CN115386526B - 一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株hcyj-03及应用 - Google Patents

一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株hcyj-03及应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及微生物发酵技术领域，具体涉及一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ‑03及应用。该大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ‑03的分类学命名为大肠埃希氏菌（Escherichia coli），保藏编号为：CGMCC NO.25637；保藏日期为2022年09月02日；保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。该大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ‑03以保藏编号为ATCC130277的大肠埃希氏菌K235为原始菌株诱变而得。该大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ‑03产聚唾液酸或唾液酸的产量相对于原始菌株提高约44.19%，适于大工业生产。

Description

一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03及应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03及应用。
背景技术
聚唾液酸（Polysialic acid）是唾液酸（Sialic acid，CAS No.:131-48-6）单体的线性聚合物，属于天然存在的荚膜多糖。聚唾液酸经酸水解可进一步制备唾液酸。研究显示，聚唾液酸对神经发育和重塑有促进作用（吴剑荣, 詹晓北, 郑志永,等. 聚唾液酸与唾液酸的研究进展[J]. 生物加工过程, 2007, 5(1):7.）；而唾液酸不仅与神经发育相关，也被认为具有抗病毒、抗肿瘤等功效（李翔宇, 徐柳柳, 舒敏,等. 固体饮料中唾液酸含量的检测方法[J]. 食品工业. 2022,43(7) :291.）。
大肠埃希氏菌可以葡萄糖、山梨醇、果糖等作为碳源，通过聚唾液酸生物合成、转运相关酶来完成聚唾液酸的体内合成，且适于工业化生产。因此，目前大肠埃希氏菌是工业企业发酵制备聚唾液酸的常用菌种。发酵制备的聚唾液酸可通过酸水解等方法进一步制备唾液酸。目前报道的发酵法生产聚唾液酸的安全菌株主要是大肠埃希氏菌K235（郑志永,詹晓北, 朱德强,等. 聚唾液酸和唾液酸寡糖的生物合成及其在营养食品中的应用前景[J]. 食品科学, 2013, 34(15):8.）。
发酵生产用菌种的改良和选择手段包括：自然选育、诱变选育、杂交选育、基因工程改造四种方法。其中诱变选育是采用物理诱变、化学诱变或离子注入等手段促使菌株短时间内产生大量、非定向突变，然后进行选择（何国庆,贾英民,丁立孝. 食品微生物学 第4版(M).北京:中国农业大学出版社, 2021年.）。其中紫外诱变手段操作简单、经济实惠，可在260nm波长附近促使DNA分子形成嘧啶二聚体；电离辐射可利用高能量射线破坏DNA分子，但操作要求高，危险性高、需要特殊昂贵设备；离子注入时可利用产生的自由基变化损伤DNA，是极有潜力的诱变选育的方法，但需要特定离子注入设备产生高能粒子束，通常实验室条件难以满足，应用较少。烷化剂（亚硝基胍、甲基磺酸乙酯等）、碱基类似物、无机化合物（氯化锂、亚硝酸等）也常用于菌种的化学诱变，操作简单易行。此外，微波、激光、空间诱变（航天育种）也可用于菌种改良选育。
为提高大肠埃希氏菌发酵制备聚唾液酸或唾液酸的产量，本领域的主要研究方向包括：对发酵培养条件的优化、对发酵产物中聚唾液酸或唾液酸分离纯化方法的优化、对菌株的改造和优化。其中大部分研究侧重于发酵培养条件的优化以及对发酵液中聚唾液酸或唾液酸分离纯化方法的优化。在菌株改造方面，已有部分单位取得了较好的成果，例如：专利文献CN112175893A、CN102649965A报道的技术，是通过基因编辑技术改造大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母等，构建了基因工程菌株，提高了唾液酸的产量。此类技术是针对微生物体内与聚唾液酸或唾液酸合成相关的基因进行针对性的敲除或过表达，其改造对象和目的是明确的。再例如，也有研究者采用低能氮离子束注入对大肠埃希氏菌进行诱变以提高聚唾液酸产量（吴金勇, 陈祥松, 余超,等. 大肠杆菌离子束诱变结合呼吸商在线实时调控高产聚唾液酸[J]. 食品科学. 2019,40(14):54-62；原始菌株为大肠埃希氏菌K235，保藏号为ATCC13027，诱变所得菌株48小时内聚唾液酸产量可达3.94g/L）；或采用60Co辐射对大肠埃希氏菌进行诱变处理提高聚唾液酸产量（詹晓北, 郑志永, 贾薇,等. 大肠杆菌60Co诱变育种及其发酵生产聚唾液酸条件[J]. 无锡轻工大学学报:食品与生物技术,2000, 19(4):315-318；原始菌株为大肠埃希氏菌WX-J11，得到的高产突变株为大肠埃希氏菌WX-J4，诱变所得菌株聚唾液酸产量可达1.5g/L）；或采用紫外照射联合60Co辐射、氮离子束注入、N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍（N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, NTG）对大肠埃希氏菌进行复合诱变以提高聚唾液酸产量(Liu JL , Zhan XB , Wu JR , et al.An efficient and large-scale preparation process for polysialic acid byEscherichia coli CCTCC M208088[J]. Biochemical Engineering Journal, 2010, 53(1):97-103; 原始菌株为大肠埃希氏菌K235，诱变所得大肠埃希氏菌K235的保藏号为CCTCC M208088；500L发酵罐中采用补料分批发酵及pH控制策略，30小时内聚唾液酸产量可达5.5g/L)。其中原始菌株也称为出发菌株、起始菌株。总体来说，上述发酵生产聚唾液酸或唾液酸的诱变菌株，其诱变操作多需要涉及离子注入、60Co辐射等，操作要求及成本高，且危险性高；部分菌株需要四种手段进行复合诱变，操作较为繁琐。上述已公开的产聚唾液酸大肠埃希氏菌诱变菌株，在单位时间内聚唾液酸产量也仍然较低。
以上背景技术信息是基于申请人已获知的信息进行地必要简介。公开该部分信息的目的是提高本领域一般技术人员对本发明背景的理解，便于本领域一般技术人员对相关的其他信息进行检索，并便于对本发明的技术方案进行理解和实施，但不必然视为上述信息已成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。由于申请人信息获知渠道的限制，也不必然视为上述信息能够涵盖申请人未能获知的现有技术或能够涵盖所有的现有技术。应当理解的是，在公开该部分信息后，本领域一般技术人员有能力以此为基础检索并获知更多现有技术。
发明内容
针对上述已公开的产聚唾液酸大肠埃希氏菌诱变菌株聚唾液酸产量低，且诱变操作要求高，危险性高等问题。本发明的目的是提供一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株，进而提供该产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株的诱变方法和应用。
为实现本发明的上述目的，采用如下技术方案：
本发明的第一方面，通过对诱变手段及诱变参数的考察，提供了一种通过物理诱变和化学诱变技术相结合获得的产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03。该大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03的保藏编号为：CGMCC NO.25637；保藏日期为2022年09月02日；保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。经鉴定分类属于大肠埃希氏菌Escherichia coli。
与诱变的原始菌株相比，同等条件下该菌株在5L发酵罐中48h内聚唾液酸产量提高约44.19%，适用于大工业生产；与保藏号CCTCC M208088的大肠埃希氏菌K235诱变菌株相比，同等条件下该菌株在5L发酵罐中48h内聚唾液酸产量提高约8.77%。
本发明的第二方面，在诱变手段及诱变参数的考察后，提供了上述产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03的一种诱变制备方法，该方法通过反复进行的紫外诱变-亚硝基胍（N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, NTG）化学诱变得以实现。经考察，紫外诱变-NTG诱变反复进行三轮筛选得到的菌株聚唾液酸产量最高。
具体地，所述诱变制备方法包括如下步骤：
第1紫外诱变：取大肠埃希氏菌K235菌株作为原始菌株进行种子培养，紫外照射10s～20s，进行发酵培养，选取聚唾液酸产量最高的菌株作为第1紫外诱变菌株；
第1化学诱变：取第1诱变菌株进行种子培养，含第1紫外诱变菌株的种子培养基中加入亚硝基胍使亚硝基胍终浓度为0.1mg/ml～0.3mg/ml，亚硝基胍处理10min～50min，反应完后离心，用生理盐水重悬菌体，重复3次，终止反应，进行发酵培养，选取聚唾液酸产量最高的菌株作为第1化学诱变菌株；
第2紫外诱变：取第1化学诱变菌株进行种子培养，紫外照射10s～20s，进行发酵培养，选取聚唾液酸产量最高的菌株作为第2紫外诱变菌株；
第2化学诱变：取第2紫外诱变菌株进行种子培养，含第2紫外诱变菌株的种子培养基中加入亚硝基胍，使亚硝基胍终浓度为0.1mg/ml～0.3mg/ml，亚硝基胍处理10min～50min，反应完后离心，用生理盐水重悬菌体，重复3次，终止反应，进行发酵培养，选取聚唾液酸产量最高的菌株作为第2化学诱变菌株；
第3紫外诱变：取第2化学诱变菌株进行种子培养，紫外照射10s～20s，进行发酵培养，选取聚唾液酸产量最高的菌株作为第3紫外诱变菌株；
第3化学诱变：取第3紫外诱变菌株进行种子培养，含第3紫外诱变菌株的种子培养基中加入亚硝基胍，使亚硝基胍终浓度为0.1mg/ml～0.3mg/ml，亚硝基胍处理10min～50min，反应完后离心，用生理盐水重悬菌体，重复3次，终止反应，进行发酵培养，选取聚唾液酸产量最高的菌株即得。
其中，在一个优选的方案中，上述第1紫外诱变中大肠埃希氏菌K235 菌株的保藏号为ATCC 13027；上述第1紫外诱变、第2紫外诱变、第3紫外诱变中，紫外照射时间为15s～20s，紫外灯功率15W～20W，紫外灯与处理物距离15cm～30cm；上述第1化学诱变、第2化学诱变、第3化学诱变中亚硝基胍终浓度为0.2mg/ml，亚硝基胍处理时间为40min～50min。
在一个进一步优选的方案中，上述原始菌株、第1紫外诱变菌株、第1化学诱变菌株、第2紫外诱变菌株、第2化学诱变菌株、第3紫外诱变菌株在诱变操作前的种子培养阶段，使用LB培养基，培养条件为37℃、200转/min、振荡培养6h～8h；诱变操作前种子液稀释至10-6梯度；诱变操作后发酵培养筛选前涂布平板，37℃避光培养1天；诱变操作后发酵培养筛选时采用摇瓶培养，发酵培养基的碳源选自葡萄糖、甘油、山梨醇、木糖中的至少一种，发酵培养基的氮源选自玉米浆淀粉、酵母提取物、胰蛋白胨、L-脯氨酸、天冬酰胺、氯化铵、硫酸铵中的至少一种。
在一个又进一步优选的方案中，诱变操作后发酵培养筛选时的发酵培养基组成为( g/L )：山梨醇40，氯化铵5，磷酸氢二钾2.5，硫酸镁0.9，蛋白胨1.5，pH7.8。
有益效果：
(1)本发明的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03可提高聚唾液酸或唾液酸的产量，便于大工业生产推广。
(2)本发明的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03的诱变方法操作简单，不需要特殊高能射线辐照设备和离子注入设备，安全性高，成本低，便于大工业生产推广。
附图说明
图1为紫外诱变照射时间与致死率的曲线图；
图2为亚硝基胍处理时间与致死率的曲线图；
图3为不同诱变步骤中诱变菌株的聚唾液酸产量柱状图，其中UN0-00为出发菌株即原始菌株（保藏号ATCC 13027的大肠埃希氏菌K235）、菌株UV-07为原始菌株接受一次紫外诱变后的菌株、UN-02为原始菌株依次接受一次紫外诱变和一次化学诱变后的菌株、UNU-04为原始菌株依次接受紫外诱变-化学诱变-紫外诱变后的菌株、UN2-09为原始菌株依次接受紫外诱变-化学诱变-紫外诱变-化学诱变后的菌株、UN2U-11为原始菌株依次接受紫外诱变-化学诱变-紫外诱变-化学诱变-紫外诱变后的菌株、UN3-01为原始菌株依次接受紫外诱变-化学诱变-紫外诱变-化学诱变-紫外诱变-化学诱变后的菌株（保藏号CGMCC NO.25637的大肠埃希氏菌）。
具体实施方式
以下结合具体实施方式对本发明的技术方案进行更为清楚、完整、详细的说明，以便本领域一般技术人员能够清楚、完整的理解本发明的技术方案，并能够据此实施本发明的技术方案取得相应的技术效果。虽然以下实施例中，采用聚唾液酸产量比较不同菌株的产量优势。但本领域一般技术人员能够清楚得知，聚唾液酸可在酸性条件下进一步水解为唾液酸，从而可使用上述菌株制备唾液酸。
以下实施例中聚唾液酸的产量（g/L，即发酵结束时发酵液中聚唾液酸的浓度）采用间苯二酚法测定。详细方法及操作步骤可参见论文《大肠杆菌离子束诱变结合呼吸商在线实时调控高产聚唾液酸》（吴金勇, 陈祥松, 余超,等. 食品科学. 2019,40(14):54-62.）。以下实施例中菌株致死率的计算公式为：致死率（%）=（1-处理组菌株存活菌数/未处理组菌株存活菌数）x100，存活菌数计数可采用平板菌落计数等现有成熟的方法。
实施例1 产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株的制备
一、诱变菌株的制备
（一）紫外诱变方法：
1.拿菌种甘油管一支（菌株：大肠埃希氏菌K235，保藏号ATCC 13027），接种到种子摇瓶中（种子培养基为LB培养基），37℃、200转/min，振荡培养6h～8h。
2.把培养好的种子液稀释至10-6梯度，吸取9ml到灭过菌的培养皿里，放置在磁力搅拌器上搅拌。
3.将步骤2所得菌株分为5组，1组不接受紫外灯照射，剩余4组用紫外灯分别照射10s、12s、15s、20s，紫外灯功率20W，培养皿距离紫外灯15cm。
4.把未照射的菌液和紫外照射后的菌液，涂布平板，37℃避光培养1d，计算致死率。
5.从致死率为80%～99%的平板上挑选生长良好的单菌落，接种到种子摇瓶中，培养16h（培养基为LB培养基），培养好后一部分做成甘油管，一部分接发酵摇瓶，发酵摇瓶培养48h后，测发酵单位，选1株聚唾液酸产量最高的菌株。发酵培养基组成为( g/L )：山梨醇40，氯化铵5，磷酸氢二钾2.5，硫酸镁0.9，蛋白胨1.5，pH7.8。发酵培养条件为：37℃, 200转/min，振荡培养。
（二）亚硝基胍诱变方法:
1.拿紫外诱变菌种甘油管一支，接种到种子摇瓶中，37℃、200转/min，振荡培养6h～8h。
2.把培养好的种子液稀释至10-6梯度，吸取1ml到灭过菌的1.5ml离心管中。
3.将步骤2所得菌株分为6组，1组不接受亚硝基胍诱变；剩余5组加入0.5ml亚硝基胍溶液，使终浓度为0.2mg/ml，37℃水浴处理。亚硝基胍处理时长分别为10min、20min、30min、40min、50min。反应完后，离心用生理盐水重悬菌体，重复3次，终止反应。
4.把未诱变的菌液和亚硝基胍诱变后的菌液，取0.1ml涂布平板，37℃避光培养1d，计算致死率。
5.从致死率为80%～99%左右的平板上挑选生长良好的单菌落，接种到种子摇瓶中，培养16h（培养基为LB培养基），培养好后一部分做成甘油管，一部分接发酵摇瓶，发酵摇瓶培养48h后，测发酵单位，选1株聚唾液酸产量最高的菌株。发酵培养基组成为( g/L )：山梨醇40，氯化铵5，磷酸氢二钾2.5，硫酸镁0.9，蛋白胨1.5，pH7.8。发酵培养条件为：37℃,200转/min，振荡培养。
（三）复合诱变
按照紫外诱变-亚硝基胍诱变-紫外诱变-亚硝基胍诱变的顺序依此进行诱变，每次诱变筛选出的聚唾液酸产量最高的菌株作为下一次诱变的原始菌株。共进行3次紫外诱变、3次亚硝基胍化学诱变。
将第1紫外诱变、第1化学诱变、第2紫外诱变、第2化学诱变、第3紫外诱变、第3化学诱变筛选得到的聚唾液酸产量最高的菌株分别赋予代码为：UV-07、UN-02、UNU-04、UN2-09、UN2U-11、UN3-01。
二、诱变致死率及诱变菌株的聚唾液酸产量比较
（一）诱变致死率
分别考察了紫外照射(距离紫外灯15cm) 10s、12s、15s、20 s；以及亚硝基胍终浓度为0.2mg/ml，处理10min、20min、30min、40min、50min时大肠埃希氏菌K235的致死率。
紫外照射不同时长，大肠埃希氏菌K235的致死率见表1和图1；亚硝基胍处理不同时长，大肠埃希氏菌K235的致死率见表2和图2。
表1紫外照射不同时长大肠埃希氏菌K235的致死率
Figure 95575DEST_PATH_IMAGE001
表2 亚硝基胍处理不同时长大肠埃希氏菌K235的致死率
Figure 790999DEST_PATH_IMAGE002
由表1、图1及表2和图2可以看出，紫外照射及亚硝基胍诱变，对大肠埃希氏菌K235致死率的影响与处理时间正相关，即随着处理时间延长，大肠埃希氏菌K235致死率升高。
（二）诱变菌株的聚唾液酸产量比较
分别考察了第1紫外诱变、第1化学诱变、第2紫外诱变、第2化学诱变、第3紫外诱变、第3化学诱变所得菌株发酵摇瓶培养48h的聚唾液酸产量。其中UV-07、UN-02、UNU-04、UN2-09、UN2U-11、UN3-01分别为第1紫外诱变、第1化学诱变、第2紫外诱变、第2化学诱变、第3紫外诱变、第3化学诱变所得的聚唾液酸产量最高的菌株代码，UN3-01即保藏号为CGMCCNO.25637的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03。结果如表3和图3所示，
表3 不同诱变菌株的聚唾液酸产量比较
Figure 298204DEST_PATH_IMAGE003
由表3和图3可见，菌株UV-07（第1紫外诱变，即仅进行一次紫外诱变）、菌株UNU-04（第2紫外诱变，即一次进行紫外诱变-化学诱变-紫外诱变）的聚唾液酸产量略高于原始菌株UN0-00（即保藏号ATCC 13027的大肠埃希氏菌K235），其聚唾液酸产量提高百分比低于12%。菌株UN-02（第1化学诱变，即进行一次紫外诱变然后进行一次化学诱变）、菌株UN2-09（第2化学诱变，即依次进行紫外诱变-化学诱变-紫外诱变-化学诱变）、菌株UN2U-11（第3紫外诱变，即依次进行紫外诱变-化学诱变-紫外诱变-化学诱变-紫外诱变）的聚唾液酸产量高于原始菌株UN0-00，其聚唾液酸产量提高百分比为26%～43.9%。
菌株UN3-01（第3化学诱变，即依次进行紫外诱变-化学诱变-紫外诱变-化学诱变-紫外诱变-化学诱变）的聚唾液酸产量高于原始菌株UN0-00，其聚唾液酸产量提高百分比为52.82%。
实施例2 产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03的保藏及鉴定
该菌株保藏编号为：CGMCC NO.25637；保藏日期为2022年09月02日；保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
生理生化特性鉴定：
将菌株在LB培养基平板上划线，37℃培养1d，观察单菌落的形态特征以及在显微镜下进行革兰氏染色观察。得到该菌株的主要形态及生理生化特性如下：
革兰氏阴性菌，染色后镜检为红色、短杆状，无芽孢、单个存在。菌落为圆形，呈乳白色，表面光滑、边缘整齐。
此菌株最适生长温度为37℃，最适生长pH为 6.5～7.5；在摇床转速为180 r/min～200r/min，培养9-10h，菌体细胞量最高。
进一步，将菌株在含有伊红美蓝的平板上划线，37℃培养24h后，菌落呈深紫黑色、表面光滑、湿润、带有金属光泽。
生化实验：
1.糖发酵实验：将上述单菌落挑取若干个，穿刺接种于三糖铁尿素半固体培养基斜面上，37℃培养24h后，初步生化反应为：发酵葡萄糖产酸产气、分解乳糖，尿素酶阴性（-），动力阳性。
2.甲基红实验（MR实验）：将菌株接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养48h后，加甲基红指示剂数滴，呈现红色，为阳性（+）。
3.二乙酰实验（V-P实验）：将菌株接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，37℃培养48h后，再加入40％NaOH溶液10～20滴，并加入约0.5～1mg微量肌酸，振荡试管，以使空气中的氧溶入，置37℃恒温箱中保温15～30min后，培养液不呈红色，为阴性（-）。
4.西蒙氏柠檬酸盐实验：将菌株接种到柠檬酸盐培养基上，37℃培养7d后，培养基不变蓝，为阴性（-）。
5.吲哚实验：将菌株接种到胰蛋白胨水培养基中，37℃培养24-48h后，滴加吲哚试剂数滴，呈现玫瑰红色，为阳性（+）。
6.其他生化实验结果
氧化酶（-）、苯丙氨酸脱羧酶(-)、H2S（-）、D-阿东醇（-）、纤维二糖（-）、赖氨酸脱羧酶（+）。
通过上述鉴定确定该菌株为大肠埃希氏菌（Escherichia coli）。
实施例3 产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株的聚唾液酸产量比较
一、菌株
大肠埃希氏菌K235（保藏号ATCC 13027）-菌株编号UN0-00；
大肠埃希氏菌K235（保藏号CGMCC NO.25637）-菌株编号UN3-01(即大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03)；
大肠埃希氏菌K235（保藏号CCTCC M208088）-菌株编号UXNY-01。
二、培养基、培养条件
（1）取菌株甘油管接种于LB培养基，在37℃， 200转/min，振荡培养8h得种子培养液。
（2）5L发酵罐中加入3L发酵培养基，发酵培养基组成为( g/L )：山梨醇40，氯化铵5，磷酸氢二钾2.5，硫酸镁0.9，蛋白胨1.5，pH7.8。发酵培养条件为：37℃, 200转/min，培养48h。发酵结束测定聚唾液酸产量。
三、聚唾液酸产量比较
本实验条件下，5L发酵罐中不同菌株的聚唾液酸产量见表4。由表4可见，与大肠埃希氏菌K235原始菌株相比（菌株编号UN0-00），两种诱变菌株的聚唾液酸产量均有提高，聚唾液酸产量提高百分比分别为32.56%、44.19%。与保藏号CCTCC M208088的大肠埃希氏菌K235诱变菌株（菌株编号UXNY-01）相比，本实验所得菌株的聚唾液酸产量提高8.77%。
表4 5L发酵罐中不同菌株的聚唾液酸产量比较
Figure 838906DEST_PATH_IMAGE004

Claims (2)

1.一种采用亚硝基胍诱变联合紫外诱变获得的产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03，其特征在于，所述大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03的保藏编号为：CGMCCNO.25637；保藏日期为2022年09月02日；保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；所述大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03的分类学命名为大肠埃希氏菌（Escherichia coli）。
2.权利要求1所述大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ-03在发酵制备聚唾液酸或唾液酸中的应用。
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