CN116550312A - 一种阳离子层析介质及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种阳离子层析介质及其制备方法与应用。所述阳离子层析介质，包含基质和配基，所述配基接枝在基质上，其特征在于：所述配基结构式为：其中，R1、R2分别独立为氢或烷基，X为氢、钠或钾，m＝1‑3。本发明提供的阳离子层析介质分辨率高，动态结合载量高，回收率高。本发明采用的阳离子层析介质制备方法，制备过程简便，节约成本。本发明提供的阳离子层析介质能有效分离纯化蛋白质、疫苗、抗体等各类生物大分子，为生物医学研究等方面的应用奠定了坚实的基础。
Description
技术领域
本发明属于色谱层析领域，具体涉及一种阳离子层析介质及其制备方法与应用。
背景技术
离子层析介质可以广泛应用在大规模分离纯化蛋白质、疫苗、抗体等各类生物大分子，是根据不同生物分子所带电荷性质和数量的差异来分离的一种层析技术。离子层析介质主要分为阴离子层析介质和阳离子层析介质两类。在阴离子层析色谱法中，免疫球蛋白的负电荷氨基酸端链将与层析介质的正电荷配体相互作用。相反，阳离子层析色谱即免疫球蛋白的正电荷氨基酸端链将与层析介质的负电荷配体相互作用。
离子层析介质的原理是由于生物分子大都带有酸性基团或碱性基团，并且可以通过调节缓冲液的pH改变其带电性质和数量，生物分子与带相反电荷的阴离子层析介质或者阳离子介质相结合后，采用改变流动相中的离子强度或者pH，让结合弱的先洗脱下来，结合强的后洗脱下来，从而达到分离纯化的目的。
目前已有的阳离子层析介质多为表面修饰的聚苯乙烯类微球或多糖类材料。众所周知，虽然聚苯乙烯微球层析介质机械强度高，耐压高，化学稳定性好，但是聚苯乙烯共聚物表面没有可以与配基发生反应的功能基团，另外，其疏水性强，会和生物大分子发生非特异性相互作用，导致分离纯化的目标物失活。针对聚苯乙烯微球疏水性强的缺陷，已有对其进行表面修饰的研究，例如专利CN103709274A中报道在聚苯乙烯类材料表面进行亲水改性的方法：该种方法需要先合成聚合物微球，在其表面进行亲水改性，再通过接枝聚合等方式引入阴离子功能基团制备得到阳离子层析介质；又如专利CN108276526B报道了一种聚合物阳离子层析层析介质，首先对聚丙烯酸酯类或聚苯乙烯类微球进行溶胀处理，随后通过自由基转移方式进行接枝聚合反应得到阳离子层析介质。上述方法过程复杂，同时会使用到表面活性剂和催化剂等对人体和环境有害的化学试剂，成本较高。
多糖作为一种亲水性强的材料，不会和生物大分子产生非特异性相互作用。而且多糖表面的羟基能够与各类阴离子基团发生接枝聚合反应，制备多种阳离子层析介质。但是，多糖类基质的孔径一般在几十纳米，对于生物大分子的传质阻力较大，在较高流速下，可能发生生物大分子扩散慢，结合载量低、分辨率低等问题。因此，开发一种新型多糖类阳离子层析介质，保证介质可在高流速条件下使用，具有高结合载量、高分辨率，对生物大分子的高效分离纯化具有重要意义。
发明内容
本发明的目的，一是提供一种高分辨率和高结合载量的阳离子层析介质；二是提供一种阳离子层析介质的应用，该层析介质能有效分离纯化蛋白质、疫苗、抗体等各类生物大分子。
本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案如下：
本发明提供一种阳离子层析介质，包含基质和配基，所述配基接枝在基质上，所述配基的结构式为：
其中，R1、R2分别独立为氢或烷基，X为氢、钠或钾，m＝1-3。
作为优选实施方式，所述R1、R2为氢或甲基，X为氢，m＝1-2。
作为优选实施方式，所述基质为多糖类微球。
作为优选实施方式，所述基质为琼脂糖、葡聚糖或含有葡聚糖长链的琼脂糖微球。
作为优选实施方式，所述基质的粒径分布为20-300μm，其对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.36-0.85；进一步优选地，所述基质的粒径分布为30-80μm。
作为优选实施方式，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.36-0.85；进一优选地，其凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75。
作为优选实施方式，所述基质与配基的质量比为5:1～20:1。
作为优选实施方式，所述基质与配基的质量比为6:1～10:1
本发明还提供一种阳离子层析介质的制备方法，包括如下步骤：
步骤1，将基质加水混合，充分搅拌使其溶胀，将体系升温至20-80℃；
步骤2，加入配基和引发剂，进行接枝反应；
步骤3，将反应物抽滤、清洗后，得到所述阳离子层析介质。
作为优选实施方式，所述接枝反应的温度为20-80℃，反应时间为1-20h，基质与配基的质量比为5:1～20:1，引发剂浓度为1-10mmol/L。
作为优选实施方式，所述接枝反应的温度为20-80℃，反应时间为1-20h，基质与配基的质量比为5:1～20:1，引发剂浓度为3.5-6.5mmol/L。
作为优选实施方式，所述接枝反应的温度为30-55℃，所述基质与配基的质量比为6:1～10:1。进一步优选地，所述接枝反应的温度40-45℃。
作为优选实施方式，所述引发剂为水溶性引发剂，选自硫酸铈、硝酸铈铵、过硫酸铵或过硫酸钾。
本发明还提供一种色谱柱，所述色谱柱的填充介质为上述的阳离子层析介质。
本发明还提供上述色谱柱在生物大分子纯化中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
1，本发明提供了一种阳离子层析介质，分辨率高，动态结合载量高，回收率高。
2，本发明采用的阳离子层析介质制备方法，制备过程简便，节约成本。
3，本发明提供的阳离子层析介质能有效分离纯化蛋白质、疫苗、抗体等各类生物大分子，为生物医学研究等方面的应用奠定了坚实的基础。
附图说明
图1是本发明的实施例2所得的阳离子层析介质显微镜镜检图。
图2是本发明的实施例6所得的阳离子层析介质显微镜镜检图。
图3是本发明的实施例2所得的阳离子层析介质功能图谱结果图。
图4是本发明的实施例4所得的阳离子层析介质功能图谱结果图。
图5是本发明的实施例5所得的阳离子层析介质功能图谱结果图。
图6是本发明的实施例6所得的阳离子层析介质功能图谱结果图。
图7是本发明的实施例10所得的阳离子层析介质在不同电导下的10％动态载量结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进行详细说明。以下采用的试剂和生物材料如未特别说明，均为商业化产品。
一、阳离子层析介质的制备
实施例1：
取100g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为Kav 0.4-0.75的高刚性琼脂糖基质加入到三口烧瓶中，加入250g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至35℃，并保持恒温不变。随后将18.6g配基单体2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸加入三口烧瓶，搅拌10分钟后，缓慢向混合体系中滴加1.5g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为10.5mmol/L。待滴加结束后，继续保持35℃恒温反应20小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
实施例2：
取100g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75的高刚性琼脂糖基质加入到三口烧瓶中，加入250g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至45℃，并保持恒温不变。随后将12.4g配基单体2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸加入三口烧瓶，搅拌10分钟后，缓慢向混合体系中滴加0.9g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为6.3mmol/L。待滴加结束后，继续保持45℃恒温反应14小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
实施例3：
取100g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75的高刚性琼脂糖基质加入到三口烧瓶中，加入250g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至55℃，并保持恒温不变。随后将6.2g配基单体2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸加入三口烧瓶，搅拌10分钟后，缓慢向混合体系中滴加0.3g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为2.1mmol/L。待滴加结束后，继续保持55℃恒温反应8小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
实施例4：
取100g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75的高刚性琼脂糖基质加入到三口烧瓶中，加入250g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至45℃，并保持恒温不变。随后将15.5g配基单体2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸加入三口烧瓶，搅拌10分钟后，缓慢向混合体系中滴加0.9g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为6.3mmol/L。待滴加结束后，继续保持45℃恒温反应14小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
实施例5：
取100g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75的高刚性葡聚糖基质加入到三口烧瓶中，加入250g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至45℃，并保持恒温不变。随后将12.4g配基单体2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸加入三口烧瓶，搅拌10分钟后，缓慢向混合体系中滴加0.9g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为6.3mmol/L。待滴加结束后，继续保持45℃恒温反应14小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
实施例6：
取100g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75的含有葡聚糖长链的高刚性琼脂糖基质加入到三口烧瓶中，加入250g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至45℃，并保持恒温不变。随后将12.4g配基单体2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸加入三口烧瓶，搅拌10分钟后，缓慢向混合体系中滴加0.9g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为6.3mmol/L。待滴加结束后，继续保持45℃恒温反应14小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
实施例7：
取100g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75的含有葡聚糖长链的高刚性琼脂糖基质加入到三口烧瓶中，加入250g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至45℃，并保持恒温不变。随后将11.6g配基单体2-丙烯酰胺丙磺酸加入三口烧瓶，搅拌10分钟后，缓慢向混合体系中滴加0.9g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为6.3mmol/L。待滴加结束后，继续保持45℃恒温反应14小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
实施例8：
取100g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75的含有葡聚糖长链的高刚性琼脂糖基质加入到三口烧瓶中，加入250g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至45℃，并保持恒温不变。随后将10.7g配基单体丙烯酰胺乙磺酸加入三口烧瓶，搅拌10分钟后，缓慢向混合体系中滴加0.9g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为6.3mmol/L。待滴加结束后，继续保持45℃恒温反应14小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
实施例9：
取100g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75的含有葡聚糖长链的高刚性琼脂糖基质加入到三口烧瓶中，加入250g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至45℃，并保持恒温不变。随后将13.3g配基单体2-丙烯酰胺-3-甲基丁磺酸加入三口烧瓶，搅拌10分钟后，缓慢向混合体系中滴加0.9g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为6.3mmol/L。待滴加结束后，继续保持45℃恒温反应14小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
实施例10：
将80g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75的琼脂糖基质加入到三口烧瓶中，加入200g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至40℃，并保持恒温不变。随后将12.4g 2-丙烯酰胺基-2-甲基丙磺酸加入到烧瓶中搅拌10分钟，缓慢向混合体系中滴加0.5g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为3.5mmol/L。待滴加结束后，继续保持40℃恒温反应6小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
对比例1：
将80g基质粒径为30-80μm，对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75的琼脂糖基质加入到三口烧瓶中，加入200g纯化水，充分搅拌使其溶胀，然后将体系温度升高至40℃，并保持恒温不变。随后将7.7g 4-丙烯酰吗啉和4.1g 2-丙烯酰胺基-2-甲基-N-丙磺酸加入到烧瓶中搅拌10分钟，缓慢向混合体系中滴加0.5g硫酸铈，硫酸铈在体系中浓度为3.5mmol/L。待滴加结束后，继续保持40℃恒温反应6小时。反应结束后，停止搅拌，将反应物使用布氏漏斗进行抽滤，随后用500ml纯化水清洗抽滤3次，再用500ml乙醇清洗抽滤3次，最后用500ml纯化水清洗抽滤3次。
二、阳离子层析介质的效果测定
1、外观、镜检
将阳离子层析介质样品混匀，用吸管吸一滴样品放在载玻片上加适量纯化水稀释使颗粒铺满视野，不要堆叠。随机选取四个颗粒铺满无堆叠视野，分别选用4倍和10倍物镜，观察是否球形、碎胶、粘连、异物、空泡、黑球数，并用两点圆圈取视野中最小、最大颗粒各一个，中等颗粒两个，拍照截屏留存照片。如图1-2所示分别为实施例2和实施例6所得的阳离子层析介质显微镜镜检图。
2、粒度分布检测
将制备得到的阳离子层析介质用纯化水清洗，抽滤后称取9-11g介质，加9-11ml纯化水制成50％悬浮液。等待激光粒度仪(POP9)测试光背景完成，边搅匀样品边加样，加样过程观察遮光比，当遮光比柱显示绿色，及范围达到10％-20％时停止加样，加样完成后等待系统检测。记录3次测样的平均数据，计算粒度分布。打开粒径分布峰形，与标准介质的粒径分布峰形对比，并判断介质是否合格。
3、功能检测
将装有阳离子层析介质的层析柱连接到AKTA系统上，用纯化水以1.0ml/min的流速平衡层析柱直至基线平稳，随后将1％丙酮注入到上样环中，以1.0ml/min的流速测定层析柱柱效，盐峰完全出来后结束程序。通过UNICORN软件对盐峰进行积分，计算出理论塔板数N及不对称因子As。(N≥3000，As应在0.8-1.5范围内)。
将层析柱连接到AKTA Exploer 100系统上，用缓冲液A(甲酸pH4.0±0.04)以1.0ml/min的流速平衡柱子，直至基线平稳。将功能检测样品(10mg/ml WGA(WGA 1、WGA 2和WGA 3)+10mg/mlβ-Lactoglobulin)注入500μl上样环中，运行AKTA Exploer 100系统程序，记录各蛋白出峰时间，并计算样品的保留时间：保留时间＝出峰时间-开始拉梯度时间，结果取两根层析柱的平均值。
如图3-6所示为本发明实施例2、实施例4、实施例5和实施例6所得的阳离子层析介质功能图谱结果图，可以看出本发明阳离子层析介质可以在含有多种杂质蛋白组份的未处理溶液中准确吸附目的蛋白，有较大的吸附容量，选择性好；蛋白洗脱过程操作简单，不同种类目的蛋白分离效果好，纯化率高，分辨率高。
4、离子载量检测
将蠕动泵软管同用EzScreen 4.4ml层析柱连接，调节流速保持为4ml/min，使用48ml 1.0M HCl饱和EzScreen 4.4ml层析柱后，使用48ml纯化水进行清洗。然后用48ml 1MKNO3置换并收集流出液于250ml锥形瓶中，并使用48ml纯化水清洗并收集流出液于同一锥形瓶中。将上述锥形瓶中的收集液用纯化水定容至100ml，加入1.0ml甲酚红指示剂，再用0.1M NaOH标准溶液滴定，当溶液从黄色变为红色，且30s不变色时，记录消耗NaOH标准溶液的体积VNaOH。离子载量计算方式如下：
H+载量(mmol/ml)＝(CNaOH×VNaOH)/V胶
CNaOH：标准NaOH溶液的浓度(M)
VNaOH：滴定样品达到终点时所消耗的NaOH体积(ml)
V胶：填装后层析柱中介质的体积，即柱管标定体积(ml)
结果取两个平行的平均值。
5、10％动态载量检测
将抗体蛋白(IgG)制成蛋白样品(上样液)，将其与阳离子层析介质结合，当有10％蛋白流穿时，计算介质结合载量。具体操作方式如下：
将阳离子层析介质装至层析柱中，将装好的层析柱连接到AKTA系统上，用纯化水以1.0ml/min的流速平衡层析柱直至基线平稳，随后将1％丙酮注入到上样环中，以1.0ml/min的流速测定层析柱柱效，盐峰完全出来后结束程序。通过UNICORN软件对盐峰进行积分，计算出理论塔板数N及不对称因子As。(N≥3000，As应在0.8-1.5范围内)。
将层析柱连接到AKTA系统上，用缓冲液以1.0ml/min的流速平衡层析柱直至基线平稳。以0.5ml/min的流速将上样液(浓度为5.0mg/ml的抗体蛋白(IgG)溶于缓冲液中)泵入层析柱，同时收集流穿，当UV值为基础流穿与10％样品UV值的总和时停止上样，记录收集的流穿体积VFT。用缓冲液以0.5ml/min的流速清洗层析柱直至基线平稳并洗脱层析柱，收集洗脱峰。结果分析：
C样品为抗体蛋白样品的浓度；VFT为收集的流穿体积；Vc为层析柱体积。
本测定方法是在缓冲液为50mM NaAc，pH4.5，4.8ms/cm的电导条件下进行检测，检测结果如表1所示：
表1
| 样品 | 离子载量(umol/ml) | 10％动态载量(mg/ml) |
| 实施例1 | 83 | 73 |
| 实施例2 | 219 | 131 |
| 实施例3 | 130 | 96 |
| 实施例4 | 190 | 149 |
| 实施例5 | 200 | 125 |
| 实施例6 | 226 | 166 |
| 实施例7 | 213 | 153 |
| 实施例8 | 192 | 158 |
| 实施例9 | 185 | 108 |
| 实施例10 | 203 | 138 |
| 对比例1 | 6.4 | 4.85 |
表1为各实施例的离子载量和抗体蛋白10％动态载量，由表1数据可以看出，本发明实施例2、实施例4、实施例5和实施例6具有较高动态载量，离子载量为190-226umol/ml，10％动态载量为125-166mg/ml。其中实施例6以葡聚糖链为延伸臂，增加了功能基团密度，减少了生物分子和介质见的空间位阻，因此结合载量高，保证了再高流速条件下处理样品的能力。实施例10和对比例1对比数据发现，使用了4-丙烯酰吗啉的对比例1其离子载量和动态载量远远低于实施例10数据，可能是由于4-丙烯酰吗啉的添加降低了2-丙烯酰胺基-2-甲基-N-丙磺酸在琼脂糖基质上的配基密度，使其捕获抗体蛋白的能力大大降低，基本没有对抗体蛋白吸附的能力。而未添加4-丙烯酰吗啉的阳离子层析介质，在相同的测试条件下，均有很高的抗体蛋白吸附能力，动态载量高。
6、耐盐性测试
本测定方法是采用实施例10所得的阳离子层析介质，在测定方法5(10％动态载量检测)的基础上，使用不同浓度的缓冲液进行10％动态载量检测，缓冲液(pH 4.5)，具体参数如下：
缓冲液A1(2.0ms/cm)：20mM NaAc
缓冲液A2(4.8ms/cm)：50mM NaAc
缓冲液A3(7.4ms/cm)：80mM NaAc
缓冲液A4(10.6ms/cm)：120mM NaAc
缓冲液A5(12.7ms/cm)：150mM NaAc
图7为实施例10所得的阳离子层析介质在不同电导下的10％动态载量结果图，从图中可以看出，本发明所制备的阳离子层析介质具有高耐盐性，高动态载量。电导率为7.4ms/cm时，动态载量能达到140.61mg/ml，即使在超高电导条件下(12.7ms/cm)，仍具有＞130mg/ml的动态载量。随着电导条件的变化，动态载量曲线较为平稳，因此本发明所制备阳离子层析介质受电导影响较小，耐盐性好。
上述仅为本发明的部分优选实施例，本发明并不仅限于实施例的内容。对于本领域中的技术人员来说，在本发明技术方案的构思范围内可以有各种变化和更改，所作的任何变化和更改，均在本发明保护范围之内。
Claims (15)
1.一种阳离子层析介质，包含基质和配基，所述配基接枝在基质上，其特征在于，所述配基的结构式为：
其中，R1、R2分别独立为氢或烷基，X为氢、钠或钾，m＝1-3。
2.根据权利要求1所述的阳离子层析介质，其特征在于，所述R1、R2为氢或甲基，X为氢，m＝1-2。
3.根据权利要求1所述的阳离子层析介质，其特征在于，所述基质为多糖类微球。
4.根据权利要求3所述的阳离子层析介质，其特征在于，所述基质为琼脂糖、葡聚糖或含有葡聚糖长链的琼脂糖微球。
5.根据权利要求3所述的阳离子层析介质，其特征在于，所述基质的粒径分布为20-300μm，其对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.36-0.85。
6.根据权利要求3所述的阳离子层析介质，其特征在于：所述基质的粒径分布为30-80μm，其对于110KDa标准分子量葡聚糖的凝胶相分布系数Kav为0.4-0.75。
7.根据权利要求1所述的阳离子层析介质，其特征在于，所述基质与配基的质量比为5:1～20:1。
8.根据权利要求1所述的阳离子层析介质，其特征在于，所述基质与配基的质量比为6:1～10:1。
9.权利要求1所述的阳离子层析介质的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1，将基质加水混合，充分搅拌使其溶胀，将体系升温至20-80℃；
步骤2，加入配基和引发剂，进行接枝反应；
步骤3，将反应物抽滤、清洗后，得到所述阳离子层析介质。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述接枝反应的温度为20-80℃，反应时间为1-20h，基质与配基的质量比为5:1～20:1，引发剂浓度为1-10mmol/L。
11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述引发剂浓度为3.5-6.5mmol/L。
12.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述接枝反应的温度为30-55℃，所述基质与配基的质量比为6:1～10:1。
13.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述引发剂为水溶性引发剂，选自硫酸铈、硝酸铈铵、过硫酸铵或过硫酸钾。
14.一种色谱柱，其特征在于，所述色谱柱的填充介质为权利要求1-8任一项所述的阳离子层析介质。
15.权利要求14所述的色谱柱在生物大分子纯化中的应用。
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