CN116500151A - 一种(s)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的hplc分析方法 - Google Patents
一种(s)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的hplc分析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116500151A CN116500151A CN202310305956.1A CN202310305956A CN116500151A CN 116500151 A CN116500151 A CN 116500151A CN 202310305956 A CN202310305956 A CN 202310305956A CN 116500151 A CN116500151 A CN 116500151A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- mobile phase
- hplc analysis
- impurity
- aminobutanamide
- aminobutanamide hydrochloride
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 46
- HDBMIDJFXOYCGK-DFWYDOINSA-N (2s)-2-aminobutanamide;hydrochloride Chemical compound Cl.CC[C@H](N)C(N)=O HDBMIDJFXOYCGK-DFWYDOINSA-N 0.000 title claims abstract description 41
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 24
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 105
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 84
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 38
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 19
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims abstract description 19
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 8
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims abstract description 4
- FPLYNRPOIZEADP-UHFFFAOYSA-N octylsilane Chemical group CCCCCCCC[SiH3] FPLYNRPOIZEADP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 32
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 19
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 8
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 6
- 241000599985 Beijerinckia mobilis Species 0.000 claims description 2
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 46
- HNNJFUDLLWOVKZ-VKHMYHEASA-N (2s)-2-aminobutanamide Chemical compound CC[C@H](N)C(N)=O HNNJFUDLLWOVKZ-VKHMYHEASA-N 0.000 description 23
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 23
- XUKUURHRXDUEBC-SXOMAYOGSA-N (3s,5r)-7-[2-(4-fluorophenyl)-3-phenyl-4-(phenylcarbamoyl)-5-propan-2-ylpyrrol-1-yl]-3,5-dihydroxyheptanoic acid Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1=C(C=2C=CC(F)=CC=2)N(CC[C@@H](O)C[C@H](O)CC(O)=O)C(C(C)C)=C1C(=O)NC1=CC=CC=C1 XUKUURHRXDUEBC-SXOMAYOGSA-N 0.000 description 17
- AAEQXEDPVFIFDK-UHFFFAOYSA-N 3-(4-fluorobenzoyl)-2-(2-methylpropanoyl)-n,3-diphenyloxirane-2-carboxamide Chemical compound C=1C=CC=CC=1NC(=O)C1(C(=O)C(C)C)OC1(C=1C=CC=CC=1)C(=O)C1=CC=C(F)C=C1 AAEQXEDPVFIFDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 9
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 4
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N ammonia Natural products N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- HPHUVLMMVZITSG-ZCFIWIBFSA-N levetiracetam Chemical compound CC[C@H](C(N)=O)N1CCCC1=O HPHUVLMMVZITSG-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 2
- 229960004002 levetiracetam Drugs 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- XDEHMKQLKPZERH-BYPYZUCNSA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanamide Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(N)=O XDEHMKQLKPZERH-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonium chloride Substances [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HQMLIDZJXVVKCW-REOHCLBHSA-N L-alaninamide Chemical compound C[C@H](N)C(N)=O HQMLIDZJXVVKCW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N L-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- -1 L-threinamide Chemical compound 0.000 description 1
- 230000003556 anti-epileptic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001961 anticonvulsive agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/60—Construction of the column
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及药物分析技术领域，公开了一种(S)‑2‑氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法。本发明的HPLC分析方法包括选用辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；采用流动相梯度洗脱，流动相的组成为磷酸二氢钾缓冲液及乙腈；在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。本发明能有效的洗脱、分离和定量(S)‑2‑氨基丁酰胺盐酸盐中的相关杂质，使杂质峰与主峰完全分离，专属性好，分析速度快，检测效果好。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法。
背景技术
(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐为白色或类白色固体粉末，是重要的医药中间体，主要用于左乙拉西坦等抗癫痫等药物的合成，在医药行业具有广泛的用途。
在(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐的有关测定中，常见的杂质有4种，包括L-2-氨基丁酸、L-缬氨酰胺、L-苏氨酰胺、L-丙氨酰胺。这4个杂质的引入，均会直接影响左乙拉西坦等相关药物的质量，因此对上述杂质进行控制具有重要意义。
目前检测(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的方法较为复杂和繁琐，均需采用多个HPLC方法进行控制。尚未见在同一种HPLC分析下去进行控制(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐中以上4个杂质的报道。
因此，本研究团队旨在寻找一种简单可行、能将(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐及其常见的4种杂质依次洗脱且分离、并做定量分析的方法。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐的HPLC分析方法。本发明利用梯度洗脱的高效液相色谱法，实现了有效的洗脱、分离和定量(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐中的相关杂质，使杂质峰与主峰完全分离，分析速度快，检测效果好。
本发明的具体技术方案为：
本发明提供了一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，在该方法种：
所述(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐(Y)及其相关杂质(A-D)的化学结构式如下：
所述HPLC分析方法的主要参数：
a、色谱柱选用辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
b、流动相梯度洗脱，其中：
流动相由流动相A和流动相B组成，其中，流动相A为磷酸二氢钾缓冲液和乙腈的混合溶液，流动相A中磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.01mol/L～0.05mol/L，pH为6.5～8.0，乙腈占比为3％～8％；流动相B为乙腈；
梯度洗脱时间与流动相比例如下：
| 时间(min) | 流动相A％ | 流动相B％ |
| 0 | 95 | 5 |
| 5 | 95 | 5 |
| 6～15 | 50～70 | 50～30 |
| 9～18 | 50～70 | 50～30 |
| 9.1～18.1 | 95 | 5 |
| 16～25 | 95 | 5 |
c、检测波长为205nm。
d、检测方法：
取样品溶液注入液相色谱仪，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
在(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐的有关测定中，目前检测的方法均需采用多个HPLC方法进行控制。本发明提供的一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，利用梯度洗脱的高效液相色谱法，能一次性实现有效的洗脱、分离和定量(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐中的相关杂质，使杂质峰与主峰完全分离，分析速度快，检测效果好。具体而言：
(1)色谱柱选用辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，如色谱柱AquaSep，若采用其他极性色谱柱，如Waters Atlantis T3色谱柱，会出现4种杂质无法进行有效分离、(S)-2-氨基丁酰胺峰形较差、拖尾严重的现象。
(2)流动相梯度洗脱中，流动相A中缓冲液为磷酸二氢钾缓冲液，浓度为0.01mol/L～0.05mol/L，pH为6.5～8.0，乙腈占比为3％～8％；流动相B为乙腈。若流动相A为磷酸水溶液或氨水水溶液，均会出现杂质B与杂质C无法分离、(S)-2-氨基丁酰胺及杂质D峰形较差、拖尾严重的现象。
(3)流动相梯度洗脱中，梯度洗脱时间与流动相比例如下：
(4)检测波长在205nm
采用上述参数进行(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析，能一次性实现(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐及其相关杂质有效的洗脱、分离和定量。
作为本发明上述技术方案的优选，所述梯度洗脱时间与流动相比例为：
| 时间(min) | 流动相A％ | 流动相B％ |
| 0 | 95 | 5 |
| 5 | 95 | 5 |
| 10 | 60 | 40 |
| 15 | 60 | 40 |
| 15.1 | 95 | 5 |
| 30 | 95 | 5 |
作为本发明上述技术方案的优选，流动相梯度洗脱中所述流动相A中磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.02mol/L。
作为本发明上述技术方案的优选，流动相梯度洗脱中，所述流动相A中的乙腈比例为5％。
作为本发明上述技术方案的优选，检测方法中所述样品溶液的配制方法为：取测试样品适量，精密称定，添加10％乙腈水溶解并稀释成浓度为2～10mg/mL的溶液。
作为本发明上述技术方案的优选，检测方法中所述样品溶液的浓度为5mg/mL。
作为本发明上述技术方案的优选，检测方法中所述注入液相色谱仪的样品溶液的量为10μL。
作为本发明上述技术方案的优选，检测方法中流动相的流速为0.4～0.6mL/min。
作为本发明上述技术方案的优选，检测方法中柱温为15～25℃。
与现有技术相比，本发明具有以下技术效果：
本发明提供的高效液相色谱分析方法，可以有效地洗脱、分离和定量检测(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐相关杂质，专属性好，灵敏度和准确度高，再无需采用多个方法来控制(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐相关杂质，可实现对(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐快速、简单、可靠的杂质控制。
附图说明
图1本发明实施例1中专属性混合溶液色谱图；
图2本发明实施例2中(流动相A中磷酸氢二钾缓冲液浓度为0.01mol/L)专属性混合溶液色谱图；
图3本发明实施例2中(流动相A中磷酸氢二钾缓冲液浓度为0.05mol/L)专属性混合溶液色谱图；
图4本发明实施例3中(流动相A中磷酸氢二钾缓冲液pH为6.5)专属性混合溶液色谱图；
图5本发明实施例3中(流动相A中磷酸氢二钾缓冲液pH为8.0)专属性混合溶液色谱图；
图6本发明实施例4中(流动相A中乙腈比例为3％)专属性混合溶液色谱图；
图7本发明实施例4中(流动相A中乙腈比例为8％)专属性混合溶液色谱图；
图8本发明实施例5中(流动相B最终乙腈比例为30％)专属性混合溶液色谱图；
图9本发明实施例5中(流动相B最终乙腈比例为50％)专属性混合溶液色谱图；
图10本发明实施例6中(梯度洗脱程序1)专属性混合溶液色谱图；
图11本发明实施例6中(梯度洗脱程序2)专属性混合溶液色谱图；
图12本发明实施例7中(流速0.4mL/min)专属性混合溶液色谱图；
图13本发明实施例7中(流速0.6mL/min)专属性混合溶液色谱图；
图14本发明实施例8中(柱温15℃)专属性混合溶液色谱图；
图15本发明实施例8中(柱温20℃)专属性混合溶液色谱图；
图16本发明实施例9中(供试液浓度2mg/mL)专属性混合溶液色谱图；
图17本发明实施例9中(供试液浓度10mg/mL)专属性混合溶液色谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述。
本发明中(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质指的是(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐及其物质测定中的4种常见杂质，(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐和其杂质名称及代号、来源和结构式如表1所示。
表1
本发明实施例及对比例1-2中按以下测定条件：色谱柱：AquaSep，3.0μm，4.0mm×150mm；检测波长：205nm；样品浓度：5mg/mL。
实施例1
检测方法：
分别取(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐样品和各相关杂质对照品适量，精密称定，加10％乙腈溶解并稀释成含(S)-2-氨基丁酰胺5mg/mL和各杂质0.5％的溶液，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取上述液10μl注入液相色谱仪，在流速0.5ml/min和柱温20℃下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
流动相A中磷酸二氢钾缓冲液浓度为0.02mol/L，pH为7.6，乙腈比例为5％。流动相B为乙腈。
按表2梯度洗脱程序分析系统适应性溶液。
表2
| 时间(min) | 流动相A％ | 流动相B％ |
| 0 | 95 | 5 |
| 5 | 95 | 5 |
| 10 | 60 | 40 |
| 15 | 60 | 40 |
| 15.1 | 95 | 5 |
| 30 | 95 | 5 |
色谱图见图1，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表3。
表3
从表3数据可知：流动相A中磷酸二氢钾缓冲液浓度为0.02mol/L；pH为7.6；乙腈比例为5％；溶剂：10％乙腈；流速0.5ml/min；柱温：20℃时，各组分之间均分离良好。
实施例2
其他同实施例1，不同之处在于：
流动相A中磷酸二氢钾缓冲液浓度为0.01mol/L或0.05mol/L；
按实施例1中的梯度洗脱程序分析系统适应性溶液，色谱图见图2和3，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表4和表5。
表4流动相A中磷酸二氢钾缓冲液浓度为0.01mol/L时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.425 | / |
| 杂质B | 2.965 | 3.8 |
| 杂质C | 3.731 | 4.0 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.117 | 1.4 |
| 杂质D | 5.223 | 3.3 |
表5流动相A中磷酸二氢钾缓冲液浓度为0.05mol/L时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.417 | / |
| 杂质B | 2.834 | 2.9 |
| 杂质C | 3.310 | 2.8 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 3.653 | 1.3 |
| 杂质D | 4.657 | 3.4 |
从表4和表5的数据可知：流动相A中磷酸二氢钾缓冲液浓度为0.01mol/L或0.05mol/L，各组分之间均分离良好。
实施例3
其他同实施例1，不同之处在于：
流动相A中磷酸二氢钾缓冲液pH为6.5或8.0；
按实施例1中的梯度洗脱程序分析系统适应性溶液，色谱图见图4和5，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表6和表7。
表6流动相A中磷酸二氢钾缓冲液pH为6.5时分离度结果
表7流动相A中磷酸二氢钾缓冲液pH为8.0时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.413 | / |
| 杂质B | 2.918 | 3.5 |
| 杂质C | 3.909 | 5.5 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.337 | 1.6 |
| 杂质D | 5.487 | 3.4 |
从表6和表7的数据可知：流动相A中磷酸二氢钾缓冲液pH为6.5或8.0，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
实施例4
其他同实施例1，不同之处在于：
流动相A中乙腈比例为3％或8％；
按实施例1中的梯度洗脱程序分析系统适应性溶液，色谱图见图6和7，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表8和表9。
表8流动相A中乙腈比例为3％时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.460 | / |
| 杂质B | 3.055 | 4.0 |
| 杂质C | 3.838 | 3.9 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.272 | 1.3 |
| 杂质D | 5.608 | 3.3 |
表9流动相A中乙腈比例为8％时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.359 | / |
| 杂质B | 2.863 | 3.5 |
| 杂质C | 3.661 | 4.2 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.009 | 1.5 |
| 杂质D | 4.897 | 3.3 |
从表8和表9的数据可知：流动相A乙腈比例为3％或8％，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
对实施例1及实施例4的色谱图进行比较，选择实施例1的色谱条件为优选条件，即流动相A乙腈比例为5％。
实施例5
其他同实施例1，不同之处在于：
流动相B中最终的乙腈比例为50％或30％；
按以下梯度洗脱程序分析系统适应性溶液，
| 时间(min) | 流动相A％ | 流动相B％ |
| 0 | 95 | 5 |
| 5 | 95 | 5 |
| 10 | 50(或70) | 50(或30) |
| 15 | 50(或70) | 50(或30) |
| 15.1 | 95 | 5 |
| 30 | 95 | 5 |
色谱图见图8和9，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表10和表11。
表10流动相B中乙腈比例为50％时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.413 | / |
| 杂质B | 2.975 | 3.9 |
| 杂质C | 3.798 | 4.4 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.189 | 1.3 |
| 杂质D | 5.320 | 3.2 |
表11流动相B中乙腈比例为30％时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.413 | / |
| 杂质B | 2.979 | 3.8 |
| 杂质C | 3.803 | 4.3 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.192 | 1.3 |
| 杂质D | 5.323 | 3.2 |
从表10和表11的数据可知：流动相B最终比例为50％或30％时，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
实施例6
其他同实施例1，不同之处在于：
梯度洗脱的时间；
分别按以下梯度洗脱程序1和梯度洗脱程序2分析系统适应性溶液，
梯度1：
梯度2：
| 时间(min) | 流动相A％ | 流动相B％ |
| 0 | 95 | 5 |
| 5 | 95 | 5 |
| 15 | 60 | 40 |
| 20 | 60 | 40 |
| 20.1 | 95 | 5 |
| 35 | 95 | 5 |
色谱图见图10和11，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表12和表13。
表12梯度洗脱程序1的分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.414 | / |
| 杂质B | 2.983 | 3.8 |
| 杂质C | 3.809 | 4.3 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.198 | 1.3 |
| 杂质D | 5.324 | 3.2 |
表13梯度洗脱程序2的分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.413 | / |
| 杂质B | 2.984 | 3.8 |
| 杂质C | 3.818 | 4.3 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.208 | 1.3 |
| 杂质D | 5.340 | 3.2 |
从表12和表13的数据可知：梯度洗脱程序1或2，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
对实施例1及实施例6的色谱图进行比较，选择实施例1的色谱条件为优选条件，即实施例1中的梯度程序。
实施例7
其他同实施例1，不同之处在于：
流速：0.4mL/min或0.6mL/min；
按实施例1中的梯度洗脱程序分析系统适应性溶液，色谱图见图12和13，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表14和表15。
表14流速为0.4mL/min时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 3.021 | / |
| 杂质B | 3.713 | 3.8 |
| 杂质C | 4.728 | 4.3 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 5.204 | 1.3 |
| 杂质D | 6.620 | 3.4 |
表15流速为0.6mL/min时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.011 | / |
| 杂质B | 2.475 | 3.7 |
| 杂质C | 3.136 | 4.1 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 3.460 | 1.3 |
| 杂质D | 4.397 | 3.2 |
从表14和表15的数据可知：流速为0.4mL/min或0.6mL/min时，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
对实施例1及实施例7的色谱图进行比较，选择实施例1的色谱条件为优选条件，即流速0.5mL/min。
实施例8
其他同实施例1，不同之处在于：
柱温：15℃或25℃；
按实施例1中的梯度洗脱程序分析系统适应性溶液，色谱图见图14和15，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表16和表17。
表16柱温为15℃时分离度结果
表17柱温25℃时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.413 | / |
| 杂质B | 2.947 | 3.6 |
| 杂质C | 3.776 | 4.4 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.198 | 1.5 |
| 杂质D | 5.337 | 3.4 |
从表16和表17的数据可知：柱温为15℃或25℃时，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
对实施例1及实施例8的色谱图进行比较，选择实施例1的色谱条件为优选条件，即柱温25℃。
实施例9
其他同实施例1，不同之处在于：
样品浓度为2mg/mL和10mg/mL；
按实施例1中的梯度洗脱程序分析系统适应性溶液，色谱图见图16和17，各杂质与主峰的保留时间及相邻峰之间的分离度见表18和表19。
表18样品浓度为2mg/mL时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.426 | / |
| 杂质B | 3.020 | 4.0 |
| 杂质C | 3.993 | 4.8 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.372 | 1.6 |
| 杂质D | 5.467 | 3.1 |
表19样品浓度为10mg/mL时分离度结果
| 名称/代号 | 保留时间(min) | 相邻峰间分离度 |
| 杂质A | 2.424 | / |
| 杂质B | 3.008 | 4.2 |
| 杂质C | 3.871 | 5.4 |
| (S)-2-氨基丁酰胺 | 4.202 | 1.1 |
| 杂质D | 5.418 | 3.0 |
从表18和表19的数据可知：样品浓度为2mg/mL或10mg/mL时，各杂质与主峰之间以及杂质与杂质之间均分离良好。
对实施例1及实施例9的色谱图进行比较，选择实施例1的色谱条件为优选条件，即样品浓度为5mg/mL。
对比例1(与实施例1的主要区别在于：流动相A为磷酸水溶液)
流动相A为磷酸水溶液。流动相B为乙腈。
与实施例1相同，按表2梯度洗脱程序分析系统适应性溶液。
分别取(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐样品和各相关杂质对照品适量，精密称定，加10％乙腈溶解并稀释成含(S)-2-氨基丁酰胺5mg/mL和各杂质0.5％的溶液，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取上述液10μl注入液相色谱仪，在流速0.5ml/min和柱温20℃下进行高效液相色谱分析。结果发现，杂质B与杂质C无法分离，(S)-2-氨基丁酰胺及杂质D峰形较差，拖尾严重。
对比例2(与实施例1的主要区别在于：流动相A为氨水水溶液)
流动相A为氨水水溶液。流动相B为乙腈。
与实施例1相同，按表2梯度洗脱程序分析系统适应性溶液。
分别取(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐样品和各相关杂质对照品适量，精密称定，加10％乙腈溶解并稀释成含(S)-2-氨基丁酰胺5mg/mL和各杂质0.5％的溶液，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取上述液10μl注入液相色谱仪，在流速0.5ml/min和柱温20℃下进行高效液相色谱分析。结果发现，杂质B与杂质C无法分离，(S)-2-氨基丁酰胺及杂质D峰形较差，拖尾严重。
对比例3(与实施例1的主要区别在于：采用Waters Atlantis T3色谱柱)
测定条件：色谱柱：Waters Atlantis T3，3.0μm，4.6mm×150mm；检测波长：205nm；样品浓度：5mg/mL。
流动相A中磷酸二氢钾缓冲液浓度为0.02mol/L，pH为7.6，乙腈比例为5％。流动相B为乙腈。
与实施例1相同，按表2梯度洗脱程序分析系统适应性溶液。
分别取(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐样品和各相关杂质对照品适量，精密称定，加10％乙腈溶解并稀释成含(S)-2-氨基丁酰胺5mg/mL和各杂质0.5％的溶液，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取上述液10μl注入液相色谱仪，在流速0.5ml/min和柱温20℃下进行高效液相色谱分析。结果发现，4种杂质无法进行有效分离，(S)-2-氨基丁酰胺峰形较差，拖尾严重。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (10)
1.一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，其特征在于：所述(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐(Y)及其相关杂质(A-D)的化学结构式如下：
所述HPLC分析方法的参数包括：
a、色谱柱选用辛基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；
b、流动相梯度洗脱，其中：
流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为磷酸二氢钾缓冲液和乙腈的混合溶液，流动相A中磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.01mol/L～0.05mol/L，pH为6.5～8.0，乙腈占比为3％～8％；所述流动相B为乙腈；
所述梯度洗脱时间与流动相比例如下：
；
c、检测波长为205nm；
d、检测方法：
取样品溶液注入液相色谱仪，在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。
2.如权利要求1所述的一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，其特征在于：所述梯度洗脱时间与流动相比例如下：
。
3.如权利要求1所述的一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，其特征在于：流动相梯度洗脱中，所述流动相A中磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.02mol/L。
4.如权利要求1所述的一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，其特征在于：流动相梯度洗脱中，所述流动相A中的乙腈比例为5％。
5.如权利要求1所述的一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，其特征在于：检测方法中，所述样品溶液的配制方法为：取测试样品适量，精密称定，添加10％乙腈水溶解并稀释成浓度为2～10mg/mL的溶液。
6.如权利要求1或5所述的一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，其特征在于：检测方法中，所述样品溶液的浓度为5mg/mL。
7.如权利要求1所述的一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，其特征在于：检测方法中，所述注入液相色谱仪的样品溶液的量为10μL。
8.如权利要求1所述的一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，其特征在于：检测方法中，所述流速为0.4～0.6mL/min。
9.如权利要求1所述的一种(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的HPLC分析方法，其特征在于：检测方法中，所述柱温为15～25℃。
10.如权利要求1-9任一所述的HPLC分析方法在(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐及中间体有关物质、或(S)-2-氨基丁酰胺盐酸盐制剂产品有关物质的分析检测中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310305956.1A CN116500151A (zh) | 2023-03-27 | 2023-03-27 | 一种(s)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的hplc分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310305956.1A CN116500151A (zh) | 2023-03-27 | 2023-03-27 | 一种(s)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的hplc分析方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116500151A true CN116500151A (zh) | 2023-07-28 |
Family
ID=87327509
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310305956.1A Pending CN116500151A (zh) | 2023-03-27 | 2023-03-27 | 一种(s)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的hplc分析方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116500151A (zh) |
-
2023
- 2023-03-27 CN CN202310305956.1A patent/CN116500151A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106033079B (zh) | 甲磺酸达比加群酯起始物料f中有关物质咪唑的检测方法 | |
| CN111983055B (zh) | 一种用hplc分离测定利伐沙班中间体有关物质的方法 | |
| CN110514759B (zh) | 一种坎地沙坦酯中叠氮化合物的检测方法 | |
| CN114324703B (zh) | 一种同时检测多种氨基酸的方法 | |
| CN114689737B (zh) | 一种s-邻氯苯甘氨酸甲酯酒石酸盐有关物质的分析方法 | |
| CN111060621A (zh) | 一种注射用头孢哌酮钠舒巴坦钠有关物质的检测方法 | |
| CN116500151A (zh) | 一种(s)-2-氨基丁酰胺盐酸盐有关物质的hplc分析方法 | |
| CN110954629A (zh) | 一种呋塞米中糠胺含量测定的控制方法 | |
| CN112034066B (zh) | 一种分离测定瑞博西尼及杂质的方法 | |
| CN113759048A (zh) | 一种十八烷二酸单叔丁酯检验方法 | |
| CN110095554B (zh) | 高效液相色谱分析米力农有关物质的方法 | |
| CN108226340B (zh) | 一种分离测定双氟米松及其6β双氟米松和16β双氟米松的方法 | |
| CN115248260A (zh) | 一种苯磺顺阿曲库铵原料药中有关物质的hplc分析检测方法 | |
| CN111983056A (zh) | 一种用hplc分离测定托法替尼中间体有关物质的方法 | |
| CN112630347B (zh) | 一种4-硝基苯乙胺的hplc分析方法 | |
| CN111257440A (zh) | 基于gc-hs的丙戊酸钠中潜在遗传毒性杂质测定方法 | |
| CN111257441B (zh) | 一种帕瑞昔布钠合成工艺杂质的检测方法 | |
| CN114200050B (zh) | 一种对溴苯甲醚中的有关物质含量的hplc检测方法 | |
| CN117630202B (zh) | 盐酸丁螺环酮中间体杂质的检测方法 | |
| CN112034058B (zh) | 一种长春胺中异构体杂质的检测方法 | |
| CN117486751A (zh) | 采用高效液相色谱法分离奥马环素异构体的方法 | |
| CN114200067B (zh) | 一种6-溴-3-羟基吡嗪-2-甲酰胺及杂质的高效液相色谱分析方法 | |
| CN117630195A (zh) | 一种度骨化醇有关物质的高效液相色谱分析方法 | |
| CN115856141A (zh) | Hplc分离测定替尼类关键中间体及其相关杂质的方法 | |
| CN118067860A (zh) | 一种依帕司他片中有关物质的检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |