CN116350732B - 用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂及其制备方法 - Google Patents
用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116350732B CN116350732B CN202310195575.2A CN202310195575A CN116350732B CN 116350732 B CN116350732 B CN 116350732B CN 202310195575 A CN202310195575 A CN 202310195575A CN 116350732 B CN116350732 B CN 116350732B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- parts
- chinese medicine
- traditional chinese
- group
- pulmonary fibrosis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 154
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 51
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 title claims abstract description 50
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 title claims abstract description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 32
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 244000197580 Poria cocos Species 0.000 claims abstract description 15
- 235000008599 Poria cocos Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 244000163122 Curcuma domestica Species 0.000 claims abstract description 14
- 235000002722 Dioscorea batatas Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 235000006536 Dioscorea esculenta Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 240000001811 Dioscorea oppositifolia Species 0.000 claims abstract description 14
- 235000003416 Dioscorea oppositifolia Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 241000756943 Codonopsis Species 0.000 claims abstract description 12
- 235000003392 Curcuma domestica Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 235000003373 curcuma longa Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 235000013976 turmeric Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 claims abstract description 11
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 claims abstract description 10
- 244000037364 Cinnamomum aromaticum Species 0.000 claims abstract description 10
- 235000014489 Cinnamomum aromaticum Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- 241000361919 Metaphire sieboldi Species 0.000 claims abstract description 10
- 241000675108 Citrus tangerina Species 0.000 claims abstract description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 29
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 14
- 240000001341 Reynoutria japonica Species 0.000 claims description 9
- 235000018167 Reynoutria japonica Nutrition 0.000 claims description 9
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 8
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 244000003416 Asparagus officinalis Species 0.000 claims description 5
- 235000005340 Asparagus officinalis Nutrition 0.000 claims description 5
- 241000007126 Codonopsis pilosula Species 0.000 claims description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 5
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 claims description 5
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 3
- 240000002381 Prunus davidiana Species 0.000 claims description 2
- 235000015533 Prunus davidiana Nutrition 0.000 claims description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 28
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 7
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 abstract description 5
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 abstract description 2
- 244000292697 Polygonum aviculare Species 0.000 abstract 1
- 235000006386 Polygonum aviculare Nutrition 0.000 abstract 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 109
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 65
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 59
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 32
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 25
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 25
- 229940124647 MEK inhibitor Drugs 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 17
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 16
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 14
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 13
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 12
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 11
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 11
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 11
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 11
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 11
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 10
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 10
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 9
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 9
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 9
- 102100031480 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Human genes 0.000 description 9
- 101710146526 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Proteins 0.000 description 9
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 9
- 101100381978 Mus musculus Braf gene Proteins 0.000 description 9
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 9
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 9
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 8
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 8
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 8
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 8
- 230000006870 function Effects 0.000 description 8
- 238000011160 research Methods 0.000 description 8
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 7
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 7
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 7
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 7
- ISWRGOKTTBVCFA-UHFFFAOYSA-N pirfenidone Chemical compound C1=C(C)C=CC(=O)N1C1=CC=CC=C1 ISWRGOKTTBVCFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 7
- KKVYYGGCHJGEFJ-UHFFFAOYSA-N 1-n-(4-chlorophenyl)-6-methyl-5-n-[3-(7h-purin-6-yl)pyridin-2-yl]isoquinoline-1,5-diamine Chemical compound N=1C=CC2=C(NC=3C(=CC=CN=3)C=3C=4N=CNC=4N=CN=3)C(C)=CC=C2C=1NC1=CC=C(Cl)C=C1 KKVYYGGCHJGEFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- 208000032023 Signs and Symptoms Diseases 0.000 description 6
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 201000001155 extrinsic allergic alveolitis Diseases 0.000 description 6
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 6
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 6
- 208000022098 hypersensitivity pneumonitis Diseases 0.000 description 6
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 229960003073 pirfenidone Drugs 0.000 description 6
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 6
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 6
- 206010001889 Alveolitis Diseases 0.000 description 5
- 241000721047 Danaus plexippus Species 0.000 description 5
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 5
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 5
- 241001619461 Poria <basidiomycete fungus> Species 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 5
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 5
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 5
- 210000003456 pulmonary alveoli Anatomy 0.000 description 5
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 4
- 206010014080 Ecchymosis Diseases 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 4
- 208000029523 Interstitial Lung disease Diseases 0.000 description 4
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 4
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 4
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N curcumin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)CC(=O)\C=C\C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N 0.000 description 4
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 4
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 4
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 238000004868 gas analysis Methods 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- 230000037308 hair color Effects 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 4
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 4
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 3
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 3
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 3
- 206010024642 Listless Diseases 0.000 description 3
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 3
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 208000031971 Yin Deficiency Diseases 0.000 description 3
- 230000009798 acute exacerbation Effects 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 238000005904 alkaline hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 3
- 230000001914 calming effect Effects 0.000 description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 3
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 3
- 208000018631 connective tissue disease Diseases 0.000 description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 3
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 3
- 238000011994 high resolution computer tomography Methods 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 208000017971 listlessness Diseases 0.000 description 3
- 230000004199 lung function Effects 0.000 description 3
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 3
- 239000002398 materia medica Substances 0.000 description 3
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 230000009325 pulmonary function Effects 0.000 description 3
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 3
- 208000010110 spontaneous platelet aggregation Diseases 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 235000014375 Curcuma Nutrition 0.000 description 2
- 101000876610 Dictyostelium discoideum Extracellular signal-regulated kinase 2 Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010007457 Extracellular Signal-Regulated MAP Kinases Proteins 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001052493 Homo sapiens Mitogen-activated protein kinase 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000243684 Lumbricus Species 0.000 description 2
- 206010049459 Lymphangioleiomyomatosis Diseases 0.000 description 2
- 244000131316 Panax pseudoginseng Species 0.000 description 2
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 2
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 206010035600 Pleural fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 2
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 2
- 206010041956 Stasis syndrome Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 208000005634 blind loop syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 201000009267 bronchiectasis Diseases 0.000 description 2
- 230000003182 bronchodilatating effect Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 208000027744 congestion Diseases 0.000 description 2
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 2
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 2
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 2
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 2
- 230000003908 liver function Effects 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000027939 micturition Effects 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000007119 pathological manifestation Effects 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002936 tranquilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- UIAGMCDKSXEBJQ-IBGZPJMESA-N 3-o-(2-methoxyethyl) 5-o-propan-2-yl (4s)-2,6-dimethyl-4-(3-nitrophenyl)-1,4-dihydropyridine-3,5-dicarboxylate Chemical compound COCCOC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OC(C)C)[C@H]1C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1 UIAGMCDKSXEBJQ-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- 206010002660 Anoxia Diseases 0.000 description 1
- 241000976983 Anoxia Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 241000345998 Calamus manan Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035484 Cellulite Diseases 0.000 description 1
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 244000223760 Cinnamomum zeylanicum Species 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 description 1
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 208000019505 Deglutition disease Diseases 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 102100023266 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710146529 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010072082 Environmental exposure Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 101710088172 HTH-type transcriptional regulator RipA Proteins 0.000 description 1
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000533950 Leucojum Species 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 241000078511 Microtome Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 206010049752 Peau d'orange Diseases 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 240000005809 Prunus persica Species 0.000 description 1
- 208000001431 Psychomotor Agitation Diseases 0.000 description 1
- 206010037423 Pulmonary oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 101150046792 RAP1B gene Proteins 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010038743 Restlessness Diseases 0.000 description 1
- 206010039424 Salivary hypersecretion Diseases 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 1
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 230000007953 anoxia Effects 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000002300 anti-fibrosis Effects 0.000 description 1
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 1
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 1
- 239000010425 asbestos Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000004900 autophagic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 208000013116 chronic cough Diseases 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 235000012754 curcumin Nutrition 0.000 description 1
- 229940109262 curcumin Drugs 0.000 description 1
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 description 1
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 231100000020 developmental retardation Toxicity 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N diferuloylmethane Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)CC(=O)C=CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000011121 diffuse pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000000916 dilatatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 206010013781 dry mouth Diseases 0.000 description 1
- 208000026500 emaciation Diseases 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011841 epidemiological investigation Methods 0.000 description 1
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000003777 experimental drug Substances 0.000 description 1
- 238000000556 factor analysis Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 1
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000005337 ground glass Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000013115 immunohistochemical detection Methods 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000010832 independent-sample T-test Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 210000001821 langerhans cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000005906 menstruation Effects 0.000 description 1
- 230000006996 mental state Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 1
- HYIMSNHJOBLJNT-UHFFFAOYSA-N nifedipine Chemical compound COC(=O)C1=C(C)NC(C)=C(C(=O)OC)C1C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O HYIMSNHJOBLJNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029410 night sweats Diseases 0.000 description 1
- 230000036565 night sweats Effects 0.000 description 1
- 229960000715 nimodipine Drugs 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000007427 paired t-test Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 208000037920 primary disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 208000005333 pulmonary edema Diseases 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 1
- 235000012950 rattan cane Nutrition 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 210000001034 respiratory center Anatomy 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 230000011506 response to oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 229910052895 riebeckite Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000026451 salivation Diseases 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 229940126673 western medicines Drugs 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
本发明公开了一种用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂及其制备方法。该中药制剂是由以下重量份数的原料药制成:党参15~20份、天冬10~15份、山药10~20份、桃仁10~15份、姜黄5~10份、茯苓10~15份、桂枝10~15份、橘络3~5份、地龙5~15份、首乌藤10~15份。本发明提供的中药复方制剂以益气养阴、活血通络为主要治法,进而治疗特发性肺纤维化缓解期。大量临床经验及试验结果表明所述中药制剂能够有效减轻患者症状、改善生活质量,价格低廉、依从性好、不良反应少,高度体现了以络论治呼吸系统疾病的学术思想和用药特色。其制备方法适合工业化生产,便于开发应用。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂技术领域,具体地说是涉及中医药内治技术治疗呼吸系统疾病相关领域,尤其涉及一种用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂及其制备方法。
背景技术
特发性肺纤维化是一种慢性、进行性的纤维化间质性肺疾病,临床表现为进行性呼吸困难和肺顺应性显著降低,病理特征表现为弥漫性肺泡炎、肺成纤维细胞和肌成纤维细胞大量增殖活化以及细胞外基质大量沉积,肺部组织学、病理学及胸部高分辨率CT的特征与普通型间质性肺炎相似,最终导致肺间质逐渐瘢痕化并出现进行性呼吸衰竭。流行病学调查显示,IPF发病率呈逐年递增趋势,每年10万人中有2~30个新发病例,且在65岁以上人群中更为高发。目前研究认为,IPF发病机制包括细胞外基质沉积、上皮细胞间充质转化、氧化应激反应、炎症反应、细胞自噬、细胞衰老、细胞凋亡等多种学说。由于IPF致死率较高,严重影响生活质量,是现代医学面临的治疗难题。目前IPF管理仍以改善症状、改善健康状况和保护肺功能为目标。
2015年美国胸科学会/欧洲呼吸协会/日本胸科协会/拉丁美洲胸科协会联合发表的《特发性肺纤维化临床治疗推荐指南》中推荐尼达尼布和吡非尼酮用于IPF治疗,但由于不良反应较多、价格昂贵等原因导致临床使用受限。肺移植是终末期IPF的重要治疗手段,但其五年生存率仅44%,且存在风险与禁忌症,在二年内死亡风险超过50%。中医药强调整体观念与辨证论治,在复杂疾病多靶点系统论治中具有独到优势,因此探索中医药治疗方法有效防治特发性肺纤维化缓解期是目前重要的研究热点,研制一种用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂成为目前亟待解决的问题。
发明内容
为了解决现有技术存在的问题,本发明目的是提供一种用于治疗特发性肺纤维化稳定期的中药制剂及其制备方法。本发明提供的中药制剂的组成是基于肺络病理论提出的“肺虚络瘀”的核心病机,以“络以通为用”的治络大法为指导,配合“虫以通络”、“理气通络”、“辛以通络”、“藤以通络”之治络技巧所拟定,配伍方药主要体现益气养阴、活血通络中医治法,进而治疗特发性肺纤维化缓解期。根据特发性肺纤维化缓解期的临床表现,在中医肺络病理论指导下的辨证论治思维认为“肺虚络瘀”为该病期的病机关键,遣以益气养阴、活血通络之中药制剂,在临床防治特发性肺纤维化进展中疗效显著。大量临床经验、临床试验及动物实验结果表明该法及本发明提供的中药制剂治疗机制多样,能够有效减轻患者症状、提高生存质量,且所述的中药制剂价格低廉、依从性好、不良反应少,高度体现了以络论治呼吸系统疾病的学术思想和用药特色。此外,其制备方法适合工业化生产,便于开发应用。
为了实现上述目的,本发明提供以下技术方案。
一种用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂,其特征在于:包括以下重量份数的中草药原料组成:党参15~20份,天冬10~15份,山药10~20份,桃仁10~15份,姜黄5~10份,茯苓10~15份,桂枝10~15份,橘络3~5份,地龙5~15份,首乌藤10~15份。
本发明经优化的重量份数及中草药原料组成为:党参15份,天冬10份,山药10份,桃仁10份,姜黄10份,茯苓10份,桂枝10份,橘络3份,地龙5份,首乌藤10份。
本发明用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂制备方法具体包括以下步骤:步骤1、按重量份数称取党参、天冬、山药、在容器中再先捣碎的桃仁、姜黄、茯苓、桂枝、橘络、地龙、首乌藤,以上药物放入容器中,加入冷水浸泡,水超过药材表面2~4cm,浸泡时间30~45min;
步骤2、先煎步骤1中浸泡后药材和水,用武火煮沸药液5min后,文火慢煎40min,煎煮后倒出汤剂100-150ml,保留剩余药料;
步骤3、将剩余药料置于容器中,加入冷水,水超过药材表面2~4cm,用武火将药液煮沸5min后,文火慢煎40min,煎煮后再次倒出汤剂100-150ml,并与步骤2中倒出的汤剂混合并充分混匀;
步骤4、将步骤3所得汤剂冷却至50℃~60℃,藏于2℃~5℃摄氏度保存以备服用;
步骤5、服用前需将药液加热至30℃~45℃。
本发明所述容器为砂锅或陶罐。
本发明所述冷水的温度是4-25 ℃。
本发明提供的用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂中各组成成分的药理作用及功效如下。
党参:甘,平,归脾、肺经。功善补脾益肺,养血生津。《本草正义》:“党参力能补脾养胃,润肺生津,健运中气,本与人参不甚相远。其尤可贵者,则健脾运而不燥,滋胃阴而不湿,润肺而不犯寒凉,养血而不偏滋腻,鼓舞清阳,振动中气,而无刚燥之弊。”药理学研究表明,党参具有增强免疫功能、兴奋呼吸中枢、抗缺氧等作用。党参为本方君药以补益肺脾之气,养血生津以补益气滋养空虚之肺络,以治本虚。
天冬:甘、苦、寒,归心、肺、胃经。具有养阴润肺,益胃生津,清心除烦之功效。《本草纲目》:“润燥滋阴,清金降火。”药理学研究表明,天冬酰胺具有镇咳、祛痰、平喘作用。此外,天冬具有增强体液、细胞免疫等作用。本方以天冬与党参共为君药,天冬可达补益肺之阴津,充养肺络之功。
山药:甘、平。归脾、肺、肾经。具有益气养阴,补脾肺肾,涩精止带之功效。 《药性论》:“补五劳七伤……患人体虚羸,加而用之。”药理学研究表明,山药多糖能提高非特异性免疫功能、特异性细胞免疫和体液免疫功能。山药多糖、总黄酮和山药稀醇提取物具有抗氧化、抗衰老作用。本方以山药为臣药,与君药协同以增强补益肺肾气阴之功效。
桃仁:苦,甘,平。归心、肝、大肠经。具有活血祛瘀,润肠通便,止咳平喘功效。《别录》:“止咳逆上气,消心下坚,除卒暴击血,破癥瘕,通脉,止痛。”药理学研究表明,桃仁具有抗纤维化,镇咳平喘,降低血管阻力,抑制血小板聚集,抗炎等作用。本方以桃仁活血通络以疏通血络之瘀塞,并能止咳平喘以缓解主要症状。
姜黄:辛、苦、温,归肝、脾经。具有活血行气,通经止痛功效。《草述》:“治气证痞证,胀满喘噎。”《唐本草》:“下气,破血。”药理学研究表明,姜黄素能抑制血小板聚集,降低血浆黏度和全血黏度。此外,姜黄具有抗炎、抗氧化作用。本药与桃仁协同活血通络以治其标。
茯苓:甘、淡、平。归心、肺、脾、肾经。具有利水渗湿,健脾,宁心安神功效。《世补斋医书》:“茯苓一味,为治痰主药。痰之本,水也,茯苓可以行水。痰之动,湿也,茯苓又可行湿。”药理学研究表明,茯苓具有利尿,镇静,增强免疫等作用。本方以茯苓健脾渗湿,以除生痰之源,扶正祛邪防止痰湿生成以阻滞肺络。
桂枝:辛、甘、温。归心、肺、膀胱经。具有发汗解肌,温通经脉,助阳化气,平冲降逆之功效。《本经疏证》:“能利关节,温通经脉……其用之之道有六:曰和营、曰通阳,曰利水,曰下气,曰行瘀,曰补中。”药理学研究表明,桂枝具有扩张血管,改善血液循环,抗炎,抗过敏等作用。本发明取桂枝辛散温通之性以温通经络,属“辛以通络”之用药特色。
橘络:味苦,性平。归脾、肺经。功擅理气、化痰、通络。《纲目拾遗》:“橘络通经络滞气、脉胀”、“橘丝专能宣通经络滞气,予屡用以治卫气逆于肺之脉胀甚有效”。方中采用橘络以通肺络之气滞。
地龙:味苦,性寒。归肝、脾、膀胱经。功擅通络、平喘、清热定惊。现代药理研究显示其具有抗凝、促纤溶、抑制血小板聚集,抗组胺反应、平喘等多种功效。属“虫以通络”的特色用药方法。
首乌藤:甘,平。归心,肝经。具有养血安神,祛风通络功效。《本草从新》:“补中气,行经络,通血脉,治劳伤。”药理学研究表明其具有抗氧化,抗慢性炎症,促进免疫功能作用。本发明以首乌藤以疏风畅络,属“藤以通络”之特色用药。
本发明提供的中药制剂以络病理论为指导,基于“肺虚络瘀”病机,结合多种特色通络治法组方。方中以党参、天冬为君,其中党参主以补气且能促进养血生津,天冬主以养阴生津,二者合用共奏益气补肺、养阴润肺之功效,进而补益滋养肺络以治其本;山药、姜黄、茯苓、桃仁共为臣药。其中山药益气养阴以助君药扶正,茯苓健脾渗湿以防脾虚生湿化痰阻滞络脉,山药与茯苓相配二者协同可补脾益肺,培土生金以助正气恢复;姜黄活血行气,其在活血化瘀同时尚能通血中之气滞,桃仁功善活血化瘀以通络中之瘀阻,二者协同活血祛瘀以通络;桂枝、橘络、地龙、首乌藤作为佐药,以体现“辛以通络”、“虫以通络”、“理气通络”和“藤以通络”之用药特色,四者合用共助臣药以疏通络脉以助君药恢复人体之正气。以上药物相配伍,共奏益气养阴,活血通络之功,方证相应,故能取效。
专利发明人在多年临床观察、经验总结的基础上,认为特发性肺纤维化缓解期的核心病机为“肺虚络瘀”。证属本虚标实,气阴两虚,肺络亏虚为本,瘀、痰、气滞互结阻于肺络为标,其中以瘀血阻络为主。在上述理论支持下,提供本发明的中药制剂,具有益气养阴、活血通络功效,本发明的临床试验及动物实验均证实其具有良好的疗效。
与现有技术相比,本发明的有益效果如下:
本发明提供的中药制剂在治疗特发性肺纤维化缓解期方面具有一定特色和优势,本中药制剂治疗机制多样,具有多层次,多靶点特点,通过多个方面干预机制来实现减轻肺水肿、抑制肺泡炎及成纤维细胞灶的形成,进而改善肺部纤维化病理改变和延缓纤维化进程。在临床实践中,该中药制剂在治疗特发性肺纤维化缓解期具有积极的作用,实践证实该中药制剂能够有效缓解特发性肺纤维化缓解期患者咳嗽、咳痰、喘促气短等主要症状,改善患者生活质量,延缓疾病进展。
与现有治疗技术相比,本发明提供的中药制剂具有安全性高、疗效确切、不良反应少、无创伤、治疗价格低廉、应用范围广等优势;此外,配合西药治疗能够起到协同增效作用,为特发性肺纤维化缓解期治疗提供了有效的治疗药物。
附图说明
图1为各组大鼠肺组织肉眼观察示意简图。注:A.空白对照组(7d) ;B.模型对照组(7d) ;C.西药组(7d) ;D.中药组(7d);E.空白对照组(28d) ;F.模型对照组(28d) ;G.西药组(28d) ;H.中药组(28d)。
图2为各组大鼠肺组织HE染色观察(HE 显色,× 200)示意简图。注: A.空白对照组(7d) ;B.模型对照组(7d) ;C.西药组(7d) ;D.中药组(7d);E.空白对照组(28d) ;F.模型对照组(28d) ;G.西药组(28d) ;H.中药组(28d)。
图3为各组大鼠肺组织Masson染色观察(Masson 显色,× 200)示意简图。注:A.空白对照组(7d) ;B.模型对照组(7d) ;C.西药组(7d) ;D.中药组(7d);E.空白对照组(28d) ;F.模型对照组(28d) ;G.西药组(28d) ;H.中药组(28d)。
图4为免疫组化法测定各组大鼠肺组织p-MEK1/2表达水平照片。注:A.空白对照组(7d) ;B.模型对照组(7d) ;C.西药组(7d) ;D.中药组(7d);E.空白对照组(28d) ;F.模型对照组(28d) ;G.西药组(28d) ;H.中药组(28d)。
图5为免疫组化法测定各组大鼠肺组织p-ERK1/2表达水平照片。注:A.空白对照组(7d) ;B.模型对照组(7d) ;C.西药组(7d) ;D.中药组(7d);E.空白对照组(28d) ;F.模型对照组(28d) ;G.西药组(28d) ;H.中药组(28d)。
图6为免疫组化法测定各组大鼠肺组织α-SMA表达水平照片(DAB 显色,×400倍)。注:A.空白对照组(7d) ;B.模型对照组(7d) ;C.西药组(7d) ;D.中药组(7d);E.空白对照组(28d) ;F.模型对照组(28d) ;G.西药组(28d) ;H.中药组(28d)。
图7为各组大鼠肺组织Rap1A、B-Raf蛋白表达水平示意简图。注:1.空白对照组 2.模型对照组 3.西药组 4.中药组。
图8为各组大鼠肺组织MEK1/2、p-MEK1/2蛋白表达水平示意简图。注:1.空白对照组 2.模型对照组 3.西药组 4.中药组。
图9为各组大鼠肺组织ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平示意简图。注:1.空白对照组 2.模型对照组 3.西药组 4.中药组。
图10为各组大鼠肺组织α-SMA、Col-I、Col-Ⅲ蛋白表达水平示意简图。注:1.空白对照组 2.模型对照组 3.西药组 4.中药组。
具体实施方式
下面结合附图和具体实例对本发明作进一步详细说明。
实施例1:一种用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂及其制备方法。
一种用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂,是由如下重量份数的中草药原料组成:党参15份、天冬10份、山药10份、桃仁10份、姜黄10份、茯苓10份、桂枝10份、橘络3份、地龙5份、首乌藤10份。
所述用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂的制备方法,具体包括以下步骤。
步骤1、按上述重量份数称取党参、天冬、山药、桃仁、姜黄、茯苓、桂枝、橘络、地龙、首乌藤,桃仁需在容器中捣碎。以上药物放入容器中,加入冷水浸泡,水超过药材表面2~4cm,浸泡时间30~45min。
步骤2、先煎步骤1中浸泡后药材和水,用武火煮沸药液5min后,文火慢煎40min,煎煮后倒出汤剂100-150ml,保留剩余药料。
步骤3、将剩余药料置于容器中,加入冷水,水超过药材表面2~4cm,用武火将药液煮沸5min后,文火慢煎40min,煎煮后再次倒出汤剂100-150ml,并与步骤2中倒出的汤剂混合并充分混匀。
步骤4、将步骤3所得汤剂冷却至50℃~60℃,冷藏于2℃~5℃摄氏度保存以备服用。
步骤5、服用前需将药液加热至30℃~45℃。
所述容器为砂锅或陶罐。
所述冷水的温度是4-25 ℃。
注意事项:(1)煎药时药注意搅拌药料,让药材充分煎煮;(2)药液沸腾前需要盖紧锅盖,沸腾后可将锅盖留出缝隙使蒸汽排出;(3)药液保存时需要放置到密闭容器中,置于2~5℃冰箱中冷藏。
所述治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂的服用方法为:(1)按配方每付汤药服用1天,每天3次,早中晚三次饭后30min服用(75ml~100ml),服用前将药液加温到50℃。(2)服用时与其他中成药、西药间隔30min以上。(3)服用汤药期间,禁食辛辣、腥膻发物、生冷、油腻、酸涩的食物。
实施例2: 本发明提供的中药制剂联合西医常规治疗特发性肺纤维化缓解期患者的临床疗效观察。
1、临床资料:
1.1一般资料:
本临床观察为随机、对照设计,90例患者来源于2019年01月至2021年01月期间于辽宁中医药大学附属医院呼吸科住院的特发性肺纤维化缓解期患者,所有患者按照随机数字表随机分为治疗组和对照组,每组45例,试验期间治疗组脱落5例、对照组脱落5例,最后纳入统计共计80例,其中治疗组40例、对照组40例。各组患者一般资料如下,见表1,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。
表1.两组患者一般资料比较。
1.2特发性肺间质纤维化缓解期西医诊断标准。
参照美国胸科学会(American Thoracic Society,ATS)、欧洲呼吸学会(EuropeanRespiratory Society,ERS)、日本呼吸学会(Japanese Respiratory Society,JRS)和拉丁美洲胸科学会(Latin American Thoracic Association,ALAT)制定的2018年特发性肺纤维化诊断临床实践指南指定:(1)排除其他已知原因的ILD(如家庭或职业环境暴露、结缔组织病和药物毒性等),和(2)或(3)之一。(2)HRCT出现UIP特征表1)。(3)取得肺组织标本患者可将具体结合HRCT类型(表1)和组织学类型(表2)。
表1.胸部HRCT类型。
类型 | 影像特征 |
UIP型 | (1)以胸膜下肺基底部分布为主;分布往往具有异质性;(2)伴或不伴外周牵引的牵拉性支气管扩张或支气管扩张的蜂窝影 |
可能UIP型 | (2)以胸膜下肺基底部分布为主;分布往往具有异质性;(2)伴外周牵拉性支气管扩张或支气管扩张的网状影;(3)可能有轻度的磨玻璃影 |
不确定UIP型 | (1)以胸膜下肺基底部分布为主;(2)细微的网状影;可能有轻度的磨玻璃影或结构扭曲(“早期普通型间质性肺炎型”);(3)肺纤维化CT特征(或)分布不提示任何特定病因(“真正不确定”) |
其他诊断 | 提示其他诊断结果,包括(1)CT特征:囊状影、明显的马赛克样灌注缺损、以磨玻璃影为主、广泛微结节影、小叶中央性结节影、结节、实变;(2)主要分布特征:支气管周围血管束、淋巴管周围、上肺或中肺;(3)其他:胸膜斑(考虑石棉肺)、食管扩张(考虑结缔组织病)、锁骨远端侵蚀(考虑类风湿关节炎)、广泛淋巴结肿大(考虑其他病因)、胸腔渗出、胸膜增厚(考虑结缔组织病或药物) |
表2.组织病理学类型及特征。
组织学类型 | 组织病理学特征 |
UIP型 | 明显肺纤维化伴结构扭曲(即破坏性瘢痕伴或不伴蜂窝样改变);纤维化主要分布在胸膜下和(或)间隔旁;肺实质有斑片状纤维化累及;成纤维细胞灶;缺乏其他诊断的特征 |
可能UIP型 | 出现第1行中的部分组织学特征,但在一定程度上排除了明确的UIP/IPF诊断:以及缺乏其他确定诊断的特征,或仅有蜂窝 |
不确定UIP型 | 纤维化伴或不伴结构扭曲,具有支持UIP型以外的特征或支持继发其他原因UIP型的特征;出现第1列的部分组织学特征,但也具有提示其诊断的特征 |
其他诊断 | 在所有的活检标本中,出现IIPs的其他型组织学特征(例如缺乏成纤维细胞灶或松散的纤维化);组织学结果提示其他疾病,如过敏性肺炎、朗格汉斯细胞组织细胞增生、结节病、淋巴管肌瘤病(LAM) |
1.3 特发性肺纤维化缓解期病情分级标准。
参照2002年中华医学会呼吸病学分会制定的《特发性肺(间质)纤维化诊断和治疗指南(草案)》:①重度:TLC(肺总量)或DLco(弥散功能)≤40%,或无法完成肺功能检测;②中度:40%<TLC(肺总量)或DLco(弥散功能)≤60%;③轻度:60%<TLC(肺总量)或DLco(弥散功能)≤80%。
1.4特发性肺纤维化缓解期肺虚络瘀证中医证候诊断标准。
参照国家技术监督局发布《中华人民共和国国家标准—中医临床诊疗术语证候部分》和《中药新药临床研究指导原则》制定,气阴两虚,血瘀肺络证诊断如下:主症:咳嗽,或咳痰,喘促气短;次症:气虚证候:久咳不愈、自汗、乏力、神疲;阴虚证候:潮热盗汗、骨蒸发热、形体消瘦、口干咽燥;血瘀证候:胸部刺痛,痛有定处,肌肤甲错;舌象:舌淡,淡胖或有齿痕;或舌质红,少津、少苔、无苔;或舌质紫暗,有瘀点瘀斑,舌脉粗胀;脉象:脉虚弱或脉微;或脉细数;或脉涩、无脉、结代。具备所有主症,并具有次症中气虚、阴虚、血瘀证候的至少各1条症状,结合舌脉,即可诊断。
1.5纳入标准:
(1)符合特发性肺纤维化西医诊断标准;(2)符合肺虚络瘀中医证候标准;(3)轻、中度特发性肺纤维化患者;(4)年龄在50至80岁之间,性别不限;(5)两周内未服用过对试验用药有较大影响的药物;(6)患者自愿签署知情同意书,并且能够配合医生按约定服药、检查、随访。
1.6排除标准。
(1)合并心、脑、肺、肝、肾及造血系统严重原发性疾病,以及精神疾病患者;(2)妊娠期或哺乳期患者,以及对试验用药过敏者;(3)近两个月内参加其他研究者;(4)拒绝或不能签署知情同意书者。
1.7剔除、脱落及终止观察标准及相关处理方式。
(1)研究过程中出现过敏反应者;(2)出现严重不良事件或严重不良反应者;(3)患者主动要求退出研究者;(4)研究过程中出现其他疾病并需要治疗,经专家评估影响疗效判定者;(5)研究过程中,患者出现依从性差、拒绝服药、未按时访视等情况,违反研究方案者;(6)开始临床研究前隐瞒病史,后经调查发现其不符合纳入标准或符合排除标准者;(7)资料整理过程中发现临床资料记录不全而影响疗效判断者。上述病例资料均予妥善保存,针对主动退出患者应采取电话、短信、微信等通讯方式与受试者取得联系,尽可能详尽询问退出理由,记录最后一次服药时间,尽可能完成待评估项目,并予如实记录,该部分受试者数据最终不计入疗效统计。
2、治疗方法:
2.1 对照组:
予西医常规治疗,即根据患者病情给予改善咳嗽、咳痰、喘促气短症状药物、吸氧、抗感染、抗纤维化等治疗。
2.2 治疗组:
在上述西医常规治疗基础上联合本发明中实施例1的中药制剂的汤剂治疗,实施例1的中药制剂的汤剂每日一剂,日三次分服,疗程90天。
3、评价指标
(1)中医证候改善有效率及中医症状积分:中医证候改善及症状积分评价标准参考《中药新药临床研究指导原则》制定:证候改善判定标准:根据尼莫地平法积分法判定,计算方法:疗效指数=(疗前积分-疗后积分)/疗前积分×100%。①临床控制:症状、体征消失或基本消失,证候积分减少≧95%;②显效:症状、体征明显改善,证候积分减少≧70%<95%;③有效:症状、体征均有好转,证候积分减少≧30%<70%;④无效:症状、体征均无明显改善,甚或加重,证候积分减少<30%。肺虚络瘀证候分级量化细则详见表3。(2)圣乔治呼吸问卷(St George's respiratory questionnaire,SGRQ);(3)肺功能(TLC%、FEV1%、FEV1/FVC%、VC%、DLCO%);(4)血气分析(PaO2、PaCO2、SaO2);(5)6分钟步行距离(6-minutewalking distance,6MWD);(6)急性加重次数;(7)安全性指标:血常规、肝功能、肾功能、尿常规、心电图分别于治疗前后各检查1次。
表3.中医症状量化评分量表。
4、统计学方法:
数据分析采用SPSS 25.0统计学软件,计量资料均采用表示,较符合正态分布组间比较采用独立样本t检验,组内比较采用配对t检验,不符合正态分布采用非参数检验中Wilcoxon秩和检验;计数资料采用卡方检验;等级资料采用秩和检验,P<0.05则认为差异即有统计学意义。
5、结果
5.1 中医证候有效率
治疗组中医证候改善总有效率为95.0%,对照组有效率为72.5%,治疗组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。详见表4。
表4.中医证候改善有效率比较结果。
5.2 中医症状积分改善情况。
在中医症状积分改善方面,与干预前相比,两组均有所缓解,差异具有统计学意义(P<0.05)。组间比较,治疗组减少显著高于对照组(P<0.05)。详见表5。
表5.中医症状积分改善比较结果。
5.3 SGRQ评分改善情况。
在SGRQ评分改善方面,与干预前相比,两组均有所缓解,差异具有统计学意义(P<0.05)。组间比较,在呼吸症状及活动能力方面,治疗组降低显著高于对照组(P<0.05),详见表6。
表6.SGRQ评分改善比较结果。
5.4 肺功能改善情况:
在肺功能改善方面,与干预前相比,两组差异具无统计学意义(P>0.05);组间比较,两组差异无统计学意义(P>0.05)。详见表7。
表7.肺功能改善比较结果。
5.5 血气分析改善情况:
在血气分析改善方面,与干预前相比,两组PaO2均有所提高,治疗组PaCO2有所降低,差异有统计学意义(P<0.05);组间比较,两组差异均无统计学意义(P>0.05);详见表8。
表8.血气分析改善比较结果。
5.6 6MWD改善情况:
在6MWD方面,与干预前相比,两组均有所提高,差异有统计学意义(P<0.05);组间比较,两组差异均无统计学意义(P>0.05);详见表9。
表9.6MWD改善比较结果。
5.7 急性加重次数。
在治疗期间,对照组1例患者在治疗期间由于感冒出现急性加重,在得到及时治疗后恢复到稳定期,其余患者未出现急性加重。
5.8安全性指标:
多数患者治疗前后血、尿、肝肾功能、心电图指标均在正常范围内,部分患者体检指标轻微变化可能与检测当时生活状态有关,仅有少数指标处于异常而无临床意义状态,治疗组安全性良好。
6、结论:
本试验运用中药制剂联合西医常规治疗方案干预特发性肺纤维化缓解期一病,临床疗效观察结果表明:中药制剂联合西医常规治疗较单纯西医常规治疗能够显著提高中医证候有效率,且在改善患者中医症状积分、SGRQ评分(呼吸症状、活动能力)方面优于单纯西医常规治疗,且安全性良好。
综上所述,本发明提供的中药制剂在提高特发性肺纤维化缓解期的中医证候有效率,减轻临床症状、改善生活质量方面均有显著疗效。
实施例3:本发明提供的中药制剂对特发性肺纤维化缓解期大鼠的疗效及作用机制观察。
1、实验材料:
1.1 实验动物:
选用6~8周龄成年雄性Wistar大鼠80只,体重200±20g,SPF级,购于斯贝福(北京)生物技术有限公司,动物许可证号:SCXK(京)2019-0010。
1.2 实验药品:
造模药物:注射用盐酸博莱霉素(瀚晖制药有限公司,国药准字H20055883,1.5万博来霉素单位/瓶),使用前加0.9%氯化钠注射液至3ml,配制成浓度为5mg/ml博来霉素水溶液,4℃保存备用。
受试药物:中药制剂颗粒剂(江阴天江药业有限公司提供,每袋0.5g,1g干粉相当于原药3.2g),由党参、天冬、山药、桃仁、姜黄、茯苓、桂枝、橘络、地龙、首乌藤加水煎煮2次,一煎加10倍水,加热至沸,保持微沸1.5小时,煎液滤过;二煎加8倍水,加热至沸,保持微沸1小时,煎液滤过,合并滤液,滤液减压浓缩至相对密度1.08-1.10(60℃)的清膏,清膏过滤,喷雾干燥得喷干粉,喷干粉过100目筛后混合均匀,再制成颗粒,包装。使用蒸馏水溶解参龙煎剂颗粒以用于动物灌胃,4℃保存备用。
对照药物:吡非尼酮胶囊(艾思瑞,北京康蒂尼药业有限公司,国药准字H20133376,100mg/粒),将吡非尼酮胶囊内容物溶解于0.9%氯化钠注射液中制备成相应浓度吡非尼酮混悬液用于动物灌胃,现用现配。
1.3 主要试剂:
重组Anti-RAP1A+RAP1B兔单克隆抗体(ab187659,Abcam);重组Anti-BRAF兔单克隆抗体(货号:ab33899,Abcam);重组Anti-ERK1+ERK2兔单克隆抗体(货号:ab184699,Abcam);重组Anti-ERK1(phosphoT202)+ ERK2 (phosphoT185)兔单克隆抗体(货号:ab201015,Abcam);MEK1/MEK2小鼠单克隆抗体(货号:MA5-15135,Thermo);Phospho-MEK1/2(Ser217/221)兔单克隆抗体(货号:3958,CST);α-Smooth Muscle Actin (D4K9N)兔单克隆抗体,(货号:19245,CST);Collagen Type I多克隆抗体(货号:14695-1-AP,proteintech);Collagen Type III(N-Terminal)多克隆抗体(货号:22734-1-AP,proteintech);山羊抗兔IgG(H+L)二级抗体(货号:c31460100,Thermo);山羊抗小鼠IgG(H+L)二级抗体(货号:c31430100,Thermo);β-actin 抗体(货号:66009-1-Ig,武汉三鹰生物技术有限公司);蛋白Marker(250ul)(货号:26616,Thermo);PMSF(货号:ST505,上海碧云天生物技术有限公司);RIPA裂解液(强)(货号:P0013B,上海碧云天生物技术有限公司);BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号:P0012S,上海碧云天生物技术有限公司);超敏ECL化学发光试剂盒(货号:P0018S,上海碧云天生物技术有限公司);SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X),(货号:P0015,上海碧云天生物技术有限公司);SDS-PAGE电泳液(Tris-Gly, 10X)(货号:P0014D,上海碧云天生物技术有限公司);Western转膜液(货号:P0021B,上海碧云天生物技术有限公司);改良Masson三色染色试剂盒(货号:G1346,北京索莱宝科技有限公司);Western一抗二抗去除液(中性)(货号:P0025N,上海碧云天生物技术有限公司);SP试剂盒(货号:KIT-9710,福州迈新生物技术开发有限公司);DAB显色试剂盒(货号:DAB-0031,福州迈新生物技术开发有限公司);羟脯氨酸(Hyp)测定试剂盒(碱水解法)(货号:A030-2-1,南京建成生物工程研究所); BSA粉末(货号:4240GR025,BioFroxx公司);TBST缓冲液(货号:T1081,北京索莱宝科技有限公司);4%多聚甲醛固定液(货号:WLA142,沈阳万类生物科技有限公司);苏木素伊红(HE)染色试剂盒,(货号:WLA051a,沈阳万类生物科技有限公司);PVDF膜(0.45μm)(货号:WJ002S,上海雅酶生物医药科技有限公司);RNAlater™ Stabilization Solution(货号:AM7020,Invitrogen™);RNaseZap™ RNase 去污溶液(货号:AM9780,Invitrogen™);TBGreen®Fast qPCR Mix,(货号:RR430A,TaKaRa);脱脂奶粉(货号:PS112,上海雅酶生物医药科技有限公司);TRIzol™ 试剂(货号:15596026,Invitrogen™);DEPC水(DNase、RNase free)(货号:R0021,碧云天Beyotime);Premix Taq™ (TaKaRa Taq™ Version 2.0 plus dye)(货号:RR901Q,TaKaRa);PrimeScript™ RT Master Mix (Perfect Real Time)(货号:RR036A,TaKaRa)。引物由武汉金开瑞生物工程术有限公司代为合成,引物序列详见表1。
表1. 引物序列信息。
1.4 主要仪器及设备:
组织脱水机(型号:LELCA ASP 300,德国Leica公司生产);组织包埋机(型号:LELCAEG 1150H,德国Leica公司生产);组织切片机(型号:HistoCore BIOCUT R,德国Leica公司生产);烤片机(型号:HI1220,德国Leica公司生产);展片机(型号:HI1220,德国Leica公司生产);恒温干燥箱(型号:DHG-9070A,上海精宏实验设备有限公司生产);数码显微镜(型号:DM LS2,德国Leica公司生产);恒温水浴锅(型号:SHA-B,常州国华电器有限公司生产);移液器(型号:数字型可调,美国热电生产);高速冷冻离心机(型号:BiofugePrimo R,美国科峻(德国)生产);高速匀浆机(型号:FS-1,江苏金坛市环宇科学仪器生产);电泳仪(型号:EPS300;上海天能科技有限公司生产);垂直电泳槽(型号:VE-180,上海天能科技有限公司上海天能科技有限公司生产);转印槽(型号:VE-386,上海天能科技有限公司上海天能科技有限公司生产);凝胶成像分析系统(型号:Tanon-4200SF,上海天能科技有限公司上海天能科技有限公司生产);-86℃超低温冷冻储存箱(型号:BCD-208F,上海天能科技有限公司上海天能科技有限公司生产);恒温水浴锅(型号:SHA-B;常州国华电器有限公司生产);荧光定量PCR仪(型号:ABI StepOne,Applied Biosystems公司生产);紫外分光光度计(型号:2800A,尤尼卡上海仪器有限公司生产);多用脱色摇床(型号:TS-2000A,海门市其林贝尔仪器制造有限公司生产);全自动雪花制冰机(型号:IMS-60,常熟市雪科电器有限公司生产);生化仪配套专用纯水机(型号:ROB30,力康生物医疗科技控股有限公司生产);漩涡混合器(型号:TZL-5009,苏州珀西瓦尔实验设备有限公司生产)。
2、实验方法:
2.1 实验动物饲养及分组:
动物引进后饲养于辽宁中医药大学实验动物中心,动物室为清洁级,环境温度20±2℃,相对湿度60%~80%,自然光线采光,普通专用饲料喂养,避免噪音及其它干扰。常规饲养7天以适应环境,观察饮食、活动、粪便等,均无异常后可进行实验。
将80只SPF级雄性Wistar大鼠采用随机数字表法随机分成四组,每组20只,即空白对照组、模型对照组、吡非尼酮组(简称西药组)、参龙煎剂组(简称中药组)。每组均为20只大鼠,对每只大鼠进行标号,组间平均体重差控制在10g以内。适应性饲养7天后进行博来霉素造模,于首造模后第7、28天进行取材和指标观察。
2.2 给药方法:
采用国际公认的气管内注射博来霉素的方法诱导特发性肺纤维化大鼠模型。模型制备次日起,日一次灌胃给药,按1ml/100g体积灌胃。吡非尼酮与参龙煎剂给药剂量以成人临床使用剂量为依据,参照实验动物与人体给药剂量折算系数表折算成大鼠灌胃给药剂量,其中西药组采用序贯给药方式予吡非尼酮胶囊(第1~7d给药剂量为62.5mg/kg·d,第8~14d给药剂量为125mg/kg·d,第15~28d给药剂量为187.5mg/kg·d);中药组予中药制剂颗粒剂(给药剂量8.4g生药/kg·d);空白对照组、模型对照组予等体积生理盐水。灌胃给药28d,每周复查体重,依据体重变化情况调整给药剂量。
2.3 取材方法:
每组分别于模型制备次日起第7d、28d两个时间点进行取材,每组随机选取10只,取材前12h内禁食水。各组大鼠麻醉后,分离左、右肺组织,右肺组织多聚甲醛溶液固定,以备脱水包埋;左肺组织置于预先消毒和DEPC处理过的冻存管中,-80℃冰箱保存备用。
2.4 观察指标及检测方法:
(1)大鼠生存情况:观察实验期间各组大鼠活动状态、体重变化,毛色光泽、进食、饮水及呼吸、排便情况。(2)大鼠肺组织病理形态变化情况:HE染色(脱蜡、染色、透明、封片),Masson染色(脱蜡、染色、透明、封片)。(3)碱水解法测大鼠肺组织HYP含量:①样本处理;②调PH;③稀释水解液;④活性炭吸附;⑤指标测定。(4)免疫组化法检测大鼠肺组织α-SMA、p-MEK1/2、p-ERK1/2含量:①样本处理;②抗原修复;③加一抗、二抗工作液;④DAB显色;⑤苏木素染色液复染;⑥封片;⑦定量分析:在图像分析系统上,光镜400倍下,每张切片分别从四周和中间随机选取5个视野,测定肺组织内待测蛋白表达颗粒的吸光度,取其平均值作为该只大鼠的肺组织该蛋白的表达量。(5)Western-blot法测定大鼠肺组织Rap1A、B-Raf、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2、Col-I、Col-Ⅲ、α-SMA蛋白表达水平:①蛋白提取;②BCA法测定蛋白浓度;③上样蛋白制备;④配胶;⑤上样,跑电泳;⑥转膜;⑦免疫反应;⑧显影:应用生物凝胶电泳图像分析系统进行扫描定量,计算各目的条带与内参GAPDH的光密度比值作为各蛋白的相对含量;⑨采用Image J软件对生成的Western blot条带进行灰度分析。(6)qRT-PCR法检测大鼠肺组织Rap1A、B-Raf、MEK、ERK mRNA表达水平:①肺组织总RNA提取;②RNA纯度鉴定;③基因组DNA去除反应;④逆转录反应合成cDNA;⑤PCR扩增反应;⑥mRNA表达量计算:采用2-ΔΔCT法进行待测样品mRNA含量换算,以β-actin作为内参照计算待测样品mRNA相对表达量。
3、统计方法:
通过SPSS 17.0软件进行数据统计分析。计数资料描述以百分率表示,组间比较采用卡方检验;正态分布计量资料描述以均数±标准差表示,组间比较采用单因素方差分析。以P<0.05为差异具有统计学意义。
4、结果:
4.1大鼠一般状态观察:
空白对照组大鼠精神状态佳,活泼好动,反应敏捷,毛色白且有光泽,呼吸平稳,体重逐渐增加,食量、饮水、二便正常。模型对照组大鼠精神萎靡、倦怠,反应迟钝,毛色逐渐枯槁而无光泽,呼吸困难逐渐加重,7d时体重下降较明显,后期有所增加,但与空白对照组比较,形体明显消瘦,口唇、爪甲及尾尖紫黯,进食、饮水明显减少,便干。 西药组大鼠精神尚可,行动稍显迟缓,反应可,毛色略显枯槁无光,呼吸急促,体重略有下降,口唇、爪甲及尾尖轻微紫黯,进食、饮水量减少,一般状态优于模型对照组。 中药组一般状态与西药组相似,大鼠精神略有萎靡,行动稍迟缓,呼吸急促,皮毛欠光泽,口唇、爪甲及尾尖无明显紫黯,进食、饮水略有减少,二便尚可。
4.2 大鼠肺组织病理形态变化情况:
4.2.1肉眼观察大鼠肺组织病理形态。
空白对照组大鼠双肺组织呈嫩红色,颜色均一,较湿润,表面光滑,有光泽,且质地柔软,弹性较好,未见明显出血点及结节。模型对照组大鼠第7d时双肺组织呈鲜红色,体积增大呈水肿样改变,表面有少量出血点和局部瘀斑,湿润度高,触之有弹性,光泽度差;第28d时肺组织颜色较前变暗,色苍白,体积缩小,弹性明显下降,质地变硬,表面粗糙,凹凸不平,无光泽,冲洗后表面有出血点及大片瘀斑,部分肺组织可见结节样改变。与模型对照组相比,中药组与西药组大鼠双肺色泽、体积、弹性、质地及结节样改变等情况均有不同程度的改善,部分肺表面偶尔可见少量出血点及点状灰白色斑块分布(见图1)。
4.2.2 各组大鼠HE染色结果:
镜下见空白对照组大鼠肺组织结构基本正常,肺泡间隔均匀、未增厚,腔内未见明显渗出,无充血、水肿、急慢性炎症及纤维化,在2个时间点均未出现明显病理改变。模型对照组大鼠肺组织符合肺纤维化病理改变,表现为肺泡炎与肺纤维化。第7d病理表现以肺泡炎为主,染色可见肺毛细血管充血,肺泡间隔水肿,肺泡壁有所增厚,肺泡腔内分泌物增多,出现大量巨噬细胞为主的炎症细胞浸润,并可见少量成纤维细胞增生聚集。随着处理时间的延长,肺泡结构破坏,肺组织损伤呈进行性加重。第28d病理表现以纤维化为主,肺泡炎基本消失,仅见少量的炎症细胞,肺泡萎缩、消失、结构改变,肺泡间隔显著增厚、断裂,大量成纤维细胞聚集,胶原沉积,形成纤维化瘢痕,肺组织广泛纤维化。与模型对照组比较,中药组、西药组在2个检测时间点均可见与模型组相似的病理改变,但程度较轻(见图2)。
4.2.3 各组大鼠Masson染色结果。
镜下见空白对照组肺内结构清晰,各支气管、肺泡以及肺泡间隔等组织结构均基本正常,在肺泡内可见少量染成浅蓝色的胶原纤维分布,无水肿和纤维化改变,镜下未见明显渗出,也无明显病理改变。模型对照组大鼠第7d时镜下见肺泡间隔增宽,其中可见成纤维细胞增殖,多见于肺间质、支气管壁、血管壁和肺泡间隔,细小支气管及小血管周围有胶原纤维分布,肺泡间质可见散在的胶原纤维、较短,还未形成片状及束状;第28d时,镜下见肺泡壁厚度显著增加,肺泡腔缩小,肺泡结构明显受损,出现部分肺泡塌陷或融合,大量胶原纤维以及周围胶原增生,支气管、小支气管、小血管多见,并逐渐向肺间质延伸,在间质内呈片状、束状分布沉积,形成弥漫性肺纤维化。与模型组相比,中药组、西药组在2个时间点病理变化相似,但纤维化程度均有不同程度改善。肺间质中、支气管壁、血管壁及肺泡隔的胶原染色显著减轻,肺间质、支气管壁、小血管周围等处见胶原纤维沉积,呈散在分布状态(见图3)。
4.3碱水解法测HYP含量结果。
表2.各组大鼠肺组织HYP含量(±S)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
4.4免疫组化法检测大鼠肺组织p-MEK1/2、p-ERK1/2、α-SMA表达水平。
4.4.1各组大鼠肺组织p-MEK1/2表达水平。
表3.各组大鼠肺组织中p-MEK1/2表达(±S)(图4所示)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
4.4.2 各组大鼠肺组织p-ERK1/2表达水平。
表4.各组大鼠肺组织中p-ERK1/2表达(±S)(图5所示)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
4.4.3各组大鼠肺组织α-SMA表达水平。
表5.各组大鼠肺组织中α-SMA表达(±S)(图6所示)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
4.5 Western-blot法检测大鼠肺组织Rap1A、B-Raf、MEK1/2、p-MEK1/2、ERK1/2、p-ERK1/2、col-I、col-Ⅲ、α-SMA蛋白表达水平结果。
4.5.1各组大鼠肺组织Rap1A、B-Raf蛋白表达水平。
表6.各组大鼠肺组织中Rap1A、B-Raf蛋白表达水平(±S)(图7所示)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
4.5.2 各组大鼠肺组织MEK1/2、p-MEK1/2蛋白表达水平。
表7.各组大鼠肺组织 MEK1/2、p-MEK1/2蛋白表达水平(±S)(图8所示)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
4.5.3 各组大鼠肺组织ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平。
表8.各组大鼠肺组织 ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达水平(±S)(图9所示)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
4.5.4 各组大鼠肺组织α-SMA、Col-I、Col-Ⅲ蛋白表达水平。
表9.各组大鼠肺组织α-SMA、Col-I、Col-Ⅲ蛋白表达水平(±S)(图10所示)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
4.6 qRT-PCR法检测大鼠肺组织Rap1A、B-Raf、MEK1/2、ERK1/2 mRNA表达水平。
4.6.1 大鼠肺组织Rap1A、B-RafmRNA表达水平。
表10.各组大鼠肺组织中Rap1A、B-Raf mRNA表达(±S)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
4.6.2 大鼠肺组织MEK1/2 mRNA表达水平。
表11. 各组大鼠肺组织中MEK1/2 mRNA表达(±S)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
4.6.3 大鼠肺组织ERK1/2 mRNA表达水平。
表12.各组大鼠肺组织中ERK1/2 mRNA表达(±S)。
注:*P<0.05,**P<0.01,与空白对照组比较;#P<0.05,##P<0.01,与模型对照组比较。
最后所应说明的是,以上具体实施方式仅用以说明本发明的技术方案而非限制,尽管对本发明进行了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的实施方式进行修改或者等同替换,而不脱离本发明实施方式的精神和范围,其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
Claims (5)
1.一种用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂,其特征在于:由以下重量份数的中草药原料组成:党参15~20份,天冬10~15份,山药10~20份,桃仁10~15份,姜黄5~10份,茯苓10~15份,桂枝10~15份,橘络3~5份,地龙5~15份,首乌藤10~15份。
2.如权利要求1所述的用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂,其特征在于:由以下重量份数的中草药原料组成:党参15份,天冬10份,山药10份,桃仁10份,姜黄10份,茯苓10份,桂枝10份,橘络3份,地龙5份,首乌藤10份。
3.如权利要求1所述的用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂制备方法,其特征在于:具体包括以下步骤:
步骤1、按重量份数称取党参、天冬、山药、在容器中再先捣碎的桃仁、姜黄、茯苓、桂枝、橘络、地龙、首乌藤,以上药物放入容器中,加入冷水浸泡,水超过药材表面2~4cm,浸泡时间30~45min;
步骤2、先煎步骤1中浸泡后药材和水,用武火煮沸药液5min后,文火慢煎40min,煎煮后倒出汤剂100~150ml,保留剩余药料;
步骤3、将剩余药料置于容器中,加入冷水,水超过药材表面2~4cm,用武火将药液煮沸5min后,文火慢煎40min,煎煮后再次倒出汤剂100~150ml,并与步骤2中倒出的汤剂混合并充分混匀;
步骤4、将步骤3所得汤剂冷却至50℃~60℃,藏于2℃~5℃摄氏度保存以备服用;
步骤5、服用前需将药液加热至30℃~45℃。
4.如权利要求3所述的用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂制备方法,其特征在于:所述容器为砂锅或陶罐。
5.如权利要求3所述的用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂制备方法,其特征在于:所述冷水的温度是4~25℃。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310195575.2A CN116350732B (zh) | 2023-03-03 | 2023-03-03 | 用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310195575.2A CN116350732B (zh) | 2023-03-03 | 2023-03-03 | 用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂及其制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN116350732A CN116350732A (zh) | 2023-06-30 |
CN116350732B true CN116350732B (zh) | 2024-04-16 |
Family
ID=86940652
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310195575.2A Active CN116350732B (zh) | 2023-03-03 | 2023-03-03 | 用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN116350732B (zh) |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102688380A (zh) * | 2012-06-13 | 2012-09-26 | 刘宗奎 | 一种治疗肺心病的中药组合物 |
CN104147356A (zh) * | 2014-07-30 | 2014-11-19 | 尤家平 | 治疗肺瘘的中药组合物 |
CN104524532A (zh) * | 2015-01-14 | 2015-04-22 | 鲁卫章 | 一种治疗气虚血瘀痰湿阻滞型阻塞性肺气肿的中药组合物 |
CN104940760A (zh) * | 2015-06-10 | 2015-09-30 | 青州市食用菌研究所 | 一种防治急性流行性传染病的四种组合物及其制备工艺 |
CN107349336A (zh) * | 2017-08-18 | 2017-11-17 | 何智 | 滋阴养肺治疗肺结核的中药组合物及其制备方法 |
WO2022240035A1 (ko) * | 2021-05-13 | 2022-11-17 | 주식회사 대웅제약 | 섬유화증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20190127456A1 (en) * | 2017-10-31 | 2019-05-02 | Fibrogen, Inc. | Methods of treating idiopathic pulmonary fibrosis |
CN109771559B (zh) * | 2019-03-19 | 2021-06-15 | 江苏省中医药研究院 | 一种治疗肺间质纤维化的中药组合物及其制备方法 |
-
2023
- 2023-03-03 CN CN202310195575.2A patent/CN116350732B/zh active Active
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102688380A (zh) * | 2012-06-13 | 2012-09-26 | 刘宗奎 | 一种治疗肺心病的中药组合物 |
CN104147356A (zh) * | 2014-07-30 | 2014-11-19 | 尤家平 | 治疗肺瘘的中药组合物 |
CN104524532A (zh) * | 2015-01-14 | 2015-04-22 | 鲁卫章 | 一种治疗气虚血瘀痰湿阻滞型阻塞性肺气肿的中药组合物 |
CN104940760A (zh) * | 2015-06-10 | 2015-09-30 | 青州市食用菌研究所 | 一种防治急性流行性传染病的四种组合物及其制备工艺 |
CN107349336A (zh) * | 2017-08-18 | 2017-11-17 | 何智 | 滋阴养肺治疗肺结核的中药组合物及其制备方法 |
WO2022240035A1 (ko) * | 2021-05-13 | 2022-11-17 | 주식회사 대웅제약 | 섬유화증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
Dissecting the underlying pharmaceutical mechanismof DangguiBuxue decoction acting on idiopathic pulmonaryfibrosiswithnetwork pharmacology;Cai-Ping Zhao;Traditional Chinese Medicine;第5卷(第4期);238-251 * |
概述肺纤维化的中医临床研究进展;许朝霞;丁明桥;陈瑞;;中国民康医学;18(10);882-884 * |
清络饮对特发性肺纤维化急性加重大鼠肺组织细胞凋亡相关因子及mRNA 的 影响;于睿智;辽宁中医药大学学报 * |
特发性肺纤维化中医药研究策略的思考;臧凝子;中华中医药杂志;第36卷(第11期);6309-6314 * |
特发性肺纤维化中医辨证客观化研究;杨丽;中华中医药学刊;第41卷(第9期);58-62 * |
钟小南治疗急危重症举隅;钟道陔;;湖北中医杂志;-(03);11-12 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN116350732A (zh) | 2023-06-30 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101991832B (zh) | 一种治疗特发性肺纤维化的药物及其制备方法 | |
CN103599356B (zh) | 一种用于治疗特发性肺纤维化的中药组合物及其制备方法 | |
CN116350732B (zh) | 用于治疗特发性肺纤维化缓解期的中药制剂及其制备方法 | |
CN105056128B (zh) | 一种治疗慢性萎缩性胃炎及肠化的中药组合物及制备方法和应用 | |
He et al. | Risk factors and clinical features in ischemic stroke patients with different tongue conditions | |
CN102475765A (zh) | 一种改善肾功能并抑制肾组织纤维化的中药组合物 | |
CN102133302A (zh) | 一种马鞭草中提取的治疗前列腺炎的马鞭草提取物 | |
CN113908229B (zh) | 消除肺结节的中药制剂及其制备与应用 | |
CN110201073A (zh) | 一种用于治疗痛风性关节炎的中药组合物及其制备方法和应用 | |
CN104189776A (zh) | 一种治疗动脉粥样硬化的药物制剂及其制备方法 | |
CN108578487A (zh) | 治疗寻常型银屑病的药物组合物及制剂和制备应用 | |
CN107029084A (zh) | 一种治疗结直肠癌前病变的中药组合物及其药物制剂与应用 | |
CN107320659A (zh) | 一种用于治疗溃疡性结肠炎的中药组合物及其制备方法 | |
CN101658567A (zh) | 一种治疗冠心病、心绞痛的药物及其颗粒剂的制备方法 | |
CN101120962A (zh) | 丹参总酚酸在制备治疗肺纤维化药物中的用途 | |
CN105055872A (zh) | 用于治疗阿尔茨海默病的中药组合物及其制备方法和用途 | |
CN115607692B (zh) | 使用热淋清颗粒治疗脓毒症的方法 | |
CN109793826A (zh) | 一种治疗小儿骨折的中药组合物 | |
CN107596109A (zh) | 一种治疗特发性肺纤维化缓解期疾病的中药制剂及其制备方法 | |
CN116350695B (zh) | 一种药物组合物治疗肺结节的新用途 | |
CN108272941A (zh) | 一种用于治疗慢性乳糜尿的中药配方及其制备方法 | |
CN116327824B (zh) | 一种具有解毒通络功能的中药组合物及其制备方法和应用 | |
CN105079706A (zh) | 一种治疗糖尿病的复方藏药制剂 | |
CN105749021A (zh) | 用于治疗慢性肾小球肾炎血尿的中药制剂 | |
CN105031023A (zh) | 一种治疗肝硬化门静脉高压症的中药组合物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant |