CN116509778A - 扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法及其测试方法 - Google Patents
扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法及其测试方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法，步骤如下：S1.对扫帚叶澳洲茶叶进行带压提取、过滤和吸附同步进行的循环，只使用水做溶剂即可以将醇溶性成分进行有效提取，并减少活性成分的氧化，最终获得主要成分为生物碱类的活性成分；S2.对姜根进行发酵工艺处理，培养液经过离心分离，回收上清液，经脱色，两次过滤，减压浓缩，冬化工艺，再两次过滤，获得最终发酵产物；S3.最后将两次分别获得的产物进行组分配比调制，获得最终的目标组合物。本发明通过对特定植物进行发酵工艺控制，可以提高原料功效，还能分解转化底物生成新的活性成分，降低原料毒性，提升安全性，并且经实验证实具有良好的舒缓止痒效果。
Description
技术领域
本发明属于日化领域，具体涉及一种扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法及其测试方法。
背景技术
随着化妆品的广泛使用，以及环境污染的日益严重，现代人的皮肤越来越脆弱，其主要表现为瘙痒、干燥、红肿、炎症等，医学的处理方式是使用抗生素、激素等治疗，但不能长期使用，因此具有减缓敏感现象的日常护理品成为消费者一个重要的选择。日常护理品有严格的法规要求，主要使用的舒缓成分以天然来源的植物或中药原料为主，但是目前这类原料主要在即时止痒、轻度抗炎、屏障修复上表现比较好，去红消肿效果好的成分比较少见，因此此类成分的开发有现实的市场需求。
日化领域的植物原料的制备有植物萃取传统的难点，也有日化使用的特有的痛点。传统的提取的一些缺点比如提取效率低，含量低，杂质多，有效成分易变色等；而日化领域使用这些植物萃取成分的时候，因为是无差别的长期外用使用，如果采用传统的提取精制方法，比如溶剂使用乙醇、甲醇、石油醚等，会因溶剂残留造成部分人皮肤过敏，也可能因为提取过程中植物成分氧化等原因产生新的刺激源引起使用人群过敏。
发明内容
本发明为了解决上述现有技术中存在的缺陷和不足，提供了一种通过对特定植物进行发酵工艺控制，富集植物功效成份，提高原料功效，并且可以获取富含各种次级代谢产物，多糖、氨基酸等有益成分，此外还能分解转化底物生成新的活性成分，降低原料毒性，进一步提升安全性，并且经实验证实具有良好的舒缓止痒效果的扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法及其测试方法。
为了实现上述技术目的，本发明采用了以下技术方案：
一种扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法，步骤如下：
S1.对扫帚叶澳洲茶叶进行带压提取、过滤和吸附同步进行的循环，只使用水做溶剂即可以将醇溶性成分进行有效提取，并减少活性成分的氧化，最终获得主要成分为生物碱类的活性成分；
S2.对姜根进行发酵工艺处理，培养液经过离心分离，回收上清液，经脱色，两次过滤，减压浓缩，冬化工艺，再两次过滤，获得最终发酵产物；
S3.最后将两次分别获得的产物进行组分配比调制，获得最终的目标组合物。
优选地，步骤S1中扫帚叶澳洲茶叶提取工艺步骤如下：
1)将扫帚叶澳洲茶叶粉碎成粗粉，加水用胶体磨混匀后，从一号阀门进入提取罐；
2)储液罐加水，经换热器加热后通过三号阀门进入上分布器、通过四号阀门进入下分布器，充满罐内形成对流，控制三号阀门和四号阀门相对开度让药材粉末处于悬浮状态，由一号阀门控制进料压力，形成带压提取，提取液经陶瓷膜管过滤后进入陶瓷膜管内，活性成分被管内树脂吸附，吸附余液通过陶瓷膜管底部的烧结板流出进入储液罐，储液罐中液体经换热器加热后进行循环提取；
3)提取结束后，从二号阀门带料出渣，并从三号阀门和四号阀门进行清洗；
4)从五号阀门加入解析液对树脂进行解析，得到产品溶液。
优选地，步骤1)水的用量为4～6倍，步骤2)水的用量为6～10倍，温度为50～70℃，压力控制2～3bar，提取时间为1～1.5h，树脂用大孔吸附树脂，陶瓷膜孔径为100～200nm，烧结板孔径为5～10μm。
优选地，步骤4)所用解析液的制备过程如下：莲花加8～10倍的水蒸馏得到5倍的蒸馏液，加入等比例的1、3丁二醇或者1、3丙二醇,4℃冷藏12h以上，过0.2μm膜；洗脱速度为0.3～0.6ml/cm2·s，洗脱倍数为3～4倍，常压洗脱。
优选地，步骤S2中姜黄根的发酵工艺步骤如下：
1)将姜黄根粉碎，加水混合均匀，从一号阀门进去发酵罐；
2)通过二号阀门加入乳酸菌培养液，控制温度，真空度进行14H的发酵，通过三号阀门将料液送入离心机进行离心，不溶物沉淀回收上清液，进行脱色处理，然后通过滤网进行两次过滤；
3)转移料液至减压浓缩装置，浓缩至原有体积的1/2；
4)降温搅拌进行冬化工艺分离残留的油脂，恢复室温后再经过两次过滤，终得姜黄根发酵产物。
优选地，步骤S3中两种产物进行复配过程如下：取扫帚叶澳洲茶叶的提取物产与姜根发酵产物进行复配，搅拌均匀；添加一定比例的丁二醇、1,2-己二醇进行调制加工。
一种扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的测试方法，包括：
稳定性测试方法：待测样品4℃、48℃、常温光照各条件下不变色、无析出的最长时间；
生物碱检测方法：根据在一定pH介质中，生物碱类与氢离子生成阳离子，一些酸性染料在此条件下可解离成阴离子而与上述阳离子定量结合成有色络合物，可被有机溶剂定量提取的原理，用汉防己甲素作为标准物质在pH＝7.60的条件下与溴麝香草酚蓝在414nm用紫外分光光度计定量显色，药材中的生物碱在此条件下凡能与溴麝香草酚蓝显色的均可被测出，从而求得相对总生物碱的含量；
DPPH清除率检测方法：通过检测物质对DPPH·自由基的清除能力可以表示其抗氧化性的强弱。
优选地，生物碱检测方法检测的参数如下：
1)生物碱提取率＝生物碱提取质量÷药材中生物碱理论质量*100％；
2)药渣生物碱残留率＝(药渣中生物碱残留质量+药渣抽滤液质量*提取液生物碱含量)÷药材中生物碱理论质量*100％；
3)药材中生物碱理论质量：将药材粉碎成80目粉末，加30倍的50％的乙醇溶液，超声提取30min，过滤；滤渣重复前述提取2次，合并三次提取液，测试生物碱含量；
4)药渣中生物碱残留质量：将药材抽滤至无滴水，加30倍的50％的乙醇溶液，超声提取30min，过滤；滤渣重复前述提取2次，合并三次提取液，测试生物碱含量。
优选地，DPPH清除率检测方法的步骤如下：用移液器取90μl浓度为2×10-4mol/LDPPH加入到96孔板中，再分别加入10μl不同浓度的芦丁标准品或待测药物，每个浓度设置三个平行；设置control组和空白组，control组加无水乙醇不足体积，空白组加90μl DPPH溶液和10μl乙醇溶液；室温反应30min，反应后迅速在MD酶标仪517nm下测定吸光度；DPPH自由基清除率/％＝[1-Ai/Ao]×100％，其中Ao为空白对照扣掉control组吸光值，Ai为药物组扣掉control组吸光值；需要至少测定3个浓度下的DPPH自由基清除能力，计算出IC50，即DPPH的抑制率为50％时的样品溶液浓度，IC50越小，抗氧化能力越强。
本发明通过对特定植物进行发酵工艺控制，富集植物功效成份，提高原料功效，并且可以获取富含各种次级代谢产物，多糖、氨基酸等有益成分，此外还能分解转化底物生成新的活性成分，降低原料毒性，进一步提升安全性，并且经实验证实具有良好的舒缓止痒效果。
具体实施方式
实施例1：扫帚叶澳洲茶叶叶100份。
取扫帚叶澳洲茶叶粉碎成粗粉，加4倍水用胶体磨混匀后加入提取罐，储液罐加6倍水，经换热器加热至50℃后进入上下分布器，充满罐内并调节阀③④相对开度形成对流提取。提取压力3bar，提取时间1.5h，提取结束放料清洗，然后加入3倍的解析液进行洗脱，洗脱速度0.3ml/cm2·s，即得。
实施例2：扫帚叶澳洲茶叶叶100份。
取扫帚叶澳洲茶叶和粉防己药材粉碎成粗粉，加6倍水用胶体磨混匀后加入提取罐，储液罐加4倍水，经换热器加热至70℃后进入上下分布器，充满罐内并调节阀③④相对开度形成对流提取。提取压力2bar，提取时间1h，提取结束放料清洗，然后加入4倍的解析液进行洗脱，洗脱速度0.6ml/cm2·s，即得。
实施例3：扫帚叶澳洲茶叶叶100份。
取扫帚叶澳洲茶叶和粉防己药材粉碎成粗粉，加5倍水用胶体磨混匀后加入提取罐，储液罐加5倍水，经换热器加热至60℃后进入上下分布器，充满罐内并调节阀③④相对开度形成对流提取。提取压力2.5bar，提取时间75min，提取结束放料清洗，然后加入3.5倍的解析液进行洗脱，洗脱速度0.45ml/cm2·s，即得。
对比例1：扫帚叶澳洲茶叶叶100份。
取扫帚叶澳洲茶叶和粉防己药材粉碎成粗粉，加4倍水用胶体磨混匀后加入提取罐，储液罐加6倍水，经换热器加热至50℃后进入上下分布器，充满罐内并调节阀③④相对开度形成对流提取。提取压力3bar，提取时间1.5h，提取结束放料清洗，然后加入3倍的解析液进行洗脱，洗脱速度0.3ml/cm2·s，即得。
对比例2：扫帚叶澳洲茶叶叶100份。
取扫帚叶澳洲茶叶和粉防己药材粉碎成粗粉，加4倍水用胶体磨混匀后加入提取罐，储液罐加6倍水，经换热器加热至50℃后进入上下分布器，充满罐内并调节阀③④相对开度形成对流提取。提取压力3bar，提取时间1.5h，提取结束放料清洗，然后加入3倍的解析液进行洗脱，洗脱速度0.3ml/cm2·s，即得。
对比例3：常规搅拌提取
扫帚叶澳洲茶叶叶100份。
取扫帚叶澳洲茶叶和粉防己药材粉碎成粗粉，加10倍水50℃搅拌提取1.5h，过滤，浓缩成药材质量：浓缩液＝2:1，上树脂进行吸附，然后加入3倍的解析液进行洗脱，洗脱速度0.3ml/cm2·s，即得。
对比例4：常规带压提取
扫帚叶澳洲茶叶叶100份。
取扫帚叶澳洲茶叶和粉防己药材粉碎成粗粉，加10倍水50℃带压提取1.5h，过滤，浓缩成药材质量：浓缩液＝2:1，上树脂进行吸附，然后加入3倍的解析液进行洗脱，洗脱速度0.3ml/cm2·s，即得。
应用例1：扫帚叶澳洲茶叶溶液50份，姜黄根发酵产物50分。
取扫帚叶澳洲茶叶提取物溶液50份，姜黄根发酵产物50份，混合搅拌均匀，加入一定的1、3丁二醇、1,2己二醇，防止混合物变质。
应用例2：扫帚叶澳洲茶叶溶液60份，姜黄根发酵产物40分。
取扫帚叶澳洲茶叶提取物溶液60份，姜黄根发酵产物40份，混合搅拌均匀，加入一定的1、3丁二醇、1,2己二醇，防止混合物变质。
应用例3：扫帚叶澳洲茶叶溶液70份，姜黄根发酵产物30分。
取扫帚叶澳洲茶叶提取物溶液70份，姜黄根发酵产物35份，混合搅拌均匀，加入一定的1、3丁二醇、1,2己二醇，防止混合物变质。
一、理化测试结果
表1
数据分析(如表1)：本发明方案的通过分别提取与发酵工艺，先制成标的物质，然后进行相应的复配，重点将提取工艺进行的不同的尝试。通过以上工艺提取扫帚叶澳洲茶叶相比于常规方案、药渣残留率明显降低，所得产品的颜色浅，稳定性远优于传统的提取方案所得产品。另外实施列1～3所得产品对DPPH清除率优于对比列1、2，说明本发明组方特定的比列有利于提高抗氧化功效，实施列1～3所得产品对DPPH清除率显著的优于对比列3、4，说明本发明工艺的产品的抗氧化效果明显优于传统工艺，这可能和本发明提取率高以及过程中对有效成分的抗氧化保护两者都有关系。
*稳定性测试(d)：待测样品4℃、48℃、常温光照各条件下不变色、无析出的最长时间；
*生物碱检测方法：根据在一定pH介质中，生物碱类与氢离子生成阳离子，一些酸性染料在此条件下可解离成阴离子而与上述阳离子定量结合成有色络合物，可被有机溶剂定量提取的原理，用汉防己甲素作为标准物质在pH＝7.60的条件下与溴麝香草酚蓝在414nm用紫外分光光度计定量显色，药材中的生物碱在此条件下凡能与溴麝香草酚蓝显色的均可被测出，从而求得相对总生物碱的含量；
*生物碱提取率＝生物碱提取质量÷药材中生物碱理论质量*100％；
*药药渣生物碱残留率＝(药渣中生物碱残留质量+药渣抽滤液质量*提取液生物碱含量)÷药材中生物碱理论质量*100％；
*药材中生物碱理论质量：将药材粉碎成80目粉末，加30倍的50％的乙醇溶液，超声提取30min，过滤；滤渣重复前述提取2次，合并三次提取液，测试生物碱含量；
*药渣中生物碱残留质量：将药材抽滤至无滴水，加30倍的50％的乙醇溶液，超声提取30min，过滤；滤渣重复前述提取2次，合并三次提取液，测试生物碱含量；
*DPPH清除率：二苯基苦基苯肼自由基(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，DPPH·)是一种稳定的有机自由基,它的稳定性主要来自共振稳定作用及3个苯环的空间障碍,而使夹在其中氮原子上的不成对电子不能发挥其应有的电子成对作用。通过检测物质对DPPH·自由基的清除能力可以表示其抗氧化性的强弱。
用移液器取90μl浓度为2×10-4mol/L DPPH加入到96孔板中，再分别加入10μl不同浓度的芦丁标准品或待测药物，每个浓度设置三个平行；设置control组和空白组，control组加无水乙醇不足体积，空白组加90μl DPPH溶液和10μl乙醇溶液。室温反应30min，反应后迅速在MD酶标仪517nm下测定吸光度。
DPPH自由基清除率/％＝[1-Ai/Ao]×100％
A0-(空白对照扣掉control组吸光值)；Ai-(药物组扣掉control组吸光值)
至少测定3个浓度下的DPPH自由基清除能力，计算出IC50，即DPPH的抑制率为50％时的样品溶液浓度，IC50越小，抗氧化能力越强。
二、功效测试结果
试验对象：将应用1-3制备得到的扫帚叶澳洲茶叶、姜黄根组合物作为试验样品1-3，进行功效评价验证。
试验方法：
1、辣椒素刺激模型
辣椒素可以激活小鼠受体(TRPV1)而诱发外周疼痛，通过对小鼠脚底注射辣椒素，建立化学刺激诱导的小鼠疼痛模型，进而考察待测样品镇痛作用，TRPV1也是热感受通道，抑制TRPV1可以有效去红。
实验材料：辣椒素、无水乙醇、去离子水、50ul进样器、电子天平、昆明小鼠(20±2g)、吲哚美辛搽剂。
实验方法：取健康昆明小鼠90只，雌雄各半，适应性喂养后随机分成9组，每组各10只，①模型对照组、②阳性药物组(吲哚美辛搽剂)、③实施例1的5％剂量组、④实施例2的5％剂量组、⑤实施例3的5％剂量组、⑥对比例1的5％剂量组、⑦对比例2的5％剂量组、⑧对比例3的5％剂量组以及⑨对比例4的5％剂量组。实验前24h用剃刀剪去小鼠背部毛发，再使用脱毛膏进行脱毛，面积为3*3cm2。各组小鼠背部分别给药0.2ml/d，连续给药7d，在末次给药1h后，右足足底注射辣椒素(16mg/100ml；20ul)，观察记录5min内小鼠舔右脚次数、持续时间，以舔右脚持续时间为指标，对各组进行差异显著性分析，并计算抑制率，评估待测药物对疼痛模型的治疗效果，参见表2的数据。
2、血红细胞溶血试验
实验基于测定从红细胞中漏出的血红蛋白的量来评价细胞膜的损伤程度，血红蛋白漏出量越多，损伤越大。本实验模型组采用0.1％的SDS进行刺激，测试各组活性物对SDS溶血刺激的抑制效果。
RBC溶血实验：用10mL聚乙烯无菌离心管分装采集的血液样本(羊血)，室温下，1500xg离心15min。用一次性注射器小心吸取上清液，弃之。同条件下用与全血等量PBS缓冲液混洗离心管中的RBC 4次。过程能去除大量的白细胞、血浆和黄色的碎片。将离心管中的RBC添加适量葡萄糖，使葡萄糖终浓度为10mmol/L，密封保存。4℃冰箱保存备用。实验前，将RBC静置，使其温度稳定于室温，以PBS调RBC终浓度为8×109个/mL待用，整个过程无菌操作。
实验组(样品+SDS)：分别向1.5mL EP管中加入测试样品500μL，再加入PBS 210μL，混匀后加入250μL RBC，振荡孵育30min后取出，加入40μL质量浓度为1.0mg/mL SDS液，振荡孵育10min。
模型组：向1.5mL EP管中加入PBS 710μL，然后加入250μL RBC，振荡孵育30min后取出，加入40μL质量浓度为1.0mg/mL SDS液，振荡孵育10min。11180xg离心1min终止3组反应，取上清液于1cm比色皿中于530nm波长处测吸光度，根据如下公式计算溶血抑制率，并登记在表3中。
溶血抑制率＝(模型组吸光度-实验组吸光度)÷模型组吸光度×100％；
实验结果与讨论
表2
注：*表示与模型组比较，P<0.01。
从表2的实验结果以看出，本申请实施例1-3的扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄根组合物在5％剂量下，在抑制trpv1效果上与阳性对照相当，明显优于对比例1-4的效果。
表3
由实验结果可以看出，本申请实施例1-3的所得扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄根组合物对SDS引起的溶血刺激有明显的抑制作用；
具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (9)
1.一种扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法，其特征在于：步骤如下：
S1.对扫帚叶澳洲茶叶进行带压提取、过滤和吸附同步进行的循环，只使用水做溶剂即可以将醇溶性成分进行有效提取，并减少活性成分的氧化，最终获得主要成分为生物碱类的活性成分；
S2.对姜根进行发酵工艺处理，培养液经过离心分离，回收上清液，经脱色，两次过滤，减压浓缩，冬化工艺，再两次过滤，获得最终发酵产物；
S3.最后将两次分别获得的产物进行组分配比调制，获得最终的目标组合物。
2.根据权利要求1所述的一种扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法，其特征在于：步骤S1中扫帚叶澳洲茶叶提取工艺步骤如下：
1)将扫帚叶澳洲茶叶粉碎成粗粉，加水用胶体磨混匀后，从一号阀门进入提取罐；
2)储液罐加水，经换热器加热后通过三号阀门进入上分布器、通过四号阀门进入下分布器，充满罐内形成对流，控制三号阀门和四号阀门相对开度让药材粉末处于悬浮状态，由一号阀门控制进料压力，形成带压提取，提取液经陶瓷膜管过滤后进入陶瓷膜管内，活性成分被管内树脂吸附，吸附余液通过陶瓷膜管底部的烧结板流出进入储液罐，储液罐中液体经换热器加热后进行循环提取；
3)提取结束后，从二号阀门带料出渣，并从三号阀门和四号阀门进行清洗；
4)从五号阀门加入解析液对树脂进行解析，得到产品溶液。
3.根据权利要求2所述的一种扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法，其特征在于：步骤1)水的用量为4～6倍，步骤2)水的用量为6～10倍，温度为50～70℃，压力控制2～3bar，提取时间为1～1.5h，树脂用大孔吸附树脂，陶瓷膜孔径为100～200nm，烧结板孔径为5～10μm。
4.根据权利要求2所述的一种扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法，其特征在于，步骤4)所用解析液的制备过程如下：莲花加8～10倍的水蒸馏得到5倍的蒸馏液，加入等比例的1、3丁二醇或者1、3丙二醇,4℃冷藏12h以上，过0.2μm膜；洗脱速度为0.3～0.6ml/cm2·s，洗脱倍数为3～4倍，常压洗脱。
5.根据权利要求1所述的一种扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法，其特征在于：步骤S2中姜黄根的发酵工艺步骤如下：
1)将姜黄根粉碎，加水混合均匀，从一号阀门进去发酵罐；
2)通过二号阀门加入乳酸菌培养液，控制温度，真空度进行14H的发酵，
通过三号阀门将料液送入离心机进行离心，不溶物沉淀回收上清液，进行脱色处理，然后通过滤网进行两次过滤；
3)转移料液至减压浓缩装置，浓缩至原有体积的1/2；
4)降温搅拌进行冬化工艺分离残留的油脂，恢复室温后再经过两次过滤，
终得姜黄根发酵产物。
6.根据权利要求1所述的一种扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的制备方法，其特征在于：步骤S3中两种产物进行复配过程如下：取扫帚叶澳洲茶叶的提取物产与姜根发酵产物进行复配，搅拌均匀；添加一定比例的丁二醇、1,2-己二醇进行调制加工。
7.一种根据权利要求1所述的制备方法制备的扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的测试方法，其特征在于：其包括稳定性测试方法：待测样品4℃、48℃、常温光照各条件下不变色、无析出的最长时间；
生物碱检测方法：根据在一定pH介质中，生物碱类与氢离子生成阳离子，一些酸性染料在此条件下可解离成阴离子而与上述阳离子定量结合成有色络合物，可被有机溶剂定量提取的原理，用汉防己甲素作为标准物质在pH＝7.60的条件下与溴麝香草酚蓝在414nm用紫外分光光度计定量显色，药材中的生物碱在此条件下凡能与溴麝香草酚蓝显色的均可被测出，从而求得相对总生物碱的含量；
DPPH清除率检测方法：通过检测物质对DPPH·自由基的清除能力可以表示其抗氧化性的强弱。
8.根据权利要求7所述的扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的测试方法，其特征在于：生物碱检测方法检测的参数如下：
1)生物碱提取率＝生物碱提取质量÷药材中生物碱理论质量*100％；
2)药渣生物碱残留率＝(药渣中生物碱残留质量+药渣抽滤液质量*提取液生物碱含量)÷药材中生物碱理论质量*100％；
3)药材中生物碱理论质量：将药材粉碎成80目粉末，加30倍的50％的乙醇溶液，超声提取30min，过滤；滤渣重复前述提取2次，合并三次提取液，测试生物碱含量；
4)药渣中生物碱残留质量：将药材抽滤至无滴水，加30倍的50％的乙醇溶液，超声提取30min，过滤；滤渣重复前述提取2次，合并三次提取液，测试生物碱含量。
9.根据权利要求7所述的扫帚叶澳洲茶叶、发酵姜黄舒缓止痒组合物的测试方法，其特征在于：DPPH清除率检测方法的步骤如下：用移液器取90μl浓度为2×10-4mol/L DPPH加入到96孔板中，再分别加入10μl不同浓度的芦丁标准品或待测药物，每个浓度设置三个平行；设置control组和空白组，control组加无水乙醇不足体积，空白组加90μl DPPH溶液和10μl乙醇溶液；室温反应30min，反应后迅速在MD酶标仪517nm下测定吸光度；DPPH自由基清除率/％＝[1-Ai/Ao]×100％，其中Ao为空白对照扣掉control组吸光值，Ai为药物组扣掉control组吸光值；需要至少测定3个浓度下的DPPH自由基清除能力，计算出IC50，即DPPH的抑制率为50％时的样品溶液浓度，IC50越小，抗氧化能力越强。
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