CN116333935A - 一种缓解肌肉疲劳的益生菌组合物及应用 - Google Patents

一种缓解肌肉疲劳的益生菌组合物及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种缓解肌肉疲劳的益生菌组合物及应用，涉及微生物的应用技术领域，所述组合物包括植物乳杆菌LP‑G18、两歧双歧杆菌BB‑G90、长双歧杆菌BL‑G301；本发明益生菌组合物对缓解肌肉疲劳有积极作用，采用微生物益生菌来缓解肌肉运动疲劳的研究开发还鲜有报道，而益生菌的安全性是众所周知的，在此基础上，设计开发出缓解肌肉疲劳的产品显得很有价值和必要。

Description

一种缓解肌肉疲劳的益生菌组合物及应用
技术领域
本发明涉及微生物的应用技术领域，特别涉及一种缓解肌肉疲劳的益生菌组合物及应用。
背景技术
“亚健康”的人群越来越多。容易疲劳较为常见的症状之一。也常常困扰着民众。因肌肉容易疲劳而产生懒于运动的现象屡见不鲜。
采用“预防为主，防治结合”的方针，依然具有时代的意义。因此开发和挖掘具有缓解肌肉疲劳功能的产品仍是科技工作者的追求，尤其是针对体力活动、爱好运动的健康人士，以及运动员。
都市的健美运动人员也日益增多，因而产品也将拥有广阔的前景与市场需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种缓解肌肉疲劳的益生菌组合物及应用。该益生菌组合物对减缓肌肉疲劳有积极的作用。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种缓解肌肉疲劳的益生菌组合物，所述组合物包括植物乳杆菌LP-G18、两歧双歧杆菌BB-G90、长双歧杆菌BL-G301；
所述植物乳杆菌LP-G18分类名为植物乳杆菌Lp-G18（LactobacillusplantarumLp-G18），保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO：M2013690，保藏时间为2013年12月23日，保藏地址：中国武汉；
所述长双歧杆菌BL-G301的分类命名为长双歧杆菌BL-G301（Bifidobacteriumlongum
BL-G301），保藏地址为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2013689，保藏时间为2013年12月23日；
所述的两歧双歧杆菌BB-G90的分类名为两歧双歧杆菌BB-G90（Bifidobacteriumbifidum BB-G90），保藏地点为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2013194，保藏时间为：2013年5月9日。
本发明还具有以下附加技术特征：
所述植物乳杆菌LP-G18、两歧双歧杆菌BB-G90、长双歧杆菌BL-G301活菌数量比为10:6~1:4~1，按此配伍获得混合菌粉。
优选的，所述植物乳杆菌LP-G18、两歧双歧杆菌BB-G90、长双歧杆菌BL-G301活菌数量比为10:3:2。
优选的，产品混合菌粉的活菌数≥100亿/g。
优选的，所述益生菌组合物还包含食品上和药学上可接受的辅料，获得最终菌粉混合物。
优选的，所述辅料为麦芽糊精、抗性糊精、羟乙基纤维素，山梨糖醇，乳糖醇、柳橙水果粉、菊粉、低聚异麦芽糖、低聚果糖、全脂乳粉、乳粉、水苏糖、奶味香精中的一种或几种。
优选的，所述辅料为低聚果糖、低聚木糖、水苏糖、低聚异麦芽糖、菊粉、抗性糊精等其中的一种或几种。
优选的，所述益生菌组合物为粉剂、颗粒剂、片剂、丸剂、液体剂或胶囊剂。
优选的，每包粉剂成品出厂时含有活菌数100亿CFU以上。
优选的，所述粉剂每包的净含量为2~5g/包。
优选的，所述的益生菌组合物制备步骤包括菌种活化、种子培养、发酵培养、菌体收集、保护剂配置、乳化、真空低温冷冻干燥、粉碎、复配混合及后道加工包装获得最终产品。
本发明还提供上述的缓解肌肉疲劳的益生菌组合物在缓解肌肉疲劳方面的应用。
所述益生菌组合物具体的制备步骤为：
（1）制备植物乳杆菌Lp-G18冻干菌粉；
（2）制备两歧双歧杆菌BB-G90冻干菌粉；
（3）制备长双歧杆菌BL-G301冻干菌粉；
（4）将步骤（1）、步骤（2）和步骤（3）得到的菌粉按活菌数量比10:3:2混合后添加辅料按照常规方法制备成食品、药品或保健品；
所述步骤（1）中菌粉的制备过程包括菌种活化、种子培养、发酵培养、菌体收集、保护剂配置、乳化、真空低温冷冻干燥、粉碎等；
所述步骤（2）中菌粉的制备过程包括菌种活化，种子培养、发酵培养、菌体收集、保护剂配置、乳化、真空低温冷冻干燥、粉碎等；
所述步骤（3）中菌粉的制备过程包括菌种活化，种子培养、发酵培养、菌体收集、保护剂配置、乳化、真空低温冷冻干燥、粉碎等。
优选的，所述步骤（1）、步骤（2）和步骤（3）中菌粉均为将发酵后收集到的菌体与基础保护剂按照质量比1∶2混合后置于温度为-40℃中冻干后粉碎而成。
具体的，益生菌组合物制备步骤如下：
（一）植物乳杆菌Lp-G18活菌的获得方法：
植物乳杆菌Lp-G18获取来源是：新疆伊犁地区自然发酵酸牛奶；
植物乳杆菌Lp-G18保藏编号为CCTCC NO:M2013690，地址：中国武汉，武汉大学；
植物乳杆菌Lp-G18的培养方法为：在一定培养基的条件下，进行相对厌氧培养。培养温度为35-39℃。优选36.5-37.5℃。其中三角瓶采用静置培养的方式，添加1%的碳酸钙在培养基中，培养过程不控制pH值。发酵罐采用通入非氧气不活泼气体（如纯度在99%以上的氮气等等），并保持罐压为0.02-0.1MPa。优选0.03-0.08MPa罐压条件下培养。发酵起始pH值控制在6.5±0.2范围内，后期发酵过程的pH值控制在5.4±0.2范围内，偏酸时采用碱液（如20%~25%的氢氧化钠或氨水中的一种或二种）流加控制，使得pH值控制在5.4±0.2范围内。在菌体繁殖生长的对数期末期或稳定期初期，结束发酵。
基础培养基（按照质量体积分数计）：葡萄糖，2~6%；牛肉浸粉，0.5~1.2%；蛋白胨，0.6~1.8%；酵母膏，0.5~1.5%；无水乙酸钠，0.5%；L-谷氨酸，0.2~0.6%；磷酸氢二钾，0.2%；柠檬酸氢二铵，0.2%；吐温80，0.1~0.2%；七水硫酸镁，0.025~0.06%；一水硫酸锰，0.005~0.03%，其余为水。
发酵结束后，将发酵液降温，然后收集菌体。通常可采用离心的方法获得菌体。
菌体的基础保护剂为20%脱脂乳粉+5%蔗糖。在考虑规避过敏性物料的情况下，采用海藻糖，菊粉、低聚果糖、蔗糖等非乳基及过敏性原料的组合物作为菌体保护剂。
将保护剂与菌体混合均匀，得到乳化液。
将乳化液放入低温冷冻真空干燥设备（冻干机）进行真空低温冷冻干燥。获得菌饼。
菌饼经过粉碎后，获得菌粉。菌粉的细度可通过调整粉碎机的筛网孔大小获得。
（二）两歧双歧杆菌BB-G90活菌的获得方法：
获取来源：内蒙古健康成人；
两歧双歧杆菌BB-G90，保藏编号CCTCC NO:M2013194，典藏时间，2013年5月15日 ，地址：中国武汉，武汉大学；
两歧双歧杆菌BB-G90的培养方法为：在一定培养基的条件下，进行相对厌氧培养。培养温度为36-39℃，优选37-38℃。其中三角瓶采用静置培养的方式，添加质量体积分数为0~0.5%的碳酸钙在培养基中，培养过程不控制pH值。发酵罐采用通入非氧气不活泼气体（如纯度在99%以上的氮气等等），并保持罐压为0.02-0.1MPa。优选0.03-0.08MPa罐压条件下培养。发酵起始pH值控制在7.0±0.2范围内，后期发酵过程的pH值控制在5.5±0.2范围内，偏酸时采用碱液（如20%~25%的氢氧化钠或氨水中的一种或二种）流加控制，使得pH值控制在5.5±0.2范围内。在菌体繁殖生长的对数期末期，结束发酵。
两歧双歧杆菌BB-G90的基础培养基：乳糖，2~5%；葡萄糖0~2%；牛肉浸粉，0.6~1.2%；蛋白胨，0.6~1.2%；酵母膏，0.5~1.5%；大豆蛋白栋，0.1~0.5%；无水乙酸钠，0.5%；磷酸氢二钾，0.2%；柠檬酸氢二铵，0.2%；L-半胱氨酸盐酸盐，0.06~0.12%，吐温80，0.1%；七水硫酸镁，0.04~0.08%；一水硫酸锰，0.01~0.03%，碳酸钙，0~0.5%；其余为水，以上均按质量分数计。
发酵结束后，将发酵液降温，然后收集菌体，通常可采用离心的方法获得菌体。
菌体的基础保护剂为20%脱脂乳粉+5%蔗糖。在考虑规避过敏性物料的情况下，采用海藻糖，菊粉、低聚果糖、蔗糖等非乳基及过敏性原料的组合物作为菌体保护剂。
将保护剂与菌体混合均匀，得到乳化液。
将乳化液放入低温冷冻真空干燥设备（冻干机）中，进行真空低温冷冻干燥，获得菌饼。
菌饼经过粉碎后，获得菌粉，菌粉的细度可通过调整粉碎机的筛网孔大小获得。
（三）长双歧杆菌BL-G301活菌的获得方法 ：
获取来源：四川汶川健康少年；
长双歧杆菌BL-G301 ,保藏编号CCTCC NO:M2013689。典藏时间，2013年12月28日，地址：中国武汉，武汉大学；
长双歧杆菌BL-G301的培养方法为：在一定培养基的条件下，进行相对厌氧培养。培养温度为35-39℃。优选37-38℃。其中三角瓶采用静置培养的方式，添加1%的碳酸钙在培养基中，培养过程不控制pH值。发酵罐采用通入非氧气不活泼气体（如纯度在99%以上的氮气等等），并保持罐压为0.02-0.1MPa。优选0.03-0.08MPa罐压条件下培养。发酵起始pH值控制在6.9±0.2范围内，后期发酵过程的pH值控制在5.5±0.1范围内，偏酸时采用碱液（如20%~25%的氢氧化钠或氨水中的一种或二种）流加控制，使得pH值控制在5.5±0.1范围内。在菌体繁殖生长的对数期末期或稳定期初期，结束发酵。
基础培养基（按照质量体积分数计）：乳糖2~3%葡萄糖，0~1%；牛肉浸粉，0.5~1.2%；蛋白胨，0.6~1.2%；酵母膏，0.5~1.5%；无水乙酸钠，0.5%；磷酸氢二钾，0.2%；柠檬酸氢二铵，0.2%；吐温80，0.1%；七水硫酸镁，0.02~0.08%；一水硫酸锰，0.01~0.04%，L-半胱氨酸盐酸盐0.5~0.15%，低聚半乳糖0.2~0.8%，氯化钙0.05~0.15%，其余为水。
发酵结束后，将发酵液降温，然后收集菌体。通常可采用离心的方法获得菌体。
菌体的基础保护剂为20%脱脂乳粉+5%蔗糖+1%明胶。在考虑规避过敏性物料的情况下，采用海藻糖，葡萄糖菊粉、低聚果糖、蔗糖、酵母粉、谷氨酸钠(味精）、异VC钠盐、麦芽糊精、贝塔糊精等非乳基及过敏性原料的组合物作为菌体保护剂。
将保护剂与菌体按质量比混合均匀，得到乳化液。
液放入低温冷冻真空干燥设备（冻干机）进行真空低温冷冻干燥。获得菌饼。
菌饼经过粉碎后，获得菌粉。菌粉的细度可通过调整粉碎机的筛网孔大小获得。
菌剂制备过程主要包括菌种活化，种子培养、发酵培养、菌体收集、保护剂配置、乳化、真空低温冷冻干燥、粉碎、包装等过程。
菌粉再经复配添加剂，混合及后道加工，获得本发明的生物制剂（菌剂）物品。
后续菌剂产品的形式包括粉剂、颗粒剂、片剂、丸剂、液体制剂、胶囊剂等相关形式。
物品经包装后，获得产品。
本发明和现有技术相比，其优点在于：
采用微生物益生菌来缓解肌肉运动疲劳的研究开发还鲜有报道。而益生菌的安全性是众所周知的。在此基础上，设计开发出缓解肌肉疲劳的产品显得很有价值和必要。
本发明益生菌组合物对缓解肌肉疲劳有积极作用。
实施方式
以下公开本发明的一些实施例，本领域技术人员可以根据本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
实施例1：植物乳杆菌Lp-G18活菌冻干粉的获得方法：
植物乳杆菌Lp-G18获取来源是：新疆伊犁地区自然发酵酸牛奶；
植物乳杆菌Lp-G18保藏编号为CCTCC NO:M2013690；
植物乳杆菌Lp-G18的培养方法为：在一定培养基的条件下，进行厌氧培养。培养温度为37±0..5℃。其中三角瓶采用静置培养的方式，添加1%的碳酸钙在培养基中，培养过程不控制pH值。发酵罐采用通入纯度在99%以上的氮气，并保持罐压为0.05±0.03MPa罐压条件下培养。发酵起始pH值为6.68，后期发酵过程的pH值控制在5.4±0.2范围内，偏酸时采用碱液（25%的氢氧化钠）流加控制，使得pH值控制在5.4±0.2范围内。在菌体繁殖生长的对数期末，结束发酵。
基础培养基（按照质量分数计）：葡萄糖，4%；牛肉浸粉，0.8%；蛋白胨，1.5%；酵母膏，1.5%；无水乙酸钠， 0.5%；L谷氨酸，0.5%；磷酸氢二钾，0.2%；柠檬酸氢二铵，0.2%；吐温80，0.1%；七水硫酸镁，0.05%；一水硫酸锰，0.025%；其余为水。
实施例2：两歧双歧杆菌BB-G90活菌冻干粉的获得方法：
获取来源：内蒙古健康成人；
两歧双歧杆菌BB-G90，保藏编号CCTCC NO:M2013194。典藏时间，2013年5月15日；
两歧双歧杆菌BB-G90的培养方法为：在一定培养基的条件下，进行厌氧培养。培养温度为36.5-37.5℃。其中三角瓶采用静置培养的方式，添加0.2%的碳酸钙在培养基中，培养过程不控制pH值。发酵罐采用通入纯度在99%以上的氮气，并保持罐压为0.05±0.02MPa罐压条件下培养。发酵起始pH值为7.0，后期发酵过程的pH值控制在5.4±0.1范围内，偏酸时采用碱液（25%的氢氧化钠）流加控制，使得pH值控制在5.4±0.1范围内。在菌体繁殖生长的对数期末，结束发酵。
具体培养基（按照质量分数计）：乳糖，4%；牛肉浸粉，1.0%；蛋白胨，1%；酵母膏，1.0%；无水乙酸钠，0.5%；大豆蛋白栋，0.25%；碳酸钙，0.25%；磷酸氢二钾，0.2%；柠檬酸氢二铵，0.2%；吐温80，0.1%；L-半胱氨酸盐酸盐，0.1%；七水硫酸镁，0.06%；一水硫酸锰，0.02%；其余为水。
实施例3：长双歧杆菌BL-G301活菌冻干粉的获得方法：
获取来源：四川汶川健康少年
长双歧杆菌BL-G301 ,保藏编号CCTCC NO:M2013689。典藏时间，2013年12月28日；
长双歧杆菌BL-G301的培养方法为：在一定培养基的条件下，进行相对厌氧培养。培养温度为35-39℃。优选36.5-37.5℃。其中三角瓶采用静置培养的方式，添加1%的碳酸钙在培养基中，培养过程不控制pH值。发酵罐采用通入纯度在99%以上的氮气，并保持罐压为0.05±0.03MPa条件下培养。发酵起始pH值为6.9，后期发酵过程的pH值控制在5.5±0.1范围内，偏酸时采用碱液（如20%~25%的氢氧化钠或氨水中的一种或二种）流加控制，使得pH值控制在5.5±0.1范围内。在菌体繁殖生长的对数期末期或稳定期初期，结束发酵。
具体培养基（按照质量分数计）：乳糖，2%；牛肉浸粉，1.0%；蛋白胨，1%；酵母膏，1.0%；无水乙酸钠，0.5%；低聚半乳糖，0.5%；磷酸氢二钾，0.2%；柠檬酸氢二铵，0.2%；吐温80，0.1%；L-半胱氨酸盐酸盐，0.1%；氯化钙，0.1%；七水硫酸镁，0.06%；一水硫酸锰，0.02%；其余为水。
其中，实施例1-3均为将-80℃冷冻保藏的菌株接种于培养基中于 37℃培养 12h，然后将活化的种子培养基以5%的接种量接种至发酵培养基中，培养结束后，收菌；
将发酵好的菌液，降温后，采用离心机进行离心，离心条件：温度 12℃、转速 7000r/min、时间10 min，离心后的菌泥和保护剂按照质量比1∶2 进行乳化及真空冷冻干燥42 h，冻干机参数为：冷阱温度-80℃，得到干燥菌体，进一步菌饼经过粉碎后，获得菌粉，菌粉的细度可通过调整粉碎机的筛网孔大小获得可获得冻干菌粉；
保护剂为：海藻糖40g/L，酵母粉20g/L，蔗糖20 g/L，味精20 g/L。
实施例
混合菌粉制备：
1）测定实施例1、例2、例3、各冻干菌粉活菌数。并测定实施例中菌粉所含谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase ,GS)的活力。结果为植物乳杆菌LP-G18、两歧双歧杆菌BB-G90、长双歧杆菌BL-G301菌粉的活菌数分别为6300亿/g、1800亿/g、1500亿/g，酶活为14.05U/mg。
2）产品的总活菌数以300亿/g为准。活菌数以10:3:2配伍。并考虑适当的保险系数（1.2~2.0）以防止加工过程损失。本例保险系数为1.3。计算2.0公斤混粉，需要的各自菌粉重量。（规整后取83g，87g，70g）
3）选用低聚果糖、低聚异麦芽糖、菊粉、抗性糊精作为辅料，辅料重量比为1:1:1:1（每种587g）；
4）将冻干菌粉与辅料混匀；
5）包装成2g/包的菌粉包获得产品。
实施例5 抗疲劳试验1
方法，采用小鼠游泳耐力试验
将56只雄性昆明小鼠（38~42g)在正常饲料喂养情况下，随机分为蒸馏水对照组，低剂量辅料组（125mg/kg*bw）、中剂量辅料组（250mg/kg*bw）、高剂量辅料组（750mg/kg*bw）、复合益生菌低剂量(125mg/kg*bw)、中剂量(250mg/kg*bw)和高剂量(750mg/kg*bw)3组，各组小鼠每日定时定量以灌胃方式处理1次，连续处理28天，末次灌胃30min后，均按小鼠体重5%负重，放于水温25~27℃、水深30cm、大小50cmx50cmx40cm的游泳箱中游泳，每只游泳箱内一次放入4只小鼠。观察小鼠游泳状况，记录从入水至力竭沉入水底持续10s不浮出水面的时间。
表1 小鼠游泳耐力试验记录
组别 数量 游泳时间（分钟） 备注
对照1 8只 3.42±1.13 （常规饲料+蒸馏水）
对照2 8只 3.46±0.54 （常规饲料+低剂量组辅料（不加菌））
对照3 8只 3.48±0.76 （常规饲料+中剂量组辅料（不加菌））
对照4 8只 3.56±0.95 （常规饲料+高剂量组辅料（不加菌））
低剂量 8只 3.77+1.21
中剂量 8只 5.38±0.79*
高剂量 8只 6.42±1.07*
由以上数据，可见，随着益生菌复合物的使用量增加，小鼠的游泳时间得到增加。其中的中剂量、高剂量组与对照有明显差异。说明益生菌复合物具有缓解肌肉疲劳的作用。
同时对照增加了辅料组，从数据上来看，辅料似有少许作用，但并不明显。而中、高剂量组与对它们比较，仍有明显差异。
实施例6 抗疲劳试验2
方法：采用爬杆实验。
将48只雄性正常饲喂昆明小鼠随机分为蒸馏水对照组，高剂量辅料组，复合益生菌低剂量(125mg/kg*bw)、中剂量(250mg/kg*bw)和高剂量(750mg/kg*bw)3组。各组小鼠每日定时定量以灌胃方式处理1次，连续处理30天。末次给药30min后，将小鼠放在爬杆架的有机玻璃棒子，记录小鼠跌落的时间，累计3次的时间作为爬杆时间
表2 小鼠爬杆实验记录
组别 数量 爬杆时间(s) 备注
对照组 8 279.78±24.19
高剂量辅料组 8 286.54±25.32 高剂量组辅料（不加菌）
低剂量组 8 308.05+94.67 1.5 亿
中剂量 8 436.44+92.71* 3 亿
高剂量组 8 494.07+83.43* 9 亿
注;与对照组相比“P<0.05
由以上数据，可见，随着益生菌复合物的使用量增加，小鼠的爬杆时间得到增加。其中的中剂量、高剂量组与对照有明显差异。说明益生菌复合物具有缓解肌肉疲劳的作用。不含菌的高剂量辅料对照进一步说明，辅料的作用非常有限而不明显。
分析原理：谷氨酰胺是一种重要的医药原料，具有治疗胃溃疡，缓解运动综合征和运动疲劳，调节机体免疫和增强脑神经机能等生理功能。谷氨酰胺合成酶(glutaminesynthetase ,GS)能催化谷氨酸与铵反应生成谷氨酰胺，是谷氨酰胺形成的重要途径之一。也是用以减少铵离子对生物毒害作用的有益手段。使有害的铵向无害的方向转化。
益生菌的增加，可能导致小鼠体内谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase ,GS)增加，同样由于益生菌的增加，可能导致小鼠体内的B族维生素的生成量有所增加。尤其是对应的维生素B1、维生素B6、维生素B2的增加。这也许是小鼠耐受力增加的原因。
实施例7 测定体内常规益生菌群的变化
雄性大鼠40只，体重160~200g，随机平均分为4组（每组10只）。对照组：自由摄入标准颗粒饲料，自由饮水。低剂量组：进食同对照组，每日饮水以低剂量益生菌液替代，持续1月。中等剂量组，进食同对照组，每日饮水以中等剂量益生菌液替代，持续1个月。高剂量组：进食同对照组，每日每日饮水以高剂量益生菌液替代，持续1个月。饲喂含嗜酸乳杆菌LA-G80、两歧双歧杆菌BB-G90、BL-G301的复合菌粉及饮用水（低剂量添加益生菌1.5亿CFU每天每只，中等剂量添加3亿CFU每天每只，高剂量添加9亿CFU每天每只，）1个月。而后全部采用普通饲料继续喂养15天。所有动物采用单笼饲养在清洁级动物房，处死大鼠前均禁食不禁饮12h。
肠粘膜菌群标本收集：
颈椎脱白法处死大鼠后固定于解剖板上，常规消毒开腹，无菌纱布覆盖切口。距回盲瓣10cm处切下回肠段约5cm置于无菌平皿中，纵行剖开肠管，生理盐水反复冲洗，玻片轻轻刮取粘膜约0.1g，置于0.9ml无菌磷酸缓冲液中。
细菌培养计数：
1、将所取标本分别以无菌生理盐水梯度稀释为1x10-2、1×10-3 1×10-4“稀释液，各取20ul接种于乳酸杆菌选择性培养基上。
2、37℃±1℃条件下，厌氧培养72小时。
3、以细菌计数仪计数菌落数，结果用菌落形成单位（cfu ）表示： CFU / ml ＝菌落数×50×稀释倍数。
结果如下（取平均值）。
表3 小鼠肠粘膜菌数
组别 乳酸杆菌（Lg对数平均值）
对照组 5.87±0.81
低剂量组 6.09±1.64
中等剂量组 6.52±1.32
高级剂量组 7.95±1.17
由上表可见，无论是低剂量组、中等剂量组，高剂量组其体内的乳酸菌群都会发生一定变化。其中中等及高剂量益生菌补充组的体内益生菌检测的数据最多。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种缓解肌肉疲劳的益生菌组合物，其特征在于，所述组合物包括植物乳杆菌LP-G18、两歧双歧杆菌BB-G90、长双歧杆菌BL-G301；
所述植物乳杆菌LP-G18分类名为植物乳杆菌Lp-G18（Lactobacillusplantarum Lp-G18），保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCCNO：M2013690，保藏时间为2013年12月23日，保藏地址：中国武汉；
所述长双歧杆菌BL-G301的分类命名为长双歧杆菌BL-G301（Bifidobacterium longum
BL-G301），保藏地址为中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2013689，保藏时间为2013年12月23日；
所述的两歧双歧杆菌BB-G90的分类名为两歧双歧杆菌BB-G90（Bifidobacteriumbifidum BB-G90），保藏地点为：中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M2013194，保藏时间为：2013年5月9日。
2.根据权利要求1所述的缓解肌肉疲劳的益生菌组合物，其特征在于，所述植物乳杆菌LP-G18、两歧双歧杆菌BB-G90、长双歧杆菌BL-G301活菌数量比为10:6~1:4~1。
3.根据权利要求1所述的缓解肌肉疲劳的益生菌组合物，其特征在于，所述植物乳杆菌LP-G18、两歧双歧杆菌BB-G90、长双歧杆菌BL-G301活菌数量比为10:3:2。
4.根据权利要求1所述的缓解肌肉疲劳的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌组合物还包含食品上和药学上可接受的辅料。
5.根据权利要求2所述的缓解肌肉疲劳的益生菌组合物，其特征在于，所述辅料为麦芽糊精、抗性糊精、羟乙基纤维素，山梨糖醇，乳糖醇、柳橙水果粉、菊粉、低聚异麦芽糖、低聚果糖、全脂乳粉、乳粉、水苏糖、奶味香精中的一种或几种。
6.根据权利要求2所述的缓解肌肉疲劳的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌组合物为粉剂、颗粒剂、片剂、丸剂、液体剂或胶囊剂。
7.根据权利要求4所述的缓解肌肉疲劳的益生菌组合物，其特征在于，每包粉剂成品出厂时含有活菌数100亿CFU以上。
8.根据权利要求4所述的缓解肌肉疲劳的益生菌组合物，其特征在于，所述粉剂每包的净含量为2~5g/包。
9.根据权利要求1所述的缓解肌肉疲劳的益生菌组合物，其特征在于，所述益生菌组合物具体的制备步骤为：
（1）制备植物乳杆菌Lp-G18冻干菌粉；
（2）制备两歧双歧杆菌BB-G90冻干菌粉；
（3）制备长双歧杆菌BL-G301冻干菌粉；
（4）将步骤（1）、步骤（2）和步骤（3）得到的菌粉按活菌数量比10:3:2混合后添加辅料按照常规方法制备成食品、药品或保健品；
其中，所述步骤（1）、步骤（2）和步骤（3）中菌粉均为将发酵后收集到的菌体与基础保护剂按照质量比1∶2混合后置于温度为-45℃中冻干后粉碎而成。
10.权利要求1-9任意项所述的缓解肌肉疲劳的益生菌组合物在缓解肌肉疲劳方面的应用。
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