CN116590160A - 一种红法夫酵母菌诱变菌株hcyj-07及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及微生物发酵技术领域，具体涉及一种红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ‑07及应用。该菌株以保藏编号CICC33064的红法夫酵母菌为出发菌株采用亚硝基胍联合60Co‑γ射线诱变而得。其保藏编号为CGMCC NO.26644；保藏日期为2023年02月21日；保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；其分类学命名为红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)。实验显示，该菌株具有高产虾青素的优势，且传代稳定，适于虾青素的工业发酵生产。
Description
技术领域
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及一种红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07及应用。
背景技术
虾青素英文名:Astaxanthin，CAS号472-61-7，即可作为着色剂，也具有较强的抗氧化、抗衰老、运动营养、增强免疫、抗肿瘤等作用，在食品添加剂、化妆品、保健食品、水产养殖和医药等领域已得到广泛应用。虾类（如太平洋磷虾）、雨生红球藻、红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)是虾青素的主要生物来源，其中雨生红球藻、红法夫酵母菌对虾青素的累积作用较强。发酵法生产虾青素常用的菌株是红法夫酵母菌，但野生型红法夫酵母菌的虾青素产量较低。为提高红法夫酵母菌的虾青素产量或优化红法夫酵母菌的耐受性等特征，国内外对红法夫酵母菌进行了多种改良，包括诱变选育及基因工程改造。
中国专利CN202111175715.7通过常压室温等离子体诱变技术(ARTP)获得了保藏编号为CCTCC No:M20211124的红法夫酵母菌，可提高虾青素产量达到35.37mg/L。中国专利CN202080066969.2构建了一种红法夫酵母菌的工程菌株，可提高虾青素产量达到37.8mg/gdm，且适应较大的碳源浓度波动范围。中国专利CN201010268908.2公开了一种保藏编号为CGMCC No:3788的好氧红法夫酵母菌，虾青素产量可达到50mg/L。黎丽等通过两轮紫外诱变和光复活交替处理的方法获得了一种红法夫酵母菌诱变菌株，虾青素产量达到70mg/L[黎丽, 窦光鹏, 霍文严,等. 高产虾青素红法夫酵母的选育和工艺优化[J]. 中国食品添加剂, 2014(9):7.]。胡向东等以红法夫酵母菌为出发菌株，分别进行紫外-氯化锂(UV-LiCl)和60 Co-γ诱变并结合基因组重排育种获得了高产、稳产虾青素的融合菌株F5，虾青素产量达到83.39mg/L[胡向东, 潘玲燕, 叶茂,等. 高产虾青素红法夫酵母菌株的选育和发酵参数优化[J].食品工业科技,2616, 37(5):142.]。
总体而言，目前报道的红法夫酵母菌虾青素产量虽有较大程度的提高，但仍然处于较低的水平。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的之一是提供一种红法夫酵母菌诱变菌株，其相对于出发菌株获得了更高的虾青素产量，可满足工业生产需求。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07，其保藏编号为CGMCC NO.26644；保藏日期为2023年02月21日；保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；其分类学命名为红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)。
所述红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07是以保藏编号CICC33064的红法夫酵母菌为出发菌株采用亚硝基胍联合60Co-γ射线诱变而得。经5L发酵罐条件下发酵试验，红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07的虾青素发酵单位(产量，即发酵结束时发酵液中虾青素浓度)可达到1604.64mg/L，以细胞干重计算虾青素产量可达到24.66g虾青素/kg细胞干重。
本发明的目的之二是提供所述红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07在发酵制备虾青素中的应用。
本发明的有益效果：本发明的红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07可显著提高虾青素产量，传代稳定性良好，为虾青素的工业规模生产提供了良好的菌株。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明的方案进行说明，其中虾青素发酵单位采用高效液相色谱法测定。详细方法及操作步骤可参见毕业论文《虾青素产量提高的红法夫酵母诱变菌的选育和转录组表达差异分析》（林启彬，广东中医药大学，2020年）。
在无额外说明的情况下，以下实施例中使用的发酵培养基及培养条件如下：
A培养基
平板培养基（g/L）:酵母浸粉10，蛋白胨20，葡萄糖20，琼脂粉20，pH6.0。115 ℃ 灭菌20min。
种子摇瓶培养基（g/L）:酵母浸粉10，蛋白胨20，葡萄糖20，pH6.0。115 ℃ 灭菌20min。
发酵摇瓶/发酵罐培养基（g/L）:(NH4)2SO43.0，蛋白胨 5.0，酵母浸粉 5.0，葡萄糖20.0（葡萄糖单独灭菌: 115 ℃灭菌20 min）、KH2PO4 1.5，MgSO4·7H2O 0.5，CaCl20. 1，柠檬酸钠2.5，pH 6.0。121 ℃ 灭菌 30 min。
B发酵条件
发酵摇瓶:22℃，200转/min，培养72h。发酵结束测定虾青素发酵单位和细胞干重（测定方法可参见：胡向东, 潘玲燕, 章祺,等. 复合诱变选育高产虾青素的红法夫酵母菌株[J]. 食品与发酵工业, 2014, 40(10):6.），计算基于细胞干重的虾青素产量(g/kg)。
5L发酵罐:初始装液量2.0L，22℃, 初始转速200转/min，初始通气量2.0L/min，pH7.0，
控制葡萄糖浓度在5g/L~10g/L，发酵结束测定虾青素发酵单位和细胞干重，计算基于细胞干重的虾青素产量(g/kg)。
实施例1 红法夫酵母菌诱变方法及筛选实验
1.出发菌株
红法夫酵母菌(Phaffia rhodozyma)保藏编号CICC 33064，在固体培养基上呈现红色。
2.诱变方法
2.1亚硝基胍诱变
(1)拿菌种甘油管一支，接种到种子摇瓶中，22℃、200转/min，振荡培养36h。
(2)把培养好的种子液稀释至10-6梯度，吸取1ml到灭过菌的1.5ml离心管中。
(3)加入0.5ml亚硝基胍溶液，使终浓度为0.15mg/ml，22℃水浴处理，分别处理10min、20min、30min、40min、50min（通过该试验，确定最佳处理时间，后续直接用所确定的最佳时间诱变）。反应完后离心，用生理盐水重悬菌体，重复3次，终止反应。
(4)把未诱变的菌液和亚硝基胍诱变后的菌液，取0.1ml涂布平板（YPD培养基），22℃避光培养5d。
(5)从致死率为90%左右的平板上挑选颜色不同的单菌落，接种到种子摇瓶中，培养36h左右，培养好后一部分做成甘油管，一部分接发酵摇瓶，发酵摇瓶培养72h后，测发酵单位，选1株目标产物含量高的菌株。
2.260Co-γ射线诱变
(1)拿经亚硝基胍诱变的菌种甘油管一支，接种到种子摇瓶中，22℃、200转/min，振荡培养36h。
(2)把培养好的种子液稀释至10-6梯度，吸取10ml到灭过菌的试管中，进行60Co-γ射线照射，照射剂量为3.5kGy。
(3)把未照射的菌液和60Co-γ射线后的菌液，取0.1ml涂布平板（YPD培养基），22℃避光培养5d。
(4)从平板上挑选形态颜色较佳的单菌落，接种到种子摇瓶中，培养36h左右，培养好后一部分做成甘油管，一部分接发酵摇瓶，发酵摇瓶培养72h后，测发酵单位，选1株目标产物含量高的菌株。
2.3联合诱变
根据本实施例“2.1亚硝基胍诱变”、“2.260Co-γ射线诱变”的方法依次采用亚硝基胍、60Co-γ射线进行交替诱变。每次诱变筛选出的虾青素发酵单位最高的菌株作为下一次诱变的出发菌株。共进行5轮亚硝基胍诱变和60Co-γ射线诱变。
3.实验结果
3.1亚硝基胍诱变致死率
如表1所示，红法夫酵母菌随亚硝基胍诱变时间的延长，死亡率逐渐升高，亚硝基胍诱变30min~50min时，红法夫酵母菌死亡率为84.6%~98.5%。因此确定亚硝基胍诱变最佳时间为40min。
表1亚硝基胍诱变致死率
3.2 交替诱变所得诱变菌株的虾青素产量比较
各次诱变所得虾青素发酵单位最高的菌株编码为NT-04(亚硝基胍诱变)、NC-02(亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变)、NCN-03(亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变）、NC2-05(亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变)、NC2N-01(亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变)、NC3-061(亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变)、NC3N-05(亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变)、NC4-01(亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变)、NC4N-04(亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变)、NC5-03(亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变-亚硝基胍诱变-60Co-γ射线诱变)。保藏编号CICC 33064的红法夫酵母菌出发菌株编码为YS-00。
分别在摇瓶培养和5L发酵罐培养条件下比较了出发菌株YS-00及诱变菌株NT-04、NC-02、NCN-03、NC2-05、NC2N-01、NC3-061、NC3N-05、NC4-01、NC4N-04、NC5-03的虾青素产量结果见表2。
表2 摇瓶培养和5L发酵罐培养条件下出发菌株YS-00及诱变菌株的虾青素产量
如表2所示，摇瓶及5L发酵罐培养条件下，NC4N-04和NC5-03的虾青素产量高于其他菌株，其中5L发酵罐培养条件下NC4N-04的虾青素发酵单位最高，达到1604.64mg/L。因此，将NC4N-04确定为最优诱变菌株，命名为红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07，并进行保藏。其保藏编号为CGMCC NO.26644；保藏日期为2023年02月21日；保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；其分类学命名为红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)。
实施例2红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07的生理生化特性鉴定
经鉴定，红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07具有如下特征：
菌落形态：菌落在平板上呈红色圆形，表面光滑、隆起、湿润、 不透明、边缘整齐。
显微镜下细胞呈椭圆形，出芽生殖。
此菌株能发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、甘露糖、可溶性淀粉，不能发酵乳糖、半乳糖。
实施例3红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07的连续传代试验
将筛选出的高产虾青素的红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07接种至准备好的种子摇瓶中，22℃，200转/min培养36h，培养结束后，一部分种子液按2%的接种量接种新鲜种子摇瓶继续培养，剩余种子液接种5L发酵罐进行发酵培养。重复操作5次，测定5次发酵的虾青素发酵单位。
连续传代试验结果：
在5个发酵罐实验中，检测出连续传代后的虾青素含量分别为1543mg/L、1600mg/L、1617mg/L、1586mg/L和1605mg/L。连续传代后的虾青素产量较为稳定，说明红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07传代稳定性良好。
Claims (2)
1.一种红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07，其特征在于，所述红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07的保藏编号为CGMCC NO.26644；保藏日期为2023年02月21日；保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号；所述红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07的分类学命名为红法夫酵母(Phaffia rhodozyma)。
2.权利要求1所述红法夫酵母菌诱变菌株HCYJ-07在发酵制备虾青素中的应用。
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Citations (6)
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|---|---|---|---|---|
| CN101818141A (zh) * | 2009-10-30 | 2010-09-01 | 大连工业大学 | 红法夫酵母菌株的复合诱变方法 |
| CN106318878A (zh) * | 2015-07-06 | 2017-01-11 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 一种高产虾青素红酵母工程菌及其构建方法 |
| CN113789322A (zh) * | 2021-10-09 | 2021-12-14 | 湖北绿科乐华生物科技有限公司 | 一种高产虾青素的红法夫酵母菌株及其选育方法与应用 |
| US20220290119A1 (en) * | 2019-07-26 | 2022-09-15 | Nextferm Technologies Ltd. | Astaxanthin Over-Producing Strains of Phaffia Rhodozyma |
| CN115386526A (zh) * | 2022-10-27 | 2022-11-25 | 山东合成远景生物科技有限公司 | 一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株hcyj-03及应用 |
| CN116286545A (zh) * | 2023-04-14 | 2023-06-23 | 山东合成远景生物科技有限公司 | 一种类球红细菌诱变菌株hcyj-01及应用 |
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101818141A (zh) * | 2009-10-30 | 2010-09-01 | 大连工业大学 | 红法夫酵母菌株的复合诱变方法 |
| CN106318878A (zh) * | 2015-07-06 | 2017-01-11 | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 | 一种高产虾青素红酵母工程菌及其构建方法 |
| US20220290119A1 (en) * | 2019-07-26 | 2022-09-15 | Nextferm Technologies Ltd. | Astaxanthin Over-Producing Strains of Phaffia Rhodozyma |
| CN113789322A (zh) * | 2021-10-09 | 2021-12-14 | 湖北绿科乐华生物科技有限公司 | 一种高产虾青素的红法夫酵母菌株及其选育方法与应用 |
| CN115386526A (zh) * | 2022-10-27 | 2022-11-25 | 山东合成远景生物科技有限公司 | 一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株hcyj-03及应用 |
| CN116286545A (zh) * | 2023-04-14 | 2023-06-23 | 山东合成远景生物科技有限公司 | 一种类球红细菌诱变菌株hcyj-01及应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 韩伟;朱传合;: "微波对红法夫酵母的诱变效应的研究", 食品与发酵工业, no. 04 * |
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