CN116586048A - 一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂及其制备方法 - Google Patents
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于改性聚苯乙烯树脂制备技术领域，特别涉及一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂及其制备方法。该方法通过四个步骤对聚苯乙烯树脂进行处理，通过对聚苯乙烯树脂进行预处理、表面活化以及镀膜，增强聚苯乙烯树脂的活性，然后对聚苯乙烯树脂进行表面羧基化、偶联聚半胱氨酸，最后固定PDGFA单抗，得到固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂，此种改性聚苯乙烯吸附树脂能够有效降低血液中的PDGFA含量，而且整个制备方法的步骤中不会引入过多无关的化学试剂，生物相容性好。
Description
技术领域
本发明属于改性聚苯乙烯树脂制备技术领域，特别涉及一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂及其制备方法。
背景技术
血液灌流是将患者的血液引入装有固态吸附剂的灌流器中，通过吸附作用，清除血液中透析不能清除的外源性或内源性毒素、药物或代谢废物的一种血液净化技术。主要用于抢救药物和毒物中毒，也可与血液透析合用以清除慢性肾功能衰竭维持性透析患者体内的大分子毒素。
由于内部填充的固态吸附剂材质均为聚苯乙烯树脂或活性炭，目前大多依赖于供应商的直接供应，使用者的自主研发较少，吸附剂所能吸附的物质类型有限，被吸附的物质分子量不能较为准确的控制，使得血液灌流器大多为非特异性吸附。血液灌流器在临床的使用过程中，经常会发生将某些致病物质有效吸附的同时，把分子量大小近似的其余体液成分也一并吸附的情况。这样会导致人体有益体液成分的丢失，引起一些潜在的健康风险。
目前有部分使用者对固态吸附剂进行了不同程度的修饰和再加工，但吸附树脂还是局限于树脂供应商的本身产品属性，在实际临床应用时难以灵活选择。现有的大多吸附剂供应商所提供的吸附剂吸附树脂基材批次间差异较大，生物相容性不稳定，吸附树脂与血液中有害物质的接触不完全，吸附效率不高。且由于现有的修饰或改性方法对树脂进行化学键的修饰时都会引入多种化学试剂，部分试剂有毒有害或化学性能不稳定，生物相容性的问题没有得到很好的解决。
特发性肺纤维化（IPF）是一种慢性、进行性、纤维化性间质性肺炎，组织学和（或）胸部HRCT表现为普通型间质性肺炎（UIP），病因不清，好发于老年人。IPF诊断后中位生存期为2-3年，大多数病人表现为缓慢逐步可预见的肺功能下降。IPF不能治愈，临床上的治疗目的是延缓疾病进展，改善生活质量，延长生存期。临床治疗主要是抗纤维化治疗、非药物治疗、肺移植。抗纤维化治疗很重要的机制是抑制血小板衍化生长因子受体（PDGFR）、血管内皮生长因子受体（VEGFR）和成纤维细胞生长因子受体（FGFR）。布罗索尤单抗可特异性地结合血液中的FGFR，从而起到抗纤维化治疗，改善疾病进展的作用。然而单抗类药物进入体内的过敏、输注反应、全身性血管炎、自身免疫样综合征等相关副作用难以避免，某些患者由于难以耐受而停药，且非人源性单抗反复多次输注后体内会产生抗体，导致疗效下降。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提出一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂及其制备方法，本发明通过在聚苯乙烯树脂颗粒上固定PDGFA单抗，制备成适用于血液灌流器的吸附树脂，血液中的PDGFA流经以本发明所制备的固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂时，改性聚苯乙烯吸附树脂所固定的PDGFA单抗与PDGFA特异性结合，来降低血液中的PDGFA含量，从而达到治疗相关疾病的作用。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂及其制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化及镀膜
将聚苯乙烯树脂置于二氯甲烷中搅拌浸泡，再用季戊四醇溶液进行洗滤，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比=（3-3.5）:1，蒸馏水洗滤后，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，进行氩气等离子镀膜，镀膜完成后，聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm；
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
向反应瓶中分别加入邻苯二甲酸酐粉末、硝基苯的二氯甲烷溶液，其中二氯甲烷与硝基苯体积比=（7.5-9）:1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=（2.5-3）：1，超声振荡后加入步骤1中得到的镀膜完成后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:（2.5-3.5）:（1-1.5），持续通纯氮后在常压下进行反应，反应完成后，将反应瓶中依次加入10%稀盐酸、蒸馏水、四氢呋喃、甲醇进行洗滤，洗滤后，真空干燥至恒重；
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2中得到的羧基化的聚苯乙烯树脂，使用15mM MES 6.0进行清洗和浸泡，然后分别加入15-25mg/mL的EDC、20-35mg/mL的PEG-聚半胱氨酸-PLA，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应30-45min；
步骤4：固定PDGFA单抗
将步骤3中得到的偶联聚半胱氨酸的聚苯乙烯树脂滤出，使用足量冷的15mM MES6.0溶液进行清洗和浸泡，然后加入2-4.5mg/mL的PDGFA单抗，在25℃混匀条件下，反应12-18小时，反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗，然后用蒸馏水清洗后加入到缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应后，将产物滤出，水洗后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
通过上述技术方案，步骤1中通过使用二氯甲烷对聚苯乙烯树脂进行预处理，从而消除聚苯乙烯树脂表面残留的杂质以及残留的试剂，使得各种化学试剂不会在聚苯乙烯树脂的孔径中残留，方便后续对聚苯乙烯树脂进行活化。季戊四醇溶液能够对聚苯乙烯树脂进行表面活化，因为聚苯乙烯树脂是惰性的，经过活化后聚苯乙烯树脂的表面才能够与其他物质发生反应，等离子镀膜机能够对活化后的聚苯乙烯树脂进行镀膜，调节聚苯乙烯树脂表面的离子膜厚度，使得聚苯乙烯树脂的表面容易发生羧基化反应。
步骤2中，邻苯二甲酸酐在硝基苯作用下生成酰基，从而与聚苯乙烯树脂进行傅氏酰基化，傅氏酰基化的目的是使得聚苯乙烯树脂表面连接上酰基，并在氯化铝催化下发生羧基化。氯化铝作为催化剂，催化镀膜后的聚苯乙烯树脂与邻苯二甲酸酐进行表面羧基化反应。邻苯二甲酸酐与聚苯乙烯树脂发生羧基化反应，反应过程中需要硝基苯来温和氧化，二氯甲烷是作为溶剂存在。
聚苯乙烯树脂表面羧基化后能够通过羧基与PEG-聚半胱氨酸-PLA进行偶联，反应过程中通纯氮的目的是防止发生氧化反应，10%稀盐酸进行洗滤能够有效洗去聚苯乙烯树脂溶液中的有机物残留。
步骤3中，15mM MES 6.0能够调节羧基化的聚苯乙烯树脂的PH值，EDC作为交联剂，能够在羧基化的聚苯乙烯树脂表面交联上PEG-聚半胱氨酸-PLA，EDC提供巯基，使得聚苯乙烯树脂表面的羧基与PEG-聚半胱氨酸-PLA上的PEG反应更加完全。聚半胱氨酸含有巯基，EDC作为交联剂的作用类似于，让PEG-聚半胱氨酸-PLA分子手拉手交联包绕在羧基化聚苯乙烯树脂的表面，使羧基化聚苯乙烯树脂表面的羧基可以更完全更持续地与PEG-聚半胱氨酸-PLA上面的PEG反应。 PEG-聚半胱氨酸-PLA的作用是将聚苯乙烯树脂表面的羧基偶联上聚半胱氨酸。
步骤4中，足量冷的15mM MES 6.0溶液作为缓冲液能够对偶联聚半胱氨酸的聚苯乙烯树脂调节PH，对反应过程中发生的PH变化进行缓冲，因为聚半胱氨酸和PDGFA单抗的活性都会受PH影响，PH波动过大会影响活性，因此需要对反应过程中溶液的PH进行缓冲，确保反应正常进行。聚苯乙烯树脂偶联聚半胱氨酸后，利用聚半胱氨酸上的巯基固定PDGFA单抗，聚半胱氨酸上的巯基与PDGFA单抗上面的氨基发生迈克尔加成反应。从而实现聚苯乙烯树脂上连接PDGFA单抗。缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20能够降低聚苯乙烯树脂溶液的表面张力，降低表面张力使得后续的溶液能够更容易的渗透进入到聚苯乙烯树脂内部的孔径中，还可以清洗掉聚苯乙烯树脂表面发MES残留。蒸馏水能够冲洗掉可能溶解在缓冲液中的PDGFA单抗。0.1%BSA 能够对单抗类蛋白有保护作用，防止反应过程中PDGFA单抗活性下降。0.01%Casein作用是封闭剩余的未连接PDGFA单抗的聚苯乙烯树脂的表面积，防止后面测试步骤的血浆中其它蛋白质在后续步骤中吸附到树脂上。
可选的，步骤1中聚苯乙烯树脂的粒径为0.5-1.2mm，聚苯乙烯树脂置于二氯甲烷中搅拌浸泡的时间为4-6小时，季戊四醇溶液中季戊四醇与蒸馏水体积比=3:1。
通过上述技术方案，聚苯乙烯树脂的粒径能够匹配临床上血液灌流器进行使用。将聚苯乙烯树脂置于二氯甲烷中进行搅拌浸泡，能够充分对聚苯乙烯树脂进行清洁，消除聚苯乙烯树脂表面残留的杂质以及残留的试剂，使得各种化学试剂不会在聚苯乙烯树脂的孔径中残留。季戊四醇溶液的浓度能够对聚苯乙烯树脂进行充分的活化，改变聚苯乙烯树脂的表面的惰性，使得聚苯乙烯树脂的表面能够与其他物质进行反应，季戊四醇溶液对聚苯乙烯树脂进行活化，价格便宜，易于操作，毒性小，易溶于水易洗脱，最主要的是生物相容性好，不易影响后面步骤里含有生物活性的试剂和产物。
可选的，步骤1中等离子镀膜机的条件为：在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，进行氩气等离子镀膜150min。
通过上述技术方案，镀膜条件的设置，能够改变聚苯乙烯树脂表面的离子膜厚度，使得聚苯乙烯树脂的离子膜厚度在20-30nm之间，因为聚苯乙烯树脂的离子膜厚度太薄会使得后面的反应不完全，太厚又会堵住聚苯乙烯树脂表面的微孔，消减了聚苯乙烯树脂的比表面积。
可选的，步骤1中季戊四醇溶液对聚苯乙烯树脂洗滤后，使用常温蒸馏水、100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，再用无水乙醇洗滤2次。
通过上述技术方案，使用常温蒸馏水、100℃蒸馏水、无水乙醇分别进行洗滤的作用是彻底清洗残留，其中，蒸馏水是为了除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，无水乙醇是为了清洗季戊四醇。
可选的，步骤2中二氯甲烷与硝基苯的体积比=7.5:1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=3：1，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:2.5:1.5。
通过上述技术方案，氯化铝和硝基苯作为催化剂，能够催化聚苯乙烯树脂与邻苯二甲酸酐反应，从而在聚苯乙烯树脂的表面羧基化。
可选的，步骤2中超声振荡的时间为10min，两次通纯氮的时间均为5min，持续通纯氮后常压下反应时间为10小时，10%稀盐酸洗滤的时间为30min，10%稀盐酸洗滤后，使用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次。
通过上述技术方案，通纯氮的作用是防止聚苯乙烯树脂在反应过程中发生氧化，10%稀盐酸洗滤、蒸馏水、足量四氢呋喃洗滤，甲醇冲洗的作用是彻底洗去有机物残留和无机物残留，其中，10%稀盐酸用于洗掉氯化铝，蒸馏水用于洗掉10%稀盐酸，四氢呋喃用于洗掉二氯甲烷、硝基苯以及邻苯二甲酸酐，甲醇用于洗掉四氢呋喃，且这些试剂成本低，易于获取，对目标物质溶解度好，低毒，生物相容性好。最后用甲醇是因为可以在真空干燥的步骤中挥发，不需要进一步清洗。
可选的，步骤3中EDC的浓度为20mg/mL ，PEG-聚半胱氨酸-PLA的浓度为24mg/mL，立即混匀后，在25℃搅拌状态下反应30min。
通过上述技术方案，EDC作为交联剂能够将PEG-聚半胱氨酸-PLA交联固定在聚苯乙烯树脂的表面，25℃搅拌状态下的反应有利于EDC充分发挥交联剂的作用，既能够保证交联效果，又不会出现过度交联的问题。
可选的，步骤4中PDGFA单抗的浓度为2mg/mL。
通过上述技术方案，PDGFA单抗的浓度能够保证与聚苯乙烯树脂进行充分结合的效率，避免出现偶联基团过量浪费的情形。
可选的，步骤4中室温条件下混匀反应的时间为30min。
通过上述技术方案，室温反应的时间确保10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein与聚苯乙烯树脂进行充分的反应，从而封闭聚苯乙烯树脂表面未与PDGFA单抗结合的表面积，防止后面测试步骤的血浆中其它蛋白质在后续步骤中吸附到树脂上，但是这个时间不能过长，否则会影响PDGFA单抗的活性。
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂，通过对聚苯乙烯树脂进行预处理、表面活化及镀膜、表面羧基化、羧基偶联聚半胱氨酸、固定PDGFA单抗，最终得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
通过上述技术方案，改性聚苯乙烯吸附树脂应用到血液灌流器中后，能够有效降低血液中的PDGFA含量。
采用了上述技术方案后，本发明的有益效果是：1、本发明所制得的表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂可特异性结合血液中的PDGF，扩大了以往血液灌流器的适应症范围，可对PDGF所诱导的特发性肺纤维化及相关疾病起到治疗作用。
2、与传统一次性使用血液灌流器的树脂相比，本发明中的改性聚苯乙烯吸附树脂运用邻苯二甲酸酐进行改性，并在改性后的聚苯乙烯树脂的表面连接了PDGFA单抗，可有效清除血液中的PDGFA，对血液中的其他物质成分没有影响，特异性更强。聚苯乙烯树脂通过与邻苯二甲酸酐进行傅氏酰基化反应，能够对聚苯乙烯树脂的表面进行羧基化，为后续固定PDGFA单抗做准备。
3、本发明中对聚苯乙烯树脂的表面进行羧基化，将PDGFA单抗通过共价键牢固的固定在聚苯乙烯树脂的表面，避免脱落。聚苯乙烯树脂羧基化，羧基偶联PEG-聚半胱氨酸-PLA，半胱氨酸再偶联PDGFA单抗。反应条件温和，使PDGFA单抗得以保留最大的酶活性。10mMPBS7.4+0.1%Tween20确保反应过程的条件温和，温度和PH波动均不剧烈。
4、本发明中的改性聚苯乙烯树脂的制备过程灵活可控，批次间差异小，得到的改性聚苯乙烯吸附树脂对血液中有害物质的清除性能更加稳定。PEG-聚半胱氨酸-PLA在聚苯乙烯树脂表面进行交联的程度，可以通过EDC和PH来控制，半胱氨酸的巯基数量也可以控制。固定化的PDGFA单抗可以标准量化，清除率更稳定可控。
5、改性聚苯乙烯吸附树脂与血液中单一物质的反应更为高效，缩短整体血液灌流的治疗时间，减少治疗风险发生的可能性，提高医疗资源利用率，创造更大的经济效益和社会效益。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化和表面镀膜
取粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂15g，置于二氯甲烷（DCM）中搅拌浸泡4-6小时，使用季戊四醇溶液洗滤2次，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比为3：1，然后用常温蒸馏水和100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，以除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，用无水乙醇洗滤2次，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，氩气（Ar）等离子镀膜150min，镀膜完成后取出备用，镀膜后的聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm。
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯的溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为7.5：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=3：1，超声振荡l0min，然后加入步骤1所得到的处理后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮5min后，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:2.5: 1.5，再通纯氮5min后常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL 10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2所得产物用15mM MES 6.0清洗3次，并浸泡于150mL 15mM MES 6.0溶液中。取75mL20mg/mL 的EDC，75mL 24mg/mL 的PEG-聚半胱氨酸-PLA，加入MES中，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应30min。
步骤4：固定PDGFA单抗
活化完成后将产物滤出，用足量冷的15mM MES 6.0溶液清洗3次，并浸泡于100mL15mM MES 6.0溶液中，加入2mg/mL的PDGFA单抗450μL，在25℃混匀条件下，反应12-18小时。反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗2次，然后用蒸馏水清洗后加入1.5L缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应30min。反应完成后将产物滤出，水洗3次后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
实施例2：一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化和表面镀膜
取粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂15g，置于二氯甲烷（DCM）中搅拌浸泡4-6小时，使用季戊四醇溶液洗滤2次，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比=3.2：1，然后用常温蒸馏水和100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，以除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，用无水乙醇洗滤2次，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，氩气（Ar）等离子镀膜150min，镀膜完成后取出备用，镀膜后的聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm。
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为8：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=2.75：1，超声振荡l0min，然后加入步骤1所得到的处理后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮5min后，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:3:1.25，再通纯氮5min后常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL 10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2所得产物用15mM MES 6.0清洗3次，并浸泡于150mL 15mM MES 6.0溶液中。取75mL15mg/mL的EDC，75mL20mg/mL的PEG-聚半胱氨酸-PLA，加入MES中，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应35min。
步骤4：固定PDGFA单抗
活化完成后将产物滤出，用足量冷的15mM MES 6.0溶液清洗3次，并浸泡于100mL15mM MES 6.0溶液中，加入3mg/mL的PDGFA单抗450μL，在25℃混匀条件下，反应12-18小时。反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗2次，然后用蒸馏水清洗后加入1.5L缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应30min。反应完成后将产物滤出，水洗3次后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
实施例3：一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化和表面镀膜
取粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂15g，置于二氯甲烷（DCM）中搅拌浸泡4-6小时，使用季戊四醇溶液洗滤2次，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比为3.5：1，然后用常温蒸馏水和100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，以除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，用无水乙醇洗滤2次，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，氩气（Ar）等离子镀膜150min，镀膜完成后取出备用，镀膜后的聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm。
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为9：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=2.5：1，超声振荡l0min，然后加入步骤1所得到的处理后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮5min后，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:3.5:1，再通纯氮5min后常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL 10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2所得产物用15mM MES 6.0清洗3次，并浸泡于150mL 15mM MES 6.0溶液中。取75mL25mg/mL的EDC，75mL35mg/mL的PEG-聚半胱氨酸-PLA，加入MES中，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应40min。
步骤4：固定PDGFA单抗
活化完成后将产物滤出，用足量冷的15mM MES 6.0溶液清洗3次，并浸泡于100mL15mM MES 6.0溶液中，加入4.5mg/mL的PDGFA单抗450μL，在25℃混匀条件下，反应12-18小时。反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗2次，然后用蒸馏水清洗后加入1.5L缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应30min。反应完成后将产物滤出，水洗3次后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
对比例1
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯的溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为7.5：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=3：1，超声振荡l0min，然后加入粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮5min后，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:2.5: 1.5，再通纯氮5min后常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL 10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤2：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤1所得产物用15mM MES 6.0清洗3次，并浸泡于150mL 15mM MES 6.0溶液中。取75mL20mg/mL 的EDC，75mL 24mg/mL 的PEG-聚半胱氨酸-PLA，加入MES中，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应30min。
步骤3：固定PDGFA单抗
活化完成后将产物滤出，用足量冷的15mM MES 6.0溶液清洗3次，并浸泡于100mL15mM MES 6.0溶液中，加入2mg/mL的PDGFA单抗450μL，在25℃混匀条件下，反应12-18小时。反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗2次，然后用蒸馏水清洗后加入1.5L缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应30min。反应完成后将产物滤出，水洗3次后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
对比例2
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化和表面镀膜
取粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂15g，置于二氯甲烷（DCM）中搅拌浸泡4-6小时，使用季戊四醇溶液洗滤2次，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比为3：1，然后用常温蒸馏水和100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，以除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，用无水乙醇洗滤2次，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，氩气（Ar）等离子镀膜150min，镀膜完成后取出备用，镀膜后的聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm。
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯的溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为7.5：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=3：1，超声振荡l0min，然后加入步骤1所得到的处理后的聚苯乙烯树脂，其中，聚苯乙烯树脂与硝基苯的摩尔比=1:1.5，向反应瓶中通纯氮5min后，常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL 10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2所得产物用15mM MES 6.0清洗3次，并浸泡于150mL 15mM MES 6.0溶液中。取75mL20mg/mL 的EDC，75mL 24mg/mL 的PEG-聚半胱氨酸-PLA，加入MES中，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应30min。
步骤4：固定PDGFA单抗
活化完成后将产物滤出，用足量冷的15mM MES 6.0溶液清洗3次，并浸泡于100mL15mM MES 6.0溶液中，加入2mg/mL的PDGFA单抗450μL，在25℃混匀条件下，反应12-18小时。反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗2次，然后用蒸馏水清洗后加入1.5L缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应30min。反应完成后将产物滤出，水洗3次后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
对比例3
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
对比例3与实施例1的区别在于：对比例3中的步骤3不加入EDC、不加入PEG-聚半胱氨酸-PLA，也不在25℃搅拌状态下反应30min。
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化和表面镀膜
取粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂15g，置于二氯甲烷（DCM）中搅拌浸泡4-6小时，使用季戊四醇溶液洗滤2次，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比为3：1，然后用常温蒸馏水和100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，以除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，用无水乙醇洗滤2次，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，氩气（Ar）等离子镀膜150min，镀膜完成后取出备用，镀膜后的聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm。
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯的溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为7.5：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=3：1，超声振荡l0min，然后加入步骤1所得到的处理后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮5min后，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:2.5: 1.5，再通纯氮5min后常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL 10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤3：固定PDGFA单抗
将步骤2中的产物用足量冷的15mM MES 6.0溶液清洗3次，并浸泡于100mL 15mMMES 6.0溶液中，加入2mg/mL的PDGFA单抗450μL，在25℃混匀条件下，反应12-18小时。反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗2次，然后用蒸馏水清洗后加入1.5L缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应30min。反应完成后将产物滤出，水洗3次后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
对比例4
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化和表面镀膜
取粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂15g，置于二氯甲烷（DCM）中搅拌浸泡4-6小时，使用季戊四醇溶液洗滤2次，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比为3：1，然后用常温蒸馏水和100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，以除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，用无水乙醇洗滤2次，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，氩气（Ar）等离子镀膜150min，镀膜完成后取出备用，镀膜后的聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm。
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯的溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为7.5：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=3：1，超声振荡l0min，然后加入步骤1所得到的处理后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮5min后，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:2.5: 1.5，再通纯氮5min后常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL 10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2所得产物用15mM MES 6.0清洗3次，并浸泡于150mL 15mM MES 6.0溶液中。取75mL20mg/mL 的EDC，75mL 24mg/mL 的PEG-聚半胱氨酸-PLA，加入MES中，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应30min。
对比例5
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化和表面镀膜
取粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂15g，置于二氯甲烷（DCM）中搅拌浸泡8小时，使用季戊四醇溶液洗滤2次，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比为4：1，然后用常温蒸馏水和100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，以除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，用无水乙醇洗滤2次，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，氩气（Ar）等离子镀膜150min，镀膜完成后取出备用，镀膜后的聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm。
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯的溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为7.5：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=3：1，超声振荡l0min，然后加入步骤1所得到的处理后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮5min后，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:2.5: 1.5，再通纯氮5min后常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL 10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2所得产物用15mM MES 6.0清洗3次，并浸泡于150mL 15mM MES 6.0溶液中。取75mL20mg/mL 的EDC，75mL 24mg/mL 的PEG-聚半胱氨酸-PLA，加入MES中，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应30min。
步骤4：固定PDGFA单抗
活化完成后将产物滤出，用足量冷的15mM MES 6.0溶液清洗3次，并浸泡于100mL15mM MES 6.0溶液中，加入2mg/mL的PDGFA单抗450μL，在25℃混匀条件下，反应12-18小时。反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗2次，然后用蒸馏水清洗后加入1.5L缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应30min。反应完成后将产物滤出，水洗3次后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
对比例6
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化和表面镀膜
取粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂15g，置于二氯甲烷（DCM）中搅拌浸泡4-6小时，使用季戊四醇溶液洗滤2次，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比为3：1，然后用常温蒸馏水和100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，以除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，用无水乙醇洗滤2次，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，氩气（Ar）等离子镀膜150min，镀膜完成后取出备用，镀膜后的聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm。
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯的溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为10：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=6：1，超声振荡l0min，然后加入步骤1所得到的处理后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮5min后，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:5: 3，再通纯氮5min后常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2所得产物用15mM MES 6.0清洗3次，并浸泡于150mL 15mM MES 6.0溶液中。取75mL20mg/mL 的EDC，75mL 24mg/mL 的PEG-聚半胱氨酸-PLA，加入MES中，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应30min。
步骤4：固定PDGFA单抗
活化完成后将产物滤出，用足量冷的15mM MES 6.0溶液清洗3次，并浸泡于100mL15mM MES 6.0溶液中，加入2mg/mL的PDGFA单抗450μL，在25℃混匀条件下，反应12-18小时。反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗2次，然后用蒸馏水清洗后加入1.5L缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应30min。反应完成后将产物滤出，水洗3次后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
对比例7
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化和表面镀膜
取粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂15g，置于二氯甲烷（DCM）中搅拌浸泡4-6小时，使用季戊四醇溶液洗滤2次，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比为3：1，然后用常温蒸馏水和100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，以除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，用无水乙醇洗滤2次，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，氩气（Ar）等离子镀膜150min，镀膜完成后取出备用，镀膜后的聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm。
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯的溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为7.5：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=3：1，超声振荡l0min，然后加入步骤1所得到的处理后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮5min后，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:2.5: 1.5，再通纯氮5min后常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL 10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2所得产物用15mM MES 6.0清洗3次，并浸泡于150mL 15mM MES 6.0溶液中。取75mL30mg/mL 的EDC，75mL40mg/mL 的PEG-聚半胱氨酸-PLA，加入MES中，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应30min。
步骤4：固定PDGFA单抗
活化完成后将产物滤出，用足量冷的15mM MES 6.0溶液清洗3次，并浸泡于100mL15mM MES 6.0溶液中，加入2mg/mL的PDGFA单抗450μL，在25℃混匀条件下，反应12-18小时。反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗2次，然后用蒸馏水清洗后加入1.5L缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应30min。反应完成后将产物滤出，水洗3次后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
对比例8
一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化和表面镀膜
取粒径0.5-1.2mm的聚苯乙烯树脂15g，置于二氯甲烷（DCM）中搅拌浸泡4-6小时，使用季戊四醇溶液洗滤2次，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比为3：1，然后用常温蒸馏水和100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，以除去聚苯乙烯树脂中的单体、残留低分子物和分散剂，用无水乙醇洗滤2次，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，氩气（Ar）等离子镀膜150min，镀膜完成后取出备用，镀膜后的聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm。
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
在反应瓶中加入49.6mg邻苯二甲酸酐(PA)粉末、170mL二氯甲烷与硝基苯的溶液，其中二氯甲烷与硝基苯的体积比为7.5：1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=3：1，超声振荡l0min，然后加入步骤1所得到的处理后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮5min后，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:2.5: 1.5，再通纯氮5min后常压下反应10小时，反应完成后，将反应瓶中的反应物全部移至砂芯漏斗中，用1000mL 10%稀盐酸洗滤30min，然后用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次，真空干燥至恒重。
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2所得产物用15mM MES 6.0清洗3次，并浸泡于150mL 15mM MES 6.0溶液中。取75mL20mg/mL 的EDC，75mL 24mg/mL 的PEG-聚半胱氨酸-PLA，加入MES中，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应30min。
步骤4：固定PDGFA单抗
活化完成后将产物滤出，用足量冷的15mM MES 6.0溶液清洗3次，并浸泡于100mL15mM MES 6.0溶液中，加入6mg/mL的PDGFA单抗450μL，在25℃混匀条件下，反应12-18小时。反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗2次，然后用蒸馏水清洗后加入1.5L缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应30min。反应完成后将产物滤出，水洗3次后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
MES：2-(N-吗啉)乙磺酸；EDC：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐；PEG-聚半胱氨酸-PLA：三种物质的多聚体，PEG：聚乙二醇，PLA：聚乳酸；PBS：磷酸盐缓冲液；Tween20：吐温20；BSA：牛血清白蛋白；Casein：酪蛋白。
聚苯乙烯树脂是市售产品，购买自西安蓝晓科技新材料股份有限公司的1000H聚苯乙烯树脂颗粒。PEG-聚半胱氨酸-PLA是市售产品，购买自西安齐岳生物科技有限公司，PEG-聚半胱氨酸-PLA包括2分子PEG，6分子聚半胱氨酸和1分子PLA，其中，PLA的分子量为25000。
本发明中涉及到的化学反应式及反应原理是现有技术，此处不进行赘述。
将实施例1-3和对比例1-8所得产物分别应用到11个血液灌流器中。将每个血液灌流器的上下两端分别通过管道连接两个容器，位于上端的容器中盛放未处理的血浆，位于下端的容器用于接收经过血液灌流器处理后的血浆，位于上端的容器与血液灌流器之间的管道安装有蠕动泵，提供动力，使得血浆能够流入血液灌流器中。然后进行PDGFA灌流效果测试，测试结果如表1所示。利用市售的血小板衍生生长因子Abcam 人PDGFA ELISA试剂盒(ab100622)进行检测，检测经过11个血液灌流器处理前后的两个容器血浆中的PDGFA含量。
表1血浆中灌流前后的PDGFA含量
| 序号 | 灌流前PDGFA | 灌流后PDGFA |
| 实施例1 | 1937.00 pg/ml | 952.31 pg/ml |
| 实施例2 | 3323.45 pg/ml | 2444.58 pg/ml |
| 实施例3 | 2080.22 pg/ml | 1381.69 pg/ml |
| 对比例1 | 3188.68 pg/ml | 3035.09 pg/ml |
| 对比例2 | 1630.30 pg/ml | 1630.11 pg/ml |
| 对比例3 | 1877.05 pg/ml | 1853.40 pg/ml |
| 对比例4 | 2535.66 pg/ml | 2547.83 pg/ml |
| 对比例5 | 3056.22 pg/ml | 2937.54 pg/ml |
| 对比例6 | 2243.12 pg/ml | 2196.35 pg/ml |
| 对比例7 | 1935.36 pg/ml | 1948.00 pg/ml |
| 对比例8 | 3877.76 pg/ml | 3635.92 pg/ml |
表1中实施例1灌流前后的清除率约为50.84%，实施例2灌流前后的清除率约为26.44%，实施例3灌流前后的清除率约为33.58%，对比例1灌流前后的清除率约为4.8%，对比例2-4没有对血液中的PDGFA进行清除，对比例5灌流前后的清除率约为3.88%，对比例6灌流前后的清除率约为2.09%，对比例7没有对血液中的PDGFA进行清除，对比例8灌流前后的清除率约为6.24%。
表1中的数据说明，实施例1-3中根据本发明中的制备方法和条件制备出的表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂，对血液中的PDGFA的清除率分别为50.84%、26.44%、33.58%，通过清除率可以判断出，本发明中制备出的表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂能够有效降低血液中的PDGFA。
而对比例2-4、对比例7均没有对血液中的PDGFA进行清除，对比例1、对比例5、对比例6以及对比例8对血液中的PDGFA的清除率分别为4.8%、3.88%、2.09%、6.24%，均小于实施例1-3中的清除率，因此可以得出，不采用本发明中的方法制备出的聚苯乙烯吸附树脂，或者是超过本发明中的实验条件的聚苯乙烯吸附树脂，都不能有效降低血液中的PDGFA含量。
以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：聚苯乙烯树脂预处理、表面活化及镀膜
将聚苯乙烯树脂置于二氯甲烷中搅拌浸泡，再用季戊四醇溶液进行洗滤，其中季戊四醇与蒸馏水的体积比=（3-3.5）:1，蒸馏水洗滤后，真空干燥至恒重，将上述产物置于等离子镀膜机中，进行氩气等离子镀膜，镀膜完成后，聚苯乙烯树脂的离子膜厚度为20-30nm；
步骤2：聚苯乙烯树脂表面羧基化
向反应瓶中分别加入邻苯二甲酸酐粉末、硝基苯的二氯甲烷溶液，其中二氯甲烷与硝基苯体积比=（7.5-9）:1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=（2.5-3）：1，超声振荡后加入步骤1中得到的镀膜完成后的聚苯乙烯树脂，向反应瓶中通纯氮，在搅拌状态下加入氯化铝，其中，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:（2.5-3.5）:（1-1.5），持续通纯氮后在常压下进行反应，反应完成后，将反应瓶中依次加入10%稀盐酸、蒸馏水、四氢呋喃、甲醇进行洗滤，洗滤后，真空干燥至恒重；
步骤3：羧基偶联聚半胱氨酸
将步骤2中得到的羧基化的聚苯乙烯树脂，使用15mM MES 6.0进行清洗和浸泡，然后分别加入15-25mg/mL的EDC、20-35mg/mL的PEG-聚半胱氨酸-PLA，立即混匀，在25℃搅拌状态下反应30-45min；
步骤4：固定PDGFA单抗
将步骤3中得到的偶联聚半胱氨酸的聚苯乙烯树脂滤出，使用足量冷的15mM MES 6.0溶液进行清洗和浸泡，然后加入2-4.5mg/mL的PDGFA单抗，在25℃混匀条件下，反应12-18小时，反应完成后将产物滤出，用缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20重复清洗，然后用蒸馏水清洗后加入到缓冲液10mMPBS7.4+0.1%Tween20+0.1%BSA+0.01%Casein中，室温条件下混匀反应后，将产物滤出，水洗后真空干燥，得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
2.根据权利要求1所述的一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，其特征在于，步骤1中聚苯乙烯树脂的粒径为0.5-1.2mm，聚苯乙烯树脂置于二氯甲烷中搅拌浸泡的时间为4-6小时，季戊四醇溶液中季戊四醇与蒸馏水体积比=3:1。
3.根据权利要求1所述的一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，其特征在于，步骤1中等离子镀膜机的条件为：在射频13.56MHz，功率700-800W，流量350-400SCCM，进行氩气等离子镀膜150min。
4.根据权利要求1所述的一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，其特征在于，步骤1中季戊四醇溶液对聚苯乙烯树脂洗滤后，使用常温蒸馏水、100℃蒸馏水分别洗滤5-10次，再用无水乙醇洗滤2次。
5.根据权利要求1所述的一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，其特征在于，步骤2中二氯甲烷与硝基苯的体积比=7.5:1，邻苯二甲酸酐与硝基苯的摩尔比=3：1，聚苯乙烯树脂、氯化铝和硝基苯的摩尔比=1:2.5:1.5。
6.根据权利要求1所述的一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，其特征在于，步骤2中超声振荡的时间为10min，两次通纯氮的时间均为5min，持续通纯氮后常压下反应时间为10小时，10%稀盐酸洗滤的时间为30min，10%稀盐酸洗滤后，使用蒸馏水洗至中性，再用足量四氢呋喃洗滤，最后用甲醇冲洗3次。
7.根据权利要求1所述的一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，其特征在于，步骤3中EDC的浓度为20mg/mL ，PEG-聚半胱氨酸-PLA的浓度为24mg/mL，立即混匀后，在25℃搅拌状态下反应30min。
8.根据权利要求1所述的一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，其特征在于，步骤4中PDGFA单抗的浓度为2mg/mL。
9.根据权利要求1所述的一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂的制备方法，其特征在于，步骤4中室温条件下混匀反应的时间为30min。
10.一种血液灌流器用改性聚苯乙烯吸附树脂，其特征在于，采用权利要求1中的方法对聚苯乙烯树脂进行预处理、表面活化及镀膜、表面羧基化、羧基偶联聚半胱氨酸、固定PDGFA单抗，最终得到表面固定有PDGFA单抗的改性聚苯乙烯吸附树脂。
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