KR20230074552A - 중증 근무력증의 예방 또는 치료용 화합물 - Google Patents

중증 근무력증의 예방 또는 치료용 화합물 Download PDF

Info

Publication number
KR20230074552A
KR20230074552A KR1020237013930A KR20237013930A KR20230074552A KR 20230074552 A KR20230074552 A KR 20230074552A KR 1020237013930 A KR1020237013930 A KR 1020237013930A KR 20237013930 A KR20237013930 A KR 20237013930A KR 20230074552 A KR20230074552 A KR 20230074552A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
peptide
sadc
prt
artificial sequence
mer
Prior art date
Application number
KR1020237013930A
Other languages
English (en)
Inventor
오스카 슴즈카
베티나 완코
Original Assignee
아블레비아 바이오테크 게엠베하
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 아블레비아 바이오테크 게엠베하 filed Critical 아블레비아 바이오테크 게엠베하
Publication of KR20230074552A publication Critical patent/KR20230074552A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
    • C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
    • C07K17/06—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/644—Transferrin, e.g. a lactoferrin or ovotransferrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70571—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/79—Transferrins, e.g. lactoferrins, ovotransferrins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/64—Cyclic peptides containing only normal peptide links

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Reciprocating, Oscillating Or Vibrating Motors (AREA)
  • Devices For Conveying Motion By Means Of Endless Flexible Members (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

본 발명은 MG의 병인에 관여하는 항 사람 근육 니코틴성 아세틸콜린 수용체(AChR) 자가항체의 제거를 위한 화합물을 제공한다. 본 화합물은 불활성 생물중합체 스캐폴드 및 6 내지 13개 아미노산의 서열 길이를 지닌 적어도 2개의 펩타이드를 포함하고, 여기서, 각각의 펩타이드는 독립적으로 AChR 주요 면역원성 영역(MIR) 에피토프 또는 미모토프를 포함하는 아미노산 서열을 포함한다. 또한, 본 화합물을 포함하는 약제학적 조성물뿐만 아니라 개체에 존재하는 하나 이상의 항체를 제거하는 방법이 제공된다.

Description

중증 근무력증의 예방 또는 치료용 화합물
본 발명의 분야는 중증 근무력증(myasthenia gravis; MG)의 치료요법에 관한 것이다.
MG는 자가항체(autoantibody)에 의해 매개되는 자가면역 신경근 장애로 경미한 근육 약화에서 호흡 문제를 동반한 생명을 위협하는 근무력증 위기까지 다양한 임상 증상을 유발한다. 근무력증 환자의 약 80%는 시냅스 후 막의 보체 매개 손상(Howard 2018), 직접적인 AChR 차단 또는 수용체 엔도사이토시스(endocytosis)를 초래하는 항 니코틴성 아세틸콜린 수용체(acetylcholine receptor; AChR) 항체를 발생시킨다. 이러한 질병 유발 자가항체는 주로 정의된 면역원성 영역 AChR 또는 MuSK로 안내된다(Ruff 2018). 이들은 기능적으로 특성이 잘 규명된 질병 유발 자가항체의 좋은 예이다. 또한 유사한 항-AChR 자가항체가 자가면역 자율신경절병증(Nakane 등, 2018) 또는 모르반 증후군(Masood 2021) 또는 부종양 증후군(Joubert 등, 2015에서 검토됨)과 같은 희귀 신경면역학적 병태(자가면역 채널병증으로 요약됨; Huang 등, 2019)에서 관찰되었다. 주요 면역원성 영역(main immunogenic region; MIR)은 사람 MG 및 랫트 실험적 자가면역 MG에서 근육 AChR에 대한 자가항체의 절반 이상의 표적이 되는 근육 니코틴성 AChR의 α1 서브유닛의 세포외 정점에 있는 형태 의존적 영역이다(Luo 등, 2009).
일반적인 면역 억제 또는 B 세포 표적 전략이 MG에 대해 존재하지만, 일반적으로 코르티코이드, IVIG, 흉선 절제술 또는 혈장 교환에 의한 면역 억제 치료 중 어느 것도 만족스럽지 않기 때문에, (특히 근무력증 위기에서) 질병을 유발하는 항체(모든, 대부분 보호 항체가 아님)만 빠르게 불활성화되거나 고갈되는 전략이 필요하다. 지금까지 MG에서 질병을 유발하는 항체를 신속하고 선택적으로 고갈시키거나 중화시킬 수 있는 편리한 치료 개입이 존재하지 않았다.
Rey 등은 조합 라이브러리를 사용하여 MG 환자의 말초 혈액에서 사람 항-아세틸콜린 수용체 단일클론 자가항체의 특성화에 관한 것이다.
Trinh 등, 2014는 Torpedo AChR의 MIR의 39개 아미노산 펩타이드 모방체의 설계, 합성 및 특성화에 관한 것이다.
Yoshikawa, 등, 1997은 화합물 FK506으로 랫트 실험적 자가면역 MG의 유도를 방지하는 것에 관한 것이다. FK506은 스트렙토미세스 추쿠바엔시스(Streptomyces tsukubanesis)에서 분리한 매크롤라이드 화합물이다. 이 화합물은 헬퍼 T 세포 활성화의 선택적 억제에 의해 야기되는 강력한 면역억제 특성을 갖는 것으로 개시한다.
WO 2018/049053 A2는 MG 진단 및 치료를 위한 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것이다. 중화 복합체를 형성하기 위해 대상체에서 순환하는 자가항체에 결합하기 위해 펩타이드가 MG를 갖는 대상체에게 투여될 수 있다는 것이 개시되어 있다. 중화 복합체는 친화성 혈장반출법으로 제거할 수 있다.
US 5 578 496 A는 특히 MG와 관련된 자가항체의 검출 및 자가면역 질환, 특히 MG의 치료에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 이 문헌은 합성 펩타이드가 관용원성("관용원성 중합체")이 되게 한다고 주장되는 중합체에 공유결합으로 부착된 변형된 펩타이드의 구성 방법 및 자가면역 질환 및 알레르기 반응 및 이식 거부와 같은 기타 원치 않는 반응의 치료에 이러한 변형된 합성 펩타이드의 용도를 개시한다. 관용원성 중합체는 예를 들어 모노메톡시폴리에틸렌 글리콜(mPEG), 폴리비닐 알코올(PVA) 또는 덱스트란과 같은 다당류가 개시되어 있다.
EP 2 698 386 A1은 MG에 관련된 자가항체와 같은 자가항체를 특이적으로 억제한다고 주장되는 융합 단백질에 관한 것이다. 융합 단백질은 자가항체에 대한 결합 부위와 항체 의존성 세포 독성을 나타내는 항체 중쇄 불변 영역의 단편을 포함한다.
비선택적 B 세포 표적화 또는 면역치료적 접근법은 아직 MG 치료를 위한 확립된 치료 옵션이 아니다. 대안적으로, 질병 유발 항체에 대한 간접 또는 직접 표적 접근법을 사용하여 MG에서 질병 유발 항체를 표적으로 하는 체내 및 체외 선택적 항체 고갈 또는 B 세포 억제 전략이 거의 제안되지 않았다(예: Homma 2017 및 Lazaridis 2017 참조). 또한, 보조 AChR 백신을 사용하는 AChR 특이적 면역 억제 요법이 제안되었다(Luo 2015). 그러나, 비교적 효과적이고 안전하며 신속하게 작용하는 선택적 항체 고갈 요법에 대한 시급한 요구가 남아있다.
따라서 본 발명의 목적은 MG 치료요법에 사용되는 MG-관련 자가항체의 선택적 고갈을 위한 화합물 및 방법을 제공하는 것이다. 바람직하게는, 이들 화합물 및 방법은 공지된 MG 치료요법과 비교할 때보다 효과적이고 안전하며(즉, 부작용이 적음) 및/또는 보다 신속하게 작용한다.
본 발명은
- 생물중합체 스캐폴드(biopolymer scaffold) 및 적어도
- 하기 화학식의 제1의 펩타이드 n-머(peptide n-mer):
P ( ― S ― P ) (n-1) 및
- 하기 화학식의 제2의 펩타이드 n-머:
P ( ― S ― P ) (n-1)
를 포함하는 화합물(전형적으로 개체에게 존재하는 항체, 특히 항 니코틴성 AChR 항체의 제거 또는 고갈)을 제공한다.
각각의 경우에 독립적으로, P는 6 내지 13개의 아미노산 서열 길이를 지닌 펩타이드이고, S는 비-펩타이드 스페이서(non-peptide spacer)이다. 각각의 펩타이드 n-머에 대해 독립적으로, n은 적어도 1, 바람직하게는 적어도 2, 보다 바람직하게는 적어도 3, 특히 적어도 4의 정수이다. 펩타이드 n-머 각각은, 바람직하게는 각각의 링커(linker)를 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합된다. 또한, 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호: 1-100(하기 표 1에 열거된 바와 같음), 서열번호: 101-200(하기 표 2에 열거된 바와 같음) 및 서열번호: 201-206(하기 표 3에 열거된 바와 같음)로부터 선택된 (바람직하게는 사람 니코틴성 AChR MIR-유래) 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개의 연속되는 아미노산을 포함한다. 임의로, 서열 단편의 최대 2개, 바람직하게는 최대 상기 아미노산 서열의 하나의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다.
바람직하게는, P의 적어도 하나의 경우는 Pa이고/이거나, P의 적어도 하나의 경우는 Pb이다. Pa는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 13개 아미노산의 서열 길이로 정의된 펩타이드(즉, 정의된 서열의 펩타이드)이고, Pb는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 13개 아미노산의 서열 길이로 정의된 펩타이드(즉, 정의된 서열의 펩타이드)이다.
본 발명은 또한,
- 생물중합체 스캐폴드 및 적어도
- 화학식 P a - S - P a 또는 P a - S - P b 의 펩타이드 이량체인 제1의 펩타이드 n-머를 포함하는 화합물을 제공하며,
여기서 Pa는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 9개 아미노산의 서열 길이로 정의된 펩타이드(즉, 정의된 서열의 펩타이드)이고, Pb는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 13개 아미노산의 서열 길이로 정의된 펩타이드(즉, 정의된 서열의 펩타이드)이고, S는 비-펩타이드 스페이서이고, 여기서 제1의 펩타이드 n-머는, 바람직하게는 링커를 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합되어 있다. Pa는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206로부터 선택된 (바람직하게는 사람 니코틴성 AChR MIR-유래) 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개의 연속되는 아미노산을 포함한다.
이 화합물은 바람직하게는 화학식 P b - S - P b 또는 P a - S - P b 의 펩타이드 이량체인 제2의 펩타이드 n-머를 추가로 포함하고, 여기서 제2의 펩타이드 n-머는, 바람직하게는 링커를 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합된다. Pb는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206로부터 선택된 (바람직하게는 사람 니코틴성 AChR MIR-유래) 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개의 연속되는 아미노산을 포함한다.
또한, 본 발명은 전술한 화합물 중 임의의 하나 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 바람직하게는, 이 약제학적 조성물은 치료요법에 사용하기 위한 것이며, 특히 MG, 개체에서 특히 일과성 신생아 MG(transient neonatal MG), 또는 자가면역 자율신경절병증(autoimmune autonomic ganglionopathy) 또는 모르반 증후군(Morvan syndrome)과 같은 자가면역 채널병증(autoimmune channelopathy), 또는 부종양 증후군(paraneoplastic neurological syndrome)의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 것이다.
또 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 정의된 약제학적 조성물(조성물은 개체에서 비-면역원성임)을 수득하는 단계; 및 약제학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에 존재하는 하나 이상의 항체(여기서, 개체에 존재하는 하나 이상의 항체가 적어도 하나의 경우의 P에 대해, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적임)를 제거(또는 고갈)시키는 방법을 제공한다.
심지어 여전히 다른 양태에서, 본 발명은 본원에 정의된 약제학적 조성물을 수득하는 단계, 및 약제학적 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 개체에서 MG(또는 자가면역 자율신경절병증 또는 모르반 증후군과 같은 자가면역 채널병증 또는 부종양 증후군)를 개선 또는 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 과정에서, 생체 내에서 MG-관련 자가항체를 고갈(또는 제거)할 수 있고 따라서 MG 치료요법에 적합한 화합물이 개발되었다.
또한, 놀랍게도 본 발명에서도 사용되는 접근법이 개체에서 바람직하지 않은 항체의 역가를 감소시키는데 특히 효과적이라는 것이 밝혀졌다. 특히, 이 화합물은 생체 내 모델에서 선택성, 역가 감소 기간 및/또는 역가 감소 수준과 관련하여 특히 우수한 결과를 달성하였다(실험예 참조) 또한, 본 발명 과정에서 공지된 MG 자가항체에 특히 효율적으로 결합하는 선형 및 환형 미모토프(mimotope) 및 에피토프가 발견되었다(특히 실시예 14 및 15 참조). 이들은 본 발명의 화합물에 사용하기에 특히 적합하다.
하기 상세한 설명은 명시적으로 제외되지 않는 한 본 발명의 상기 측면 모두에 관한 것이다.
일반적으로, 항체는 세균, 바이러스, 진균 또는 기생충을 포함하는 외부 유기체에 의한 감염으로부터의 보호를 제공하는, 체액성 면역계의 필수 구성 성분이다. 그러나, 자가면역 질환, 기관 이식(organ transplantation), 수혈(blood transfusion) 또는, 생물분자 약물 또는 유전자 전달 벡터(gene delivery vector)의 투여시를 포함하는 - 특정의 상황하에서, 항체는 환자 자신의 신체(또는 바로 투여된 외부 조직 또는 세포 또는 생물분자 약물 또는 벡터)를 표적화함으로써, 유해하거나 질환을 유발하는 실체가 될 수 있다. 특정의 항체는 또한 진단 영상용 프로브(probe)를 방해할 수 있다. 이하에서, 이러한 항체는 일반적으로 "목적하지 않은 항체(undesired antibody)" 또는 "바람직하지 않은 항체(undesirable antibody)"로 지칭된다.
거의 예외없이, 목적하지 않은 항체의 선택적인 제거는 임상 실시에 도달하지 않았다. 이는 현재 매우 적은 증상(indications)에 한정된다: 선택적인 항체 제거에 대한 공지된 기술 중 하나(광범위하게 확립되어 있지 않다고 해도)는 면역채집술(immunoapheresis)이다. 면역채집술(이는 면역글로불린을 제거한다)과는 대조적으로, 선택적인 면역채집술은 이의 항원 결합 부위에 대한 선택적인 결합을 기반으로 목적하지 않은 항체를 고갈시킬 체외의, 선택적인 항체-흡수제 카트릿지(antibody-absorber cartridge)를 통한 혈장의 여과를 포함한다. 선택적인 면역채집술은 예를 들면, ABO-양립할 수 없는 이식(ABO-incompatible transplantation) 전에 또는 수혈의학의 처방과 관련하여 혈액으로부터 항-A 또는 항-B 항체를 제거하는데 사용되어 왔다(Teschner 등). 선택적인 채집술은 또한 다른 처방, 예를 들면, 신경면역학적 처방(Tetala 등) 또는 MG(Lazaridis 등)에서 실험적으로 적용되었으나, 임상 실무에서 아직 확인되지 않고 있다. 선택적인 면역채집술이 단지 주저하며 적용되는 한가지 이유는 이것이 비용 집약적이고 전문화된 의학적 보호를 필요로하는 복잡한 중재 과정이라는 사실이다. 더욱이, 목적하지 않은 항체를 신속하게 및 효율적으로 고갈시키는 방법이 선행 기술에 알려져 있지 않다.
채집술(apheresis)과는 별도로, 모리모토(Morimoto) 등은 펩타이드 및 펩티도미메틱 리간드(peptidomimetic ligand), 예를 들면, FLAG 펩타이드의 면역글로불린-결합 친화성을 증진시키기 위한 일반적으로 적용가능한 다가 스캐폴드(miltivalent scaffold)로서의 덱스트란을 개시하고 있다. 제WO 2011/130324 A1호는 세포 손상의 예방용 화합물에 관한 것이다. 제EP 3 059 244 A1호는 C-met 단백질 효능제에 관한 것이다.
언급한 바와 같이, 채집술은 체외적으로 적용된다. 대조적으로, 또한 바람직하지 않은 항체를 고갈시키기 위한 수개의 접근법이, 대부분이 자가항체 또는 항-약물 항체를 포함하는 특정의 자가면역 질환과 관련하여, 선행 기술에서 제안되었다:
로렌츠(Lorentz) 등은 적혈구를 항원-특이적인 T 세포의 고갈을 유발하는 면역허용원성 페이로드를 사용하여 반응계내(in situ)에서 충전시키는 기술을 개시하고 있다. 이는 모델 항원에 대해 목적하지 않은 체액성 반응의 감소를 궁극적으로 초래하는 것으로 추정된다. 유사한 시도는 피쉐샤(Pishesha) 등에 제안되어 있다. 이러한 시도에서, 적혈구는 표면에 공유결합으로 결합된 펩타이드-항원 작제물로 생체외(ex vivo)에서 로딩되고 일반적인 면역내성 유도를 위해 동물 모델로 재주사된다.
제WO 92/13558 A1호는 면역원의 특이적인 B 세포 결합능을 지니고, 개체에게 도입된 경우, 면역원에 대해 체액성 아네르기(humoral anergy)를 유도하는 안정한 비면역원성 중합체 및 면역원의 유사체의 접합체(conjugate)에 관한 것이다. 따라서, 이러한 접합체는 외부- 또는 자가-면역원에 의해 유발된 항체-매개된 병리학을 치료하는데 유용한 것으로 개시되어 있다. 이와 관련하여, 또한 제EP 0 498 658 A2호를 참고한다.
탓데오(Taddeo) 등은 오브알부민(ovalbumin) 모델 항원에 융합된 항-CD138 항체 유도체를 사용하여 항체를 생산하는 혈장 세포를 선택적으로 고갈시킴으로써 모델 항원에 대해 항체를 발현하는 이러한 세포내에서 선택적으로 시험관내(in vitro)에서 수용체 가교결합 및 세포 자살을 유도하는 것을 개시하고 있다.
Apitope International NV(벨기에)는 현재 내성을 유발함으로써, 항체 반응을 억제하는 항원 제시 세포(antigen presenting cell)로부터 공-자극성 분자의 낮은 수준의 발현을 초래할 수 있는 가용성의 면역허용원성 T-세포 에피토프 펩타이드를 개발 중에 있다(참고: 예컨대, Jansson 등). 이러한 생성물(product)은 현재 예컨대, 다발경화증(multiple sclerosis), 그레이브스 질환(Grave's disease), 중간 포도막염(intermediate uveitis), 및 다른 자가면역 병태(autoimmune condition) 뿐만 아니라 인자 VIII 내성에 있어서, 전임상 및 조기 임상 평가 하에 있다.
유사하게, 문헌 [Selecta Biosciences, Inc. (USA)]은 현재 소위 합성 백신 입자(Synthetic Vaccine Particles)(SVPs)에 의한 내성 유도 전략을 추구하고 있다. SVP-라파마이신은 조절성 T 세포를 선택적으로 유도함을 통해 목적하지 않은 항체 생산을 방지함으로써 내성을 유도하는 것으로 제안되어 있다(참고: Mazor 등)
민고찌(Mingozzi) 등은 항체를 흡수하지만 표적 세포로 도입할 수 없는 데코이(decoy) 아데노-관련 바이러스(adeno-associated virus)(AAV) 캡시드를 개시하고 있다.
제WO 2015/136027 Al호는 항-MAG(myelin-associated glycoprotein) IgM 항체에 결합하는 최소의 사람 천연 킬러-1(Human Natural Killer-1)(HNK-1) 에피토프를 제시하는 탄수화물 리간드, 및 진단시 뿐만 아니라 항-MAG 신경병증(neuropathy)의 치료를 위한 이의 용도를 개시하고 있다. 제WO 2017/046172 Al호는 신경학적 질환과 관련된 항-글리칸 항체에 의해 결합된 신경계의 글리코스핑고리피드(glycosphingolipid)가 포함하는 당에피토프를 모사(mimicking)하는 추가의 탄수화물 리간드 및 모이어티(moiety)를 개시하고 있다. 이러한 문헌은 또한 진단 뿐만 아니라 항-글리칸 항체와 관련된 신경학적 질환의 치료를 위한 이러한 탄수화물 리간드/모이어티(moiety)의 용도에 관한 것이다.
제US 2004/0258683 Al호는 전신 홍반 루푸스(systemic lupus erythematosus)(SLE), 예를 들면, 신장 SLE를 치료하는 방법 및 SLE를 지닌 개체에서 신장 플래어(renal flare)의 위험을 감소시키는 방법을 개시하고 있다. 신장 SLE를 포함하는 SLE를 치료하고 SLE를 지닌 개체에서 신장 플래어의 위험을 감소시키는 하나의 개시된 방법은 항-이중 가닥 DNA(dsDNA) 항체, 예를 들면, 에피토프-제시 담체(epitope-presenting carrier) 또는 에피토프-제시 원자가 플랫폼 분자 (epitope-presenting valency platform molecule) 형태에서와 같은 dsDNA 에피토프를 개인에게 투여함을 포함한다.
미국 특허 제5,637,454호는 자가면역 질환의 검정 및 치료에 관한 것이다. 치료에 사용된 제제는 확인된 항원성의, 분자 미미크리 서열(molecular mimicry sequence)에 대해 상동성인 펩타이드를 포함할 수 있다. 이러한 펩타이드는 환자에게 전달되어 특수한 특이성을 지닌 순환하는 항체의 양을 감소시킬 수 있음이 개시되어 있다.
제US 2007/0026396 A1호는 감기-내성을 유발하는, 항체에 대해 지시된 펩타이드, 및 이의 용도에 관한 것이다. 개시된 펩타이드를 사용함으로써, 목적하지 않은 자가항체의 생체내 또는 생체외 중화가 가능함이 교시되어 있다. 비교가능한 접근법은 제WO 1992/014150 A1호 또는 제WO 1998/030586 A2호에 개시되어 있다.
제WO 2018/102668 A1호는 질환-유발 또는 달리 목적하지 않은 항체의 선택적인 분해를 위한 융합 단백질을 개시하고 있다. 융합 단백질("Seldeg"로 명명됨)은 거의 중성 pH에서 세포 표면 수용체 또는 다른 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 표적화 구성성분, 및 표적화 구성성분에 직접 또는 간접적으로 융합된 항원 구성성분을 포함한다. 또한 표적 항원-특이적인 항체에 특이적으로 결합하도록 구성된 항원 구성성분을 갖는 Seldeg를 환자에게 투여함으로써 환자로부터 표적 항원-특이적인 항체를 고갈시키는 방법이 개시되어 있다.
제WO 2015/181393 A1호는 해바라기 트립신 억제제(sunflower_trypsin-inhibitor-)(SFTI-) 및 사이클로타이드-기반 스캐폴드(cyclotide-based 스캐폴드) 내로 이식된 펩타이드에 관한 것이다. 이러한 펩타이드, 예를 들면, 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis)에서 자가항체를 차단하고 염증(inflammation) 및 통증(pain)을 억제하는 것으로 밝혀진 SFTI 스캐폴드 내로 이식된 시트룰린화된 (citrullinated) 피브리노겐 서열은 자가면역 질환에 효과적인 것으로 개시되어 있다. 이러한 스캐폴드는 비-면역원성인 것으로 개시되어 있다.
에를랜드슨(Erlandsson) 등은 항-이디오타입 항체(anti-idiotypic antibody) 및 이의 유도체를 생체내(in vivo)에서 청소하는 것(clearing)을 개시하고 있다.
Berlin Cures Holding AG(독일)는 고 투여량에서 자가항체의 항원 결합 영역에 대한 경쟁적 결합에 의해 자가항체를 차단하는 것으로 제안된 확장성 심근병증(dilated cardiomyopathy) 및 다른 GPCR-자가항체 관련 질환(GPCR-autoantibody related disease)의 치료를 위한 정맥내 광범위한 스펙트럼의 중화제 DNA 압타머(neutralizer DNA aptamer)(참고: 예컨대, 제WO 2016/020377 A1호 및 제 WO 2012/000889 A1호)를 제시하였다. 일반적으로, 압타머는 아직 돌파구를 달성하지 않았으며 여전히 임상 개발의 예비 단계에 있다. 주요 관심은 여전히 생물안정성 및 생이용가능성, 구속, 예를 들면, 뉴클레아제 민감성, 독성, 작은 크기 및 신장 청소(renal clearance)이다. 선택적인 항체 길항제로서 이의 용도와 관련된 특수한 문제는 선천성 면역 반응을 자극하는 이의 경향성이다.
제WO 00/33887 A2호는 항체, 특히 질환-관련된 항체의 순환 수준을 감소시키는 방법을 개시하고 있다. 방법은 유효량의 에피토프-제시 담체를 개체에게 투여함을 개시하고 있다. 또한, 에피토프-제시 담체를 사용하는 항체의 순환하는 수준을 감소시키기 위한 생체외 방법이 개시되어 있다.
제US 6,022,544 A호는 포유동물에게 고 분자량 면역자극성 분자가 없는 비-면역원성 작제물을 투여함으로써 포유동물에서 목적하지 않은 항체 반응을 감소시키는 방법에 관한 것이다. 작제물(contruct)은 약제학적으로 허용되는 비-면역원성 담체에 결합된 B 세포 막 면역글로불린 수용체 에피토프의 적어도 2개의 카피를 함유하는 것으로 개시되어 있다.
그러나, 선행 기술에 개시된 체내적으로 바람직하지 않은 항체를 고갈시키려는 접근법은 많은 단점을 갖는다. 특히, 이들 중 어느 것도 정식 임상용으로 승인되지 않았다.
본 발명에 사용된 생물중합체 스캐폴드는 포유동물 생물중합체, 예를 들면, 사람 생물중합체, 비-사람 영장류 생물중합체, 양(sheep) 생물중합체, 돼지 생물중합체, 개 생물중합체 또는 설치류 생물중합체일 수 있다. 특히, 생물중합체 스캐폴드는 단백질, 특히 (비-변형된 또는 이의 아미노산 서열과 관련하여 비-변형된) 혈장 단백질이다. 바람직하게는, 생물중합체 스캐폴드는 포유동물 단백질, 예를 들면, 사람 단백질, 비-사람 영장류 단백질, 양 단백질, 돼지 단백질, 개 단백질 또는 설치류 단백질이다. 전형적으로, 생물중합체 스캐폴드는 바람직하게는 건강한(사람) 개인의 혈장내에서 순환하고 예컨대, 효율적으로 스캐빈징(scavenging)되거나 스캐빈징 수용체(scavenging receptor)에 의해 재순환될 수 있는, 예컨대, 골수 세포 또는 간 동모양 혈관 내피 세포(liver sinusoidal endothelial cell)에 존재하는 비-면역원성 및/또는 비-독성 단백질이다(참고: Sorensen 등, 2015).
특수한 선호도에 따라서, 생물중합체 스캐폴드는 바람직하게는 면역글로불린, 알파-글로불린, 알파2-글로불린 및 베타-글로불린, 특히 면역글로불린 G, 헤파토글로빈 및 트랜스페린으로 이루어진 그룹으로부터 선택된, (바람직하게는 사람) 글로불린이다. 특히 헤파토글로빈은, 실시예 5 내지 9에 나타낸 바와 같은, 수 개의 유리한 특성, 특히 유리한 안전성 프로파일을 갖는다.
생물중합체 스캐폴드는 또한 (바람직하게는 사람) 알부민, 헤모펙신, 알파-1-항트립신, C1 에스테라제 억제제, 락토페린 또는 전술한 단백질, 예를 들면, 글로불린 모두의 비-면역원성(즉, 치료될 개체에서 비-면역원성) 단편일 수 있다.
또 다른 선호도에서, 생물중합체 스캐폴드는 항-CD163 항체(즉, CD163 단백질에 특이적인 항체) 또는 이의 CD163-결합 단편이다.
사람 CD163(Cluster of Differentiation 163)은 리간드 결합을 담당하는 9개의 스캐빈저 수용체 시스테인 풍부(scavenger receptor cysteine-rich, SRCR) 도메인으로 구성된 세포외 부분을 가지는 130kDa 막 당단백질(이전에는 M130이라고 함) 및 프로토타입 클래스 I 스캐빈저 수용체이다. CD163은 대식세포 및 단핵구에 존재하는 세포내 이입 수용체(endocytic receptor)이며,혈액에서 헤모글로빈/합토글로빈 복합체를 제거하지만 항염증 과정과 상처 치유에도 역할을 한다. CD163의 가장 높은 발현 수준은 조직 대식세포(예: 간의 쿠퍼 세포)와 비장 및 골수의 특정 대식세포에서 발견된다. 조직 및 세포 특이적인 발현과 바람직하지 않은 항체의 고갈과는 전혀 관련이 없기 때문에, CD163은 예컨대, 면역독소, 리포좀 또는 기타 치료 화합물 부류의 약물 전달을 위한 대식세포 표적으로 간주된다(Skytthe 등, 2020).
모노클로날 항-CD163 항체 및 이들이 결합하는 SRCR 도메인은 예를 들어 Madsen 등, 2004, 특히 도 7에 개시되어 있다. 추가의 항-CD163 항체 및 이의 단편은 예를 들어 제WO 2002/032941 A2호 또는 제WO 2011/039510 A2호에 개시되어 있다. 도메인 특이적 항체, 예를 들어 모노클로날 항체(mAb) EDhu1를 사용하여 적어도 2개의 구조적으로 다른 리간드 결합 부위가 매핑되었다 (Madsen 등, 2004 참조). 이 항체는 CD163의 세 번째 SRCR에 결합하고 CD163에 결합하는 헤모글로빈/합토글로빈과 경쟁한다. SRCR 도메인 1, 3, 7 및 9를 각각 표적으로 하는 Mac2-158, KiM8, GHI/61 및 RM3/1을 포함하여 CD163의 다른 도메인에 대한 수많은 다른 항체가 이전에 문헌에 기술되었다. 또한, 보존된 박테리아 결합 부위가 매핑되었고 특정 항체가 박테리아 결합을 억제할 수 있지만 헤모글로빈/합토글로빈 복합체 결합은 억제할 수 없으며 그 반대도 가능하다는 것이 입증되었다. 이는 CD163의 다양한 결합 방식과 리간드 상호작용을 지시한다 (Fabriek 등, 2009; 또한, 그 인용 참조).
바람직하지 않은 항체의 고갈과는 전혀 관련이 없이, 그의 생리학적 특성 때문에 CD163은 세포 특이적 약물 전달의 표적으로 제안되었다. 종양 관련 대식세포는 현재 CD163 표적화의 잠재적 이점이 탐구되는 주요 표적 중 하나이다. 놀랍게도, 수많은 종양 및 악성종양이 CD163 발현 수준과 상관관계가 있는 것으로 나타났으며, 이는 종양 치료를 위한 이 표적의 사용을 뒷받침한다. 다른 제안된 응용에는 만성 염증 및 신경염증에서 항약물 결합체(ADC)에 의한 CD163 표적화가 포함된다 (Skytthe 등, 2020에서 검토됨). 따라서, 특히 덱사메타손 또는 스텔스 리포솜 접합체를 사용한 ADC에 의한 CD163 표적화는 현재 연구되고 있는 치료 원리를 나타낸다(Graversen 등, 2012; Etzerodt 등, 2012).
이러한 맥락에서, 항-CD163 항체가 생체 내에서 적용될 때 엔도사이토시스(endocytosis)에 의해 신속하게 내재화될 수 있음을 나타내는 참고 문헌이 있다. 이는 예를 들어 모노클로날 항체(mAb) Ed-2(Dijkstra 등, 1985; Graversen 등, 2012) 또는 mAb Mac2-158/KN2/NRY(Granfeldt 등, 2013)에 대해 나타났다. 본 발명(특정 실시예 섹션 참조)의 과정에서 이루어진 관찰과 조합된 이러한 관찰에 기초하여, 항-CD163 항체 및 CD163-결합은 바람직하지 않은 항체의 고갈/제거를 위한 매우 적합한 생물중합체 스캐폴드인 것으로 밝혀졌다.
수많은 항-CD163 항체 및 이의 CD163-결합 단편이 당업계에 공지되어 있다(예를 들어 상기 참조). 이들은 본 발명의 생물중합체 스캐폴드로 사용하기에 적합하다. 예를 들어, 본원 또는 제WO 2011/039510 A2호(본원에 참조로 포함됨)에 언급된 임의의 항-CD163 항체 또는 이의 단편은 본 발명에서 생체중합체 스캐폴드로 사용될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명 화합물의 생물중합체 스캐폴드는 제WO 2011/039510 A2호에 개시된 항체 Mac2-48, Mac2-158, 5C6-FAT, BerMac3, 또는 E10B10이고, 특히 제WO 2011/039510 A2호에 개시된 사람화 Mac2-48 또는 Mac2-158이다.
바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 11-13으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR) 서열을 포함하는 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
추가로 또는 이에 대안적으로, 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 14-16으로 이루어진 그룹 또는 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 17-19로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 CDR 서열을 포함하는 경쇄 가변(VL) 영역을 포함한다.
추가의 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
추가로 또는 이에 대안적으로, 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역을 포함한다.
추가의 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
추가로 또는 이에 대안적으로, 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역을 포함한다.
추가의 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역을 포함한다.
추가로 또는 이에 대안적으로, 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역을 포함한다.
본 발명의 맥락에서, 항-CD163 항체는 사람화 항체 또는 사람 항체, 비사람 영장류 항체, 양 항체, 돼지 항체, 개 항체 또는 설치류 항체와 같은 포유동물 항체일 수 있다. 구현예에서, 항-CD163 항체는 모노클로날일 수 있다.
선호도에 따라서, 항-CD163 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE 및 IgM에서 선택된다.
추가의 선호도에 따라서, CD163-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab)2, Fv, 단일 사슬 항체, 나노바디 및 항원 결합 도메인으로부터 선택된다.
CD163 아미노산 서열은 예를 들어 제WO 2011/039510 A2호(여기에 참조로 포함됨)에 개시되어 있다. 본 발명의 맥락에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 바람직하게는 사람 CD163에 대해 특이적이고, 특히 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 28-31 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는다.
추가의 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 CD163의 세포외 영역 (예를 들어, 사람 CD163의 경우: UniProt Q86VB7의 아미노산 42-1050, 서열 버전 2)에 대해, 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인에 대해, 보다 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인 1-9 (예를 들어 사람 CD163의 경우: 각각 UniProt Q86VB7의 아미노산 51-152, 159-259, 266-366, 373-473, 478-578, 583-683, 719-819, 824-926 및 929-1029, 서열버전 2) 중 어느 하나에 대해, 심지어 보다 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인 1-3 (예를 들어, 사람 CD163에 경우, 각각 UniProt Q86VB7의 아미노산 51-152, 159-259, 266-366 및 373-473, 서열 버전 2) 중 어느 하나에 대해, 특히 CD163의 SRCR 도메인 1 (특히, 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 1-8 중 어느 하나의 아미노산 서열, 특히 제WO 2011/039510 A2호의 서열번호 1)에 대해 특이적이다.
특정 선호도에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 (바람직하게는 사람) CD163에 대한 결합에 대해 (바람직하게는 사람) 헤모글로빈-합토글로빈 복합체 (예컨대, ELISA에서)와 경쟁할 수 있다.
또 다른 특정 선호도에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 사람 CD163에 대한 결합에 대해 본원에 개시된 임의의 항-사람 CD163 mAb, 특히 제WO 2011/039510 A2호에 개시된 바와 같은 Mac2-48 또는 Mac2-158과 경쟁할 수 있다.
심지어 또 다른 특정 선호도에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 사람 CD163에 결합하기 위해
DVQLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSITSDYAWNWIRQFPGNKLEWMGYIT
YSGITNYNPSLKSQISITRDTSKNQFFLQLNSVTTEDTATYYCVSGTYYFDYW
GQGTTLTVSS,
아미노산 서열로 구성된 중쇄 가변(VH) 영역 및
SVVMTQTPKSLLISIGDRVTITCKASQSVSSDVAWFQQKPGQSPKPLIYYASNRY
TGVPDRFTGSGYGTDFTFTISSVQAEDLAVYFCGQDYTSPRTFGGGTKLEIKRA 의 아미노산 서열로 구성된 경쇄 가변(VL) 영역을 가지는 항체와 (예컨대, ELISA에서) 경쟁할 수 있다.
경쟁적 결합 실험(예를 들어 ELISA를 기반으로 함)에 대한 상세한 사항은 당업자에게 공지되어 있고 예를 들어 제WO 2011/039510 A2호(본원에 참조로 포함됨)에 개시되어 있다.
제WO 2011/039510 호에 개시된 바와 같은 항체 E10B10 및 Mac2-158의 에피토프를 맵핑하였다(실시예 섹션 참조). 이들 에피토프는 본 발명의 화합물의 항-CD163 항체(또는 이의 CD163-결합 단편)의 결합에 특히 적합하다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드에 특이적이며, 여기서 펩타이드는 아미노산 서열 CSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEA 또는 이의 7 내지 24개 아미노산 단편을 포함한다. 바람직하게는, 이 펩타이드는 아미노산 서열 GRVEVKVQEEW, WGTVCNNGWS 또는 WGTVCNNGW를 포함한다. 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 EWGTVCNNGWSME, QEEWGTVCNNGWS, WGTVCNNGWSMEA, EEWGTVCNNGWSM, VQEEWGTVCNNGW, EWGTVCNNGW 및 WGTVCNNGWS로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 심지어 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 EWGTVCNNGWSME, QEEWGTVCNNGWS, WGTVCNNGWSMEA, EEWGTVCNNGWSM, VQEEWGTVCNNGW, EWGTVCNNGW 및 WGTVCNNGWS 로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD 163-결합 단편은 7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드에 특이적이며, 여기서 펩타이드는 아미노산 서열 DHVSCRGNESALWDCKHDGWG 또는 이의 7 내지 20개 아미노산 단편을 포함한다. 바람직하게는, 이 펩타이드는 아미노산 서열 ESALW 또는 ALW을 포함한다. 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 ESALWDC, RGNESALWDC, SCRGNESALW, VSCRGNESALWDC, ALWDCKHDGW, DHVSCRGNESALW, CRGNESALWD, NESALWDCKHDGW 및 ESALWDCKHDGWG로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 심지어 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 ESALWDC, RGNESALWDC, SCRGNESALW, VSCRGNESALWDC, ALWDCKHDGW, DHVSCRGNESALW, CRGNESALWD, NESALWDCKHDGW 및 ESALWDCKHDGWG로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
따라서, 특히 바람직한 구현예에서, 항-CD163 항체 또는 이의 CD 163-결합 단편은 7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드에 특이적이며, 여기서 펩타이드는 아미노산 서열 SSLGGTDKELRLVDGENKCS 또는 이의 7 내지 19개 아미노산 단편을 포함한다. 바람직하게는, 이 펩타이드는 아미노산 서열 SSLGGTDKELR 또는 SSLGG을 포함한다. 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 SSLGGTDKELR, SSLGGTDKEL, SSLGGTDKE, SSLGGTDK, SSLGGTD, SSLGGT 및 SSLGG로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다. 심지어 보다 바람직하게는, 이 펩타이드는 SSLGGTDKELR, SSLGGTDKEL, SSLGGTDKE, SSLGGTDK, SSLGGTD, SSLGGT 및 SSLGG로부터 선택되는 아미노산 서열로 구성되고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는다.
펩타이드(또는 펩타이드 n-머)는 바람직하게는 예를 들면, 아민-대-설프하이드릴 링커 및 이작용성 NHS-PEG-말레이미드 링커 또는 당해 분야에 공지된 다른 링커와 같이 당해 분야에 공지된 (비-면역원성) 링커를 통해 생물중합체 스캐폴드에 공유결합으로 접합(또는 공유결합으로 결합)된다. 대안적으로, 펩타이드(또는 펩타이드 n-머)는 예컨대, 단백질과 펩타이드(이는 또한 본원에서 "링커"로 지칭된다) 사이의 이황화물 결합의 형성에 의해, 또는 비-공유결합성 조립 기술, 자발적 이소펩타이드 결합 형성, 또는 유전 코드 확장 기술을 통한 생체-직교 화학용 비천연 아미노산을 사용하여 에피토프 담체 스캐폴드(epitope carrier scaffold)에 결합시킬 수 있다(참고: Howarth 등 2018 및 Lim 등 2016).
본 발명의 화합물은 예컨대, 하나 또는 수개의 상이한 펩타이드(이는 본원에 개시된 바와 같이 펩타이드 n-머의 상이한 형태로 존재할 수 있다)의 적어도 2개, 바람직하게는 3 내지 40개 카피를 포함할 수 있다. 화합물은 1개 유형의 에피토프성 펩타이드(epitopic peptide)(다시 말해서: 항체-결합 펩타이드 또는 파라토프-결합 펩타이드) 중 하나의 유형을 포함할 수 있지만, 하나의 생물중합체 스캐폴드 분자에 결합된 에피토프성 펩타이드의 다양성은 예컨대, 8개 이하의 상이한 에피토프성 펩타이드의 혼합물일 수 있다.
전형적으로, 본 발명에 존재하는 펩타이드는 선택된 목적하지 않은 항체에 특이적으로 결합하므로, 이의 서열을 일반적으로 선택하여 최적화함으로써 이는 특이적인 결합을 제공하여 혈액으로부터 목적하지 않은 항체 고갈의 선택성을 보장한다. 이러한 목적을 위해, 상기 펩타이드의 펩타이드 서열은 전형적으로 전체 에피토프 서열 또는 목적하지 않는 항체 에피토프의 부위에 상응한다. 본 발명에 사용된 펩타이드는 1개, 2개 또는 4개 이하의 아미노산 위치를 교환하고, 예컨대, 고갈시킬 필요가 있는 목적하지 않은 항체에 대한 결합 친화성을 조절하도록 함으로써 추가로 최적화시킬 수 있다. 증가된 결합 친화성을 지닌 "미모토프(mimotopes)를 제공할 수 있고 당해 분야에 공지된 이러한 단일 또는 다수의 아미노산 치환 전략이 파아지 디스플레이 전략 (phage display strategies) 또는 펩타이드 미세배열(peptide microarray)을 사용하여 앞서 개발되었다. 다시 말해서, 본 발명에 사용된 펩타이드는 목적하지 않은 항체의 천연 에피토프 서열과 완전히 동일하지 않아야만 한다.
전형적으로, 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드(예컨대, 펩타이드 P 또는 Pa 또는 Pb)는 포유동물 단백질 속에 일반적으로 존재하는 20개 아미노산 중 하나 이상으로 구성된다. 또한, 펩타이드에 사용된 아미노산 레퍼토리는 해독후 변형된 아미노산으로 확장되어, 예컨대, 단백질의 항원성, 예를 들면, 해독후 변형 (post translational modifications), 특히 산화성 해독후 변형(참고: 예컨대, Ryan 2014) 또는 펩타이드 골격에 대한 변형(참고: 예컨대, Muller 2018), 또는 비-천연 아미노산에 대한 변형(참고: 예컨대, Meister 등, 2018)에 영향을 미칠 수 있다. 이러한 변형은 또한 펩타이드에서 사용되어, 예컨대, 펩타이드와 목적하지 않은 항체의 가변 영역 사이의 결합 상호작용 및 특이성을 조정할 수 있다. 특히, 에피토프(및 따라서 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드)는 또한 예를 들면, 자가면역 질환에서와 같이 시트룰린(citrulline)을 함유할 수 있다. 또한, 펩타이드 서열내로 변형을 도입시킴으로써 HLA 분자에 대한 결합 성향을 감소시킬 수 있거나, 안정성 및 물리화학적 특성이 개선될 수 있거나 목적하지 않은 항체에 대한 친화성이 증가될 수 있다.
많은 경우에, 고갈시켜야 하는 목적하지 않은 항체는 올리고- 또는 폴리클로날(예컨대, 자가항체, ADA 또는 동종항체는 전형적으로 폴리- 또는 올리고 클로날이다)이고, 목적하지 않은(폴리클로날) 항체 에피토프는 표적 분자의 보다 큰 에피토프성 영역을 포함한다. 이러한 상황을 조정하기 위하여, 본 발명의 화합물은 2개 또는 수개의 에피토프성 펩타이드(다시 말해서: 항체-결합 펩타이드 또는 파라토프-결합 펩타이드)의 혼합물을 포함함으로써, 목적하지 않은 항체의 폴리클로날성(polyclonality) 또는 올리고클로날성(oligoclonality)을 조정하도록 한다.
본 발명의 이러한 폴리-에피토프성 화합물은 목적하지 않은 항체를 효과적으로 고갈시킬 수 있고 목적하지 않은 항체의 에피토프가 보다 큰 아미노산 서열 범위로 연장되는 경우에 모노-에피포트성 화합물보다 흔히 더 효과적이다.
이는 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드를 설계하여 이것이 고갈될 목적하지 않은 항체의 가변 영역에 의해 특이적으로 인식되도록 설계하는 경우에 유리하다. 본 발명에 사용된 펩타이드의 서열은 예컨대, 목적하지 않은 항체에서 미세한 에피토프 맵핑 기술(즉, 에피토프 웍스(epitope walks), 펩타이드 고갈 맵핑, 예를 들면, Carter 등, 2004, 및 Hansen 등, 2013에 기술된 바와 같은 펩타이드 배열을 사용한 아미노산 치환 스캐닝)을 적용함으로써 선택할 수 있다.
본 발명의 과정에서, MG-관련 자가항체를 이용한 미모토프 및 에피토프 스크리닝을 수행하였다(실시예 14 및 15 참조). 본 발명의 화합물에 특히 적합한 펩타이드 미모토프 및 에피토프를 발견하였다. 이들 미모토프 및 에피토프는 하기 표 1-3에 나열되어 있다.
표 1은 MG-관련 자가항체("상대 신호(relative signal)")에 대한 결합 친화도에 따라 순위가 매겨진 선형 미모토프를 나열한다.
서열번호 미모토프 서열 상대 신호 [ % ]
1 LRRNPAD 100,0
2 NPADYRG 71,4
3 NPADYHG 59,3
4 VRLRWNPADYP 56,7
5 LRGNPAD 48,0
6 WNPADYR 40,6
7 LRFNPAD 37,1
8 GSLRYNP 34,4
9 LRVNPADYG 31,6
10 LRRNPADYG 28,3
11 VRLRFNP 27,1
12 VRLRYNP 26,3
13 LRLNPAD 25,2
14 VRLRRNPAD 25,0
15 RFNPADY 21,8
16 GSLRFNP 21,6
17 NPDDYHG 21,3
18 NPADYGY 21,2
19 WNPADYP 20,5
20 RLHWNPADY 20,2
21 QWIDVRLRFNP 20,1
22 NPADYPG 19,8
23 NPADYGH 18,1
24 RLNPADY 17,7
25 LRLNPADYG 17,3
26 LLGGGSLRFNP 16,7
27 RYNPADY 16,5
28 LRYNPAD 15,9
29 LHWNPAD 15,7
30 LRWNPADYH 15,3
31 IDVRLRFNP 15,0
32 RLRVNPADY 14,9
33 NPADYGD 14,1
34 WNPADYGHI 13,7
35 YNLKFNP 13,7
36 SLHWNPADY 13,6
37 QWIDVRLRYNP 13,4
38 RGNPADYGG 13,0
39 GGGSLRFNP 13,0
40 LRINPADYG 12,6
41 RWNPADF 12,6
42 RLRWNPADYHG 12,4
43 IDVRLRYNP 12,2
44 RINPADY 12,2
45 NPADYGR 12,2
46 RLRFNPADY 11,4
47 WNPDDYR 11,4
48 CNLKFNP 11,0
49 SLRINPADY 11,0
50 RLYWNPADY 11,0
51 QWVDYNLKFNP 10,9
52 GGGSLRRNPAD 10,6
53 LRWNPADYGGF 10,6
54 SLRWNPADYHG 10,6
55 NPADYDG 10,3
56 DVRLRFNPADY 10,0
57 RRNPADY 9,9
58 RPNPADY 9,5
59 GSLRRNPAD 9,5
60 WNPADYH 9,4
61 RWNPADYGH 9,4
62 GSLRFNPAD 9,3
63 LRINPAD 9,2
64 WRLRWNPAD 9,0
65 GNPADYGGI 8,9
66 RHNPADY 8,9
67 WNPDDYGHV 8,8
68 RPNPADYGG 8,6
69 DVRLRINPADY 8,5
70 YNLKYNP 8,3
71 GGGSLRFNPAD 8,1
72 VRHRWNPAD 8,1
73 NPADYGI 8,0
74 IDVRLRFNPAD 7,9
75 NPDDYGH 7,7
76 VPLRWNPAD 7,6
77 YNLPWNP 7,6
78 VDYNLKFNP 7,6
79 HWNPADY 7,4
80 RTNPADY 7,2
81 LRWNPADYHGI 7,2
82 GGGSLRYNP 7,1
83 RLRGNPADY 6,9
84 RGNPADY 6,9
85 VDCNLKFNP 6,8
86 DVRLRWNPSDY 6,8
87 RIRWNPADY 6,8
88 HRLRWNPAD 6,7
89 SLRVNPADY 6,7
90 CNLKYNP 6,7
91 HSLRWNPAD 6,6
92 NPADYGN 6,5
93 LRWNPADYPGI 6,5
94 RLRYNPADY 6,5
95 SLRFNPADY 6,5
96 QWVDCNLKFNP 6,4
97 LRPNPADYG 6,1
98 VDCNLKYNP 6,1
99 ALRWNPADY 6,0
100 NPADYGV 6,0
표 2는 MG-관련 자가항체("상대 신호")에 대한 결합 친화도에 따라 순위가 매겨진 환형 미모토프를 나열한다.
서열번호 미모토프 서열 상대 신호 [ % ]
101 VRLRWNPADYP 100,0
102 RLRVNPADY 61,3
103 LRVNPADYG 45,1
104 WIDVRLRGNPA 43,2
105 RLNPADY 42,3
106 RFNPADY 37,5
107 RLRLNPADY 37,3
108 RLRGNPADY 32,7
109 DVRLRINPADY 31,4
110 DVRLRVNPADY 30,2
111 RINPADY 28,9
112 LRLNPADYG 28,6
113 LRRNPAD 28,2
114 SLRINPADY 28,0
115 DVRLRFNPADY 27,7
116 NPADYRG 27,4
117 SLRVNPADY 26,5
118 RLRINPADY 25,5
119 GGSLRINPADY 25,4
120 DVRLRGNPADY 25,0
121 WNPADYR 24,9
122 RLRYNPADY 24,5
123 RGNPADY 23,8
124 RRNPADY 23,5
125 LRRNPADYG 23,4
126 RINPADYGG 23,1
127 LRINPADYG 22,8
128 GGSLRVNPADY 22,5
129 RGNPADYGG 22,2
130 SLRLNPADY 21,8
131 DVRLRPNPADY 21,3
132 RLRFNPADY 21,3
133 WNPADYP 21,1
134 RYNPADY 20,2
135 GGSLRGNPADY 19,6
136 NPADYGR 19,5
137 RVNPADY 18,7
138 GSLRWNPADYR 16,2
139 NPADYGH 15,8
140 RPNPADY 15,6
141 SLRGNPADY 15,4
142 VRLRRNPAD 14,7
143 RTNPADY 14,6
144 GGSLRFNPADY 14,5
145 RLYWNPADY 13,7
146 GNPADYGGI 13,7
147 SLRFNPADY 13,6
148 VRLRVNPADYG 13,4
149 LRWNPADYP 13,1
150 NPADYGD 12,6
151 VNPADYG 12,5
152 GGGSLRRNPAD 12,5
153 RPRWNPADY 12,4
154 GSLRWNPADYP 12,4
155 SLRYNPADY 12,2
156 RANPADY 12,2
157 GSLRINPADYG 12,1
158 RPNPADYGG 11,9
159 NPADYGY 11,8
160 ALRWNPADY 11,5
161 GGSLRYNPADY 11,5
162 RIRWNPADY 11,5
163 RWNPADR 11,0
164 RLHWNPADY 10,8
165 QLRWNPADY 10,7
166 RLRQNPADY 10,6
167 DVRLRWNPSDY 10,5
168 VRLRWNPADYS 10,5
169 DVRLRYNPADY 10,5
170 GSLRFNPADYG 10,4
171 GGSLRWNPADR 10,3
172 LRWNPADYR 10,3
173 LRWNPADYGGF 10,3
174 GSLRWNPADYD 10,2
175 RLRWNPADYHG 10,1
176 RLRWNPADYGP 10,0
177 GSLRWNPADYN 10,0
178 VRLRINPADYG 10,0
179 LRPNPADYG 10,0
180 TLRWNPADY 9,9
181 VRLRGNPAD 9,9
182 RSRWNPADY 9,8
183 RLRPNPADY 9,8
184 RLLWNPADY 9,7
185 RLRWNPADYGS 9,7
186 GSLRWNPADYQ 9,7
187 VRLRLNPADYG 9,7
188 SLYWNPADY 9,4
189 LRGNPAD 9,1
190 RWNPADF 9,1
191 RLRGNPADYGG 9,0
192 WNPDDYR 9,0
193 LRWNPADYPGI 8,9
194 DVRLRQNPADY 8,8
195 SLRWNPADYHG 8,7
196 GSLRWNPADYT 8,7
197 NPADYGN 8,7
198 LRFNPAD 8,6
199 RLRTNPADY 8,6
200 GGSLRLNPADY 8,5
표 3은 MG-관련 자가항체의 환형 에피토프를 나타낸다.
서열번호 에피토프 서열
201 WVDYNLKWNPDDY
202 YNLKWNPDDY
203 LFSHLQNEQWVDY
204 KWNPDDY
205 NEQWVDY
206 HLQNEQWVDY
바람직한 구현예에서, 각각의 경우에 독립적으로 P는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고, 임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다.
또 다른 바람직한 구현예에서, 바람직하게는 상기 아미노산 서열은 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY에서 선택된다.
바람직하게는, 각각의 경우에 독립적으로 P는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 특히 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY으로부터 선택된 전체 서열을 포함한다.
추가의 바람직한 구현예에서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호: 1-50 및 서열번호: 101-150으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고, 임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다.
추가의 바람직한 구현예에서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호: 1-20 및 서열번호: 101-120으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고, 임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다.
추가의 바람직한 구현예에서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호: 1-10 및 서열번호: 101-110으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고, 임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된다.
또 다른 바람직한 구현예에서, P가 서열번호: 101-200 및 201-206으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개의 연속되는 아미노산을 포함하는 경우(임의로 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환됨), P는 환형화된(즉, 환형) 펩타이드다.
또 다른 바람직한 구체예에서, P가 서열번호: 1-100으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개의 연속되는 아미노산을 포함하는 경우(임의로 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환됨), P는 선형 펩타이드다.
추가의 특히 바람직하게는, 적어도 하나의 펩타이드 P, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb, (또는 전체적으로 화합물)는 항-AChR mAb198 또는 항-AChR mAb637(본원에 개시된 바와 같이, 특히 실시예 14 및 15 참조)에 결합할 수 있다. 전형적으로 상기 mAb의 결합은 1000nM 미만(즉, "보다 강한"), 바람직하게는 100nM 미만, 보다 바람직하게는 50nM 미만, 심지어 보다 바람직하게는 10 nM 미만, 특히 5 nM 미만(특히 생리적 조건, 예를 들어 인체 내부의 혈류에서)의 친화성을 갖는 결합이다.
또한 본 발명에 사용된 펩타이드가 임의의 HLA 제I 부류 또는 HLA 제II 부류 분자(즉, 치료될 개체, 예컨대 사람의)에 결합하지 않아, 생체내에서 T-세포 수용체를 통한 제시(presentation) 및 자극을 방지함으로서 면역 반응을 유도하는 것이 매우 바람직하다. 항원-특이적인 면역학적 내성화 접근법과는 대조적으로 임의의 억제성(또는 자극성) T-세포 반응을 포함시키는 것은 일반적으로 바람직하지 않다. 따라서, T-cell 에피토프 활성을 가능한 한 최대로 피하기 위하여, 본 발명의 화합물의 펩타이드(예컨대, 펩타이드 P 또는 Pa 또는 Pb)는 바람직하게는 다음의 특성 중 하나 이상을 충족한다:
- 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드가 HLA 제II 부류 또는 제I 부류 분자에 결합할 가능성을 감소시키기 위하여, 펩타이드(예컨대, 펩타이드 P 또는 Pa 또는 Pb)는, 어느 정도 더 짧거나 더 긴 길이가 여전히 허용될 수 있다고 해도, 4 내지 8개 아미노산 길이가 바람직하다.
- 이러한 펩타이드가 HLA 제II 부류 또는 제I 부류 분자에 결합하는 가능성을 추가로 감소시키기 위하여, HLA 결합 예측 알고리즘, 예를 들면, NetMHCII-2.3(참고: Jensen 등 2018)에 의해 후보물 펩타이드 서열을 시험하는 것이 바람직하다. 바람직하게는, 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드(예컨대, 펩타이드 P 또는 Pa 또는 Pb)는 적어도 500 nM의 (예측된) HLA 결합(IC50)을 갖는다. 보다 바람직하게는, HLA 결합(IC50)은 1000 nM 이상, 특히 2000 nM 이상이다(참고: 예컨대, Peters 등 2006). HLA 제I 부류 결합의 경향성을 감소시키기 위하여, NetMHCpan 4.0을 또한 예측에 적용시킬 수 있다(Jurtz 등 2017).
- 이러한 펩타이드가 HLA 제I 부류 분자에 결합할 가능성을 추가로 감소시키기 위하여, 문헌:
Figure pct00001
에 따라 10%의 배경 수준으로 설정할 수 있다. 바람직하게는, 따라서, 본 발명의 화합물에 사용된 펩타이드(예컨대, 펩타이드 P)는 NetMHCpan 알고리즘에 따라 3 이상, 바람직하게는 5 이상, 보다 바람직하게는 10 이상의 순위 값%(%Rank value)를 갖는다.
- 이러한 펩타이드가 HLA 제II 부류 분자에 결합할 가능성을 추가로 감소시키기 위하여, 당해 분야에서 일반적으로 사용된 시험관내 HLA-결합 검정, 예를 들면, 리폴딩 검정(refolding assay), iTopia, 펩타이드 구제 검정(peptide rescuing assay) 또는 배열-기반 펩타이드 결합 검정(array-based peptide binding assay)을 수행하는 것이 유리하다. 대안적으로, 또는 이외에, 예컨대, Gfeller 등 2016에 고찰된 바와 같이, LC-MS 기반 분석을 사용할 수 있다.
목적하지 않은 항체의 역가의 보다 강력한 감소를 위해, 본 발명에 사용된 펩타이드를 환형화(circularization)시키는 것이 바람직하다(참고: 또한 실시예 4). 따라서, 바람직한 구현예에서, 적어도 하나의 경우의 P는 환형화된 펩타이드이다(특히 P가 서열번호: 101-200 및 201-206에서 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개의 연속되는 아미노산 서열, 또는 전체 서열을 포함하는 경우, 임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환됨). 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 10%는 환형화된 펩타이드이거나, 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 25%는 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 보다 바람직하게는 P의 모든 환형화된 경우의 적어도 50%는 환형화된 펩타이드이거나, 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 75%는 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P의 적어도 90%는 환형화된 펩타이드이거나 심지어 모든 경우의 P의 적어도 95%는 환형화된 펩타이드이고, 특히 P의 모든 경우은 환형화된 펩타이드이다. 수개의 일반적인 기술이 펩타이드의 환형화에 이용가능하다(참고: 예컨대, Ong 등 2017). 본원에 사용된 바와 같은 "환형화된 펩타이드"는 예컨대 문헌(참고: Ong 등)에 개시된 바와 같이, 펩타이드 자체가 환형화된 것으로 이해될 수 있음은 말할 필요가 없다(그리고, 예컨대, 서열 길이가 13개 아미노산 보다 긴 환형 스캐폴드에서 이식되지 않음). 이러한 펩타이드는 또한 본원에서 사이클로펩타이드 또는 사이클릭 펩타이드로 지칭될 수 있다.
또한, 본 발명의 바람직한 구현예에서, 사용된 스캐폴드의 양에 대해 목적하지 않은 항체의 역가의 보다 강력한 감소를 위해, 독립적으로, 펩타이드 n-머 각각에 대해, n은 적어도 2, 보다 바람직하게는 적어도 3, 특히 적어도 4이다. 일반적으로, 제조 공정에서 복잡성을 피하기 위하여, 독립적으로 각각의 펩타이드 n-머에 대해, n은 10 미만, 바람직하게는 9 미만, 보다 바람직하게는 8 미만, 심지어 보다 바람직하게는 7 미만, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6 미만, 특히 5 미만이다. 목적하지 않은 항체의 2가 결합을 통한 보다 높은 항원항체결합력(avidity)으로부터 유리하기 위해, 펩타이드 n-머 각각에 대해, n이 2인 것이 매우 바람직하다.
목적하지 않은 항체의 다가 결합을 위해, 펩타이드 이량체 또는 n_머가 소수성의, 구조적으로 유연하고, 면역학적으로 불활성이며, 무독성이고 임상적으로 승인된 스페이서, 예를 들면, (헤테로-)이작용성 및 -삼작용성 폴리에틸렌글리콜(PEG) 스페이서 (예컨대, NHS-PEG-말레이미드)에 의해 이격되어 있는 것이 유리하다 - 광범위한 PEG 쇄가 이용가능하며 PEG는 FDA에 의해 승인되어 있다. PEG 링커의 대안, 예를 들면, 면역학적으로 불활성이고 무독성인 합성 중합체 또는 글리칸이 또한 적합하다. 따라서, 본 발명의 맥락에서, 스페이서(예컨대, 스페이서 S)는 바람직하게는 PEG 분자 또는 글리칸으로부터 선택된다. 예를 들면, 스페이서, 예를 들어, PEG가 펩타이드 합성 동안 도입될 수 있다. 이러한 스페이서(예컨대, PEG 스페이서)는 예컨대, 10000 달톤의 분자량을 가질 수 있다. 명백하게, 본 발명의 맥락 내에서, 각각의 링커를 통한 생물중합체 스캐폴드에 대한 펩타이드 n-머의 공유결합성 결합은 예를 들면, 링커를 펩타이드 n-머의 스페이서(예컨대, 펩타이드 n-머의 펩타이드 대신에)에 직접 결합시킴으로써 달성할 수 있다.
바람직하게는, 펩타이드 n-머 각각은 바람직하게는 각각의 링커를 통해 생물중합체 스캐폴드에 공유결합으로 결합된다.
본원에 사용된 바와 같이, 링커는 예컨대, 디설파이드 브릿지(difulphide bridge) 및 PEG 분자로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 화합물의 추가의 바람직한 구현예에 따라서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 Pa 또는 Pb이다.
또한, 제1의 펩타이드 n-머에서, P의 각각의 경우이 Pa이고, 제2의 펩타이드 n-머에서, P의 각각의 경우가 Pb인 것이 바람직하다. 대안적으로, 또는 이외에, Pa 및/또는 Pb는 환형화되어 있다.
항체 역가를 감소시키기 위해서는 2가 결합이 특히 적합하다. 따라서, 바람직한 구현예에서,
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이다.
특히 효능을 증가시키기 위하여, 바람직한 구현예에서 제1의 펩타이드 n-머는 제2의 펩타이드 n-머와는 상이하다. 유사한 이유로, 바람직하게는, 펩타이드 Pa는 펩타이드 Pb와는 상이하고, 바람직하게는 여기서 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb는 동일한 항원의 2개의 상이한 에피토프 또는 동일한 에피토프의 2개의 상이한 에피토프 부분이다.
특히 폴리클로날 항체의 보다 우수한 표적화를 위해, 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb가 적어도 부분적으로 중복되는 경우, 즉 이들이 동일한 아미노산 서열 단편을 동일한 아미노산 단편을 포함하는 경우가 유리하며, 여기서, 아미노산 서열 단편은 적어도 2개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 3개의 아미노산, 보다 바람직하게는 적어도 4개의 아미노산, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 5개의 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 6개의 아미노산, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 7개의 아미노산, 특히 적어도 8개의 아미노산 또는 심지어 적어도 9개의 아미노산의 길이를 갖는다.
또한, 사용된 스캐폴드의 양에 대해 목적하지 않은 항체의 역가의 보다 강력한 감소를 위해, 화합물은 다수의 상기 제1의 펩타이드 n-머(예컨대, 10개 또는 20개 또는 30개 이하) 및/또는 다수의 상기 제2의 펩타이드 n-머(예컨대, 10개 또는 20개 또는 30개 이하)를 포함한다.
또한 상기 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물이 포유동물, 바람직하게는 사람, 비-사람 영장류, 양, 돼지, 개 또는 설치류 내에서 비-면역원성인 경우가 매우 바람직하다.
본 발명의 맥락에서, 비-면역원성 화합물은 바람직하게는 생물중합체 스캐폴드(이것이 단백질인 경우) 및/또는 펩타이드(펩타이드 n-머의)가 NetMHCII-2.3 알고리즘에 의해 예측된 것으로서 HLA-DRB1_0101에 대해 100 nM 초과, 바람직하게는 500 nM 초과, 심지어 보다 바람직하게는 1000 nM 초과, 특히 2000 nM 초과의 IC50을 갖는 화합물이다. NetMHCII-2.3 알고리즘은 본원에 참고로 포함된 문헌: Jensen 등에 기술되어 있다. 알고리즘은 http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHCII-2.3/ 하에 공공 이용가능하다. 심지어 보다 바람직하게는, 비-면역원성 화합물(또는 약제학적 조성물)은 생체내에서 어떠한 HLA 및/또는 MHC 분자에도 결합하지 않는다(예컨대, 포유동물 내에서, 바람직하게는 사람에서, 비-사람 영장류에서, 양에서, 돼지에서, 개에서 또는 설치류에서; 또는 치료할 개체에서).
추가의 선호도에 따라서, 화합물은 개체내, 바람직하게는 개체의 혈류내에서 적어도 하나의 (특히 항 니코틴성 AChR 항체) 항체의 체내 제거(또는 체내 고갈)용 및/또는 개체내, 바람직하게는 개체의 혈류내에서 적어도 하나의 (특히 항 니코틴성 AChR 항체) 항체의 역가의 감소용이다.
일 양태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
구현예에서, 조성물은 복강내, 피하, 근육내 및/또는 정맥내 투여를 위해 제조한다. 특히, 조성물은 반복된 투여용이다(이는 전형적으로 비-면역원성 (non-immunogenic)이기 때문이다).
바람직하게는, 조성물 속의 펩타이드 P 또는 Pa 또는 Pb 대 생물중합체 스캐폴드의 몰 비는 2:1 내지 100:1, 바람직하게는 3:1 내지 90:1, 보다 바람직하게는 4:1 내지 80:1, 심지어 보다 바람직하게는 5:1 내지 70:1, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6:1 내지 60:1, 특히 7:1 내지 50:1 또는 심지어 8:10 내지 40:1이다.
다른 양태에서, 본 발명의 화합물은 치료요법에서 사용하기 위한 것이다.
본 발명의 과정에서, 본 발명의 화합물에 의해 저하되는 바람직하지 않은 항체의 생체내 동역학은 전형적으로 매우 빠르며, 때때로 바람직하지 않은 항체의 완만한 반동이 뒤따른다는 것이 밝혀졌다. 따라서 화합물(또는 화합물을 포함하는 약제학적 조성물)은 96시간 범위 내, 바람직하게는 72시간 범위 내, 보다 바람직하게는 48시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 36시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 24시간 범위 내, 특히 18시간 범위 내 또는 심지어 12시간 범위 내에서 2회 이상 투여되는 경우가 특히 바람직하다.
구현예에서, 하나 이상의 항체는 펩타이드 P 중 적어도 하나의 경우에 대해, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적인 개체에 존재하고, 바람직하게는 여기서 상기 항체는 항 니코틴성 AChR 항체, 특히 항 사람 니코틴성 AChR 항체이다.
조성물이 개체에서 비-면역원성인 것이 매우 바람직하다(예컨대, 이는 보조제 또는 선천성 또는 적응성 면역계(adaptive immune system)를 자극시키는 면역자극성 물질, 예컨대, 보조제 또는 T-세포 에피토프를 포함하지 않는다).
본 발명의 조성물은 개체의 체중 kg당 화합물을 1 내지 1000 mg, 바람직하게는 2 내지 500 mg, 보다 바람직하게는 3 내지 250 mg, 심지어 보다 바람직하게는 4 내지 100 mg, 특히 5 내지 50 mg의 용량으로 투여될 수 있고, 바람직하게는 여기서 조성물은 반복적으로 투여된다. 이러한 투여는 복강내, 피하, 근육내 또는 정맥내일 수 있다.
일 양태에서, 본 발명은 개체 내에 존재하는 하나 이상의 항체(바람직하게는 상기 항체는 항 니코틴성 AChR 항체, 특히 항 사람 니코틴성 AChR 항체임)를 제거(또는 고갈)시키는 방법에 관한 것이며,
본원에 정의된 바와 같은 약제학적 조성물을 수득하는 단계(여기서, 조성물은 개체에서 비-면역원성이고 여기서 개체내에 존재하는 하나 이상의 항체는 적어도 하나의 경우의 P에 대해, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적이다) 및
개체에게 약제학적 조성물을 투여하는 단계(특히 반복적으로 투여, 예컨대, 적어도 2회, 바람직하게는 적어도 3회, 보다 바람직하게는 적어도 5회 투여)를 포함한다.
본 발명의 맥락에서, 개체(치료될)는 사람 또는 비-사람 동물, 바람직하게는 비-사람 영장류, 양, 돼지, 개 또는 설치류, 특히 마우스이다.
바람직하게는, 생물중합체 스캐폴드는 개체와 관련하여 자기유래 (autologous)이고, 바람직하게는 여기서 생물중합체 스캐폴드는 자기유래 단백질이다(즉, 개체가 마우스인 경우 쥐 알부민이 사용된다).
구현예에서, 개체는 MG(또는 자가면역 자율신경절병증 또는 모르반 증후군과 같은 자가면역 채널병증, 또는 부종양 증후군)을 갖고 있거나 MG(또는 자가면역 자율신경절병증 또는 모르반 증후군과 같은 자가면역 채널병증, 또는 부종양 증후군)이 발생할 위험이 있는 개체이다.
일반적으로, 펩타이드 미모토프 자체에 대한 스크리닝은 당해 분야에 공지되어 있다(참고: 예를 들면, Shanmugam 등). 본 발명의 미모토프-기반 화합물은 야생형 에피토프를 기반으로 한 화합물보다 다음 2개의 장점을 갖는다: 첫째로, 일반적으로, 목적하지 않은 항체는 펩타이드 라이브러리(peptide library)를 스크리닝하여 발견된 미노토프에 대해 심지어 보다 높은 친화성을 가짐으로써, 미모토프-기반 화합물의 보다 높은 청소 효능(clearance efficiency)을 생성한다. 둘째로, 미모토프는 야생형 에피토프 서열이 T-세포 에피토프 활성을 유도하는 경우에 가능한 많은 T-세포 에피토프 활성을 추가로 피할 수 있다.
추가의 양태에서, 본 발명은 펩타이드(바람직하게는 6 내지 50개의 아미노산, 보다 바람직하게는 6 내지 25개의 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 6 내지 20개의 아미노산, 여전히 보다 바람직하게는 7 내지 13개의 아미노산의 서열 길이)에 관한 것으로, 여기서 펩타이드는 본원에 개시된 바와 같이 정의된다(특히 여기서 펩타이드는 본원에 개시된 P, Pa 또는 Pb를 포함한다).
특정 구현예에서, 이러한 펩타이드는 순환하는 바이러스 벡터-중화 항체의 진단 분류(diagnostic typing) 및 분석을 위한 프로브로 사용될 수 있다. 펩타이드는 예를 들어 환자 계층화를 위한 진단 벡터-중화 항체 타이핑 또는 스크리닝 장치나 키트 또는 동반 진단과 같은 절차의 일부로서 또는 백신 접종 또는 유전자 치료요법 전, 동시 및/또는 후에 벡터-중화 항체 수준을 모니터링하기 위해 사용된다.
추가의 양태에서, 본 발명은
- 샘플을 본원에 개시된 바와 같이 정의된 펩타이드(특히 여기서 펩타이드는 본원에 개시된 P, Pa, 또는 Pb를 포함한다)와 접촉시키는 단계, 및
- 샘플 내 항체의 존재 및/또는 농도를 검출하는 단계를 포함하는 생물학적 샘플에서 항체를 검출 및/또는 정량화하는 방법에 관한 것이다.
당업자는 생물학적 샘플에서 항체를 검출 및/또는 정량화하는 방법에 익숙합니다. 이 방법은 예를 들어 샌드위치 분석, 바람직하게는 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 또는 SPR(surface plasmon resonance) 분석이다.
당업자는 생물학적 샘플에서 항체를 검출 및/또는 정량화하는 방법에 익숙하다. 이 방법은 예를 들어 샌드위치 분석, 바람직하게는 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 또는 SPR(surface plasmon resonance) 분석일 수 있다.
바람직하게는, 펩타이드는 고체 지지체, 바람직하게는 ELISA 플레이트 또는 SPR 칩 또는 전기화학, 형광, 자기, 전자, 중력 또는 광학 생체변환기를 갖춘 바이오센서 기반 진단 장치 상에 고정된다. 대안적으로 또는 이에 더하여, 펩타이드는 리포터 또는 단백질 단편 보완 분석(PCA)에 적합한 리포터 단편과 같은 리포터 단편에 커플링될 수 있다; 예컨대, Li 등, 2019, 또는 Kanulainen 등, 2021 참조.
바람직하게는, 샘플은 포유동물, 바람직하게는 사람으로부터 수득된다. 바람직하게는 샘플은 혈액 샘플, 바람직하게는 전혈, 혈청 또는 혈장 샘플이다.
본 발명은 또한 진단 분석, 바람직하게는 상기 본원에 개시된 바와 같은, 바람직하게는 ELISA에서, 본원에 개시된 바와 같이 정의된 펩타이드(예컨대, P, Pa, 또는 Pb에 대한)의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 추가의 양태는 바람직하게는 고체 지지체 상에 고정된, 본원에 개시된 바와 같이 정의된 펩타이드(특히 여기서 펩타이드는 본원에 개시된 P, Pa, 또는 Pb를 포함한다)를 포함하는 진단 장치에 관한 것이다. 바람직하게는, 고체 지지체는 ELISA 플레이트 또는 표면 플라즈몬 공명 칩이다. 다른 바람직한 예에서, 진단 장치는 전기화학적, 형광, 자기, 전자, 중량 측정 또는 광학 생체변환기를 갖는 바이오센서 기반 진단 장치이다.
또 다른 바람직한 구현예에서, 진단 장치는 측면 유동 분석이다(lateral flow assay).
본 발명은 또한 본원에 개시된 바와 같이 정의된 (특히 여기서 펩타이드는 본원에 개시된 P, Pa 또는 Pb를 포함한다) 펩타이드를 포함하는 진단 키트, 바람직하게는 본원에 정의된 바와 같은 진단 장치에 관한 것이다. 바람직하게는 진단 키트는 버퍼, 시약, 설명서의 그룹에서 선택된 하나 이상을 추가로 포함한다. 바람직하게는 진단 키트는 ELISA 키트이다.
추가의 양태는 본원에 개시된 바와 같이 정의된 펩타이드(특히 여기서 펩타이드는 본원에 개시된 P, Pa 또는 Pb를 포함한다)를 포함하는 채집 장치에 관한 것이다. 바람직하게는 펩타이드는 고체 담체 상에 고정된다. 채집 장치가 본원에 개시된 바와 같이 정의된(특히 여기서 펩타이드는 본원에 개시된 P, Pa 또는 Pb를 포함한다) 적어도 2개, 바람직하게는 적어도 3개, 보다 바람직하게는 적어도 4개의 상이한 펩타이드를 포함하는 경우 특히 바람직하다. 바람직한 구현예에서 고체 담체는 본 발명의 화합물을 포함한다.
바람직하게는, 고체 담체는 혈액 또는 혈장 흐름과 접촉할 수 있다. 바람직하게는, 고체 담체는 멸균되고 발열원이 없는(pyrogen-free) 컬럼이다.
본 발명의 맥락에서, 개선된 생물이용능(bioavailability)을 위해, 본 발명의 화합물은 25℃에서 적어도 0.1 μg/ml, 바람직하게는 적어도 1 μg/ml, 보다 바람직하게는 적어도 10 μg/ml, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 100 μg/ml, 특히 적어도 1000 μg/ml의 수중 용해도를 갖는 것이 바람직하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "예방하는" 또는 "예방"은 환자 또는 대상체 또는 개체가 이러한 질환 상태(disease state) 또는 병태(condition)에 걸릴 위험에 취약하게 되는 경우, 환자 또는 대상체에서의 발생으로부터 질환 상태 또는 병태를 완벽하게 또는 거의 완벽하게 또는 적어도 (바람직하게는 유의적인) 정도로 정지시키는 것을 의미한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 바람직하게는 (전형적으로 수성) 액제, (전형적으로 수성) 현탁제(suspension) 또는 (전형적으로 수성) 유제(emulsion)로서 제공된다. 본 발명의 약제학적 조성물에 적합한 부형제는 당해 분야의 기술자에게 공지되어 있고, 본 명세서의 판독시, 예를 들면, 물(특히 주사용수), 염수, 링커액(Ringer's solution), 덱스트로즈 용액, 완충제, 행크 용액(Hank solution), 비히클 형성 화합물(예컨대, 지질), 고정 오일(fixed oil), 에틸 올레이트, 염수 중 5% 덱스트로즈, 등장성 및 화학 안정성을 향상시키는 물질, 완충제 및 방부제이다. 다른 적합한 부형제는 환자(또는 개체)에 대해 유해한 환자(또는 개체)에서 항체의 생산을 자체적으로 유도하지 않는 임의의 화합물이다. 예에는 잘 견딜 수 있는 단백질, 다당류, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체성 아미노산 및 아미노산 공중합체가 있다. 이러한 약제학적 조성물은 (약물로서) 당해 분야의 기술자에게 공지된 적절한 과정을 통해(본 명세서의 판독시) 이를 필요로 하는 환자 또는 개체(즉, 본원에서 언급한 질환 또는 병태를 갖거나 이로 발전할 위험을 가진 환자 또는 개체)에게 투여될 수 있다. 상기 약제학적 조성물의 바람직한 투여 경로는 특히 복강내, 피하, 근육내 및/또는 정맥내 투여를 통한 비경구 투여이다. 비경구 투여를 위해, 본 발명의 약제학적 조성물은 바람직하게는 상기 정의한 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 제형화된, 주사가능한 투여량 단위형, 예컨대, 액제(전형적으로 수성 액제), 현탁제 또는 유제로서 제공된다. 그러나, 투여량 및 투여방법은 치료될 개체 환자 또는 개체에 의존한다. 상기 약제학적 조성물은 다른 생물학적 투여량 요법(regimen)으로부터 공지된 임의의 적합한 투여량으로 투여될 수 있거나 주어진 개체에 대해 구체적으로 평가 및 최적화될 수 있다. 예를 들면, 활성제는 약제학적 조성물 속에 1 mg 내지 10 g, 바람직하게는 50 mg 내지 2 g, 특히 100 mg 내지 1 g의 양으로 존재할 수 있다. 일반적인 투여량은 또한 환자의 체중 kg을 기반으로 측정할 수 있고, 예를 들면, 바람직한 투여량은 0.1 mg 내지 100 mg/kg 체중, 특히 1 내지 10 mg/kg 체중(투여 기간 당)의 범위이다. 투여는 예컨대, 1일 1회, 격일에 1회, 주당 1회 또는 2주당 1회일 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 바람직한 투여 방식은 비경구 투여이므로, 본 발명에 따른 약제학적 조성물은 바람직하게는 액체이거나 멸균, 탈이온화 또는 증류수 또는 멸균 등장성 인산염 완충된 염수(PBS)와 같은 액체 속에 용해될 준비가 되어 있다. 바람직하게는, 이러한 조성물 1000 μg(무수 중량)은 0.1 내지 990 μg, 바람직하게는 1 내지 900μg, 보다 바람직하게는 10 내지 200μg의 화합물, 및 임의로 1 내지 500 μg, 바람직하게는 1 내지 100 μg, 보다 바람직하게는 5 내지 15 μg(완충제) 염(바람직하게는 최종 용적으로 등장성 완충제를 수득하기 위하여), 및 임의로 0.1 내지 999.9 μg, 바람직하게는 100 내지 999.9 μg, 보다 바람직하게는 200 내지 999 μg의 다른 부형제를 포함하거나 이로 이루어진다. 바람직하게는, 이러한 무수 조성물 100 mg은 멸균된, 탈이온수/증류수 또는 멸균 등장성 인산염 완충된 염수(PBS) 속에 용해되어 0.1 내지 100 ml, 바람직하게는 0.5 내지 20 ml, 보다 바람직하게는 1 내지 10 ml의 최종 용적을 생성한다.
본원에 기술된 활성제 및 약물이 염 형태(즉, 활성제의 약제학적으로 허용되능 염)로 또한 투여될 수 있음은 기술자에게 명백하다. 따라서, 본원의 활성제의 임의의 언급은 또한 이의 임의의 약제학적으로 허용되는 염 형태를 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물에 대해 사용된 펩타이드의 화학적 합성 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 물론, 재조합 방법을 사용하여 펩타이드를 생산하는 것이 또한 가능하다. 펩타이드는 미생물, 예를 들면,세균, 효모 또는 진균, 진핵 세포, 예를 들면, 포유동물 또는 곤충 세포, 또는 재조합 바이러스 벡터, 예를 들면, 아데노바이러스, 폭스바이러스, 헤르페스바이러스, 심리키 포레스트 바이러스(Simliki forest virus), 바쿨로바이러스, 신드비스 바이러스(sindbis virus) 또는 센다이 바이러스(sendai virus)에서 생산될 수 있다. 펩타이드를 생산하기에 적합한 세균은 이. 콜라이(E. coli), 비. 서브틸리스(B. subtilis) 또는 이러한 펩타이드를 발현할 수 있는 임의의 다른 세균을 포함한다. 본 발명의 펩타이드를 발현하기에 적합한 효모 세균은 사카로마이세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae), 시크조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe), 칸디다(Candida), 피키아파스토리스(Pichiapastoris) 또는 펩타이드를 발현할 수 있는 임의의 다른 효모를 포함한다. 상응하는 수단 및 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 또한, 재조합적으로 생산된 펩타이드를 단리 및 정제하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있고 예컨대, 겔 여과, 친화성 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피 등을 포함한다.
유리하게는, 시스테인 잔기를 N- 및/또는 C-말단에서 펩타이드에 가하여 특히 생물중합체 스캐폴드에 대한 커플링을 촉진시킨다.
상기 펩타이드의 단리를 용이하게 하기 위하여, 융합 폴리펩타이드를 제조할 수 있고 여기서 펩타이드는 친화성 크로마토그래피에 의한 단리를 가능하도록 하는 이종 폴리펩타이드에 해독적으로 융합(공유결합으로 연결)된다. 대표적인 이종 폴리펩타이드는 His-Tag(예컨대, His6; 6 히스티딘 잔기), GST-Tag(글루타티온-S-트랜스퍼라제) 등이다. 융합 폴리펩타이드는 펩타이드의 정제를 촉진할 뿐만 아니라 정제 단계 동안 펩타이드의 분해를 방지할 수 있다. 정제 후 이종 폴리펩타이드를 제거하는 것이 요구되는 경우, 융합 폴리펩타이드는 펩타이드와 이종 폴리펩타이드 사이의 접합(junction)에서 절단 부위를 포함할 수 있다. 절단 부위는 이러한 부위에서 아미노산 서열에 대해 특이적인 효소(예컨대, 프로테아제)로 절단되는 아미노산 서열로 이루어질 수 있다.
생물중합체 스캐폴드에 펩타이드/펩타이드 n-머를 연결(예컨대, 헤테로이작용성 화합물, 예를 들면, GMBS 및 물론 또한 문헌: "Bioconjugate Techniques", Greg T. Hermanson에 기술된 바와 같은 다른 것)시키는데 사용되거나 본 발명의 맥락에서 펩타이드에 스페이스를 접합시키는데 사용된 커플링/접합 화학은 또한 당해 분야의 기술자에게 공지된 반응으로부터 선택될 수 있다. 생물중합체 스캐폴드 자체는 재조합작으로 생산될 수 있거나 천연 공급원으로부터 수득될 수 있다.
여기서, "분자 B에 대해 특이적인 분자 A"에서와 같이 용어 "~에 대해 특이적인"은 분자 A가 개체의 체(body)내 다른 분자와 비교하여 분자 B에 대한 결합 선호도를 갖는다. 전형적으로, 이는 분자 A(예를 들면, 항체)는 (즉, 보다 더 강한") 1000 nM 미만, 바람직하게는 100 nM 미만, 보다 바람직하게는 50 nM 미만, 심지어 보다 바람직하게는 10 nM 미만, 특히 5 nM 미만인 분자 B(예를 들면, 항원, 특이적으로 이의 결합 에피토프)와 관련하여 해리 상수(또한 "친화성"으로 불림)를 갖는다.
여기서, "UniProt"은 Universal Protein Resource를 지칭한다. UniProt은 단백질 서열에 대한 포괄적인 자원 및 주석 데이타이다. UniProt는 유럽 생물정보 협회(European Bioinformatics Institute)(EMBL-EBI), SIB 스위스 생물정보 협회(SIB Swiss Institute)와 단백질 정보 자원(Protein Information Resource)(PIR) 사이의 공동 작업체이다. 3개의 협회에 걸쳐 100명 이상의 사람들이 상이한 업무, 예를 들면, 데이타베이스 큐레이션(database curation), 소프트웨어 개발 및 지원(software development and support)을 통해 포함된다. Website: http://www.uniprot.org/
UniProt 데이타베이스내 기입은 이의 수탁 코드(본원에서 예컨대, "UniProt 수탁 코드" 또는 요약하면 "UniProt"에 이은 수탁 코드로 지칭됨), 일반적으로 6개의 영숫자 문자(alphanumeric letter)의 코드(예컨대, "Q1HVF7")에 의해 확인된다. 달리 구체화되지 않는 경우, 본원에 사용된 수탁 코드는 UniProt의 단백질 지식베이스(UniProtKB)내 기입을 지칭한다. 달리 기술하지 않는 한, 본원에 지칭된 모든 기입에 대한 UniProt 데이타베이스 상태는 2019년 2월 13일부터이다(UniProt/UniProtKB Release 2019_02).
본원의 맥락에서, 서열 변이체(UniProt에서 "천연 변이체"로서 지정됨)는 UniProt 데이타베이스 기입을 지칭하는 경우 명확하게 포함된다.
본 발명은 또한 다음의 구현예에 관한 것이다:
구현예 1. - 생물중합체 스캐폴드(biopolymer scaffold) 및 적어도
- 하기 화학식의 제1의 펩타이드 n-머(peptide n-mer):
P ( ― S ― P ) (n-1) 및
- 하기 화학식의 제2의 펩타이드 n-머:
P ( ― S ― P ) (n-1)
를 포함하는 화합물로서,
여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 6 내지 13개(바람직하게는 7 내지 13개, 특히 8 내지 13개)의 아미노산 서열 길이를 지닌 펩타이드이고, S는 비-펩타이드 스페이서(non-peptide spacer)이고,
여기서 각각의 펩타이드 n-머에 대해 독립적으로, n은 적어도 1, 바람직하게는 적어도 2, 보다 바람직하게는 적어도 3, 특히 적어도 4의 정수이고,
여기서 펩타이드 n-머 각각은, 바람직하게는 각각의 링커(linker)를 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합되고,
여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206으로부터 선택된 (바람직하게는 사람 니코틴성 AChR MIR-유래) 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고,
임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 2. 구현예 1의 화합물로서, 여기서 P의 적어도 하나의 경우는 환형화된 펩타이드(특히 P가 서열번호: 101-200 및 201-206에서 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개의 연속되는 아미노산 서열, 또는 전체 서열을 포함하는 경우, 임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환됨)이거나, 바람직하게는 여기서 모든 경우의 P의 적어도 10%는 환형화된 펩타이드이거나, 보다 바람직하게는 여기서 모든 경우의 P의 적어도 25%는 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 보다 바람직하게는 여기서 모든 경우의 P의 적어도 50%는 환형화된 펩타이드이거나, 심지어 보다 바람직하게는 여기서 모든 경우의 P의 적어도 75%는 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 여기서 P의 모든 경우의 적어도 90%는 환형화된 펩타이드이거나 심지어 여기서 모든 경우의 P의 적어도 95%는 환형화된 펩타이드이고, 특히 여기서 P의 모든 경우는 환형화된 펩타이드인 화합물.
구현예 3. 구현예 1 또는 2의 화합물로서, 여기서, 각각의 펩타이드 n-머에 대해 독립적으로, n은 적어도 2, 보다 바람직하게는 적어도 3, 특히 적어도 4인 화합물.
구현예 4. 구현예 1 내지 3 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 펩타이드 n-머 각각에 대해 독립적으로, n은 10 미만, 바람직하게는 9 미만, 보다 바람직하게는 8 미만, 심지어 보다 바람직하게는 7 미만, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6 미만, 특히 5 미만인 화합물.
구현예 5. 구현예 1 내지 4 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 각각의 펩타이드 n-머에 대해 n은 2인 화합물.
구현예 6. 구현예 1 내지 5 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, P의 적어도 1회 경우는 Pa이고/이거나 P의 적어도 1회 경우는 Pb이고,
여기서 Pa는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 13개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드이고,
여기서 Pb는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 13개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드인 화합물.
구현예 7. 구현예 1 내지 6 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 Pa 또는 Pb인 화합물.
구현예 8. 구현예 1 내지 7 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 제1의 펩타이드 n-머에서, P의 각각의 경우는 Pa이고, 제2의 펩타이드 n-머에서, P의 각각의 경우는 Pb인 화합물.
구현예 9. 구현예 1 내지 8 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 인 화합물.
구현예 10. - 생물중합체 스캐폴드 및 적어도
- 화학식 P a - S - P a 또는 P a - S - P b 의 펩타이드 이량체인 제1의 펩타이드 n-머를 포함하는 화합물로서,
여기서 Pa는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 13개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드이고, Pb는 6 내지 13개 아미노산, 바람직하게는 7 내지 13개 아미노산, 보다 바람직하게는 7 내지 11개 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드이고, S는 비-펩타이드 스페이서이고,
여기서 제1의 펩타이드 n-머는, 바람직하게는 링커를 통해, 생물중합체 스캐폴드에 결합된 화합물로,
여기서 Pa는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 바람직하게는 서열번호: 1-50, 서열번호: 101-150 및 서열번호: 201-206, 특히 서열번호: 1-20, 서열번호: 101-20 및 서열번호: 201-206으로부터 선택된 (바람직하게는 사람 니코틴성 AChR MIR 유래)아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고,
임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 11. 구현예 10의 화합물로서, 화학식 P b - S - P b 또는 P a - S - P b 의 펩타이드 이량체인 제2의 펩타이드 n-머를 추가로 포함하고,
여기서 제2의 펩타이드 n-머는 바람직하게는 링커를 통해 생물중합체 스캐폴드에 결합되며,
여기서 Pb는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 바람직하게는 서열번호: 1-50, 서열번호: 101-150 및 서열번호: 201-206, 특히 서열번호: 1-20, 서열번호: 101-20 및 서열번호: 201-206으로부터 선택된 (바람직하게는 사람 니코틴성 AChR MIR 유래)아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고,
임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 13. 구현예 6 내지 12 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 펩타이드 Pa는 펩타이드 Pb와 상이한 에피토프 부분인 화합물.
구현예 14. 구현예 6 내지 13 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb는 동일한 아미노산 서열 단편을 포함하고, 여기서 상기 아미노산 서열 단편은 적어도 2개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 3개의 아미노산, 보다 바람직하게는 적어도 4개의 아미노산, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 5개의 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 6개의 아미노산, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 7개의 아미노산, 특히 적어도 8개의 아미노산 또는 심지어 적어도 9개의 아미노산의 길이를 갖는 화합물.
구현예 15. 구현예 6 내지 14 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pa 및/또는 Pb가 환형화되고, 특히 Pa 및/또는 Pb가 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개의 연속되는 아미노산 또는 전체 서열을 포함하는 경우, 임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 16. 구현예 1 내지 15 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 화합물이 다수의 상기 제1의 펩타이드 n-머 및/또는 다수의 상기 제2의 펩타이드 n-머를 포함하는 화합물.
구현예 17. 구현예 1 내지 16 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 단백질, 바람직하게는 포유동물 단백질, 예를 들면, 사람 단백질, 비-사람 영장류 단백질, 양(sheep) 단백질, 돼지 단백질, 개 단백질 또는 설치류 단백질인 화합물.
구현예 18. 구현예 17의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 글로불린인 화합물.
구현예 19. 구현예 18의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 면역글로불린, 알파1-글로불린, 알파2-글로불린 및 베타-글로불린으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화합물.
구현예 20. 구현예 19의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 면역글로불린 G, 합토글로빈(haptoglobin) 및 트랜스페린으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 화합물.
구현예 21. 구현예 20의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 합토글로빈인 화합물.
구현예 22. 구현예 17의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 알부민인 화합물.
구현예 23. 구현예 1 내지 22 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 화합물이 포유동물, 바람직하게는 사람, 비-사람 영장류, 양, 돼지, 개 또는 설치류에서 비-면역원성인 화합물.
구현예 24. 구현예 1 내지 23 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 화합물이 개체, 바람직하게는 개체의 혈류에서 (특히 항 니코틴성 AChR 항체) 적어도 하나의 항체의 체내 제거(또는 체내 고갈)용 및/또는, 개체, 바람직하게는 개체의 혈류에서 (특히 항 니코틴성 AChR 항체) 적어도 하나의 항체의 역가 감소용인 화합물.
구현예 25. 구현예 1 내지 24 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 상기 아미노산 서열은 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY에서 선택되는 화합물.
구현예 26. 구현예 1 내지 25 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호: 1-50 및 서열번호: 101-150으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고, 임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되는 화합물.
구현예 27. 구현예 1 내지 26 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 각각의 경우에 대해 독립적으로, P는 서열번호: 1-20 및 서열번호: 101-120으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고, 임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되는 화합물.
구현예 28. 구현예 1 내지 27 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 각각의 경우에 대해 독립적으로, P는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 특히 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY으로부터 선택된 전체 서열을 포함하는 화합물.
구현예 29. 구현예 1 내지 28 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 P의 적어도 하나의 경우는 서열번호: 101-200 및 201-206으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개의 연속되는 아미노산(임의로 여기서 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환됨)을 포함하고 환형화된 펩타이드인 화합물.
구현예 30. 구현예 1 내지 29 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 P의 적어도 하나의 경우는 서열번호: 1-100으로부터 선택된 아미노산 서열의 적어도 6개의 연속되는 아미노산(임의로 여기서 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환됨)을 포함하고 선형 펩타이드인 화합물.
구현예 31. 구현예 1 내지 30 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 특히 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY으로부터 선택된 전체 서열을 포함하고, 임의로 여기서 상기 전체 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 32. 구현예 1 내지 31 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 특히 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY으로부터 선택된 전체 서열을 포함하고, 임의로 N-말단 및/또는 C-말단 시스테인 잔기를 갖는 화합물.
구현예 33. 구현예 1 내지 32 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드는 사람 단백질 또는 사람화 항체와 같은 사람화 단백질인 화합물.
구현예 34. 구현예 1 내지 33 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 각각의 펩타이드 n-머는 바람직하게는 각각의 링커를 통해 생물중합체 스캐폴드에 공유결합으로 결합된 화합물.
구현예 35. 구현예 1 내지 34 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 상기 링커 중 적어도 하나는 이황화물 브릿지 및 PEG 분자로부터 선택된 화합물.
구현예 36. 구현예 1 내지 35 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 스페이서 S 중 적어도 하나는 PEG 분자 또는 글리칸으로부터 선택된 화합물.
구현예 37. 구현예 1 내지 36 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pa는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 특히 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY으로부터 선택된 (바람직하게는 사람 니코틴성 AChR MIR-유래) 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고,
임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 38. 구현예 1 내지 37 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pb는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 특히 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY 으로부터 선택된 (바람직하게는 사람 니코틴성 AChR MIR-유래) 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고,
임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 39. 구현예 1 내지 36 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pa는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 특히 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY으로부터 선택된 전체 서열로 구성되고,
임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 40. 구현예 1 내지 37 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 Pb는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 특히 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY으로부터 선택된 전체 서열로 구성되고,
임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 화합물.
구현예 41. 구현예 6 내지 40 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 제1의 펩타이드 n-머가 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머가 P a - S - P b 인 화합물.
구현예 42. 구현예 6 내지 41 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb가 동일한 아미노산 서열 단편을 포함하고, 여기서 상기 동일한 아미노산 서열 단편이 적어도 5개 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 6개 아미노산, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 7개 아미노산, 특히 적어도 8개 아미노산 또는 심지어 적어도 9개 아미노산의 길이를 갖는 화합물.
구현예 43. 구현예 1 내지 42 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 상기 화합물은 25℃에서 적어도 0.1㎍/ml의 수중 용해도를 갖는 화합물.
구현예 44. 구현예 1 내지 43 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 상기 화합물은 25℃에서 적어도 1㎍/ml의 수중 용해도를 갖는 화합물.
구현예 45. 구현예 1 내지 44 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 상기 화합물은 25℃에서 적어도 10 ㎍/ml, 바람직하게는 적어도 100 ㎍/ml, 특히 적어도 1000 ㎍/ml의 수중 용해도를 갖는 화합물.
구현예 46. 구현예 1 내지 45 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 적어도 하나의 펩타이드 P, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb, (또는 전체적으로 화합물)는 항-AChR mAb198 또는 항-AChR mAb637(본원에 개시된 바와 같이, 특히 실시예 14 및 15 참조)에 결합할 수 있는 화합물.
구현예 47. 구현예 1 내지 46 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 제1의 펩타이드 n-머가 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머가 P a - S - P b 인 화합물.
구현예 48. 구현예 1 내지 47 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서, 펩타이드 Pa 및 펩타이드 Pb가 동일한 아미노산 서열 단편을 포함하고, 여기서 아미노산 서열 단편이 적어도 5개 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 6개 아미노산, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 7개 아미노산, 특히 적어도 8개 아미노산 또는 심지어 적어도 9개 아미노산의 길이를 갖는 화합물.
구현예 49. 구현예 1 내지 48 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드는 사람 트랜스페린인 화합물.
구현예 50. 구현예 1 내지 49 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드는 항-CD163 항체(즉, CD163 단백질에 특이적인 항체) 또는 이의 CD163-결합 단편인 화합물.
구현예 51. 구현예 50의 화합물로서, 여기서 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 사람 CD163에 특이적 및/또는 CD163의 세포외 영역, 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인, 보다 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인 1-9 중 어느 하나, 심지어 보다 바람직하게는 CD163의 SRCR 도메인 1-3 중 어느 하나, 특히 CD163의 SRCR 도메인 1에 특이적인 화합물.
구현예 52. 구현예 50 또는 51의 화합물로서, 여기서 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은
7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드로, 여기서 상기 펩타이드는 아미노산 서열 CSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEA 또는 이의 7 내지 24개 아미노산 단편을 포함하거나;
7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드로, 여기서 상기 펩타이드는 아미노산 서열 DHVSCRGNESALWDCKHDGWG 또는 이의 7 내지 20개 아미노산 단편을 포함하거나; 또는
7 내지 25개, 바람직하게는 8 내지 20개, 심지어 보다 바람직하게는 9 내지 15개, 특히 10 내지 13개의 아미노산으로 구성된 펩타이드로, 여기서 상기 펩타이드는 아미노산 서열 SSLGGTDKELRLVDGENKCS 또는 이의 7 내지 19개의 아미노산 단편을 포함하는 펩타이드 중 하나에 특이적인 화합물.
구현예 53. 구현예 50 또는 51의 화합물로서, 여기서 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편이 아미노산 서열 ESALW 또는 ALW를 포함하는 펩타이드에 대해 특이적인 화합물.
구현예 54. 구현예 50 또는 51의 화합물로서, 여기서 항-CD163 항체 또는 이의 CD163-결합 단편은 아미노산 서열 GRVEVKVQEEW, WGTVCNNGWS 또는 WGTVCNNGW을 포함하는 펩타이드에 특이적인 화합물.
구현예 55. 구현예 50 또는 51의 화합물로서, 여기서 항-CD163 항체 또는 그의 CD163-결합 단편은 아미노산 서열 SSLGGTDKELR 또는 SSLGG를 포함하는 펩타이드에 특이적인 화합물.
구현예 56. 구현예 1 내지 55 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 상기 아미노산 서열은 서열번호: 1-50 및 서열번호: 101-150으로부터 선택된 바이러스 화합물.
구현예 57. 구현예 1 내지 56 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 상기 아미노산 서열은 서열번호: 1-20 및 서열번호: 101-120으로부터 선택된 화합물.
구현예 58. 구현예 1 내지 57 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 상기 아미노산 서열은 서열번호: 201-206으로부터 선택된 화합물.
구현예 59. 구현예 1 내지 58 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 펩타이드는 어느 HLA 제I 부류 또는 HLA 제II 부류 분자에도 결합하지 않는 화합물.
구현예 60. 구현예 1 내지 59 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 각각의 펩타이드 n-머는 각각 링커를 통해 생물중합체 스캐폴드에 공유적으로 결합된 화합물.
구현예 61. 구현예 1 내지 60 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 사람 면역글로불린 및 사람 트랜스페린으로부터 선택된 화합물.
구현예 62. 구현예 1 내지 61 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 사람 트랜스페린인 화합물.
구현예 63. 구현예 49 내지 62 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 적어도 2개 펩타이드 중 적어도 하나가 환형화되어 있는 화합물.
구현예 64. 구현예 1 내지 63 중 어느 하나의 화합물로서, 여기서 화합물이 사람에서 비-면역원성인 화합물.
구현예 65. 구현예 1 내지 64 중 어느 하나의 화합물 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
구현예 66. 구현예 65의 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물이 복강내, 피하, 근육내 및/또는 정맥내 투여를 위해 제조되고/되거나, 여기서 조성물이 반복된 투여용인 약제학적 조성물.
구현예 67. 구현예 1 내지 66 중 어느 하나의 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물 속의 펩타이드 P 대 생물중합체 스캐폴드의 몰 비가 2:1 내지 100:1, 바람직하게는 3:1 내지 90:1, 보다 바람직하게는 4:1 내지 80:1, 심지어 보다 바람직하게는 5:1 내지 70:1, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6:1 내지 60:1, 특히 7:1 내지 50:1 또는 심지어 8:10 내지 40:1인 약제학적 조성물.
구현예 68. 구현예 6 내지 67 중 어느 하나의 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물 속의 펩타이드 Pa 대 생물중합체 스캐폴드의 몰 비가 2:1 내지 100:1, 바람직하게는 3:1 내지 90:1, 보다 바람직하게는 4:1 내지 80:1, 심지어 보다 바람직하게는 5:1 내지 70:1, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6:1 내지 60:1, 특히 7:1 내지 50:1 또는 심지어 8:10 내지 40:1인 약제학적 조성물.
구현예 69. 구현예 6 내지 68 중 어느 하나의 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물 속의 펩타이드 Pb 대 생물중합체 스캐폴드의 몰 비가 2:1 내지 100:1, 바람직하게는 3:1 내지 90:1, 보다 바람직하게는 4:1 내지 80:1, 심지어 보다 바람직하게는 5:1 내지 70:1, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 6:1 내지 60:1, 특히 7:1 내지 50:1 또는 심지어 8:10 내지 40:1인 약제학적 조성물.
구현예 70. 치료요법에서 사용하기 위한, 구현예 65 내지 69 중 어느 하나의 약제학적 조성물.
구현예 71. 구현예 70에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 개체에서 MG, 특히 일과성 신생아 MG, 또는 자가면역 자율신경절병증 또는 모르반 증후군과 같은 자가면역 채널병증, 또는 부종양 증후군의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 조성물.
구현예 72. 구현예 71에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 약제학적 조성물은 96시간 범위 내, 바람직하게는 72시간 범위 내, 보다 바람직하게는 48시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 36시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 24시간 범위 내, 특히 18시간 범위 또는 12시간 범위 내에서 적어도 2회 투여되는 약제학적 조성물.
구현예 73. 구현예 70에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, MG(또는 자가면역 자율신경절병증 또는 모르반 증후군과 같은 자가면역 채널병증, 또는 부종양 증후군)가 있는 개체에게 존재하는 하나 이상의 자가항체를 제거하는 데 사용하기 위한 약제학적 조성물.
구현예 74. 구현예 73에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 약제학적 조성물은 96시간 범위 내, 바람직하게는 72시간 범위 내, 보다 바람직하게는 48시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 36시간 범위 내, 심지어 보다 바람직하게는 24시간 범위 내, 특히 18시간 범위 또는 12시간 범위 내에서 적어도 2회 투여되는 약제학적 조성물.
구현예 75. 구현예 71 내지 74 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 개체는 사람인 약제학적 조성물.
구현예 76. 구현예 70 내지 75 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 하나 이상의 항체가 펩타이드 P의 적어도 하나의 경우, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적인 개체에서 존재하고, 바람직하게는 여기서 상기 항체가 자가항체인 약제학적 조성물.
구현예 77. 구현예 70 내지 76 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물이 개체내에서 비-면역원성인 약제학적 조성물.
구현예 78. 구현예 70 내지 77 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물이 개체의 체중 kg당 1 내지 1000 mg, 바람직하게는 2 내지 500 mg, 보다 바람직하게는 3 내지 250 mg, 심지어 보다 바람직하게는 4 내지 100 mg, 특히 5 내지 50 mg의 화합물의 용량으로 투여되는 약제학적 조성물.
구현예 79. 구현예 70 내지 78 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서, 여기서 조성물이 복강내, 피하, 근육내 또는 정맥내 투여되는 약제학적 조성물.
구현예 80. 구현예 65 내지 79 중 어느 하나에서 정의한 바와 같은 약제학적 조성물을 수득하는 단계; 및
약제학적 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 필요로 하는 개체에게 MG(또는 자가면역 자율신경절병증 또는 모르반 증후군과 같은 자가면역 채널병증, 또는 부종양 증후군)를 개선 또는 치료하는 방법.
구현예 81. 구현예 65 내지 79 중 어느 하나에서 정의한 바와 같은 약제학적 조성물을 수득하는 단계; 및
약제학적 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에 존재하는 하나 이상의 항체의 제거(또는 고갈) 방법으로서, 여기서 조성물은 개체에서 비-면역원성이고, 여기서 개체에 존재하는 하나 이상의 항체가 적어도 하나의 경우의 P에 대해, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적인, 방법.
구현예 82. 구현예 81의 방법으로서, 여기서 개체가 비-사람 동물, 바람직하게는 사람 또는 비-사람 영장류, 양, 돼지, 개 또는 설치류, 특히 마우스인 방법.
구현예 83. 구현예 81 또는 82의 방법으로서, 여기서 생물중합체 스캐폴드가 개체와 관련하여 자가이고, 바람직하게는 여기서 생물중합체 스캐폴드가 자가 단백질인 방법.
구현예 84. 6 내지 50개의 아미노산, 보다 바람직하게는 6 내지 25개의 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 6 내지 20개의 아미노산, 심지어 보다 바람직하게는 7 내지 13개의 아미노산의 서열 길이를 지닌 펩타이드로,
여기서 펩타이드는 구현예 81-83 중 어느 하나에 정의된 P, Pa 또는 Pb를 포함하거나 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206, 바람직하게는 서열번호: 1-50, 서열번호: 101-150 및 서열번호: 201-206, 특히 서열번호: 1-20, 서열번호: 101-20 및 서열번호: 201-206으로부터 선택된 (바람직하게는 사람 니코틴성 AChR MIR-유래)아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개, 보다 바람직하게는 적어도 8개, 여전히 보다 바람직하게는 적어도 9개, 심지어 보다 바람직하게는 적어도 10개, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 적어도 11개 또는 심지어 12개, 특히 모든 연속되는 아미노산을 포함하고,
임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환된 펩타이드.
구현예 85. - 샘플을 구현예 84의 펩타이드와 접촉시키는 단계, 및
- 샘플 내 항체의 존재 및/또는 농도를 검출하는 단계;를 포함하는
생물학적 샘플에서 항 AChR 항체를 검출 및/또는 정량하는 방법.
구현예 86. 구현예 85의 방법에 있어서, 펩타이드는 고체 지지체, 특히 전기화학, 형광, 자기, 전자, 중력 또는 광학 생체변환기를 갖는 바이오센서 기반 진단 장치 상에 고정 및/또는 펩타이드는 리포터 또는 리포터 단편, 예컨대 PCA에 적합한 리포터 단편에 커플링된, 방법.
구현예 87. 구현예 85 또는 86에 있어서, 상기 방법이 샌드위치 검정, 바람직하게는 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)인 방법.
구현예 88. 구현예85내지 87 중 어느 하나에 있어서, 상기 샘플은 포유동물, 바람직하게는 사람으로부터 얻어지는 방법(바람직하게는 여기서 포유동물이 MG를 가지고 있거나 MG를 가질 것으로 의심되는 경우).
구현예 89. 구현예 85 내지 88 중 어느 하나에 있어서, 샘플이 혈액 샘플, 바람직하게는 전혈, 혈청 또는 혈장인 방법.
구현예 90. 구현예 84에 따른 펩타이드의 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA)에서의 용도로, 바람직하게는 구현예 85 내지 88 중 어느 하나에 정의된 방법을 위한 용도.
구현예 91. 구현예 84에 따른 펩타이드를 포함하는 진단 장치로, 펩타이드는 고체 지지체 상에 고정 및/또는 펩타이드는 리포터 또는 리포터 단편, 예컨대 PCA에 적합한 리포터 단편에 커플링된, 진단 장치.
구현예 92. 구현예 91에 있어서, 고체 지지체가 ELISA 플레이트 또는 표면 플라즈몬 공명 칩인 진단 장치.
구현예 93. 구현예 91에 따른 진단 장치로서, 상기 진단 장치는 전기화학적, 형광, 자기, 전자, 중력 또는 광학 생체변환기를 갖는 측면 흐름 분석 장치 또는 바이오센서 기반 진단 장치인, 진단 장치.
구현예 94. 구현예 84에 따른 펩타이드, 바람직하게는 구현예 91 내지 93 중 어느 하나에 따른 진단 장치, 및 바람직하게는 완충제, 시약, 설명서의 그룹으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 진단 키트.
구현예 95. 구현예 84에 따른 펩타이드를 포함하는 채집 장치(apheresis device)로, 바람직하게는 고체 담체 상에 고정된 채집 장치.
구현예 96. 구현예 95에 있어서, 고체 담체가 혈액 또는 혈장 흐름과 접촉할 수 있는 채집 장치.
구현예 97. 고체 담체가 구현예 1 내지 64 중 어느 하나에 따른 화합물을 포함하는, 구현예 95 또는 96에 따른 채집 장치.
구현예 98. 구현예 95 내지 97 중 어느 하나에 있어서, 고체 담체가 멸균되고 발열원이 없는 컬럼인 채집 장치.
구현예 99. 구현예 95 내지 98 중 어느 하나에 따른 채집 장치로서, 상기 채집 장치는 구현예 84에 따른 적어도 2개, 바람직하게는 적어도 3개, 보다 바람직하게는 적어도 4개의 상이한 펩타이드를 포함하는, 채집 장치.
본 발명을 이에 한정되지 않는, 다음의 도면 및 실시예로 추가로 나타낸다. 다음의 도면 및 실시예의 맥락에서, 본 발명의 접근법이 기반으로 하는 화합물은 또한 "선택적인 항체 고갈 화합물"(SADC)로 지칭된다.
도 1: SADC는 목적하지 않은 항체의 역가를 성공적으로 감소시킨다. 각각의 SADC는 정의된 항원에 대해 펩타이드 면역화에 의해 예비-면역화된 Balb/c 마우스내로 복강내 투여함으로써 0 시점에 적용시켰다. 각각의 상부 패널(top panel)은 상응하는 항체를 검출하는 표준 ELISA에 따라 OD 값(y_축)에 대한 항-펩타이드 역가(0.5x 희석 단계; X-축은 log(X) 희석을 나타낸다)를 나타낸다. 각각의 하부 패널은 각각의 SADC 주사 전 역가(즉, -48h 및 -24h에서의 역가) 및 각각의 SADC 적용 후(즉, 주사 후 +24h, +48h 및 +72h째 역가; x-축에 나타냄) LogIC50(y-축)를 나타낸다. (A) EBNA1(전자간증과 관련됨)에 대해 지시된 항체에 결합하는 생물중합체 스캐폴드로서 알부민을 지닌 화합물. 마우스를 EBNA-1 모델 에피토프를 수반하는 펩타이드 백신으로 예비-면역화시켰다. (B) 사람 AChR 단백질 MIR(MG와 관련됨)로부터 유래된 펩타이드에 대해 지시된 항체에 결합하는 생물중합체 스캐폴드로서 알부민을 지닌 화합물. 마우스를 AChR MIR 모델 에피토르를 수반하는 펩타이드 백신으로 예비-면역화시켰다. (C) EBNA1(전자간증과 관련됨)에 대해 지시된 항체에 결합하는 생물중 합체 스캐폴드로서 면역글로불린을 지닌 화합물. 마우스를 EBNA-1 모델 에피토프를 수반하는 펩타이드 백신으로 예비-면역화시켰다. (D) EBNA1(전자간증과 관련됨)에 대해 지시된 항체에 결합하는 생물중합체 스캐폴드로서 합토글로빈을 지닌 화합물. 마우스를 EBNA-1 모델 에피토프를 수반하는 펩타이드 백신으로 예비-면역화시켰다. (E) 패널 C에 나타낸 실험에서 사용된 EBNA1에 대해 지시된 항체에 결합하는 동일한 면역글로불린-기반 SADC를 사용한 선택성의 증명. 마우스를 관련되지 않은 아미노산 서열로 예비-면역화시켰다. 역가 감소는 발생하지 않았고, 이는 화합물의 선택성을 입증하였다
도 2: SADC는 비-면역원성이고 마우스 내로 반복된 주사 후 항체 형성을 유도하지 않는다. 동물 C1-C4 뿐만 아니라 동물 C5-C8을 2개의 상이한 SADC로 복강내 처리하였다. 대조군 동물 C를 사람 AChR 단백질 MIR로부터 유래된 KLH-펩타이드로 예방접종하였다. 1:100의 희석에서 표준 ELISA에 의한 항체 역가 검출을 위해, BSA-접합된 펩타이드 프로브 T3-1, T9-1 및 E005(회색 바아, 그래프에서 나타낸 바와 같음)를 각각 사용하여, 백신-처리된 대조군 동물 C(y-축, OD450 nm)와 비교하는 경우, 항체 유도가 SADC로 처리한 동물에서 부재하였음이 입증될 수 있다.
도 3: 1가 또는 2가 펩타이드의 다중 카피를 수반하는 SADC를 사용한 항체의 성공적인 시험관내 고갈. 1가 또는 2가 펩타이드를 지닌 SADC는 항체를 흡수함으로써 이를 고갈시키는데 매우 적합하였다. "1가"는 펩타이드 단량체가 생물중합체 스캐폴드(즉, n=1)에 결합함을 의미하는 반면, "2가"는 펩타이드 이량체가 생물중합체 스캐폴드(즉, n=2)에 결합함을 의미한다. 본 경우에, 2가 펩타이드는 "단독2가 (homodivalent)"인데, 즉, SADC의 펩타이드 n-머는 E006 - 스페이서 - E006)이다.
도 4: 다양한 SADC 생물중합체 스캐폴드를 사용한 마우스에서 신속하고 선택적인 항체 고갈. 모의 처리된(mock treated) 대조군 그룹 SADC-CTL(관련되지 않은 펩타이드 함유)과 비교하는 경우 처리된 그룹은 이미 24 시간째에 신속하고 확실한 항체 감소를 나타내었다(특히 SADC-TF). 알부민 스캐폴 - SADC - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC.
도 5: SADC 주사 후 24시간째에 이의 펩타이드 모이어티를 통한 혈장 속의 SADC의 검출. 합토글로빈-스캐폴드-기반 SADC(SADC-HP 및 SADC-CTL)는 SADC-ALB, SADC-IG oder SADC-TF와 같은 다른 생물중합체 스캐폴드를 지닌 SADC보다 장점을 나타내는 비교적 보다 짧은 혈장 반감기를 나타내었다. 알부민 스캐폴드 - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC.
도 6: SADC 주사 후 24시간째에 혈장 속에서 SADC-IgG 복합체의 검출. 합토글로빈 기반 SADC는 다른 생물중합체 스캐폴드를 지닌 SADC와 비교하는 경우 가속화된 청소(clearance)에 처리하였다. 알부민 스캐폴드 - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC.
도 7: SADC-IgG 복합체 형성의 시험관내 분석. 동물 SADC-TF 및 -ALB는 강력한 신호 및 항원-항체 평형으로부터 항원 과다로의 이전으로 인해 1000ng/ml SADC-TF의 경우에 급격한 신호 저하에 의해 반영되는 것으로서 명백한 면역복합체 형성 및 C1q에 대한 결합을 나타내었다. 대조적으로, SADC-HP 또는 SADC-IG를 사용한 시험관내 면역복합체 형성은 존재하는 검정에서 측정시 훨씬 덜 효율적이었다. 이러한 발견은 합토글로빈 스캐폴드가 보체 시스템을 활성화시키기 위한 감소된 경향성(propensity)으로 인하여 다른 SADC 생물중합체 스캐폴드보다 유리하다는 발견을 확증한다. 알부민 스캐폴드 - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC.
도 8: 시험관내에서 SADC에 의한 IgG 포획의 측정. SADC-HP는 SADC-TF 또는 SADC-ALB과 비교하는 경우 시험관내에서 현저히 적은 항체 결합능을 나타내었다. 알부민 스캐폴드 - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC.
도 9: 항-CD163-항체 기반 생물중합체 스캐폴드의 혈액 청소. 마우스 모델에서, mAb E10B10(뮤린 CD163에 특이적)은 mAb Mac2-158(사람 CD163에 특이적이지만 뮤린 CD163에 특이적이지 않으므로 이 실험에서 음성 대조군으로 사용됨)보다 순환에서 심지어 더 빠르게 청소된다.
실시예 1-3, 5-8 및 11-13은 SADC가 바람직하지 않은 항체의 선택적 제거에 매우 적합함을 입증한다. 실시예 4 및 10 뿐만 아니라 14 및 15은 MG-관련 자가항체와 관련하여 본 발명의 화합물에 대한 보다 상세한 내용을 포함한다.
실시예 1: SADC는 목적하지 않은 항체의 역가를 효과적으로 감소시킨다.
동물 모델: 사람 처방에서 환형의 목적하지 않은 항체의 측정가능한 역가를 지닌 생체내 모델을 제공하기 위하여, BALB/c 마우스를 확립된 하람 자가항원 또는 항-약물 항체로부터 유래된 KLH-접합된 펩타이드 백신을 사용한 표준 실험 예방접종을 사용하여 면역화시켰다. 표준 펩타이드 ELISA에 의한 역가 평가 후, 면역화된 동물을 상응하는 시험 SADC로 처리하여 SADC 처리에 의한 선택적인 항체 저하를 입증하였다. 모든 실험을 상응하는 동물 윤리에 의한 안내에 따라 수행하였다.
모델 항원을 사용한 마우스의 면역화: 암컷 BALB/c 마우스(8 내지 10주령)는 Janvier(프랑스)가 제공하였으며, 12시간 광/12시간 암 주기 하에 유지시키고 사료 및 물을 자유로이 접근하도록 하였다. 면역화는 2주 간격으로 3회 주사한 KLH 담체-접합된 펩타이드 백신의 피하 적용에 의해 수행하였다. KLH 접합체를, 바이러스 항원(EBNA-1)과 내인성 사람 수용체 항원, 즉, 자간전증과 관련된 것으로 밝혀진(Elliott 등), 태반 GPR50 단백질 사이의 분자 모조품(mimicry)에 대한 예를 나타낸, 펩타이드 T3-2(CGRPQKRPSCIGCKG)를 사용하여 생성시켰다. 이러한 접근법의 일반화를 확립하기 위하여, 자가면역 병태 MG으로부터 유래된 보다 큰 항원성 펩타이드를 사람 자가에피토프를 사용한 마우스의 면역화에 사용하였다. 펩타이드 T3-2와 유사하게, 동물을 질환의 병리학에 근본 역활을 하는 사람 AChR 단백질의 MIR(주요 면역원성 영역)으로부터 유래된 펩타이드 T1-1(LKWNPDDYGGVKKIHIPSEKGC)으로 면역화시켰다(Luo 등, 2009). T1-1 펩타이드는 마우스를 사람 AChR 자가항원의 대용 부분 모델 에피토프를 사용하여 면역화시키기 위해 사용하였다. 펩타이드 T8-1(DHTLYTPYHTHPG)을 사용하여 대조군 마우스를 면역화시킴으로써 시스템의 선택성의 입증을 위한 대조군 역가를 제공하였다. 백신 접합체 제조를 위해, KLH 담체(Sigma)를 설포-GMBS(제품 번호 22324 Thermo)로 제조업자의 지시에 따라 활성화시킨 후, N- 또는 C-말단적으로 시스테이닐화된(cysteinylated) 펩타이드 T3-2 및 T1-1 중의 하나를 첨가하고 Alhydrogel®을 최종 첨가한 후 동물의 옆구리에 주사하였다. 백신 T3-2 및 T1-1에 대한 용량은 용량당 1%의 최종 농도에서 Alhydrogel®(InvivoGen VAC-Alu-250)을 함유하는 주사 당 100μg의 용적 속에 15ul의 접합체이었다.
환형 SADC의 생성: T3-2 및 T1-1 면역화된 마우스의 DSDC에 의한 선택적인 항체 저하 활성을 시험하기 위하여, SADC를 생물중합체 스캐폴드로서 마우스 혈청 알부민(MSA) 또는 마우스 면역글로불린(마우스-Ig)을 사용하여 제조함으로써 마우스에서 어떠한 면역 반응도 유도하지 않을, 자가 생물중합체 스캐폴드를 생성시키거나, 생물중합체 스캐폴드(이는 72시간내 1회 주사 후 동종면역 반응을 유도하지 않았다)로서 비-자가 사람 합토글로빈을 생성시켰다. N-말단으로 시스테이닐화된 SADC 펩타이드 E049(GRPQKRPSCIG) 및/또는 C-말단으로 시스테이닐화된 SADC 펩타이드 E006(VKKIHIPSEKG)를 스캐폴드에 설포-GMBS(제품 번호 22324 Thermo)-활성화된 MSA(Sigma; 제품 번호 A3559) 또는 -마우스-Ig(Sigma, I5381) 또는 -사람 합토글로빈(Sigma H0138)을 사용하여 제조업자의 설명서에 따라 연결시킴으로써, 상응하는 생물중합체 스캐폴드의 라이신에 공유결합으로 부착된, MSA-, Ig- 및 합토글로빈-기반 SADC를 제공하였다. 이작용성 아민-대-설프하이드릴 가교 결합제를 통해 라이신에 대한 시스테이닐화된 펩타이드의 접합 외에도, 첨가된 시스테이닐화된 SADC 펩타이드의 부위를 알부민 스캐폴드 단백질의 시스테인의 설프하이드릴 그룹과 반응시켰으며, 이는 접합체를 DTT로 처리한 다음 유리 펩타이드를 진량 분광법 또는 유리 펩타이드를 검출하는 임의의 다른 분석 방법을 사용한 후속적인 검출로 검출할 수 있다. 최종적으로, 이러한 SADC 접합체는 물에 대해 Pur-A-Lyzer™(Sigma)을 사용하여 투석하고 후속적으로 동결건조시켰다. 동결건조된 물질은 동물에게 주사하기 전에 PBS 속에 재현탁시켰다.
SADC의 생체내 기능 시험: 환형 SADC, SADC-E049 및 SADC-E006을 펩타이드 백신 T3-2(EBNA-1 모델 에피토프 수반) 및 펩타이드 백신 T1-1(AChR MIR 모델 에피토프 수반)로 미리 면역화시킨 마우스 내로 복강내 주사하였다(i.p.; 사람 및 보다 큰 동물에서 의도된 정맥내 적용을 위한 대용품으로서). 적용된 용량은 50μl의 PBS 용적 속에 30μg의 SADC 접합체이었다. 채혈은 복강내 SADC 주사 전(-48h, -24h) 및 후(+24h, +48h, +72h 등) 각각에 모세관 미세-헤마토크릿 튜브(capillary micro-hematocrit tube)를 사용하여, 턱밑 정맥 천자(submandibular vein puncture)로 수행하였다. ELISA 분석(하기 참고)을 사용하여, 환형 SADC 둘 다는 나타낸 동물 모델에서 적어도 72시간에 걸쳐 역가를 명확하게 감소시킬 수 있음이 밝혀졌다. 따라서, SADC를 사용하여 생체내에서 역가를 효과적으로 감소시킬 수 있다고 결론지을 수 있다.
역가 분석: 펩타이드 ELISA를 BSA-커플링된 펩타이드(30nM, PBS 속에 용해시킴)로 실온에서 1시간 동안 코팅시킨 96-웰 플레이트(Nunc Medisorp 플레이트; Thermofisher, 제품 번호 467320)를 사용하여 표준 과정에 따라 수행하고 적절한 완충액과 함께 진탕(차단 완충액, 1% BSA, 1x PBS; 세척 완충액, 1xPBS/0.1% 트윈; 희석 완충액, 1xPBS / 0.1% BSA /0.1% 트윈)시키면서 수행하였다. 혈청 항온 처리(PBS 속에서 1:50로 출발하는 희석; 전형적으로 1:3 또는 1:2 적정 단계로)한 후, 결합된 항체를 Jackson immunoresearch (115-035-008)로부터 서양고추냉이 퍼옥시다제-접합된 염소 항-마우스 IgG(Fc)를 사용하여 검출하였다. 반응을 정지시킨 후, 플레이트를 450nm에서 20분 동안 TMB를 사용하여 측정하였다. EC50은 4-매개변수 로지스틱 회귀 모델(4-parameter logistic regression model)(GraphPad Prism)을 지닌 곡선 핏팅(curve fitting)을 사용하여 제조업자가 추천한 과정에 따라 판독물 값으로부터 계산하였다. 상한치 및 하한치에 대한 제한 매개변수(constraining parameter)를 상응하게 설정하여 R2 >0.98의 커브 핏팅 품질 수준(curve fitting quality level)을 설정하였다.
도 1a는 자간전증에서 자가항체 및 모조품에 대한 모델로서(Elliott 등), EBNA1에 대해 지시된 항원에 결합하는 환형 알부민-기반 SADC 후보물의 생체내 선택적인 혈장-저하 활성에 대해 마우스 모델에서 생체내 개념 증명을 나타낸다. 이러한 마우스 실험을 위해, 마우스 알부민을 사용하여, 외부 종(foreign species)으로부터의 단백질에 대한 어떠한 반응도 피하였다. 항체 역가를 표준 펩타이드 예방접종에 의해 6개월령 Balb/c 마우스에서 유도하였다. 하부 패널은 SADC 주사 전(즉, -48h 및 -24h에서의 역가) 역가 LogIC50(y-축)이 SADC 적용 후(즉, 주사 후 +24h, +48h 및 +72h에서의 역가; x-축에 나타냄) 역가 LogIC50보다 더 높았음을 입증한다.
유사한 실시예를 상이한 질환 처방을 위한 펩타이드 항체 결합 모이어티의 대안적인 예를 사용하여, 도 1b에 나타낸다. MG에서의 상황을 모사하기 위하여 사람 AChR 단백질 MIR 영역(Luo 등, 2009)으로부터 유래된 상이한 펩타이드로 예비-면역화시킨 마우스 모델에서 알부민-기반 SADC의 항체 저하 활성. AChR-MIR 영역에 대해 유도된 항체 역가를 MG에서 유발 역활을 하는 것으로 공지된 항-AChR-MIR 자가항체에 대한 대리물로서 사용하였다(참고: Vincent 등). 명확한 역가 감소가 SADC 적용 후 관찰되었다.
도 1c 및 1d는 대안적인 생물중합체 스캐폴드를 포함하는 SADC 변이 체의 기능성을 입증한다. 구체적으로, 도 1c는 면역글로불린 스캐폴드가 성공적으로 사용될 수 있는 반면, 도 1d는 SADC를 작제하기 위한 합토글로빈-스캐폴드의 사용을 입증한다. 예 둘 다는 공유결합으로 결합된 실시예 펩타이드 E049를 수반하는, SADC에 의한 선택적인 항체 저하에 대한 생체내 개념 증명을 나타낸다.
자가 스캐폴드 단백질이 바람직할 수 있지만 합토글로빈-기반 SADC를 대리물로서 사람 합토글로빈을 사용하여 생성시켰다. 항-사람-합토글로빈 항체의 형성을 피하기 위하여, 비-자가 스캐폴드 합토글로빈의 마우스 당 단지 1회 단일 SADC 주사를 본 실험 조건을 위해 사용하였다. 예측한 바와 같이, 본 실험 조건(즉, 1회 적용) 하에서, 본 대리물 합토글로빈 동족체에 대해 항체 반응성은 관찰되지 않았다.
도 1e는 SADC 시스템의 선택성을 입증한다. 펩타이드 E049를 수반하는 면역글로불린-기반 SADC(즉, 도 1c와 동일함)는 관련되지 않은, 비관련성 아미노산 서열, 지정된 펩타이드 T8-1(DHTLYTPYHTHPG)을 사용한 펩타이드에 의해 유도된 Ig-역가를 감소시킬 수 없다. 실시예는 시스템의 선택성에 대한 생체내 개념 증명을 나타낸다. 상단 패널은 표준 ELISA에 따라 OD 값(y-축)에 대한 항-펩타이드 T8-1 역가(1:50로부터 1:102400까지의 0,5x 희석 단계; X-축은 log(X) 희석을 나타낸다)를 나타낸다. T8-1-역가는 적용 후 SADC-Ig-E049의 투여에 의해 영향받지 않는다. 하단 패널은 SADC 주사 전(즉, -48h 및 -24h에서 역가) 초기 역가 LogIC50(y-축)가 SADC 적용 후(즉, 역가 +24h, +48h 및 +72h; x-축에서 나타낸 바와 같음) 역가 LogIC50과 비교하는 경우 SADC-Ig-E049의 투여(화살표)에 의해 영향받지 않음으로써, 시스템의 선택성을 증명함음을 입증한다.
실시예 2: SADC의 면역원성.
SADC의 면역원성을 배제시키기 위하여, 환형 후보물 SADC를 반복된 주사시 항체를 유도하는 이의 경향성에 대해 시험하였다. 펩타이드 T3-1 및 T9-1을 당해 시험을 위해 사용하였다. T3-1은 이에 대해 작용성 자가항체가 전-자간증 동물 모델에서 형성된 안지오텐신 수용체의 참고 에피토프로부터 유래된 10개 아미노산 펩타이드이고(Zhou 등); T9-1은 사람 IFN 감마의 참고 항-약물 항체 에피토프로부터 유래된 12개 아미노산 펩타이드이다(Lin 등). 이러한 대조군 SADC 접합체를 8 내지 10주령에서 출발하여 나이브(naive), 비-면역화된 암컷 BALB/c 마우스내로 복강내에 2주마다 8회 주사하였다.
동물 C1 내지 C4를 SADC T3-1으로 복강내 처리하였다(실시예 1에 기술된 바와 같음). 동물 C5 내지 C8을 펩타이드 T9-1을 수반하는 SADC를 사용하여 복강내 처리하였다. ELISA 분석을 위한 참고 신호로서, KLH-펩타이드 T1-1(AChR_MIR로부터 유래됨, 실시예 1에서 설명됨)로 3회 예방접종시킨 대조군 동물로부터의 혈장을 사용하였다. 1:100의 희석에서 표준 ELISA에 의한 항체 역가 검출에 대해, BSA-접합된 펩타이드 프로브 T3-1, T9-1 및 E005(GGVKKIHIPSEK)을 각각 사용하여, 백신-처리된 대조군 동물 C와 비교하는 경우, 항체 유도가 SADC-처리된 동물에서 부재하였음을 입증할 수 있다(참고: 도 2). 3번째 백신 주사 후 1주째(대조군 동물 C) 및 2주 간격으로 마지막 8회의 연속적인 SADC 주사 후(동물 C1 내지 C8) 각각 후 혈장을 턱밑 혈액 수집으로 수득하였다. 따라서, SADC는 비-면역원성이고 마우스내로 반복된 주사 후 항체 형성을 유도하지 않음이 입증되었다.
실시예 3: 1가 또는 2가 펩타이드의 다수 카피를 수반하는 SADC를 사용한 항체의 성공적인 시험관내 고갈.
E006-KLH(KLH에 접합된, C-말단 시스테인을 지닌 VKKIHIPSEKG(예방접종된 마우스의 혈장을 희석 완충액(PBS + 0.1% w/v BSA + 0.1% 트윈(Tween) 20) 속에 1:3200으로 희석시키고 음성 대조군으로서 2.5 μg/ml(250 ng/웰)의 SADC 또는 5 μg/ml(500 ng/웰)의 알부민으로 코팅시킨 미세역가 플레이트의 단일 웰에서 4회 연속적으로(10분/웰) 항온처리(100 μl, 실온)하였다.
SADC 코팅된 웰에서 항온처리 전 및 후에 존재하는 유리되고, 결합되지 않은 항체의 양을 측정하기 위하여, 50 μl의 희석된 혈청을 고갈 전 및 후에 취하고 표준 ELISA에 의해 E006-BSA 코팅된 플레이트(10 nM 펩타이드)를 사용하여 정량화하고 염소 항 마우스 IgG 바이오(Southern Biotech, 1:2000로 희석시킴)로 희석시켰다. 후속적으로, 바이오티닐화된 항체를 스트렙타비딘-HRP(Thermo Scientific, 1:5000으로 희석시킴)으로 기질로서 TMB를 사용하여 검출하였다. 신호의 발달은 0.5 M 황산으로 정지시켰다.
ELISA를 OD450nm(y-축)에서 측정하였다. 결과적으로, 항체는 C-말단 시스테인을 지닌 펩타이드 E006(서열 VKKIHIPSEKGC)을 함유하는 코팅된 1가- 또는 2가 SADC에 의해 효율적으로 흡착되었다(전 = 고갈된 출발 물질 없음; 1가는 SADC 표면에 나타난 펩타이드에 상응한다; 음성 대조군은 알부민이었다; x-축에 나타냄). 도 3 참고. ("1가"는 펩타이드 단량체가 생물중합체 스캐폴드에 결합함을 의미(즉, n=1)하는 반면 "2가"는 펩타이드 이량체가 생물중합체 스캐폴드에 결합함을 의미(즉, n=2)한다. 본 경우에, 2가 펩타이드는 "단독2가"이었는데, 즉 SADC의 펩타이드 n-머는 E006 - S - E006이다.)
이는 1가 또는 2가 펩타이드를 지닌 SADC가 항체를 흡착시킴으로써 이를 고갈시키는데 매우 적합함을 입증한다.
실시예 4: 미모토프 -기반 SADC의 생성
야생형 또는 변형된 펩타이드 아미노산 서열로부터 유래된 선형 및 환형 펩타이드를 MG-관련 항체의 선택적인 제거를 위한 특이적인 SADC의 작제를 위해 사용할 수 있다. 특수한 에피토프의 경우에, 선형 펩타이드 또는 구속된 펩타이드, 예를 들면, 에피토프의 일부 또는 이의 변이체를 함유하는 사이클로펩타이드(여기서, 예를 들면, 하나 또는 수개의 아미노산은 치환되거나 화학적으로 변형되어 항체(미모토프)에 대한 친화성을 증진시켰다)는 SADC를 작제하는데 사용될 수 있다. 펩타이드 스크린은 질병 유발 자가항체에 대해 최적화된 친화성을 지닌 펩타이드를 확인하는 목표로 수행될 수 있다. 구조적 또는 화학적 펩타이드 변형의 유연성(flexibility)은 HLA에 대한 펩타이드 결합의 면역원성의 위험 및 따라서 원치않은 면역 자극 위험을 최소화시키기 위한 해결책을 제공하였다.
따라서, 야생형 뿐만 아니라 변형된 선형 및 환형 펩타이드 서열은 AChR MIR 부터 유래될 수 있다. 다양한 길이 및 위치의 펩타이드는 아미노산 치환에 의해 시스템적으로 추정되었고 펩타이드 배열에서 합성되었다. 이는 이러한 서열로부터 유래된 60000개의 환형 및 선형의 야생형 및 미모토프 펩타이드의 스크리닝을 허용하였다. 펩타이드 배열을 근무력증 자가항체 와 함께 항온처리하였다. 따라서, 이러한 자가항체를 사용하여 60000개의 펩타이드를 스크리닝하였고 100개의 환형 및 100개의 선형 펩타이드 히트(hit)를 자가항체에 대한 이들의 상대적인 결합 강도를 기반으로 선택하였다. 이러한 200개 펩타이드 중에서, 51개의 서열은 선형 펩타이드 그룹과 환형 펩타이드 그룹 사이에서 동일하였다. 확인된 가장 우수한 펩타이드 모두는 원래의 서열 각각에 대해 정렬하는 경우 적어도 하나의 아미노산 치환을 가졌고 따라서 미모토프로 고려된다. 보다 높은 결합 강도가 환형화된 펩타이드로 달성될 수 있다고 또한 결론지어졌다.
이러한 새로이 확인된 펩타이드, 우선적으로 높은 상대적 결합 값을 지닌 것을 사용하여 MG-관련 자가항체를 고갈하기 위한 SADC를 생성시켰다.
실시예 5: 다양한 SADC 생물중합체 스캐폴드를 사용한 마우스에서의 신속하고, 선택적인 항체 고갈.
10 μg의 모델 목적하지 않은 항체 mAb 항 V5(Thermo Scientific)를 암컷 Balb/c 마우스(처리 그룹 당 5마리; 9 내지 11주령)에게 복강내 주사한 다음 초기 항체 투여 후 48시간째에 50 μg의 SADC(결합된 표적화된 V5 펩타이드를 지닌 상이한 생물중합체 스캐폴드, 하기 참고)를 정맥내 주사하였다. 턱밑 정맥으로부터 24시간 간격에서 혈액을 수집하였다. 0 hr 시점에 대한 혈액 샘플을 SADC 투여 직전에 취하였다.
혈액을 SADC 투여 후 120시간 시점까지 24시간마다 수집하였다(x-축). SADC 투여 후 혈장 항-V5 IgG 수준의 쇠퇴 및 감소를 코팅된 V5-펩타이드-BSA(펩타이드 서열 IPNPLLGLDC)와 함께 표준 ELISA 과정을 사용하여 항 V5 역가 판독 및 도 4에 나타낸 바와 같은 염소 항 마우스 IgG 바이오(Southern Biotech, diluted 1:2000)에 의한 검출로 측정하였다. 또한, SADC 수준(참고: 실시예 6) 및 면역복합체 형성(참고: 실시예 7)을 분석하였다.
EC50[OD450] 값을 4 매개변수 로지스틱 곡선 핏팅을 사용하여 측정하고 초기 수준(0 시점에서 1로 설정)과 이후 시점(x-축) 사이의 상대적인 신호 쇠퇴를 EC50 값의 비(y-축, 배 신호 감소 EC50)로서 계산하였다. 모든 SADC 펩타이드는 SADC의 직접적인 검출을 위한 태그 및 혈장 샘플로부터의 면역복합체를 함유하였고; SADC에 사용된 펩타이드 서열은: IPNPLLGLDGGSGDYKDDDDKGK-(BiotinAca)GC(알부민 스캐폴드 - SADC-ALB를 지닌 SADC, 면역글로불린 스캐폴드 - SADC-IG를 지닌 SADC, 합토글로빈 스캐폴드 - SADC-HP를 지닌 SADC, 및 트랜스페린 스캐폴드 - SADC-TF를 지닌 SADC) 및 음성 대조군 SADC로서 관련되지 않은 펩타이드 VKKIHIPSEKGGSGDYKDDDDKGK-(BiotinAca)GC(SADC-CTR)이었다.
5마리 동물의 상이한 처리 그룹에 대한 SADC 스캐폴드는 검정색/회색 음영으로 나타낸다(참고: 도 4의 삽도(inset)).
처리된 그룹은 모조물 처리된 대조군 그룹 SADC-CTL과 비교하는 경우 24 시간째에 이미 신속하고 명백한 항체 감소를 나타내었다(특히 SADC-TF). SADC-CTR은, 이의 펩타이드 서열이 투여된 항 V5 항체에 의해 인식되지 않으므로 항체 저하 활성을 가지지 않기 때문에 정상 항체에 대한 참고로 사용하였다. 따라서, SADC-CTR의 쇠퇴를 추세선(trend line)으로 표시하여 처리된 동물과 모조물 처리된 동물 사이의 항체 수준 차이를 강조하였다.
이러한 실험 조건 하에서 선택적인 항체 저하의 효능을 측정하기 위하여, 2원 ANOVA 시험을 SADC 투여 48시간 후 던네트 다중 비교 시험(Dunnett's multiple comparison test)을 사용하여 수행하였고, 항체 EC50은 SADC-CTR 참고 그룹(추세선)과 비교하여 모든 SADC 그룹에서 크게 유의적으로 감소하였다(p<0.0001). SADC 투여 120 시간째에, 항체 감소는 SADC-ALB 및 SADC-TF 그룹에서 매우 유의적이었고(둘 다 p<0.0001) SADC-HP 그룹에서 유의적(p=0.0292)이었으나, SADC-IG 그룹은 SADC 투여 120 시간 후 EC50 감소를 항한 경향성(p = 0.0722)을 나타내었다. 물론, 선택적인 항체 감소가 SADC 투여 후 모든 시험한 시점에서 SADC-ALB 및 SADC-TF 그룹에서 매우 유의적(p<0.0001)이었다.
모든 SADC 생물중합체 스캐폴드는 항체 수준을 선택적으로 감소시킬 수 있었다고 결론지어진다. 역가 감소는 SADC-ALB 및 SADC-TF로 가장 명확하며 항체 수준의 재결합 또는 재순환은 마지막 시점을 향해 검출되지 않았고, 이는 목적하지 않은 항체가 의도된 바와 같이 분해됨을 시사한다.
실시예 6: SADC 주사 후 24시간째에 혈장 속에서 SADC의 검출
Balb/c 마우스내로 정맥내 주사 후 24시간째에 상이한 SADC 변이체의 혈장 수준. SADC-ALB, -IG, -HP, -TF의 혈장 수준(y-축) 및 음성 대조군 SADC-CTR의 혈장 수준(x-축)의 측정을 실시예 5에 이미 기술된 동물로부터의 혈장에서 검출하였다. 주사된 혈장 SADC 수준은 표준 ELISA로 검출하였으며 이에 의해 SADC가 스트렙타비딘 코팅된 플레이트(Thermo Scientific)와 함께 이의 펩타이드의 이들의 바이오틴 모이어티를 통해 포획되었다. 포획된 SADC는 Flag-태그된 펩타이드를 검출하는 마우스 항 Flag-HRP 항체(Thermo Scientific, 1:2,000 희석됨)로 검출하였다(참고: 또한 실시예 7):
50 μg의 SADC를 정맥내 주사한 후 혈액 속에서 대략 25 μg/ml의 이론적 양을 추정할 때, SADC의 검출가능한 양은 SADC 주사 후 24시간 째에, SADC-ALB 또는 SADC-IG의 경우 799 내지 623 ng/ml 및 SADC-TF의 경우 대략 5000 ng/ml 이하의 범위이었다. 그러나, 놀랍게도 및 대조적으로, SADC-HP 및 대조군 SADC-CTR(이는 또한 SADC-HP 변이체이나, 당해 경우에 관련되지 않은 음성 대조군 펩타이드 E006를 수반한다, 참고: 앞서의 실시예)은 주사 후 24시간째에 순환으로부터 완전히 사라졌고, 더 이상 검출될 수 없었다. 도 5를 참고한다.
이는 본 실시예에서 시험한 합토글로빈 스캐폴드-기반 SADC 둘 다(즉, SADC-HP 및 SADC-CTR)가 면역복합체 형성의 생체내 위험으로 인한 보체 의존성 혈관 및 신장 손상에 있어서 이의 잠재적인 역활과 관련하여 SADC, 예를 들면, SADC-ALB, SADC-IG 또는 SADC-TF보다 장점을 나타내는 비교적 보다 짧은 혈장 반감기를 나타냄을 입증한다. SADC-HP의 다른 장점은 신속한 치료학적 효과가 요구되는 경우에 혈액으로부터 이의 원치않는 표적 항체의 가속화된 청소율이다. 이러한 결과는 합토글로빈-기반 SADC 스캐폴드(SADC-HP 및 SADC-CTR로 나타낸 바와 같음)가 SADC-결합 항체가 혈액 속에 존재하는 여부와 상관없이, 혈액으로부터의 신속한 청소에 적용됨으로써 바람직하지 않은 면역복합체 형성을 최소화하고 신속하고 효율적인 청소를 나타냄을 입증한다. 따라서 본 실시예에서 합토글로빈-기반 SADC, 예를 들면, SADC-HP는 둘 다 주사후 24시간째에 완전히 청소된 SADC-HP 또는 SADC-CTR과는 대조적으로, 기술된 조건 하에서 주사 후 둘 다 24시간째까지 여전히 검출가능한, SADC-TF 또는 SADC-ALB에 의해 입증되는 바와 같이, 다른 SADC 생물중합체 스캐폴드보다 치료학적으로 관련된 장점을 제공한다.
실시예 7: SADC 주사 후 24시간째에 혈장 속에서 SADC - IgG 복합체의 검출
생체내에서 SADC에 결합된 IgG의 양을 측정하기 위하여, 10 μg의 항 V5 IgG(Thermo Scientific)의 정맥내 주사에 이어 항체 주사 후 24시간째에 정맥내 투여된 SADC-ALB, -HP, -TF 및 -CTR(50 μg)의 주사 후, 혈장을, SADC 주사 후 24시간째에, 턱밑 정맥으로부터 수집하고, 이의 바이오티닐화된 SADC-V5-펩타이드 [IPNPLLGLDGGSGDYKDDDDKGK(BiotinAca)GC 또는 SADC-CTR의 경우 음성 대조군 펩타이드 VKKIHIPSEKGGSGDYKDDDDKGK(BiotinAca)GC]를 통해 혈장으로부터 SADC를 포획하기 위해 스트렙타비딘 플레이트 상에서 항온처리하였다. 스트렙타비딘-포획된 SADC에 결합된 IgG는 SADC 주사 후 24시간째에 혈장 속에 존재하는 SADC-항체 복합체의 검출을 위한 염소 항 마우스 IgG HRP 항체 (Jackson Immuno Research, 1:2,000으로 희석됨)를 사용한 ELISA로 검출하였다. 처리되지 않은 동물로부터의 음성 대조군 혈청에 대해 수득된 OD450nm 값(y-축)을 배경 보정(background correction)을 위해 시험 그룹의 OD450nm 값(x-축)으로부터 감하였다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 명백한 항-V5 항체 신호가 SADC-ALB 및 SADC-TF 주사된 마우스의 경우에 관찰되었지만(검정색 바아는, 5마리의 평균 값인, 1:25의 희석에서 배경 보정된 OD 값을 나타낸다; 표준 편차 오차 바아(standard deviation error bar)), 항체 신호는 SADC-HP 또는 대조군 SADC-CTR 주사된 동물에서 검출할 수 없었다(SADC-CTR은 임의의 항 V5 항체에 의해 인식되지 않는 관련없는 펩타이드 바이오-FLG-E006[VKKIHIPSEKGGSGDYKDDDDKGK(BiotinAca)GC]를 수반하는 음성 대조군이다). 이는 SADC의 정맥내 적용 후 24 시간째에 혈장 속에서 검출가능한 양의 SADC-HP/IgG 복합체의 부재를 입증한다.
따라서, SADC-HP는 SADC-ALB 또는 SADC-TF와 비교하는 경우 항 V5 예비-주사된 마우스에서 가속화된 청소(clearance)에 적용된다.
실시예 8: SADC -면역글로불린 복합체 형성의 시험관내 분석
SADC-항체 복합체 형성을 PBS +0.1% w/v BSA + 0.1% v/v 트윈20 속에서 증가하는 농도의 SADC-ALB, -IG, -HP, -TF 및 -CTR과 함께 1 μg/ml의 사람 항 V5 항체(항 V5 에피토프 태그 [SV5-P-K], 사람 IgG3, 절대 항체)를 실온에서 2 시간 동안 예비-항온처리하여 시험관내에서 면역복합체가 형성되도록 함으로써 분석하였다. 복합체 형성 후, 샘플을 10 μg/ml의 사람 C1q(CompTech)로 미리 코팅된 ELISA 플레이트에서 실온에서 1시간 동안 항온처리함으로써, 시험관내 형성된 면역 복합체의 포획이 가능하도록 하였다. 복합체를 ELISA에 의해 항 사람 IgG(Fab 특이적인)-퍼옥시다제(Sigma, 1:1,000로 희석됨)를 사용하여 후속적으로 검출하였다. OD450 nm에서 측정된 신호(y-축)는 시험관내에서 항체-SADC 복합체 형성을 반영한다.
도 7에 나타낸 바와 같이, SADC-TF 및 -ALB는 항원-항체 평형으로부터 항원 과다로의 이전으로 인하여 1000ng/ml SADC-TF의 경우에 강력한 신호 및 급격한 신호 저하로 반영되는 바와 같이 명백한 면역복합체 형성 및 C1q에 대한 결합을 나타내었다. 대조적으로, SADC-HP 또는 SADC-IG를 사용한 시험관내 면역 복합체 형성은 본 검정에서 측정한 경우 훨씬 덜 효율적이었다.
생체내 데이타(앞서의 실시예)와 함께, 이러한 발견은 합토글로빈 스캐폴드가 보체 시스템을 활성화시키기 위한 감소된 경향성으로 인하여 다른 SADC 생물중합체 스캐폴드보다 유리하다는 발견을 제공한다. 대조적으로, SADC-TF 또는 SADC-ALB는 보다 높은 복잡성을 나타내므로, 전통적인 보체 경로의 개시와 함께 C1 복합체를 활성화시키는 특정 위험을 수반한다(이러한 위험은 그러나, 일부 설정에 서 견디어질 수 있다).
실시예 9: 시험관내에서 SADC에 의한 IgG 포획의 측정
앞서의 실시예와 유사하게, 증가하는 양의 SADC(x-축에 나타냄)와 함께 1 μg/ml의 마우스 항 V5 항체(Thermo Scientific)를 사용하여 면역복합체를 시험관내에서 형성하도록 하였다. SADC-항체 복합체를 스트렙타비딘 코팅된 ELISA 플레이트에서 바이오티닐화된 SADC-펩타이드를 통해 포획한 다음(참고: 앞서의 실시예), 항 마우스 IgG-HRP(Jackson Immuno Research, 1:2,000으로 희석됨)를 사용하여 결합된 항-V5를 검출하였다.
이러한 검정 조건 하에서, SADC-HP는 SADC-TF 또는 SADC-ALB와 비교하는 경우 시험관내에서 현저히 적은 항체 결합능을 나타내었다(참고: 도 8, A). SADC에서 IgG 검출에 대해 계산된 EC50 값은 SADC-TF, -ALB 및 -HP의 경우 각각 7.0 ng/ml, 27.9 ng/ml 및 55.5 ng/ml이었다(참고: 도 8, B).
이러한 시험관내 발견은 SADC-HP가 원치않는 항체의 고갈을 위한 이의 치료학적 사용과 관련하여 안전성 장점으로서 고려되는 SADC-TF 또는 SADC-ALB와 비교하는 경우 보다 적은 면역복합체 형성능을 가진다는 관찰(참고: 앞서의 실시예)과 일치한다.
실시예 10: 목적하지 않은 MG-관련 자가항체를 감소시키기 위한 SADC
3개의 SADC를 제공하여 MG-관련 자가항체를 감소시킨다:
(a) 생물중합체 스캐폴드로서의 Mac2-158(제WO 2011/039510 A2호에 개시된 바와 같음)을 지닌 SADC-a 및 스캐폴드에 공유결합으로 결합된 서열 LRRNPAD를 지닌 적어도 2개 펩타이드,
(b) 생물중합체 스캐폴드로서 사람 트랜스페린을 지닌 SADC-b 및 스캐폴드에 공유결합으로 결합된 환형 서열 VRLRWNPADYP를 지닌 적어도 2개 펩타이드, 및
(c) 생물중합체 스캐폴드로서 사람 알부민을 지닌 SADC-c 및 스캐폴드에 공유결합으로 결합된 서열 YNLKWNPDDY를 지닌 적어도 2개 펩타이드.
이러한 SADC를 MG가 있는 개체에게 투여한다.
실시예 11: 항-CD163 항체 기반 SADC 생물중합체 스캐폴드의 생체 내 기능
항-마우스-CD163 mAb E10B10의 신속한 생체 내 혈액 제거(제WO 2011/039510 A2호에 개시됨). mAb E10B10은 마우스 IgG2a 백본으로 재합성되었다. 50 μg mAb E10B10 및 Mac2-158 (제WO 2011/039510 A2호에 개시된 바와 같이 사람-특이적 항-CD163 mAb, 마우스 CD163에 결합하지 않기 때문에 이 실시예에서 음성 대조군으로 사용됨)을 마우스에 정맥 내 주입하고 ELISA에서 12, 24, 36, 48, 72, 96 시간 후에 측정하여 혈액 제거율을 결정하였다.
직접적인 비교를 위해 둘 다 마우스 IgG2a 아이소타입으로 표현되었지만, E10B10은 마우스 CD163에 결합하는 반면 Mac2-158은 사람 특이적이므로, mAb E10B10은 도 9에 나타낸 바와 같이 대조군 mAb Mac2-158 보다 심지어 더 빠르게 순환계에서 제거되었다.
결론적으로 항-CD163 항체는 제거 프로파일 때문에 SADC 스캐폴드로 매우 적합하다. 이러한 스캐폴드가 있는 SADC는 바람직하지 않은 항체를 순환에서 빠르게 제거한다.
상세한 방법: 50ug의 바이오티닐화 모노클로날 항체 E10B10 및 바이오티닐화 Mac2-158을 마우스로 정맥 내 주사하고 12, 24, 36, 48, 72, 96시간 후에 ELISA로 측정하여 제거율을 결정하였다: 스트렙타비딘 플레이트를 실온에서 1시간 동안 PBS + 0.1% BSA + 0.1% Tween20에 희석된 혈장 샘플과 함께 인큐베이션하였다 (50 ㎕/웰). 세척 후(PBS + 0.1% Tween20으로 3회), 결합된 비오티닐화 항체는 1:1000 희석된 항-마우스 IgG+IgM-HRP 항체로 검출되었다. 세척 후, TMB 기질을 첨가하고 TMB 정지 용액으로 기질의 현상을 정지시켰다. OD450nm의 신호를 측정하였다. EC50 는 제한된 곡선 및 최소 제곱 회귀를 사용한 4 매개변수 곡선 피팅을 사용하여 비선형 회귀로 계산되었다. 시점 T12에서의 EC50 값(항체 주입 후 처음 측정된 시점임)을 100%로 설정하고, 다른 모든 EC50 값을 T12에서의 수준과 비교하였다.
실시예 12: 항-CD163 mAb의 에피토프 맵핑
mAb E10B10은 마우스의 혈액으로부터 CD163-매개된 가속화된 생체내 제거율을 제공한다 (실시예 11 참조). 이 항체의 에피토프는 환형 펩타이드 어레이를 사용하여 미세 매핑되었으며, 이로써 펩타이드는 마우스 CD163에서 유래되었다. 그 결과, mAb E10B10에 의해 인식되는 단백질 클러스터를 확인하였다(실시예 13 참조).
환형 펩타이드를 이용한 동일한 에피토프 맵핑 절차를 mAb Mac2-158(제WO 2011/039510 A2호에 개시된 바와 같음)로 수행하였다. mAb Mac2-158에 대한 에피토프 맵핑 결과로부터 수용체에 결합하는 리간드 및 항체의 내재화와 특히 관련된 CD163 에피토프 영역의 추가 구분을 허용하는 2개의 펩타이드 클러스터를 산출하였다(실시예 13 참조).
따라서 Mac2-158 및 E10B10에 대한 이들 새롭게 특성화된 에피토프는 CD163항체에 대한 3개의 바람직한 결합 영역을 나타낸다. 미세 에피토프 매핑 작업을 기반으로, 선형 또는 우선적으로 환형인 펩타이드가 합성되어 CD163을 표적으로 하는 폴리클로날 또는 모노클로날 항체 또는 다른 CD163 결합 SADC 스캐폴드의 유도, 생산 및 선택에 사용된다.
실시예 13: 항-CD163 mAb의 에피토프 맵핑
사람 CD163의 SRCR 도메인 1에 정렬된 펩타이드는 mAb Mac2-158 환형 에피토프 매핑 펩타이드의 상위 20개 펩타이드 히트에서 선택되었으며, 가장 바람직한 서열은 사람 CD163의 SRCR-1의 N-말단 및 C-말단에 있는 2개의 펩타이드 정렬 클러스터로부터 선택되었다. 그 결과, 다음 서열(및 그로부터 유래된 모티프)은 SADC 생물중합체 스캐폴드로 사용되는 항-CD163 항체 및 이의 단편에 매우 적합한 에피토프이다:
펩타이드 클러스터 1:
04 ----------------EWGTVCNNGWSME-------
07 -----CSGRVEVKVQEEW------------------
09 --------------QEEWGTVCNNGWS---------
12 -----------------WGTVCNNGWSMEA------
14 ---------------EEWGTVCNNGWSM--------
18 -------------VQEEWGTVCNNGW----------
19 ----------------EWGTVCNNGW----------
20 -----------------WGTVCNNGWS---------
huCD163-도메인1-3 DGENKCSGRVEVKVQEEWGTVCNNGWSMEAVSVICN
펩타이드 클러스터 2:
01 ------------ESALWDC--------------
02 ---------RGNESALWDC--------------
03 -------SCRGNESALW----------------
05 ------VSCRGNESALWDC--------------
06 --------------ALWDCKHDGW---------
08 ----DHVSCRGNESALW----------------
11 --------CRGNESALWD---------------
13 -----------NESALWDCKHDGW---------
17 ------------ESALWDCKHDGWG--------
huCD163-도메인1-3 RIWMDHVSCRGNESALWDCKHDGWGKHSNCTHQ
mAb E10B10의 미세 에피토프 매핑은 Mac2-158에서와 같이 수행되었다. 1068개의 환형 펩타이드(7, 10 및 13 아미노산의 크기를 가짐) 및 마우스 CD163 서열(UniProKB Q2VLH6.2)의 SRCR-1 내지 -3에서 유도된 것을 mAb E10B10으로 스크리닝하고 다음의 상위 결합 펩타이드를 수득하였다(상대적 신호 강도로 순위매김). 사람 CD163 서열은 마우스 CD163 서열의 클러스터에 정렬되어 또 다른 매우 적합한 에피토프를 나타낸다:
펩타이드 클러스터 3:
01 ---------------------VTNAPGEMKKELR---------
02 ------------------ASAVTNAPGEMKK------------
03 ---------------------VTNAPGEMKK------------
04 ---------------------VTNAPGE---------------
05 ----------------GSASAVTNAPGEM--------------
06 --------------------AVTNAPGEMKKEL----------
07 -----------------SASAVTNAPGEMK-------------
08 ---------------SGSASAVTNAPGE---------------
09 --------------------AVTNAPGEMK-------------
10 -------------------SAVTNAPGEM--------------
11 ------------------ASAVTNAPGE---------------
12 -------------------SAVTNAPGEMKKE-----------
13 ----------------------TNAPGEMKKE-----------
mCD163(SRCR-1, N-말단) VTNAPGEMKKELRLAGGENNCS
hCD163(SRCR-1, N-말단) SSLGGTDKELRLVDGENKCS
클러스터 3의 마우스 펩타이드 01 - 13의 사람 동족체는 성숙한 사람 CD163 단백질(UniProtKB: Q86VB7)의 N-말단 부분의 다음 서열을 갖는다:
클러스터 3 펩타이드 (마우스): 사람 동족체:
01 SSLGGTDKELR
06 SSLGGTDKEL
12,13 SSLGGTDKE
02,03 SSLGGTDK
07,09 SSLGGTD
05,10 SSLGGT
04,08,11 SSLGG
hCD163(SRCR-1) SSLGGTDKELRLVDGENKCS
이러한 동족체 펩타이드는 항-CD163 항체 기반 생물중합체 스캐폴드에 대한 추가로 매우 적합한 에피토프를 나타낸다.
실시예 14: 근무력증 항체 mAb198에 의해 결합된 선형 및 환형 미모토프 펩타이드에 대한 스크리닝
MG와 같은 근무력증 자가항체가 있는 자가면역 질환에서 사람 아세틸콜린 수용체 알파 사슬(UniProtKB P02708)에 대한 자가항체의 고갈 및 제거를 위한 SADC의 생성에 사용될 수 있는 Mimotope 펩타이드가 확인되었다. 또한, 상기 펩타이드는 항 AChR-자가항체가 있는 임의의 자가면역 질환에서 진단 목적, 바이오마커 검출 및 사람 자가항체의 탐색 및 정량화에도 사용될 수 있다.
크기가 7 내지 19개 아미노산인 펩타이드로 30000개 펩타이드의 맞춤 펩타이드 어레이가 합성되었다; 상기 펩타이드는 20개의 공통 아미노산 각각에 의한 각 아미노산 위치의 교환으로 176개의 AChR-MIR 펩타이드의 치환 분석을 기반으로 했다. 펩타이드는 마이크로어레이에서 직접 합성되었고, 사람 AChR 알파 사슬 MIR 포함 서열 FSHLQNEQWVDYNLKWNPDDYGGVKKIHI(Tzartos 등, 1991; Luo 등, 2009) 및 이전에 공개된 미모토프 서열(ETRLVANLLGGGSLRWNPADYGGIKKIRG) 보다 개선된 결합 강도를 가진 미모토프를 얻기 위해 단일클론 항체 mAB 198로 스크리닝했고, 이는 항체 mAB 132A (Trinh 등, 2014)의 도움으로 Torpedo AchR에서 유래되었다. 특히, 야생형 AChR-MIR 서열은 환자의 근무력증, 원치않는 질병유발 항체에 의해 인식되는 에피토프를 어느 정도 구조적으로 모방하는 것으로 알려져 있다. 미모토프 펩타이드 라이브러리는 펩타이드 변이체의 최대로 다양한 수집을 제공하기 위해 두 서열의 각 단일 아미노산 위치를 모든 천연 아미노산으로 치환하여 설계하였다. 모든 펩타이드는 선형 및 환형 펩타이드로서 이중체에서 합성되었다. 목표는 근무력증 항체의 천연 에피토프를 모방하는 펩타이드(미모토프)를 얻는 것이다.
미모토프 스크리닝에는 항체 mAB 198(Absolute Antibody Ltd, UK)을 사용하였다. 이것은 사람 AChR을 사용하여 랫트에서 생성된 프로토타입 항체이다(Tzartos 등, 1983; Asher 등, 1993). 이전에 mAB 198이 정맥내 투여 후 24시간 이내에 랫트에서 근무력증 증상을 유발할 수 있는 것으로 나타났으며 이전에 프로토타입 질병 유발 항체로 특성화되었다. 또한, 상기 항체를 주사한 동물은 주사 후 48시간 이내에 체중 감소를 보였다. mAB 198 또한 MG 환자의 AChR-MIR에 대한 자가항체와 경쟁하는 것으로 밝혀졌다(Mamalaki 등, 1993; Graus 등, 1997). 따라서 mAB198은 해당 AChR-MIR 에피토프 또는 에피토프의 일부를 모방할 수 있는 새로운 미모토프를 스크리닝하기 위한 대용의 프로브로 사용되었다.
판독으로서, 30000개의 선형 및 환형 펩타이드에 대한 mAB 198의 결합을 형광 판독으로 측정하고, 펩타이드는 백그라운드에 대해 정규화한 후 상대적인 형광 신호에 따라 순위가 매겨졌다.
상위 100개 선형 및 환형 미모토프는 위의 표 1과 표 2에 각각 나열되어 있다.
확인된 상위 100개의 환형 및 상위 100개의 선형 펩타이드 중에서, 미모토프 라이브러리가 치환 설계에 의해 초기에 설계되었던 원래 서열 FSHLQNEQWVDYNLKWNPDDYGGVKKIHI 또는 ETRLVANLLGGGSLRWNPADYGGIKKIRG에 정렬되었을 때 히트 중 어느 것도 100% 동일성을 나타내지 않았다. 이는 사람 AChR(UniProtKB P02708) 또는 이전에 Trinh(Thrinh 등, 2014)에 의해 공개된 mimotope 서열의 원래 서열을 가진 펩타이드와 비교할 때 이 스크린에서 식별된 미모토프가 mAB198에 대한 우수한 결합제임을 입증한다.
결합 강도와 특이성을 더욱 향상시키기 위해, 이러한 미모토프는 추가 서열 치환 순회(rounds) 또는 심지어 화학적으로 변형된 아미노산에 의해 변형되어, 개선된 항체 고갈 및 원치 않는 질병 유발 항체의 제거, 진단 또는 바이오마커 발견 및 분석을 위한 자가항체의 개선된 검출을 달성한다.
실시예 15: 근무력증 항체 mAb637에 의해 결합된 환형 에피토프 펩타이드에 대한 스크리닝
7, 10 및 13개 아미노산 길이 및 6, 9 및 12개 아미노산의 펩타이드 중첩을 갖는 사람 아세틸콜린 수용체 알파 사슬(UniProtKB P02708)로부터 유래된 1215개의 환형 펩타이드를 실시예 14에서 수행된 방법과 유사하게 합성하였고, 이전에 공개된 환자 유래 MG 항체인 mAB 637의 에피토프 매핑에 사용했다(Graus 등, 1997).
이 스크리닝 결과, 다음의 상위 6개의 환형 펩타이드가 확인되었고, MG 및 자가면역 질환이 있는 다른 환자에서 항 AChR-MIR 항체의 고갈 및 검출 또는 본원에 개시된 임의의 다른 목적에 바람직하게 사용될 수 있다. mAB 637에 의해 인식된 상위 확인된 펩타이드는 다음과 같다:
MIR-c03 ---------WVDYNLKWNPDDY--------
MIR-c05 ------------YNLKWNPDDY--------
MIR-c13 ---------------KWNPDDY--------
MIR-c06 LFSHLQNEQWVDY-----------------
MIR-c15 ------NEQWVDY-----------------
MIR-c20 ---HLQNEQWVDY-----------------
huAChR-MIR -FSHLQNEQWVDYNLKWNPDDYGGVKKIHI
이들 펩타이드는 또한 상기 표 3에 나열되어 있다.
결합 강도와 특이성을 더욱 향상시키기 위해, 이러한 펩타이드는 추가 서열 치환 순회 또는 심지어 화학적으로 변형된 아미노산에 의해 변형되어, 개선된 항체 고갈 및 원치 않는 질병 유발 항체의 제거, 진단 또는 바이오마커 발견 및 분석을 위한 자가항체의 개선된 검출을 달성한다.
[비특허문헌]
Asher, Orna, 등 "Increased gene expression of acetylcholine receptor and myogenic factors in passively transferred experimental autoimmune myasthenia gravis." The Journal of Immunology 151.11 (1993): 6442-6450.
Carter, John Mark, and Larry Loomis-Price. "B cell epitope mapping using synthetic peptides." Current protocols in immunology 60.1 (2004): 9-4.
Dijkstra, C. D., 등 "The heterogeneity of mononuclear phagocytes in lymphoid organs: distinct macrophage subpopulations in rat recognized by monoclonal antibodies ED1, ED2 and ED3." Microenvironments in the Lymphoid System. Springer, Boston, MA, 1985. 409-419.
Elliott, Serra E., 등 "A pre-eclampsia-associated Epstein-Barr virus antibody cross-reacts with placental GPR50." Clinical Immunology 168 (2016): 64-71.
Erlandsson, Ann, 등 "In vivo clearing of idiotypic antibodies with antiidiotypic antibodies and their derivatives." Molecular immunology 43.6 (2006): 599-606.
Etzerodt, Anders, 등 "Efficient intracellular drug-targeting of macrophages using stealth liposomes directed to the hemoglobin scavenger receptor CD163." Journal of controlled release 160.1 (2012): 72-80.
Fabriek, Babs O., 등 "The macrophage scavenger receptor CD163 functions as an innate immune sensor for bacteria." Blood 113.4 (2009): 887-892.
Garces, Jorge Carlos, 등 "Antibody-mediated rejection: a review." The Ochsner Journal 17.1 (2017): 46.
Gazarian, Karlen, 등 "Mimotope peptides selected from phage display combinatorial library by serum antibodies of pigs experimentally infected with Taenia solium as leads to developing diagnostic antigens for human neurocysticercosis." Peptides 38.2 (2012): 381-388.
Gfeller, David, 등 "Current tools for predicting cancer-specific T cell immunity." Oncoimmunology 5.7 (2016): e1177691.
Granfeldt, Asger, 등 "Targeting dexamethasone to macrophages in a porcine endotoxemic model." Critical Care Medicine 41.11 (2013): e309-e318.
Graus, Yvo F., 등 "Human anti-nicotinic acetylcholine receptor recombinant Fab fragments isolated from thymus-derived phage display libraries from myasthenia gravis patients reflect predominant specificities in serum and block the action of pathogenic serum antibodies." The Journal of Immunology 158.4 (1997): 1919-1929.
Graversen, Jonas H., 등 "Targeting the hemoglobin scavenger receptor CD163 in macrophages highly increases the anti-inflammatory potency of dexamethasone." Molecular Therapy 20.8 (2012): 1550-1558.
Gurda, Brittney L., 등 "Mapping a neutralizing epitope onto the capsid of adeno-associated virus serotype 8." Journal of virology 86.15 (2012): 7739-7751.
Hansen, Lajla Bruntse, Soren Buus, and Claus Schafer-Nielsen. "Identification and mapping of linear antibody epitopes in human serum albumin using high-density peptide arrays." PLoS One 8.7 (2013): e68902.
Homma, Masayuki, 등 "A Novel Fusion Protein, AChR-Fc, Ameliorates Myasthenia Gravis by Neutralizing Antiacetylcholine Receptor Antibodies and Suppressing Acetylcholine Receptor-Reactive B Cells." Neurotherapeutics 14.1 (2017): 191-198.
Howard Jr, James F. "Myasthenia gravis: the role of complement at the neuromuscular junction." Annals of the New York Academy of Sciences 1412.1 (2018): 113-128.
Howarth, M., & Brune, K. D. (2018). New routes and opportunities for modular construction of particulate vaccines: stick, click and glue. Frontiers in immunology, 9, 1432.
Huang, Kun, Yue-Bei Luo, and Huan Yang. "Autoimmune channelopathies at neuromuscular junction." Frontiers in neurology 10 (2019): 516.
Jansson, Liselotte, 등 "Immunotherapy With Apitopes Blocks the Immune Response to TSH Receptor in HLA-DR Transgenic Mice." Endocrinology 159.9 (2018): 3446-3457.
Jensen, Kamilla Kjζrgaard, 등 "Improved methods for predicting peptide binding affinity to MHC class II molecules." Immunology 154.3 (2018): 394-406.
Joubert, Bastien, and J
Figure pct00002
r
Figure pct00003
me Honnorat. "Autoimmune channelopathies in paraneoplastic neurological syndromes." Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Biomembranes 1848.10 (2015): 2665-2676.
Jurtz, Vanessa, 등 "NetMHCpan-4.0: improved peptide-MHC class I interaction predictions integrating eluted ligand and peptide binding affinity data." The Journal of Immunology 199.9 (2017): 3360-3368.
Kainulainen, Markus H., 등 "High-throughput quantitation of SARS-CoV-2 antibodies in a single-dilution homogeneous assay." Scientific reports 11.1 (2021): 1-9.
Koþaloðlu-Yalη
Figure pct00004
n, Zeynep, 등 "Predicting T cell recognition of MHC class I restricted neoepitopes." Oncoimmunology 7.11 (2018): e1492508.
Lazaridis, Konstantinos, 등 "Specific removal of autoantibodies by extracorporeal immunoadsorption ameliorates experimental autoimmune myasthenia gravis." Journal of neuroimmunology 312 (2017): 24-30.
Leung, Nicki YH, 등 "Screening and identification of mimotopes of the major shrimp allergen tropomyosin using one-bead-one-compound peptide libraries." Cellular & molecular immunology 14.3 (2017): 308-318.
Li, Peipei, Li Wang, and Li-jun Di. "Applications of protein fragment complementation assays for analyzing biomolecular interactions and biochemical networks in living cells." Journal of proteome research 18.8 (2019): 2987-2998.
Lim, Sung In, and Inchan Kwon. "Bioconjugation of therapeutic proteins and enzymes using the expanded set of genetically encoded amino acids." Critical reviews in biotechnology 36.5 (2016): 803-815.
Lin, Chia-Hao, 등 "Identification of a major epitope by anti-interferon-γ autoantibodies in patients with mycobacterial disease." Nature medicine 22.9 (2016): 994.
Lorentz, Kristen M., 등 "Engineered binding to erythrocytes induces immunological tolerance to E. coli asparaginase." Science advances 1.6 (2015): e1500112.
Luo, Jie, 등 "Main immunogenic region structure promotes binding of conformation-dependent myasthenia gravis autoantibodies, nicotinic acetylcholine receptor conformation maturation, and agonist sensitivity." Journal of Neuroscience 29.44 (2009): 13898-13908.
Luo, Jie, and Jon Lindstrom. "AChR-specific immunosuppressive therapy of myasthenia gravis." Biochemical pharmacology 97.4 (2015): 609-619.
Madsen, Mette, 등 "Molecular Characterization of the Haptoglobin· Hemoglobin Receptor CD163 ligand binding properties of the scavenger receptor cysteine-rich domain region." Journal of Biological Chemistry 279.49 (2004): 51561-51567.
Majowicz, Anna, 등 "Seroprevalence of pre-existing NABs against AAV1, 2, 5, 6 and 8 in the South African Hemophilia B patient population." (2019): 3353-3353.
Mamalaki, Avgi, Nikos Trakas And, and Socrates J. Tzartos. "Bacterial expression of a single-chain Fv fragment which efficiently protects the acetylcholine receptor against antigenic modulation caused by myasthenic antibodies." European journal of immunology 23.8 (1993): 1839-1845.
Masood 등, “Morvan syndrome”, In: StatPearls [Internet]. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2021.
Mazor, Ronit, 등 "Tolerogenic nanoparticles restore the antitumor activity of recombinant immunotoxins by mitigating immunogenicity." Proceedings of the National Academy of Sciences 115.4 (2018): E733-E742.
Meister, Daniel, S. Maryamdokht Taimoory, and John F. Trant. "Unnatural amino acids improve affinity and modulate immunogenicity: Developing peptides to treat MHC type II autoimmune disorders." Peptide Science 111.1 (2019): e24058.
Mingozzi, Federico, 등 "Overcoming preexisting humoral immunity to AAV using capsid decoys." Science translational medicine 5.194 (2013): 194ra92-194ra92.
Mingozzi, Federico, and Katherine A. High. "Overcoming the host immune response to adeno-associated virus gene delivery vectors: the race between clearance, tolerance, neutralization, and escape." Annual review of virology 4 (2017): 511-534.
Morimoto et. al., Bioconjugate Chemistry 25 (8) (2014): 1479-1491
Moussa, Ehab M., 등 "Immunogenicity of therapeutic protein aggregates." Journal of pharmaceutical sciences 105.2 (2016): 417-430.
Mu¨ller, Manuel M. "Post-translational modifications of protein backbones: unique functions, mechanisms, and challenges." Biochemistry 57.2 (2017): 177-185.
Nakane, Shunya, 등 "Autoimmune autonomic ganglionopathy: an update on diagnosis and treatment." Expert review of neurotherapeutics 18.12 (2018): 953-965.
Peters, Bjoern, 등 "A community resource benchmarking predictions of peptide binding to MHC-I molecules." PLoS computational biology 2.6 (2006): e65.
Pishesha, Novalia, 등 "Engineered erythrocytes covalently linked to antigenic peptides can protect against autoimmune disease." Proceedings of the National Academy of Sciences (2017): 201701746.
Rey 등, Clinical Immunology 96 (3) (2000): 269-279
Ruff, Robert L., and Robert P. Lisak. "Nature and action of antibodies in myasthenia gravis." Neurologic clinics 36.2 (2018): 275-291.
Rummler, Silke, 등 "Current techniques for AB0-incompatible living donor liver transplantation." World journal of transplantation 6.3 (2016): 548.
Runcie, Karie, 등 "Bi-specific and tri-specific antibodies-the next big thing in solid tumor therapeutics." Molecular Medicine 24.1 (2018): 50.
Ryan, Brent J., Ahuva Nissim, and Paul G. Winyard. "Oxidative post-translational modifications and their involvement in the pathogenesis of autoimmune diseases." Redox biology 2 (2014): 715-724.
Shanmugam, Arulkumaran, 등 "Identification of PSA peptide mimotopes using phage display peptide library." Peptides 32.6 (2011): 1097-1102.
Siang Ong, Yong, 등 "Recent advances in synthesis and identification of cyclic peptides for bioapplications." Current topics in medicinal chemistry 17.20 (2017): 2302-2318.
Skytthe, Maria K., Jonas Heilskov Graversen, and Søren K. Moestrup. "Targeting of CD163+ Macrophages in Inflammatory and Malignant Diseases." International Journal of Molecular Sciences 21.15 (2020): 5497.
Sørensen, Karen Kristine, 등 "Liver sinusoidal endothelial cells." Comprehensive Physiology 5.4 (2011): 1751-1774.
Spiess, Christoph, Qianting Zhai, and Paul J. Carter. "Alternative molecular formats and therapeutic applications for bispecific antibodies." Molecular immunology 67.2 (2015): 95-106.
Taddeo, Adriano, 등 "Selection and depletion of plasma cells based on the specificity of the secreted antibody." European journal of immunology 45.1 (2015): 317-319.
Teschner, Sven, 등 "ABO-incompatible kidney transplantation using regenerative selective immunoglobulin adsorption." Journal of clinical apheresis 27.2 (2012): 51-60.
Tetala, Kishore KR, 등 "Selective depletion of neuropathy-related antibodies from human serum by monolithic affinity columns containing ganglioside mimics." Journal of medicinal chemistry 54.10 (2011): 3500-3505.
Trinh, Vu B., Alex J. Foster, and Robert H. Fairclough. "Design, synthesis, and characterization of a 39 amino acid peptide mimic of the main immunogenic region of the Torpedo acetylcholine receptor." Molecular immunology 59.1 (2014): 79-90.
Tzartos, Socrates, 등 "Demonstration of a main immunogenic region on acetylcholine receptors from human muscle using monoclonal antibodies to human receptor." FEBS letters 158.1 (1983): 116-118.
Tzartos, S. J., 등 "The main immunogenic region (MIR) of the nicotinic acetylcholine receptor and the anti-MIR antibodies." Molecular neurobiology 5.1 (1991): 1-29.
Vincent, Angela, 등 "Serological and experimental studies in different forms of myasthenia gravis." Annals of the New York Academy of Sciences 1413.1 (2018): 143-153.
Wallukat, Gerd, 등 "Patients with preeclampsia develop agonistic autoantibodies against the angiotensin AT 1 receptor." The Journal of clinical investigation 103.7 (1999): 945-952.
Yoshikawa, 등 "FK506 prevents induction of rat experimental autoimmune myasthenia gravis." Journal of autoimmunity 10.1 (1997): 11-16.
Zhou, Cissy C., 등 "Angiotensin receptor agonistic autoantibodies induce pre-eclampsia in pregnant mice." Nature medicine 14.8 (2008): 855.
SEQUENCE LISTING <110> Ablevia biotech GmbH <120> Compound for the prevention or treatment of myasthenia gravis <130> r76437 <160> 288 <150> EP 20198234.5 <151> 24.09.2020 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 1 Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 2 Asn Pro Ala Asp Tyr Arg Gly 1 5 <210> 3 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 3 Asn Pro Ala Asp Tyr His Gly 1 5 <210> 4 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 4 Val Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Pro 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 5 Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 6 Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Arg 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 7 Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 8 Gly Ser Leu Arg Tyr Asn Pro 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 9 Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 10 Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 11 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 11 Val Arg Leu Arg Phe Asn Pro 1 5 <210> 12 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 12 Val Arg Leu Arg Tyr Asn Pro 1 5 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 13 Leu Arg Leu Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 14 Val Arg Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 15 Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 16 Gly Ser Leu Arg Phe Asn Pro 1 5 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 17 Asn Pro Asp Asp Tyr His Gly 1 5 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 18 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Tyr 1 5 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 19 Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Pro 1 5 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 20 Arg Leu His Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 21 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 21 Gln Trp Ile Asp Val Arg Leu Arg Phe Asn Pro 1 5 10 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 22 Asn Pro Ala Asp Tyr Pro Gly 1 5 <210> 23 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 23 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly His 1 5 <210> 24 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 24 Arg Leu Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 25 Leu Arg Leu Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 26 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 26 Leu Leu Gly Gly Gly Ser Leu Arg Phe Asn Pro 1 5 10 <210> 27 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 27 Arg Tyr Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 28 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 28 Leu Arg Tyr Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 29 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 29 Leu His Trp Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 30 Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr His 1 5 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 31 Ile Asp Val Arg Leu Arg Phe Asn Pro 1 5 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 32 Arg Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 33 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 33 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Asp 1 5 <210> 34 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 34 Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Gly His Ile 1 5 <210> 35 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 35 Tyr Asn Leu Lys Phe Asn Pro 1 5 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 36 Ser Leu His Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 37 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 37 Gln Trp Ile Asp Val Arg Leu Arg Tyr Asn Pro 1 5 10 <210> 38 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 38 Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly 1 5 <210> 39 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 39 Gly Gly Gly Ser Leu Arg Phe Asn Pro 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 40 Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 41 Arg Trp Asn Pro Ala Asp Phe 1 5 <210> 42 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 42 Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr His Gly 1 5 10 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 43 Ile Asp Val Arg Leu Arg Tyr Asn Pro 1 5 <210> 44 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 44 Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 45 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Arg 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 46 Arg Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 47 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 47 Trp Asn Pro Asp Asp Tyr Arg 1 5 <210> 48 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 48 Cys Asn Leu Lys Phe Asn Pro 1 5 <210> 49 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 49 Ser Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 50 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 50 Arg Leu Tyr Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 51 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 51 Gln Trp Val Asp Tyr Asn Leu Lys Phe Asn Pro 1 5 10 <210> 52 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 52 Gly Gly Gly Ser Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp 1 5 10 <210> 53 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 53 Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly Phe 1 5 10 <210> 54 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 54 Ser Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr His Gly 1 5 10 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 55 Asn Pro Ala Asp Tyr Asp Gly 1 5 <210> 56 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 56 Asp Val Arg Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 57 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 57 Arg Arg Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 58 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 58 Arg Pro Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 59 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 59 Gly Ser Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 60 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 60 Trp Asn Pro Ala Asp Tyr His 1 5 <210> 61 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 61 Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Gly His 1 5 <210> 62 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 62 Gly Ser Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 63 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 63 Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 64 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 64 Trp Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 65 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 65 Gly Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly Ile 1 5 <210> 66 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 66 Arg His Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 67 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 67 Trp Asn Pro Asp Asp Tyr Gly His Val 1 5 <210> 68 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 68 Arg Pro Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly 1 5 <210> 69 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 69 Asp Val Arg Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 70 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 70 Tyr Asn Leu Lys Tyr Asn Pro 1 5 <210> 71 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 71 Gly Gly Gly Ser Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp 1 5 10 <210> 72 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 72 Val Arg His Arg Trp Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 73 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 73 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Ile 1 5 <210> 74 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 74 Ile Asp Val Arg Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp 1 5 10 <210> 75 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 75 Asn Pro Asp Asp Tyr Gly His 1 5 <210> 76 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 76 Val Pro Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 77 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 77 Tyr Asn Leu Pro Trp Asn Pro 1 5 <210> 78 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 78 Val Asp Tyr Asn Leu Lys Phe Asn Pro 1 5 <210> 79 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 79 His Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 80 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 80 Arg Thr Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 81 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 81 Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr His Gly Ile 1 5 10 <210> 82 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 82 Gly Gly Gly Ser Leu Arg Tyr Asn Pro 1 5 <210> 83 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 83 Arg Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 84 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 84 Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 85 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 85 Val Asp Cys Asn Leu Lys Phe Asn Pro 1 5 <210> 86 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 86 Asp Val Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ser Asp Tyr 1 5 10 <210> 87 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 87 Arg Ile Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 88 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 88 His Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 89 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 89 Ser Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 90 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 90 Cys Asn Leu Lys Tyr Asn Pro 1 5 <210> 91 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 91 His Ser Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 92 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 92 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Asn 1 5 <210> 93 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 93 Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Pro Gly Ile 1 5 10 <210> 94 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 94 Arg Leu Arg Tyr Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 95 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 95 Ser Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 96 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 96 Gln Trp Val Asp Cys Asn Leu Lys Phe Asn Pro 1 5 10 <210> 97 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 97 Leu Arg Pro Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 98 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 98 Val Asp Cys Asn Leu Lys Tyr Asn Pro 1 5 <210> 99 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 99 Ala Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 100 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 100 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Val 1 5 <210> 101 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 101 Val Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Pro 1 5 10 <210> 102 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 102 Arg Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 103 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 103 Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 104 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 104 Trp Ile Asp Val Arg Leu Arg Gly Asn Pro Ala 1 5 10 <210> 105 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 105 Arg Leu Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 106 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 106 Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 107 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 107 Arg Leu Arg Leu Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 108 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 108 Arg Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 109 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 109 Asp Val Arg Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 110 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 110 Asp Val Arg Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 111 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 111 Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 112 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 112 Leu Arg Leu Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 113 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 113 Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 114 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 114 Ser Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 115 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 115 Asp Val Arg Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 116 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 116 Asn Pro Ala Asp Tyr Arg Gly 1 5 <210> 117 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 117 Ser Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 118 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 118 Arg Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 119 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 119 Gly Gly Ser Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 120 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 120 Asp Val Arg Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 121 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 121 Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Arg 1 5 <210> 122 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 122 Arg Leu Arg Tyr Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 123 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 123 Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 124 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 124 Arg Arg Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 125 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 125 Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 126 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 126 Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly 1 5 <210> 127 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 127 Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 128 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 128 Gly Gly Ser Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 129 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 129 Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly 1 5 <210> 130 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 130 Ser Leu Arg Leu Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 131 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 131 Asp Val Arg Leu Arg Pro Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 132 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 132 Arg Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 133 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 133 Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Pro 1 5 <210> 134 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 134 Arg Tyr Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 135 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 135 Gly Gly Ser Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 136 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 136 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Arg 1 5 <210> 137 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 137 Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 138 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 138 Gly Ser Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Arg 1 5 10 <210> 139 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 139 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly His 1 5 <210> 140 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 140 Arg Pro Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 141 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 141 Ser Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 142 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 142 Val Arg Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 143 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 143 Arg Thr Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 144 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 144 Gly Gly Ser Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 145 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 145 Arg Leu Tyr Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 146 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 146 Gly Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly Ile 1 5 <210> 147 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 147 Ser Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 148 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 148 Val Arg Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 10 <210> 149 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 149 Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Pro 1 5 <210> 150 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 150 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Asp 1 5 <210> 151 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 151 Val Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 152 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 152 Gly Gly Gly Ser Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp 1 5 10 <210> 153 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 153 Arg Pro Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 154 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 154 Gly Ser Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Pro 1 5 10 <210> 155 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 155 Ser Leu Arg Tyr Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 156 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 156 Arg Ala Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 157 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 157 Gly Ser Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 10 <210> 158 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 158 Arg Pro Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly 1 5 <210> 159 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 159 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Tyr 1 5 <210> 160 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 160 Ala Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 161 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 161 Gly Gly Ser Leu Arg Tyr Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 162 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 162 Arg Ile Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 163 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 163 Arg Trp Asn Pro Ala Asp Arg 1 5 <210> 164 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 164 Arg Leu His Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 165 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 165 Gln Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 166 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 166 Arg Leu Arg Gln Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 167 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 167 Asp Val Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ser Asp Tyr 1 5 10 <210> 168 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 168 Val Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Ser 1 5 10 <210> 169 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 169 Asp Val Arg Leu Arg Tyr Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 170 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 170 Gly Ser Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 10 <210> 171 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 171 Gly Gly Ser Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Arg 1 5 10 <210> 172 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 172 Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Arg 1 5 <210> 173 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 173 Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly Phe 1 5 10 <210> 174 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 174 Gly Ser Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Asp 1 5 10 <210> 175 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 175 Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr His Gly 1 5 10 <210> 176 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 176 Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Pro 1 5 10 <210> 177 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 177 Gly Ser Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Asn 1 5 10 <210> 178 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 178 Val Arg Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 10 <210> 179 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 179 Leu Arg Pro Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 180 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 180 Thr Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 181 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 181 Val Arg Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 182 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 182 Arg Ser Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 183 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 183 Arg Leu Arg Pro Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 184 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 184 Arg Leu Leu Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 185 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 185 Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Ser 1 5 10 <210> 186 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 186 Gly Ser Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Gln 1 5 10 <210> 187 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 187 Val Arg Leu Arg Leu Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 10 <210> 188 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 188 Ser Leu Tyr Trp Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 189 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 189 Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 190 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 190 Arg Trp Asn Pro Ala Asp Phe 1 5 <210> 191 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 191 Arg Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly 1 5 10 <210> 192 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 192 Trp Asn Pro Asp Asp Tyr Arg 1 5 <210> 193 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 193 Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Pro Gly Ile 1 5 10 <210> 194 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 194 Asp Val Arg Leu Arg Gln Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 195 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 195 Ser Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr His Gly 1 5 10 <210> 196 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 196 Gly Ser Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Thr 1 5 10 <210> 197 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 197 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Asn 1 5 <210> 198 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 198 Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 199 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 199 Arg Leu Arg Thr Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 200 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 200 Gly Gly Ser Leu Arg Leu Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 201 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 201 Trp Val Asp Tyr Asn Leu Lys Trp Asn Pro Asp Asp Tyr 1 5 10 <210> 202 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 202 Tyr Asn Leu Lys Trp Asn Pro Asp Asp Tyr 1 5 10 <210> 203 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 203 Leu Phe Ser His Leu Gln Asn Glu Gln Trp Val Asp Tyr 1 5 10 <210> 204 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 204 Lys Trp Asn Pro Asp Asp Tyr 1 5 <210> 205 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 205 Asn Glu Gln Trp Val Asp Tyr 1 5 <210> 206 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 206 His Leu Gln Asn Glu Gln Trp Val Asp Tyr 1 5 10 <210> 207 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 207 Cys Ser Gly Arg Val Glu Val Lys Val Gln Glu Glu Trp Gly Thr Val 1 5 10 15 Cys Asn Asn Gly Trp Ser Met Glu Ala 20 25 <210> 208 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 208 Gly Arg Val Glu Val Lys Val Gln Glu Glu Trp 1 5 10 <210> 209 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 209 Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser 1 5 10 <210> 210 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 210 Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp 1 5 <210> 211 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 211 Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser Met Glu 1 5 10 <210> 212 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 212 Gln Glu Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser 1 5 10 <210> 213 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 213 Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser Met Glu Ala 1 5 10 <210> 214 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 214 Glu Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser Met 1 5 10 <210> 215 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 215 Val Gln Glu Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp 1 5 10 <210> 216 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 216 Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp 1 5 10 <210> 217 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 217 Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser 1 5 10 <210> 218 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 218 Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys Lys 1 5 10 15 His Asp Gly Trp Gly 20 <210> 219 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 219 Glu Ser Ala Leu Trp 1 5 <210> 220 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 220 Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys 1 5 <210> 221 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 221 Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys 1 5 10 <210> 222 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 222 Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp 1 5 10 <210> 223 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 223 Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys 1 5 10 <210> 224 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 224 Ala Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp 1 5 10 <210> 225 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 225 Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp 1 5 10 <210> 226 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 226 Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asp 1 5 10 <210> 227 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 227 Asn Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp 1 5 10 <210> 228 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 228 Glu Ser Ala Leu Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp Gly 1 5 10 <210> 229 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 229 Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys Glu Leu Arg Leu Val Asp Gly Glu 1 5 10 15 Asn Lys Cys Ser 20 <210> 230 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 230 Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys Glu Leu Arg 1 5 10 <210> 231 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 231 Ser Ser Leu Gly Gly 1 5 <210> 232 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 232 Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys Glu Leu 1 5 10 <210> 233 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 233 Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys Glu 1 5 <210> 234 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 234 Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys 1 5 <210> 235 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 235 Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp 1 5 <210> 236 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 236 Ser Ser Leu Gly Gly Thr 1 5 <210> 237 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 237 Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 238 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 238 Asn Pro Ala Asp Tyr Arg Gly 1 5 <210> 239 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 239 Asn Pro Ala Asp Tyr His Gly 1 5 <210> 240 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 240 Val Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Pro 1 5 10 <210> 241 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 241 Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 242 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 242 Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Arg 1 5 <210> 243 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 243 Leu Arg Phe Asn Pro Ala Asp 1 5 <210> 244 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 244 Gly Ser Leu Arg Tyr Asn Pro 1 5 <210> 245 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 245 Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 246 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 246 Leu Arg Arg Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 247 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 247 Val Arg Leu Arg Trp Asn Pro Ala Asp Tyr Pro 1 5 10 <210> 248 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 248 Arg Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 249 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 249 Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr Gly 1 5 <210> 250 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 250 Trp Ile Asp Val Arg Leu Arg Gly Asn Pro Ala 1 5 10 <210> 251 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 251 Arg Leu Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 252 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 252 Arg Phe Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 253 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 253 Arg Leu Arg Leu Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 254 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 254 Arg Leu Arg Gly Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 <210> 255 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 255 Asp Val Arg Leu Arg Ile Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 256 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 256 Asp Val Arg Leu Arg Val Asn Pro Ala Asp Tyr 1 5 10 <210> 257 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 257 Leu Phe Ser His Leu Gln Asn Glu Gln Trp Val Asp Tyr 1 5 10 <210> 258 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 258 Cys Gly Arg Pro Gln Lys Arg Pro Ser Cys Ile Gly Cys Lys Gly 1 5 10 15 <210> 259 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 259 Leu Lys Trp Asn Pro Asp Asp Tyr Gly Gly Val Lys Lys Ile His Ile 1 5 10 15 Pro Ser Glu Lys Gly Cys 20 <210> 260 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 260 Asp His Thr Leu Tyr Thr Pro Tyr His Thr His Pro Gly 1 5 10 <210> 261 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 261 Gly Arg Pro Gln Lys Arg Pro Ser Cys Ile Gly 1 5 10 <210> 262 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 262 Val Lys Lys Ile His Ile Pro Ser Glu Lys Gly 1 5 10 <210> 263 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 263 Gly Gly Val Lys Lys Ile His Ile Pro Ser Glu Lys 1 5 10 <210> 264 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 264 Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Cys 1 5 10 <210> 265 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 265 Ile Pro Asn Pro Leu Leu Gly Leu Asp Gly Gly Ser Gly Asp Tyr Lys 1 5 10 15 Asp Asp Asp Asp Lys Gly Lys 20 <210> 266 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 266 Val Lys Lys Ile His Ile Pro Ser Glu Lys Gly Gly Ser Gly Asp Tyr 1 5 10 15 Lys Asp Asp Asp Asp Lys Gly Lys 20 <210> 267 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 267 Cys Ser Gly Arg Val Glu Val Lys Val Gln Glu Glu Trp 1 5 10 <210> 268 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 268 Asp Gly Glu Asn Lys Cys Ser Gly Arg Val Glu Val Lys Val Gln Glu 1 5 10 15 Glu Trp Gly Thr Val Cys Asn Asn Gly Trp Ser Met Glu Ala Val Ser 20 25 30 Val Ile Cys Asn 35 <210> 269 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 269 Arg Ile Trp Met Asp His Val Ser Cys Arg Gly Asn Glu Ser Ala Leu 1 5 10 15 Trp Asp Cys Lys His Asp Gly Trp Gly Lys His Ser Asn Cys Thr His 20 25 30 Gln <210> 270 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 270 Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys Glu Leu Arg 1 5 10 <210> 271 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 271 Ala Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys 1 5 10 <210> 272 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 272 Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys 1 5 10 <210> 273 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 273 Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu 1 5 <210> 274 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 274 Gly Ser Ala Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met 1 5 10 <210> 275 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 275 Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys Glu Leu 1 5 10 <210> 276 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 276 Ser Ala Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys 1 5 10 <210> 277 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 277 Ser Gly Ser Ala Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu 1 5 10 <210> 278 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 278 Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys 1 5 10 <210> 279 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 279 Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met 1 5 10 <210> 280 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 280 Ala Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu 1 5 10 <210> 281 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 281 Ser Ala Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys Glu 1 5 10 <210> 282 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 282 Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys Glu 1 5 10 <210> 283 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 283 Val Thr Asn Ala Pro Gly Glu Met Lys Lys Glu Leu Arg Leu Ala Gly 1 5 10 15 Gly Glu Asn Asn Cys Ser 20 <210> 284 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 284 Ser Ser Leu Gly Gly Thr Asp Lys Glu Leu Arg Leu Val Asp Gly Glu 1 5 10 15 Asn Lys Cys Ser 20 <210> 285 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 285 Phe Ser His Leu Gln Asn Glu Gln Trp Val Asp Tyr Asn Leu Lys Trp 1 5 10 15 Asn Pro Asp Asp Tyr Gly Gly Val Lys Lys Ile His Ile 20 25 <210> 286 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 286 Glu Thr Arg Leu Val Ala Asn Leu Leu Gly Gly Gly Ser Leu Arg Trp 1 5 10 15 Asn Pro Ala Asp Tyr Gly Gly Ile Lys Lys Ile Arg Gly 20 25 <210> 287 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable (VH) region <400> 287 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Thr Tyr Ser Gly Ile Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Gln Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Val Ser Gly Thr Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 288 <211> 109 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light-chain variable (VL) region <400> 288 Ser Val Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Ser Leu Leu Ile Ser Ile Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asp 20 25 30 Val Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Ala Ser Asn Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Gln Asp Tyr Thr Ser Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala 100 105

Claims (15)

  1. 화합물로서,
    - 생물중합체 스캐폴드(biopolymer scaffold) 및 적어도
    - 하기 화학식의 제1의 펩타이드 n-머(peptide n-mer):
    P ( ― S ― P ) (n-1) 및
    - 하기 화학식의 제2의 펩타이드 n-머:
    P ( ― S ― P ) (n-1)
    를 포함하되,
    여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 6 내지 13개 아미노산의 서열 길이(sequence length)를 지닌 펩타이드이고, S는 비-펩타이드 스페이서(non-peptide spacer)이고,
    여기서, 각각의 펩타이드 n-머에 대해 독립적으로, n은 적어도 1, 바람직하게는 적어도 2, 보다 바람직하게는 적어도 3, 특히 적어도 4의 정수이고,
    여기서 상기 펩타이드 n-머 각각은, 바람직하게는 각각의 링커(linker)를 통해, 상기 생물중합체 스캐폴드에 결합되고,
    여기서 각각의 경우에 독립적으로, P는 서열번호: 1-100, 서열번호: 101-200 및 서열번호: 201-206으로부터 선택된 사람 니코틴성 AChR MIR 유래 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개의 연속되는 아미노산을 포함하고,
    임의로 여기서 상기 아미노산 서열의 최대 2개, 바람직하게는 최대 1개의 아미노산이 임의의 다른 아미노산에 의해 독립적으로 치환되는, 화합물.
  2. 제1항에 있어서,
    여기서 상기 아미노산 서열은 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY에서 선택된, 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 LRRNPAD, NPADYRG, NPADYHG, VRLRWNPADYP, LRGNPAD, WNPADYR, LRFNPAD, GSLRYNP, LRVNPADYG, LRRNPADYG, VRLRWNPADYP, RLRVNPADY, LRVNPADYG, WIDVRLRGNPA, RLNPADY, RFNPADY, RLRLNPADY, RLRGNPADY, DVRLRINPADY, DVRLRVNPADY, WVDYNLKWNPDDY, YNLKWNPDDY, KWNPDDY, LFSHLQNEQWVDY, NEQWVDY 및 HLQNEQWVDY에서 선택된 전체 서열을 포함하는 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    P의 적어도 하나의 경우가 환형화된 펩타이드(circularized peptide)이고, 바람직하게는 여기서 모든 경우의 P 중 적어도 10%가 환형화된 펩타이드이거나, 보다 바람직하게는 모든 경우의 P 중 적어도 25%가 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 보다 바람직하게는 모든 경우의 P 중 적어도 50%가 환형화된 펩타이드이거나, 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P 중 적어도 75%가 환형화된 펩타이드이거나, 여전히 심지어 보다 바람직하게는 모든 경우의 P 중 적어도 90%가 환형화된 펩타이드이거나, 심지어 모든 경우의 P 중 적어도 95%가 환형화된 펩타이드이고, 특히 모든 경우의 P가 환형화된 펩타이드인 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서, 각각의 경우에 독립적으로, P는 Pa 또는 Pb이고,
    여기서 Pa는 상기 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개의 연속되는 아미노산을 포함하고,
    여기서 Pb는 상기 아미노산 서열의 적어도 6개, 바람직하게는 적어도 7개의 연속되는 아미노산을 포함하고; 여기서,
    제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
    제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
    제1의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 이거나;
    제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이거나;
    제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P a - S - P a 이거나;
    제1의 펩타이드 n-머는 P a - S - P b 이고 제2의 펩타이드 n-머는 P b - S - P b 인 화합물.
  6. 제5항에 있어서,
    상기 생물 중합체 스캐폴드가 알부민, 알파1-글로불린, 알파2-글로불린, 베타-글로불린 및 면역글로불린으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 특히 여기서 생물중합체 스캐폴드가 합토글로빈 또는 트랜스페린, 특히 트랜스페린이거나; 또는 여기서 생물중합체 스캐폴드가 CD163 단백질에 특이적인 항체이거나, 또는 이의 CD163-결합 단편인 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 생물중합체 스캐폴드는 사람 트랜스페린인 화합물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화합물이 사람에서 비-면역원성인 화합물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    치료요법(therapy)에서 사용하기 위한 약제학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    개체에서 중증 근무력증(myasthenia gravis, MG), 또는 자가면역 자율신경절병증 또는 모르반 증후군과 같은 자가면역 채널병증, 또는 부종양 증후군(paraneoplastic neurological syndrome)의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 약제학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    여기서 상기 조성물은 개체의 체중 kg당 화합물 1-1000 mg, 바람직하게는 2-500 mg, 보다 바람직하게는 3-250 mg, 심지어 보다 바람직하게는 4-100 mg, 특히 5-50 mg의 용량으로 투여되는 것인 약제학적 조성물.
  13. 제11항 또는 제12항에 있어서,
    여기서 상기 조성물은 피하, 근육내 또는 정맥내로 투여되는 것인 약제학적 조성물,
  14. 개체에 존재하는 하나 이상의 항체를 제거(sequestering)하는 방법으로서,
    제9항에서 정의한 바와 같은 약제학적 조성물을 수득하는 단계; 및
    상기 약제학적 조성물을 상기 개체에게 투여하는 단계;
    를 포함하되,
    여기서 상기 조성물은 상기 개체에서 비-면역원성이고,
    여기서 상기 개체에 존재하는 하나 이상의 항체는 적어도 하나의 경우의 P에 대해, 또는 펩타이드 Pa 및/또는 펩타이드 Pb에 대해 특이적인, 방법.
  15. 이를 필요로 하는 개체에서 MG 또는 자가면역 자율신경절병증 또는 모르반 증후군과 같은 자가면역 채널병증, 또는 부종양 증후군을 개선 또는 치료하는 방법으로서,
    제9항에서 정의한 바와 같은 약제학적 조성물을 수득하는 단계; 및
    상기 약제학적 조성물의 유효량을 상기 개체에게 투여하는 단계;
    를 포함하는 방법.
KR1020237013930A 2020-09-24 2021-09-23 중증 근무력증의 예방 또는 치료용 화합물 KR20230074552A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20198234 2020-09-24
EP20198234.5 2020-09-24
PCT/EP2021/076169 WO2022063880A1 (en) 2020-09-24 2021-09-23 Compound for the prevention or treatment of myasthenia gravis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230074552A true KR20230074552A (ko) 2023-05-30

Family

ID=72659071

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237013930A KR20230074552A (ko) 2020-09-24 2021-09-23 중증 근무력증의 예방 또는 치료용 화합물

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20230381328A1 (ko)
EP (1) EP4217401A1 (ko)
JP (1) JP2023543444A (ko)
KR (1) KR20230074552A (ko)
CN (1) CN116710143A (ko)
AU (1) AU2021348225A1 (ko)
CA (1) CA3192735A1 (ko)
WO (1) WO2022063880A1 (ko)

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6022544A (en) 1983-01-24 2000-02-08 The John Hopkins University Therapeutic suppression of specific immune responses by administration of oligomeric forms of antigen of controlled chemistry
US5372933A (en) 1988-10-03 1994-12-13 The Scripps Research Institute Polypeptides that mimic receptor-induced binding sites, and methods of using same
US5268454A (en) 1991-02-08 1993-12-07 La Jolla Pharmaceutical Company Composition for inducing humoral anergy to an immunogen comprising a t cell epitope-deficient analog of the immunogen conjugated to a nonimmunogenic carrier
US6897287B1 (en) 1990-01-31 2005-05-24 Oklahoma Medical Research Foundation Ro/SSA peptide reagents for diagnosis of autoantibodies
US5578496A (en) 1991-12-19 1996-11-26 Board Of Regents, Baylor College Of Medicine Detection of autoantibodies associated with the disease myasthenia gravis
US7888458B1 (en) 1993-11-30 2011-02-15 John B. Harley Diagnostics and therapy of epstein-barr virus in autoimmune disorders
JP2002531531A (ja) 1998-12-09 2002-09-24 ラ ホヤ ファーマシューティカル カンパニー 循環している抗体を減少させるための方法および処方物
DE60140069D1 (de) 2000-10-16 2009-11-12 Cytoguide Aps Funktion eines haptoglobin-hämoglobin-rezeptors und anwendungszwecke dafür
WO2004067549A2 (de) 2003-01-31 2004-08-12 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin Peptide gegen kälteunverträglichkeit hervorrufende autoantikörper und ihre verwendung
WO2004089422A2 (en) 2003-03-30 2004-10-21 La Jolla Pharmaceutical Co. Methods of treating and monitoring systemic lupus erythematosus in individuals
GB0917044D0 (en) 2009-09-29 2009-11-18 Cytoguide As Agents, uses and methods
AU2011240620A1 (en) 2010-04-13 2012-10-18 Medimmune, Llc Fibronectin type III domain-based multimeric scaffolds
EP2402016A1 (en) 2010-06-29 2012-01-04 Charité - Universitätsmedizin Berlin Aptamers that inhibit interaction between antibody and 1st or 2nd extracellular loop of human beta-1-adrenergic receptor
JP4857396B1 (ja) 2011-04-13 2012-01-18 日本製薬株式会社 融合蛋白質
JP6426103B2 (ja) 2013-10-15 2018-11-21 国立大学法人 東京大学 ｃ−Ｍｅｔタンパク質アゴニスト
SI3116887T1 (sl) 2014-03-13 2021-06-30 Universitaet Basel Ogljikohidratni ligandi, ki se vežejo na protitelesa img proti glikoproteinu, ki je povezan z mielinom
WO2015181393A1 (en) 2014-05-30 2015-12-03 Per-Johan Jakobsson Novel sfti and cyclotide based peptides
EP2982756A1 (en) 2014-08-04 2016-02-10 Berlin Cures Holding AG Aptamers for use against autoantibody-associated diseases
JP6849667B2 (ja) 2015-09-16 2021-03-24 ウニヴェルズィテート バーゼル スフィンゴ糖脂質の糖鎖エピトープに対する抗体に結合する炭水化物リガンド
JP7169267B2 (ja) 2016-09-08 2022-11-10 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 重症筋無力症を診断および治療するためのペプチドおよびその使用
CA3045797A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 The Texas A&M University System Fusion proteins for selectively depleting antigen-specific antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022063880A1 (en) 2022-03-31
EP4217401A1 (en) 2023-08-02
AU2021348225A1 (en) 2023-05-18
CA3192735A1 (en) 2022-03-31
JP2023543444A (ja) 2023-10-16
US20230381328A1 (en) 2023-11-30
CN116710143A (zh) 2023-09-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3898702B1 (en) Compound for the sequestration of undesirable antibodies in a patient
US20230355747A1 (en) Compound for increasing efficacy of viral vectors
US20230381328A1 (en) Compound for the prevention or treatment of myasthenia gravis
US20230365655A1 (en) Compound for increasing the efficacy of factor viii replacement therapy
US20230355784A1 (en) Compound for the prevention or treatment of autoantibody-mediated conditions
AU2021348225A9 (en) Compound for the prevention or treatment of myasthenia gravis
AU2021347581A9 (en) Compound for the prevention or treatment of autoantibody-mediated conditions
US11986536B2 (en) Compound for the sequestration of undesirable antibodies in a patient
US20230381334A1 (en) Compound for the sequestration of undesirable antibodies in a patient
WO2020193487A1 (en) Compound for the prevention or treatment of myasthenia gravis