CN116622698A - 试剂盒及其使用方法 - Google Patents

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CN116622698A CN202310198918.0A CN202310198918A CN116622698A CN 116622698 A CN116622698 A CN 116622698A CN 202310198918 A CN202310198918 A CN 202310198918A CN 116622698 A CN116622698 A CN 116622698A
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Abstract

本发明公开了一种试剂盒及其使用方法，该试剂盒包括：能特异性检测受试者样本中的第一组标记基因，和/或，第二组标记基因的甲基化水平的试剂；所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的任意一种或多种的组合，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的任意一种或多种的组合；通过提供能特异性检测受试者样本中的第一组标记基因，和/或，第二组标记基因的甲基化水平的试剂，用于检测检测HGSIL细胞和腺癌病变细胞，为检测HGSIL细胞和/或腺癌病变细胞提供了一种新的思路，具有重要的临床应用意义。

Description

试剂盒及其使用方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种试剂盒及其使用方法。
背景技术
宫颈癌(Cervical cancer,CC)是指发生在宫颈阴道部或移行带的鳞状上皮细胞及宫颈管内膜的柱状上皮细胞交界处的恶性肿瘤，通常起源于持续感染高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)而导致的细胞转化。宫颈癌发生的早期一般先经历低等级鳞状上皮内病变(Low grade squamous intraepithelial lesion，简称LGSIL)和高等级鳞状上皮内病变(High grade squamous intraepithelial lesion，简称HGSIL)。如果不进行积极治疗，可能往往会发展为晚期癌症，例如腺癌(Adenomatous carcinoma，简称ACC)。
因此，研发用于诊断或监测HGSIL细胞和腺癌病变细胞具有重要的临床、科研及社会价值。
发明内容
鉴于此，本发明提供一种用试剂盒及其使用方法，用于检测HGSIL细胞，和/或腺癌病变细胞，为医疗服务提供指导。
第一方面，本发明提供一种试剂盒，包括：能特异性检测受试者样本中的第一组标记基因，和/或，第二组标记基因的甲基化水平的试剂；所述第一组标记基因包括SEQ IDNo.1至SEQ ID No.10中的任意一种或多种的组合，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的任意一种或多种的组合。
可选的，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的至少三种，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的至少三种。
可选的，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的至少五种，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的至少五种。
可选的，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的十种，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的十种。
可选的，所述甲基化水平是每一区域核苷酸序列中甲基化CpG位点的数量占该区域核苷酸序列中总CpG位点总数量的比例。
可选的，所述试剂包括可特异性扩增所述标记基因的引物和/或探针。
可选的，所述试剂还包括阳性对照试剂，所述阳性对照试剂包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.20中的至少一种的核酸分子。
可选的，所述样本来自人类的离体宫颈细胞。
第二方面，本发明还提供一种离体宫颈细胞类型的的判定方法，所述方法包括(a)：检测受试者离体宫颈细胞样本中的所述第一组标记基因，和/或，所述第二组标记基因的甲基化水平；以及(b)：根据步骤(a)所述的甲基化水平评估所述样本是否为HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
其中，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的任意一种或多种的组合，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的任意一种或多种的组合。
可选的，所述(a)包括：检测样本中的所述第一组标记基因的甲基化水平，和/或，所述第二组标记基因的甲基化水平。
可选的，所述(b)包括：
根据所述第一组标记基因的甲基化水平判断是否为高于第一阈值，若高于第一阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不高于第一阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
所述第一阈值为正常受试者的样本中的的所述第一组标记基因的甲基化水平。
可选的，所述(b)包括：
根据所述第二组标记基因的甲基化水平判断是否低于第二阈值，若低于第二阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不低于第二阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
所述第二阈值为正常受试者的样本中的的所述第二组标记基因的甲基化水平。
可选的，所述(b)包括：
根据所述第一组标记基因的甲基化水平判断是否为高于第一阈值，若高于第一阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不高于第一阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；和/或
根据所述第二组标记基因的甲基化水平判断是否低于第二阈值，若低于第二阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不低于第二阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
所述第一阈值为正常受试者的样本中的的所述第一组标记基因的甲基化水平；所述第二阈值为正常受试者的样本中的的所述第二组标记基因的甲基化水平。
可选的，所述样本是离体血液样本或者宫颈穿刺活检样本。
有益效果：
本发明提供一种试剂盒及其使用方法，通过提供能特异性检测受试者样本中的第一组标记基因和/或第二组标记基因的甲基化水平的试剂，用于检测检测HGSIL细胞和腺癌病变细胞，为检测HGSIL细胞和/或腺癌病变细胞提供了一种新的思路，具有重要的临床应用意义。
具体实施方式
本发明提供一种试剂盒及其使用方法，旨在通过提供能特异性检测受试者样本中的第一组标记基因，和/或，第二组标记基因的甲基化水平的试剂，用于检测HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，为检测HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞提供了一种新的思路，具有重要的临床应用意义。
术语定义：
术语“受试者”和“患者”包括人类受试者和其它哺乳类动物，或者希望使用本发明方法进行分析或治疗的任何个体。落入本发明范围内的合适的哺乳类动物包括但不限于：灵长类、家畜(例如绵羊、牛、马、猴、猪)、实验室试验动物(例如兔、小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠)、宠物(例如猫、狗)和圈养野生动物(例如狐狸、鹿、澳洲野狗)。优选地，为人类。
术语“正常受试者”和“正常组”，的具体定义可参看临床实验指导原则，尤其是指未患有低等级宫颈上皮内瘤变(low grade squamous intraepithelial lesion，LGSIL)，HGSIL(高等级宫颈上皮内瘤变，high grade squamous intraepithelial lesion)，宫颈腺癌(Adenocarcinoma of Cervix，CCA)和CCS(Squamous Cell Carcinoma，宫颈鳞状细胞癌)人类受试者和其它哺乳类动物。
术语“样本”可以包括：来源于手术切除术或活组织检查(例如来自患者活组织检查的细胞)的肿瘤、组织、体液、血液或者活组织。组织可以以任何合适的方法移除，例如穿刺活组织检查、吸引术、刮擦、利用手术切除法切除。任选地，样本可以在一个或多个时间点获得。任选地，在通过本发明方法分析材料前，可以利用一种或多种收集后制备或储存技术对样本进行处理(例如：固定、储存、冷冻、裂解、匀浆、DNA或RNA抽提、cDNA转化、超滤、稀释(例如使用盐水、缓冲剂或生理上可接受的稀释剂等进行稀释)、浓缩、蒸发、离心、分离、过滤等)。任选地，本发明方法的步骤(a)和(b)之前可以有从受试者获得受试者来源的样本的步骤。
术语“引物”是指够在PCR反应中充当DNA复制反应起始子的寡核苷酸DNA。
术语“探针”意指寡核苷酸及其类似物，并指通过与靶序列的核苷酸碱基之间的氢键相互作用从而识别多核苷酸靶序列的一类化学物质。探针或靶序列可以是单链或双链RNA、或单链或双链DMA、或DM和RNA碱基的组合。
术语“PCR”或“PCR扩增”是指聚合酶链反应。
术语“文库”表示核酸片段的集合，它们各自的大小可以从几个碱基对到大约一百万个碱基对。这些片段作为插入片段包含在能够在某些宿主细胞中繁殖的载体中，例如细菌、真菌、植物、昆虫或哺乳动物细胞。
本文中，“甲基化水平”代表核苷酸序列中一个或多个位点处于甲基化水平的比例。一个区域的甲基化水平是该区域中所有位点的甲基水平的均值。因此，区域的甲基化水平上升或下降并不表示区域中所有甲基化位点的甲基化水平都上升或下降。本领域知晓将检测DNA甲基化的方法(例如简化甲基化测序)所得结果转化为甲基化水平的过程。
术语“包括”是指“包括但不限于”此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个所述特征。
首先，本发明涉及一种试剂盒，该试剂盒用于鉴定出HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，该试剂盒包括：能特异性检测受试者样本中的第一组标记基因，和/或，第二组标记基因的甲基化水平的试剂；所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的任意一种或多种的组合，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的任意一种或多种的组合。其中，所述SEQ ID No.1至SEQ ID No.10是指SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示的核苷酸序列，SEQ ID No.11至SEQ ID No.20是指SEQ ID No.11至SEQ ID No.20所示的核苷酸序列。
其中，SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示核苷酸序列和对应的区间的具体信息详见下表1：
表1 SEQ ID No.1至SEQ ID No.10所示核苷酸序列的具体信息
其中，SEQ ID No.11至SEQ ID No.20所示核苷酸序列的具体信息详见下表2：
表2 SEQ ID No.11至SEQ ID No.20所示核苷酸序列的具体信息
在一些实施例中，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的至少三种，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的至少三种。
在一些实施例中，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的至少五种，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的至少五种。
在一些实施例中，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的十种，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的十种。
在一些实施例中，所述甲基化水平是每一区域核苷酸序列中甲基化CpG位点的数量占该区域核苷酸序列中总CpG位点总数量的比例。
在一些实施例中，所述试剂包括可特异性扩增所述标记基因的引物和/或探针。
在一些实施例中，所述试剂还包括阳性对照试剂，所述阳性对照试剂包括SEQ IDNo.1至SEQ ID No.20中的至少一种的核酸分子。
在一些实施例中，所述样本来自人类的离体宫颈细胞。
本发明还涉及一种方法，该方法为一种离体宫颈细胞类型的的判定方法，所述方法包括(a)：检测受试者离体宫颈细胞样本中的所述第一组标记基因，和/或，所述第二组标记基因的甲基化水平；以及(b)：根据步骤(a)所述的甲基化水平评估所述样本是否为HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
其中，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的任意一种或多种的组合，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的任意一种或多种的组合。
在一些实施例中，所述(a)包括：检测样本中的所述第一组标记基因的甲基化水平，和/或，所述第二组标记基因的甲基化水平。
在一些实施例中，所述(b)包括：
根据所述第一组标记基因的甲基化水平判断是否为高于第一阈值，若高于第一阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不高于第一阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
所述第一阈值为正常受试者的样本中的的所述第一组标记基因的甲基化水平。
在一些实施例中，所述(b)包括：
根据所述第二组标记基因的甲基化水平判断是否低于第二阈值，若低于第二阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不低于第二阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
所述第二阈值为正常受试者的样本中的的所述第二组标记基因的甲基化水平。
在一些实施例中，所述(b)包括：
根据所述第一组标记基因的甲基化水平判断是否为高于第一阈值，若高于第一阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不高于第一阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；和/或
根据所述第二组标记基因的甲基化水平判断是否低于第二阈值，若低于第二阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不低于第二阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
所述第一阈值为正常受试者的样本中的的所述第一组标记基因的甲基化水平；所述第二阈值为正常受试者的样本中的的所述第二组标记基因的甲基化水平。
在一些实施例中，所述第一阈值是所述第一组标记基因的任一核苷酸序列中发生甲基化的CpG位点占该核苷酸序列中所有CpG位点的55％以上。特别的，所述SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.10中，至少八个或更多个核苷酸序列的甲基化水平在55％以上，例如55％以上、60％以上、65％以上、70％以上、75％以上、80％以上、85％以上或90％以上。
在一些实施例中，所述第二阈值是所述第二组标记基因的任一核苷酸序列中发生甲基化的CpG位点占该核苷酸序列中所有CpG位点的56％以下。特别的，所述SEQ ID NO.11至SEQ ID NO.20中，至少八个或更多个核苷酸序列的甲基化水平在56％以下，例如56％以下、50％以下、45％以下、40％以下、35％以下、30％以下、25％以下、20％以下或15％以下。
在一些实施例中，所述样本是离体血液样本或者宫颈穿刺活检样本。
本发明还涉及一种应用，所述应用是涉及以上任一项实施例的试剂盒在检测HGSIL中的应用。
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用，但不能限制本申请的内容。
除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过本领域已知方法制备。
本发明实施例测序由中国的Novogene(北京诺禾致源科技股份有限公司)完成。
本发明实施例中涉及的试剂盒Tiangen DP304购置于天根生化科技(北京)有限公司；试剂盒EZ DNA Methylation-GoldTM购置于美国Zymo Research公司；Qubit 2.0荧光计购置于美国加利福尼亚州生命技术公司；Agilent Bioanalyzer 2100购置于安捷伦。
本发明实施例中所有操作均符合制造商的说明。
本发明实施例所用的样本是针对广州医科大学附属第三医院接受宫颈病变组织切除的宫颈癌及其前癌前病变患者的回顾性研究。从2017年1月至2020年12月，广州医科大学附属第三医院共有18例患者和5例正常对照被纳入本研究。其中，有6例患者在组织学上首次被诊断为低等级宫颈上皮内瘤变(low grade squamous intraepithelial lesion，LGSIL)，对应的受试样品为手术切除的宫颈病变组织，分别为样品1至样品6；有5例患者在组织学上首次被诊断为HGSIL(高等级宫颈上皮内瘤变，high grade squamousintraepithelial lesion)，对应的受试样品为手术切除的宫颈病变组织，分别为样品7至样品11；2例患者在组织学上首次被诊断为宫颈腺癌(Adenocarcinoma of Cervix，CCA)，对应的受试样品为手术切除的宫颈癌变组织(置于-80℃的条件下保存)，分别为样品12和样品13；5例患者在组织学上首次被诊断为CCS(Squamous Cell Carcinoma，宫颈鳞状细胞癌)，对应的受试样品为手术切除的宫颈癌变组织(置于-80℃的条件下保存)，分别为样品14至样品18。所有患者均在组织学上首次被诊断为宫颈癌或癌前病变，且不包括宫颈癌复发患者。该研究方案已获得每个中心伦理委员会的批准，并且在手术前已获得每位患者的书面知情同意。所有样本在本申请中进行匿名化处理。
本申请实施例涉及的对照组来源于5例正常女性(身体各项指标正常，且子宫颈未发生病变)的离体宫颈细胞样本，分别对应对照1至对照5。
实施例1甲基化测序
本发明实施例所用的样本为患者手术切除宫颈组织样本。
首先，使用TiangenDP304试剂盒分离基因组DNA，并使用琼脂糖凝胶监测DNA的降解和污染。用分光光度计(IMPLEN，CA，USA)测量DNA纯度。使用2.0 Flurometer中的DNA分析试剂盒确认DNA浓度，用Covaris S220超声处理至200-300bp，然后加末端修复和腺苷酸化，将掺有26ngλDNA的总量为5.2μg的基因组DNA片段化。根据试剂盒制造商的说明，将胞嘧啶甲基化的条形码连接到超声处理的DNA。使用EZ DNA Methylation-GoldTM试剂盒(Zymo Research)用亚硫酸氢盐处理连接得到的DNA片段两次。使用KAPA HiFi HotStartUracil+ReadyMix(2X)试剂盒对亚硫酸氢盐处理的单链DNA片段进行PCR扩增。文库浓度通过Qubit 2.0荧光计(Life Technologies，CA，USA)和定量PCR定量，插入片段大小在Agilent Bioanalyzer 2100系统上测定。检测合格的样本文库进行全基因组甲基化(WGBS)测序，本发明实施例中的测序由诺和致源公司完成。
实施例2数据分析
利用MOABS系列软件进行样本WGBS测序数据分析，以报告全基因组中CpG二核苷酸的甲基化水平以及CpG深度覆盖和平均甲基化水平。以正常组作为实验对照组，鉴定LGSIL(低等级宫颈上皮内瘤变)，HGSIL(高等级宫颈上皮内瘤变)，CCA(宫颈腺癌)和CCS(宫颈鳞状细胞癌)中甲基化水平异常升高(Hyper DMR)和降低(Hypo DM)的区间。整合分析宫颈癌发展变化过程中的四组时期，鉴定特异性的DMR分组。在甲基化异常升高和降低的区间内，鉴定出2组特异性区间，并在这2组特异性区间中各自挑选变化最大的前10个区间作为潜在标志物(markers)。详细信息见表3和表4。
表3.18例受试样本和5例对照样本的全基因组DNA中区间1至区间10的CpG二核苷酸甲基化水平。
注：NULL表示空值，0.00表示未发生甲基化，其他数值代表甲基化水平。
如表3所示，HGSIL和/或腺癌患者的SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的甲基化水平明显高于各个对照品的甲基化水平，正常个体的SEQ ID No.1至SEQ ID No.10的甲基化水平约为0.12～0.34，而HGSIL和/或腺癌患者则达到0.64～0.88(约64％～88％)，且HGSIL和/或腺癌患者至少8个序列的甲基化水平在0.55以上(≥55％)。由此可见，与正常个体相比，在HGSIL细胞和/或腺癌病变细胞个体样本中，至少存在10个核苷酸序列区间的甲基化水平异常的升高，这10个区间包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10，其中，SEQ ID No.1的甲基化升高水平变化最大，SEQ ID No.2至10的甲基化升高水平变化程度依次降低。因此，该实验证明可将SEQ ID No.1至SEQ ID No.10这10个区间作为HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞的指示基因，并将这10个区间中的任意一个或多个的甲基化水平或者平均甲基化水平作为HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞的评估指标。
表4.18例受试样本和5例对照样本的全基因组DNA中区间11至区间20的CpG二核苷酸甲基化水平。
注：NULL表示空值，0.00表示未发生甲基化，其他数值代表甲基化水平。
另外，如表4所示，HGSIL和/或腺癌患者的SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的甲基化水平明显低于各个对照品的甲基化水平，正常个体的SEQ ID No.11至SEQ ID No.20的甲基化水平约为0.73～0.95，而HGSIL和/或腺癌患者则约为0.27～0.51(约0％～51％)，且HGSIL和/或腺癌患者至少8个序列的甲基化水平在0.56以下(≤56％)。由此可见，与正常个体相比，在HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞样本中，至少存在10个核苷酸序列区间的甲基化水平异常的降低，根据甲基化异常降低的变化大小，依次将这甲基化水平异常降低的10个区间进行排序，这10个区间包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20，其中，SEQ ID No.11的甲基化降低水平变化最大，SEQ ID No.12至20的甲基化降低水平变化程度依次降低。因此，该实验证明可将SEQ ID No.11至SEQ ID No.20这10个区间作为HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞的指示基因，并将这10个区间中的任意一个或多个的甲基化水平作为HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞评估指标。
需要说明的是，以上甲基化变化的顺序仅为一个示例性的实施例中的排序，本发明并不额外限定SEQ ID No.1至SEQ ID No.10和SEQ ID No.11至SEQ ID No.20的优选顺序。
综上所述，本发明提供一种用于检测HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞的试剂盒及其使用方法，通过提供能特异性检测受试者样本中的第一组标记基因，和/或，第二组标记基因的甲基化水平的试剂，用于检测HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，为检测HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞提供了一种新的思路。
需要说明的是，不同于现有的试剂盒中的标记基因，本发明试剂盒中第一组标记基因和第二组标记基因，突破性的利用全基因组测序，最终筛选出甲基化异常升高和降低的基因序列，并将该甲基化异常升高和降低的基因序列分别归为以上第一组标记基因和第二组标记基因，并用于检测HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，其检测结果可以作为制定临床治疗方案的参考因素，具有重大的临床应用意义。
以上对本发明实施例所提供的试剂盒及其使用方法进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想；同时，对于本领域的技术人员，依据本发明的思想，在具体实施方式及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。

Claims (14)

1.一种试剂盒，其特征在于，包括：能特异性检测受试者样本中的第一组标记基因，和/或，第二组标记基因的甲基化水平的试剂；所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ IDNo.10中的任意一种或多种的组合，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ IDNo.20中的任意一种或多种的组合。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的至少三种，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的至少三种。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的至少五种，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的至少五种。
4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的十种，所述第二组标记基因包括SEQ IDNo.11至SEQ ID No.20中的十种。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述甲基化水平是每一区域核苷酸序列中甲基化CpG位点的数量占该区域核苷酸序列中总CpG位点总数量的比例。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括可特异性扩增所述标记基因的引物和/或探针。
7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂还包括阳性对照试剂，所述阳性对照试剂包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.20中的至少一种的核酸分子。
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样本来自人类的离体宫颈细胞。
9.一种离体宫颈细胞类型的的判定方法，其特征在于，所述方法包括(a)：检测受试者离体宫颈细胞样本中的所述第一组标记基因，和/或，所述第二组标记基因的甲基化水平；以及(b)：根据步骤(a)所述的甲基化水平评估所述样本是否为HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
其中，所述第一组标记基因包括SEQ ID No.1至SEQ ID No.10中的任意一种或多种的组合，所述第二组标记基因包括SEQ ID No.11至SEQ ID No.20中的任意一种或多种的组合。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述(a)包括：检测样本中的所述第一组标记基因的甲基化水平，和/或，所述第二组标记基因的甲基化水平。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述(b)包括：
根据所述第一组标记基因的甲基化水平判断是否为高于第一阈值，若高于第一阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不高于第一阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
所述第一阈值为正常受试者的样本中的的所述第一组标记基因的甲基化水平。
12.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述(b)包括：
根据所述第二组标记基因的甲基化水平判断是否低于第二阈值，若低于第二阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不低于第二阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
所述第二阈值为正常受试者的样本中的的所述第二组标记基因的甲基化水平。
13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述(b)包括：
根据所述第一组标记基因的甲基化水平判断是否为高于第一阈值，若高于第一阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不高于第一阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；和/或
根据所述第二组标记基因的甲基化水平判断是否低于第二阈值，若低于第二阈值，则指示所述样本是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞，若不低于第二阈值，则指示所述样本不是HGSIL细胞，和/或，腺癌病变细胞；
所述第一阈值为正常受试者的样本中的的所述第一组标记基因的甲基化水平；所述第二阈值为正常受试者的样本中的的所述第二组标记基因的甲基化水平。
14.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述样本是离体血液样本或者宫颈穿刺活检样本。
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