CN116459267A - 人参皂苷Rd的抗炎应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种人参皂苷Rd在制备缓解或/和治疗炎症药物和保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂中的新应用。试验证明，人参皂苷Rd治疗炎症的疗效显著、见效快，效果优于地塞米松，适用于急性炎症如流感病毒性肺炎、新冠病毒性肺炎、急性肺损伤性炎症等，也适用于慢性炎症如慢性阻塞性肺炎、慢性哮喘性气道炎症等，是治疗急、慢性炎症及其并发症的新的药物来源。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，涉及一种抗炎药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂，特别涉及一种人参皂苷Rd在制备抗炎药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂的应用。
背景技术
炎症(inflammation)是机体对抗外界感染或损伤性刺激的一种保护性反应，同时也是多种不同类型疾病的共同病理过程。长期持续、过度的炎症反应或炎症风暴，将会造成对机体自身造成严重伤害、甚至脏器的衰竭，故需要采用药物干预以阻断炎症持续和发展。目前临床上常用的抗炎药主要有两类：非甾体抗炎药和甾体类抗炎药(糖皮质激素类)。虽然这两类抗炎药都有很好的临床抗炎效果，但长期大量使用会产生一系列不良反应和耐受性，如前者的胃粘膜损伤、肝肾损害和心脏毒副作用，后者的水钠潴留等。为解决药物的耐受性及不良反应，寻找结构新颖、机制独特的抗炎药物一直是新型抗炎药物研发领域的热点。
人参皂苷Rd(Ginsenoside Rd)属于二醇型人参皂苷，主要存在于人参、三七、西洋参中。具有广泛的生物活性，对心脑血管、神经系统、免疫系统等明显的药理作用，在镇痛、神经保护作用方面作用优于其他单体皂苷，但其抗炎及对急性炎症(ALI)保护作用及其机制尚未见文献报道。
发明内容
本发明的首要目的是针对上述现有的治疗炎症药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂存在的技术问题，提供人参皂苷Rd抗炎的性能和功效，并提供人参皂苷Rd新的药用用途，即在抗炎药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂中的新应用。
为实现上述目的，本发明一方面提供一种人参皂苷Rd在制备抗炎药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂中的应用。
在筛选具有抗炎作用的天然活性成分的过程中，发明人发现人参的化学成分中人参皂苷Rd具有显著的抗炎作用。
其中，所述药物用于治疗急性炎症、慢性炎症的一种或多种。
其中，所述药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂由人参皂苷Rd和药学上可接受的载体组成。
其中，所述的人参皂苷Rd含量为1％～99.9％；优选为30～99.9％，进一步优选为60～99.9％，更进一步优选为80～99.9％，再更进一步优选为98～99.9％。
特别是，所述人参皂苷Rd的重量与所述制剂的总重量之比为0.01-100：100，优选为0.1～100：100，进一步优选为10～100：100。
特别是，药学上可接受的载体通常被保健专家认可用于这一目的且作为药剂的非活性成分。有关药学上可接受的载体的汇编可以在《药物赋形剂手册》(Handbook ofPharmaceutical excipients，第2版，由A.Wade和P.J.Weller编辑；AmericanPharmaceutical Association出版，Washington and The Pharmaceutical Press,London,1994)等工具书中找到。
尤其是，所述的载体包括赋形剂，如淀粉、水等；润滑剂，如硬脂酸镁等；崩解剂，如微晶纤维素等；填充剂，如乳糖等；粘结剂，如预胶化淀粉、糊精等；甜味剂；抗氧化剂；软膏基质；透皮促进剂；防腐剂、矫味剂、香料等；
其中，所述药物为口服制剂、外用制剂或针剂；所述的口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、口服液、滴剂、糖浆剂；所述的外用制剂为贴膏剂、软膏剂、栓剂等；所述的针剂为注射液、粉针剂或冻干粉针剂。
其中，所述保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂为口服制剂；所述的口服制剂为片剂、粉剂、颗粒剂、茶剂、丸剂、膏剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、酒剂、糖浆剂、滴剂等。
本发明另一方面提供一种具有抗炎作用的药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂，该药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂含有人参皂苷Rd。
其中，所述的人参皂苷Rd含量为1％～99.9％；优选为30～99.9％，进一步优选为60～99.9％，更进一步优选为80～99.9％，再更进一步优选为98～99.9％。
特别是，所述人参皂苷Rd的重量与所述制剂的总重量之比为0.01-100：100，优选为0.1～100：100，进一步优选为10～100：100。
特别是，所述药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂中还包括玄参提取物、生地提取物、麦冬提取物、黄芩提取物、猫爪草提取物、贝母提取物、薄荷提取物、黑芝麻提取物、生姜提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、香附提取物、青皮提取物、植物精油、熊果苷、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物。
所述药物可以采用本领域公知的方法制成各种剂型，如片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、贴膏剂，软膏剂、栓剂等。
与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点：
1、本发明对已知化合物人参皂苷Rd发掘了新的药用价值，将其用于抗炎，并可制备成抗炎药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂，从而为人参药材的应用开拓了一个新的领域。
2、本发明的系列实验研究证明人参皂苷Rd具有显著的抗炎功效。
3、本发明的人参皂苷Rd抗炎药理作用强，见效快、毒副作用小、安全性好，能够长期服用，具有良好的药用前景。
4、本发明的产品原料来源丰富、价廉、临床使用安全，制备工艺简单，可制成各种剂型，且服量小，使用方便，因此易于推广。
5、本发明既可采用单一成分的人参皂苷Rd抗炎活性成分制备抗炎药物，又可采用人参皂苷Rd与其它活性成分(例如与三七提取物、雷公藤提取物、柴胡提取物、粉防己取物、黄芩提取物、苦参提取物、草木樨提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物)共同组方，制备治疗炎症的复方药物。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步描述本发明所述配方的有益效果，这些实施例包括了本发明的人参皂苷Rd的胶囊、片剂、软胶囊剂的药效学试验。这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的配方思路、用途范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1人参皂苷Rd片剂
按照如下配比制备人参皂苷Rd片剂：
将人参皂苷Rd和淀粉混合均匀后，制成颗粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混合均匀后压制成10000片。
实施例2人参皂苷Rd胶囊剂
1、按照如下配比准备原料
人参皂苷Rd(纯度98％) 500g
淀粉 1000g
将人参皂苷Rd和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
实施例3人参皂苷Rd颗粒剂
1、按照如下配比准备原料
人参皂苷Rd(纯度63％) 10g
淀粉 1000g
将人参皂苷Rd和淀粉混合均匀后，制成颗粒装袋，制成10000袋。
实施例4人参皂苷Rd片剂
1、按照如下配比准备原料
将人参皂苷Rd、生地提取物、麦冬提取物和淀粉混合均匀后制粒，加入滑石粉和硬脂酸镁混匀后压制成10000片。
实施例5人参皂苷Rd胶囊剂
1、按照如下配比准备原料
将人参皂苷Rd、贝母提取物、维生素C和淀粉混合均匀后装胶囊，制成10000粒。
实施例6人参皂苷Rd颗粒剂
将人参皂苷Rd、黄芩提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。
实施例7人参皂苷Rd口服液
将人参皂苷Rd、香附提取物、青皮提取物，用乙醇溶解后加入葡萄糖糖浆至100％，即得。
实施例8人参皂苷Rd固体饮料
将人参皂苷Rd、黄芩提取物、维生素C和蔗糖粉混合均匀制成颗粒后装袋，制成10000袋。
实施例9人参皂苷Rd压片糖果
将人参皂苷Rd、木糖醇、柠檬酸、阿斯巴甜、薄荷香精混合均匀后制粒，加入硬脂酸镁混匀后压制成1000片。
实施例10人参皂苷Rd软膏剂
人参皂苷Rd(含量63％) 100g
水相(尼泊金甲酯、水) 250g
油相(十八醇、凡士林) 1000g
将水相加入油相中，搅拌，并加入人参皂苷Rd，即得。
实验例1人参皂苷Rd对二甲苯致鼠耳肿胀的影响
1.1实验动物及药剂
1.1.1实验动物：
雌雄昆明小鼠(SPF级)，体重18-22g，购于辽宁长生生物技术股份有限责任公司，质量合格证号：SCXK-(辽)2020-0001。
1.1.2试剂及受试药物：
地塞米松、二甲苯，购于上海化学试剂公司；
人参皂苷Rd(含量≥95％)，大连富生天然药物开发有限公司生产，以中国食品药品检定研究院提供的人参皂苷Rd为对照品进行HPLC检测，含量为96.2％。
1.2实验方法
KM小鼠20只，体重为18-22g，随机分组，每组10只。模型组、阳性对照组(地塞米松2mg/Kg)，人参皂苷Rd低剂量组(5mg/Kg)、人参皂苷Rd高剂量组(10mg/Kg)。小鼠灌胃给药30min后(模型组以同体积0.5％羧甲基纤维素钠灌胃)，将0.03ml二甲苯均匀涂抹于各组小鼠右耳的两面致炎，小鼠的左耳不涂作为对照；4h后脱颈椎处死，沿着小鼠耳廓剪下小鼠两耳，在左右耳相同位置取同等大小的圆形耳片(直径6mm)，分别称重，以两耳片的质量差作为耳肿胀度，并计算肿胀抑制率。
耳肿胀率(％)＝[右耳重(肿胀耳)-左耳重(对照耳)]/左耳重(对照耳)×100％。
肿胀抑制率(％)＝[(模型组耳肿胀率-试验组耳肿胀率)/模型组耳肿胀率]×100％。
1.3结果与结论
表1-1各组小鼠耳质量差、耳肿胀率、耳肿胀抑制率结果
与阳性药物组比较**P<0.01
与模型组比较，人参皂苷Rd药物组可显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀，具有显著的抗炎作用；其10mg/Kg给药剂量的耳肿胀抑制率明显优于地塞米松，具有较明显的抗炎效果。
实验例2人参皂苷Rd对小鼠流感病毒所致肺炎的影响
1.1实验动物及药剂
1.1.1实验动物：
ICR小鼠，20-30g，实验动物供应商：湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证：SCXK(湘)2019-0004，饲料供应商：江苏美迪森生物医药有限公司。1.1.2病毒及药物：
流感病毒(广州海关技术中心BSL-3实验室(呼吸疾病国家重点实验室高致病病原微生物研究室)。
人参皂苷Rd(含量≥95％)，大连富生天然药物开发有限公司生产，以中国食品药品检定研究院提供的人参皂苷Rd为对照品进行HPLC检测，含量为96.2％。
地塞米松购于上海化学试剂公司。
1.2实验方法
(1)病毒接种
流感病毒鼻腔接种：用200-300mL大小的烧杯，放入一团脱脂棉，然后倒入适量的乙醚(使脱脂棉变湿即可)，把装有脱脂棉的烧杯倒扣过来，把小鼠放入进行麻醉，见小鼠极度兴奋，明显成无力样时，即麻醉深度适中时马上取出，将乙醚麻醉后的小鼠仰卧，将鼠头仰起放置，滴鼻感染，每鼻孔稀释好的流感病毒0.03mL/每个鼻孔(15LD50)，空白对照用生理盐水代替病毒悬液。
(2)给药方法
药物组(10mg/kg、5mg/kg)、模型组、地塞米松对照组(2mg/kg)，分别于感染前一天开始常规灌胃给药，每天一次，连续给药5d，阳性对照组和模型组灌服相同体积的0.5％羧甲基纤维素钠。
(3)IL-2和TNF-a检测
于流感病毒感染后第5天、即给药后第六天，禁食8小时后，称体重、眼丛后静脉取血、留取各小组小鼠血液，分离血清，冰箱保存备用。按检测试剂盒操作说明进行各项检测分析，根据标准品检测与绘制标准曲线，计算IL-2和TNF-a浓度。
(4)肺病变组织学和病理学检查
取各试验组鼠肺、固定、包埋、切片染色、镜检等。
1.3试验结果
(1)小鼠肺部病理学结果显示，与正常组比，感染模型组动物肺组织出现肺出血，间质肺炎等病理变化。感染动物各组具体病变类型和程度如下：
表2-1流感病毒感染小鼠的肺部病理形态观察结果
与空白组比较，病毒组动物肺部病理学改变显著；药物低、高剂量组病变程度明显较病毒组轻，10mg/kg和5mg/kg药物对流感病毒引起的肺部病变具有较好的改善作用，高剂量组效果优于地塞米松。
(2)TNF-a与IL-2检测结果显示，不同浓度药物对TNF-a与IL-2均发挥了干预作用。其中高剂量组的疗效，优于地塞米松。
表2-2流感病毒感染小鼠肺匀浆中TNF-a、IL-2的表达量(n＝10)
与阳性药物组比较**P<0.01，*P<0.05
实验例3人参皂苷Rd对小鼠新型冠状病毒Delta变异株所致肺炎的影响
1.1实验动物及药剂
1.1.1实验动物：
hACE2小鼠，6-7周龄，20-40g，实验动物供应商：江苏集萃药康生物科技有限公司，实验动物生产许可证：SCXK(苏)2018-0008，饲料供应商：江苏美迪森生物医药有限公司。
1.1.2病毒及药物：
COVID-19 Delta病毒(广州海关技术中心BSL-3实验室(呼吸疾病国家重点实验室高致病病原微生物研究室)。
人参皂苷Rd(含量≥95％)，大连富生天然药物开发有限公司生产，以中国食品药品检定研究院提供的人参皂苷Rd为对照品进行HPLC检测，含量为96.2％。
地塞米松购于上海化学试剂公司。
1.2实验方法
1.2.1将hACE2转基因C57BL/6小鼠分为正常组、COVID-19 Detal病毒感染组、药物组(低剂量组10mg/kg，高剂量组20mg/kg)，阳性对照组(地塞米松5mg/kg)，每组8只。除正常组滴鼻给予PBS之外，其它各组小鼠滴鼻感染105PFU的COVID-19 Delta病毒。感染后2小时，各药物组小鼠灌胃给予药物，连续5日，1次/日。死亡或者濒死动物安乐死后解剖取肺，存活动物在感染后第5日解剖取肺。
1.2.2感染组每组取4例动物剖取肺部组织做病理学研究；取4例动物剖取肺部组织，采用Trizol法对肺组织匀浆上清进行提取总RNA，RT-qPCR检测炎症因子白介素1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)。
1.2.3肺部组织病理学研究具体操作步骤如下：
①固定包埋：固定(用4％的多聚甲醛固定)→洗涤修块，将组织修出平整的切面→用50％、70％、80％、95％、100％各级乙醇溶液进行脱水→分别浸入二甲苯I、II进行透明→分别浸入60℃蜡I、II透蜡→石蜡包埋
②切片染色：切片(厚度约为4um)→石蜡切片分别浸入透明剂I、透明剂II、透明剂Ⅲ脱蜡→100％、90％、80％、70％等各级酒精溶液中浸泡各5min→水洗→苏木素染色3min→水洗→0.5％盐酸乙醇分化数秒→自来水洗15min反蓝→伊红染色2min→分别浸入95％乙醇I、95％乙醇II、100％乙醇I、100％乙醇II、透明剂I、透明剂II、透明剂Ⅲ中进行脱水透明→中性树胶封存→显微镜观察拍照。
1.3试验结果
(1)小鼠肺部病理学结果显示，与正常组比，感染模型组动物肺组织出现肺出血，间质肺炎等病理变化。感染动物各组具体病变类型和程度如下：
表3-1 COVID-19 Delta病毒感染小鼠的肺部病理形态观察结果
以上病变各组间比较，各组存活动物病理学改变较死亡动物轻；药物低、高剂量组病变程度明显较病毒组轻，10mg/kg和20mg/kg药物对COVID-19 Delta病毒引起的肺部病变，具有较好的改善作用，高剂量组药物在肺出血和间质性肺炎方面病理改善优于地塞米松。
(2)肺部炎症因子mRNA表达结果显示，COVID-19 Detal病毒感染小鼠第5天，与正常组相比，病毒模型组IL-1β、MCP-1表达显著升高；与病毒模型组相比，人参皂苷Rd药物组的IL-1β、MCP-1炎症因子显著降低；且20mg/kg给药组抑制炎症介质过度表达的能力优于地塞米松。
表3-2 COVID-19 Detal病毒感染小鼠肺匀浆中IL-1β、MCP-1的表达量
实验例4人参皂苷Rd对急性肺损伤小鼠炎症反应的影响
1.1实验动物及药剂
1.1.1实验动物：
Balb/c小鼠，雄性，体重20-22g，购于辽宁长生生物技术股份有限责任公司，质量合格证号：SCXK-(辽)2020-0001。
1.1.2试剂及受试药物：
丙二醇，购于上海麦克林生化科技有限公司
生理盐水，购于昆明南疆制药有限公司
脂多糖、地塞米松，购于美国Sigma公司
戊巴比妥钠，购于上海化学试剂公司
酶联免疫吸附测定试剂盒、小鼠TNF-α检测试剂盒、小鼠IL-1β检测试剂盒、小鼠IL-6检测试剂盒、小鼠IL-18检测试剂盒，购于南京建成生物工程研究所
受试药物：人参皂苷Rd(含量≥95％)，大连富生天然药物开发有限公司生产，以中国食品药品检定研究院提供的人参皂苷Rd为对照品进行HPLC检测，含量为96.2％。
1.2实验方法
1.2.1实验分组及给药
Balb/c雄性小鼠，体重20-22g，按体重随机分为5组，每组8只：空白对照组(丙二醇-0.5％羧甲基纤维素钠)、模型组(LPS，15mg/kg)、人参皂苷Rd低剂量组(10mg/Kg)、人参皂苷Rd高剂量组(20mg/Kg)、地塞米松组(5mg/kg)。各组小鼠均腹腔注射，给药1h后，除空白对照组外，各组小鼠气管内滴注LPS 20μg进行造模，空白对照组气管内滴注等体积的PBS。
1.2.2小鼠ALI模型建立
给药1h后，建立小鼠ALI模型，小鼠腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg麻醉背位固定于手术台上，颈部备皮，切开皮肤，暴露气管，使用微量玻璃注射器气管滴注LPS20μg，随后将小鼠头朝上轻轻旋转手术台，使滴入的液体均匀分布于小鼠肺部，缝合皮肤切口。
1.2.3肺组织及BLAF中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18含量测定
造模24h后，腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg麻醉小鼠，取小鼠肺组织，在预冷的生理盐水中反复漂洗，去除血液，滤纸拭干，称重，按1:9比例(W:V＝1g:9ml)加入生理盐水，在冰水浴的条件下，用匀浆机制备组织匀浆，取小鼠肺组织匀浆上清液。
麻醉小鼠，分离气管，用预冷的0.5ml生理盐水对全肺进行灌洗，停留1min后用注射器缓缓回抽，重复三次，收集BLAF，4℃条件下，1600rpm/min，离心15min。
严格按照酶联免疫吸附测定试剂盒(ELISA)操作说明，检测小鼠肺组织匀浆上清液和BLAF上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18含量。
1.3结果
与空白对照组比较，模型组小鼠肺组织、肺泡灌洗液中中的TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-18含量均显著升高(P<0.01)；与模型组比较，人参皂苷Rd药物组、地塞米松组能显著降低小鼠肺组织、BLAF中TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-18含量，且人参皂苷Rd高剂量组的效果优于地塞米松(P<0.01)。
表4-1人参皂苷Rd对急性肺损伤小鼠肺组织炎症因子含量的影响(X±SD，n＝8)
与阳性药物组比较**P<0.01，*P<0.05
表4-2人参皂苷Rd对急性肺损伤小鼠肺泡灌洗液中炎症因子含量的影响(X±SD，n＝8)
与阳性药物组比较**P<0.01，*P<0.05
实验例5人参皂苷Rd对大鼠慢性阻塞性肺疾病的影响
1.1实验动物及药剂
1.1.1实验动物：
SD大鼠，雄性，200±20g，实验动物供应商：湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证：SCXK(湘)2019-0004，饲料供应商：江苏美迪森生物医药有限公司。
1.1.2药物：
人参皂苷Rd(含量≥95％)，大连富生天然药物开发有限公司生产，以中国食品药品检定研究院提供的人参皂苷Rd为对照品进行HPLC检测，含量为96.2％。
地塞米松购于上海化学试剂公司。
脂多糖(LPS，批号08168)购于Sigma公司
TNF-a检测酶联免疫吸附检测盒南京建成生物科技有限公司
IL-6 ELISA检测试剂盒南京建成生物科技有限公司1.2实验方法
(1)动物分组
将大鼠进行适应性喂养(20-25℃，湿度50-60％)1周后，随机分成空白组、模型组、阳性对照组、药物组高剂量组、药物低剂量组；其中模型组12只，其余各组10只。
(2)模型制备
除空白组以外，其余各组以烟熏联合气管内注射脂多糖，制备慢性阻塞性肺疾病模型。
烟熏方法：将大鼠置于有机玻璃箱内，每日烟熏1h，每次25支香烟；持续4周。
注射脂多糖方法：分别于烟熏日的第1、8、15、22天，用2％戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉大鼠，将其头低位固定，暴露声门，快速将0.1ml(1mg/ml)脂多糖注入气管，将大鼠直立，并左右摇晃，是药物均匀分布与两肺。
模型验证：于烟熏结束后，取2只模型组大鼠，处死，剖取其肺组织，进行病理学变化观察。大鼠肺组织呈明显的病理状态，且肺上皮细胞变性、坏死，细胞间隙伴有大量炎性细胞浸润，表明造模成功。
(3)给药方法
药物组高剂量组(10mg/kg)、药物低剂量组(5mg/kg)、地塞米松对照组(2mg/kg)，药物以0.5％羧甲基纤维素钠配制，灌胃体积为10ml/kg，每天1次，连续12天。模型组和空白组灌胃等体积0.5％羧甲基纤维素钠。
(4)TNF-a和IL-6检测
末次给药后，大鼠以2％戊巴比妥钠腹腔注射、进行麻醉，仰卧位固定，在腹主动脉采血5ml，并取其血清，严格按照实际说明书操作，采用酶联免疫吸附发检测血清中TNF-a和IL-6水平。数据以表示，p＜0.05，代表具有统计学意义。
(5)肺组织病理学检查
取各试验组鼠肺、固定、包埋、切片染色、镜检等。
1.3试验结果
(1)TNF-a和IL-6检测
TNF-a与IL-6检测结果显示，不同浓度药物对TNF-a与IL-6均发挥了干预作用。其中高剂量组的疗效，优于地塞米松。
表5-1大鼠血清中TNF-a、IL-6的表达量(n＝10)
与阳性药物组比较**P<0.01
(2)大鼠肺部病理学结果显示，与空白对照组，模型组动物肺组织出现明显病理变化。
表5-2实验组大鼠的肺部病理形态观察结果
病变各组间比较，药物低、高剂量组病变程度明显较模型组轻，10mg/kg和5mg/kg药物对肺部病变具有较好的改善作用，高剂量组效果优于地塞米松。
实验例6人参皂苷Rd对慢性哮喘小鼠气道炎症的抑制作用
1.1实验动物及药剂
1.1.1实验动物：
BALB/c小鼠，雌性，22±2g，实验动物供应商：湖南斯莱克景达实验动物有限公司，实验动物生产许可证：SCXK(湘)2019-0004，饲料供应商：江苏美迪森生物医药有限公司。
1.1.2药物：
人参皂苷Rd(含量≥95％)，大连富生天然药物开发有限公司生产，以中国食品药品检定研究院提供的人参皂苷Rd为对照品进行HPLC检测，含量为96.2％。
地塞米松购于上海化学试剂公司。
卵蛋白(OVA)购于Sigma公司
TNF-a检测酶联免疫吸附检测盒南京建成生物科技有限公司
IL-6 ELISA检测试剂盒南京建成生物科技有限公司
1.2实验方法
(1)动物分组
将小鼠进行适应性喂养(20-25℃，湿度50-60％)1周后，随机分成空白组、模型组、阳性对照组、药物组高剂量组、药物低剂量组；其中模型组12只，其余各组10只。
(2)模型制备
除空白组以外，其余各组小鼠分别于第1，7，14天腹腔注射0.2ml致敏液(含有3mgOVA与1mg氢氧化铝)。第21天开始，各组小鼠放入雾化器中，吸入2.5％OVA激发。每日1次，每次30min，连续10天。
分别于雾化激发的第5天与第10天，取模型组小鼠1只，进行模型验证。
(3)给药方法
药物组高剂量组(10mg/kg)、药物低剂量组(5mg/kg)、地塞米松对照组(2mg/kg)，药物以0.5％羧甲基纤维素钠配制，每天1次，连续7天。
模型组和空白组灌胃等体积0.5％羧甲基纤维素钠。
(4)检测
小鼠末次给药24小时后，采用吸入过量乙醚致死。取小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)，并离心，上清液用于IL-4、IL-5与IL-10检测。
沉淀加入磷酸缓冲液0.5ml，重悬混匀，取混悬液适量，继续以磷酸缓液稀释20倍后，于光学显微镜下进行细胞总数计数；进行吉姆萨染色，对其中的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞进行计数，计算其百分比。
1.3试验结果
(1)IL-4、IL-5与IL-10检测
结果显示，不同剂量药物对哮喘小鼠均发挥了干预作用。其中高剂量组的疗效，优于地塞米松。
表6-1小鼠BALF中IL-4、IL-5与IL-10的表达量(n＝10)
与阳性药物组比较**P<0.01，*P<0.05
(2)炎症细胞计数
表6-2各组炎症细胞计数(105/ml，n＝10)
与阳性药物组比较**P<0.01，*P<0.05
结果显示，与空白组比较，模型组中总细胞个数及各炎症细胞数量均明显升高。不同剂量药物对哮喘小鼠均发挥了干预作用，与模型组比较，给药组可显著降低炎症细胞数量。其中高剂量组的炎症细胞数量，明显低于地塞米松对照组。
Claims (10)
1.人参皂苷Rd在制备用于缓解或治疗急性炎症或慢性炎症的所致疾病的药物或保健食品/功能食品/膳食补充剂中的应用。
2.如权利1所述的应用，其特征是，所述的急性炎症，如为流感病毒性肺炎、新冠病毒(如COVID-19Delta病毒)性肺炎、急性肺损伤性炎症。
3.如权利1所述的应用，其特征是，所述的慢性炎症，如为慢性阻塞性肺炎、慢性哮喘性气道炎症。
4.如权利要求1所述的应用，其特征是，人参皂苷Rd单独的引用。
5.如权利要求1所述的应用，其特征是，所述缓解或治疗的效果优于地塞米松。
6.如权利1所述的应用，其特征是，所述药物或保健食品/功能食品/膳食补充剂中人参皂苷Rd的含量为1％～99.9％。
7.如权利1所述的应用，其特征是，所述的人参皂苷Rd可以是从三七、人参、西洋参等植物的根、茎、叶、花、果实中提取分离获得，也可以是利用化学合成、化学转化以及生物转化等工艺制备而成。
8.如权利要求1所述的应用，其特征是，所述药物或保健食品/功能食品/膳食补充剂由人参皂苷Rd和药学上可接受的载体或食品上可接受的载体组成；或者，所述药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂还含有崩解剂、湿润剂、粘合剂、填充剂、吸收促进剂、溶剂、润滑剂、表面活性剂、香味剂、甜味剂、抗氧化剂、防腐剂和色素、软膏基质、透皮促进剂等其中一种或几种；或者，所述的药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂还包括玄参提取物、生地提取物、麦冬提取物、黄芩提取物、猫爪草提取物、贝母提取物、薄荷提取物、黑芝麻提取物、生姜提取物、葡萄子提取物、石榴子提取物、香附提取物、青皮提取物、植物精油、熊果苷、维生素C及其衍生物或维生素E及其衍生物中的一种或多种。
9.如权利要求8所述的应用，其特征是，所述人参皂苷Rd的重量与所述药物或保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂的总重量之比为0.01-100：100。
10.如权利要求1或8所述的应用，其特征在于，所述的药物为口服制剂、外用制剂或注射剂，优选所述的口服制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、口服液、滴剂、糖浆剂等；所述的外用制剂为贴膏剂、软膏剂、栓剂等；所述的针剂为注射液、粉针剂或冻干粉针剂等；或者，所述的保健食品/药食同源食品/功能食品/膳食补充剂为口服制剂，优选所述的口服制剂为片剂、粉剂、颗粒剂、茶剂、丸剂、膏剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、酒剂、糖浆剂、滴剂等。
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