CN116333934A - 贝莱斯芽孢杆菌在制备具有促进植物生长作用的菌剂中的应用 - Google Patents

贝莱斯芽孢杆菌在制备具有促进植物生长作用的菌剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供贝莱斯芽孢杆菌在制备具有促进植物生长作用的菌剂中的应用，所述贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST‑221菌株，保藏编号为CGMCC No.22955，保藏日期为2021年07月26日。该菌株具有抑菌、固氮、溶磷、解钾、形成生物膜和产生生长素的作用，能用于制备抑制病原菌，促进植株生长和减少植物土传病害的产品。

Description

贝莱斯芽孢杆菌在制备具有促进植物生长作用的菌剂中的 应用
技术领域
本发明属于微生物制剂领域，具体涉及贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensisIFST-221菌株在制备具有促进植物生长作用的菌剂中的应用、贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis IFST-221菌株在制备预防和/或治疗植物土传病害的生防菌剂中的应用、一种预防和/或治疗植株土传病害、促进植株生长的贝莱斯芽孢杆菌的培养物和一种具有防病促生功效的植物用菌剂。
背景技术
作物土传病害是指病原菌利用土壤为生存媒介在适当条件下从作物的根系或茎基部侵染作物引起的病害，主要包括根腐病、茎基腐病、枯萎病、黄萎病等。对于该类病害，目前的防治手段主要依靠多菌灵、戊唑醇等为主要成分的化学农药，但是化学药物带来的环境污染问题以及农药残留问题不容忽视，并且化肥的大量施用，造成了土壤肥力的下降，破坏了土壤中的微生物环境，进一步加重了土传病害的发生。
土传病害可通过无污染的生物防治手段进行防治，生物防治是指通过微生物或其代谢产物对有害生物进行防控，其中来源于自然界中的植物根际促生菌(plant growth-promoting rizhobacteria，PGPR)是一类重要的生物防治菌，主要包括芽孢杆菌、假单胞菌、固氮菌、微杆菌等。
CN101974462A公开了一种防治中草药土传病害的枯草芽孢杆菌及其菌剂制备，它涉及一种枯草芽孢杆菌及其菌剂制备。该发明防治中草药土传病害的枯草芽孢杆菌X1，为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)，保藏编号为CGMCC No.4037，保藏日期为2010年7月26日。菌剂是通过活化菌种接种于NYD液体培养基中富集培养得菌数浓度达20～40亿/毫升的菌液即完成。该发明中菌X1是对土传病害具有较高防效的生防菌株；其菌剂防治中草药土传病害人参根腐病和菌核病、平贝菌核病及五味子根腐、茎基腐病等病害的防治达60％～80％，菌剂生防制剂安全，不污染环境，不伤害非靶标生物和诱发病原菌的抗药性。
CN104509539A公开了一种含有甲霜灵和多菌灵用于防治蔬菜、葡萄主要病害的复配杀菌剂，其特点是：由活性成分和助剂组成，所述的活性成分由甲霜灵与多菌灵杀菌剂组成，其重量比为1～20∶1～20。该发明主要用于防治土传病害包括辣椒疫病、辣椒枯萎病，地上部病害包括葡萄霜霉病、葡萄白腐病、黄瓜霜霉病、黄瓜炭疽病、番茄晚疫病、番茄灰霉病。该复配杀菌剂防治谱广，速效性和持效性好，能有效延缓病原菌抗药性的发生和发展。该复配制剂制备工艺简单，成本低，安全性高，经济效益显著。
因此，为减少化学农药、化肥对环境造成的污染问题，研发具有防病促生作用的生物制剂是非常有意义的。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种贝莱斯芽孢杆菌应用及菌剂，尤其提供贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株在制备具有促进植物生长作用的菌剂中的应用、贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株在制备预防和/或治疗植物土传病害的生防菌剂中的应用、一种预防和/或治疗植株土传病害、促进植株生长的贝莱斯芽孢杆菌的培养物和一种具有防病促生功效的植物用菌剂。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供贝莱斯芽孢杆菌在制备具有促进植物生长作用的菌剂中的应用，所述贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株，保藏编号为CGMCC No.22955，保藏日期为2021年07月26日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明从中国云南省曲靖市玉米穗腐病发病严重田块中健康玉米根际的土壤样品里分离获得并保藏了一株贝莱斯芽孢杆菌，将其命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis IFST-221菌株，该菌株具有固氮、溶磷、解钾、形成生物膜和产生生长素的作用，能够显著提高玉米、棉花、番茄、花椰菜等植株的地上部分鲜重、地上部分干重和植株高度，呈现明显的促进植株生长的作用，这为制备促进植株生长的菌剂提供了新的选择策略。
第二方面，本发明提供贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株在制备预防和/或治疗植物土传病害的生防菌剂中的应用，所述贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis IFST-221菌株的保藏编号为CGMCC No.22955，保藏日期为2021年07月26日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明还发现贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株具有显著的抑制病原菌、促进植株生长，从而减少植物土传病害的作用。具体地，贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株对拟轮枝镰孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌、腐皮镰孢菌、烟草疫霉菌、大丽轮枝菌六种病原菌的抑制率分别可达61.84％、68.54％、61.51％、71.61％、77.88％、74.14％；结合第一方面所涉及的贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensisIFST-221菌株固氮、溶磷、解钾、形成生物膜和产生生物素，进而改善植株生长状态的功用，贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株在制备预防和/或治疗植物土传病害的生防菌剂中具有良好的应用前景。
第三方面，本发明提供一种预防和/或治疗植株土传病害、促进植株生长的贝莱斯芽孢杆菌的培养物，所述培养物的制备方法包括如下步骤：
将第一方面或第二方面所述的贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株接种于培养基中在30-39℃下培养12-24h即得。
所述30-39℃中的具体数值可以选择30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃或39℃等，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
所述12-24h中的具体数值可以选择12h、14h、16h、18h、20h、22h、或24h等，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述培养基为LB培养基、CM培养基或NB培养基。
本发明优选上述培养条件，贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株在上述培养条件中生长速率快，碳源利用能力强。
第四方面，本发明提供一种具有防病促生功效的植物用菌剂，所述具有防病促生功效的植物用菌剂中的菌株包括如第一方面、第二方面或第三方面所述的贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株。
本发明所涉及的贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株可以被单独地应用于相关产品中，也可以与其他菌株结合应用于相关产品中。含有贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株的植物用菌剂具有显著的促进植株生长，预防和/或治疗植株土传病害的作用。
优选地，所述具有防病促生功效的植物用菌剂的剂型包括液体菌剂、粉状菌剂或颗粒状菌剂。
优选地，所述液体菌剂中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株的活菌数不低于1×109cfu/mL，例如1×109cfu/mL、1.5×109cfu/mL、2×109cfu/mL、2.5×109cfu/mL、5×109cfu/mL、10×109cfu/mL，该数值点内的其他数值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述粉状菌剂中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株的活菌数不低于1.5×109cfu/g，例如1.5×109cfu/g、2×109cfu/g、2.5×109cfu/g、5×109cfu/g、10×109cfu/g，该数值点内的其他数值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述具有防病促生功效的植物用菌剂还包括保护剂。
优选地，所述保护剂包括脱脂奶粉、甘露醇、蔗糖或乳糖中的任意一种或至少两种的组合；所述至少两种的组合包括脱脂奶粉和甘露醇的组合、甘露醇和蔗糖的组合或蔗糖和乳糖的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述保护剂为脱脂奶粉。
优选地，所述粉状菌剂中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株与保护剂的质量比为(5-20):1。
所述(5-20)中的具体数值可以选择5、7、9、11、13、15、17、19或20等，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述具有防病促生功效的植物用菌剂中的菌株还包括芽孢杆菌、假单胞菌、固氮菌或微杆菌中的任意一种或至少两种的组合；所述至少两种的组合包括芽孢杆菌和假单胞菌的组合、假单胞菌和固氮菌的组合或固氮菌和微杆菌的组合等，其他任意的组合方式均可选择，在此便不再一一赘述。
优选地，所述具有防病促生功效的植物用菌剂中的菌株还包括枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis GW-450菌株，所述枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis GW-450保藏编号为CGMCC No.26671，保藏日期为2023年2月21日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
本发明还创造性地发现上述贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株能够与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis GW-450菌株复配使用，用于防治植物土传病害，具有比单一菌剂或者其他复配方式显著优异的效果，说明贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis IFST-221菌株和枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis GW-450菌株在抑制土传病害病原菌生长方面具有协同增效作用。
优选地，所述贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株与枯草芽孢杆菌GW-450菌株的活菌数比为(1-10):1。
所述(1-10)中的具体数值可以选择1、2、3、4、5、6、7、8、9或10等，上述各项数值范围内的其他具体点值均可选择，在此便不再一一赘述。
在本发明所涉及的植物用菌剂中，贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株和枯草芽孢杆菌GW-450菌株在满足上述特定的活菌数比例关系时具有更优的协同增效效果。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
1、本发明从中国云南省曲靖市玉米穗腐病发病严重田块中健康玉米根际的土壤样品中分离获得并保藏了一株贝莱斯芽孢杆菌，将其命名为贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis IFST-221菌株，该菌株具有固氮、溶磷、解钾、形成生物膜和产生生长素的作用，能够显著提高玉米、棉花、番茄、花椰菜等植株的地上部分鲜重、地上部分干重和植株高度，呈现明显的促进植株生长的作用，这为制备促进植株生长的菌剂提供了新的选择策略。
2、本发明还发现贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株具有显著的抑制病原菌，促进植株生长、从而减少植物土传病害的作用。具体地，贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株对拟轮枝镰孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌、腐皮镰孢菌、烟草疫霉菌、大丽轮枝菌六种病原菌的抑制率分别可达61.84％、68.54％、61.51％、71.61％、77.88％、74.14％；结合第一方面所涉及的贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensisIFST-221菌株固氮、溶磷、解钾、形成生物膜和促进生长素的释放，进而改善植株生长状态的功用，贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株在制备预防和/或治疗植物土传病害的生防菌剂中具有良好的应用前景。
3、本发明所涉及的贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株可以被单独地应用于相关产品中，也可以与其他菌株结合应用于相关产品中。含有贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株的植物用菌剂具有显著的促进植株生长，预防和/或治疗植株土传病害的作用。
附图说明
图1为测试例1中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221在无氮培养基、NBRIP培养基和解钾细菌培养基中的生长结果图。
图2为测试例1中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221的生物膜结晶紫染色结果图。
图3为测试例3中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221对拟轮枝镰孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌、腐皮镰孢菌、烟草疫霉菌、大丽轮枝菌六种病原菌的抑菌结果图；
图4为测试例4中实施例4组的玉米、棉花、番茄、花椰菜30d后的生长情况图。
图5为测试例4中实施例4组的玉米、棉花、番茄、花椰菜30d后植株高度、根长、地上部分鲜重和干重、地下部分鲜重和干重结果图。
图6为测试例5中空白组、模型组、IFST-221组和实施例1组的棉花植株生长情况图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。各实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
除非另有说明，本说明书中使用的全部专业术语和科学用语的含义均与本发明所属技术领域的技术人员一般理解的含义相同。但如有冲突，以包含定义的本说明书为准。
下述制备例、实施例和测试例中所涉及的拟轮枝镰孢菌、枯草芽孢杆菌、尖孢镰孢菌、腐皮镰孢菌为购自上海百风生物科技有限公司的拟轮枝镰孢菌ATCC24378、枯草芽孢杆菌ATCC6051、尖孢镰孢菌ATCC64530、腐皮镰孢菌ATCC36031产品。禾谷镰孢菌为购买于宁波明舟生物科技有限公司的禾谷镰孢菌B80303产品。烟草疫霉菌、大丽轮枝菌为购买自北京百欧博伟生物技术有限公司的烟草疫霉菌Bio-52996、大丽轮枝菌Bio-20525产品。
制备例1
本制备例提供下述制备例、实施例或测试例中培养基与结晶紫染色液的制备方法。
LB液体培养基：胰蛋白胨10份、酵母提取物5份、NaCl 10份、无菌H2O补齐至1000份，pH调为7，121℃、20min高温高压灭菌后保存备用。
LB固体培养基：在LB液体培养基中加入15g/L琼脂粉，121℃、20min高温高压灭菌后保存备用。
CM培养基：酵母提取物6份，酶水解酪合素6份，蔗糖10份，加无菌H2O补齐至1000份，121℃、20min高温高压灭菌后保存备用。
PDA培养基：将马铃薯洗净去皮，切成小块，称取200份，加800份无菌H2O煮沸后计时25min，经四层纱布过滤，滤液中加入葡萄糖20份、琼脂粉15份，继续加热搅拌均匀，冷却后加无菌H2O补齐至1000份，121℃、20min高温高压灭菌后保存备用。
无氮培养基：蔗糖10份，NaCl 0.12份，K2HPO4·3H2O 0.5份，CaCO3 1份，MgSO4·7H2O 0.2份，酵母提取物0.5份，无菌H2O补齐至1000份，pH调为7，121℃、20min高温高压灭菌后保存备用。
国家植物研究所磷酸盐生长培养基(NBRIP)：葡萄糖10份，Ca3(PO4)2 5份，MgCl2·6H2O 5份，MgSO4·7H2O 0.25份，KCl 0.2份，(NH4)2SO4 0.1份，无菌H2O补齐至1000份，pH调为7.2，121℃、20min高温高压灭菌后保存备用。
解钾细菌培养基：(NH4)2SO4 0.5份，酵母提取物0.5份，MgSO4·7H2O 0.3份，FeSO4·7H2O 0.03份，MnSO4·H2O 0.03份，钾长石粉2份、无菌H2O补齐至1000份，pH调为7，121℃、20min高温高压灭菌后保存备用。
0.5％结晶紫染色液：称取0.5份结晶紫粉末，溶于100份无水乙醇。
制备例2
本制备例提供贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株，分离方法如下所示：
(1)玉米根际土中菌株的分离：从中国云南省曲靖市玉米穗腐病发病严重田块的健康玉米根际获得土壤样品，加入10倍体积无菌H2O后于30℃、180rpm的条件下振荡15min制备悬浊液。随后悬浊液使用无菌H2O梯度稀释10倍、20倍、50倍后涂布于LB固体培养基上，30℃培养24h。用接种环挑取平板上形态、大小、颜色、透明度不同的菌株进行平板划线，获得单菌落。
(2)筛选具有抑菌效果的生防菌株：将拟轮枝镰孢菌菌株接种于PDA平板，25℃培养5d，待菌落布满平板时，在边缘处用灭菌打孔器打取菌饼，用灭菌牙签将菌饼挑入新的PDA平板中心。在距离新的PDA平板中心25mm处两侧，选取两个点，接种5μL步骤(1)中单菌落30℃培养12h得到的菌液，并以只接种拟轮枝镰孢菌的平板为对照组，每组设置三个平行组。25℃培养6d，观察抑菌圈的形成。根据抑菌圈计算抑菌率，获得一株抑菌效果强的菌株，将其命名为IFST-221菌株，抑菌率为61.84％。
(3)IFST-221菌株的鉴定：根据“伯杰细菌鉴定手册”第八版和“常见细菌系统鉴定手册”中描述的方法，对该菌菌落形态以及生理生化特征进行如下鉴定：
形态特征：在LB固体培养基上单菌落呈乳白偏淡黄色，不透明，圆形；长时间培养时边缘凸起形成褶皱。革兰氏染色结果为阳性，杆状，长约1-5μm。
生理生化特征：淀粉水解反应，阳性、葡萄糖水解反应，阳性、木糖水解反应，阳性、阿拉伯糖水解反应，阳性、甘露醇水解反应，阳性、柠檬酸盐利用反应，阳性、甲基红实验反应，阳性、V.P.实验反应，阳性、酪素水解反应，阳性、ONPG反应，阳性、可以耐受质量分数为2％、5％、7％的NaCl水溶液，不能耐受10％的NaCl水溶液，可以在pH＝6.8或5.7的液体培养基中生长，可以在15-40℃的温度条件下生长。
基因组鉴定：使用天根细菌DNA提取试剂盒提取该菌株的基因组，用细菌16S rDNA通用引物(27F/1492R，表1)进行PCR扩增，得到大小约1500bp的片段，16S rDNA序列如SEQID NO:7所示。使用美基生物胶回收试剂盒将扩增产物进行胶回收，1500bp的片段连接至购自TaKaRa公司的pMD18-T Vector质粒，进行测序后，使用NCBI中BLAST工具对基因测序结果进行分析比对，使用MEGA X构建系统发育树。结果表明IFST-221菌株为芽孢杆菌属。
由于IFST-221菌株关于16S rDNA的测序结果只能将IFST-221菌株鉴定为芽孢杆菌属，因此采用芽孢杆菌属内鉴定基因gyrA通用引物(gyrA-F/R，表1)和gyrB通用引物(引物序列参考自文献：喻国辉等人2010年5月发表在《中国生物防治》期刊上，名称为“利用16SrDNA结合gyrA和gyrB基因对生防芽孢杆菌R31的快速鉴定”的期刊文献，其中UP1序列为
GAAGTCATCATGACCGTTCTGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA；UP2R序列为AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTCNGCRTCNGTCA)进行PCR扩增，使用美基生物胶回收试剂盒将扩增产物进行胶回收，连接至pMD18-TVector质粒中，送至生工生物工程有限公司进行测序。测序所得结果使用NCBI的BLAST工具进行比对分析，获取相关基因序列信息后用MEGA X构建两个基因的系统发育树。
基于以上特征，IFST-221菌株鉴定为Bacillus velezensis(贝莱斯芽孢杆菌)。该菌株于2021年7月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号为CGMCC No.22955，分类名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。
表1
引物名称 序列表中序列名称 寡核苷酸序列(5’-3’)
27F SEQ ID No:1 AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
1492R SEQ ID No:2 TACGGCTACCTTGTTACGACTT
gyrA-F SEQ ID No:3 CAGTCAGGAAATGCGTACGTCCTT
gyrA-R SEQ ID No:4 CAAGGTAATGCTCCAGGCATTGCT
SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列(5’-3’)如下：
GGTTACCTTGTTACGACTTCACCCCAATCATCTGTCCCACCTTCGGCGGCTGGCTCCTAAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCSGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACT
ACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCA
GTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTAC
GCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTT
CCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGA
CTTWAGAAACCGCCTGCGAGCCcTTTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCT
TGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTC
TGGTTAGGTACCGTCAAGGTGCCGCCCTATTTGAACGGCACTTGTTCTTCC
CTAACAACAGAGCTTTACAATCCGAAAACCTTCATCACTCACGCGGCGTTG
CTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGT
AGGAGCCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGTGTGGCCGATCACCCTCTCAGG
TCGGCTACGCATCGTTGCCTTGGTGAGCCGTTACCTCACCAACTAGCTAAT
GCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGCGGTAGCCGAAGCCACCTTTTATGTCTGA
ACCATGCGGTTCAAACAACCATCCGGTATTAGCCCCGGTTTCCCGGAGTTA
TCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTACTCACCCGTCCGCCGCTA
ACATCAGGGAGCAAGCTCCCATCTGTCCGCTCGACTTGCATGTATTAGGCA
CGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCCAGGATCAAACTCTA
实施例1
本实施例提供一种具有防病促生功效的植物用菌剂，所述菌剂的制备方法如下所示：
取保存在-80℃的贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株甘油菌，在LB固体培养基上划线，置于37℃培养箱培养20h；从固体培养基上挑取单菌落，接种于100mL的LB液体培养基，37℃、250rpm培养12h，制得贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensisIFST-221菌株的种子液；将种子液以3％(v/v)的接种量接种于400mL的LB液体培养基，37℃、250rpm、pH调整为7，发酵培养12h，停止发酵后收集发酵液，添加无菌水调整活菌数至1×109cfu/mL，制得贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221液体菌剂；
取保存在-80℃的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis GW-450菌株甘油菌，在LB培养基上划线，置于37℃培养箱培养20h；从固体培养基上挑取单菌落，接种于100mL的LB液体培养基，37℃、250rpm培养12h，制得枯草芽孢杆菌GW-450菌株的种子液；将种子液以1％(v/v)的接种量接种于400mL的LB液体培养基，37℃、250rpm、pH调整为7，发酵培养12h，停止发酵后收集发酵液，添加无菌H2O调整活菌数至1×109cfu/mL，制得枯草芽孢杆菌GW-450液体菌剂；
按照贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221液体菌剂10份、枯草芽孢杆菌GW-450液体菌剂1份混合，制得具有防病促生功效的植物用液体菌剂。
实施例2
本实施例提供一种具有防病促生功效的植物用菌剂，所述菌剂的制备方法如下所示：
取保存在-80℃的贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株甘油菌，在LB固体培养基上划线，置于30℃培养箱培养16h；从固体培养基上挑取单菌落，接种于500mL的LB液体培养基中，37℃、250rpm培养16h，制得贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis IFST-221菌株的种子液；将种子液以0.8％(v/v)的接种量接种于50L的CM液体培养基，30℃、250rpm、pH调整为7，发酵培养24h，停止发酵后收集发酵液；发酵液离心收集菌体沉淀，按照菌体沉淀9份，脱脂奶粉1份的比例混合，混合物放入冷冻干燥仪器中，冷冻干燥5h后取出制得贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221粉状菌剂(5×109cfu/g)。
取保存在-80℃的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis GW-450菌株甘油菌，在LB培养基上划线，置于37℃培养箱培养18h；从固体培养基上挑取单菌落，接种于100mL的LB液体培养基，37℃、250rpm培养14h，制得枯草芽孢杆菌GW-450菌株的种子液；将种子液以1％(v/v)的接种量接种于400mL的CM液体培养基，37℃、250rpm、pH调整为7，发酵培养16h，停止发酵后收集发酵液；发酵液离心收集菌体沉淀，将菌体沉淀放入冷冻干燥仪器中，冷冻干燥5h后取出制得枯草芽孢杆菌GW-450菌株粉状菌剂(2×109cfu/g)。
按照贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221粉状菌剂10份、枯草芽孢杆菌GW-450粉状菌剂(2×109cfu/g)10份混合，制得具有防病促生功效的植物用粉状菌剂。
实施例3
本实施例提供一种具有防病促生功效的植物用菌剂，所述菌剂的制备方法如下所示：
取保存在-80℃的贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株甘油菌，在LB固体培养基上划线，置于37℃培养箱培养18h；从固体培养基上挑取单菌落，接种于100mL的LB液体培养基中，37℃、250rpm培养14h，制得贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis IFST-221菌株的种子液；将种子液以1％(v/v)的接种量接种于400mL的LB液体培养基，37℃、250rpm、pH调整为7，发酵培养16h，停止发酵后收集发酵液，添加无菌H2O调整活菌数至5×109cfu/mL，制得贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221液体菌剂；
取保存在-80℃的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis GW-450菌株甘油菌，在LB培养基上划线，置于37℃培养箱培养18h；从固体培养基上挑取单菌落，接种于100mL的LB液体培养基，37℃、250rpm培养14h，制得枯草芽孢杆菌GW-450菌株的种子液；将种子液以1％(v/v)的接种量接种于400mL的LB液体培养基，37℃、250rpm、pH调整为7，发酵培养16h，停止发酵后收集发酵液，添加无菌H2O调整活菌数至5×109cfu/mL，制得枯草芽孢杆菌GW-450液体菌剂；
按照贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221液体菌剂10份、枯草芽孢杆菌GW-450液体菌剂10份(活菌数为5×109cfu/mL)混合，制得具有防病促生功效的植物用液体菌剂。
实施例4
本实施例提供一种具有防病促生功效的植物用菌剂，所述具有防病促生功效的植物用菌剂与实施例1的区别仅在于不含枯草芽孢杆菌GW-450液体菌剂，并将枯草芽孢杆菌GW-450液体菌剂的质量份数分配至贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221液体菌剂，其余均与实施例1相同。
实施例5
本实施例提供一种具有防病促生功效的植物用菌剂，所述具有防病促生功效的植物用菌剂与实施例1的区别仅在于将枯草芽孢杆菌GW-450菌株替换为枯草芽孢杆菌ATCC6051菌株，其余均与实施例1相同。
对比例1
本对比例提供一种具有防病促生功效的植物用菌剂，所述具有防病促生功效的植物用菌剂与实施例1的区别仅在于不含贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221液体菌剂，并将贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221液体菌剂的质量份数分配至枯草芽孢杆菌GW-450液体菌剂，其余均与实施例1相同。
测试例1
贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株固氮、溶磷、解钾及形成生物膜的作用
挑取实施例1-3中所述固体LB培养基中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensisIFST-221单菌落，分别接种于4mL无氮培养基、NBRIP培养基和解钾细菌培养基，37℃、培养32h，分别以未接菌的培养基作为空白组，比较实施例1-3中菌株生长情况(图1)。
结果表明，接种贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株的培养基较空白组浑浊，该菌株可以在无氮培养基、NBRIP培养基和解钾细菌培养基中生长，表明贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株具有固氮、溶磷和解钾的作用。
挑取实施例1-3中所述固体LB培养基中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensisIFST-221单菌落，分别接种于4mL LB液体培养基，37℃、培养12h后，吸取菌液加入装有LB固体培养基的48孔板中，每孔加入10μL，37℃、培养32h，以未加菌液的LB固体培养基作为空白组。培养结束后使用PBS缓冲液冲洗固体培养基，冲去膜表层细胞，每孔加入100μL甲醇固定20min，弃去甲醛，每孔加入100μL质量百分数为0.1％的结晶紫溶液染色20min，使用PBS缓冲液洗涤去除结晶紫溶液，比较空白组与实施例1-3组中的固体培养基染色情况(图2)。
实施例1-3中固体培养基染为紫色，空白组呈现固体培养基的原色，如图2所示，空白组LB培养基表面光滑，实施例1中固体培养基表面出现了有皱褶的生物膜，表明贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株具有促进生物膜形成的作用。
测试例2
贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株的生长素分泌作用
称取20mg生长素IAA，使用少量无水乙醇溶解后，用蒸馏水定容至100mL，保存至4℃冰箱。逐级稀释配制IAA梯度稀释液，浓度为0mg/L、5mg/L、10mg/L、15mg/L、20mg/L、25mg/L、30mg/L、35mg/L、40mg/L、45mg/L、50mg/L的IAA溶液。分别吸取1mL IAA不同浓度梯度稀释液加入3mL Salkowski试剂(取3mL 0.5M无水FeCl3 4.075g溶于50mL蒸馏水)，加入37mL蒸馏水中，取浓硫酸60mL沿壁缓缓加入，使用前摇匀，避光保存，此时应为黄绿色；)，避光静置30min，测定吸光度在530nm处的比色值。待测定完毕后，以OD530值作为纵坐标，IAA浓度(mg/L)作为横坐标绘制标准曲线。
向产IAA测定培养基(1g/mL的L-色氨酸加入已高温灭菌且放至室温的LB液体培养基，使之终浓度为100mg/L)中接入贝莱斯芽孢杆菌IFST-221单菌落培养24h后，1000rpm离心10min，吸取1mL上清液加入3mL Salkowski试剂，避光静置30min，测定吸光度在530nm处的比色值，5次重复，然后通过标准曲线计算贝莱斯芽孢杆菌IFST-221菌株产IAA浓度为5.59mg/L。
测试例3
贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株的抑菌作用
将拟轮枝镰孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌、腐皮镰孢菌、烟草疫霉菌、大丽轮枝菌六种病原菌分别接种于PDA平板上，25℃培养，直至菌落布满平板时，在边缘处用灭菌打孔器打取菌饼，用灭菌牙签将其接种至新的PDA平板中心。
在距离新的PDA平板中心25mm两侧处，选取两个点，分别接种实施例1-3中制得的10μL贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221种子液，并以只接种病原菌的平板为对照组，每组设置三个平行组，25℃培养至对照组菌落长满平板，观察实验组抑菌圈，并根据抑菌圈计算抑菌率。上述实验中，贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株对拟轮枝镰孢菌、禾谷镰孢菌、尖孢镰孢菌、腐皮镰孢菌、烟草疫霉菌、大丽轮枝菌的抑制率分别为61.84％、68.54％、61.51％、71.61％、77.88％、74.14％(图3)，表明贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株具有显著的抑制植物病原菌的作用，在生物防治植株微生物病害方面应用前景良好。
测试例4
具有防病促生功效的植物用菌剂的促生长作用
播种玉米、棉花、番茄、花椰菜于培养钵中，待出苗后，使用灌根法分别接种40mL实施例4制得所述具有防病促生功效的植物用菌剂。玉米、棉花、番茄、花椰菜4种植物分别设置一个空白组，空白组将植物用菌剂更换为40mL的无菌水。每组接种14株植株，各组接种30d后记录各组植株高度、根长、地上部分鲜重和干重、地下部分鲜重和干重，实验重复3次，根据记录数据计算平均值(表2、图4和图5)。某种植株地上部分鲜重平均值＝某种植株总地上部分鲜重/某种植株总个数。
表2
Figure BDA0004129615420000191
Figure BDA0004129615420000201
由表2数据可知，实施例4使用具有防病促生功效的植物用菌剂后，植株地上部分鲜重平均值高于空白组；此外，图4、图5中，实施例4的玉米植株高度、花椰菜的地上部分干重和棉花的地下部分鲜重较空白组呈现显著的升高，更值得注意的是实施例4中玉米、棉花、番茄、花椰菜的地上部分鲜重均高于空白组，表明使用本发明所述具有防病促生功效的植物用菌剂，即使用含有贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株的菌剂后，植物的生长呈现显著的升高。
测试例5
具有防病促生功效的植物用菌剂的防病害作用
将活化好的大丽轮枝菌的菌饼接种到CM培养基中，在25℃，120rpm的恒温摇床里培养3d后，用灭过菌的三层擦镜纸过滤菌丝后得到孢子悬浮液，用血球计数板将孢子悬浮液的浓度调为5×106个/mL备用。
模型组：播种棉花黄萎病易感植株(军棉1号)于纸钵中，生长至一片真叶展开的棉花时，使用灌根法接种20mL大丽轮枝菌孢子悬浮液；空白组不接种大丽轮枝菌孢子悬浮液，更换为20mL的无菌水；IFST-221组：不接种大丽轮枝菌孢子悬浮液，更换为20mL的无菌水，3d天后使用灌根法接种实施例4制得的40mL所述具有防病促生功效的植物用菌剂；实施例或对比例组为在接种大丽轮枝菌孢子悬浮液3d后，继续使用灌根法接种实施例或对比例制得的40mL所述具有防病促生功效的植物用菌剂。
每组接种14株棉花，接种30d后拍照、记录病情指数，实验重复3次(表3，图6)。
病害等级标准共分为5个等级：0＝健康植株，叶片无症状；1＝有一片或两片子叶出现症状，但真叶上没有症状；2＝两片子叶和一片真叶均出现症状；3＝两片子叶和两片真叶均出现症状；4＝所有叶片都出现症状，有症状的叶片脱落，顶端分生组织坏死或植株死亡。病情指数＝(0n0+1n1+2n2+3n3+4n4)/4n×100％，其中n0至n4是每个相应病害等级对应的植株数量，n为每组处理的植株总数量。
表3
组别 病情指数(％)
空白组 0
模型组 73.21
IFST-221组 0
实施例1 8.93
实施例2 10.91
实施例3 16.74
实施例4 20.49
实施例5 29.85
对比例1 40.56
由表3数据可知，实施例1与模型组相比，使用含有贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis IFST-221菌株和枯草芽孢杆菌GW-450菌株以10：1活菌数配比的液体菌剂灌根后大丽轮枝菌侵染引起的棉花病情指数降低了64.28％，防效高达87.8％，表明含有贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株和枯草芽孢杆菌GW-450菌株以10：1配比的液体菌剂具有显著的防病害作用；实施例1与模型组相比病情指数降低，且降低程度高于实施例4和对比例1，表明贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株可以与枯草芽孢杆菌GW-450菌株组合搭配，协同增效，制得的菌剂具有更优的防病害作用。实施例5与实施例1相比，使用市售枯草芽孢杆菌，其病情指数较高，表明市售枯草芽孢杆菌与贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株组合使用效果较枯草芽孢杆菌GW-450菌株与贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株组合差。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的制备工艺，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (10)

1.贝莱斯芽孢杆菌在制备具有促进植物生长作用的菌剂中的应用，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌为贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株，保藏编号为CGMCC No.22955，保藏日期为2021年07月26日。
2.贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株在制备预防和/或治疗植物土传病害的生防菌剂中的应用，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensisIFST-221菌株的保藏编号为CGMCC No.22955，保藏日期为2021年07月26日。
3.一种预防和/或治疗植株土传病害、促进植株生长的贝莱斯芽孢杆菌的培养物，其特征在于，所述培养物的制备方法包括如下步骤：
将权利要求1或2所述的贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株接种于培养基中在30-39℃下培养12-24h即得。
4.一种具有防病促生功效的植物用菌剂，其特征在于，所述具有防病促生功效的植物用菌剂中的菌株包括如权利要求1-3中任一项所述的贝莱斯芽孢杆菌Bacillusvelezensis IFST-221菌株。
5.如权利要求4所述的具有防病促生功效的植物用菌剂，其特征在于，所述具有防病促生功效的植物用菌剂的剂型包括液体菌剂、粉状菌剂或颗粒状菌剂；
优选地，所述液体菌剂中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株的活菌数不低于1×109cfu/mL；
优选地，所述粉状菌剂中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株的活菌数不低于1.5×109cfu/g。
6.如权利要求4或5所述的具有防病促生功效的植物用菌剂，其特征在于，所述具有防病促生功效的植物用菌剂还包括保护剂。
7.如权利要求6所述的具有防病促生功效的植物用菌剂，其特征在于，所述保护剂包括脱脂奶粉、甘露醇、蔗糖或乳糖中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述保护剂为脱脂奶粉。
8.如权利要求6或7所述的具有防病促生功效的植物用菌剂，其特征在于，所述具有防病促生功效的植物用菌剂中贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株与保护剂的质量比为(5-20):1。
9.如权利要求4-8中任一项所述的具有防病促生功效的植物用菌剂，其特征在于，所述具有防病促生功效的植物用菌剂中的菌株还包括芽孢杆菌、假单胞菌、固氮菌或微杆菌中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述具有防病促生功效的植物用菌剂中的菌株还包括枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis GW-450菌株，所述枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis GW-450菌株的保藏编号为CGMCC No.26671，保藏日期为2023年2月21日。
10.如权利要求9所述的具有防病促生功效的植物用菌剂，其特征在于，所述贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis IFST-221菌株与枯草芽孢杆菌GW-450菌株的活菌数比为(1-10):1。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117327618A (zh) * 2023-09-27 2024-01-02 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) 一株苏云金芽孢杆菌及其应用、复合生物菌剂及其制备方法和应用
CN118126903A (zh) * 2024-04-19 2024-06-04 青岛农业大学 一株耐酸产碱的多功能贝莱斯芽孢杆菌、其微生物菌剂及其应用

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117327618A (zh) * 2023-09-27 2024-01-02 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) 一株苏云金芽孢杆菌及其应用、复合生物菌剂及其制备方法和应用
CN117327618B (zh) * 2023-09-27 2024-05-14 中国农业科学院烟草研究所(中国烟草总公司青州烟草研究所) 一株苏云金芽孢杆菌及其应用、复合生物菌剂及其制备方法和应用
CN118126903A (zh) * 2024-04-19 2024-06-04 青岛农业大学 一株耐酸产碱的多功能贝莱斯芽孢杆菌、其微生物菌剂及其应用
CN118126903B (zh) * 2024-04-19 2024-10-18 青岛农业大学 一株耐酸产碱的多功能贝莱斯芽孢杆菌、其微生物菌剂及其应用

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