내었다(특히 SADC-TF). 알부민 스캐폴 - SADC - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC.
도 5: SADC 주사 후 24시간째에 이의 펩타이드 모이어티를 통한 혈장 속의 SADC의 검출. 합토글로빈-스캐폴드-기반 SADC(SADC-HP 및 SADC-CTL)는 SADC-ALB, SADC-IG oder SADC-TF와 같은 다른 생물중합체 스캐폴드를 지닌 SADC보다 장점을 나타내는 비교적 보다 짧은 혈장 반감기를 나타내었다. 알부민 스캐폴드 - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC.
도 6: SADC 주사 후 24시간째에 혈장 속에서 SADC-IgG 복합체의 검출. 합토글로빈 기반 SADC는 다른 생물중합체 스캐폴드를 지닌 SADC와 비교하는 경우 가속화된 청소(clearance)에 처리하였다. 알부민 스캐폴드 - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC.
도 7: SADC-IgG 복합체 형성의 시험관내 분석. 동물 SADC-TF 및 -ALB는 강력한 신호 및 항원-항체 평형으로부터 항원 과다로의 이전으로 인해 1000ng/ml SADC-TF의 경우에 급격한 신호 저하에 의해 반영되는 것으로서 명백한 면역복합체 형성 및 C1q에 대한 결합을 나타내었다. 대조적으로, SADC-HP 또는 SADC-IG를 사용한 시험관내 면역복합체 형성은 존재하는 검정에서 측정시 훨씬 덜 효율적이었다. 이러한 발견은 합토글로빈 스캐폴드가 보체 시스템을 활성화시키기 위한 감소된 경향성(propensity)으로 인하여 다른 SADC 생물중합체 스캐폴드보다 유리하다는 발견을 확증한다. 알부민 스캐폴드 - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC.
도 8: 시험관내에서 SADC에 의한 IgG 포획의 측정. SADC-HP는 SADC-TF 또는 SADC-ALB과 비교하는 경우 시험관내에서 현저히 적은 항체 결합능을 나타내었다. 알부민 스캐폴드 - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC.
도 9: 항-CD163-항체 기반 생물중합체 스캐폴드의 혈액 청소. 마우스 모델에서, mAb E10B10(뮤린 CD163에 특이적)은 mAb Mac2-158(사람 CD163에 특이적이지만 뮤린 CD163에 특이적이지 않으므로 이 실험에서 음성 대조군으로 사용됨)보다 순환에서 심지어 더 빠르게 청소된다.
도 10: 본 발명에서 사용하기 위한 AdV 캡시드 단백질 서열. 데이터베이스 수탁 번호(특히 UniProt 또는 GenBank 수탁 번호)가 나열된다.
도 11: 본 발명에서 사용하기 위한 AAV 캡시드 단백질 서열. 데이터베이스 수탁 번호(특히 UniProt 또는 GenBank 수탁 번호가 나열됨) 및 특허 간행물의 서열에 대한 참조.
실시예 1-3, 5-8 및 11-13은 SADC가 바람직하지 않은 항체의 선택적 제거에 매우 적합함을 입증한다. 실시예 4, 10 및 14-21은 바이러스 벡터 및 상응하는 펩타이드 에피토프에 대한 항체에 관한 본 발명의 화합물에 대한 보다 상세한 내용을 포함한다.
실시예 1: SADC는 목적하지 않은 항체의 역가를 효과적으로 감소시킨다.
동물 모델: 사람 처방에서 환형의 목적하지 않은 항체의 측정가능한 역가를 지닌 생체내 모델을 제공하기 위하여, BALB/c 마우스를 확립된 하람 자가항원 또는 항-약물 항체로부터 유래된 KLH-접합된 펩타이드 백신을 사용한 표준 실험 예방접종을 사용하여 면역화시켰다. 표준 펩타이드 ELISA에 의한 역가 평가 후, 면역화된 동물을 상응하는 시험 SADC로 처리하여 SADC 처리에 의한 선택적인 항체 저하를 입증하였다. 모든 실험을 상응하는 동물 윤리에 의한 안내에 따라 수행하였다.
모델 항원을 사용한 마우스의 면역화: 암컷 BALB/c 마우스(8 내지 10주령)는 Janvier(프랑스)가 제공하였으며, 12시간 광/12시간 암 주기 하에 유지시키고 사료 및 물을 자유로이 접근하도록 하였다. 면역화는 2주 간격으로 3회 주사한 KLH 담체-접합된 펩타이드 백신의 피하 적용에 의해 수행하였다. KLH 접합체를, 바이러스 항원(EBNA-1)과 내인성 사람 수용체 항원, 즉, 자간전증과 관련된 것으로 밝혀진(Elliott 등), 태반 GPR50 단백질 사이의 분자 모조품(mimicry)에 대한 예를 나타낸, 펩타이드 T3-2(서열번호 356: CGRPQKRPSCIGCKG)를 사용하여 생성시켰다. 이러한 접근법의 일반화를 확립하기 위하여, 자가면역 상태 중증 근무력증으로부터 유래된 보다 큰 항원성 펩타이드를 사람 자가에피토프를 사용한 마우스의 면역화에 사용하였다. 펩타이드 T3-2와 유사하게, 동물을 질환의 병리학에 근본 역활을 하는 사람 AChR 단백질의 MIR(주요 면역원성 영역)으로부터 유래된 펩타이드 T1-1(서열번호 357: LKWNPDDYGGVKKIHIPSEKGC)으로 면역화시켰다(Luo 등). T1-1 펩타이드는 마우스를 사람 AChR 자가항원의 대용 부분 모델 에피토프를 사용하여 면역화시키기 위해 사용하였다. 펩타이드 T8-1(서열번호 358: DHTLYTPYHTHPG)을 사용하여 대조군 마우스를 면역화시킴으로써 시스템의 선택성의 입증을 위한 대조군 역가를 제공하였다. 백신 접합체 제조를 위해, KLH 담체(Sigma)를 설포-GMBS(제품 번호 22324 Thermo)로 제조업자의 지시에 따라 활성화시킨 후, N- 또는 C-말단적으로 시스테이닐화된(cysteinylated) 펩타이드 T3-2 및 T1-1 중의 하나를 첨가하고 Alhydrogel®을 최종 첨가한 후 동물의 옆구리에 주사하였다. 백신 T3-2 및 T1-1에 대한 용량은 용량당 1%의 최종 농도에서 Alhydrogel®(InvivoGen VAC-Alu-250)을 함유하는 주사 당 100μg의 용적 속에 15ul의 접합체이었다.
환형 SADC의 생성: T3-2 및 T1-1 면역화된 마우스의 DSDC에 의한 선택적인 항체 저하 활성을 시험하기 위하여, SADC를 생물중합체 스캐폴드로서 마우스 혈청 알부민(MSA) 또는 마우스 면역글로불린(마우스-Ig)을 사용하여 제조함으로써 마우스에서 어떠한 면역 반응도 유도하지 않을, 자가 생물중합체 스캐폴드를 생성시키거나, 생물중합체 스캐폴드(이는 72시간내 1회 주사 후 동종면역 반응을 유도하지 않았다)로서 비-자가 사람 합토글로빈을 생성시켰다. N-말단으로 시스테이닐화된 SADC 펩타이드 E049(서열번호 359: GRPQKRPSCIG) 및/또는 C-말단으로 시스테이닐화된 SADC 펩타이드 E006(서열번호 360: VKKIHIPSEKG)를 스캐폴드에 설포-GMBS(제품 번호 22324 Thermo)-활성화된 MSA(Sigma; 제품 번호 A3559) 또는 -마우스-Ig(Sigma, I5381) 또는 -사람 합토글로빈(Sigma H0138)을 사용하여 제조업자의 설명서에 따라 연결시킴으로써, 상응하는 생물중합체 스캐폴드의 라이신에 공유결합으로 부착된, MSA-, Ig- 및 합토글로빈-기반 SADC를 제공하였다. 이작용성 아민-대-설프하이드릴 가교 결합제를 통해 라이신에 대한 시스테이닐화된 펩타이드의 접합 외에도, 첨가된 시스테이닐화된 SADC 펩타이드의 부위를 알부민 스캐폴드 단백질의 시스테인의 설프하이드릴 그룹과 반응시켰으며, 이는 접합체를 DTT로 처리한 다음 유리 펩타이드를 진량 분광법 또는 유리 펩타이드를 검출하는 임의의 다른 분석 방법을 사용한 후속적인 검출로 검출할 수 있다. 최종적으로, 이러한 SADC 접합체는 물에 대해 Pur-A-Lyzer™(Sigma)을 사용하여 투석하고 후속적으로 동결건조시켰다. 동결건조된 물질은 동물에게 주사하기 전에 PBS 속에 재현탁시켰다.
SADC의 생체내 기능 시험: 환형 SADC, SADC-E049 및 SADC-E006을 펩타이드 백신 T3-2(EBNA-1 모델 에피토프 수반) 및 펩타이드 백신 T1-1(AChR MIR 모델 에피토프 수반)로 미리 면역화시킨 마우스 내로 복강내 주사하였다(i.p.; 사람 및 보다 큰 동물에서 의도된 정맥내 적용을 위한 대용품으로서). 적용된 용량은 50μl의 PBS 용적 속에 30μg의 SADC 접합체이었다. 채혈은 복강내 SADC 주사 전(-48h, -24h) 및 후(+24h, +48h, +72h 등) 각각에 모세관 미세-헤마토크릿 튜브(capillary micro-hematocrit tube)를 사용하여, 턱밑 정맥 천자(submandibular vein puncture)로 수행하였다. ELISA 분석(하기 참고)을 사용하여, 환형 SADC 둘 다는 나타낸 동물 모델에서 적어도 72시간에 걸쳐 역가를 명확하게 감소시킬 수 있음이 밝혀졌다. 따라서, SADC를 사용하여 생체내에서 역가를 효과적으로 감소시킬 수 있다고 결론지을 수 있다.
역가 분석: 펩타이드 ELISA를 BSA-커플링된 펩타이드(30nM, PBS 속에 용해시킴)로 실온에서 1시간 동안 코팅시킨 96-웰 플레이트(Nunc Medisorp 플레이트; Thermofisher, 제품 번호 467320)를 사용하여 표준 과정에 따라 수행하고 적절한 완충액과 함께 진탕(차단 완충액, 1% BSA, 1x PBS; 세척 완충액, 1xPBS/0.1% 트윈; 희석 완충액, 1xPBS / 0.1% BSA /0.1% 트윈)시키면서 수행하였다. 혈청 항온 처리(PBS 속에서 1:50로 출발하는 희석; 전형적으로 1:3 또는 1:2 적정 단계로)한 후, 결합된 항체를 Jackson immunoresearch (115-035-008)로부터 서양고추냉이 퍼옥시다제-접합된 염소 항-마우스 IgG(Fc)를 사용하여 검출하였다. 반응을 정지시킨 후, 플레이트를 450nm에서 20분 동안 TMB를 사용하여 측정하였다. EC50은 4-매개변수 로지스틱 회귀 모델(4-parameter logistic regression model)(GraphPad Prism)을 지닌 곡선 핏팅(curve fitting)을 사용하여 제조업자가 추천한 과정에 따라 판독물 값으로부터 계산하였다. 상한치 및 하한치에 대한 제한 매개변수(constraining parameter)를 상응하게 설정하여 R2 >0.98의 커브 핏팅 품질 수준(curve fitting quality level)을 설정하였다.
도 1a는 자간전증에서 자가항체 및 모조품에 대한 모델로서(Elliott 등), EBNA1에 대해 지시된 항원에 결합하는 환형 알부민-기반 SADC 후보물의 생체내 선택적인 혈장-저하 활성에 대해 마우스 모델에서 생체내 개념 증명을 나타낸다. 이러한 마우스 실험을 위해, 마우스 알부민을 사용하여, 외부 종(foreign species)으로부터의 단백질에 대한 어떠한 반응도 피하였다. 항체 역가를 표준 펩타이드 예방접종에 의해 6개월령 Balb/c 마우스에서 유도하였다. 하부 패널은 SADC 주사 전(즉, -48h 및 -24h에서의 역가) 역가 LogIC50(y-축)이 SADC 적용 후(즉, 주사 후 +24h, +48h 및 +72h에서의 역가; x-축에 나타냄) 역가 LogIC50보다 더 높았음을 입증한다.
유사한 실시예를 상이한 질환 처방을 위한 펩타이드 항체 결합 모이어티의 대안적인 예를 사용하여, 도 1b에 나타낸다. 중증 근무력증에서의 상황을 모사하기 위하여 사람 AChR 단백질 MIR 영역(Luo 등)으로부터 유래된 상이한 펩타이드로 예비-면역화시킨 마우스 모델에서 알부민-기반 SADC의 항체 저하 활성. AChR-MIR 영역에 대해 유도된 항체 역가를 중증 근무력증에서 유발 역활을 하는 것으로 공지된 항-AChR-MIR 자가항체에 대한 대리물로서 사용하였다(참고: Vincent 등). 명확한 역가 감소가 SADC 적용 후 관찰되었다.
도 1c 및 1d는 대안적인 생물중합체 스캐폴드를 포함하는 SADC 변이 체의 기능성을 입증한다. 구체적으로, 도 1c는 면역글로불린 스캐폴드가 성공적으로 사용될 수 있는 반면, 도 1d는 SADC를 작제하기 위한 합토글로빈-스캐폴드의 사용을 입증한다. 예 둘 다는 공유결합으로 결합된 실시예 펩타이드 E049를 수반하는, SADC에 의한 선택적인 항체 저하에 대한 생체내 개념 증명을 나타낸다.
자가 스캐폴드 단백질이 바람직할 수 있지만 합토글로빈-기반 SADC를 대리물로서 사람 합토글로빈을 사용하여 생성시켰다. 항-사람-합토글로빈 항체의 형성을 피하기 위하여, 비-자가 스캐폴드 합토글로빈의 마우스 당 단지 1회 단일 SADC 주사를 본 실험 조건을 위해 사용하였다. 예측한 바와 같이, 본 실험 조건(즉, 1회 적용) 하에서, 본 대리물 합토글로빈 동족체에 대해 항체 반응성은 관찰되지 않았다.
도 1e는 SADC 시스템의 선택성을 입증한다. 펩타이드 E049를 수반하는 면역글로불린-기반 SADC(즉, 도 1c와 동일함)는 관련되지 않은, 비관련성 아미노산 서열, 지정된 펩타이드 T8-1(서열번호 358: DHTLYTPYHTHPG)을 사용한 펩타이드에 의해 유도된 Ig-역가를 감소시킬 수 없다. 실시예는 시스템의 선택성에 대한 생체내 개념 증명을 나타낸다. 상단 패널은 표준 ELISA에 따라 OD 값(y-축)에 대한 항-펩타이드 T8-1 역가(1:50로부터 1:102400까지의 0,5x 희석 단계; X-축은 log(X) 희석을 나타낸다)를 나타낸다. T8-1-역가는 적용 후 SADC-Ig-E049의 투여에 의해 영향받지 않는다. 하단 패널은 SADC 주사 전(즉, -48h 및 -24h에서 역가) 초기 역가 LogIC50(y-축)가 SADC 적용 후(즉, 역가 +24h, +48h 및 +72h; x-축에서 나타낸 바와 같음) 역가 LogIC50과 비교하는 경우 SADC-Ig-E049의 투여(화살표)에 의해 영향받지 않음으로써, 시스템의 선택성을 증명함음을 입증한다.
실시예 2: SADC의 면역원성.
SADC의 면역원성을 배제시키기 위하여, 환형 후보물 SADC를 반복된 주사시 항체를 유도하는 이의 경향성에 대해 시험하였다. 펩타이드 T3-1 및 T9-1을 당해 시험을 위해 사용하였다. T3-1은 이에 대해 작용성 자가항체가 전-자간증 동물 모델에서 형성된 안지오텐신 수용체의 참고 에피토프로부터 유래된 10개 아미노산 펩타이드이고(Zhou 등); T9-1은 사람 IFN 감마의 참고 항-약물 항체 에피토프로부터 유래된 12개 아미노산 펩타이드이다(Lin 등). 이러한 대조군 SADC 접합체를 8 내지 10주령에서 출발하여 나이브(naive), 비-면역화된 암컷 BALB/c 마우스내로 복강내에 2주마다 8회 주사하였다.
동물 C1 내지 C4를 SADC T3-1으로 복강내 처리하였다(실시예 1에 기술된 바와 같음). 동물 C5 내지 C8을 펩타이드 T9-1을 수반하는 SADC를 사용하여 복강내 처리하였다. ELISA 분석을 위한 참고 신호로서, KLH-펩타이드 T1-1(AChR_MIR로부터 유래됨, 실시예 1에서 설명됨)로 3회 예방접종시킨 대조군 동물로부터의 혈장을 사용하였다. 1:100의 희석에서 표준 ELISA에 의한 항체 역가 검출에 대해, BSA-접합된 펩타이드 프로브 T3-1, T9-1 및 E005(서열번호 361: GGVKKIHIPSEK)을 각각 사용하여, 백신-처리된 대조군 동물 C와 비교하는 경우, 항체 유도가 SADC-처리된 동물에서 부재하였음을 입증할 수 있다(참고: 도 2). 3번째 백신 주사 후 1주째(대조군 동물 C) 및 2주 간격으로 마지막 8회의 연속적인 SADC 주사 후(동물 C1 내지 C8) 각각 후 혈장을 턱밑 혈액 수집으로 수득하였다. 따라서, SADC는 비-면역원성이고 마우스내로 반복된 주사 후 항체 형성을 유도하지 않음이 입증되었다.
실시예 3: 1가 또는 2가 펩타이드의 다수 카피를 수반하는 SADC를 사용한 항체의 성공적인 시험관내 고갈.
E006-KLH(KLH에 접합된, C-말단 시스테인을 지닌 VKKIHIPSEKG(서열번호: 360) 예방접종된 마우스의 혈장을 희석 완충액(PBS + 0.1% w/v BSA + 0.1% 트윈(Tween) 20) 속에 1:3200으로 희석시키고 음성 대조군으로서 2.5 μg/ml(250 ng/웰)의 SADC 또는 5 μg/ml(500 ng/웰)의 알부민으로 코팅시킨 미세역가 플레이트의 단일 웰에서 4회 연속적으로(10분/웰) 항온처리(100 μl, 실온)하였다.
SADC 코팅된 웰에서 항온처리 전 및 후에 존재하는 유리되고, 결합되지 않은 항체의 양을 측정하기 위하여, 50 μl의 희석된 혈청을 고갈 전 및 후에 취하고 표준 ELISA에 의해 E006-BSA 코팅된 플레이트(10 nM 펩타이드)를 사용하여 정량화하고 염소 항 마우스 IgG 바이오(Southern Biotech, 1:2000로 희석시킴)로 희석시켰다. 후속적으로, 바이오티닐화된 항체를 스트렙타비딘-HRP(Thermo Scientific, 1:5000으로 희석시킴)으로 기질로서 TMB를 사용하여 검출하였다. 신호의 발달은 0.5 M 황산으로 정지시켰다.
ELISA를 OD450nm(y-축)에서 측정하였다. 결과적으로, 항체는 C-말단 시스테인을 지닌 펩타이드 E006(서열 VKKIHIPSEKGC, 서열번호 362)을 함유하는 코팅된 1가- 또는 2가 SADC에 의해 효율적으로 흡착되었다(전 = 고갈된 출발 물질 없음; 1가는 SADC 표면에 나타난 펩타이드에 상응한다; 음성 대조군은 알부민이었다; x-축에 나타냄). 도 3 참고. ("1가"는 펩타이드 단량체가 생물중합체 스캐폴드에 결합함을 의미(즉, n=1)하는 반면 "2가"는 펩타이드 이량체가 생물중합체 스캐폴드에 결합함을 의미(즉, n=2)한다. 본 경우에, 2가 펩타이드는 "단독2가"이었는데, 즉 SADC의 펩타이드 n-머는 E006 - S - E006이다.)
이는 1가 또는 2가 펩타이드를 지닌 SADC가 항체를 흡착시킴으로써 이를 고갈시키는데 매우 적합함을 입증한다.
실시예 4: 미모토프-기반 SADC의 생성
mAb 4D2는 아데노바이러스 섬유 에피토프 펩타이드를 표적으로 하는 마우스 IgG2a mAb이다(NCBI 참조 서열: AP_000226.1). 이는 UV 조사된 Ad2 바이러스(Krasnykh 등, 1998)에서 생성된 프로토타입 중화 항체를 나타낸다.
야생형 또는 변형된 펩타이드 아미노산 서열로부터 유래된 선형 및 환형 펩타이드를 바이러스 벡터에 대해 중화 항체의 선택적인 제거를 위한 특이적인 SADC의 작제를 위해 사용할 수 있다. 특수한 에피토프의 경우에, 선형 펩타이드 또는 구속된 펩타이드, 예를 들면, 에피토프의 일부 또는 이의 변이체를 함유하는 사이클로펩타이드(여기서, 예를 들면, 하나 또는 수개의 아미노산은 치환되거나 화학적으로 변형되어 항체(미모토프)에 대한 친화성을 증진시켰다)는 SADC를 작제하는데 사용될 수 있다. 펩타이드 스크린은 중화 항체에 대해 최적화된 친화성을 지닌 펩타이드를 확인하는 목표로 수행될 수 있다. 구조적 또는 화학적 펩타이드 변형의 유연성(flexibility)은 HLA에 대한 펩타이드 결합의 면역원성의 위험 및 따라서 원치않은 면역 자극 위험을 최소화시키기 위한 해결책을 제공하였다.
따라서, 야생형 뿐만 아니라 변형된 선형 및 환형 펩타이드 서열은 본원에 개시된 바와 같은 바이러스 캡시드 단백질, 예를 들어 본 발명의 과정에서 발견된 mAb 4D2의 에피토프 서열 LNLRLGQGPLFINSAHNLDINY(서열번호 34)(아래 추가 실시예 참조)과 같은, 에피토프로부터 유래될 수 있다. 다양한 길이 및 위치의 펩타이드는 아미노산 치환에 의해 시스템적으로 추정되었고 펩타이드 배열에서 합성되었다. 이는 이러한 서열로부터 유래된 60000개의 환형 및 선형의 야생형 및 미모토프 펩타이드의 스크리닝을 허용하였다. 펩타이드 배열을 mAb 4D2와 함께 항온처리하였다. 따라서, 이러한 항체를 사용하여 60000개의 펩타이드를 스크리닝하였고 100개의 환형 및 100개의 선형 펩타이드 히트(hit)를 항체에 대한 이들의 상대적인 결합 강도를 기반으로 선택하였다. 이러한 200개 펩타이드 중에서, 51개의 서열은 선형 펩타이드 그룹과 환형 펩타이드 그룹 사이에서 동일하였다. 확인된 가장 우수한 펩타이드 모두는 원래의 서열 각각에 대해 정렬하는 경우 적어도 하나의 아미노산 치환을 가졌고 따라서 미모토프로 고려된다. 보다 높은 결합 강도가 환형화된 펩타이드로 달성될 수 있다고 또한 결론지어졌다.
이러한 새로이 확인된 펩타이드, 우선적으로 높은 상대적 결합 값을 지닌 것을 사용하여 이 AdV 기반 벡터 백신의 효능을 높이기 위한 SADC를 생성시켰다.
실시예 5: 다양한 SADC 생물중합체 스캐폴드를 사용한 마우스에서의 신속하고, 선택적인 항체 고갈.
10 μg의 모델 목적하지 않은 항체 mAb 항 V5(Thermo Scientific)를 암컷 Balb/c 마우스(처리 그룹 당 5마리; 9 내지 11주령)에게 복강내 주사한 다음 초기 항체 투여 후 48시간째에 50 μg의 SADC(결합된 표적화된 V5 펩타이드를 지닌 상이한 생물중합체 스캐폴드, 하기 참고)를 정맥내 주사하였다. 턱밑 정맥으로부터 24시간 간격에서 혈액을 수집하였다. 0 hr 시점에 대한 혈액 샘플을 SADC 투여 직전에 취하였다.
혈액을 SADC 투여 후 120시간 시점까지 24시간마다 수집하였다(x-축). SADC 투여 후 혈장 항-V5 IgG 수준의 쇠퇴 및 감소를 코팅된 V5-펩타이드-BSA(펩타이드 서열 IPNPLLGLDC - 서열번호: 561)와 함께 표준 ELISA 과정을 사용하여 항 V5 역가 판독 및 도 4에 나타낸 바와 같은 염소 항 마우스 IgG 바이오(Southern Biotech, diluted 1:2000)에 의한 검출로 측정하였다. 또한, SADC 수준(참고: 실시예 6) 및 면역복합체 형성(참고: 실시예 7)을 분석하였다.
EC50[OD450] 값을 4 매개변수 로지스틱 곡선 핏팅을 사용하여 측정하고 초기 수준(0 시점에서 1로 설정)과 이후 시점(x-축) 사이의 상대적인 신호 쇠퇴를 EC50 값의 비(y-축, 배 신호 감소 EC50)로서 계산하였다. 모든 SADC 펩타이드는 SADC의 직접적인 검출을 위한 태그 및 혈장 샘플로부터의 면역복합체를 함유하였고; SADC에 사용된 펩타이드 서열은: IPNPLLGLDGGSGDYKDDDDKGK(서열번호 363)-(BiotinAca)GC(알부민 스캐폴드 - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC) 및 음성 대조군 SADC로서 관련되지 않은 펩타이드 VKKIHIPSEKGGSGDYKDDDDKGK(서열번호 364)-(BiotinAca)GC(SADC-CTR)이었다.
5마리 동물의 상이한 처리 그룹에 대한 SADC 스캐폴드는 검정색/회색 음영으로 나타낸다(참고: 도 4의 삽도(inset)).
처리된 그룹은 모조물 처리된 대조군 그룹 SADC-CTL과 비교하는 경우 24 시간째에 이미 신속하고 명백한 항체 감소를 나타내었다(특히 SADC-TF). SADC-CTR은, 이의 펩타이드 서열이 투여된 항 V5 항체에 의해 인식되지 않으므로 항체 저하 활성을 가지지 않기 때문에 정상 항체에 대한 참고로 사용하였다. 따라서, SADC-CTR의 쇠퇴를 추세선(trend line)으로 표시하여 처리된 동물과 모조물 처리된 동물 사이의 항체 수준 차이를 강조하였다.
이러한 실험 조건 하에서 선택적인 항체 저하의 효능을 측정하기 위하여, 2원 ANOVA 시험을 SADC 투여 48시간 후 던네트 다중 비교 시험(Dunnett's multiple comparison test)을 사용하여 수행하였고, 항체 EC50은 SADC-CTR 참고 그룹(추세선)과 비교하여 모든 SADC 그룹에서 크게 유의적으로 감소하였다(p<0.0001). SADC 투여 120 시간째에, 항체 감소는 SADC-ALB 및 SADC-TF 그룹에서 매우 유의적이었고(둘 다 p<0.0001) SADC-HP 그룹에서 유의적(p=0.0292)이었으나, SADC-IG 그룹은 SADC 투여 120 시간 후 EC50 감소를 항한 경향성(p = 0.0722)을 나타내었다. 물론, 선택적인 항체 감소가 SADC 투여 후 모든 시험한 시점에서 SADC-ALB 및 SADC-TF 그룹에서 매우 유의적(p<0.0001)이었다.
모든 SADC 생물중합체 스캐폴드는 항체 수준을 선택적으로 감소시킬 수 있었다고 결론지어진다. 역가 감소는 SADC-ALB 및 SADC-TF로 가장 명확하며 항체 수준의 재결합 또는 재순환은 마지막 시점을 향해 검출되지 않았고, 이는 목적하지 않은 항체가 의도된 바와 같이 분해됨을 시사한다.
실시예 6: SADC 주사 후 24시간째에 혈장 속에서 SADC의 검출
Balb/c 마우스내로 정맥내 주사 후 24시간째에 상이한 SADC 변이체의 혈장 수준. SADC-ALB, -IG, -HP, -TF의 혈장 수준(y-축) 및 음성 대조군 SADC-CTR의 혈장 수준(x-축)의 측정을 실시예 5에 이미 기술된 동물로부터의 혈장에서 검출하였다. 주사된 혈장 SADC 수준은 표준 ELISA로 검출하였으며 이에 의해 SADC가 스트렙타비딘 코팅된 플레이트(Thermo Scientific)와 함께 이의 펩타이드의 이들의 바이오틴 모이어티를 통해 포획되었다. 포획된 SADC는 Flag-태그된 펩타이드를 검출하는 마우스 항 Flag-HRP 항체(Thermo Scientific, 1:2,000 희석됨)로 검출하였다(참고: 또한 실시예 7):
50 μg의 SADC를 정맥내 주사한 후 혈액 속에서 대략 25 μg/ml의 이론적 양을 추정할 때, SADC의 검출가능한 양은 SADC 주사 후 24시간 째에, SADC-ALB 또는 SADC-IG의 경우 799 내지 623 ng/ml 및 SADC-TF의 경우 대략 5000 ng/ml 이하의 범위이었다. 그러나, 놀랍게도 및 대조적으로, SADC-HP 및 대조군 SADC-CTR(이는 또한 SADC-HP 변이체이나, 당해 경우에 관련되지 않은 음성 대조군 펩타이드 E006를 수반한다, 참고: 앞서의 실시예)은 주사 후 24시간째에 순환으로부터 완전히 사라졌고, 더 이상 검출될 수 없었다. 도 5를 참고한다.
이는 본 실시예에서 시험한 합토글로빈 스캐폴드-기반 SADC 둘 다(즉, SADC-HP 및 SADC-CTR)가 면역복합체 형성의 생체내 위험으로 인한 보체 의존성 혈관 및 신장 손상에 있어서 이의 잠재적인 역활과 관련하여 SADC, 예를 들면, SADC-ALB, SADC-IG 또는 SADC-TF보다 장점을 나타내는 비교적 보다 짧은 혈장 반감기를 나타냄을 입증한다. SADC-HP의 다른 장점은 신속한 치료학적 효과가 요구되는 경우에 혈액으로부터 이의 원치않는 표적 항체의 가속화된 청소율이다. 이러한 결과는 합토글로빈-기반 SADC 스캐폴드(SADC-HP 및 SADC-CTR로 나타낸 바와 같음)가 SADC-결합 항체가 혈액 속에 존재하는 여부와 상관없이, 혈액으로부터의 신속한 청소에 적용됨으로써 바람직하지 않은 면역복합체 형성을 최소화하고 신속하고 효율적인 청소를 나타냄을 입증한다. 따라서 본 실시예에서 합토글로빈-기반 SADC, 예를 들면, SADC-HP는 둘 다 주사후 24시간째에 완전히 청소된 SADC-HP 또는 SADC-CTR과는 대조적으로, 기술된 조건 하에서 주사 후 둘 다 24시간째까지 여전히 검출가능한, SADC-TF 또는 SADC-ALB에 의해 입증되는 바와 같이, 다른 SADC 생물중합체 스캐폴드보다 치료학적으로 관련된 장점을 제공한다.
실시예 7: SADC 주사 후 24시간째에 혈장 속에서 SADC-IgG 복합체의 검출
생체내에서 SADC에 결합된 IgG의 양을 측정하기 위하여, 10 μg의 항 V5 IgG(Thermo Scientific)의 정맥내 주사에 이어 항체 주사 후 24시간째에 정맥내 투여된 SADC-ALB, -HP, -TF 및 -CTR(50 μg)의 주사 후, 혈장을, SADC 주사 후 24시간째에, 턱밑 정맥으로부터 수집하고, 이의 바이오티닐화된 SADC-V5-펩타이드 IPNPLLGLDGGSGDYKDDDDKGK(서열번호 363)(BiotinAca)GC를 통해 또는 SADC-CTR의 경우 음성 대조군 펩타이드 VKKIHIPSEKGGSGDYKDDDDKGK(서열번호 364)(BiotinAca)GC]를 통해 혈장으로부터 SADC를 포획하기 위해 스트렙타비딘 플레이트 상에서 항온처리하였다. 스트렙타비딘-포획된 SADC에 결합된 IgG는 SADC 주사 후 24시간째에 혈장 속에 존재하는 SADC-항체 복합체의 검출을 위한 염소 항 마우스 IgG HRP 항체 (Jackson Immuno Research, 1:2,000으로 희석됨)를 사용한 ELISA로 검출하였다. 처리되지 않은 동물로부터의 음성 대조군 혈청에 대해 수득된 OD450nm 값(y-축)을 배경 보정(background correction)을 위해 시험 그룹의 OD450nm 값(x-축)으로부터 감하였다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 명백한 항-V5 항체 신호가 SADC-ALB 및 SADC-TF 주사된 마우스의 경우에 관찰되었지만(검정색 바아는, 5마리의 평균 값인, 1:25의 희석에서 배경 보정된 OD 값을 나타낸다; 표준 편차 오차 바아(standard deviation error bar)), 항체 신호는 SADC-HP 또는 대조군 SADC-CTR 주사된 동물에서 검출할 수 없었다(SADC-CTR은 임의의 항 V5 항체에 의해 인식되지 않는 관련없는 펩타이드 바이오-FLG-E006[VKKIHIPSEKGGSGDYKDDDDKGK(서열번호 364)(BiotinAca)GC]를 수반하는 음성 대조군이다). 이는 SADC의 정맥내 적용 후 24 시간째에 혈장 속에서 검출가능한 양의 SADC-HP/IgG 복합체의 부재를 입증한다.
따라서, SADC-HP는 SADC-ALB 또는 SADC-TF와 비교하는 경우 항 V5 예비-주사된 마우스에서 가속화된 청소(clearance)에 적용된다.
실시예 8: SADC-면역글로불린 복합체 형성의 시험관내 분석
SADC-항체 복합체 형성을 PBS +0.1% w/v BSA + 0.1% v/v 트윈20 속에서 증가하는 농도의 SADC-ALB, -IG, -HP, -TF 및 -CTR과 함께 1 μg/ml의 사람 항 V5 항체(항 V5 에피토프 태그 [SV5-P-K], 사람 IgG3, 절대 항체)를 실온에서 2 시간 동안 예비-항온처리하여 시험관내에서 면역복합체가 형성되도록 함으로써 분석하였다. 복합체 형성 후, 샘플을 10 μg/ml의 사람 C1q(CompTech)로 미리 코팅된 ELISA 플레이트에서 실온에서 1시간 동안 항온처리함으로써, 시험관내 형성된 면역 복합체의 포획이 가능하도록 하였다. 복합체를 ELISA에 의해 항 사람 IgG(Fab 특이적인)-퍼옥시다제(Sigma, 1:1,000로 희석됨)를 사용하여 후속적으로 검출하였다. OD450 nm에서 측정된 신호(y-축)는 시험관내에서 항체-SADC 복합체 형성을 반영한다.
도 7에 나타낸 바와 같이, SADC-TF 및 -ALB는 항원-항체 평형으로부터 항원 과다로의 이전으로 인하여 1000ng/ml SADC-TF의 경우에 강력한 신호 및 급격한 신호 저하로 반영되는 바와 같이 명백한 면역복합체 형성 및 C1q에 대한 결합을 나타내었다. 대조적으로, SADC-HP 또는 SADC-IG를 사용한 시험관내 면역 복합체 형성은 본 검정에서 측정한 경우 훨씬 덜 효율적이었다.
생체내 데이타(앞서의 실시예)와 함께, 이러한 발견은 합토글로빈 스캐폴드가 보체 시스템을 활성화시키기 위한 감소된 경향성으로 인하여 다른 SADC 생물중합체 스캐폴드보다 유리하다는 발견을 제공한다. 대조적으로, SADC-TF 또는 SADC-ALB는 보다 높은 복잡성을 나타내므로, 전통적인 보체 경로의 개시와 함께 C1 복합체를 활성화시키는 특정 위험을 수반한다(이러한 위험은 그러나, 일부 설정에 서 견디어질 수 있다).
실시예 9: 시험관내에서 SADC에 의한 IgG 포획의 측정
앞서의 실시예와 유사하게, 증가하는 양의 SADC(x-축에 나타냄)와 함께 1 μg/ml의 마우스 항 V5 항체(Thermo Scientific)를 사용하여 면역복합체를 시험관내에서 형성하도록 하였다. SADC-항체 복합체를 스트렙타비딘 코팅된 ELISA 플레이트에서 바이오티닐화된 SADC-펩타이드를 통해 포획한 다음(참고: 앞서의 실시예), 항 마우스 IgG-HRP(Jackson Immuno Research, 1:2,000으로 희석됨)를 사용하여 결합된 항-V5를 검출하였다.
이러한 검정 조건 하에서, SADC-HP는 SADC-TF 또는 SADC-ALB와 비교하는 경우 시험관내에서 현저히 적은 항체 결합능을 나타내었다(참고: 도 8, A). SADC에서 IgG 검출에 대해 계산된 EC50 값은 SADC-TF, -ALB 및 -HP의 경우 각각 7.0 ng/ml, 27.9 ng/ml 및 55.5 ng/ml이었다(참고: 도 8, B).
이러한 시험관내 발견은 SADC-HP가 원치않는 항체의 고갈을 위한 이의 치료학적 사용과 관련하여 안전성 장점으로서 고려되는 SADC-TF 또는 SADC-ALB와 비교하는 경우 보다 적은 면역복합체 형성능을 가진다는 관찰(참고: 앞서의 실시예)과 일치한다.
실시예 10: AAV-8에 대해 목적하지 않은 항체를 감소시키기 위한 SADC
3개의 SADC를 제공하여 유전자 치료요법을 방해하는 AAV-8-중화 항체를 감소시킨다(참고: 사용된 에피토프에 대해 Gurda 등; 또한 참고: AAV-8 캡시드 단백질 서열 UniProt Q8JQF8, 서열 버젼 1):
(a) 생물중합체 스캐폴드로서의 Mac2-158(제WO 2011/039510 A2호에 개시된 바와 같음)을 지닌 SADC-a 및 스캐폴드에 공유결합으로 결합된 서열 YLQGPIW(서열번호 312)를 지닌 적어도 2개 펩타이드,
(b) 생물중합체 스캐폴드로서 사람 트랜스페린을 지닌 SADC-b 및 스캐폴드에 공유결합으로 결합된 서열 YFGYSTPWGYFDF(서열번호 320)를 지닌 적어도 2개 펩타이드, 및
(c) 생물중합체 스캐폴드로서 사람 알부민을 지닌 SADC-c 및 스캐폴드에 공유결합으로 결합된 서열 QGCLPPF(서열번호 335)를 지닌 적어도 2개 펩타이드.
이러한 SADC를 벡터로서 AAV-8을 사용하여 면역 치료요법 중일 개체에게 투여함으로써 유전자 치료요법의 효능을 증가시킨다.
실시예 11: 항-CD163 항체 기반 SADC 생물중합체 스캐폴드의 생체 내 기능
항-마우스-CD163 mAb E10B10의 신속한 생체 내 혈액 제거(제WO 2011/039510 A2호에 개시됨). mAb E10B10은 마우스 IgG2a 백본으로 재합성되었다. 50 μg mAb E10B10 및 Mac2-158 (제WO 2011/039510 A2호에 개시된 바와 같이 사람-특이적 항-CD163 mAb, 마우스 CD163에 결합하지 않기 때문에 이 실시예에서 음성 대조군으로 사용됨)을 마우스에 정맥 내 주입하고 ELISA에서 12, 24, 36, 48, 72, 96 시간 후에 측정하여 혈액 제거율을 결정하였다.
직접적인 비교를 위해 둘 다 마우스 IgG2a 아이소타입으로 표현되었지만, E10B10은 마우스 CD163에 결합하는 반면 Mac2-158은 사람 특이적이므로, mAb E10B10은 도 9에 나타낸 바와 같이 대조군 mAb Mac2-158 보다 심지어 더 빠르게 순환계에서 제거되었다.
결론적으로 항-CD163 항체는 제거 프로파일 때문에 SADC 스캐폴드로 매우 적합하다. 이러한 스캐폴드가 있는 SADC는 바람직하지 않은 항체를 순환에서 빠르게 제거한다.
상세한 방법: 50ug의 바이오티닐화 모노클로날 항체 E10B10 및 바이오티닐화 Mac2-158을 마우스로 정맥 내 주사하고 12, 24, 36, 48, 72, 96시간 후에 ELISA로 측정하여 제거율을 결정하였다: 스트렙타비딘 플레이트를 실온에서 1시간 동안 PBS + 0.1% BSA + 0.1% Tween20에 희석된 혈장 샘플과 함께 인큐베이션하였다 (50 ㎕/웰). 세척 후(PBS + 0.1% Tween20으로 3회), 결합된 비오티닐화 항체는 1:1000 희석된 항-마우스 IgG+IgM-HRP 항체로 검출되었다. 세척 후, TMB 기질을 첨가하고 TMB 정지 용액으로 기질의 현상을 정지시켰다. OD450nm의 신호를 측정하였다. EC50 는 제한된 곡선 및 최소 제곱 회귀를 사용한 4 매개변수 곡선 피팅을 사용하여 비선형 회귀로 계산되었다. 시점 T12에서의 EC50 값(항체 주입 후 처음 측정된 시점임)을 100%로 설정하고, 다른 모든 EC50 값을 T12에서의 수준과 비교하였다.
실시예 12: 항-CD163 mAb의 에피토프 맵핑
mAb E10B10은 마우스의 혈액으로부터 CD163-매개된 가속화된 생체내 제거율을 제공한다 (실시예 11 참조). 이 항체의 에피토프는 환형 펩타이드 어레이를 사용하여 미세 매핑되었으며, 이로써 펩타이드는 마우스 CD163에서 유래되었다. 그 결과, mAb E10B10에 의해 인식되는 단백질 클러스터를 확인하였다(실시예 13 참조).
환형 펩타이드를 이용한 동일한 에피토프 맵핑 절차를 mAb Mac2-158(제WO 2011/039510 A2호에 개시된 바와 같음)로 수행하였다. mAb Mac2-158에 대한 에피토프 맵핑 결과로부터 수용체에 결합하는 리간드 및 항체의 내재화와 특히 관련된 CD163 에피토프 영역의 추가 구분을 허용하는 2개의 펩타이드 클러스터를 산출하였다(실시예 13 참조).
따라서 Mac2-158 및 E10B10에 대한 이들 새롭게 특성화된 에피토프는 CD163항체에 대한 3개의 바람직한 결합 영역을 나타낸다. 미세 에피토프 매핑 작업을 기반으로, 선형 또는 우선적으로 환형인 펩타이드가 합성되어 CD163을 표적으로 하는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 또는 다른 CD163 결합 SADC 스캐폴드의 유도, 생산 및 선택에 사용된다.
실시예 13: 항-CD163 mAb의 에피토프 맵핑
사람 CD163의 SRCR 도메인 1에 정렬된 펩타이드는 mAb Mac2-158 환형 에피토프 매핑 펩타이드의 상위 20개 펩타이드 히트에서 선택되었으며, 가장 바람직한 서열은 사람 CD163의 SRCR-1의 N-말단 및 C-말단에 있는 2개의 펩타이드 정렬 클러스터로부터 선택되었다. 그 결과, 다음 서열(및 그로부터 유래된 모티프)은 SADC 생물중합체 스캐폴드로 사용되는 항-CD163 항체 및 이의 단편에 매우 적합한 에피토프이다:
펩타이드 클러스터 1:
04 ----------------EWGTVCNNGWSME------- (서열번호 7)
07 -----CSGRVEVKVQEEW------------------ (서열번호 365)
09 --------------QEEWGTVCNNGWS--------- (서열번호 8)
12 -----------------WGTVCNNGWSMEA------ (서열번호 9)
14 ---------------EEWGTVCNNGWSM-------- (서열번호 10)
18 -------------VQEEWGTVCNNGW---------- (서열번호 11)
19 ----------------EWGTVCNNGW---------- (서열번호 12)
20 -----------------WGTVCNNGWS--------- (서열번호 5)
huCD163-도메인1-3 DGENKCSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEAVSVICN (서열번호 366)
펩타이드 클러스터 2:
01 ------------ESALWDC-------------- (서열번호 15)
02 ---------RGNESALWDC-------------- (서열번호 16)
03 -------SCRGNESALW---------------- (서열번호 17)
05 ------VSCRGNESALWDC-------------- (서열번호 18)
06 --------------ALWDCKHDGW--------- (서열번호 19)
08 ----DHVSCRGNESALW---------------- (서열번호 20)
11 --------CRGNESALWD--------------- (서열번호 21)
13 -----------NESALWDCKHDGW--------- (서열번호 22)
17 ------------ESALWDCKHDGWG-------- (서열번호 23)
huCD163-도메인1-3 RIWMDHVSCRGNESALWDCKHDGWGKHSNCTHQ (서열번호 367)
mAb E10B10의 미세 에피토프 매핑은 Mac2-158에서와 같이 수행되었다. 1068개의 환형 펩타이드(7, 10 및 13 아미노산의 크기를 가짐) 및 마우스 CD163 서열(UniProKB Q2VLH6.2)의 SRCR-1 내지 -3에서 유도된 것을 mAb E10B10으로 스크리닝하고 다음의 상위 결합 펩타이드를 수득하였다(상대적 신호 강도로 순위매김). 사람 CD163 서열은 마우스 CD163 서열의 클러스터에 정렬되어 또 다른 매우 적합한 에피토프를 나타낸다:
펩타이드 클러스터 3:
01 ---------------------VTNAPGEMKKELR--------- (서열번호 368)
02 ------------------ASAVTNAPGEMKK------------ (서열번호 369)
03 ---------------------VTNAPGEMKK------------ (서열번호 370)
04 ---------------------VTNAPGE--------------- (서열번호 371)
05 ----------------GSASAVTNAPGEM-------------- (서열번호 372)
06 --------------------AVTNAPGEMKKEL---------- (서열번호 373)
07 -----------------SASAVTNAPGEMK------------- (서열번호 374)
08 ---------------SGSASAVTNAPGE--------------- (서열번호 375)
09 --------------------AVTNAPGEMK------------- (서열번호 376)
10 -------------------SAVTNAPGEM-------------- (서열번호 377)
11 ------------------ASAVTNAPGE--------------- (서열번호 378)
12 -------------------SAVTNAPGEMKKE----------- (서열번호 379)
13 ----------------------TNAPGEMKKE----------- (서열번호 380)
mCD163(SRCR-1, N-말단) VTNAPGEMKKELRLAGGENNCS (서열번호 75)
hCD163(SRCR-1, N-말단) SSLGGTDKELRLVDGENKCS (서열번호 24)
클러스터 3의 마우스 펩타이드 01 - 13의 사람 동족체는 성숙한 사람 CD163 단백질(UniProtKB: Q86VB7)의 N-말단 부분의 다음 서열을 갖는다:
클러스터 3 펩타이드 (마우스): 사람 동족체:
01 SSLGGTDKELR (서열번호 25)
06 SSLGGTDKEL (서열번호 27)
12,13 SSLGGTDKE (서열번호 28)
02,03 SSLGGTDK (서열번호 29)
07,09 SSLGGTD (서열번호 30)
05,10 SSLGGT (서열번호 31)
04,08,11 SSLGG (서열번호 26)
hCD163(SRCR-1) SSLGGTDKELRLVDGENKCS (서열번호 24)
이러한 동족체 펩타이드는 항-CD163 항체 기반 생물중합체 스캐폴드에 대한 추가로 매우 적합한 에피토프를 나타낸다.
실시예 14: AdV에 대한 mAb 4D2의 에피토프 맵핑
mAb 4D2는 아데노바이러스 섬유 에피토프 펩타이드를 표적으로 하는 마우스 IgG2a mAb이다(NCBI 참조 서열: AP_000226.1). 이는 UV 조사된 Ad2 바이러스에서 생성된 프로토타입 중화 항체를 나타낸다(Krasnykh 등, 1998). 바이러스 중화 에피토프로부터 환형 항체 결합 펩타이드를 수득하기 위해, 섬유 서열로부터 유래한 정렬된 환형 펩타이드에 대한 mAb 4D2가 매핑되었다. NCBI 참조 서열: AP_000226.1의 아미노산 위치 1 내지 581에 있는 서열을 7-머, 10-머 및 13-머 환형 펩타이드를 설계하기 위한 출발 서열로 사용하였으며 펩타이드 마이크로어레이에서 직접 합성 및 환형화한 후 다양한 농도의 항체와 함께 인큐베이션 하였다. 펩타이드에 대한 모노클로날 항체 4D2의 결합 신호로 단백질의 서열에 대해 정렬되고 후속적으로 클러스터 되는 여러 결합 히트가 산출되었다. 결과적으로 클러스터는 클러스터1(길이=14 아미노산), 클러스터2(길이=13 아미노산) 및 클러스터3(길이=22 아미노산)으로 지정되었다. 아래는 mAb 4D2 파라토프에 결합할 수 있는 상응하는 신규한 펩타이드의 정렬이다. 펩타이드 명칭에서의 숫자는 마이크로어레이에 대한 항체의 결합 신호의 순위에 해당한다(즉, 펩타이드 01이 가장 강하게 결합하고, 02가 두 번째로 가장 강하게 결합하는 등). 상위 50개의 상위 결합체 중에서 상위 후보 결합 펩타이드의 선택을 상응하는 단백질 서열(첫 번째 줄)에 대해 정렬하였다.
클러스터1 ETGPPTVPFLTPPF (서열번호 32)
08 --GPPTVPFLTP-- (서열번호 60)
10 ETGPPTVPFLTPP- (서열번호 61)
21 -TGPPTVPFLT--- (서열번호 62)
34 ----PTVPFLTPPF (서열번호 63)
클러스터2 HDSKLSIATQGPL (서열번호 64)
03 HDSKLSIATQGPL (서열번호 64)
11 -----SIATQGP- (서열번호 65)
클러스터3 LNLRLGQGPLFINSAHNLDINY (서열번호 34)
02 -NLRLGQGPLF----------- (서열번호 66)
12 ------QGPLFINSAH------ (서열번호 67)
13 --------PLFINSAHNLD--- (서열번호 68)
15 ----LGQGPLF----------- (서열번호 69)
17 LNLRLGQGPL------------ (서열번호 70)
19 -----GQGPLFI---------- (서열번호 71)
29 -NLRLGQGPLFINS-------- (서열번호 72)
32 ---------LFINSAHNLDINY (서열번호 73)
33 ----------FINSAHNLDI-- (서열번호 74)
37 --LRLGQGPLFI---------- (서열번호 75)
39 -------GPLFINSAHN----- (서열번호 76)
상기 펩타이드/서열은 AdV 벡터의 중화를 감소시키는 SADC에 대한 펩타이드로서 매우 적합하다.
실시예 15: AdV에 대한 모노클로날 항체 9C12의 에피토프 맵핑
모노클로날 항체 9C12(일명 mAB TC31-9C12.C9-s)는 헥손 단백질(GenBank: BAG48782.1에 해당하는 Uniprot ID: P04133)로 마우스를 면역화하여 생성되었다. 이 중화 항체는 헥손 단백질에 대한 것이며 이 항체의 중화 활성은 Varghese에 의해 입증되었다 (Varghese 등, 2004). 요약하면, 희석된 항체를 GFP-발현 복제-결함 Ad 벡터와 함께 인큐베이션한 후 HeLa 세포에 첨가한 후 형광 판독하였다. 파라토프 결합 펩타이드가 유래될 수 있는 영역을 매핑하기 위해, GenBank: BAG48782.1의 아미노산 위치 1 내지 952에 있는 서열을 환형 7-머, 10-머 및 13-머 펩타이드를 설계하기 위한 출발 서열로 사용하고, 펩타이드 마이크로어레이에서 합성 및 환형화한 후 다양한 농도의 항체와 함께 인큐베이션 하였다. 펩타이드에 대한 mAb 9C12의 결합 신호가 단백질에 대해 정렬되고 클러스터링 될 수 있는 여러 후보를 산출하였다. 파라토프 결합 펩타이드가 우선적으로 유래될 수 있는 20개 아미노산의 에피토픽 클러스터 영역이 확인되었다. 다음은 이와 같은 선별로부터 상응하는 펩타이드 히트의 정렬이다. 펩타이드 명칭에서의 숫자는 마이크로어레이에서 수득한 결합 신호의 순위에 해당한다 (즉, 펩타이드 01이 가장 강하게 결합하고, 02가 두 번째로 가장 강하게 결합하는 등). 이 실험에서 최대 50개의 상위 결합체가 환형 펩타이드로 선택되었다.
클러스터1 VDPMDEPTLLYVLFEVFDVV (서열번호 35)
01 ----DEPTLLYVLFEVF--- (서열번호 77)
02 -------TLLYVLFEVF--- (서열번호 78)
03 ----DEPTLLYVLF------ (서열번호 79)
04 -------TLLYVLFEVFDVV (서열번호 80)
05 -------TLLYVLF------ (서열번호 81)
06 ---MDEPTLLYVLFEV---- (서열번호 82)
07 -----EPTLLYVLFE----- (서열번호 83)
08 -DPMDEPTLLYVLF------ (서열번호 84)
09 --------LLYVLFEVFD-- (서열번호 85)
10 ----------YVLFEVFDVV (서열번호 86)
11 ------PTLLYVLFEV---- (서열번호 87)
12 ------PTLLYVLFEVFDV- (서열번호 88)
13 ---------LYVLFEVFDV- (서열번호 89)
14 -----EPTLLYVLFEVFD-- (서열번호 90)
15 ---------LYVLFEV---- (서열번호 91)
16 --PMDEPTLLYVLFE----- (서열번호 92)
17 --------LLYVLFE----- (서열번호 93)
18 VDPMDEPTLLYVL------- (서열번호 94)
19 ----------YVLFEVF--- (서열번호 95)
20 ------PTLLYVL------- (서열번호 96)
상기 펩타이드/서열은 AdV 벡터의 중화를 감소시키는 SADC에 대한 펩타이드로서 매우 적합하다.
실시예 16: AdV에 대한 폴리클로날 항체 ab6982의 에피토프 맵핑
폴리클로날 항체 ab6982(Abcam)는 정제된 AdV로 토끼를 면역화하여 생성되었다. 이는 헥손, 섬유 및 펜톤을 포함한 Ad5의 모든 캡시드 단백질과 반응한다. 생물검정에서 항체는 1000 아데노바이러스 5 입자/ml에서 Ad5 감염을 중화시키는 것으로 나타났으며, 아데노바이러스의 50% 불활성화는 항체의 1/25,000 희석에서 달성될 수 있다. ab6982 파라토프 결합을 위한 펩타이드를 함유할 수 있는 에피토프 영역을 확인하기 위해, 섬유(NCBI 참조 서열: AP_000226.1) 및 헥손 단백질(GenBank: BAG48782.1)의 서열에 대해 항체가 맵핑되었다. 섬유 서열(NCBI Reference Sequence: AP_000226.1)의 아미노산 위치 1 내지 581 및 헥손-서열(GenBank: BAG48782.1)의 아미노산 위치 1 내지 952가 펩타이드 어레이에서 합성된 7-머, 10-머 및 13-머 환형 펩타이드를 설계하기 위한 시작 서열로 사용되었다. 어레이에 대한 이 항체의 결합 신호가 단백질의 서열에 대해 정렬되고 클러스터링되어 여러 펩타이드를 산출하였다. 펩타이드 클러스터는 환형 펩타이드 히트 순위에 따라 클러스터1-7(섬유 단백질) 및 클러스터8-16(헥손 단백질)으로 명명되었다(즉, 클러스터1은 가장 강한 결합체를 포함하고 클러스터2는 두 번째로 강한 결합체를 포함하는 등). 다음은 폴리클로날 항체 ab6982에 결합하는 상응하는 펩타이드의 정렬이다. 펩타이드 명칭에서의 숫자는 마이크로어레이 실험의 항체 결합 신호 순위에 해당하며, 클러스터 1-7 및 클러스터 8-16의 수는 각각 상위 결합 펩타이드의 함량에 따라 순위가 매겨진다.
클러스터1 MKRARPSEDTFNPVYPYD (서열번호 36)
001 MKRARPSEDTF------- (서열번호 97)
002 -KRARPSEDTF------- (서열번호 98)
003 MKRARPSEDT-------- (서열번호 99)
005 MKRARPSEDTFN------ (서열번호 100)
010 ---ARPSEDTFNP----- (서열번호 101)
019 --RARPSEDTFN------ (서열번호 102)
024 ----RPSEDTF------- (서열번호 103)
035 MKRARPSEDTFNP----- (서열번호 104)
040 --RARPSEDTFNPVY--- (서열번호 105)
041 ---ARPSEDT-------- (서열번호 106)
052 -------EDTFNPVYPY- (서열번호 107)
061 ----RPSEDTFNPVYPY- (서열번호 108)
129 -KRARPSEDTFNPV---- (서열번호 109)
130 --------DTFNPVY--- (서열번호 110)
150 ----RPSEDTFNPV---- (서열번호 111)
153 -----PSEDTFNPVY--- (서열번호 112)
163 --------DTFNPVYPYD (서열번호 113)
클러스터2 ISGTVQSAHLIIRFD (서열번호 37)
004 ----VQSAHLIIRF- (서열번호 114)
006 -------AHLIIRF- (서열번호 115)
015 -SGTVQSAHLIIRF- (서열번호 116)
056 ---TVQSAHLIIR-- (서열번호 117)
060 --------HLIIRFD (서열번호 118)
065 ------SAHLIIR-- (서열번호 119)
076 -----QSAHLIIRFD (서열번호 120)
085 ISGTVQSAHLIIR-- (서열번호 121)
118 --GTVQSAHLII--- (서열번호 122)
123 --GTVQSAHLIIRFD (서열번호 123)
126 -----QSAHLII--- (서열번호 124)
클러스터3 LGQGPLFINSAHNLDINYNKGLYLF (서열번호 38)
009 ------------HNLDINY------ (서열번호 125)
011 -----LFINSAHNLDINY------- (서열번호 126)
012 ------------NLDINYNKGLYLF (서열번호 127)
013 -------FVSPNG------------ (서열번호 128)
016 ----------------NYINEIF-- (서열번호 129)
020 ------------------NKGLYLF (서열번호 130)
021 ---------------INYNKGLYLF (서열번호 131)
023 --------NSAHNLDINY------- (서열번호 132)
032 ------WDWSGH----NYINEIF-- (서열번호 133)
039 ---------SGH----NYINEIF-- (서열번호 134)
044 --LGTGLSF---------------- (서열번호 135)
047 PFLTPPF------------------ (서열번호 136)
클러스터4 SYPFDAQNQLNLRLGQGPLFIN (서열번호 39)
027 -------------LGQGPLF-- (서열번호 137)
029 ----------NLRLGQGPLF-- (서열번호 138)
030 -------NQLNLRLGQGPLF-- (서열번호 139)
058 --------------GQGPLFI- (서열번호 140)
059 --------QLNLRLGQGPLFI- (서열번호 141)
062 SYPFDAQNQLNLR--------- (서열번호 142)
066 -YPFDAQNQLNLRL-------- (서열번호 143)
070 -----------LRLGQGPLFI- (서열번호 144)
072 -------NQLNLRL-------- (서열번호 145)
073 ---FDAQNQLNLR--------- (서열번호 146)
082 ------QNQLNLR--------- (서열번호 147)
093 ---------------QGPLFIN (서열번호 148)
102 --PFDAQNQLNLRLG------- (서열번호 149)
112 ----DAQNQLNLRL-------- (서열번호 150)
117 ------------RLGQGPLFIN (서열번호 151)
136 --------QLNLRLG------- (서열번호 152)
147 ---FDAQNQLNLRLGQ------ (서열번호 153)
148 ---------LNLRLGQGPLFIN (서열번호 154)
169 -----AQNQLNLRLG------- (서열번호 155)
172 -----AQNQLNL---------- (서열번호 156)
173 ---------LNLRLGQ------ (서열번호 157)
178 SYPFDAQNQL------------ (서열번호 158)
197 --PFDAQNQLNL---------- (서열번호 159)
클러스터5 GDTTPSAYSMSFSWDWSGHNYIN (서열번호 40)
008 ---------YSMSFSW------- (서열번호 160)
014 ----TPSAYSMSFSWDW------ (서열번호 161)
022 ----------MSFSWDW------ (서열번호 162)
028 -----PSAYSMSFSW-------- (서열번호 163)
049 --DTTPSAYSMSFSW-------- (서열번호 164)
078 ---TTPSAYSMSF---------- (서열번호 165)
079 --------YSMSFSWDWS----- (서열번호 166)
091 TGDTTPSAYSMSF---------- (서열번호 167)
095 ------------FSWDWSGHNY- (서열번호 168)
100 ----------SFSWDWS----- (서열번호 169)
108 -----SAYSMSF---------- (서열번호 170)
134 ----------SFSWDWSGHN-- (서열번호 171)
143 -----SAYSMSFSWD------- (서열번호 172)
144 --------SMSFSWD------- (서열번호 173)
149 ------------SWDWSGHNYI (서열번호 174)
167 ------AYSMSFS--------- (서열번호 175)
176 --------SMSFSWDWSGHNY- (서열번호 176)
186 -----------FSWDWSG---- (서열번호 177)
193 ------------SWDWSGH--- (서열번호 178)
클러스터6 VLLNNSFLDPEYWNFRN (서열번호 41)
017 ------FLDPEYWNFR- (서열번호 179)
018 -----SFLDPEYWNF-- (서열번호 180)
031 ---------PEYWNFR- (서열번호 181)
033 --LNNSFLDPEYWNF-- (서열번호 182)
034 ---NNSFLDPEYWNFR- (서열번호 183)
050 ------FLDPEYW---- (서열번호 184)
053 --------DPEYWNF-- (서열번호 185)
068 ---NNSFLDPEYW---- (서열번호 186)
088 VLLNNSFLDPEYW---- (서열번호 187)
113 ----------EYWNFRN (서열번호 188)
114 --LNNSFLDPEY----- (서열번호 189)
155 -------LDPEYWNFRN (서열번호 190)
180 --LNNSFLD-------- (서열번호 191)
187 ----NSFLDPEYWN--- (서열번호 192)
클러스터7 HNYINEIFATSSYTFSYIA (서열번호 42)
042 ----------SSYTFSY-- (서열번호 193)
043 -------FATSSYTFSY-- (서열번호 194)
055 --YINEIFATSSYTF---- (서열번호 195)
064 -----------SYTFSYI- (서열번호 196)
080 --------ATSSYTF---- (서열번호 197)
089 -----EIFATSSYTF---- (서열번호 198)
092 ----NEIFATSSYTFSY-- (서열번호 199)
097 --------ATSSYTFSYI- (서열번호 200)
099 HNYINEIFATSSY------ (서열번호 201)
104 ------IFATSSY------ (서열번호 202)
110 ---INEIFATSSY------ (서열번호 203)
119 -NYINEIFATSSYT----- (서열번호 204)
168 --YINEIFA---------- (서열번호 205)
181 ------------YTFSYIA (서열번호 206)
200 -----EIFATSSYTFSYI- (서열번호 207)
클러스터8 DEAATALEINLEEEDDDNEDEVDEQAEQQKTH (서열번호 43)
01 -----ALEINLEEEDDDN-------------- (서열번호 208)
02 ---ATALEINLEEEDD---------------- (서열번호 209)
03 -EAATALEINLEEE------------------ (서열번호 210)
04 ------LEINLEE------------------- (서열번호 211)
05 ----TALEINLEEEDDD--------------- (서열번호 212)
06 -------EINLEEE------------------ (서열번호 213)
07 -----ALEINLEEED----------------- (서열번호 214)
08 ------LEINLEEEDD---------------- (서열번호 215)
09 ----TALEINLEEE------------------ (서열번호 216)
11 DEAATALEINLEE------------------- (서열번호 217)
13 ------LEINLEEEDDDNE------------- (서열번호 218)
14 --AATALEINLEEED----------------- (서열번호 219)
15 -------EINLEEEDDD--------------- (서열번호 220)
19 ---ATALEINLEE------------------- (서열번호 221)
23 --------INLEEEDDDN-------------- (서열번호 222)
27 ---------NLEEEDDDNE------------- (서열번호 223)
10 -------------------DEVDEQA------ (서열번호 224)
12 -------------EDDDNEDEVDEQA------ (서열번호 225)
16 ---------------DDNEDEVDEQAEQ---- (서열번호 226)
17 --------------------EVDEQAE----- (서열번호 227)
18 ----------------DNEDEVDEQA------ (서열번호 228)
20 ---------------------VDEQAEQ---- (서열번호 229)
21 ------------------EDEVDEQAEQQKT- (서열번호 230)
22 ------------------EDEVDEQAEQ---- (서열번호 231)
24 -------------------DEVDEQAEQQKTH (서열번호 232)
25 -----------------NEDEVDEQAEQQK-- (서열번호 233)
26 -------------------DEVDEQAEQQ--- (서열번호 234)
클러스터9 INLEEEDDDNEDEVDEQAEQ (서열번호 44)
028 EINLEEEDDDNED------- (서열번호 235)
029 --NLEEEDDDNEDEV----- (서열번호 236)
032 -INLEEED------------ (서열번호 237)
034 ---LEEEDDDNED------- (서열번호 238)
035 -INLEEEDDDNEDE------ (서열번호 239)
037 -------DDDNEDEVDEQAE (서열번호 240)
053 ---LEEEDDDNEDEVD---- (서열번호 241)
057 --------DDNEDEVDEQ-- (서열번호 242)
063 ------EDDDNED------- (서열번호 243)
065 --NLEEEDD----------- (서열번호 244)
078 --------DDNEDEV----- (서열번호 245)
087 -------DDDNEDEVDE--- (서열번호 246)
096 -------DDDNEDE------ (서열번호 247)
097 ----EEEDDDNEDE------ (서열번호 248)
108 -----EEDDDNE--------- (서열번호 249)
121 ------EDDDNEDEVD----- (서열번호 250)
126 -----------EDEVDEQ--- (서열번호 251)
148 -----EEDDDNEDEVDEQ--- (서열번호 252)
185 -----EEDDDNEDEV------ (서열번호 253)
188 ----EEEDDDNEDEVDE---- (서열번호 254)
클러스터10 DNEDEVDEQAEQQKTHVF (서열번호 45)
030 ----EVDEQAEQQK---- (서열번호 255)
031 DNEDEVDEQAEQQ----- (서열번호 256)
036 -----VDEQAEQQKT--- (서열번호 257)
038 ----EVDEQAEQQKTHV- (서열번호 258)
041 -----VDEQAEQQKTHVF (서열번호 259)
클러스터11 EWDEAATALEINLEE (서열번호 46)
033 --------ALEINLE (서열번호 260)
042 --WDEAATALEINLE (서열번호 261)
043 -----AATALEINLE (서열번호 262)
112 EWDEAATALEINL-- (서열번호 263)
124 ---EAATALEINL-- (서열번호 264)
클러스터12 PKVVLYSEDVDIETPDTHISYMP (서열번호 47)
039 ----LYSEDVDIET--------- (서열번호 265)
040 ----LYSEDVDIETPDT------ (서열번호 266)
044 -KVVLYSEDVDIET--------- (서열번호 267)
045 -----------IETPDTH----- (서열번호 268)
046 ---------VDIETPDTHI---- (서열번호 269)
047 ---VLYSEDVDIE---------- (서열번호 270)
048 --------DVDIETPDTHISY-- (서열번호 271)
049 --VVLYSEDVDIETP-------- (서열번호 272)
050 ------SEDVDIETPDTHI---- (서열번호 273)
051 ------------ETPDTHI---- (서열번호 274)
052 ---VLYSEDVDIETPD------- (서열번호 275)
054 --------DVDIETPDTH----- (서열번호 276)
055 ----------DIETPDTHIS--- (서열번호 277)
056 -------EDVDIETPDTHIS--- (서열번호 278)
058 -----------IETPDTHISY-- (서열번호 279)
059 -----YSEDVDIETPDTH----- (서열번호 280)
060 ---------VDIETPDTHISYM- (서열번호 281)
061 PKVVLYSEDVDIE---------- (서열번호 282)
062 ----------DIETPDT------ (서열번호 283)
064 ----------DIETPDTHISYMP (서열번호 284)
070 -------EDVDIETPDT------ (서열번호 285)
071 ------------ETPDTHISYM- (서열번호 286)
159 -----------IETPDTHISYMP (서열번호 287)
클러스터13 YIPESYKDRMYSFFRNF (서열번호 48)
072 -------DRMYSFFRNF (서열번호 288)
086 -------DRMYSFF--- (서열번호 289)
104 ----------YSFFRNF (서열번호 290)
107 -IPESYKDRMYSFF--- (서열번호 291)
120 ----SYKDRMYSFF--- (서열번호 292)
127 ---ESYKDRMYSF---- (서열번호 293)
143 ------KDRMYSF―--- (서열번호 294)
152 YIPESYKDRMYSF---- (서열번호 295)
153 --PESYKDRMYSFFR-- (서열번호 296)
160 -----YKDRMYSFFR-- (서열번호 297)
클러스터14 DSIGDRTRYFSMW (서열번호 49)
073 ------TRYFSMW (서열번호 298)
080 ---GDRTRYF--- (서열번호 299)
095 DSIGDRTRYF--- (서열번호 300)
100 DSIGDRTRYFSMW (서열번호 301)
101 ---GDRTRYFSMW (서열번호 302)
클러스터15 SYKDRMYSFFRNF (서열번호 50)
072 ---DRMYSFFRNF (서열번호 303)
099 SYKDRMYSFFRNF (서열번호 304)
클러스터16 FLVQMLANYNIGYQGFY (서열번호 51)
106 -------NYNIGYQGFY (서열번호 305)
122 ------ANYNIGYQGF- (서열번호 306)
123 ----MLANYNIGYQGFY (서열번호 307)
136 ----------IGYQGFY (서열번호 308)
184 FLVQMLANYNIGY---- (서열번호 309)
187 ---------NIGYQGF- (서열번호 310)
190 ---QMLANYNIGYQGF- (서열번호 311)
상기 펩타이드/서열은 AdV 벡터의 중화를 감소시키는 SADC에 대한 펩타이드로서 매우 적합하다. 중요한 것은, 개선된 항체 결합 특성을 갖는 미모토프(mimotope)를 생성하기 위해 1, 2 또는 3개의 아미노산을 돌연변이시킴으로써 원하지 않는 항체의 파라토프(paratope)에 대한 이들 펩타이드의 결합이 더욱 개선될 수 있다는 것이다.
실시예 17: AAV에 대한 mAb ADK8의 에피토프 맵핑
모노클로날 항체 ADK8은 마우스를 AAV8 캡시드로 면역화함으로써 생성시켰다. 이는 조립된 AAV8 캡시드에 대한 것이다(Sonntag 등, 2011). 항체의 중화 기능은 이전에 입증된 바 있다(Gurda 등, 2012). 요약하면, AAV8은 세포질에 존재하는 바이러스 입자의 수를 감소시키는 ADK8과 사전 배양되었다. 더욱이, ADK8에 의한 중화 후에 AAV8의 핵막 결합 및 핵 도입이 저지되었다. 이는 ADK8 중화가 세포 진입 및/또는 핵으로의 수송을 방해할 수 있음을 시사한다. ADK8은 또한 AAV1, AAV3, AAV7과 같은 다른 AAV 혈청형의 캡시드 단백질과 교차 반응하므로(Mietzsch 등, 2014) 본 발명에 대한 일반적인 결론을 도출할 수 있는 일 예로 선택되었다.
다른 항체들(위의 실시예 참조)의 경우, 바람직한 펩타이드가 추론될 수 있는 영역을 기술하는 여러 클러스터가 확인되었다. 가장 바람직하게는, 이들의 결합 강도에 따라 하기 정렬된 펩타이드는 상기와 같은 선택적 항체 고갈 및 검출에 사용될 수 있다.
클러스터1 WQNRDVYLQGPIWAKIP (서열번호 52)
01 ------YLQGPIW---- (서열번호 312)
02 -----VYLQGPI----- (서열번호 313)
03 WQNRDVY---------- (서열번호 314)
05 ----DVYLQGP------ (서열번호 315)
08 -QNRDVYL--------- (서열번호 316)
12 -------LQGPIWA--- (서열번호 317)
20 ---RDVYLQG------- (서열번호 318)
50 --NRDVYLQ-------- (서열번호 319)
클러스터2 DNTYFGYSTPWGYFDFNRFHC (서열번호 53)
07 ---YFGYSTPWGYFDF----- (서열번호 320)
09 ----FGYSTPWGYF------- (서열번호 321)
10 -----GYSTPWGYFD------ (서열번호 322)
11 ------YSTPWGYFDF----- (서열번호 323)
17 -NTYFGYSTPWGYF------- (서열번호 324)
18 --------TPWGYFDFNRFHC (서열번호 325)
23 --TYFGYSTPWGYFD------ (서열번호 326)
26 DNTYFGYSTPWGY-------- (서열번호 327)
28 ---YFGYSTPWGY-------- (서열번호 328)
34 ----FGYSTPWGYFDFN---- (서열번호 329)
클러스터3 MANQAKNWLPGPCY (서열번호 54)
04 ------NWLPGPC- (서열번호 330)
15 -------WLPGPCY (서열번호 331)
16 ---QAKNWLPGPC- (서열번호 332)
21 ----AKNWLPGPCY (서열번호 333)
25 MANQAKNWLPGPC- (서열번호 334)
클러스터4 LPYVLGSAHQGCLPPFP (서열번호 55)
06 ---------QGCLPPF- (서열번호 335)
13 ----------GCLPPFP (서열번호 336)
27 ---VLGSAHQGCLPPF- (서열번호 337)
32 LPYVLGSAHQGCL---- (서열번호 338)
37 -YVLGSAHQGC------ (서열번호 339)
38 ----------CLPPFPA (서열번호 340)
39 -----SAHQGCLPPF-- (서열번호 341)
45 --VLGSAHQGCL----- (서열번호 342)
46 PYVLGSAHQGCLP---- (서열번호 343)
클러스터5 NGSQAVGRSSFYCLEYF (서열번호 56)
14 ------GRSSFYC---- (서열번호 344)
22 ----AVGRSSFYCLEYF (서열번호 345)
24 ----AVGRSSFYCL--- (서열번호 346)
33 ---QAVGRSSFYCLEY- (서열번호 347)
35 NGSQAVGRSSFYC---- (서열번호 348)
클러스터6 PLIDQYLYYL (서열번호 57)
19 ---DQYLYYL (서열번호 349)
29 PLIDQYLYYL (서열번호 350)
36 --IDQYLYY- (서열번호 351)
클러스터7 EERFFPSNGILIF (서열번호 58)
31 ---FFPSNGILIF (서열번호 352)
49 EERFFPSNGILIF (서열번호 353)
클러스터8 ADGVGSSSGNWHC (서열번호 59)
42 ---VGSSSGNWHC (서열번호 354)
48 ADGVGSSSGNWHC (서열번호 355)
실시예 18: 사람 혈청에서 항-AAV 항체에 대한 스크리닝
유전자 치료에 사용되는 16개의 상이한 AAV의 서열에서 유래되고 각각 15개 아미노산의 서열 길이를 지닌 2452개의 선형 펩타이드가 합성되었다.
사람 공여자로부터 수득된 샘플로 마이크로어레이에 고정된 이러한 AAV 유래 펩타이드에 대한 항체를 스크리닝하였다. 이를 위하여 사람 공여자로부터 얻은 혈액으로부터 단백질 G 정제를 통해 IgG를 준비하였다. 각 IgG 샘플을 펩타이드 마이크로어레이와 함께 인큐베이션하고 Ig 결합 신호를 형광으로 검출하였다. 어레이 상의 펩타이드에 대한 모든 항체 결합 신호는 백그라운드 제거되었고 각 샘플에 대해 순위가 매겨졌으며, (UniProt 또는 기타 소스에서 수득한 것과 같은) 상응하는 기원 단백질 서열을 갖는 각 공여자에 대한 각각의 상위 250개 펩타이드 히트의 중복 제거된 집합체가 편집되었다(그룹 IV로 지정됨). 또한, 각 공여자에 대한 각각의 상위 50개 펩타이드 히트의 중복 제거된 집합체가 수집되어 그룹 III으로 지정되었다. 또한, 각 공여자에 대한 각각의 상위 25개 펩타이드 히트의 중복 제거된 집합체가 수집되어 그룹 II로 지정되었다. 마지막으로, 각 공여자에 대한 각각의 상위 10개 펩타이드 히트의 중복 제거된 집합체가 수집되어 그룹 I로 지정되었다.
상세한 결과는 하기 표 1에 나타낸다. 전체적으로 그룹 I은 110개의 별개의 펩타이드 히트(표 1의 해당 AAV 벡터에 할당됨)를 포함하고, 그룹 II는 289개의 별개의 펩타이드 히트를 포함하며, 그룹 III은 428개의 별개의 펩타이드 히트를 포함하고, 그룹 IV는 1271개의 별개의 펩타이드 히트를 포함한다. 분명히 그룹 I은 차례로 그룹 IV의 하위집단인 그룹 III의 하위 집단인 그룹 II의 하위 집단이다. 그룹 I-IV는 스크리닝된 모든 펩타이드의 각각 상위 4.4%, 10.5%, 17.5% 및 51.8%에 해당한다.
따라서, 나열된 모든 펩타이드, 바람직하게는 그룹 III에 속하는 펩타이드, 심지어 보다 바람직하게는 그룹 II에 속하는 펩타이드, 가장 바람직하게는 그룹 I에 속하는 펩타이드(즉, 상위 4.4%)는 본 발명에 따른 항체 고갈을 위해 더 짧은 펩타이드 서열이 유래될 수 있는 서열을 제공한다. 또한, 표 1의 펩타이드가 유래된 단백질(바람직하게는 그룹 III, 보다 바람직하게는 그룹 II, 가장 바람직하게는 그룹 I)의 다른 펩타이드 서열(또는 단편)도 본 발명에 따른 SADC에 사용하기에 적합하다. 또한, 이러한 펩타이드는 사람 혈청과 같은 생물학적 샘플에서 항-AAV 항체의 진단적 검출을 위한 프로브로 사용될 수도 있다.
이 표는 본 발명에 따른 항-AAV 항체 고갈 SADC의 구성을 위한 기초로서 선형 펩타이드에 대한 스크리닝의 상세한 결과를 나열한다. 이들 펩타이드는 또한 AAV 유전자 치료요법 벡터에 대한 적합한 유형 중화 항체이다. 달리 명시되지 않는 한, 펩타이드는 상이한 AAV VP1 단백질의 단편을 나타낸다. 제공된 소스는 UniProt ID, GenBank ID, PDB ID 또는 AAV 균주 이름이다.
펩타이드 # 서열번호
펩타이드
그룹 I 그룹 II 그룹 III 그룹IV 소스
1 383 LRTGNNFEFSYQFED X X X X AAO88201.1
2 384 TGNNFEFSYQFEDVP X X X X AAO88201.1
3 385 VATEQYGVVADNLQQ X X X X AAO88201.1
4 386 FEFSYFEDVPFHSSY X X X X AAV-Rh74 c
5 387 RTGNFEFSYFEDVPF X X X X AAV-Rh74 c
6 388 MLRTGNFEFSYFEDV X X X X AAV-Rh74 c
7 389 PVPADPPTTFNQAKL X X X X AAV-Rh74 c
8 390 TQSTGGTAGTQQLLF X X X X AAV-Rh74 c
9 391 EEEIKTTNPVATEQY X X X X AAV-Rh74 c
10 392 SSVMLTSEEEIKTTN X X X X AAV-Rh74 c
11 393 VDFAVNTEGTYSEPR X X X X AAV-Rh74 c
12 394 SVPDPQPIGEPPAGP X X X X AAV-Rh74 c
13 395 EEIKTTNPVATEQYG X X X X AAV-Rh74 c
14 396 PIGEPPAGPSGLGSG X X X X AAV-Rh74 c
15 397 VNTEGTYSEPRPIGT X X X X AAV-Rh74 c
16 398 YSSVMLTSEEEIKTT X X X X AAV-Rh74 c
17 399 VATNHQSAQTLAVPF X X X X ALU85156.1
18 400 VSTNLQRGNLALGET X X X X AOD99651.1
19 401 ALGETTRPATAAQTQ X X X X AOD99656.1
20 402 TQTTGGTTNTQTLGF X X X X pdb3J1QA
21 403 DDEEKFFPQSGVLIF X X X X P03135
22 404 EEEIRTTNPVATEQY X X X X P03135
23 405 PVEPDSSSGTGKAGQ X X X X P03135
24 406 IQYTSNYNKSVNVDF X X X X P03135
25 407 TDEEEIRTTNPVATE X X X X P03135
26 408 VDFTVDTNGVYSEPR X X X X P03135
27 409 VDTNGVYSEPRPIGT X X X X P03135
28 410 TMATGSGAPMADNNE X X X X P03135
29 411 TSTVQVFTDSEYQLP X X X X P03135
30 412 LYYLSRTNTPSGTTT X X X X P03135
31 413 TADVNTQGVLPGMVW X X X X P03135
32 414 GSEKTNVDIEKVMIT X X X X P03135
33 415 TNTMATGSGAPMADN X X X X P03135
34 416 WNPEIQYTSNYNKSV X X X X P03135
35 417 SYTFEDVPFHSSYAH X X X X O56137
36 418 EDVPFHSSYAHSQSL X X X X O56137
37 419 SSTDPATGDVHVMGA X X X X O56137
38 420 ATERFGTVAVNLQSS X X X X O56137
39 421 WLEDNLSEGIREWWD X X X X O56137
40 422 EEEIKATNPVATERF X X X X O56137
41 423 LEDNLSEGIREWWDL X X X X O56137
42 424 DAEFQERLQEDTSFG X X X X O56137
43 425 EWELQKENSKRWNPE X X X X O56137
44 426 SFITQYSTGQVSVEI X X X X O56137
45 427 EIEWELQKENSKRWN X X X X O56137
46 428 ITQYSTGQVSVEIEW X X X X O56137
47 429 TDEEEIKATNPVATE X X X X O56137
48 430 EEGAKTAPGKKRPVE X X X X O56137
49 431 IQVKEVTTNDGVTTI X X X X O56137
50 432 SDSEYQLPYVLGSAH X X X X O56137
51 433 PLGEPPATPAAVGPT X X X X O56137
52 434 SSASTGASNDNHYFG X X X X O56137
53 435 PVDQSPQEPDSSSGV X X X X O56139
54 436 EEAAKTAPGKKRPVD X X X X O56139
55 437 APGKKRPVDQSPQEP X X X X O56139
56 438 ILEPLGLVEEAAKTA X X X X O56139
57 439 TRTVNDQGALPGMVW X X X X O56139
58 440 KRPVDQSPQEPDSSS X X X X O56139
59 441 PLGEPPAAPTSLGSN X X X X O56139
60 442 GKKRPVDQSPQEPDS X X X X O56139
61 443 KTAPGKKRPVDQSPQ X X X X O56139
62 444 SNAELDNVMITDEEE X X X X O56139
63 445 WLEDNLSEGIREWWA X X X X Q6JC40
64 446 PVPADPPTAFNKDKL X X X X Q6JC40
65 447 EFENVPFHSSYAHSQ X X X X Q6JC40
66 448 FQERLKEDTSFGGNL X X X X Q6JC40
67 449 PQILIKNTPVPADPP X X X X Q6JC40
68 450 ADAEFQERLKEDTSF X X X X Q6JC40
69 451 EEIKTTNPVATESYG X X X X Q6JC40
70 452 VEFAVNTEGVYSEPR X X X X Q6JC40
71 453 AEFQERLKEDTSFGG X X X X Q6JC40
72 454 EPDSSAGIGKSGAQP X X X X Q6JC40
73 455 LIKNTPVPADPPTAF X X X X Q6JC40
74 456 VMITNEEEIKTTNPV X X X X Q6JC40
75 457 VNTEGVYSEPRPIGT X X X X Q6JC40
76 458 DKLNSFITQYSTGQV X X X X Q6JC40
77 459 VATESYGQVATNHQS X X X X Q6JC40
78 460 DDEERFFPSNGILIF X X X X Q8JQF8
79 461 EEEIKTTNPVATEEY X X X X Q8JQF8
80 462 PVPADPPTTFNQSKL X X X X Q8JQF8
81 463 LIKNTPVPADPPTTF X X X X Q8JQF8
82 464 SSSGNWHCDSTWLGD X X X X Q8JQF8
83 465 TSVDFAVNTEGVYSE X X X X Q8JQF8
84 466 TTTGQNNNSNFAWTA X X X X Q8JQF8
85 467 VDFAVNTEGVYSEPR X X X X Q8JQF8
86 468 VSTTTGQNNNSNFAW X X X X Q8JQF8
87 469 KTAPGKKRPVEPSPQ X X X X Q8JQF8
88 470 TQTTGGTANTQTLGF X X X X Q8JQF8
89 471 VLEPLGLVEEGAKTA X X X X Q8JQF8
90 472 EEVGEGLREFLGLEA X X X X Q9YIJ1
91 473 DAEFQEKLADDTSFG X X X X Q9YIJ1
92 474 SFVDHPPDWLEEVGE X X X X Q9YIJ1
93 475 EWELKKENSKRWNPE X X X X Q9YIJ1
94 476 EMEWELKKENSKRWN X X X X Q9YIJ1
95 477 TNNYNDPQFVDFAPD X X X X Q9YIJ1
96 478 FEEVPFHSSFAPSQN X X X X Q9YIJ1
97 479 QYTNNYNDPQFVDFA X X X X Q9YIJ1
98 480 TSTVQVFTDDDYQLP X X X X Q9YIJ1
99 481 EDSKPSTSSDAEAGP X X X X Q9YIJ1
100 482 EEGAKTAPTGKRIDD X X X X Q9YIJ1
101 483 EVPFHSSFAPSQNLF X X X X Q9YIJ1
102 484 SSFITQYSTGQVTVE X X X X Q9YIJ1
103 485 ELEGASYQVPPQPNG X X X X Q9YIJ1
104 486 ERDVYLQGPIWAKIP X X X X Q9YIJ1
105 487 PQYGYATLNRDNTEN X X X X Q9YIJ1
106 488 QVTVEMEWELKKENS X X X X Q9YIJ1
107 489 VTVQDSTTTIANNLT X X X X Q9YIJ1
108 490 YNEQLEAGDNPYLKY X X X X Q9YIJ1
109 491 YNNHQYREIKSGSVD X X X X Q9YIJ1
110 492 TSSDAEAGPSGSQQL X X X X Q9YIJ1
111 493 FEFSYQFEDVPFHSS X X X AAO88201.1
112 494 NNFEFSYQFEDVPFH X X X AAO88201.1
113 495 YQFEDVPFHSSYAHS X X X AAO88201.1
114 496 QGAGKDNVDYSSVML X X X AAO88201.1
115 497 TPVPADPPTTFSQAK X X X AAO88201.1
116 498 IKTTNPVATEQYGVV X X X AAO88201.1
117 499 GNFEFSYFEDVPFHS X X X AAV-Rh74 c
118 500 FSYFEDVPFHSSYAH X X X AAV-Rh74 c
119 501 YFEDVPFHSSYAHSQ X X X AAV-Rh74 c
120 502 EYFPSQMLRTGNFEF X X X AAV-Rh74 c
121 503 EIKTTNPVATEQYGW X X X AAV-Rh74 c
122 504 RTQSTGGTAGTQQLL X X X AAV-Rh74 c
123 505 DNVDYSSVMLTSEEE X X X AAV-Rh74 c
124 506 DEERFFPSSGVLMFG X X X AAV-Rh74 c
125 507 TNVDFAVNTEGTYSE X X X AAV-Rh74 c
126 508 EIQYTSNYYKSTNVD X X X AAV-Rh74 c
127 509 RVSTTLSQNNNSNFA X X X AAV-Rh74 c
128 510 SESVPDPQPIGEPPA X X X AAV-Rh74 c
129 511 QRVSTTLSQNNNSNF X X X AAV-Rh74 c
130 512 VDYSSVMLTSEEEIK X X X AAV-Rh74 c
131 513 PQPIGEPPAGPSGLG X X X AAV-Rh74 c
132 514 QQRVSTTLSQNNNSN X X X AAV-Rh74 c
133 515 VSTTLSQNNNSNFAW X X X AAV-Rh74 c
134 516 TTRPATAPQIGTVNS X X X AOD99652.1
135 517 EYGAVAINNQAANLA X X X AOD99654.1
136 518 TTRPATAAQTQVVNN X X X AOD99656.1
137 519 NQSLALGETTRPAST X X X AOD99659.1
138 520 GQMATNNQSLALGET X X X AOD99659.1
139 521 MATNNQSLALGETTR X X X AOD99659.1
140 522 TNNQSLALGETTRPA X X X AOD99659.1
141 523 DSVPDPQPIGEPPAA X X X pdb3J1QA
142 524 TGDADSVPDPQPIGE X X X pdb3J1QA
143 525 SLTMAAGGGAPMADN X X X pdb3J1QA
144 526 TTGGTTNTQTLGFSQ X X X pdb3J1QA
145 527 LYYLSRTQTTGGTTN X X X pdb3J1QA
146 528 SRTQTTGGTTNTQTL X X X pdb3J1QA
147 529 YLSRTQTTGGTTNTQ X X X pdb3J1QA
148 530 DGYLPDWLEDTLSEG X X X P03135
149 531 PPFPADVFMVPQYGY X X X P03135
150 532 GEPVNEADAAALEHD X X X P03135
151 533 VNVDFTVDTNGVYSE X X X P03135
152 534 EEKFFPQSGVLIFGK X X X P03135
153 535 PDWLEDTLSEGIRQW X X X P03135
154 536 PVNEADAAALEHDKA X X X P03135
155 537 TNVDIEKVMITDEEE X X X P03135
156 538 VDIEKVMITDEEEIR X X X P03135
157 539 PEIQYTSNYNKSVNV X X X P03135
158 540 VEEPVKTAPGKKRPV X X X P03135
159 541 ASHKDDEEKFFPQSG X X X P03135
160 542 EPVNEADAAALEHDK X X X P03135
161 543 ERHKDDSRGLVLPGY X X X P03135
162 544 GNSSGNWHCDSTWMG X X X P03135
163 545 PVPANPSTTFSAAKF X X X P03135
164 546 AAALEHDKAYDRQLD X X X P03135
165 547 FNGLDKGEPVNEADA X X X P03135
166 548 YTSNYNKSVNVDFTV X X X P03135
167 549 EDTLSEGIRQWWKLK X X X P03135
168 550 EPDSSSGTGKAGQQP X X X P03135
169 551 NNSEYSWTGATKYHL X X X P03135
170 552 SNYNKSVNVDFTVDT X X X P03135
171 553 SSQSGASNDNHYFGY X X X P03135
172 554 KRWNPEIQYTSNYNK X X X P03135
173 555 YLSRTNTPSGTTTQS X X X P03135
174 556 YTFEDVPFHSSYAHS X X X O56137
175 557 FEDVPFHSSYAHSQS X X X O56137
176 558 QSSSTDPATGDVHVM X X X O56137
177 559 PDWLEDNLSEGIREW X X X O56137
178 560 DWLEDNLSEGIREWW X X X O56137
179 561 QYSTGQVSVEIEWEL X X X O56137
180 562 DGYLPDWLEDNLSEG X X X O56137
181 563 EDNLSEGIREWWDLK X X X O56137
182 564 DNHYFGYSTPWGYFD X X X O56137
183 565 PVEQSPQEPDSSSGI X X X O56137
184 566 ADGYLPDWLEDNLSE X X X O56137
185 567 GDSESVPDPQPLGEP X X X O56137
186 568 GEPVNAADAAALEHD X X X O56137
187 569 EDTSFGGNLGRAVFQ X X X O56137
188 570 GCLPPFPADVFMIPQ X X X O56137
189 571 PVPANPPAEFSATKF X X X O56137
190 572 SESVPDPQPLGEPPA X X X O56137
191 573 EFQERLQEDTSFGGN X X X O56137
192 574 DAAALEHDKAYDQQL X X X O56137
193 575 EPVNAADAAALEHDK X X X O56137
194 576 QRVSKTKTDNNNSNF X X X O56137
195 577 DSESVPDPQPLGEPP X X X O56137
196 578 EHDKAYDQQLKAGDN X X X O56137
197 579 LPGMVWQDRDVYLQG X X X O56137
198 580 VSVEIEWELQKENSK X X X O56137
199 581 DSEYQLPYVLGSAHQ X X X O56137
200 582 PQPLGEPPATPAAVG X X X O56137
201 583 VEIEWELQKENSKRW X X X O56137
202 584 EYFPSQMLRTGNNFT X X X O56137
203 585 PLIDQYLYYLNRTQN X X X O56137
204 586 QVSVEIEWELQKENS X X X O56137
205 587 ASNDNHYFGYSTPWG X X X O56137
206 588 EIKATNPVATERFGT X X X O56137
207 589 GSAHQGCLPPFPADV X X X O56137
208 590 SSSGIGKTGQQPAKK X X X O56137
209 591 AAALEHDKAYDQQLK X X X O56137
210 592 NNFQFSYTFEDVPFH X X X O56139
211 593 TGNNFQFSYTFEDVP X X X O56139
212 594 LRTGNNFQFSYTFED X X X O56139
213 595 EADAAALEHDKAYDQ X X X O56139
214 596 PQPLGEPPAAPTSLG X X X O56139
215 597 SSSGVGKSGKQPARK X X X O56139
216 598 DDEEKFFPMHGNLIF X X X O56139
217 599 QRLSKTANDNNNSNF X X X O56139
218 600 TTSGTTNQSRLLFSQ X X X O56139
219 601 SYEFENVPFHSSYAH X X X Q6JC40
220 602 QFSYEFENVPFHSSY X X X Q6JC40
221 603 ERLKEDTSFGGNLGR X X X Q6JC40
222 604 ESVPDPQPIGEPPAA X X X Q6JC40
223 605 NNVEFAVNTEGVYSE X X X Q6JC40
224 606 NEEEIKTTNPVATES X X X Q6JC40
225 607 SLIFGKQGTGRDNVD X X X Q6JC40
226 608 EDNLSEGIREWWALK X X X Q6JC40
227 609 NSFITQYSTGQVSVE X X X Q6JC40
228 610 SSNDNAYFGYSTPWG X X X Q6JC40
229 611 TPVPADPPTAFNKDK X X X Q6JC40
230 612 VEEAAKTAPGKKRPV X X X Q6JC40
231 613 IKNTPVPADPPTAFN X X X Q6JC40
232 614 IKTTNPVATESYGQV X X X Q6JC40
233 615 IQYTSNYYKSNNVEF X X X Q6JC40
234 616 QILIKNTPVPADPPT X X X Q6JC40
235 617 AFNKDKLNSFITQYS X X X Q6JC40
236 618 EYFPSQMLRTGNNFQ X X X Q6JC40
237 619 ITNEEEIKTTNPVAT X X X Q6JC40
238 620 LKEDTSFGGNLGRAV X X X Q6JC40
239 621 VATNHQSAQAQAQTG X X X Q6JC40
240 622 DADKVMITNEEEIKT X X X Q6JC40
241 623 SLTMASGGGAPVADN X X X Q6JC40
242 624 NKDKLNSFITQYSTG X X X Q6JC40
243 625 QPIGEPPAAPSGVGS X X X Q6JC40
244 626 DNADYSDVMLTSEEE X X X Q8JQF8
245 627 TYTFEDVPFHSSYAH X X X Q8JQF8
246 628 ARDNADYSDVMLTSE X X X Q8JQF8
247 629 IGTVNSQGALPGMVW X X X Q8JQF8
248 630 EEYGIVADNLQQQNT X X X Q8JQF8
249 631 QRVSTTTGQNNNSNF X X X Q8JQF8
250 632 DGVGSSSGNWHCDST X X X Q8JQF8
251 633 IKNTPVPADPPTTFN X X X Q8JQF8
252 634 ILIKNTPVPADPPTT X X X Q8JQF8
253 635 STIQVFTDSEYQLPY X X X Q8JQF8
254 636 CYRQQRVSTTTGQNN X X X Q8JQF8
255 637 HDKAYDQQLQAGDNP X X X Q8JQF8
256 638 LYYLSRTQTTGGTAN X X X Q8JQF8
257 639 TFNQSKLNSFITQYS X X X Q8JQF8
258 640 VTQNEGTKTIANNLT X X X Q8JQF8
259 641 QYLYYLSRTQTTGGT X X X Q8JQF8
260 642 SRTQTTGGTANTQTL X X X Q8JQF8
261 643 NTYFGYSTPWGYFDF X X X Q8JQF8
262 644 PVEPSPQRSPDSSTG X X X Q8JQF8
263 645 SVPDPQPLGEPPAAP X X X Q8JQF8
264 646 EPSPQRSPDSSTGIG X X X Q8JQF8
265 647 NNFEFTYNFEEVPFH X X X Q9YIJ1
266 648 PDWLEEVGEGLREFL X X X Q9YIJ1
267 649 TGNNFEFTYNFEEVP X X X Q9YIJ1
268 650 LRTGNNFEFTYNFEE X X X Q9YIJ1
269 651 EPVNRADEVAREHDI X X X Q9YIJ1
270 652 TEEDSKPSTSSDAEA X X X Q9YIJ1
271 653 TQYSTGQVTVEMEWE X X X Q9YIJ1
272 654 ESETQPVNRVAYNVG X X X Q9YIJ1
273 655 NLTSTVQVFTDDDYQ X X X Q9YIJ1
274 656 EIQYTNNYNDPQFVD X X X Q9YIJ1
275 657 PVPGNITSFSDVPVS X X X Q9YIJ1
276 658 TVEMEWELKKENSKR X X X Q9YIJ1
277 659 EFQEKLADDTSFGGN X X X Q9YIJ1
278 660 EQLEAGDNPYLKYNH X X X Q9YIJ1
279 661 NYNDPQFVDFAPDST X X X Q9YIJ1
280 662 SSLGADTMSAGGGGP X X X Q9YIJ1
281 663 SKPSTSSDAEAGPSG X X X Q9YIJ1
282 664 FITQYSTGQVTVEME X X X Q9YIJ1
283 665 EFLGLEAGPPKPKPN X X X Q9YIJ1
284 666 NVGGQMATNNQSSTT X X X Q9YIJ1
285 667 PSKMLRTGNNFEFTY X X X Q9YIJ1
286 668 VLEPFGLVEEGAKTA X X X Q9YIJ1
287 669 AQPASSLGADTMSAG X X X Q9YIJ1
288 670 VQDSTTTIANNLTST X X X Q9YIJ1
289 671 YLEGNMLITSESETQ X X X Q9YIJ1
290 672 NVDFAVNTDGTYSEP X X AAO88201.1
291 673 KDNVDYSSVMLTSEE X X AAO88201.1
292 674 HDDEERFFPSSGVLM X X AAV-Rh74 c
293 675 SQMLRTGNFEFSYFE X X AAV-Rh74 c
294 676 GDSESVPDPQPIGEP X X AAV-Rh74 c
295 677 DNPYLRYHADAEFQE X X AAV-Rh74 c
296 678 NTPVPADPPTTFNQA X X AAV-Rh74 c
297 679 DSLVNPGVAMATHDD X X AAV-Rh74 c
298 680 PLGLVESPVKTAPGK X X AAV-Rh74 c
299 681 SRTQSTGGTAGTQQL X X AAV-Rh74 c
300 682 TFNQAKLASFITQYS X X AAV-Rh74 c
301 683 STTLSQNNNSNFAWT X X AAV-Rh74 c
302 684 SSTGIGKKGQQPAKK X X AAV-Rh74 c
303 685 KSTNVDFAVNTEGTY X X AAV-Rh74 c
304 686 TYSEPRPIGTRYLTR X X AAV-Rh74 c
305 687 EYGIVADNLQQQNLA X X AOD99652.1
306 688 RPATAPQIGTVNSQG X X AOD99652.1
307 689 GETTRPATAAQTQVV X X AOD99656.1
308 690 EYGIVSSNLQAANLA X X AOD99656.1
309 691 SNLQAANLALGETTR X X AOD99656.1
310 692 DADSVPDPQPIGEPP X X pdb3J1QA
311 693 QGVLPGMVWQDRDVY X X P03135
312 694 NEADAAALEHDKAYD X X P03135
313 695 QGCLPPFPADVFMVP X X P03135
314 696 EHDKAYDRQLDSGDN X X P03135
315 697 PFPADVFMVPQYGYL X X P03135
316 698 EPVKTAPGKKRPVEH X X P03135
317 699 HKDDEEKFFPQSGVL X X P03135
318 700 DKGEPVNEADAAALE X X P03135
319 701 EQYGSVSTNLQRGNR X X P03135
320 702 GPPPPKPAERHKDDS X X P03135
321 703 IEKVMITDEEEIRTT X X P03135
322 704 KSVNVDFTVDTNGVY X X P03135
323 705 RPVEHSPVEPDSSSG X X P03135
324 706 SDIRDQSRNWLPGPC X X P03135
325 707 DNNEGADGVGNSSGN X X P03135
326 708 PVATEQYGSVSTNLQ X X P03135
327 709 QVKEVTQNDGTTTIA X X P03135
328 710 STVQVFTDSEYQLPY X X P03135
329 711 DADSVPDPQPLGQPP X X P03135
330 712 DSGDNPYLKYNHADA X X P03135
331 713 DSLVNPGPAMASHKD X X P03135
332 714 ISSQSGASNDNHYFG X X P03135
333 715 MITDEEEIRTTNPVA X X P03135
334 716 RQWWKLKPGPPPPKP X X P03135
335 717 VKEVTQNDGTTTIAN X X P03135
336 718 VTQNDGTTTIANNLT X X P03135
337 719 ADNNEGADGVGNSSG X X P03135
338 720 PLGLVEEPVKTAPGK X X P03135
339 721 GNNFTFSYTFEDVPF X X O56137
340 722 FSYTFEDVPFHSSYA X X O56137
341 723 TFSYTFEDVPFHSSY X X O56137
342 724 DDKDKFFPMSGVMIF X X O56137
343 725 TFEDVPFHSSYAHSQ X X O56137
344 726 TGDVHVMGALPGMVW X X O56137
345 727 HVMGALPGMVWQDRD X X O56137
346 728 TVAVNLQSSSTDPAT X X O56137
347 729 AVNLQSSSTDPATGD X X O56137
348 730 NHYFGYSTPWGYFDF X X O56137
349 731 GSQAVGRSSFYCLEY X X O56137
350 732 TQYSTGQVSVEIEWE X X O56137
351 733 YLPDWLEDNLSEGIR X X O56137
352 734 SNTALDNVMITDEEE X X O56137
353 735 TPWGYFDFNRFHCHF X X O56137
354 736 YFDFNRFHCHFSPRD X X O56137
355 737 GYLPDWLEDNLSEGI X X O56137
356 738 YSTGQVSVEIEWELQ X X O56137
357 739 SLDRLMNPLIDQYLY X X O56137
358 740 STVQVFSDSEYQLPY X X O56137
359 741 SVPDPQPLGEPPATP X X O56137
360 742 EFSATKFASFITQYS X X O56137
361 743 YSTPWGYFDFNRFHC X X O56137
362 744 AHQGCLPPFPADVFM X X O56137
363 745 ASFITQYSTGQVSVE X X O56137
364 746 EWWDLKPGAPKPKAN X X O56137
365 747 GEPPATPAAVGPTTM X X O56137
366 748 MVWQDRDVYLQGPIW X X O56137
367 749 DKGEPVNAADAAALE X X O56137
368 750 ERLQEDTSFGGNLGR X X O56137
369 751 EYQLPYVLGSAHQGC X X O56137
370 752 FITQYSTGQVSVEIE X X O56137
371 753 MITDEEEIKATNPVA X X O56137
372 754 AADAAALEHDKAYDQ X X O56137
373 755 AVGPTTMASGGGAPM X X O56137
374 756 DSTWLGDRVITTSTR X X O56137
375 757 ATPAAVGPTTMASGG X X O56137
376 758 DNNEGADGVGNASGN X X O56137
377 759 EQSPQEPDSSSGIGK X X O56137
378 760 FNIQVKEVTTNDGVT X X O56137
379 761 PAAVGPTTMASGGGA X X O56137
380 762 SSYAHSQSLDRLMNP X X O56137
381 763 TAPGKKRPVEQSPQE X X O56137
382 764 FHSSYAHSQSLDRLM X X O56137
383 765 FNGLDKGEPVNAADA X X O56137
384 766 HSSYAHSQSLDRLMN X X O56137
385 767 TTSTRTWALPTYNNH X X O56137
386 768 VKEVTTNDGVTTIAN X X O56137
387 769 DGVGNSSGNWHCDSQ X X O56139
388 770 NSSGNWHCDSQWLGD X X O56139
389 771 AKKRILEPLGLVEEA X X O56139
390 772 PVPANPPTTFSPAKF X X O56139
391 773 NNSNFPWTAASKYHL X X O56139
392 774 PDSSSGVGKSGKQPA X X O56139
393 775 QSSNTAPTTRTVNDQ X X O56139
394 776 TVANNLQSSNTAPTT X X O56139
395 777 AELDNVMITDEEEIR X X O56139
396 778 EEKFFPMHGNLIFGK X X O56139
397 779 GNNFQFSYEFENVPF X X Q6JC40
398 780 NVEFAVNTEGVYSEP X X Q6JC40
399 781 MLRTGNNFQFSYEFE X X Q6JC40
400 782 RTGNNFQFSYEFENV X X Q6JC40
401 783 STVQVFTDSDYQLPY X X Q6JC40
402 784 DGSQAVGRSSFYCLE X X Q6JC40
403 785 EFAVNTEGVYSEPRP X X Q6JC40
404 786 EFAWPGASSWALNGR X X Q6JC40
405 787 DTESVPDPQPIGEPP X X Q6JC40
406 788 NNNSEFAWPGASSWA X X Q6JC40
407 789 NTPVPADPPTAFNKD X X Q6JC40
408 790 STTVTQNNNSEFAWP X X Q6JC40
409 791 EIQYTSNYYKSNNVE X X Q6JC40
410 792 ENVPFHSSYAHSQSL X X Q6JC40
411 793 ILIKNTPVPADPPTA X X Q6JC40
412 794 RVSTTVTQNNNSEFA X X Q6JC40
413 795 SDYQLPYVLGSAHEG X X Q6JC40
414 796 GNGLDKGEPVNAADA X X Q6JC40
415 797 KSNNVEFAVNTEGVY X X Q6JC40
416 798 LNSFITQYSTGQVSV X X Q6JC40
417 799 QQTLKFSVAGPSNMA X X Q6JC40
418 800 SSGNWHCDSQWLGDR X X Q6JC40
419 801 ADNNEGADGVGSSSG X X Q6JC40
420 802 ASGGGAPVADNNEGA X X Q6JC40
421 803 IGEPPAAPSGVGSLT X X Q6JC40
422 804 PLGLVEEAAKTAPGK X X Q6JC40
423 805 SAGIGKSGAQPAKKR X X Q6JC40
424 806 ENSKRWNPEIQYTSN X X Q6JC40
425 807 ELQKENSKRWNPEIQ X X Q6JC40
426 808 GNNFQFTYTFEDVPF X X Q8JQF8
427 809 EERFFPSNGILIFGK X X Q8JQF8
428 810 PVATEEYGIVADNLQ X X Q8JQF8
429 811 QFTYTFEDVPFHSSY X X Q8JQF8
430 812 NTPVPADPPTTFNQS X X Q8JQF8
431 813 EIKTTNPVATEEYGI X X Q8JQF8
432 814 GSSSGNWHCDSTWLG X X Q8JQF8
433 815 RTGNNFQFTYTFEDV X X Q8JQF8
434 816 TNPVATEEYGIVADN X X Q8JQF8
435 817 TSEEEIKTTNPVATE X X Q8JQF8
436 818 GPCYRQQRVSTTTGQ X X Q8JQF8
437 819 LPGPCYRQQRVSTTT X X Q8JQF8
438 820 TTGGTANTQTLGFSQ X X Q8JQF8
439 821 KQISNGTSGGATNDN X X Q8JQF8
440 822 KQNAARDNADYSDVM X X Q8JQF8
441 823 NAARDNADYSDVMLT X X Q8JQF8
442 824 SKLNSFITQYSTGQV X X Q8JQF8
443 825 VKEVTQNEGTKTIAN X X Q8JQF8
444 826 VNSQGALPGMVWQNR X X Q8JQF8
445 827 NNSNFAWTAGTKYHL X X Q8JQF8
446 828 QQQNTAPQIGTVNSQ X X Q8JQF8
447 829 YNNHLYKQISNGTSG X X Q8JQF8
448 830 YSDVMLTSEEEIKTT X X Q8JQF8
449 831 DNTYFGYSTPWGYFD X X Q8JQF8
450 832 TYFGYSTPWGYFDFN X X Q8JQF8
451 833 ESVPDPQPLGEPPAA X X Q8JQF8
452 834 STGIGKKGQQPARKR X X Q8JQF8
453 835 FGYSTPWGYFDFNRF X X Q9YIJ1
454 836 YFGYSTPWGYFDFNR X X Q9YIJ1
455 837 NAYFGYSTPWGYFDF X X Q9YIJ1
456 838 HPPDWLEEVGEGLRE X X Q9YIJ1
457 839 TENPTERSSFFCLEY X X Q9YIJ1
458 840 WLEEVGEGLREFLGL X X Q9YIJ1
459 841 YSTGQVTVEMEWELK X X Q9YIJ1
460 842 FVDFAPDSTGEYRTT X X Q9YIJ1
461 843 QEIVPGSVWMERDVY X X Q9YIJ1
462 844 TPWGYFDFNRFHSHW X X Q9YIJ1
463 845 ANAYFGYSTPWGYFD X X Q9YIJ1
464 846 DDDYQLPYVVGNGTE X X Q9YIJ1
465 847 DEVAREHDISYNEQL X X Q9YIJ1
466 848 ELKKENSKRWNPEIQ X X Q9YIJ1
467 849 GNASGDWHCDSTWMG X X Q9YIJ1
468 850 GYNYLGPGNGLDRGE X X Q9YIJ1
469 851 TSFSDVPVSSFITQY X X Q9YIJ1
470 852 ANNLTSTVQVFTDDD X X Q9YIJ1
471 853 DQYLYRFVSTNNTGG X X Q9YIJ1
472 854 EYRTTRPIGTRYLTR X X Q9YIJ1
473 855 IFNIQVKEVTVQDST X X Q9YIJ1
474 856 ENSKRWNPEIQYTNN X X Q9YIJ1
475 857 AGPPKPKPNQQHQDQ X X Q9YIJ1
476 858 PSTSSDAEAGPSGSQ X X Q9YIJ1
477 859 TGQVTVEMEWELKKE X X Q9YIJ1
478 860 VKIFNIQVKEVTVQD X X Q9YIJ1
479 861 DSTTTIANNLTSTVQ X X Q9YIJ1
480 862 ISYNEQLEAGDNPYL X X Q9YIJ1
481 863 LGLEAGPPKPKPNQQ X X Q9YIJ1
482 864 TAPATGTYNLQEIVP X X Q9YIJ1
483 865 TMSAGGGGPLGDNNQ X X Q9YIJ1
484 866 FSYQFEDVPFHSSYA X AAO88201.1
485 867 VLMFGKQGAGKDNVD X AAO88201.1
486 868 DFAVNTDGTYSEPRP X AAO88201.1
487 869 DGTYSEPRPIGTRYL X AAO88201.1
488 870 GAVNSQGALPGMVWQ X AAO88201.1
489 871 QMLRTGNNFEFSYQF X AAO88201.1
490 872 MFGKQGAGKDNVDYS X AAO88201.1
491 873 APIVGAVNSQGALPG X AAO88201.1
492 874 IVGAVNSQGALPGMV X AAO88201.1
493 875 LQQQNAAPIVGAVNS X AAO88201.1
494 876 NTDGTYSEPRPIGTR X AAO88201.1
495 877 STNVDFAVNTDGTYS X AAO88201.1
496 878 KDDEERFFPSSGVLM X AAO88201.1
497 879 THKDDEERFFPSSGV X AAO88201.1
498 880 VNPGVAMATHKDDEE X AAO88201.1
499 881 KNTPVPADPPTTFSQ X AAO88201.1
500 882 MATHKDDEERFFPSS X AAO88201.1
501 883 NPVATEQYGVVADNL X AAO88201.1
502 884 PGVAMATHKDDEERF X AAO88201.1
503 885 RDSLVNPGVAMATHK X AAO88201.1
504 886 TTNPVATEQYGVVAD X AAO88201.1
505 887 VPADPPTTFSQAKLA X AAO88201.1
506 888 YFPSQMLRTGNNFEF X AAO88201.1
507 889 PSQMLRTGNNFEFSY X AAO88201.1
508 890 VLMFGKQGAGDNVDY X AAV-Rh74 c
509 891 AGDNPYLRYHADAEF X AAV-Rh74 c
510 892 AGDNVDYSSVMLTSE X AAV-Rh74 c
511 893 FPSQMLRTGNFEFSY X AAV-Rh74 c
512 894 IVGAVSQGALPGMVW X AAV-Rh74 c
513 895 NWGFRPKRLNFLFNI X AAV-Rh74 c
514 896 PVATEQYGWADNLQQ X AAV-Rh74 c
515 897 EQYGWADNLQQQNAA X AAV-Rh74 c
516 898 GPFNGLDKGEPVAAD X AAV-Rh74 c
517 899 LVNPGVAMATHDDEE X AAV-Rh74 c
518 900 LYYLSRTQSTGGTAG X AAV-Rh74 c
519 901 NNMSAQAKNWLPGPC X AAV-Rh74 c
520 902 YLGPFNGLDKGEPVA X AAV-Rh74 c
521 903 ATEQYGWADNLQQQN X AAV-Rh74 c
522 904 ATHDDEERFFPSSGV X AAV-Rh74 c
523 905 CLEYFPSQMLRTGNF X AAV-Rh74 c
524 906 DKGEPVAADAAALEH X AAV-Rh74 c
525 907 FLFNIQVKEVTQNEG X AAV-Rh74 c
526 908 GEPVAADAAALEHDK X AAV-Rh74 c
527 909 LRYHADAEFQERLQE X AAV-Rh74 c
528 910 NPGVAMATHDDEERF X AAV-Rh74 c
529 911 PVAADAAALEHDKAY X AAV-Rh74 c
530 912 QTGDSESVPDPQPIG X AAV-Rh74 c
531 913 YHADAEFQERLQEDT X AAV-Rh74 c
532 914 DPPTTFNQAKLASFI X AAV-Rh74 c
533 915 GFRPKRLNFLFNIQV X AAV-Rh74 c
534 916 GPNNMSAQAKNWLPG X AAV-Rh74 c
535 917 GVAMATHDDEERFFP X AAV-Rh74 c
536 918 KTTNPVATEQYGWAD X AAV-Rh74 c
537 919 LEPLGLVESPVKTAP X AAV-Rh74 c
538 920 LNFLFNIQVKEVTQN X AAV-Rh74 c
539 921 NNNWGFRPKRLNFLF X AAV-Rh74 c
540 922 PSSGVLMFGKQGAGD X AAV-Rh74 c
541 923 PYLRYHADAEFQERL X AAV-Rh74 c
542 924 RVLEPLGLVESPVKT X AAV-Rh74 c
543 925 SPVKTAPGKKRPVEP X AAV-Rh74 c
544 926 SQAGPNNMSAQAKNW X AAV-Rh74 c
545 927 STGGTAGTQQLLFSQ X AAV-Rh74 c
546 928 TGGTAGTQQLLFSQA X AAV-Rh74 c
547 929 TNPVATEQYGWADNL X AAV-Rh74 c
548 930 VESPVKTAPGKKRPV X AAV-Rh74 c
549 931 VKTAPGKKRPVEPSP X AAV-Rh74 c
550 932 VSQGALPGMVWQNRD X AAV-Rh74 c
551 933 YLSRTQSTGGTAGTQ X AAV-Rh74 c
552 934 YYLSRTQSTGGTAGT X AAV-Rh74 c
553 935 NMSAQAKNWLPGPCY X AAV-Rh74 c
554 936 GEPPAGPSGLGSGTM X AAV-Rh74 c
555 937 SEEEIKTTNPVATEQ X AAV-Rh74 c
556 938 NVDYSSVMLTSEEEI X AAV-Rh74 c
557 939 FAVNTEGTYSEPRPI X AAV-Rh74 c
558 940 SNYYKSTNVDFAVNT X AAV-Rh74 c
559 941 TEGTYSEPRPIGTRY X AAV-Rh74 c
560 942 ERFFPSSGVLMFGKQ X AAV-Rh74 c
561 943 HLYKQISNGTSGGST X AAV-Rh74 c
562 944 IGKKGQQPAKKRLNF X AAV-Rh74 c
563 945 MSAQAKNWLPGPCYR X AAV-Rh74 c
564 946 PDPQPIGEPPAGPSG X AAV-Rh74 c
565 947 QYLYYLSRTQSTGGT X AAV-Rh74 c
566 948 SVMLTSEEEIKTTNP X AAV-Rh74 c
567 949 TLSQNNNSNFAWTGA X AAV-Rh74 c
568 950 YYKSTNVDFAVNTEG X AAV-Rh74 c
569 951 AGPSGLGSGTMAAGG X AAV-Rh74 c
570 952 AQAKNWLPGPCYRQQ X AAV-Rh74 c
571 953 CYRQQRVSTTLSQNN X AAV-Rh74 c
572 954 DQYLYYLSRTQSTGG X AAV-Rh74 c
573 955 DYSSVMLTSEEEIKT X AAV-Rh74 c
574 956 GLGSGTMAAGGGAPM X AAV-Rh74 c
575 957 GRDSLVNPGVAMATH X AAV-Rh74 c
576 958 IDQYLYYLSRTQSTG X AAV-Rh74 c
577 959 IQYTSNYYKSTNVDF X AAV-Rh74 c
578 960 KKGQQPAKKRLNFGQ X AAV-Rh74 c
579 961 KLASFITQYSTGQVS X AAV-Rh74 c
580 962 KYHLNGRDSLVNPGV X AAV-Rh74 c
581 963 LNGRDSLVNPGVAMA X AAV-Rh74 c
582 964 NPEIQYTSNYYKSTN X AAV-Rh74 c
583 965 PEIQYTSNYYKSTNV X AAV-Rh74 c
584 966 PLIDQYLYYLSRTQS X AAV-Rh74 c
585 967 QAKLASFITQYSTGQ X AAV-Rh74 c
586 968 QISNGTSGGSTNDNT X AAV-Rh74 c
587 969 QYTSNYYKSTNVDFA X AAV-Rh74 c
588 970 RQQRVSTTLSQNNNS X AAV-Rh74 c
589 971 SNGTSGGSTNDNTYF X AAV-Rh74 c
590 972 SQNNNSNFAWTGATK X AAV-Rh74 c
591 973 TGIGKKGQQPAKKRL X AAV-Rh74 c
592 974 TSNYYKSTNVDFAVN X AAV-Rh74 c
593 975 TTLSQNNNSNFAWTG X AAV-Rh74 c
594 976 YKQISNGTSGGSTND X AAV-Rh74 c
595 977 YRQQRVSTTLSQNNN X AAV-Rh74 c
596 978 NNSNFAWTGATKYHL X AAV-Rh74 c
597 979 GSTNDNTYFGYSTPW X AAV-Rh74 c
598 980 DNGRGLVLPGYKYLG X AAV-Rh74 c
599 981 NNNSNFAWTGATKYH X AAV-Rh74 c
600 982 PKPKANQQKQDNGRG X AAV-Rh74 c
601 983 QQKQDNGRGLVLPGY X AAV-Rh74 c
602 984 SNFAWTGATKYHLNG X AAV-Rh74 c
603 985 LAVPFKAQAQTGWVQ X ALU85156.1
604 986 QTLAVPFKAQAQTGW X ALU85156.1
605 987 SRTINGSGQNQQTLK X ALU85156.1
606 988 GETTRPARQAATADV X AOD99651.1
607 989 ALGETTRPARQAATA X AOD99651.1
608 990 GSVSTNLQRGNLALG X AOD99651.1
609 991 QYGSVSTNLQRGNLA X AOD99651.1
610 992 RPARQAATADVNTQG X AOD99651.1
611 993 TTRPARQAATADVNT X AOD99651.1
612 994 DNLQQQNLALGETTR X AOD99652.1
613 995 GETTRPATAPQIGTV X AOD99652.1
614 996 GIVADNLQQQNLALG X AOD99652.1
615 997 VADNLQQQNLALGET X AOD99652.1
616 998 RPATQAQTGLVHNQG X AOD99654.1
617 999 VADNLQQLALGETTR X AOD99655.1
618 1000 GETTRPAANTGPIVG X AOD99655.1
619 1001 RPAANTGPIVGNVNS X AOD99655.1
620 1002 TEQYGVVADNLQQLA X AOD99655.1
621 1003 TTRPAANTGPIVGNV X AOD99655.1
622 1004 VSSNLQAANLALGET X AOD99656.1
623 1005 GIVSSNLQAANLALG X AOD99656.1
624 1006 RPATAAQTQVVNNQG X AOD99656.1
625 1007 GETTRPASTTAPATG X AOD99659.1
626 1008 SLALGETTRPASTTA X AOD99659.1
627 1009 TTRPASTTAPATGTY X AOD99659.1
628 1010 VGGQMATNNQSLALG X AOD99659.1
629 1011 EAAKTAPGKKRPVEH X pdb3J1QA
630 1012 APSGVGSLTMAAGGG X pdb3J1QA
631 1013 GGTTNTQTLGFSQGG X pdb3J1QA
632 1014 VGSLTMAAGGGAPMA X pdb3J1QA
633 1015 GADGVGNSSGNWHCD X P03135
634 1016 ADAAALEHDKAYDRQ X P03135
635 1017 CLPPFPADVFMVPQY X P03135
636 1018 DKAYDRQLDSGDNPY X P03135
637 1019 EGADGVGNSSGNWHC X P03135
638 1020 NNEGADGVGNSSGNW X P03135
639 1021 YLPDWLEDTLSEGIR X P03135
640 1022 ALEHDKAYDRQLDSG X P03135
641 1023 DVNTQGVLPGMVWQD X P03135
642 1024 GPAMASHKDDEEKFF X P03135
643 1025 LPPFPADVFMVPQYG X P03135
644 1026 QRVSKTSADNNNSEY X P03135
645 1027 AADGYLPDWLEDTLS X P03135
646 1028 SSGNWHCDSTWMGDR X P03135
647 1029 FPADVFMVPQYGYLT X P03135
648 1030 GPFNGLDKGEPVNEA X P03135
649 1031 GVGNSSGNWHCDSTW X P03135
650 1032 NNLTSTVQVFTDSEY X P03135
651 1033 NPGPAMASHKDDEEK X P03135
652 1034 TAPGKKRPVEHSPVE X P03135
653 1035 VLPGMVWQDRDVYLQ X P03135
654 1036 VSKTSADNNNSEYSW X P03135
655 1037 AMASHKDDEEKFFPQ X P03135
656 1038 ATEQYGSVSTNLQRG X P03135
657 1039 DNNNSEYSWTGATKY X P03135
658 1040 DSVPDPQPLGQPPAA X P03135
659 1041 EKTNVDIEKVMITDE X P03135
660 1042 EVTQNDGTTTIANNL X P03135
661 1043 GNWHCDSTWMGDRVI X P03135
662 1044 KKRPVEHSPVEPDSS X P03135
663 1045 KPGPPPPKPAERHKD X P03135
664 1046 KTSADNNNSEYSWTG X P03135
665 1047 NEGADGVGNSSGNWH X P03135
666 1048 NLTSTVQVFTDSEYQ X P03135
667 1049 NTQGVLPGMVWQDRD X P03135
668 1050 RLNFGQTGDADSVPD X P03135
669 1051 SRLQFSQAGASDIRD X P03135
670 1052 TVQVFTDSEYQLPYV X P03135
671 1053 VQVFTDSEYQLPYVL X P03135
672 1054 WLEDTLSEGIRQWWK X P03135
673 1055 YNKSVNVDFTVDTNG X P03135
674 1056 ADGVGNSSGNWHCDS X P03135
675 1057 ADVFMVPQYGYLTLN X P03135
676 1058 ANNLTSTVQVFTDSE X P03135
677 1059 APSGLGTNTMATGSG X P03135
678 1060 FKLFNIQVKEVTQND X P03135
679 1061 GCLPPFPADVFMVPQ X P03135
680 1062 GIRQWWKLKPGPPPP X P03135
681 1063 GLDKGEPVNEADAAA X P03135
682 1064 KKRVLEPLGLVEEPV X P03135
683 1065 KQGSEKTNVDIEKVM X P03135
684 1066 KVMITDEEEIRTTNP X P03135
685 1067 LTSTVQVFTDSEYQL X P03135
686 1068 MADNNEGADGVGNSS X P03135
687 1069 PARKRLNFGQTGDAD X P03135
688 1070 PPPKPAERHKDDSRG X P03135
689 1071 SADNNNSEYSWTGAT X P03135
690 1072 TLSEGIRQWWKLKPG X P03135
691 1073 TNGVYSEPRPIGTRY X P03135
692 1074 TNTPSGTTTQSRLQF X P03135
693 1075 WMGDRVITTSTRTWA X P03135
694 1076 AATADVNTQGVLPGM X P03135
695 1077 AYDRQLDSGDNPYLK X P03135
696 1078 CDSTWMGDRVITTST X P03135
697 1079 DDSRGLVLPGYKYLG X P03135
698 1080 DPQPLGQPPAAPSGL X P03135
699 1081 EIRTTNPVATEQYGS X P03135
700 1082 FGKQGSEKTNVDIEK X P03135
701 1083 FTVDTNGVYSEPRPI X P03135
702 1084 GASDIRDQSRNWLPG X P03135
703 1085 GLVEEPVKTAPGKKR X P03135
704 1086 GNRQAATADVNTQGV X P03135
705 1087 GQTGDADSVPDPQPL X P03135
706 1088 GRDSLVNPGPAMASH X P03135
707 1089 GSGAPMADNNEGADG X P03135
708 1090 GVLIFGKQGSEKTNV X P03135
709 1091 HSPVEPDSSSGTGKA X P03135
710 1092 IQVKEVTQNDGTTTI X P03135
711 1093 IRDQSRNWLPGPCYR X P03135
712 1094 KEVTQNDGTTTIANN X P03135
713 1095 KGEPVNEADAAALEH X P03135
714 1096 KLFNIQVKEVTQNDG X P03135
715 1097 KLKPGPPPPKPAERH X P03135
716 1098 LEPLGLVEEPVKTAP X P03135
717 1099 LIFGKQGSEKTNVDI X P03135
718 1100 LNFKLFNIQVKEVTQ X P03135
719 1101 NFGQTGDADSVPDPQ X P03135
720 1102 NLQRGNRQAATADVN X P03135
721 1103 NTPVPANPSTTFSAA X P03135
722 1104 PAAPSGLGTNTMATG X P03135
723 1105 PAERHKDDSRGLVLP X P03135
724 1106 PGKKRPVEHSPVEPD X P03135
725 1107 PLIDQYLYYLSRTNT X P03135
726 1108 PMADNNEGADGVGNS X P03135
727 1109 PQILIKNTPVPANPS X P03135
728 1110 QAGASDIRDQSRNWL X P03135
729 1111 QISSQSGASNDNHYF X P03135
730 1112 QRGNRQAATADVNTQ X P03135
731 1113 QSGVLIFGKQGSEKT X P03135
732 1114 RKRLNFGQTGDADSV X P03135
733 1115 RQQRVSKTSADNNNS X P03135
734 1116 RTTNPVATEQYGSVS X P03135
735 1117 RVLEPLGLVEEPVKT X P03135
736 1118 SAAKFASFITQYSTG X P03135
737 1119 SEYSWTGATKYHLNG X P03135
738 1120 SGTTTQSRLQFSQAG X P03135
739 1121 SRGLVLPGYKYLGPF X P03135
740 1122 SSGTGKAGQQPARKR X P03135
741 1123 TFSAAKFASFITQYS X P03135
742 1124 TGDADSVPDPQPLGQ X P03135
743 1125 TNPVATEQYGSVSTN X P03135
744 1126 VFMVPQYGYLTLNNG X P03135
745 1127 VNEADAAALEHDKAY X P03135
746 1128 VPDPQPLGQPPAAPS X P03135
747 1129 WWKLKPGPPPPKPAE X P03135
748 1130 GATKYHLNGRDSLVN X P03135
749 1131 NFTFSYTFEDVPFHS X O56137
750 1132 RTGNNFTFSYTFEDV X O56137
751 1133 EPFGLVEEGAKTAPG X O56137
752 1134 PVATERFGTVAVNLQ X O56137
753 1135 DVHVMGALPGMVWQD X O56137
754 1136 ERFGTVAVNLQSSST X O56137
755 1137 MGGFGLKHPPPQILI X O56137
756 1138 AMASHKDDKDKFFPM X O56137
757 1139 DVPFHSSYAHSQSLD X O56137
758 1140 FGTVAVNLQSSSTDP X O56137
759 1141 FHPSPLMGGFGLKHP X O56137
760 1142 GLKHPPPQILIKNTP X O56137
761 1143 GRAVFQAKKRVLEPF X O56137
762 1144 HPSPLMGGFGLKHPP X O56137
763 1145 KDKFFPMSGVMIFGK X O56137
764 1146 KHPPPQILIKNTPVP X O56137
765 1147 LMGGFGLKHPPPQIL X O56137
766 1148 NLQSSSTDPATGDVH X O56137
767 1149 PSPLMGGFGLKHPPP X O56137
768 1150 TDPATGDVHVMGALP X O56137
769 1151 LPPFPADVFMIPQYG X O56137
770 1152 FDFNRFHCHFSPRDW X O56137
771 1153 PPFPADVFMIPQYGY X O56137
772 1154 HYFGYSTPWGYFDFN X O56137
773 1155 CLPPFPADVFMIPQY X O56137
774 1156 NNLTSTVQVFSDSEY X O56137
775 1157 SQAVGRSSFYCLEYF X O56137
776 1158 DNLSEGIREWWDLKP X O56137
777 1159 LDRLMNPLIDQYLYY X O56137
778 1160 PFPADVFMIPQYGYL X O56137
779 1161 QAVGRSSFYCLEYFP X O56137
780 1162 QGCLPPFPADVFMIP X O56137
781 1163 GADGVGNASGNWHCD X O56137
782 1164 NLSEGIREWWDLKPG X O56137
783 1165 RSSFYCLEYFPSQML X O56137
784 1166 TDGHFHPSPLMGGFG X O56137
785 1167 VDFTVDNNGLYTEPR X O56137
786 1168 AADGYLPDWLEDNLS X O56137
787 1169 ANVDFTVDNNGLYTE X O56137
788 1170 FPADVFMIPQYGYLT X O56137
789 1171 LPDWLEDNLSEGIRE X O56137
790 1172 MAADGYLPDWLEDNL X O56137
791 1173 SNDNHYFGYSTPWGY X O56137
792 1174 VLPGYKYLGPFNGLD X O56137
793 1175 WGYFDFNRFHCHFSP X O56137
794 1176 EVTTNDGVTTIANNL X O56137
795 1177 GNWHCDSTWLGDRVI X O56137
796 1178 NDNHYFGYSTPWGYF X O56137
797 1179 PAEFSATKFASFITQ X O56137
798 1180 PYLRYNHADAEFQER X O56137
799 1181 YNHADAEFQERLQED X O56137
800 1182 DFNRFHCHFSPRDWQ X O56137
801 1183 DNPYLRYNHADAEFQ X O56137
802 1184 DRLMNPLIDQYLYYL X O56137
803 1185 GRSSFYCLEYFPSQM X O56137
804 1186 HQGCLPPFPADVFMI X O56137
805 1187 MGALPGMVWQDRDVY X O56137
806 1188 PHTDGHFHPSPLMGG X O56137
807 1189 QTGDSESVPDPQPLG X O56137
808 1190 SVEIEWELQKENSKR X O56137
809 1191 VGRSSFYCLEYFPSQ X O56137
810 1192 VQVFSDSEYQLPYVL X O56137
811 1193 YKYLGPFNGLDKGEP X O56137
812 1194 DGVGNASGNWHCDST X O56137
813 1195 GDNPYLRYNHADAEF X O56137
814 1196 GGGAPMADNNEGADG X O56137
815 1197 GQVSVEIEWELQKEN X O56137
816 1198 KGEPVNAADAAALEH X O56137
817 1199 LGPFNGLDKGEPVNA X O56137
818 1200 LTSTVQVFSDSEYQL X O56137
819 1201 NASGNWHCDSTWLGD X O56137
820 1202 NNGLYTEPRPIGTRY X O56137
821 1203 PDPQPLGEPPATPAA X O56137
822 1204 QSLDRLMNPLIDQYL X O56137
823 1205 SQSLDRLMNPLIDQY X O56137
824 1206 VEEGAKTAPGKKRPV X O56137
825 1207 ADAEFQERLQEDTSF X O56137
826 1208 ADVFMIPQYGYLTLN X O56137
827 1209 GMVWQDRDVYLQGPI X O56137
828 1210 IDQYLYYLNRTQNQS X O56137
829 1211 KLFNIQVKEVTTNDG X O56137
830 1212 KRPVEQSPQEPDSSS X O56137
831 1213 KTKTDNNNSNFTWTG X O56137
832 1214 KYLGPFNGLDKGEPV X O56137
833 1215 NAADAAALEHDKAYD X O56137
834 1216 NTPVPANPPAEFSAT X O56137
835 1217 PVNAADAAALEHDKA X O56137
836 1218 PWGYFDFNRFHCHFS X O56137
837 1219 QEDTSFGGNLGRAVF X O56137
838 1220 SAHQGCLPPFPADVF X O56137
839 1221 SGGGAPMADNNEGAD X O56137
840 1222 TGQVSVEIEWELQKE X O56137
841 1223 VFSDSEYQLPYVLGS X O56137
842 1224 VSKTKTDNNNSNFTW X O56137
843 1225 VWQDRDVYLQGPIWA X O56137
844 1226 YLGPFNGLDKGEPVN X O56137
845 1227 AALEHDKAYDQQLKA X O56137
846 1228 ADAAALEHDKAYDQQ X O56137
847 1229 AEFQERLQEDTSFGG X O56137
848 1230 AVGRSSFYCLEYFPS X O56137
849 1231 DDGRGLVLPGYKYLG X O56137
850 1232 DNNNSNFTWTGASKY X O56137
851 1233 ESIINPGTAMASHKD X O56137
852 1234 FGQTGDSESVPDPQP X O56137
853 1235 FNRFHCHFSPRDWQR X O56137
854 1236 FQERLQEDTSFGGNL X O56137
855 1237 FRPKRLNFKLFNIQV X O56137
856 1238 FSPRDWQRLINNNWG X O56137
857 1239 FTVDNNGLYTEPRPI X O56137
858 1240 FTWTGASKYNLNGRE X O56137
859 1241 GAPKPKANQQKQDDG X O56137
860 1242 GAPMADNNEGADGVG X O56137
861 1243 GASNTALDNVMITDE X O56137
862 1244 GHFHPSPLMGGFGLK X O56137
863 1245 GLDKGEPVNAADAAA X O56137
864 1246 GRGLVLPGYKYLGPF X O56137
865 1247 GYFDFNRFHCHFSPR X O56137
866 1248 GYKYLGPFNGLDKGE X O56137
867 1249 IEWELQKENSKRWNP X O56137
868 1250 IREWWDLKPGAPKPK X O56137
869 1251 KIPHTDGHFHPSPLM X O56137
870 1252 KKRPVEQSPQEPDSS X O56137
871 1253 KQDDGRGLVLPGYKY X O56137
872 1254 KTDNNNSNFTWTGAS X O56137
873 1255 LDKGEPVNAADAAAL X O56137
874 1256 LEHDKAYDQQLKAGD X O56137
875 1257 LEYFPSQMLRTGNNF X O56137
876 1258 LKPGAPKPKANQQKQ X O56137
877 1259 MASGGGAPMADNNEG X O56137
878 1260 NEGADGVGNASGNWH X O56137
879 1261 NGLDKGEPVNAADAA X O56137
880 1262 NGSQAVGRSSFYCLE X O56137
881 1263 NNSNFTWTGASKYNL X O56137
882 1264 NNWGFRPKRLNFKLF X O56137
883 1265 NPYLRYNHADAEFQE X O56137
884 1266 NVMITDEEEIKATNP X O56137
885 1267 NWGFRPKRLNFKLFN X O56137
886 1268 PADVFMIPQYGYLTL X O56137
887 1269 PDSSSGIGKTGQQPA X O56137
888 1270 PFNGLDKGEPVNAAD X O56137
889 1271 PGKKRPVEQSPQEPD X O56137
890 1272 PGYKYLGPFNGLDKG X O56137
891 1273 PIWAKIPHTDGHFHP X O56137
892 1274 PQILIKNTPVPANPP X O56137
893 1275 QEPDSSSGIGKTGQQ X O56137
894 1276 QISSASTGASNDNHY X O56137
895 1277 QQKQDDGRGLVLPGY X O56137
896 1278 REWWDLKPGAPKPKA X O56137
897 1279 RLMNPLIDQYLYYLN X O56137
898 1280 RLNFKLFNIQVKEVT X O56137
899 1281 SEYQLPYVLGSAHQG X O56137
900 1282 SGNWHCDSTWLGDRV X O56137
901 1283 SPRDWQRLINNNWGF X O56137
902 1284 STGQVSVEIEWELQK X O56137
903 1285 STPWGYFDFNRFHCH X O56137
904 1286 TALDNVMITDEEEIK X O56137
905 1287 TGDSESVPDPQPLGE X O56137
906 1288 VGNASGNWHCDSTWL X O56137
907 1289 WAKIPHTDGHFHPSP X O56137
908 1290 WELQKENSKRWNPEV X O56137
909 1291 YTEPRPIGTRYLTRP X O56137
910 1292 AGMSVQPKNWLPGPC X O56137
911 1293 AHSQSLDRLMNPLID X O56137
912 1294 APGKKRPVEQSPQEP X O56137
913 1295 APKPKANQQKQDDGR X O56137
914 1296 CDSTWLGDRVITTST X O56137
915 1297 CLEYFPSQMLRTGNN X O56137
916 1298 DGRGLVLPGYKYLGP X O56137
917 1299 DKAYDQQLKAGDNPY X O56137
918 1300 DQQLKAGDNPYLRYN X O56137
919 1301 DRDVYLQGPIWAKIP X O56137
920 1302 FPSQMLRTGNNFTFS X O56137
921 1303 GASKYNLNGRESIIN X O56137
922 1304 GDRVITTSTRTWALP X O56137
923 1305 GFRPKRLNFKLFNIQ X O56137
924 1306 GIREWWDLKPGAPKP X O56137
925 1307 GLVEEGAKTAPGKKR X O56137
926 1308 GLVLPGYKYLGPFNG X O56137
927 1309 GLYTEPRPIGTRYLT X O56137
928 1310 GNLGRAVFQAKKRVL X O56137
929 1311 GQTGDSESVPDPQPL X O56137
930 1312 GRESIINPGTAMASH X O56137
931 1313 HADAEFQERLQEDTS X O56137
932 1314 HFSPRDWQRLINNNW X O56137
933 1315 IKNTPVPANPPAEFS X O56137
934 1316 KANQQKQDDGRGLVL X O56137
935 1317 KPGAPKPKANQQKQD X O56137
936 1318 KPKANQQKQDDGRGL X O56137
937 1319 KRLNFGQTGDSESVP X O56137
938 1320 LDNVMITDEEEIKAT X O56137
939 1321 LGRAVFQAKKRVLEP X O56137
940 1322 LNFGQTGDSESVPDP X O56137
941 1323 LNGRESIINPGTAMA X O56137
942 1324 LNNGSQAVGRSSFYC X O56137
943 1325 LPGYKYLGPFNGLDK X O56137
944 1326 LPTYNNHLYKQISSA X O56137
945 1327 LRYNHADAEFQERLQ X O56137
946 1328 LVEEGAKTAPGKKRP X O56137
947 1329 MLRTGNNFTFSYTFE X O56137
948 1330 NFKLFNIQVKEVTTN X O56137
949 1331 NHADAEFQERLQEDT X O56137
950 1332 NLGRAVFQAKKRVLE X O56137
951 1333 PFHSSYAHSQSLDRL X O56137
952 1334 PKRLNFKLFNIQVKE X O56137
953 1335 PPATPAAVGPTTMAS X O56137
954 1336 PPPQILIKNTPVPAN X O56137
955 1337 PQYGYLTLNNGSQAV X O56137
956 1338 PRDWQRLINNNWGFR X O56137
957 1339 PYVLGSAHQGCLPPF X O56137
958 1340 QDDGRGLVLPGYKYL X O56137
959 1341 QDRDVYLQGPIWAKI X O56137
960 1342 QERLQEDTSFGGNLG X O56137
961 1343 QRLINNNWGFRPKRL X O56137
962 1344 QYLYYLNRTQNQSGS X O56137
963 1345 RDVYLQGPIWAKIPH X O56137
964 1346 RDWQRLINNNWGFRP X O56137
965 1347 RGSPAGMSVQPKNWL X O56137
966 1348 RLNFGQTGDSESVPD X O56137
967 1349 RLQEDTSFGGNLGRA X O56137
968 1350 RQQRVSKTKTDNNNS X O56137
969 1351 SEGIREWWDLKPGAP X O56137
970 1352 SKYNLNGRESIINPG X O56137
971 1353 SNFTWTGASKYNLNG X O56137
972 1354 SSFYCLEYFPSQMLR X O56137
973 1355 STRTWALPTYNNHLY X O56137
974 1356 TNPVATERFGTVAVN X O56137
975 1357 TSTRTWALPTYNNHL X O56137
976 1358 TTMASGGGAPMADNN X O56137
977 1359 TWLGDRVITTSTRTW X O56137
978 1360 TYNNHLYKQISSAST X O56137
979 1361 VDNNGLYTEPRPIGT X O56137
980 1362 VFMIPQYGYLTLNNG X O56137
981 1363 VNAADAAALEHDKAY X O56137
982 1364 VPFHSSYAHSQSLDR X O56137
983 1365 VQYTSNYAKSANVDF X O56137
984 1366 WGFRPKRLNFKLFNI X O56137
985 1367 WLGDRVITTSTRTWA X O56137
986 1368 WQDRDVYLQGPIWAK X O56137
987 1369 WQRLINNNWGFRPKR X O56137
988 1370 YAKSANVDFTVDNNG X O56137
989 1371 YGYLTLNNGSQAVGR X O56137
990 1372 YLNRTQNQSGSAQNK X O56137
991 1373 YLRYNHADAEFQERL X O56137
992 1374 YNLNGRESIINPGTA X O56137
993 1375 FQFSYTFEDVPFHSS X O56139
994 1376 QGALPGMVWQDRDVY X O56139
995 1377 NDQGALPGMVWQDRD X O56139
996 1378 EIRTTNPVATEQYGT X O56139
997 1379 EQYGTVANNLQSSNT X O56139
998 1380 PGNGLDKGEPVNEAD X O56139
999 1381 GEPPAAPTSLGSNTM X O56139
1000 1382 GSNTMASGGGAPMAD X O56139
1001 1383 NTMASGGGAPMADNN X O56139
1002 1384 PTTRTVNDQGALPGM X O56139
1003 1385 LGPGNGLDKGEPVNE X O56139
1004 1386 PDPQPLGEPPAAPTS X O56139
1005 1387 PVATEQYGTVANNLQ X O56139
1006 1388 QSMSLQARNWLPGPC X O56139
1007 1389 SGVGKSGKQPARKRL X O56139
1008 1390 TFSPAKFASFITQYS X O56139
1009 1391 TVNDQGALPGMVWQD X O56139
1010 1392 VGNSSGNWHCDSQWL X O56139
1011 1393 EWWALKPGVPQPKAN X O56139
1012 1394 FPWTAASKYHLNGRD X O56139
1013 1395 LINNNWGFRPKKLSF X O56139
1014 1396 MGGFGLKHPPPQIMI X O56139
1015 1397 NPPTTFSPAKFASFI X O56139
1016 1398 NWGFRPKKLSFKLFN X O56139
1017 1399 TNPVATEQYGTVANN X O56139
1018 1400 AAKTAPGKKRPVDQS X O56139
1019 1401 AAPTSLGSNTMASGG X O56139
1020 1402 AASKYHLNGRDSLVN X O56139
1021 1403 ANNLQSSNTAPTTRT X O56139
1022 1404 DQSPQEPDSSSGVGK X O56139
1023 1405 EGIREWWALKPGVPQ X O56139
1024 1406 GKQPARKRLNFGQTG X O56139
1025 1407 GPQSMSLQARNWLPG X O56139
1026 1408 GRAVFQAKKRILEPL X O56139
1027 1409 IKNTPVPANPPTTFS X O56139
1028 1410 IREWWALKPGVPQPK X O56139
1029 1411 KRILEPLGLVEEAAK X O56139
1030 1412 LKPGVPQPKANQQHQ X O56139
1031 1413 NLGRAVFQAKKRILE X O56139
1032 1414 PANPPTTFSPAKFAS X O56139
1033 1415 PQIMIKNTPVPANPP X O56139
1034 1416 QEPDSSSGVGKSGKQ X O56139
1035 1417 SKYHLNGRDSLVNPG X O56139
1036 1418 SLGSNTMASGGGAPM X O56139
1037 1419 SNTAPTTRTVNDQGA X O56139
1038 1420 TAPTTRTVNDQGALP X O56139
1039 1421 HKDDEEKFFPMHGNL X O56139
1040 1422 ASHKDDEEKFFPMHG X O56139
1041 1423 KFFPMHGNLIFGKEG X O56139
1042 1424 NVMITDEEEIRTTNP X O56139
1043 1425 AMASHKDDEEKFFPM X O56139
1044 1426 LDNVMITDEEEIRTT X O56139
1045 1427 FGKEGTTASNAELDN X O56139
1046 1428 KTANDNNNSNFPWTA X O56139
1047 1429 RQQRLSKTANDNNNS X O56139
1048 1430 DNNNSNFPWTAASKY X O56139
1049 1431 FPMHGNLIFGKEGTT X O56139
1050 1432 GNLIFGKEGTTASNA X O56139
1051 1433 KEGTTASNAELDNVM X O56139
1052 1434 LSKTANDNNNSNFPW X O56139
1053 1435 QGTTSGTTNQSRLLF X O56139
1054 1436 TASNAELDNVMITDE X O56139
1055 1437 YLYYLNRTQGTTSGT X O56139
1056 1438 YYLNRTQGTTSGTTN X O56139
1057 1439 QRLINNNWGFRPKKL X O56139
1058 1440 DGNFHPSPLMGGFGM X Q6JC40
1059 1441 GEDRFFPLSGSLIFG X Q6JC40
1060 1442 LEDNLSEGIREWWAL X Q6JC40
1061 1443 NDNAYFGYSTPWGYF X Q6JC40
1062 1444 NFQFSYEFENVPFHS X Q6JC40
1063 1445 NNLTSTVQVFTDSDY X Q6JC40
1064 1446 QGILPGMVWQDRDVY X Q6JC40
1065 1447 EGVYSEPRPIGTRYL X Q6JC40
1066 1448 GILPGMVWQDRDVYL X Q6JC40
1067 1449 NSEFAWPGASSWALN X Q6JC40
1068 1450 PYLKYNHADAEFQER X Q6JC40
1069 1451 KEGEDRFFPLSGSLI X Q6JC40
1070 1452 PGPAMASHKEGEDRF X Q6JC40
1071 1453 QAKKRLLEPLGLVEE X Q6JC40
1072 1454 QNQGILPGMVWQDRD X Q6JC40
1073 1455 EGADGVGSSSGNWHC X Q6JC40
1074 1456 HEGCLPPFPADVFMI X Q6JC40
1075 1457 LVEEAAKTAPGKKRP X Q6JC40
1076 1458 NQGILPGMVWQDRDV X Q6JC40
1077 1459 EVTDNNGVKTIANNL X Q6JC40
1078 1460 GADGVGSSSGNWHCD X Q6JC40
1079 1461 LTSTVQVFTDSDYQL X Q6JC40
1080 1462 NEGADGVGSSSGNWH X Q6JC40
1081 1463 NPVATESYGQVATNH X Q6JC40
1082 1464 NVDADKVMITNEEEI X Q6JC40
1083 1465 PVADNNEGADGVGSS X Q6JC40
1084 1466 SAHEGCLPPFPADVF X Q6JC40
1085 1467 TGDTESVPDPQPIGE X Q6JC40
1086 1468 TMASGGGAPVADNNE X Q6JC40
1087 1469 VEQSPQEPDSSAGIG X Q6JC40
1088 1470 VQVFTDSDYQLPYVL X Q6JC40
1089 1471 EPLGLVEEAAKTAPG X Q6JC40
1090 1472 EPPAAPSGVGSLTMA X Q6JC40
1091 1473 FNKDKLNSFITQYST X Q6JC40
1092 1474 GAPVADNNEGADGVG X Q6JC40
1093 1475 GGGAPVADNNEGADG X Q6JC40
1094 1476 IFGKQGTGRDNVDAD X Q6JC40
1095 1477 ILPGMVWQDRDVYLQ X Q6JC40
1096 1478 MGGFGMKHPPPQILI X Q6JC40
1097 1479 PPQILIKNTPVPADP X Q6JC40
1098 1480 RAVFQAKKRLLEPLG X Q6JC40
1099 1481 RDNVDADKVMITNEE X Q6JC40
1100 1482 SNNVEFAVNTEGVYS X Q6JC40
1101 1483 TEGVYSEPRPIGTRY X Q6JC40
1102 1484 TSGGSSNDNAYFGYS X Q6JC40
1103 1485 TVTQNNNSEFAWPGA X Q6JC40
1104 1486 VLPGYKYLGPGNGLD X Q6JC40
1105 1487 ADPPTAFNKDKLNSF X Q6JC40
1106 1488 ALNGRNSLMNPGPAM X Q6JC40
1107 1489 APSGVGSLTMASGGG X Q6JC40
1108 1490 DNLSEGIREWWALKP X Q6JC40
1109 1491 DPPTAFNKDKLNSFI X Q6JC40
1110 1492 DSQWLGDRVITTSTR X Q6JC40
1111 1493 DSSAGIGKSGAQPAK X Q6JC40
1112 1494 DVFMIPQYGYLTLND X Q6JC40
1113 1495 GIGKSGAQPAKKRLN X Q6JC40
1114 1496 GKQGTGRDNVDADKV X Q6JC40
1115 1497 GNFHPSPLMGGFGMK X Q6JC40
1116 1498 GVGSSSGNWHCDSQW X Q6JC40
1117 1499 ISNSTSGGSSNDNAY X Q6JC40
1118 1500 KLNSFITQYSTGQVS X Q6JC40
1119 1501 KNTPVPADPPTAFNK X Q6JC40
1120 1502 KYLGPGNGLDKGEPV X Q6JC40
1121 1503 LGRAVFQAKKRLLEP X Q6JC40
1122 1504 LGSAHEGCLPPFPAD X Q6JC40
1123 1505 MNPGPAMASHKEGED X Q6JC40
1124 1506 NMAVQGRNYIPGPSY X Q6JC40
1125 1507 NNEGADGVGSSSGNW X Q6JC40
1126 1508 NWHCDSQWLGDRVIT X Q6JC40
1127 1509 PAMASHKEGEDRFFP X Q6JC40
1128 1510 PEIQYTSNYYKSNNV X Q6JC40
1129 1511 QQRVSTTVTQNNNSE X Q6JC40
1130 1512 RLLEPLGLVEEAAKT X Q6JC40
1131 1513 RPVEQSPQEPDSSAG X Q6JC40
1132 1514 TAFNKDKLNSFITQY X Q6JC40
1133 1515 TGWVQNQGILPGMVW X Q6JC40
1134 1516 TQNNNSEFAWPGASS X Q6JC40
1135 1517 VKEVTDNNGVKTIAN X Q6JC40
1136 1518 VPDPQPIGEPPAAPS X Q6JC40
1137 1519 VQNQGILPGMVWQDR X Q6JC40
1138 1520 YFPSQMLRTGNNFQF X Q6JC40
1139 1521 YVLGSAHEGCLPPFP X Q6JC40
1140 1522 ADGVGSSSGNWHCDS X Q6JC40
1141 1523 ANQQHQDNARGLVLP X Q6JC40
1142 1524 AQPAKKRLNFGQTGD X Q6JC40
1143 1525 ARGLVLPGYKYLGPG X Q6JC40
1144 1526 ASSWALNGRNSLMNP X Q6JC40
1145 1527 AVNTEGVYSEPRPIG X Q6JC40
1146 1528 DNNEGADGVGSSSGN X Q6JC40
1147 1529 DPQPIGEPPAAPSGV X Q6JC40
1148 1530 DRFFPLSGSLIFGKQ X Q6JC40
1149 1531 FGMKHPPPQILIKNT X Q6JC40
1150 1532 GLVLPGYKYLGPGNG X Q6JC40
1151 1533 GNLGRAVFQAKKRLL X Q6JC40
1152 1534 GPGNGLDKGEPVNAA X Q6JC40
1153 1535 GQTGDTESVPDPQPI X Q6JC40
1154 1536 GSSSGNWHCDSQWLG X Q6JC40
1155 1537 GWVQNQGILPGMVWQ X Q6JC40
1156 1538 IANNLTSTVQVFTDS X Q6JC40
1157 1539 KKRLLEPLGLVEEAA X Q6JC40
1158 1540 KKRLNFGQTGDTESV X Q6JC40
1159 1541 LEPLGLVEEAAKTAP X Q6JC40
1160 1542 LGLVEEAAKTAPGKK X Q6JC40
1161 1543 LKAGDNPYLKYNHAD X Q6JC40
1162 1544 LMGGFGMKHPPPQIL X Q6JC40
1163 1545 LNDGSQAVGRSSFYC X Q6JC40
1164 1546 LPYVLGSAHEGCLPP X Q6JC40
1165 1547 LSEGIREWWALKPGA X Q6JC40
1166 1548 MKHPPPQILIKNTPV X Q6JC40
1167 1549 NLSEGIREWWALKPG X Q6JC40
1168 1550 NSTSGGSSNDNAYFG X Q6JC40
1169 1551 NTEGVYSEPRPIGTR X Q6JC40
1170 1552 NYYKSNNVEFAVNTE X Q6JC40
1171 1553 PADPPTAFNKDKLNS X Q6JC40
1172 1554 PAKKRLNFGQTGDTE X Q6JC40
1173 1555 PLIDQYLYYLSKTIN X Q6JC40
1174 1556 PLMGGFGMKHPPPQI X Q6JC40
1175 1557 PQEPDSSAGIGKSGA X Q6JC40
1176 1558 PQPKANQQHQDNARG X Q6JC40
1177 1559 PSPLMGGFGMKHPPP X Q6JC40
1178 1560 PSQMLRTGNNFQFSY X Q6JC40
1179 1561 PSYRQQRVSTTVTQN X Q6JC40
1180 1562 QNQQTLKFSVAGPSN X Q6JC40
1181 1563 QTGWVQNQGILPGMV X Q6JC40
1182 1564 QYTSNYYKSNNVEFA X Q6JC40
1183 1565 RLMNPLIDQYLYYLS X Q6JC40
1184 1566 RLNFGQTGDTESVPD X Q6JC40
1185 1567 RNSLMNPGPAMASHK X Q6JC40
1186 1568 SAQAQAQTGWVQNQG X Q6JC40
1187 1569 SGNWHCDSQWLGDRV X Q6JC40
1188 1570 SHKEGEDRFFPLSGS X Q6JC40
1189 1571 SLMNPGPAMASHKEG X Q6JC40
1190 1572 SQMLRTGNNFQFSYE X Q6JC40
1191 1573 TDSDYQLPYVLGSAH X Q6JC40
1192 1574 TESYGQVATNHQSAQ X Q6JC40
1193 1575 TLKFSVAGPSNMAVQ X Q6JC40
1194 1576 TSNYYKSNNVEFAVN X Q6JC40
1195 1577 VFTDSDYQLPYVLGS X Q6JC40
1196 1578 VGSLTMASGGGAPVA X Q6JC40
1197 1579 VPADPPTAFNKDKLN X Q6JC40
1198 1580 WVQNQGILPGMVWQD X Q6JC40
1199 1581 WWALKPGAPQPKANQ X Q6JC40
1200 1582 YDQQLKAGDNPYLKY X Q6JC40
1201 1583 YKYLGPGNGLDKGEP X Q6JC40
1202 1584 YLGPGNGLDKGEPVN X Q6JC40
1203 1585 YRQQRVSTTVTQNNN X Q6JC40
1204 1586 YYKSNNVEFAVNTEG X Q6JC40
1205 1587 TDGNFHPSPLMGGFG X Q6JC40
1206 1588 WELQKENSKRWNPEI X Q6JC40
1207 1589 HTDGNFHPSPLMGGF X Q6JC40
1208 1590 PHTDGNFHPSPLMGG X Q6JC40
1209 1591 AKIPHTDGNFHPSPL X Q6JC40
1210 1592 QKENSKRWNPEIQYT X Q6JC40
1211 1593 GPIWAKIPHTDGNFH X Q6JC40
1212 1594 GVYSEPRPIGTRYLT X Q6JC40
1213 1595 KENSKRWNPEIQYTS X Q6JC40
1214 1596 KIPHTDGNFHPSPLM X Q6JC40
1215 1597 LQKENSKRWNPEIQY X Q6JC40
1216 1598 PIWAKIPHTDGNFHP X Q6JC40
1217 1599 TIQVFTDSEYQLPYV X Q8JQF8
1218 1600 NNLTSTIQVFTDSEY X Q8JQF8
1219 1601 HKDDEERFFPSNGIL X Q8JQF8
1220 1602 SSGNWHCDSTWLGDR X Q8JQF8
1221 1603 ATNDNTYFGYSTPWG X Q8JQF8
1222 1604 NFQFTYTFEDVPFHS X Q8JQF8
1223 1605 TAPGKKRPVEPSPQR X Q8JQF8
1224 1606 AALEHDKAYDQQLQA X Q8JQF8
1225 1607 ADYSDVMLTSEEEIK X Q8JQF8
1226 1608 ATHKDDEERFFPSNG X Q8JQF8
1227 1609 EPPAAPSGVGPNTMA X Q8JQF8
1228 1610 EWWALKPGAPKPKAN X Q8JQF8
1229 1611 FGKQNAARDNADYSD X Q8JQF8
1230 1612 MAAGGGAPMADNNEG X Q8JQF8
1231 1613 PQIGTVNSQGALPGM X Q8JQF8
1232 1614 QVFTDSEYQLPYVLG X Q8JQF8
1233 1615 VGSSSGNWHCDSTWL X Q8JQF8
1234 1616 ANNLTSTIQVFTDSE X Q8JQF8
1235 1617 GIAMATHKDDEERFF X Q8JQF8
1236 1618 GVGSSSGNWHCDSTW X Q8JQF8
1237 1619 IDQYLYYLSRTQTTG X Q8JQF8
1238 1620 IQVFTDSEYQLPYVL X Q8JQF8
1239 1621 RQQRVSTTTGQNNNS X Q8JQF8
1240 1622 TAPQIGTVNSQGALP X Q8JQF8
1241 1623 YDQQLQAGDNPYLRY X Q8JQF8
1242 1624 ATEEYGIVADNLQQQ X Q8JQF8
1243 1625 EGAKTAPGKKRPVEP X Q8JQF8
1244 1626 EVTQNEGTKTIANNL X Q8JQF8
1245 1627 FKLFNIQVKEVTQNE X Q8JQF8
1246 1628 FPSQMLRTGNNFQFT X Q8JQF8
1247 1629 GPNTMANQAKNWLPG X Q8JQF8
1248 1630 LEHDKAYDQQLQAGD X Q8JQF8
1249 1631 LIFGKQNAARDNADY X Q8JQF8
1250 1632 LTSTIQVFTDSEYQL X Q8JQF8
1251 1633 LYKQISNGTSGGATN X Q8JQF8
1252 1634 MANQAKNWLPGPCYR X Q8JQF8
1253 1635 NLTSTIQVFTDSEYQ X Q8JQF8
1254 1636 NPGIAMATHKDDEER X Q8JQF8
1255 1637 NQSKLNSFITQYSTG X Q8JQF8
1256 1638 PNTMAAGGGAPMADN X Q8JQF8
1257 1639 SFKLFNIQVKEVTQN X Q8JQF8
1258 1640 TDSEYQLPYVLGSAH X Q8JQF8
1259 1641 TMAAGGGAPMADNNE X Q8JQF8
1260 1642 AMATHKDDEERFFPS X Q8JQF8
1261 1643 APSGVGPNTMAAGGG X Q8JQF8
1262 1644 DPPTTFNQSKLNSFI X Q8JQF8
1263 1645 DPQPLGEPPAAPSGV X Q8JQF8
1264 1646 EGIREWWALKPGAPK X Q8JQF8
1265 1647 FPSNGILIFGKQNAA X Q8JQF8
1266 1648 FTDSEYQLPYVLGSA X Q8JQF8
1267 1649 GAKTAPGKKRPVEPS X Q8JQF8
1268 1650 GGTANTQTLGFSQGG X Q8JQF8
1269 1651 GILIFGKQNAARDNA X Q8JQF8
1270 1652 GTKTIANNLTSTIQV X Q8JQF8
1271 1653 INNNWGFRPKRLSFK X Q8JQF8
1272 1654 IQYTSNYYKSTSVDF X Q8JQF8
1273 1655 ISNGTSGGATNDNTY X Q8JQF8
1274 1656 KAYDQQLQAGDNPYL X Q8JQF8
1275 1657 KEVTQNEGTKTIANN X Q8JQF8
1276 1658 KLFNIQVKEVTQNEG X Q8JQF8
1277 1659 KSTSVDFAVNTEGVY X Q8JQF8
1278 1660 KTIANNLTSTIQVFT X Q8JQF8
1279 1661 KTTNPVATEEYGIVA X Q8JQF8
1280 1662 LMNPLIDQYLYYLSR X Q8JQF8
1281 1663 LPTYNNHLYKQISNG X Q8JQF8
1282 1664 LTSEEEIKTTNPVAT X Q8JQF8
1283 1665 MADNNEGADGVGSSS X Q8JQF8
1284 1666 NGTSGGATNDNTYFG X Q8JQF8
1285 1667 NHLYKQISNGTSGGA X Q8JQF8
1286 1668 NIQVKEVTQNEGTKT X Q8JQF8
1287 1669 NLQQQNTAPQIGTVN X Q8JQF8
1288 1670 NNHLYKQISNGTSGG X Q8JQF8
1289 1671 NTMANQAKNWLPGPC X Q8JQF8
1290 1672 PEIQYTSNYYKSTSV X Q8JQF8
1291 1673 PGKKRPVEPSPQRSP X Q8JQF8
1292 1674 PTYNNHLYKQISNGT X Q8JQF8
1293 1675 QGGPNTMANQAKNWL X Q8JQF8
1294 1676 QNEGTKTIANNLTST X Q8JQF8
1295 1677 QNNNSNFAWTAGTKY X Q8JQF8
1296 1678 QNTAPQIGTVNSQGA X Q8JQF8
1297 1679 QPLGEPPAAPSGVGP X Q8JQF8
1298 1680 QTLGFSQGGPNTMAN X Q8JQF8
1299 1681 QVKEVTQNEGTKTIA X Q8JQF8
1300 1682 SGVGPNTMAAGGGAP X Q8JQF8
1301 1683 SNFAWTAGTKYHLNG X Q8JQF8
1302 1684 SQGALPGMVWQNRDV X Q8JQF8
1303 1685 TQNEGTKTIANNLTS X Q8JQF8
1304 1686 TSGGATNDNTYFGYS X Q8JQF8
1305 1687 TSTIQVFTDSEYQLP X Q8JQF8
1306 1688 TYNNHLYKQISNGTS X Q8JQF8
1307 1689 VGPNTMAAGGGAPMA X Q8JQF8
1308 1690 VMLTSEEEIKTTNPV X Q8JQF8
1309 1691 WLPGPCYRQQRVSTT X Q8JQF8
1310 1692 YLSRTQTTGGTANTQ X Q8JQF8
1311 1693 YYKSTSVDFAVNTEG X Q8JQF8
1312 1694 DGNFHPSPLMGGFGL X Q8JQF8
1313 1695 NDNTYFGYSTPWGYF X Q8JQF8
1314 1696 GALPGMVWQNRDVYL X Q8JQF8
1315 1697 AGGGAPMADNNEGAD X Q8JQF8
1316 1698 RPVEPSPQRSPDSST X Q8JQF8
1317 1699 MVWQNRDVYLQGPIW X Q8JQF8
1318 1700 TNDNTYFGYSTPWGY X Q8JQF8
1319 1701 KRPVEPSPQRSPDSS X Q8JQF8
1320 1702 LPGMVWQNRDVYLQG X Q8JQF8
1321 1703 VPDPQPLGEPPAAPS X Q8JQF8
1322 1704 VWQNRDVYLQGPIWA X Q8JQF8
1323 1705 AAGGGAPMADNNEGA X Q8JQF8
1324 1706 DSSTGIGKKGQQPAR X Q8JQF8
1325 1707 GKKGQQPARKRLNFG X Q8JQF8
1326 1708 NFHPSPLMGGFGLKH X Q8JQF8
1327 1709 QGALPGMVWQNRDVY X Q8JQF8
1328 1710 QQPARKRLNFGQTGD X Q8JQF8
1329 1711 ALPGMVWQNRDVYLQ X Q8JQF8
1330 1712 GIGKKGQQPARKRLN X Q8JQF8
1331 1713 GMVWQNRDVYLQGPI X Q8JQF8
1332 1714 GNFHPSPLMGGFGLK X Q8JQF8
1333 1715 KKRPVEPSPQRSPDS X Q8JQF8
1334 1716 PDSSTGIGKKGQQPA X Q8JQF8
1335 1717 PGMVWQNRDVYLQGP X Q8JQF8
1336 1718 QRSPDSSTGIGKKGQ X Q8JQF8
1337 1719 VEPSPQRSPDSSTGI X Q8JQF8
1338 1720 QAKKRVLEPLGLVEE X Q8JQF8
1339 1721 EPLGLVEEGAKTAPG X Q8JQF8
1340 1722 RAVFQAKKRVLEPLG X Q8JQF8
1341 1723 AKKRVLEPLGLVEEG X Q8JQF8
1342 1724 FQAKKRVLEPLGLVE X Q8JQF8
1343 1725 PLGLVEEGAKTAPGK X Q8JQF8
1344 1726 RVLEPLGLVEEGAKT X Q8JQF8
1345 1727 GYSTPWGYFDFNRFH X Q9YIJ1
1346 1728 FEFTYNFEEVPFHSS X Q9YIJ1
1347 1729 NPTERSSFFCLEYFP X Q9YIJ1
1348 1730 GDWHCDSTWMGDRVV X Q9YIJ1
1349 1731 TVQVFTDDDYQLPYV X Q9YIJ1
1350 1732 FTYNFEEVPFHSSFA X Q9YIJ1
1351 1733 VDHPPDWLEEVGEGL X Q9YIJ1
1352 1734 RSSFFCLEYFPSKML X Q9YIJ1
1353 1735 TGAHFHPSPAMGGFG X Q9YIJ1
1354 1736 ASGDWHCDSTWMGDR X Q9YIJ1
1355 1737 GVGNASGDWHCDSTW X Q9YIJ1
1356 1738 PQFVDFAPDSTGEYR X Q9YIJ1
1357 1739 RGEPVNRADEVAREH X Q9YIJ1
1358 1740 AYFGYSTPWGYFDFN X Q9YIJ1
1359 1741 DNTENPTERSSFFCL X Q9YIJ1
1360 1742 DYQLPYVVGNGTEGC X Q9YIJ1
1361 1743 PETGAHFHPSPAMGG X Q9YIJ1
1362 1744 RADEVAREHDISYNE X Q9YIJ1
1363 1745 TERSSFFCLEYFPSK X Q9YIJ1
1364 1746 EGLREFLGLEAGPPK X Q9YIJ1
1365 1747 NDPQFVDFAPDSTGE X Q9YIJ1
1366 1748 PAMGGFGLKHPPPMM X Q9YIJ1
1367 1749 VAREHDISYNEQLEA X Q9YIJ1
1368 1750 VNRADEVAREHDISY X Q9YIJ1
1369 1751 YNHADAEFQEKLADD X Q9YIJ1
1370 1752 EPFGLVEEGAKTAPT X Q9YIJ1
1371 1753 FSDVPVSSFITQYST X Q9YIJ1
1372 1754 FTDDDYQLPYVVGNG X Q9YIJ1
1373 1755 HADAEFQEKLADDTS X Q9YIJ1
1374 1756 MGGFGLKHPPPMMLI X Q9YIJ1
1375 1757 NGLDRGEPVNRADEV X Q9YIJ1
1376 1758 NPEIQYTNNYNDPQF X Q9YIJ1
1377 1759 QVFTDDDYQLPYVVG X Q9YIJ1
1378 1760 REHDISYNEQLEAGD X Q9YIJ1
1379 1761 VGEGLREFLGLEAGP X Q9YIJ1
1380 1762 WGYFDFNRFHSHWSP X Q9YIJ1
1381 1763 WSPRDWQRLINNYWG X Q9YIJ1
1382 1764 YFDFNRFHSHWSPRD X Q9YIJ1
1383 1765 ADGVGNASGDWHCDS X Q9YIJ1
1384 1766 ARTEEDSKPSTSSDA X Q9YIJ1
1385 1767 ASVSAFATTNRMELE X Q9YIJ1
1386 1768 DFNRFHSHWSPRDWQ X Q9YIJ1
1387 1769 EGCLPAFPPQVFTLP X Q9YIJ1
1388 1770 ETQPVNRVAYNVGGQ X Q9YIJ1
1389 1771 FHPSPAMGGFGLKHP X Q9YIJ1
1390 1772 GGGGPLGDNNQGADG X Q9YIJ1
1391 1773 GGPLGDNNQGADGVG X Q9YIJ1
1392 1774 IDDHFPKRKKARTEE X Q9YIJ1
1393 1775 LVEEGAKTAPTGKRI X Q9YIJ1
1394 1776 NLQEIVPGSVWMERD X Q9YIJ1
1395 1777 NPYLKYNHADAEFQE X Q9YIJ1
1396 1778 PAFPPQVFTLPQYGY X Q9YIJ1
1397 1779 PASSLGADTMSAGGG X Q9YIJ1
1398 1780 PVSSFITQYSTGQVT X Q9YIJ1
1399 1781 QGADGVGNASGDWHC X Q9YIJ1
1400 1782 TGGVQFNKNLAGRYA X Q9YIJ1
1401 1783 VSAFATTNRMELEGA X Q9YIJ1
1402 1784 YFPSKMLRTGNNFEF X Q9YIJ1
1403 1785 YNFEEVPFHSSFAPS X Q9YIJ1
1404 1786 AFATTNRMELEGASY X Q9YIJ1
1405 1787 AHFHPSPAMGGFGLK X Q9YIJ1
1406 1788 DFAPDSTGEYRTTRP X Q9YIJ1
1407 1789 DGSNANAYFGYSTPW X Q9YIJ1
1408 1790 DNPYLKYNHADAEFQ X Q9YIJ1
1409 1791 DSTGEYRTTRPIGTR X Q9YIJ1
1410 1792 EGNMLITSESETQPV X Q9YIJ1
1411 1793 FVSTNNTGGVQFNKN X Q9YIJ1
1412 1794 GDNPYLKYNHADAEF X Q9YIJ1
1413 1795 GGNLGKAVFQAKKRV X Q9YIJ1
1414 1796 GTEGCLPAFPPQVFT X Q9YIJ1
1415 1797 HDISYNEQLEAGDNP X Q9YIJ1
1416 1798 IVPGSVWMERDVYLQ X Q9YIJ1
1417 1799 KIPETGAHFHPSPAM X Q9YIJ1
1418 1800 KMLRTGNNFEFTYNF X Q9YIJ1
1419 1801 LEAGPPKPKPNQQHQ X Q9YIJ1
1420 1802 LEYFPSKMLRTGNNF X Q9YIJ1
1421 1803 LGPGNGLDRGEPVNR X Q9YIJ1
1422 1804 LPGYNYLGPGNGLDR X Q9YIJ1
1423 1805 LVDQYLYRFVSTNNT X Q9YIJ1
1424 1806 NIQVKEVTVQDSTTT X Q9YIJ1
1425 1807 NITSFSDVPVSSFIT X Q9YIJ1
1426 1808 NNQGADGVGNASGDW X Q9YIJ1
1427 1809 NRASVSAFATTNRME X Q9YIJ1
1428 1810 NTPVPGNITSFSDVP X Q9YIJ1
1429 1811 NYLGPGNGLDRGEPV X Q9YIJ1
1430 1812 PATGTYNLQEIVPGS X Q9YIJ1
1431 1813 PGNGLDRGEPVNRAD X Q9YIJ1
1432 1814 PGNITSFSDVPVSSF X Q9YIJ1
1433 1815 PRDWQRLINNYWGFR X Q9YIJ1
1434 1816 PSPAMGGFGLKHPPP X Q9YIJ1
1435 1817 PYVVGNGTEGCLPAF X Q9YIJ1
1436 1818 QARGLVLPGYNYLGP X Q9YIJ1
1437 1819 QEKLADDTSFGGNLG X Q9YIJ1
1438 1820 QLPYVVGNGTEGCLP X Q9YIJ1
1439 1821 RMELEGASYQVPPQP X Q9YIJ1
1440 1822 SVWMERDVYLQGPIW X Q9YIJ1
1441 1823 TGEYRTTRPIGTRYL X Q9YIJ1
1442 1824 TTTIANNLTSTVQVF X Q9YIJ1
1443 1825 VVGNGTEGCLPAFPP X Q9YIJ1
1444 1826 WMERDVYLQGPIWAK X Q9YIJ1
1445 1827 WMGDRVVTKSTRTWV X Q9YIJ1
1446 1828 YLYRFVSTNNTGGVQ X Q9YIJ1
1447 1829 ADDTSFGGNLGKAVF X Q9YIJ1
1448 1830 AKKRVLEPFGLVEEG X Q9YIJ1
1449 1831 ALENTMIFNSQPANP X Q9YIJ1
1450 1832 APDSTGEYRTTRPIG X Q9YIJ1
1451 1833 APSQNLFKLANPLVD X Q9YIJ1
1452 1834 APTGKRIDDHFPKRK X Q9YIJ1
1453 1835 ASYQVPPQPNGMTNN X Q9YIJ1
1454 1836 ATNNQSSTTAPATGT X Q9YIJ1
1455 1837 DHFPKRKKARTEEDS X Q9YIJ1
1456 1838 DTSFGGNLGKAVFQA X Q9YIJ1
1457 1839 DVPVSSFITQYSTGQ X Q9YIJ1
1458 1840 DWQRLINNYWGFRPR X Q9YIJ1
1459 1841 FPPQVFTLPQYGYAT X Q9YIJ1
1460 1842 FQAKKRVLEPFGLVE X Q9YIJ1
1461 1843 GDNNQGADGVGNASG X Q9YIJ1
1462 1844 GDRVVTKSTRTWVLP X Q9YIJ1
1463 1845 GFRPRSLRVKIFNIQ X Q9YIJ1
1464 1846 GGQMATNNQSSTTAP X Q9YIJ1
1465 1847 GSGVNRASVSAFATT X Q9YIJ1
1466 1848 GSQQLQIPAQPASSL X Q9YIJ1
1467 1849 GVNRASVSAFATTNR X Q9YIJ1
1468 1850 IKSGSVDGSNANAYF X Q9YIJ1
1469 1851 KEVTVQDSTTTIANN X Q9YIJ1
1470 1852 KKENSKRWNPEIQYT X Q9YIJ1
1471 1853 LDRGEPVNRADEVAR X Q9YIJ1
1472 1854 LGADTMSAGGGGPLG X Q9YIJ1
1473 1855 LINNYWGFRPRSLRV X Q9YIJ1
1474 1856 LREFLGLEAGPPKPK X Q9YIJ1
1475 1857 LVLPGYNYLGPGNGL X Q9YIJ1
1476 1858 NLAGRYANTYKNWFP X Q9YIJ1
1477 1859 NLFKLANPLVDQYLY X Q9YIJ1
1478 1860 NNQSSTTAPATGTYN X Q9YIJ1
1479 1861 NNTGGVQFNKNLAGR X Q9YIJ1
1480 1862 NPLVDQYLYRFVSTN X Q9YIJ1
1481 1863 NRDNTENPTERSSFF X Q9YIJ1
1482 1864 PFHSSFAPSQNLFKL X Q9YIJ1
1483 1865 PIWAKIPETGAHFHP X Q9YIJ1
1484 1866 PLGDNNQGADGVGNA X Q9YIJ1
1485 1867 PMGRTQGWNLGSGVN X Q9YIJ1
1486 1868 PMMLIKNTPVPGNIT X Q9YIJ1
1487 1869 PQPNGMTNNLQGSNT X Q9YIJ1
1488 1870 QGPIWAKIPETGAHF X Q9YIJ1
1489 1871 QGSNTYALENTMIFN X Q9YIJ1
1490 1872 QPVNRVAYNVGGQMA X Q9YIJ1
1491 1873 QVKEVTVQDSTTTIA X Q9YIJ1
1492 1874 REIKSGSVDGSNANA X Q9YIJ1
1493 1875 RTTRPIGTRYLTRPL X Q9YIJ1
1494 1876 RWNPEIQYTNNYNDP X Q9YIJ1
1495 1877 RYANTYKNWFPGPMG X Q9YIJ1
1496 1878 SFFCLEYFPSKMLRT X Q9YIJ1
1497 1879 SFGGNLGKAVFQAKK X Q9YIJ1
1498 1880 SNANAYFGYSTPWGY X Q9YIJ1
1499 1881 SNTYALENTMIFNSQ X Q9YIJ1
1500 1882 SQNLFKLANPLVDQY X Q9YIJ1
1501 1883 SVDGSNANAYFGYST X Q9YIJ1
1502 1884 TGTYNLQEIVPGSVW X Q9YIJ1
1503 1885 TLNRDNTENPTERSS X Q9YIJ1
1504 1886 TSESETQPVNRVAYN X Q9YIJ1
1505 1887 TYKNWFPGPMGRTQG X Q9YIJ1
1506 1888 YATLNRDNTENPTER X Q9YIJ1
1507 1889 YGYATLNRDNTENPT X Q9YIJ1
1508 1890 YRFVSTNNTGGVQFN X Q9YIJ1
1509 1891 YSTPWGYFDFNRFHS X Q9YIJ1
실시예 19: 환형 펩타이드에 기초한 사람 혈청에서 항-AAV 항체에 대한 스크리닝
사람 및 레서스 원숭이 AAV 서열 및 표 2에 따른 인공 AAV 서열로부터 유래되고 각각 14개 아미노산의 서열 길이를 지닌 1200개 이상의 환형 펩타이드가 합성되었다.
사람 공여자로부터 수득된 샘플로 마이크로어레이에 고정된 이러한 AAV 유래 펩타이드에 대한 항체를 스크리닝하였다. 이를 위하여 사람 공여자로부터 얻은 혈액으로부터 단백질 G 정제를 통해 IgG를 준비하였다. 각 IgG 샘플을 펩타이드 마이크로어레이와 함께 인큐베이션하고 Ig 결합 신호를 형광으로 검출하였다. 어레이 상의 펩타이드에 대한 모든 항체 결합 신호는 백그라운드 제거되었고 각 샘플에 대해 순위가 매겨졌으며, (UniProt 또는 기타 소스에서 얻은 것과 같은) 상응하는 기원 단백질 서열을 갖는 각 공여자에 대한 각각의 상위 250개 펩타이드 히트의 중복 제거된 집합체가 편집되었다(그룹 II로 지정됨). 또한, 각 공여자에 대한 각각의 상위 50개 펩타이드 히트의 중복 제거된 집합체가 수집되어 그룹 I로 지정되었다.
상세한 결과는 하기 표 2에 나타낸다. 전체적으로 그룹 I은 47개의 별개의 펩타이드 히트(표 2의 해당 AAV 벡터에 할당됨)를 포함하고 그룹 II는 172개의 별개의 펩타이드 히트를 산출하였다. 분명히 그룹 I은 그룹 II의 하위 집합이다.
따라서, 나열된 모든 펩타이드, 바람직하게는 그룹 I에 속하는 펩타이드는, 본 발명에 따른 항체 고갈을 위해 더 짧은 펩타이드 서열이 유래될 수 있는 서열을 제공한다. 또한, 표 2의 펩타이드가 유래된 단백질(바람직하게는 그룹 I)의 다른 펩타이드 서열(또는 단편)도 본 발명에 따른 SADC에 사용하기에 적합하다. 또한, 이러한 펩타이드는 사람 혈청과 같은 생물학적 샘플에서 항-AAV 항체의 진단적 검출을 위한 프로브로 사용될 수도 있다.
이 표는 본 발명에 따른 SADC를 고갈시키는 항-AAV 항체의 구성을 위한 기초로서 환형화된 펩타이드에 대한 스크리닝의 상세한 결과를 나열한다. 이들 펩타이드는 또한 AAV 유전자 치료요법 벡터에 대한 중화 항체를 타이핑하는데 적합하다. 달리 명시되지 않는 한, 펩타이드는 상이한 AAV VP1 단백질로부터의 단편을 나타낸다. 제공된 소스는 UniProt ID, GenBank ID, PDB ID 또는 AAV 균주 이름이다.
펩타이드 # 서열번호 펩타이드 그룹 I 그룹 II 소스
1 1892 DSQWLGDRVITTST X X AAVLK03.L125I
2 1893 DTNGVYSEPRPIGT X X AAVLK03.L125I
3 1894 STNLQRGNLALGET X X AOD99651.1
4 1895 ANNLTSTVQIFADS X X A9RAI0
5 1896 KIFNIQVKEVTTSN X X A9RAI0
6 1897 GNTSQQQTDRNAFY X X O41855
7 1898 LEDNLSEGIREWWD X X AAO88201.1
8 1899 SESVPDPQPIGEPP X X AAO88201.1
9 1900 LIKNTPVPADPPTT X X AAO88201.1
10 1901 PQYGYLTLNNGSQA X X AAO88201.1
11 1902 DEEEIRTTNPVATE X X AAVLK03.L125I
12 1903 NYNKSVNVDFTVDT X X AAVLK03.L125I
13 1904 YHLNGRDSLVNPGP X X AAVLK03.L125I
14 1905 TRPATAPQIGTVNS X X AOD99652.1
15 1906 GETTRPATAAQTQV X X AOD99656.1
16 1907 IFNIQVKEVTTSNG X X A9RAI0
17 1908 SNSQLIFAGPNPSG X X A9RAI0
18 1909 TTTSSNNLLFTSEE X X A9RAI0
19 1910 FNIQVKEVTTNDGV X X O56137
20 1911 GQTGDSESVPDPQP X X AAO88201.1
21 1912 PQILIKNTPVPADP X X AAO88201.1
22 1913 QLKAGDNPYLRYNH X X AAO88201.1
23 1914 SFITQYSTGQVSVE X X AAO88201.1
24 1915 FGKQGAGRDNVDYS X X AAS99285.1
25 1916 YYKSTNVDFAVNTE X X AAS99285.1
26 1917 HYFGYSTPWGYFDF X X AAVLK03.L125I
27 1918 APGKKRPVDQSPQE X X AAVLK03.L125I
28 1919 GKKRPVDQSPQEPD X X AAVLK03.L125I
29 1920 KTAPGKKRPVDQSP X X AAVLK03.L125I
30 1921 PEIQYTSNYNKSVN X X AAVLK03.L125I
31 1922 SESVPDPQPLGEPP X X AAVLK03.L125I
32 1923 TAPGKKRPVDQSPQ X X AAVLK03.L125I
33 1924 YDQQLKAGDNPYLK X X AAVLK03.L125I
34 1925 YLYYLNRTQGTTSG X X AAVLK03.L125I
35 1926 DKAYDRQLDSGDNP X X AAV2i8
36 1927 GTNTMATGSGAPMA X X AAV2i8
37 1928 DKAYDQQLQAGDNP X X AAV-Rh74
38 1929 TESVPDPQPIGEPP X X ALU85156.1
39 1930 KNTPVPADPPTTES X X AAO88201.1
40 1931 PVPADPPTTESQAK X X AAO88201.1
41 1932 DEEEIKATNPVATE X X O56137
42 1933 DKDKFFPMSGVMIF X X O56137
43 1934 LQQQNTAPQIGTVN X X Q8JQF8
44 1935 EEEIKTTNPVATEE X X Q8JQF8
45 1936 GQNNNSNFAWTAGT X X Q8JQF8
46 1937 DDEDKFFPMSGVMI X X Q9WBP8
47 1938 PLVDQYLYRFVSTN X X Q9YIJ1
48 1939 ADPPTTFSQAKLAS X AAO88201.1
49 1940 DAAALEHDKAYDQQ X AAO88201.1
50 1941 DKAYDQQLKAGDNP X AAO88201.1
51 1942 DSESVPDPQPIGEP X AAO88201.1
52 1943 DWLEDNLSEGIREW X AAO88201.1
53 1944 EDNLSEGIREWWDL X AAO88201.1
54 1945 EEIKTTNPVATEQY X AAO88201.1
55 1946 ENSKRWNPEIQYTS X AAO88201.1
56 1947 ESVPDPQPIGEPPA X AAO88201.1
57 1948 EYQLPYVLGSAHQG X AAO88201.1
58 1949 FQERLQEDTSFGGN X AAO88201.1
59 1950 GDSESVPDPQPIGE X AAO88201.1
60 1951 HSQSLDRLMNPLID X AAO88201.1
61 1952 KGEPVNAADAAALE X AAO88201.1
62 1953 KNTPVPADPPTTFS X AAO88201.1
63 1954 LPYVLGSAHQGCLP X AAO88201.1
64 1955 LQQQNAAPIVGAVN X AAO88201.1
65 1956 NAADAAALEHDKAY X AAO88201.1
66 1957 NPGVAMATHKDDEE X AAO88201.1
67 1958 PGAPKPKANQQKQD X AAO88201.1
68 1959 PPQILIKNTPVPAD X AAO88201.1
69 1960 PRDWQRLINNNWGF X AAO88201.1
70 1961 PWGYFDFNRFHCHF X AAO88201.1
71 1962 QLPYVLGSAHQGCL X AAO88201.1
72 1963 QQRVSTTLSQNNNS X AAO88201.1
73 1964 SEPRPIGTRYLTRN X AAO88201.1
74 1965 SGGSTNDNTYFGYS X AAO88201.1
75 1966 SQSLDRLMNPLIDQ X AAO88201.1
76 1967 TGDSESVPDPQPIG X AAO88201.1
77 1968 TIANNLTSTIQVFT X AAO88201.1
78 1969 TQYSTGQVSVEIEW X AAO88201.1
79 1970 VTQNEGTKTIANNL X AAO88201.1
80 1971 WLEDNLSEGIREWW X AAO88201.1
81 1972 YFGYSTPWGYFDFN X AAO88201.1
82 1973 LSRTQSTGGTQGTQ X AAS99285.1
83 1974 TQGTQQLLFSQAGP X AAS99285.1
84 1975 DAEFQERLKEDTSF X AAVLK03.L125I
85 1976 DDEEKFFPMHGNLI X AAVLK03.L125I
86 1977 DGHFHPSPLMGGFG X AAVLK03.L125I
87 1978 DSESVPDPQPLGEP X AAVLK03.L125I
88 1979 EEEIRTTNPVATEQ X AAVLK03.L125I
89 1980 EEIRTTNPVATEQY X AAVLK03.L125I
90 1981 FQERLKEDTSFGGN X AAVLK03.L125I
91 1982 GADGVGNSSGNWHC X AAVLK03.L125I
92 1983 GDSESVPDPQPLGE X AAVLK03.L125I
93 1984 GNGLDKGEPVNAAD X AAVLK03.L125I
94 1985 KKRPVDQSPQEPDS X AAVLK03.L125I
95 1986 KRPVDQSPQEPDSS X AAVLK03.L125I
96 1987 KSVNVDFTVDTNGV X AAVLK03.L125I
97 1988 LSKTANDNNNSNFP X AAVLK03.L125I
98 1989 MASHKDDEEKFFPM X AAVLK03.L125I
99 1990 NNFQFSYTFEDVPF X AAVLK03.L125I
100 1991 PVDQSPQEPDSSSG X AAVLK03.L125I
101 1992 PVPANPPTTFSPAK X AAVLK03.L125I
102 1993 QQRLSKTANDNNNS X AAVLK03.L125I
103 1994 QSSNTAPTTRTVND X AAVLK03.L125I
104 1995 SKTANDNNNSNFPW X AAVLK03.L125I
105 1996 SNYNKSVNVDFTVD X AAVLK03.L125I
106 1997 TTSGTTNQSRLLFS X AAVLK03.L125I
107 1998 VMITDEEEIRTTNP X AAVLK03.L125I
108 1999 APGKKRPVEHSPVE X AAV2i8
109 2000 FFPQSGVLIFGKQG X AAV2i8
110 2001 FGKQGSEKTNVDIE X AAV2i8
111 2002 HKDDEEKFFPQSGV X AAV2i8
112 2003 KGEPVNEADAAALE X AAV2i8
113 2004 NEADAAALEHDKAY X AAV2i8
114 2005 NPVATEQYGSVSTN X AAV2i8
115 2006 PQILIKNTPVPANP X AAV2i8
116 2007 QQRVSKTSADNNNS X AAV2i8
117 2008 QTGDADSVPDPQPL X AAV2i8
118 2009 ADPPTTFNQAKLAS X AAV-Rh74
119 2010 AGDNVDYSSVMLTS X AAV-Rh74
120 2011 KNTPVPADPPTTFN X AAV-Rh74
121 2012 KRVLEPLGLVESPV X AAV-Rh74
122 2013 PYLRYHADAEFQER X AAV-Rh74
123 2014 EEEIKTTNPVATES X ALU85156.1
124 2015 EFAWPGASSWALNG X ALU85156.1
125 2016 KSNNVEFAVNTEGV X ALU85156.1
126 2017 MNPGPAMASHKEGE X ALU85156.1
127 2018 PVPADPPTAFNKDK X ALU85156.1
128 2019 TVQVFTDSDYQLPY X ALU85156.1
129 2020 NLQAANLALGETTR X AOD99656.1
130 2021 GGQMATNNQSLALG X AOD99659.1
131 2022 MATNNQSLALGETT X AOD99659.1
132 2023 KKRILEPLGLVEEA X AAB95452.1
133 2024 ADPPTTFNQSKLNS X 3J1Q
134 2025 KSTSVDFAVNTEGV X 3J1Q
135 2026 LQRGNRQAATADVN X 3J1Q
136 2027 PVPADPPTTFNQSK X 3J1Q
137 2028 DDDDRFFPMHGNLI X QLI60567.1
138 2029 PEPADVFMIPQYGY X AAO88201.1
139 2030 DIYYQGPIWAKVPH X A9RAI0
140 2031 FEKVPFHSMYAHSQ X A9RAI0
141 2032 FSAARINSFLTQYS X A9RAI0
142 2033 HSQSLDRMMNPLLD X A9RAI0
143 2034 KKRILEPLGLVEEG X A9RAI0
144 2035 MVPQYGYCGVVTGK X A9RAI0
145 2036 NQTDRNAFYCLEYF X A9RAI0
146 2037 RDTDMFGQIADNNQ X A9RAI0
147 2038 RDWQRLINNNWGLR X A9RAI0
148 2039 TVQIFADSTYELPY X A9RAI0
149 2040 DIYYQGPIWAKIPH X O41855
150 2041 QIFADSSYELPYVM X O41855
151 2042 THSTLDGRWSALTP X O41855
152 2043 TVQIFADSSYELPY X O41855
153 2044 DKFFPMSGVMIFGK X O56137
154 2045 EEEIKATNPVATER X O56137
155 2046 EGADGVGNASGNWH X O56137
156 2047 LFNIQVKEVTTNDG X O56137
157 2048 QVKEVTTNDGVTTI X O56137
158 2049 RVSKTKTDNNNSNF X O56137
159 2050 SDSEYQLPYVLGSA X O56137
160 2051 HSQSLDRLMNPLLD X Q5Y9B2
161 2052 IEMRAAPGGNAVDA X Q5Y9B2
162 2053 KRLNFEEDTGAGDG X Q5Y9B2
163 2054 SQSLDRLMNPLLDQ X Q5Y9B2
164 2055 STGQVAVQIEWEIE X Q5Y9B2
165 2056 TTSANNLLFTSEEE X Q5Y9B2
166 2057 TTSGETLNQGNAAT X Q5Y9B2
167 2058 GESESVPDPQPIGE X Q5Y9B4
168 2059 GQTGESESVPDPQP X Q5Y9B4
169 2060 ANPGIAMATHKDDE X Q8JQF8
170 2061 EGASYQVPPQPNGM X Q9YIJ1
171 2062 EYRTTRPIGTRYLT X Q9YIJ1
172 2063 YNLQEIVPGSVWME X Q9YIJ1
실시예 20: 사람 혈청에서 항-AAV 항체에 대한 추가 스크리닝
상응하는 AAV 서열을 따라 4개의 연속적으로 정렬된 펩타이드 신호에 대해 시험된 모든 혈청의 누적 글라이딩 평균 신호를 사용함으로써, AAV 벡터 AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV8, AAV9 및 AAVrh.10으로부터 1948개의 선형 펩타이드가 유래되었다.
상세한 결과는 하기 표 3에 나타낸다. 가장 강한 신호를 가진 63개의 상위 후보는 AAV VP1 서열을 따라 글라이딩 평균 신호에 의해 분석된 모든 AAV 펩타이드의 3.2%에 해당하는 그룹 I로 할당되었다. 두 번째로 강한 신호를 가진 135개의 펩타이드 뿐만 아니라 그룹 I의 펩타이드는 분석된 모든 AAV 펩타이드의 10.1%에 해당하는 그룹 II로 할당되었다. 추가 82개의 펩타이드(그룹 III에 할당됨)는 그룹 I 및 II에 커버되지 않는 본 스크리닝의 상위 200개 순위 펩타이드 신호에서 유래되었다. 요약하면, 그룹 I, II 및 III은 항 AAV 항체, 특히 AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV8, AAV9 및 AAVrh.10 VP1 단백질에 대한 항체를 제거하거나 검출하기에 (SADC의 기초로서) 적합한 280개의 선형 펩타이드를 포함한다.
이 표는 AAV1, AAV2, AAV5, AAV6, AAV8, AAV9 및 AAVrh.10을 포함하여 널리 사용되는 AAV 벡터의 VP1 서열을 따라 스트레치를 커버하는 적합한 펩타이드의 별도 편집물을 제공한다. 제공된 소스는 UniProt ID, GenBank ID, PDB ID 또는 AAV 균주 이름이다. 별표(*)는 상기 표 1에서 서열번호가 이미 지정된 펩타이드 서열을 나타낸다.
펩타이드 # 서열번호 펩타이드 그룹 I 그룹 II 그룹 III 소스
1 * ADPPTAFNKDKLNSF X X Q6JC40
2 2064 ADTMSAGGGGPLGDN X X Q9YIJ1
3 * AEFQERLKEDTSFGG X X spP03135
4 2065 AKTAPGKKRPVEPSP X X Q8JQF8
5 * APTGKRIDDHFPKRK X X Q9YIJ1
6 * DKLNSFITQYSTGQV X X Q6JC40
7 2066 DVYLQGPIWAKIPET X X Q9YIJ1
8 * EEEIKTTNPVATEEY X X Q8JQF8
9 * EEEIKTTNPVATEQY X X AAO88201.1
10 * EEEIRTTNPVATEQY X X spP03135
11 * EEIKTTNPVATEQYG X X AAO88201.1
12 * EIKTTNPVATEEYGI X X Q8JQF8
13 * EIRTTNPVATEQYGS X X spP03135
14 * ELKKENSKRWNPEIQ X X Q9YIJ1
15 * EMEWELKKENSKRWN X X Q9YIJ1
16 * ERDVYLQGPIWAKIP X X Q9YIJ1
17 * ERLKEDTSFGGNLGR X X spP03135
18 * EWELKKENSKRWNPE X X Q9YIJ1
19 * FITQYSTGQVSVEIE X X spP03135
20 * FITQYSTGQVTVEME X X Q9YIJ1
21 * FQERLKEDTSFGGNL X X spP03135
22 2067 GAKTAPTGKRIDDHF X X Q9YIJ1
23 2068 GQVATNHQSAQAQAQ X X Q6JC40
24 * IKTTNPVATEQYGVV X X AAO88201.1
25 * IQYTSNYNKSVNVDF X X spP03135
26 * KKENSKRWNPEIQYT X X Q9YIJ1
27 * KLNSFITQYSTGQVS X X Q6JC40
28 2069 KTAPTGKRIDDHFPK X X Q9YIJ1
29 * KTTNPVATEEYGIVA X X Q8JQF8
30 * LKEDTSFGGNLGRAV X X spP03135
31 * LNSFITQYSTGQVSV X X Q6JC40
32 2070 MNPLIDQYLYYLSKT X X Q6JC40
33 2071 NHQYREIKSGSVDGS X X Q9YIJ1
34 * NSFITQYSTGQVSVE X X Q6JC40
35 * NTEGVYSEPRPIGTR X X Q6JC40
36 * PADPPTAFNKDKLNS X X Q6JC40
37 * PEIQYTSNYNKSVNV X X spP03135
38 * PLIDQYLYYLSKTIN X X Q6JC40
39 2072 PTTFNQSKLNSFITQ X X Q8JQF8
40 * PVPADPPTAFNKDKL X X Q6JC40
41 * QGPIWAKIPETGAHF X X Q9YIJ1
42 2073 QYREIKSGSVDGSNA X X Q9YIJ1
43 * REIKSGSVDGSNANA X X Q9YIJ1
44 * RTTNPVATEQYGSVS X X spP03135
45 * SEEEIKTTNPVATEQ X X AAO88201.1
46 * SFITQYSTGQVSVEI X X spP03135
47 * SSFITQYSTGQVTVE X X Q9YIJ1
48 * SSVMLTSEEEIKTTN X X AAO88201.1
49 * SSYAHSQSLDRLMNP X X spP03135
50 * SVMLTSEEEIKTTNP X X AAO88201.1
51 2074 SYAHSQSLDRLMNPL X X spP03135
52 * TMSAGGGGPLGDNNQ X X Q9YIJ1
53 * TNPVATEEYGIVADN X X Q8JQF8
54 * TNPVATEQYGSVSTN X X spP03135
55 * TQTTGGTANTQTLGF X X Q8JQF8
56 * TTNPVATEQYGVVAD X X AAO88201.1
57 * VPADPPTAFNKDKLN X X Q6JC40
58 2075 VYSEPRPIGTRYLTR X X spP03135
59 * WNPEIQYTSNYNKSV X X spP03135
60 2076 YLQGPIWAKIPETGA X X Q9YIJ1
61 * YNNHQYREIKSGSVD X X Q9YIJ1
62 * YSSVMLTSEEEIKTT X X AAO88201.1
63 * YTSNYNKSVNVDFTV X X spP03135
64 * ADAEFQERLKEDTSF X spP03135
65 * AGPPKPKPNQQHQDQ X Q9YIJ1
66 * AGPSGLGSGTMAAGG X AAO88201.1
67 * ANNLTSTVQVFTDDD X Q9YIJ1
68 * CYRQQRVSTTTGQNN X Q8JQF8
69 * DPPTTFNQSKLNSFI X Q8JQF8
70 2077 DSSSGTGKAGQQPAR X spP03135
71 * DSTTTIANNLTSTVQ X Q9YIJ1
72 * EDTSFGGNLGRAVFQ X spP03135
73 * EEGAKTAPGKKRPVE X Q8JQF8
74 * EEGAKTAPTGKRIDD X Q9YIJ1
75 * EEIKTTNPVATESYG X Q6JC40
76 * EFENVPFHSSYAHSQ X Q6JC40
77 * EGAKTAPGKKRPVEP X Q8JQF8
78 * EGLREFLGLEAGPPK X Q9YIJ1
79 * EIQYTSNYYKSTNVD X AAO88201.1
80 * EKTNVDIEKVMITDE X spP03135
81 * ELQKENSKRWNPEIQ X spP03135
82 * ENSKRWNPEIQYTNN X Q9YIJ1
83 * ENVPFHSSYAHSQSL X Q6JC40
84 * EPDSSSGTGKAGQQP X spP03135
85 * EQLEAGDNPYLKYNH X Q9YIJ1
86 * EWELQKENSKRWNPE X spP03135
87 * GAKTAPGKKRPVEPS X Q8JQF8
88 * GEPPAGPSGLGSGTM X AAO88201.1
89 * GGTANTQTLGFSQGG X Q8JQF8
90 * GSEKTNVDIEKVMIT X spP03135
91 2078 GVVADNLQQQNAAPI X AAO88201.1
92 * GVYSEPRPIGTRYLT X spP03135
93 2079 HSSFAPSQNLFKLAN X Q9YIJ1
94 * HSSYAHSQSLDRLMN X spP03135
95 * IKNTPVPADPPTAFN X Q6JC40
96 * IKTTNPVATESYGQV X Q6JC40
97 * ILIKNTPVPADPPTA X Q6JC40
98 * IQYTSNYYKSNNVEF X Q6JC40
99 * IQYTSNYYKSTNVDF X AAO88201.1
100 * ITNEEEIKTTNPVAT X Q6JC40
101 * ITQYSTGQVSVEIEW X spP03135
102 2080 KDKLNSFITQYSTGQ X Q6JC40
103 * KNTPVPADPPTAFNK X Q6JC40
104 * KRWNPEIQYTSNYNK X spP03135
105 2081 KRWNPEIQYTSNYYK X Q6JC40
106 2082 LEAGDNPYLKYNHAD X Q9YIJ1
107 * LEAGPPKPKPNQQHQ X Q9YIJ1
108 * LGADTMSAGGGGPLG X Q9YIJ1
109 * LGLEAGPPKPKPNQQ X Q9YIJ1
110 * LIKNTPVPADPPTAF X Q6JC40
111 2083 LKYNHADAEFQEKLA X Q9YIJ1
112 * LQKENSKRWNPEIQY X spP03135
113 * LREFLGLEAGPPKPK X Q9YIJ1
114 * LYYLSRTNTPSGTTT X spP03135
115 * NEEEIKTTNPVATES X Q6JC40
116 * NKDKLNSFITQYSTG X Q6JC40
117 * NNSNFAWTAGTKYHL X Q8JQF8
118 * NPVATEQYGVVADNL X AAO88201.1
119 * NPVATESYGQVATNH X Q6JC40
120 2084 NSQGALPGMVWQNRD X Q8JQF8
121 * NTPVPADPPTAFNKD X Q6JC40
122 * NTPVPADPPTTFNQS X Q8JQF8
123 2085 PADPPTTFNQSKLNS X Q8JQF8
124 * PFHSSFAPSQNLFKL X Q9YIJ1
125 * PIGEPPAGPSGLGSG X AAO88201.1
126 2086 PPAGPSGLGSGTMAA X AAO88201.1
127 * PQILIKNTPVPADPP X Q6JC40
128 * PQYGYATLNRDNTEN X Q9YIJ1
129 * PSTSSDAEAGPSGSQ X Q9YIJ1
130 * PVATEQYGSVSTNLQ X spP03135
131 * PVEPDSSSGTGKAGQ X spP03135
132 * PVPADPPTTFNQSKL X Q8JQF8
133 * PVPGNITSFSDVPVS X Q9YIJ1
134 2087 PYLKYNHADAEFQEK X Q9YIJ1
135 * QILIKNTPVPADPPT X Q6JC40
136 * QRVSTTTGQNNNSNF X Q8JQF8
137 2088 QSGASNDNHYFGYST X spP03135
138 2089 QSTGGTAGTQQLLFS X AAO88201.1
139 * QVTVEMEWELKKENS X Q9YIJ1
140 2090 QYGVVADNLQQQNAA X AAO88201.1
141 * QYTSNYYKSNNVEFA X Q6JC40
142 * RQQRVSTTTGQNNNS X Q8JQF8
143 2091 RWNPEIQYTSNYYKS X Q6JC40
144 2092 SFAPSQNLFKLANPL X Q9YIJ1
145 * SGNWHCDSTWLGDRV X Q8JQF8
146 2093 SKRWNPEIQYTSNYY X Q6JC40
147 * SNYNKSVNVDFTVDT X spP03135
148 2094 SQSGASNDNHYFGYS X spP03135
149 2095 SRTNTPSGTTTQSRL X spP03135
150 * SSGNWHCDSTWLGDR X Q8JQF8
151 * SSGTGKAGQQPARKR X spP03135
152 * SSLGADTMSAGGGGP X Q9YIJ1
153 * SSQSGASNDNHYFGY X spP03135
154 * SSSGNWHCDSTWLGD X Q8JQF8
155 * STGGTAGTQQLLFSQ X AAO88201.1
156 * STTLSQNNNSNFAWT X AAO88201.1
157 2096 SYGQVATNHQSAQAQ X Q6JC40
158 2097 TANTQTLGFSQGGPN X Q8JQF8
159 * TEGVYSEPRPIGTRY X Q6JC40
160 2098 TEQYGVVADNLQQQN X AAO88201.1
161 * TESYGQVATNHQSAQ X Q6JC40
162 * TGGTAGTQQLLFSQA X AAO88201.1
163 2099 TGQNNNSNFAWTAGT X Q8JQF8
164 * TLNRDNTENPTERSS X Q9YIJ1
165 * TLSQNNNSNFAWTGA X AAO88201.1
166 * TNGVYSEPRPIGTRY X spP03135
167 * TNTPSGTTTQSRLQF X spP03135
168 * TNVDIEKVMITDEEE X spP03135
169 * TQSTGGTAGTQQLLF X AAO88201.1
170 * TQYSTGQVSVEIEWE X spP03135
171 * TQYSTGQVTVEMEWE X Q9YIJ1
172 * TSNYYKSNNVEFAVN X Q6JC40
173 * TSSDAEAGPSGSQQL X Q9YIJ1
174 * TTGGTANTQTLGFSQ X Q8JQF8
175 * TTLSQNNNSNFAWTG X AAO88201.1
176 2100 TTNPVATESYGQVAT X Q6JC40
177 * TTTGQNNNSNFAWTA X Q8JQF8
178 * TVEMEWELKKENSKR X Q9YIJ1
179 * VATEQYGVVADNLQQ X AAO88201.1
180 * VATESYGQVATNHQS X Q6JC40
181 * VATNHQSAQAQAQTG X Q6JC40
182 * VDIEKVMITDEEEIR X spP03135
183 * VDTNGVYSEPRPIGT X spP03135
184 * VEIEWELQKENSKRW X spP03135
185 * VNTEGVYSEPRPIGT X Q6JC40
186 * VQDSTTTIANNLTST X Q9YIJ1
187 * VSTTLSQNNNSNFAW X AAO88201.1
188 * VSTTTGQNNNSNFAW X Q8JQF8
189 * VTVQDSTTTIANNLT X Q9YIJ1
190 2101 WTGATKYHLNGRDSL X spP03135
191 2102 YAHSQSLDRLMNPLI X spP03135
192 * YATLNRDNTENPTER X Q9YIJ1
193 * YGYATLNRDNTENPT X Q9YIJ1
194 * YLSRTNTPSGTTTQS X spP03135
195 * YNKSVNVDFTVDTNG X spP03135
196 * YNNHLYKQISNGTSG X Q8JQF8
197 * YSTGQVTVEMEWELK X Q9YIJ1
198 2103 YTSNYYKSNNVEFAV X Q6JC40
199 * ASHKDDEEKFFPQSG X spP03135
200 * ASNDNHYFGYSTPWG X spP03135
201 * ATERFGTVAVNLQSS X O56137
202 * AVNLQSSSTDPATGD X O56137
203 * DAAALEHDKAYDQQL X Q6JC40
204 * DAEFQERLQEDTSFG X Q8JQF8
205 * DDEEKFFPQSGVLIF X spP03135
206 * EDSKPSTSSDAEAGP X Q9YIJ1
207 * EDVPFHSSYAHSQSL X spP03135
208 * EEEIKATNPVATERF X Q9WBP8
209 * EEVGEGLREFLGLEA X Q9YIJ1
210 * EEYGIVADNLQQQNT X Q8JQF8
211 * EFLGLEAGPPKPKPN X Q9YIJ1
212 * EHDKAYDQQLKAGDN X Q6JC40
213 * EHDKAYDRQLDSGDN X spP03135
214 * EIKATNPVATERFGT X Q9WBP8
215 * EPDSSAGIGKSGAQP X Q6JC40
216 * EPVNAADAAALEHDK X Q6JC40
217 * EPVNEADAAALEHDK X spP03135
218 * ERHKDDSRGLVLPGY X spP03135
219 * ESVPDPQPIGEPPAA X Q6JC40
220 * EVPFHSSFAPSQNLF X Q9YIJ1
221 * FHSSYAHSQSLDRLM X spP03135
222 * FNGLDKGEPVNAADA X Q8JQF8
223 * FNGLDKGEPVNEADA X spP03135
224 * GEPVNAADAAALEHD X Q6JC40
225 * GEPVNEADAAALEHD X spP03135
226 * GNGLDKGEPVNAADA X Q6JC40
227 * GSAHQGCLPPFPADV X spP03135
228 * GSSSGNWHCDSTWLG X Q8JQF8
229 * IGTVNSQGALPGMVW X Q8JQF8
230 * IQVKEVTTNDGVTTI X Q9WBP8
231 * LIKNTPVPADPPTTF X Q8JQF8
232 * LRTGNNFEFSYQFED X AAO88201.1
233 * NEADAAALEHDKAYD X spP03135
234 * NNNSEFAWPGASSWA X Q6JC40
235 * NNSEYSWTGATKYHL X spP03135
236 * NVGGQMATNNQSSTT X Q9YIJ1
237 * NYNDPQFVDFAPDST X Q9YIJ1
238 * PLGEPPATPAAVGPT X Q9WBP8
239 * PQPLGEPPATPAAVG X Q9WBP8
240 * PSKMLRTGNNFEFTY X Q9YIJ1
241 * PVATEEYGIVADNLQ X Q8JQF8
242 * PVEPSPQRSPDSSTG X Q8JQF8
243 * PVEQSPQEPDSSSGI X Q9WBP8
244 * PVNEADAAALEHDKA X spP03135
245 * PVPANPPAEFSATKF X Q9WBP8
246 * QQRVSTTLSQNNNSN X AAO88201.1
247 * QRVSKTKTDNNNSNF X Q9WBP8
248 * QRVSTTLSQNNNSNF X AAO88201.1
249 * QSSSTDPATGDVHVM X O56137
250 * QYTNNYNDPQFVDFA X Q9YIJ1
251 * RVSTTLSQNNNSNFA X AAO88201.1
252 * SDSEYQLPYVLGSAH X Q9WBP8
253 * SESVPDPQPIGEPPA X AAO88201.1
254 * SESVPDPQPLGEPPA X Q8JQF8
255 * SFVDHPPDWLEEVGE X Q9YIJ1
256 * SSNDNAYFGYSTPWG X Q6JC40
257 * SSSGIGKTGQQPAKK X Q9WBP8
258 * STTVTQNNNSEFAWP X Q6JC40
259 * SVPDPQPLGEPPAAP X Q8JQF8
260 * SVPDPQPLGEPPATP X Q9WBP8
261 * SYEFENVPFHSSYAH X Q6JC40
262 * SYTFEDVPFHSSYAH X spP03135
263 * TDEEEIKATNPVATE X Q9WBP8
264 * TDEEEIRTTNPVATE X spP03135
265 * TGNNFEFSYQFEDVP X AAO88201.1
266 * TMATGSGAPMADNNE X spP03135
267 * TNNYNDPQFVDFAPD X Q9YIJ1
268 * TNTMATGSGAPMADN X spP03135
269 * TPVPADPPTAFNKDK X Q6JC40
270 * TPVPADPPTTFSQAK X AAO88201.1
271 * TSTVQVFTDSEYQLP X spP03135
272 * TSVDFAVNTEGVYSE X Q8JQF8
273 * TVAVNLQSSSTDPAT X O56137
274 * VDFAVNTEGVYSEPR X Q8JQF8
275 * VEFAVNTEGVYSEPR X Q6JC40
276 * VLEPLGLVEEGAKTA X Q8JQF8
277 * VNVDFTVDTNGVYSE X spP03135
278 * VSVEIEWELQKENSK X spP03135
279 * WLEDNLSEGIREWWD X Q9WBP8
280 * YNEQLEAGDNPYLKY X Q9YIJ1
실시예 21: 사람 혈청에서 항-벡터 항체에 대한 추가 스크리닝
d5 Hexon, 섬유 및 펜톤 단백질 P04133, P11818 및 P12538 각각, 및 AAV VP1 서열 P03135, Q6JC40, Q8JQF8, Q9WBP8, Q9YIJ1, O56137, AAO88201.1, O41855, O56139 및 Q8JQG0에서 유래된 3285개의 환형 펩타이드 중에서 마이크로어레이 스크리닝을 통해 상위 5% 최대 IgG 신호 강도를 갖는 펩타이드를 얻었고, 스크리닝된 벡터 단백질 서열로부터의 상위 신호를 갖는 총 164개의 펩타이드를 얻었다. 상세한 내용은 하기 표 4에 나타낸다.
이 표는 본 발명의 기초로서 적합한 바이러스 펩타이드 서열의 또 다른 편집물을 제공한다. 제공된 소스는 UniProt ID 또는 GenBank ID이다. 별표(*)는 상기 표 2에서 서열번호가 이미 할당된 펩타이드 서열을 나타낸다.
펩타이드 # 서열번호 펩타이드 소스
1 2104 AAEAAAPAAQPEVE P12538
2 2105 AAAPAAQPEVEKPQ P12538
3 2106 DASEYLSPGLVQFA P04133
4 2107 DGLEFGSPNAPNTN P11818
5 2108 APVAAALGSPFDAP P12538
6 2109 NLEEEDDDNEDEVD P04133
7 2110 EEDDDNEDEVDEQA P04133
8 2111 DDNEDEVDEQAEQQ P04133
9 2112 VLQSSLGNDLRVDG P04133
10 2113 PSEDTFNPVYPYDT P11818
11 2114 FPVVGAELLPVHSK P12538
12 2115 EEIRPTNPVATEEY Q8JQG0
13 2116 SGSGAEENSNAAAA P12538
14 2117 YEEGPPPSYESVVS P12538
15 2118 NAAAAAMQPVEDMN P12538
16 2119 AAALGSPFDAPLDP P12538
17 2120 NGVLESDIGVKFDT P12538
18 2121 AAAMQPVEDMNDHA P12538
19 2122 PAQPASSLGADTMS Q9YIJ1
20 2123 TVQVFTDDDYQLPY Q9YIJ1
21 2124 PVPGNITSFSDVPV Q9YIJ1
22 2125 TQYSTGQVTVEMEW Q9YIJ1
23 2126 YLGPGNGLDRGEPV Q9YIJ1
24 2127 TSESETQPVNRVAY Q9YIJ1
25 2128 RARPSEDTFNPVYP P11818
26 2129 ATALEINLEEEDDD P04133
27 2130 ENSNAAAAAMQPVE P12538
28 2131 YLGPFNGLDKGEPV P03135
29 2132 NNFEFSYSFEDVPF Q8JQG0
30 2133 SFITQYSTGQVTVE Q9YIJ1
31 2134 YNKSVNVDFTVDTN P03135
32 2135 LGSPFDAPLDPPFV P12538
33 2136 PAAQPEVEKPQKKP P12538
34 2137 ENSKRWNPEIQYTN Q9YIJ1
35 2138 YLVDNKSTDVASLN P12538
36 2139 PPMMLIKNTPVPGN Q9YIJ1
37 2140 PVPADPPTTFSQAK AAO88201.1
38 2141 DTFNPVYPYDTETG P11818
39 2142 ITQYSTGQVTVEME Q9YIJ1
40 2143 AGNLTSQNVTTVSP P11818
41 2144 NNFTFSYTFEDVPF P03135
42 2145 WVLPSYNNHQYREI Q9YIJ1
43 2146 YLGPGNGLDKGEPV Q6JC40
44 2147 FLYSNIALYLPDKL P04133
45 2148 NSTGNMGVLAGQAS P04133
46 2149 YLKYNHADAEFQER P03135
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SEQUENCE LISTING <110> Ablevia biotech GmbH <120> Compound for increasing efficacy of viral vectors <130> R 78305 <160> 2190 <150> EP 20197898.8 <151> 2020-09-23 <170> BiSSAP 1.3 <210> 1 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable (VH) region <400> 1 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ile Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Gln Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Ser Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable (VL) region <400> 2 Ser Val Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Ser Leu Leu Ile Ser Ile Gly 1 5 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Met Glu 1 5 10 <210> 2143 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2143 Ala Gly Asn Leu Thr Ser Gln Asn Val Thr Thr Val Ser Pro 1 5 10 <210> 2144 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2144 Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe 1 5 10 <210> 2145 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2145 Trp Val Leu Pro Ser Tyr Asn Asn His Gln Tyr Arg Glu Ile 1 5 10 <210> 2146 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2146 Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro Val 1 5 10 <210> 2147 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2147 Phe Leu Tyr Ser Asn Ile Ala Leu Tyr Leu Pro Asp Lys Leu 1 5 10 <210> 2148 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2148 Asn Ser Thr Gly Asn Met Gly Val Leu Ala Gly Gln Ala Ser 1 5 10 <210> 2149 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2149 Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg 1 5 10 <210> 2150 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2150 Leu Ala Pro Lys Gly Ala Pro Asn Pro Cys Glu Trp Asp Glu 1 5 10 <210> 2151 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2151 Ile Gln Tyr Thr Asn Asn Tyr Asn Asp Pro Gln Phe Val Asp 1 5 10 <210> 2152 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2152 Ser His Gly Lys Thr Ala Lys Ser Asn Ile Val Ser Gln Val 1 5 10 <210> 2153 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2153 Val Ser Ala Ala Pro Val Ala Ala Ala Leu Gly Ser Pro Phe 1 5 10 <210> 2154 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2154 Gly Asn Asp Arg Leu Leu Thr Pro Asn Glu Phe Glu Ile Lys 1 5 10 <210> 2155 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2155 Leu Glu Ile Asn Leu Glu Glu Glu Asp Asp Asp Asn Glu Asp 1 5 10 <210> 2156 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2156 Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg 1 5 10 <210> 2157 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2157 Ala Ala Gly Gly Ala Ala Val Glu Gly Gly Gln Gly Ala Asp 1 5 10 <210> 2158 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2158 Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu Thr Thr Val Ala 1 5 10 <210> 2159 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2159 Glu Ala Met Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn 1 5 10 <210> 2160 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2160 Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly 1 5 10 <210> 2161 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2161 Asn Met Thr Lys Asp Trp Phe Leu Val Gln Met Leu Ala Asn 1 5 10 <210> 2162 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2162 Val Gly Ser Gly Thr Val Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met 1 5 10 <210> 2163 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2163 Glu Gln Tyr Gly Thr Val Ala Asn Asn Leu Gln Ser Ser Asn 1 5 10 <210> 2164 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2164 Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Lys Met Leu Arg Thr Gly Asn 1 5 10 <210> 2165 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2165 Ala His Ala Leu Asp Met Thr Phe Glu Val Asp Pro Met Asp 1 5 10 <210> 2166 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2166 Thr Met Ala Asn Gln Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys 1 5 10 <210> 2167 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2167 Lys Arg Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser 1 5 10 <210> 2168 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2168 Lys Thr Ala Asn Asp Asn Asn Asn Ser Asn Phe Pro Trp Thr 1 5 10 <210> 2169 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2169 Thr Gln Asn Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser 1 5 10 <210> 2170 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2170 Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn 1 5 10 <210> 2171 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2171 Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr 1 5 10 <210> 2172 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2172 Leu Asp Lys Gly Glu Pro Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala 1 5 10 <210> 2173 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2173 Val Leu Glu Pro Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr 1 5 10 <210> 2174 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2174 Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp 1 5 10 <210> 2175 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2175 Leu Gln Ser Ser Asn Thr Ala Pro Thr Thr Arg Thr Val Asn 1 5 10 <210> 2176 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2176 Ser Pro Pro Leu Lys Lys Thr Lys Ser Asn Ile Asn Leu Glu 1 5 10 <210> 2177 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2177 Leu Asp Lys Gly Glu Pro Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala 1 5 10 <210> 2178 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2178 Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu Phe 1 5 10 <210> 2179 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2179 Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr Gly Asp Ala Asp 1 5 10 <210> 2180 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2180 Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp 1 5 10 <210> 2181 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2181 Gln Tyr Gly Thr Val Ala Asn Asn Leu Gln Ser Ser Asn Thr 1 5 10 <210> 2182 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2182 Leu Ala Arg Pro Pro Ala Pro Thr Ile Thr Thr Val Ser Glu 1 5 10 <210> 2183 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2183 Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu 1 5 10 <210> 2184 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2184 Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 1 5 10 <210> 2185 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2185 Leu Arg Asn Asp Thr Asn Asp Gln Ser Phe Asn Asp Tyr Leu 1 5 10 <210> 2186 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2186 Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu Phe Glu Asn Val Pro Phe His 1 5 10 <210> 2187 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2187 Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Glu Met 1 5 10 <210> 2188 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2188 Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr Gly 1 5 10 <210> 2189 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2189 His Asp Ser Lys Leu Ser Ile Ala Thr Gln Gly Pro Leu Thr 1 5 10 <210> 2190 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide derived from viral capsid protein <400> 2190 Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp 1 5 10

Claims (16)

  1. 화합물로서,
    - 생물중합체 스캐폴드(biopolymer scaffold) 및 적어도
    - 하기 화학식의 제1의 펩타이드 n-머(peptide n-mer):
    P ( ― S ― P ) (n-1) 및
    - 하기 화학식의 제2의 펩타이드 n-머:
    P ( ― S ― P ) (n-1)
    를 포함하되,
    여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 6 내지 13개 아미노산의 서열 길이(sequence length)를 지닌 펩타이드이고, S는 비-펩타이드 스페이서(non-peptide spacer)이고,
    여기서, 각각의 펩타이드 n-머에 대해 독립적으로, n은 적어도 1, 바람직하게는 적어도 2, 보다 바람직하게는 적어도 3, 특히 적어도 4의 정수이고,
    여기서 펩타이드 n-머 각각은, 바람직하게는 링커(linker) 각각을 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합되고,
    여기서 각각의 경우에 독립적으로, P는 바이러스 벡터의 캡시드 단백질 서열의 적어도 6개의 아미노산 길이를 지닌 서열 단편을 포함하는 아미노산 서열을 가지고,
    임의로 여기서 서열 단편 중 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되는, 화합물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 바이러스 벡터는 아데노바이러스(adenovirus, AdV) 벡터 또는 아데노관련 바이러스(adeno-associated virus, AAV) 벡터인, 화합물.
  3. 제2항에 있어서,
    여기서 상기 서열 단편은:
    ETGPPTVPFLTPPF (서열번호 32), HDSKLSIATQGPL (서열번호 33), LNLRLGQGPLFINSAHNLDINY (서열번호 34), VDPMDEPTLLYVLFEVFDVV (서열번호 35), MKRARPSEDTFNPVYPYD (서열번호 36), ISGTVQSAHLIIRFD (서열번호 37), LGQGPLFINSAHNLDINYNKGLYLF (서열번호 38), SYPFDAQNQLNLRLGQGPLFIN (서열번호 39), GDTTPSAYSMSFSWDWSGHNYIN (서열번호 40), VLLNNSFLDPEYWNFRN (서열번호 41), HNYINEIFATSSYTFSYIA (서열번호 42), DEAATALEINLEEEDDDNEDEVDEQAEQQKTH (서열번호 43), INLEEEDDDNEDEVDEQAEQ (서열번호 44), DNEDEVDEQAEQQKTHVF (서열번호 45), EWDEAATALEINLEE (서열번호 46), PKVVLYSEDVDIETPDTHISYMP (서열번호 47), YIPESYKDRMYSFFRNF (서열번호 48), DSIGDRTRYFSMW (서열번호 49), SYKDRMYSFFRNF (서열번호 50), 및 FLVQMLANYNIGYQGFY (서열번호 51)의 AdV 서열 그룹, 또는
    WQNRDVYLQGPIWAKIP (서열번호 52), DNTYFGYSTPWGYFDFNRFHC (서열번호 53), MANQAKNWLPGPCY (서열번호 54), LPYVLGSAHQGCLPPFP (서열번호 55), NGSQAVGRSSFYCLEYF (서열번호 56), PLIDQYLYYL (서열번호 57), EERFFPSNGILIF (서열번호 58), ADGVGSSSGNWHC (서열번호 59), 서열번호 383 내지 1891, 서열번호 1892 내지 2063 및 서열번호 2064 내지 2103의 AAV 서열 그룹, 또는
    서열번호 2104 내지 2190로 확인되는 서열 그룹,
    으로부터 선택되는 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 9개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개의 연속되는 아미노산의 서열을 포함하는 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    P의 적어도 하나의 경우가 환형화된 펩타이드(circularized peptide)이고, 바람직하게는 여기서 모든 경우의 P 중 적어도 10%는 환형화된 펩타이드이거나, 보다 바람직하게는 모든 경우의 P 중 적어도 25%는 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 보다 바람직하게는 모든 경우의 P 중 적어도 50%는 환형화된 펩타이드이거나, 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P 중 적어도 75%는 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P 중 적어도 90%는 환형화된 펩타이드이거나, 심지어 모든 경우의 P 중 적어도 95%는 환형화된 펩타이드이고, 특히 모든 경우의 P는 환형화된 펩타이드인 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 Pa 또는 Pb이고,
    여기서 Pa는 바이러스 벡터의 캡시드 단백질 서열의 적어도 6개 아미노산 길이를 가진 제1의 서열 단편을 포함하는 아미노산 서열을 가지고, 임의로 여기서 서열 단편 중 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되고,
    여기서 Pb는 바이러스 벡터의 캡시드 단백질 서열의 적어도 6개 아미노산 길이를 가진 제2의 서열 단편을 포함하는 아미노산 서열을 가지고, 임의로 여기서 서열 단편 중 최대 3개, 바람직하게는 최대 2개, 가장 바람직하게는 적어도 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되고; 여기서,
    제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
    제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
    제1의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
    제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이거나;
    제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
    제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 인 화합물.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb가 동일한 캡시드 항원의 2개의 상이한 에피토프 또는 동일한 캡시드 에피토프의 2개의 상이한 에피토프 부분인 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    생물 중합체 스캐폴드가 알부민, 알파1-글로불린, 알파2-글로불린, 베타-글로불린 및 면역글로불린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 특히 여기서 생물중합체 스캐폴드가 합토글로빈 또는 트랜스페린, 특히 트랜스페린이거나; 또는 여기서 생물중합체 스캐폴드가 CD163 단백질에 특이적인 항체이거나, 또는 이의 CD163-결합 단편인 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화합물이 포유동물, 바람직하게는 사람, 비-사람 영장류(non-human primate), 양, 돼지, 개 또는 설치류에서 비-면역원성인 화합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    조성물이 사람에서 비-면역원성인 약제학적 조성물.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서,
    치료요법(therapy)에서 사용하기 위한 약제학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    개체에서 백신의 효능을 증가시키는데 사용되며,
    여기서 상기 백신은 바이러스 벡터를 포함하고,
    바람직하게는 여기서 상기 약제학적 조성물은 백신의 투여 전 또는 투여와 동시에 개체에게 투여되는 것인 약제학적 조성물.
  13. 제11항에 있어서,
    개체에서 유전자 치료요법 조성물의 효능을 증가시키는데 사용되며,
    여기서 상기 유전자 치료요법 조성물은 바이러스 벡터를 포함하고,
    바람직하게는 여기서 상기 약제학적 조성물은 유전자 치료요법 조성물의 투여 전 또는 투여와 동시에 개체에게 투여되는 것인 약제학적 조성물.
  14. 개체에 존재하는 하나 이상의 항체를 제거(sequestering)하는 방법으로서,
    제9항 또는 제10항에서 정의한 바와 같은 약제학적 조성물을 수득하는 단계; 및
    상기 약제학적 조성물을 상기 개체에게 투여하는 단계;
    를 포함하되,
    여기서 상기 조성물은 상기 개체에서 비-면역원성이고,
    여기서 상기 개체에 존재하는 하나 이상의 항체는 적어도 하나의 경우의 P에 대해, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적인, 방법.
  15. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물을 포함하고 바이러스 벡터 및 임의로 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 추가로 포함하는 백신 또는 유전자 치료요법 조성물.
  16. 백신 또는 유전자 치료요법 조성물로 치료가 요구되는 개체에서 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 사용하는 치료에 대한 면역 반응을 억제하는 방법으로서,
    제15항에서 정의한 바와 같은 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 수득하는 단계; 및
    상기 백신 또는 유전자 치료요법 조성물을 상기 개체에게 투여하는 단계;
    를 포함하여,
    여기서 상기 백신 또는 유전자 치료요법 조성물의 화합물이 상기 개체에서 비-면역원성인 방법.
KR1020237013901A 2020-09-23 2021-09-23 바이러스 벡터의 효능 증가를 위한 화합물 KR20230074775A (ko)

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