CN111394270B - 一株藤黄类诺卡氏菌及其应用 - Google Patents

一株藤黄类诺卡氏菌及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111394270B
CN111394270B CN201811609808.4A CN201811609808A CN111394270B CN 111394270 B CN111394270 B CN 111394270B CN 201811609808 A CN201811609808 A CN 201811609808A CN 111394270 B CN111394270 B CN 111394270B
Authority
CN
China
Prior art keywords
nocardia
gamboge
nocardioides luteus
luteus
nocardioides
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811609808.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111394270A (zh
Inventor
高淼
张方博
张树清
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Agricultural Resources and Regional Planning of CAAS
Original Assignee
Institute of Agricultural Resources and Regional Planning of CAAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Agricultural Resources and Regional Planning of CAAS filed Critical Institute of Agricultural Resources and Regional Planning of CAAS
Priority to CN201811609808.4A priority Critical patent/CN111394270B/zh
Publication of CN111394270A publication Critical patent/CN111394270A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111394270B publication Critical patent/CN111394270B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明公开了一株藤黄类诺卡氏菌及其应用。该藤黄类诺卡氏菌的菌株号为CM‑13‑16,其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.16927。本发明的藤黄类诺卡氏菌CM‑13‑16对草莓根腐病菌和草莓炭疽病菌具有较好的抑制作用,并且能产生生长素IAA:对草莓根腐病菌和草莓炭疽病菌的抑菌率分别为23.7%和21.1%,IAA的产量为96.36±4.27mg/L发酵液。藤黄类诺卡氏菌CM‑13‑16繁殖速度快,能够人工培养,培养条件简单,适于批量化生产。

Description

一株藤黄类诺卡氏菌及其应用
技术领域
本发明涉及生物农业中生物农药和生物肥料领域中一株藤黄类诺卡氏菌及其应用。
背景技术
一直以来,农业生产都饱受真菌病害的困扰,每年因此遭受巨大损失。生产者普遍通过选育抗病品种和一些化学手段进行病害的防控与治理。化学农药的使用对防治植物病害、保证农作物产量起着积极的作用,但化学防治的现状令人担忧。大量的化学毒品进入环境以后潜伏着巨大的危险,如药物残留引起的食品安全隐患、破坏生态系统的平衡等,随着时间推移会对人类的生存造成威胁。所以人们更加重视利用有益生物或生物的代谢物来控制和减轻农作物病、虫、草害,利用生态系统中各种生物之间相互依存、相互制约的生态学现象和某些生物学特性,以防治危害农业的生物措施。生物防治能有效地将有害生物控制在经济允许受害水平之下,保证农作物的产量,减少环境污染,降低残毒的遗留量。采用生物防治配合其它防治措施,可改变过去定期施药的状况,减少农药的施用次数,降低农业成本,增加了农民收入,为我国国民经济和未来农业的发展提供了可持续发展的广阔前景。
草莓根腐病是草莓上的重要病害,目前已报道多种病原菌都能引起草莓根腐病,如:Rhizoctonia solani、Fusarium spp.、Pythiumsp.、Pestalotiopsis sp.等。草莓炭疽病也是草莓上的重要病害,草莓炭疽病的病原菌为炭疽菌属(Colletotrichum spp.)的多种真菌。
当前对草莓病害的防治主要以植物抗性品种和化学防治为主,但病原菌抗药性、耐药性问题逐渐严重,且化学农药造成的残留问题也备受重视,对人类本身和生态环境造成了很大威胁,不利于草莓种植产业的可持续发展。因此,科研工作者着力探寻一种安全、经济、有效的防治措施。生物防治措施是利用有益微生物杀灭或者降低病原生物的数量以控制植物病害发生、发展的一类措施。这些有益生物亦称拮抗微生物或生防菌。开发对草莓黑根腐病和草莓炭疽根腐病具有良好防治效果的生防制剂的前提是要筛选出具有较强拮抗能力的拮抗菌。
近年来,化肥和农药在农业生产中发挥了巨大的增产作用,但它们的不合理使用,导致土壤污染、土壤肥力下降、土传病害严重、农药残留严重、农产品品质降低等一系列问题。微生物肥料可以改善作物根际生态环境,提高土壤生物肥力,减少化肥和农药的使用,并且可以节约资源、对环境友好,有利于农业的可持续发展。
微生物肥料中促进植物生长、防治病害、增加作物产量的微生物被称为植物根际促生菌(plant growth promotion rhizobacteria,PGPR),促进植物生长的机制包括产生植物生长素吲哚乙酸(IAA),具有这种机制的微生物可以引导植物茎和根分别对光和重力做出反应,从而促进植物根系生长、增强根系吸收矿物质营养和水分的能力,对于植物生长具有很好的促进作用。
菌种是微生物肥料生产应用的基础。目前,限制我国微生物肥料行业发展的瓶颈就是高效菌种的选育问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何抑制草莓根腐病菌和/或草莓炭疽病菌并促进植物生长。
为解决以上技术问题,本发明提供了一株藤黄类诺卡氏菌(Nocardioidesluteus)。
本发明所提供的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)的菌株号为CM-13-16,其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.16927。下文简称藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16。
藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16具有序列表中序列1所示的16srDNA序列。
藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-164的培养物也属于本发明的保护范围。
本发明所提供的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的培养物,是将藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16在微生物培养基中培养得到的培养容器内的物质。
上述藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的培养物中,所述物质包括所述藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-164和藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的代谢物。
上述藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的培养物中,所述微生物培养基可为固体培养基或液体培养基。
为解决以上技术问题,本发明提供了菌剂。
本发明所提供的菌剂含有藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16、藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的代谢物和/或藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的培养物。
上述菌剂中,所述菌剂可为病原菌抑制剂、病害抑制剂或产生生长素IAA的菌剂。
上述菌剂中,所述病原菌抑制剂可对下述至少一种病原菌具有抑制作用:
A、草莓根腐病菌;
B、草莓炭疽病菌;
所述病害可为下述至少一种:
a、草莓根腐病;
b、草莓炭疽病。
上述菌剂中,所述菌剂的活性成分可为藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16、藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的代谢物和/或所述藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的培养物,所述菌剂的活性成分还可含有其他生物成分或/和非生物成分,所述菌剂的其他活性成分本领域技术人员可根据抑菌效果、抗病效果、产生生长素IAA效果和/或促进植物生长效果确定。
上述菌剂中,所述菌剂除所述活性成分外,还含有载体。所述载体可为农药领域常用的且在生物学上是惰性的载体。所述载体可为固体载体或液体载体;所述固体载体可为矿物材料、植物材料或高分子化合物;所述矿物材料可为粘土、滑石、高岭土、蒙脱石、白碳、沸石、硅石和硅藻土中的至少一种;所述植物材料可为玉米粉、豆粉和淀粉中的至少一种;所述高分子化合物可为聚乙烯醇和/或聚二醇;所述液体载体可为有机溶剂、植物油、矿物油或水;所述有机溶剂可为癸烷和/或十二烷。
上述菌剂中,所述藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16可以孢子、菌丝或含有孢子和/或菌丝的培养物的形式存在。
上述菌剂中,所述菌剂的剂型可为多种剂型,如液剂、乳剂、悬浮剂、粉剂、颗粒剂、可湿性粉剂或水分散粒剂。
根据需要,所述菌剂中还可添加表面活性剂(如吐温20、吐温80等)、粘合剂、稳定剂(如抗氧化剂)、pH调节剂等。
本发明所提供的病原菌抑制剂含有藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16、藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的代谢物和/或所述藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的培养物。
上述菌剂中,所述藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的代谢物可从藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的发酵液中获得。
所述藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的代谢物可为藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的无菌代谢物或藤黄类诺卡氏菌(Nocardioidesluteus)CM-13-16的含菌代谢物。藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的无菌代谢物(无菌发酵滤液)具体可按照如下方法制备,在液体培养基中培养藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16得到液体培养物(发酵液),过滤除去液体培养物中的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16即得到藤黄类诺卡氏菌(Nocardioidesluteus)CM-13-16的无菌代谢物。藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的含菌代谢物具体可按照如下方法制备,在液体发酵培养基中培养藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16,收集培养容器内的所有物质(发酵液),该发酵液即为藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的含菌代谢物。
上述菌剂中,所述液体培养基可为PD液体培养基。
藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16、藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的代谢物、和/或所述藤黄类诺卡氏菌(Nocardioidesluteus)CM-13-16的培养物的下述任一种应用也属于本发明的保护范围:
1)在抑制病原菌中的应用;
2)在制备病原菌抑制剂中的应用;
3)在抑制病害中的应用;
4)在制备病害抑制剂中的应用。
上述应用中,所述病原菌可为下述至少一种病原菌:
A、草莓根腐病菌;
B、草莓炭疽病菌;
所述病害可为下述至少一种:
a、草莓根腐病;
b、草莓炭疽病。
藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16、藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的代谢物和/或所述藤黄类诺卡氏菌(Nocardioidesluteus)CM-13-16的培养物的下述任一种应用也属于本发明的保护范围:
A1)在制备产生生长素IAA的产品中的应用;
A2)在制备生长素IAA中的应用;
A3)在制备促进植物生长的产品中的应用;
A4)在促进植物生长中的应用。
本申请中,所述草莓根腐病菌可为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),所述草莓炭疽病菌可为暹罗刺盘孢菌(Colletotrichum siamense);所述草莓根腐病可为由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的病害,所述草莓炭疽病可为由暹罗刺盘孢菌(Colletotrichum siamense)引起的病害。
本发明的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16对草莓根腐病菌和草莓炭疽病菌具有较好的抑制作用,并且能产生生长素IAA:对草莓根腐病菌和草莓炭疽病菌的抑菌率分别为23.7%和21.1%,IAA的产量为96.36±4.27mg/L发酵液。藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16繁殖速度快,能够人工培养,培养条件简单,适于批量化生产。
保藏说明
菌种名称:藤黄类诺卡氏菌
拉丁名:Nocardioides luteus
菌株编号:CM-13-16
保藏机构:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称:CGMCC
地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期:2018年12月11日
保藏中心登记入册编号:CGMCC No.16927
附图说明
图1为菌株CM-13-16的菌落照片。
图2为菌株CM-13-16的16s rDNA的PCR产物扩增结果图。
图3为菌株CM-13-16拮抗草莓根腐病菌的效果图。图中,左侧菌落为草莓根腐病菌,右侧菌落为菌株CM-13-16。
图4为菌株CM-13-16拮抗草莓炭疽病菌的效果图。图中,左侧菌落为草莓炭疽病菌,右侧菌落为菌株CM-13-16。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述,给出的实施例仅为了阐明本发明,而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
下述实施例中的草莓根腐病菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)ACCC 39513,已于2018年8月20日收藏于中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心(又称中国农业微生物菌种保藏管理中心,简称ACCC,地址:北京市海淀区中关村南大街12号,中国农业科学院农业资源与农业区划研究所,邮编100081),自该收藏日起公众可从中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心获得该菌株。
下述实施例中的草莓炭疽病菌为暹罗刺盘孢菌(Colletotrichum siamense)ACCC39514,已于2018年8月20日收藏于中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心(又称中国农业微生物菌种保藏管理中心,简称ACCC,地址:北京市海淀区中关村南大街12号,中国农业科学院农业资源与农业区划研究所,邮编100081),自该收藏日起公众可从中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心获得该菌株。
下述实施例中所用的培养基如下:
牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏5g,蛋白胨10g,NaCl 5g,琼脂18g,用蒸馏水定容至1000mL;pH 7.0~7.2。
高氏一号固体培养基:可溶性淀粉20g,KNO3 1g,NaCl 0.5g,K2HPO4·3H2O 0.5g,MgSO4·7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,琼脂18g,用蒸馏水定容至1000mL,pH 7.2~7.4。
高氏一号液体培养基:可溶性淀粉20g,KNO3 1g,NaCl 0.5g,K2HPO4·3H2O 0.5g,MgSO4·7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,用蒸馏水定容至1000mL,pH 7.2~7.4。
PDA培养基:马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂18g,用蒸馏水定容至1000mL,pH 7.0。
纤维素刚果红培养基:NaNO3 1.0g,Na2HPO4 1.2g,KH2PO4 0.9g,MgSO4 0.5g,KCl0.5g,酵母浸出粉0.5g,酸水解酪蛋白0.5g,刚果红0.2g,纤维素粉5.0g,琼脂18.0g,用蒸馏水定容至1000mL,pH值pH 7.0~7.2。
石蕊牛奶培养基:脱脂奶粉100g,石蕊1.67g,用蒸馏水定容至1000mL,pH 6.0~6.8。
明胶培养基:NaCl 5g,蛋白胨10g,牛肉膏3g,明胶120g,用蒸馏水定容至1000mL,pH 7.2~7.4。
实施例1、藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的分离与鉴定
一、藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的分离
土壤来自北京市昌平区兴寿镇辛庄草莓基地的草莓根际土壤。在100mL无菌水中加入10g土壤样品,放入含有20粒细玻璃珠和100mL灭菌去离子水的250mL锥形瓶中,置于摇床上150r/min、30℃℃条件下震荡培养30min。吸取1mL上述混浊液加入盛有9mL无菌水中的试管中充分混匀(此时稀释度记为10-1),然后从此试管中吸取1mL加入到另一盛有9mL无菌水的试管中混合均匀,以此类推制成10-2、10-3、10-4、10-5不同稀释度的菌悬液。将各稀释度取100μL均匀涂布在牛肉膏蛋白胨培养基平板上,30℃恒温静置培养2-3天。待菌落形成后,在牛肉膏蛋白胨培养基平板上进行菌种纯化,将菌株转移至高氏一号培养基上纯化,30℃恒温静置培养1~2天,保存备用。
结果表明,从采自北京市昌平区兴寿镇辛庄草莓基地的土壤样品中共分离得到300株细菌,经对草莓黑根腐病和炭疽根腐病的生物活性初筛和复筛,从中得到一株对两种病原菌皆有良好抑菌活性的菌株,编号为CM-13-16,即为本申请的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16CGMCC No.16927(简称为菌株CM-13-16)。
二、藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16的鉴定
1、形态学鉴定
菌株CM-13-16在高氏一号平板上生长,表面菌丝体薄,致密,有褶皱,米白色,无光泽,菌落边缘不规则呈锯齿状,如图1所示。
2、生理生化测定
参考《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠,蔡妙英.常见细菌系统鉴定手册.北京:科学出版社,2011.)和《微生物学实验》(沈萍,范秀容,李广武.微生物学实验(第三版).北京:高等教育出版社,1999.)测定菌株CM-13-16的生理生化特征。
生理生化测定结果显示:菌株CM-13-16是革兰氏染色阳性菌,过氧化氢酶试验、接触酶试验、吲哚试验、明胶液化试验、硝酸盐还原试验和淀粉水解试验均为阳性结果,氧化酶试验、纤维素水解试验为阴性结果,石蕊牛奶试验中缓慢变碱性,不凝固不胨化。
3、细菌的16s rRNA分子学鉴定
提取菌株CM-13-16的总DNA作为基因扩增模板,以细菌16s rDNA通用引物,27f:5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′和1492r:5′-TACCTTGTTACGACTT-3′进行PCR反应,16s rDNA序列的PCR扩增体系为25μL扩增体系,包含:引物27f 1μL,引物1492r 1μL,超纯水7.5μL,Taq-mix酶,基因组DNA模板3μL。PCR扩增条件为94℃预变性5min;94℃变性40s,55℃退火40s,72℃延伸90s,30个循环;72℃补充延伸10min,4℃保存。PCR扩增产物采用1%的琼脂糖凝胶电泳分析,EB染色后置于
3UVTMTransilluminator(UVP,USA)下进行观察。通过电泳检测发现菌株CM-13-1616s rDNA片段大小约为1500bp,片段大小与试剂盒预期设计相符,扩增结果见图2。DNA测序由上海生工生物工程股份有限公司完成,对于返回的测序结果利用韩国数据库EZBiocloud(https://www.ezbiocloud.net)进行BLAST比对及分析序列,利用Mega 6.0软件构建系统发育树。
结果表明,16S rDNA序列的PCR扩增得到1416bp的片段,其序列如序列表中序列1所示,与Nocardioides luteus(Genbank Accession是NR_044982)的同一性是99.22%,结合形态特征、生理生化特性和分子序列鉴定结果,将该菌株鉴定为藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)。该藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16已于2018年12月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC,地址为:北京市朝阳区北辰西路1号院3号),保藏编号为CGMCC No.16927,以下简称为藤黄类诺卡氏菌CM-13-16。
实施例2、藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16CGMCC No.16927的抑制真菌能力的测定
采用两点平板对峙法。无菌操作台中在PDA培养基平板上距离中心位置2cm处接种藤黄类诺卡氏菌CM-13-16,对称的另一侧相同距离接种0.5cm大小的病原真菌菌饼,分别为草莓根腐病菌菌饼和草莓炭疽病菌菌饼。采用同样的接种方式,每个处理3个重复,以不接藤黄类诺卡氏菌CM-13-16只接病原真菌菌饼为对照。28℃培养4天,并与对照组对比记录每天观察菌落生长状况。
抑菌率=[(对照真菌生长半径-处理真菌生长半径)/对照真菌生长半径]×100%
实验结果:对峙试验共设置3个平行,抑制作用明显,28℃培养4天的结果见表1,由此表明,藤黄类诺卡氏菌CM-13-16对草莓根腐病病原菌和草莓炭疽病病原菌有良好的拮抗作用,可以作为潜力生防菌株。
表1.藤黄类诺卡氏菌CM-13-16对草莓根腐病病原菌抑菌能力测定结果
病原菌 抑菌率(%) 对照真菌生长半径(cm) 处理真菌生长半径(cm)
草莓根腐病菌 23.7 3.8 2.9
草莓炭疽病菌 21.1 3.8 3.0
实施例3、藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16 CGMCC No.16927产植物生长素IAA能力测定
将藤黄类诺卡氏菌CM-13-16活化,接种于含有L-色氨酸(100mg/L)的高氏一号液体培养基(在高氏一号液体培养基中加入L-色氨酸使L-色氨酸的含量达到100mg/L得到的液体培养基)中,3个重复,在30℃,180r/min的摇床中黑暗振荡3天后,取50μL菌悬液滴于白色陶瓷板上,同时加入等体积的Salkowski比色液,并加入50μL未接菌的高氏一号液体培养基与等体积比色液的混合溶液为对照。将充分混合后的白色陶瓷板置于室温避光处,30min后观察,与对照相比颜色变红者表示能够分泌IAA。
实验发现,上述白色陶瓷板内混合液体颜色变红。测定其IAA分泌能力:培养条件同上,3个重复,先测定培养了48h的菌悬液的OD600nm值,将菌悬液10000r离心10min后,取100μL上清液,加入等体积Salkowski比色液,避光静置30min,取出立即测定其OD530nm值。以加了比色液的对照调零,重复3次。
对照标准曲线计算单位体积中吲哚乙酸的含量,采用分析纯的吲哚乙酸梯度稀释绘制标准曲线,配制不同浓度梯度IAA,如下:0,25,50,75,100,125,150,175,200mg/L,分别取100μL配好的不同浓度IAA溶液于96孔酶标板,加入等体积Salkowski比色液,避光静置30min,取出立即测定其OD530nm值。
结果显示,经比色法测定,藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16能够产生植物生长素IAA,产量为96.36±4.27mg/L发酵液。这一结果表明,藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)CM-13-16具有产IAA能力,进而具有促进植物根系生长、增强根系吸收矿物质营养和水分的能力,对于植物生长具有很好的促进作用。
序列表
<110> 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所
<120> 一株藤黄类诺卡氏菌及其应用
<130> GNCFH182758
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1416
<212> DNA
<213> 藤黄类诺卡氏菌( Nocardioides luteus )
<400> 1
aacgcggaca cttcgacgct ccccccacaa gggttgggcc actggcttcg ggtgttgccg 60
actttcgtga cgtgacgggc ggtgtgtaca aggcccggga acgtattcac cgcagcgttg 120
ctgatctgcg attactagcg actccgactt catggggtcg agttgcagac cccaatccga 180
actgagaccg gctttttggg attcgctcac cctcacggga tcgcagccct ttgtaccggc 240
cattgtagca tgcgtgaagc cctggacata aggggcatga tgacttgacg tcatccccac 300
cttcctccga gttgaccccg gcagtctcct atgagtcccc aaccgaattg ctggcaacat 360
aggacgaggg ttgcgctcgt tgcgggactt aacccaacat ctcacgacac gagctgacga 420
cagccatgca ccacctgtac accgactaaa aggggctaca tctctgcagc tttccggtgt 480
atgtcaaacc caggtaaggt tcttcgcgtt gcatcgaatt aatccgcatg ctccgccgct 540
tgtgcgggcc cccgtcaatt cctttgagtt ttagccttgc ggccgtactc cccaggcggg 600
gcgcttaatg cgttagctgc ggcacggaac ccgtggaatg gatcccacac ctagcgccca 660
acgtttacgg tgtggactac cagggtatct aatcctgttc gctccccaca ctttcgctcc 720
tcagcgtcag gatactccca gagaaccgcc ttcgccaccg gtgttcctcc tgatatctgc 780
gcatttcacc gctacaccag gaattccatt ctcccctgag tacctctagt ctgcccgtat 840
cgaaagcagg ccaggtgtta agcacctggt tttcactccc gacgcgacag accgcctacg 900
agccctttac gcccaataat tccggacaac gctcggaccc tacgtattac cgcggctgct 960
ggcacgtagt tggccggtcc ttcttctgca cataccgtca cttgcgcttc gtctgtgctg 1020
aaagaggttt acaacccgaa ggccgtcatc cctcacgcgg cgttgctgga tcaggcttcc 1080
gcccattgtc caatattccc cactgctgcc tcccgtagga gtctgggccg tgtctcagtc 1140
ccagtgtggc cggtcaccct ctcaggccgg ctacccgtcg aagccttggt gagccattac 1200
ctcaccaaca agctgatagg ccgcgagcac atcccaggcc gaaaaacttt ccacaaccag 1260
atcatgcaat cggttgtcgt atccggtatt aatcaccgtt tccggtggct atcccagagc 1320
ctggggcaga ttactcacgt gttactcacc cgttcgccgc tcgagtaccc cgaagggcct 1380
ttccgctcga ctgcatgtgt agcacgccgc cccggt 1416

Claims (6)

1.藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus),其菌株号为CM-13-16,其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.16927。
2.一种菌剂,其特征在于:所述菌剂含有权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)。
3.权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)的下述任一种应用:
1)权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)在制备病原菌抑制剂中的应用;
2)权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)在制备病害抑制剂中的应用;
所述病原菌为下述至少一种病原菌:
A、草莓根腐病菌,所述草莓根腐病菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);
B、草莓炭疽病菌,所述草莓炭疽病菌为暹罗刺盘孢菌(Colletotrichum siamense);
所述病害为下述至少一种:
a、草莓根腐病,所述草莓根腐病为由尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)引起的病害;
b、草莓炭疽病,所述草莓炭疽病为由暹罗刺盘孢菌(Colletotrichum siamense)引起的病害。
4.权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)的下述任一种应用:
A1)权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)在制备产生生长素IAA的产品中的应用;
A2)权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)在制备生长素IAA中的应用。
5.权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)的下述任一种应用:
B1)权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)在制备促进植物生长的产品中的应用;
B2)权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)在促进植物生长中的应用。
6.培养权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)的方法,包括将权利要求1所述的藤黄类诺卡氏菌(Nocardioides luteus)在微生物培养基中培养的步骤。
CN201811609808.4A 2018-12-27 2018-12-27 一株藤黄类诺卡氏菌及其应用 Active CN111394270B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811609808.4A CN111394270B (zh) 2018-12-27 2018-12-27 一株藤黄类诺卡氏菌及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811609808.4A CN111394270B (zh) 2018-12-27 2018-12-27 一株藤黄类诺卡氏菌及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111394270A CN111394270A (zh) 2020-07-10
CN111394270B true CN111394270B (zh) 2022-04-05

Family

ID=71433902

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811609808.4A Active CN111394270B (zh) 2018-12-27 2018-12-27 一株藤黄类诺卡氏菌及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111394270B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113957019B (zh) * 2021-12-06 2023-06-23 云南中烟工业有限责任公司 一种类诺卡氏菌、其分离方法和应用
CN114015508B (zh) * 2021-12-06 2023-06-06 云南中烟工业有限责任公司 一种高氨基酸含量香料、其制备方法和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1101944A (zh) * 1993-06-15 1995-04-26 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 制备带羟基或酰氧基的紫杉烷的酶方法及其应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104877928B (zh) * 2015-04-13 2018-08-07 苏州泽方新能源技术有限公司 一种产生物表面活性剂的混合菌及其筛选方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1101944A (zh) * 1993-06-15 1995-04-26 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 制备带羟基或酰氧基的紫杉烷的酶方法及其应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Enzymatic acetylation of 10-deacetylbaccatin III to baccatin III by C-10 deacetylase from Nocardioides luteus SC 13913;Ramesh N.Patel等;《Enzyme and Microbial Technology》;20001231;第27卷(第6期);摘要和第2.2、2.3节 *
尖孢镰刀菌引起角膜溃疡一例;朱文正等;《临床检验杂志》;19930131;第11卷(第1期);第52页 *
尖孢镰刀菌致角膜溃疡的菌株分离及鉴定;陈淑贞等;《江西医学检验》;20021231;第20卷(第6期);第406页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111394270A (zh) 2020-07-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109749974B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌菌株及其应用
CN104164394A (zh) 一株拮抗植物病原菌的菌株及其应用
CN110066756B (zh) 一株克里布所类芽孢杆菌及其制剂和应用
CN104651260B (zh) 一种短短芽孢杆菌bbc-3及其应用与菌剂制备
CN109337823B (zh) 金龟子绿僵菌ippmhbc-009及其应用
CN112126601B (zh) 一种贝莱斯芽孢杆菌及发酵方法与应用
CN108070541B (zh) 一种促进植物生长的枯草芽孢杆菌sicau-pv1及其应用
CN111500501A (zh) 一株米修链霉菌及其在防治小麦根腐病和茎基腐病中的应用
CN112280716B (zh) 一种高地芽孢杆菌yg045及其应用
CN110295129B (zh) 一种用于防治黄瓜灰霉病和白粉病的生防菌及应用
US20230059898A1 (en) Bacillus altitudinis antagonizing xanthomonas oryzae and use thereof
CN115058358B (zh) 一株耐盐芽孢杆菌及其应用
CN111394270B (zh) 一株藤黄类诺卡氏菌及其应用
CN113308392A (zh) 一株诺尼内生暹罗芽胞杆菌的应用
CN101092599A (zh) 一种防病植物内生枯草芽孢杆菌
CN110317747B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌jt68及其在防治茶炭疽病的应用
CN113604376B (zh) 一株甘蔗内生枯草芽孢杆菌及其应用
CN105062897B (zh) 一株高产厚垣孢子的绿色木霉及其应用
CN112358991B (zh) 一种类芽孢杆菌cl01及其应用
CN116716225B (zh) 一种耐辐射链霉菌及其应用
CN116622547A (zh) 一株莫海威芽孢杆菌yl-78及其应用
CN114703069B (zh) 一种黑附球菌发酵产物、制备方法及其应用
CN116333934A (zh) 贝莱斯芽孢杆菌在制备具有促进植物生长作用的菌剂中的应用
CN115197853A (zh) 内生菌Epicoccum thailandicumLF-28菌株及其应用
CN112725193B (zh) 一株软毛木霉菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant