CN116640870A - 甘蓝型油菜油菜早花性状的分子标记及其获得方法和应用 - Google Patents

甘蓝型油菜油菜早花性状的分子标记及其获得方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种甘蓝型油菜早花性状的分子标记及其获得方法和应用。通过田间花期调查鉴定出油菜早花材料EMS诱变的突变体ebm，构建其与晚花来源材料中双9号的F2分离群体，采用混池重测序(BSA‑seq)技术，对早花基因进行初定位，在此区间筛选出能用于早花性状筛选和基因定位的SNP分子标记。所述分子标记包括双亲纯合的SNP分子标记1‑11。本发明为油菜开花机制的挖掘和分子育种提供了新的分子标记，对增强油菜在杂交育种过程中种子纯度和开花期材料的选择具有重要的应用前景。

Description

甘蓝型油菜油菜早花性状的分子标记及其获得方法和应用
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种甘蓝型油菜早花性状的分子标记及其获得方法和应用。
背景技术
单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)广泛存在动植物的基因组中，是单个核苷酸的变异导致的DNA序列多态性，包括单碱基的转换、颠换、插入和缺失，是继微卫星标记之后的新一代分子标记。与微卫星标记相比，SNP分布密度大，数量众多，多态性丰富；突变率低，稳定性和准确性高；不需检测片段长度，只需检测“有或无”确定多态性，从而易于实现自动化筛选。SNP标记具有如下应用：(1)可用于基因与疾病的关联研究，定位疾病的靶基因；(2)可用于动植物育种关键基因的筛选，通过比较不同表型的遗传差异，筛选抗逆高产等关键SNP；(3)可用于物种间进化关系的推算、物种内亲缘关系的鉴定，在医学、农学、林学方面，具有很好的应用潜力。
最佳开花时间对作物生产和植物生命周期起着至关重要的作用。早熟品种抑制营养生长，对蔬菜产量影响较大。相反，晚开花或抑制开花不仅会降低种子产量，而且也会为轮作增加剩余有害生物量。因此，了解开花时间的调控机制对作物育种的优化至关重要。在模式植物拟南芥中，开花调控的分子基础已得到广泛研究。开花时间主要由自主、光周期、春化诱导和信号转导等四个主要途径的遗传因子介导。到目前为止，大量参与开花调控的关键基因被克隆，如FLOWERING LOCUS T(FT)、FLOWERING LOCUS C(FLC)和CONSTANS(CO)等。
油菜(Brassica napus L.,2n＝38,AACC)是全球重要的种植多年的油料作物。开花时间是潜在产量形成的一个重要决定因素，因此适宜的开花时间是油菜育种的一个主要目标。目前基于双亲本作图群体的QTL定位研究表明，A2、A3、C1、C2、C3、C5和C9染色体上携带FT、FLC、VIN3、CO、Phytochrome A、FY、LFY、AP1、TFL1和TFL2等候选同源基因。这些基因大多与春化、光周期、自主途径和花分生组织分化有关。这些研究表明，开花性状极其复杂，由位于不同染色体上的多个位点控制。然而，对油菜开花候选基因特征的了解以及与开花基因相关联的分子标记的开发还十分有限，分子标记的分布密集程度决定了基因定位的区域的大小，因此目前亟需开发与开花相关联的分子标记用于开花基因的基因定位。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明提出了一种油菜早花材料的鉴定及早花基因的初定位和分子标记开发的应用。本发明通过田间花期调查鉴定出油菜早花材料EMS诱变突变体ebm，构建其与晚花来源材料中双9号的F2分离群体，采用混池重测序(BSA-seq)技术，对早花基因进行初定位，在此区间筛选出能用于早花性状筛选和基因定位的SNP分子标记。
本发明提供一种甘蓝型油菜早花的分子标记，所述分子标记包括SNP标记1、SNP标记2、SNP标记3、SNP标记4、SNP标记5、SNP标记6、SNP标记7、SNP标记8、SNP标记9、SNP标记10、SNP标记11中的至少一种；
所述SNP标记1～11均位于油菜的染色体A2上；
所述SNP标记1为碱基A或G，所述SNP标记1位于核酸的第364位，所述核酸具有SEQID NO.1所示核苷酸序列；
所述SNP标记2为碱基T或C，所述SNP标记2位于核酸的第200位，所述核酸具有SEQID NO.2所示核苷酸序列；
所述SNP标记3为碱基T或A，所述SNP标记3位于核酸的第152位，所述核酸具有SEQID NO.3所示核苷酸序列；
所述SNP标记4为碱基G或T，所述SNP标记4位于核酸的第261位，所述核酸具有SEQID NO.4所示核苷酸序列；
所述SNP标记5为碱基A或G，所述SNP标记5位于核酸的第262位，所述核酸具有SEQID NO.5所示核苷酸序列；
所述SNP标记6为碱基G或A，所述SNP标记6位于核酸的第493位，所述核酸具有SEQID NO.6所示核苷酸序列；
所述SNP标记7为碱基G或C，所述SNP标记7位于核酸的第256位，所述核酸具有SEQID NO.7所示核苷酸序列；
所述SNP标记8为碱基A或C，所述SNP标记8位于核酸的第153位，所述核酸具有SEQID NO.8所示核苷酸序列；
所述SNP标记9为碱基A或G，所述SNP标记9位于核酸的第362位，所述核酸具有SEQID NO.9所示核苷酸序列；
所述SNP标记10为碱基G或A，所述SNP标记10位于核酸的第413位，所述核酸具有SEQ ID NO.10所示核苷酸序列；
所述SNP标记11为碱基A或G，所述SNP标记11位于核酸的第284位，所述核酸具有SEQ ID NO.11所示核苷酸序列。
本发明还提供用于检测所述SNP分子标记1～11的引物对。
进一步的，所述引物对的序列为：
所述引物对ES-1用于扩增SEQ ID NO.1所示核苷酸序列；
所述引物对ES-2用于扩增SEQ ID NO.2所示核苷酸序列；
所述引物对ES-3用于扩增SEQ ID NO.3所示核苷酸序列；
所述引物对ES-4用于扩增SEQ ID NO.4所示核苷酸序列；
所述引物对ES-5用于扩增SEQ ID NO.5所示核苷酸序列；
所述引物对ES-7用于扩增SEQ ID NO.6所示核苷酸序列；
所述引物对ES-10用于扩增SEQ ID NO.7所示核苷酸序列；
所述引物对ES-12用于扩增SEQ ID NO.8所示核苷酸序列；
所述引物对ES-20用于扩增SEQ ID NO.9所示核苷酸序列；
所述引物对ES-40用于扩增SEQ ID NO.10所示核苷酸序列；
所述引物对ES-47用于扩增SEQ ID NO.11所示核苷酸序列。
本发明还提供所述的油菜早花的分子标记的获得方法，包括如下步骤：
(1)筛选油菜早花品种；
(2)将步骤(1)筛选到的早花油菜品种与其原始来源的晚花品种杂交，获得F2群体；
(3)在步骤(2)所述F2群体中筛选出若干早花和若干晚花油菜的样本，提取所述早花样本和所述晚花样本的基因组DNA，并优化至相近浓度，然后等量混合生成两个极端池，连同筛选出的早花品种和所述原始来源的晚花品种的两个亲本DNA，一共四个样本按照标准的150bp双端测序方案进行文库构建，随后高通量测序；
(4)对测序数据进行检查和过滤，对可靠的多态性变异进行注释，筛选出reads覆盖深度至少为4的高质量SNPs/InDels进行BSA-seq分析；
(5)采用欧几里德距离和snp index方法检测潜在的早花性状相关SNP候选位点，基于这两种方法的重叠区域被定义为候选区域；
(6)在候选区域中设计引物对，以早花油菜品种和原始来源的晚花品种为模板进行PCR，验证是否具有SNP位点。
进一步的，所述步骤(6)中验证是否具有SNP位点，如果有SNP位点，测序验证可得到SNP位点对应的单碱基在双亲本种出现差异。
进一步的，所述早花油菜品种为原始品种经甲基磺酸乙酯诱变而来的材料，命名ebm，所述原始来源的晚花品种为中双9号(ZS9)。
本发明还提供所述的分子标记或所述的引物对在油菜早花筛选中的应用。
本发明还提供所述的分子标记或所述的引物对在油菜早花基因定位中的应用。
综上，与现有技术相比，本发明达到了以下技术效果：
1.虽然油菜开花性状的研究已有一些报道，但目前为止相比较于其它性状，开花分子机制的研究略少，本发明在油菜中开展的工作丰富了开花的研究。
2.本发明通过对BSA产生的初始定位区间进行分子标记的开发，所获得的多态性分子标记有助于早花基因的精细定位。
3.本发明的SNP分子标记可以应用于油菜A2染色体的5.39-10.84M之间的基因的定位。
4.本发明对构建的F2群体采用BSA-seq技术进行早花基因的初定位，获得的候选基因区间为油菜开花分子机理的研究提供了参考，具有重要意义。
5.本发明中鉴定到的早花材料ebm，为早花材料育种提供了新的遗传资源，为早花品种培育具有指导和借鉴作用。
6.ebm这一油菜早花材料的发现，为开展作物开花机制的研究，探讨开花的分子作用机理，具有重要的理论指导意义。
7.选育早花的油菜材料一直为油菜育种家所重视，早花材料ebm的鉴定为育种学家提供了优良的早花材料来源。由于目前生产上因晚花生育周期长造成的油菜产量以及作物轮作的影响巨大，使得选育早花品种显得尤其重要，这位下一步早花基因的克隆奠定了夯实的基础；为进一步培育具有早花特性的油菜品种提供了新的育种材料；在作物早花的育种实践、品种改良及品种推广均具有重要的实践指导价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1是本发明的甘蓝型油菜早花突变体ebm的表型示意图；
其中A：上，ZS9与ebm突变体植株在苗期的比较，Scale bar＝25cm；下，ZS9与ebm突变体植株在开花期主花序开花性状的比较，Scale bar＝25cm；
B：ZS9与ebm突变体植株在成熟期的株高、第一分枝高度、分枝数、主花序长度、主花序角果数和千粒重等农艺性状的比较，以及现蕾期、初花期和盛花期的时间比较；
C：ZS9与ebm杂交获得的F2群体的开花时间的频次分布图。
图2是本发明的甘蓝型油菜早花相关基因的初定位；
其中A：上中下三个曼哈顿图分别代表在全基因组水平上L池，E池的SNP变异频率以及两个混池频率的差值。L为晚花，E为早花；
B：上中下三个曼哈顿图分别代表在A02染色体上L池，E池的SNP变异频率以及两个混池频率的差值。L为晚花，E为早花。候选区域在A02的5.39-10.84Mb之间。
图3是本发明中在初定位区间及侧翼开发的SNP多态性分子标记。
图4是本发明中早花基因的精细定位过程；在BSA-seq结果基础上利用开发的分子标记对60株和460株F2代早花表型植株筛选交换单株，竖线下面代表的是该分子标记下的交换单株个数，最终将候选基因定位于ES-20和ES-7之间。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
本发明的油菜早花的分子标记的获得方法，包括如下步骤：
(1)筛选早花油菜品种；
(2)将步骤(1)筛选到的早花油菜品种与其原始来源的晚花品种杂交，获得F2群体；
(3)在步骤(2)所述F2群体中筛选出若干早花和若干晚花的样本，提取所述早花样本和所述晚花样本的基因组DNA，并优化至相近浓度，然后等量混合生成两个极端池，连同筛选出的早花油菜品种和所述原始来源的晚花品种的两个亲本DNA，一共四个样本按照标准的150bp双端测序方案进行文库构建，随后高通量测序；
(4)对测序数据进行检查和过滤，对可靠的多态性变异进行注释，筛选出reads覆盖深度至少为4的高质量SNPs/InDels进行BSA-seq分析；
(5)采用欧几里德距离和snp index方法检测潜在的早花性状相关SNP候选位点，基于这两种方法的重叠区域被定义为候选区域；
(6)在候选区域中设计引物对，以早花油菜品种和原始来源的晚花品种为模板进行PCR，验证是否具有SNP位点；如果有SNP位点，则所用引物对的扩增产物即为SNP分子标记。
下面以早花材料的筛选及BSA-seq的具体操作为实施例对本发明的原理和特征进行描述，实施例中以早花材料ebm和其原始来源的晚花品种ZS9为例说明本发明的分子标记获得方法，但是本领域技术人员通过其他的早花材料和其原始来源的晚花品种也可以获得相应的分子标记，下述实施例中所用的材料和试剂等，如无特殊说明，均可从公司通过商业途径购买。
实施例1：早花材料ebm的筛选
按油菜生长的正常条件，在武汉油料所武昌实验基地从2013-2015连续三年播种本实验室通过项目合作在世界范围内收集的油菜品种263份。厢宽2m，行距0.33m，每行种植15株，分别种植3个生物学重复，每个生物学重复种植3行，用于初花期和盛花期的天数统计与调查。初花期定义为从播种至小区内25％植株的主花序开花的时间，盛花期定义为从播种至小区内50％植株的分枝开花的时间。在这263份甘蓝型油菜材料中，我们鉴定到一个初花期和盛花期均较早的ebm突变体，该突变体来源于经EMS诱变处理的甘蓝型油菜中双9号(ZS9)。
实施例2：早花材料各农艺性状的考察
将ebm与ZS9两种材料分别种植在武汉油料所武昌实验基地，厢宽2m，行距0.33m，每行种植15株，分别种植3个生物学重复，每个生物学重复种植3行，用于成熟期考察各农艺性状的表型以及现蕾期花期调查，结果如图1所示。图中所有数据均为3个生物重复平均值±标准偏差(每个重复测量10个植株)。星号表示两个谱系之间存在显著差异。从图中可以看到，两个谱系在农艺性状方面无明显差异，但在开花时间上，ebm显著早于ZS9。
实施例3：遗传分析，确定早花性状的遗传模式
2016年3月开花期，用早花突变体ebm和ZS9进行正反交，2016年9月种植正反交F1代，2017年3月花期调查正反交F1代表型，并对F1代套袋自交。2017年9月种植部分正反交F1代的自交后代F2群体，2018年3月花期统计不同开花类型的植株数。F2群体中单株的开花时间定义为从播种到第一朵花开花的时间。利用卡方检测验证早花性状是否符合孟德尔遗传，结果显示该突变体早花是单显性核基因控制的。
F2世代的分离比
实施例4：采用BSA-seq技术对早花性状进行初定位
(1)基因组DNA的提取
2018年3月份花期，在田间调查ZS9×ebm杂交F1后代的F2代分离群体各单株表型，并选取开花极早和极晚植株各60个单株，用试剂盒提取这些样本的高质量基因组DNA。
(2)文库的构建及测序(BSA-seq)
所有基因组DNA提取完成后，测定浓度，分别对表型极端单株的DNA浓度进行定量，并等量混合均匀，分别组成两个混池L-pool(极端晚花单株)和E-pool(极端早花单株)。文库构建完成后，先使用Qubit 2.0进行初步定量，稀释文库至1ng/μL，随后使用Agilent2100对文库的insert size进行检测，insert size符合预期后，使用Q-PCR方法对文库的有效浓度进行准确定量(文库有效浓度>2nM)，以保证文库质量。库检合格后，把不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求pooling后进行Illumina HiSeq TM PE150测序。
(3)生物信息分析
i.对下机得到的Raw data进行质控得到Clean data
ii.将Clean reads与参考基因组比对
每一个样本的clean reads用BWA(Burrows-Wheeler Aligner)和参考基因组校对(Li and Durbin,2009)。
iii.检测SNP和InDel并对其进行注释
用Genome Analysis Toolkit(GATK)软件鉴定所有样本的SNP，InDel以及大片段的变异。然后使用SnpEff工具对可靠的多态性变异进行注释，最后筛选出reads覆盖深度至少为4的高质量SNPs/InDel进行BSA-seq分析。
iv.SNP-index的计算及候选区域的界定
对SNP-index在染色体上的分布进行作图。默认选择1Mb为窗口，10kb为步长，计算每个窗口中SNP-index的平均值来反应子代的SNP-index分布。根据△SNP-index的结果，能够清晰的得到控制早花表型的候选区域，具体如图2所示，结果显示候选区域在A02的5.39-10.84Mb之间。
实施例5：初定位区间及侧翼分子标记的开发
首先根据BSA-seq的结果确定初定位的候选区域，再以双亲重测序clean reads数据与参考基因组比对的结果为基础，在候选区域内及两侧提取双亲中纯合且具有多态性的SNP位点作为开发分子标记的候选位点。为了验证两个亲本谱系间具有真正多态性的SNP标记，在候选区域不同位置上均匀设计多对不同的引物，扩增约500-2000bp包含目标SNP变异的序列。
PCR反应体系为(50μL)：2.5μL cDNA，5μL 10×Buffer，4μL dNTP(2.5mM)，正/反向引物(10μM)各2.5μL，1μL Taq酶(5U/μL)和32.5μL ddH2O。在冰上加样后混匀。PCR反应条件为：94℃5min；94℃30sec，52-58℃30-120sec(根据不同产物长度有所变化)；72℃30sec，30个循环；72℃10min。用1％琼脂糖凝胶电泳检测。
对在双亲中均能扩出条带的产物进行Sanger测序，测序的峰图结果见图3。最终保留经测序验证的双亲在同一位点有碱基差异的SNP标记，见表1。
表1 SNP分子标记
(1)对于ES-1，SNP分子标记的序列自5’端起第364位碱基为SNP位点n；n为A或G。
(2)对于ES-2，SNP分子标记的序列自5’端起第200位碱基为SNP位点n；n为T或C。
(3)对于ES-3，SNP分子标记的序列自5’端起第152位碱基为SNP位点n；n为T或A。
(4)对于ES-4，SNP分子标记的序列自5’端起第261位碱基为SNP位点n；n为G或T。
(5)对于ES-5，SNP分子标记的序列自5’端起第262位碱基为SNP位点n；n为A或G。
(6)对于ES-7，SNP分子标记的序列自5’端起第493位碱基为SNP位点n；n为G或A。
(7)对于ES-10，SNP分子标记的序列自5’端起第256位碱基为SNP位点n；n为G或C。
(8)对于ES-12，SNP分子标记的序列自5’端起第153位碱基为SNP位点n；n为A或C。
(9)对于ES-20，SNP分子标记的序列自5’端起第362位碱基为SNP位点n；n为A或G。
(10)对于ES-40，SNP分子标记的序列自5’端起第413位碱基为SNP位点n；n为G或A。
(11)对于ES-47，SNP分子标记的序列自5’端起第284位碱基为SNP位点n；n为A或G。
在BSA-seq结果基础上利用以上开发的分子标记，对60株和460株F2代早花表型植株筛选交换单株，结果如图4所示。竖线下面代表的是该分子标记下的交换单株个数。最终将候选基因定位于ebm-20和ebm-7之间。
综合以上实施例，使用上述SNP分子标记可以明确区分早花品种和晚花品种，鉴定方法简单，效率高，选择目标明确，不受环境的影响，能有效找出定位群体中的交换单株，应用于A2染色体5.39-10.84M之间的早花基因的精细定位。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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Claims (8)

1.一种甘蓝型油菜早花的分子标记，其特征在于，所述SNP分子标记包括SNP标记1、SNP标记2、SNP标记3、SNP标记4、SNP标记5、SNP标记6、SNP标记7、SNP标记8、SNP标记9、SNP标记10、SNP标记11中的至少一种；
所述SNP标记1～11均位于油菜的染色体A2上；
所述SNP标记1为碱基A或G，所述SNP标记1位于核酸的第364位，所述核酸具有SEQ IDNO.1所示核苷酸序列；
所述SNP标记2为碱基T或C，所述SNP标记2位于核酸的第200位，所述核酸具有SEQ IDNO.2所示核苷酸序列；
所述SNP标记3为碱基T或A，所述SNP标记3位于核酸的第152位，所述核酸具有SEQ IDNO.3所示核苷酸序列；
所述SNP标记4为碱基G或T，所述SNP标记4位于核酸的第261位，所述核酸具有SEQ IDNO.4所示核苷酸序列；
所述SNP标记5为碱基A或G，所述SNP标记5位于核酸的第262位，所述核酸具有SEQ IDNO.5所示核苷酸序列；
所述SNP标记6为碱基G或A，所述SNP标记6位于核酸的第493位，所述核酸具有SEQ IDNO.6所示核苷酸序列；
所述SNP标记7为碱基G或C，所述SNP标记7位于核酸的第256位，所述核酸具有SEQ IDNO.7所示核苷酸序列；
所述SNP标记8为碱基A或C，所述SNP标记8位于核酸的第153位，所述核酸具有SEQ IDNO.8所示核苷酸序列；
所述SNP标记9为碱基A或G，所述SNP标记9位于核酸的第362位，所述核酸具有SEQ IDNO.9所示核苷酸序列；
所述SNP标记10为碱基G或A，所述SNP标记10位于核酸的第413位，所述核酸具有SEQ IDNO.10所示核苷酸序列；
所述SNP标记11为碱基A或G，所述SNP标记11位于核酸的第284位，所述核酸具有SEQ IDNO.11所示核苷酸序列。
2.用于检测权利要求1所述SNP分子标记1～11的引物对。
3.根据权利要求2所述的引物对，其特征在于，所述引物对的序列为：
所述引物对ES-1用于扩增SEQ ID NO.1所示核苷酸序列；
所述引物对ES-2用于扩增SEQ ID NO.2所示核苷酸序列；
所述引物对ES-3用于扩增SEQ ID NO.3所示核苷酸序列；
所述引物对ES-4用于扩增SEQ ID NO.4所示核苷酸序列；
所述引物对ES-5用于扩增SEQ ID NO.5所示核苷酸序列；
所述引物对ES-7用于扩增SEQ ID NO.6所示核苷酸序列；
所述引物对ES-10用于扩增SEQ ID NO.7所示核苷酸序列；
所述引物对ES-12用于扩增SEQ ID NO.8所示核苷酸序列；
所述引物对ES-20用于扩增SEQ ID NO.9所示核苷酸序列；
所述引物对ES-40用于扩增SEQ ID NO.10所示核苷酸序列；
所述引物对ES-47用于扩增SEQ ID NO.11所示核苷酸序列。
4.权利要求1所述的油菜早花的分子标记的获得方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)筛选油菜早花品种；
(2)将步骤(1)筛选到的早花油菜品种与其原始来源的晚花品种杂交，获得F2群体；
(3)在步骤(2)所述F2群体中筛选出若干早花和若干晚花油菜的样本，提取所述早花样本和所述晚花样本的基因组DNA，并优化至相近浓度，然后等量混合生成两个极端池，连同筛选出的早花品种和所述原始来源的晚花品种的两个亲本DNA，一共四个样本按照标准的150bp双端测序方案进行文库构建，随后高通量测序；
(4)对测序数据进行检查和过滤，对可靠的多态性变异进行注释，筛选出reads覆盖深度至少为4的高质量SNPs/InDels进行BSA-seq分析；
(5)采用欧几里德距离和snp index方法检测潜在的早花性状相关SNP候选位点，基于这两种方法的重叠区域被定义为候选区域；
(6)在候选区域中设计引物对，以早花油菜品种和原始来源的晚花品种为模板进行PCR，验证是否具有SNP位点。
5.根据权利要求4所述的油菜开花性状的分子标记的获得方法，其特征在于，所述步骤(6)中验证是否具有SNP位点，如果有SNP位点，测序验证可得到SNP位点对应的单碱基在双亲本种出现差异。
6.根据权利要求4所述的油菜开花性状的分子标记的获得方法，其特征在于，所述早花油菜品种为原始品种经甲基磺酸乙酯诱变而来的材料，命名ebm，所述原始来源的晚花品种为中双9号。
7.权利要求1所述的分子标记或权利要求2～3任一项所述的引物对在油菜早花筛选中的应用。
8.权利要求1所述的分子标记或权利要求2～3任一项所述的引物对在油菜早花基因定位中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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