CN116297930A - 定性/定量检测香豆素类化合物的方法及其应用 - Google Patents

定性/定量检测香豆素类化合物的方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了定性/定量检测香豆素类化合物的方法及其应用，其中，该定性/定量检测香豆素类化合物的方法。根据本发明的实施例，包括：利用提取溶剂对待测样本进行提取处理，以便得到提取液；利用磁性纳米粒对所述提取液中进行萃取处理，以便富集所述香豆素类化合物，得到待测液；利用超高效液相色谱‑质谱联用系统对所述待测液进行分析检测，以便对所述待测样品中的香豆素类化合物进行定性/定量检测。该方法利用磁性纳米颗粒进行萃取和富集，磁性强，在水中分散性好，吸附能力强，吸附速度快，适于香豆素类化合物的富集和提取，回收率和精确度高，操作简单，省时快速，检测成本低，有机试剂用量少，安全环保。

Description

定性/定量检测香豆素类化合物的方法及其应用
技术领域
本发明涉及分析化学领域，具体地，涉及定性/定量检测香豆素类化合物的方法及其应用。
背景技术
香豆素类化合物作为天然存在的化学物质广泛分布在各种植物中，其常用做增香剂、甜味剂，在饮料、香烟或其他食品中广泛应用，但一些动物研究表明其具有肝毒性和致癌性，因此很多国家和组织限制了香豆素类的安全摄入剂量，欧洲食品安全局建议香豆素类可耐受每日摄入量TDI为0.1mg/kg体重，它作为合成香料在美国禁止使用，但目前其衍生物被开发成香料添加剂，取代某些食品中香豆素的使用，如7-甲氧基香豆素、7-甲基香豆素、7-二乙基氨基香豆素、环香豆素和3,3'-羰基双(7-二乙基氨香豆素)。
因此，迫切需要开发有效、准确的香豆素类非法添加物的检测分析方法。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种定性/定量检测香豆素类化合物的方法，该方法利用磁性纳米颗粒进行萃取和富集，检测方法的回收率和准确度高。尤其适用于食品中香豆素类化合物的检测。
需要说明的是，本发明是基于发明人的下列工作而完成的：
发明人在研究磁性固相萃取的过程中发现，以芳基胺与芳基异氰酸酯为功能单体，可以实现条件温和的合成方法，进而合成新型有机多孔材料。以磁性四氧化三铁为磁性纳米核心，将新型有机多孔材料成功包覆于磁性四氧化三铁表面，合成了官能团修饰的磁性纳米材料。在检测中，利用这种磁性纳米粒作为磁性固相萃取吸附剂应用于样品中药物，尤其是香豆素类药物残留的净化与富集，能有效提高色谱检测的回收率和精确度。
因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种定性/定量检测香豆素类化合物的方法。根据本发明的实施例，包括：利用提取溶剂对待测样本进行提取处理，以便得到提取液；利用磁性纳米粒对所述提取液进行萃取处理，以便富集所述香豆素类化合物，得到待测液；利用超高效液相色谱-质谱联用系统对所述待测液进行分析检测，以便对所述待测样品中的香豆素类化合物进行定性/定量检测，其中，磁性纳米粒，包括：核体，所述核体是超顺磁性四氧化三铁构成的；以及壳体，所述壳体覆着在所述核体的表面上，所述壳体是由式I所示的重复单元构成的。
Figure BDA0004099335250000021
根据本发明实施例的检测香豆素类化合物的方法，该方法利用磁性纳米颗粒进行萃取和富集，其中，该磁性纳米粒具有优越的化学和热稳定性，并且，磁性强，在水中分散性好，吸附能力强，吸附速度快，适于香豆素类化合物的富集和提取，从而该磁性纳米粒能有效提高检测香豆素类化合物的方法的检测回收率和精确度，尤其适于复杂基质中的香豆素类化合物的检测，操作简单，省时快速，检测成本低，有机试剂用量少，安全环保。
另外，根据本发明上述实施例的定性/定量检测香豆素类化合物的方法，可以具有如下附加的技术特征：
根据本发明的实施例，所述壳体的，厚度为40-60nm。
根据本发明的实施例，所述的磁性纳米粒的磁强度为20-30emu/g。
根据本发明的实施例，基于2mL提取液，所述磁性纳米粒的用量为4-8mg，优选地，为6mg。
根据本发明的实施例，所述提取溶剂为乙腈溶液。
根据本发明的实施例，所述萃取处理包括：将所述磁性纳米粒与所述提取液混合10-20分钟，以便得到混合溶液；在外磁场下对所述混合溶液进行固液分离处理，以便得到吸附后的纳米粒和分离液；以及利用洗脱剂对所述吸附后的纳米粒进行洗脱处理，以便得到所述待测液。
根据本发明的实施例，所述混合溶液的pH值为6-8，优选地，为7。pH值能够影响磁性固相材料表面离子的和香豆素类化合物的离子化，在pH6-8范围内，香豆素类化合物和Fe3O4@TAPM-PPDI分子间之间的氢键和π-π非共价键结合不受影响。
根据本发明的实施例，所述洗脱剂为含有乙腈和氨水的混合液，优选地，所述乙腈和氨水的体积比为20：1。
根据本发明的实施例，所述洗脱剂为1～10mL。
根据本发明的实施例，所述洗脱处理的时间为3-8分钟。由此，洗脱的效率高，有利于香豆素类化合物的充分洗脱。
根据本发明的实施例，所述超高效液相色谱-质谱联用系统的色谱条件包括：柱温：40℃；色谱柱：C18柱，3.5μm，2.1×150mm；流速：0.4mL/min；流动相：A：乙腈，B：0.1％甲酸水溶液；梯度洗脱条件：0-2分钟，30％B，2-13分钟，30％-90％B；13-13.01分钟，90％-30％B；13.01-15分钟，30％B。
根据本发明的实施例，所述超高效液相色谱-质谱联用系统的质谱条件包括：检测器：高效液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正离子模式；监测方式：多反应离子监测(MRM)；离子源温度，600℃；电喷雾电压4500V；气帘气压力，GS1和GS2分别是20psi、55psi和50psi；碰撞池出口电压:14V；驻留时间：100ms。
根据本发明的实施例，所述香豆素类化合物为选择香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素、7-甲基香豆素、环香豆素和3,3'-羰基双(7-二乙胺香豆素)中的至少一种。
根据本发明的另一方面，本发明提供了磁性纳米粒在制备定性/定量检测香豆素类化合物的试剂盒中的用途。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括前述的磁性纳米粒。由此，该试剂盒包含的磁性纳米颗粒具有优越的化学和热稳定性，并且，磁性强，在水中分散性好，吸附能力强，吸附速度快，适于香豆素类化合物的富集和提取，从而利用该试剂盒对香豆素类化合物进行检测，检测的回收率和精确度高，尤其适于复杂基质中的香豆素类化合物的检测。
根据本发明的实施例，所述香豆素类化合物为选择香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素、7-甲基香豆素、环香豆素和3,3'-羰基双(7-二乙胺香豆素)中的至少一种。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
图1显示了根据本发明一个实施例的Fe3O4纳米粒子、TAPM(四(4氨苯基)甲烷)、PPDI(对苯二异氰酸酯)和微孔有机聚合物(TAPM-PPDI)红外光谱示意图；
图2显示了根据本发明一个实施例的聚合物TAPM-PPDI的扫描电镜示意图，其中，A为Fe3O4纳米粒子的扫描电镜图，B为TAPM-PPDI的扫描电镜图，C为TAPM-PPDI的扫描电镜局部放大图；
图3显示了根据本发明一个实施例的Fe3O4@TAPM-PPDI纳米颗粒磁性分离前后对比图，其中，A为分离前，B为在外加磁场分离后；
图4显示了根据本发明实施例的磁性纳米颗粒作为磁性固相萃取材料处理样品前后香豆素液相质谱联用色谱图对比示意图，其中，A：香豆素的工作液(200ng/g)，B：饮料(阳性)，C：饼干样品加标(50ng/g)，D：饼干样品阴性样品。
图5显示了根据本发明实施例的不同磁性固相萃取材料用量对回收率的影响的结果示意图；
图6显示了根据本发明实施例的不同萃取溶液pH对回收率的影响的结果示意图；
图7显示了根据本发明实施例的不同萃取时间对回收率的影响的结果示意图；
图8显示了根据本发明实施例的不同洗脱溶剂对回收率的影响的结果示意图；
图9显示了根据本发明实施例的不同洗脱时间对回收率的影响的结果示意图。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
在本发明的描述中，术语“纵向”、“横向”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明而不是要求本发明必须以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。
因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种定性/定量检测香豆素类化合物的方法。根据本发明实施例的检测香豆素类化合物的方法，该方法利用磁性纳米颗粒进行萃取和富集，该磁性纳米粒具有优越的化学和热稳定性，并且，磁性强，在水中分散性好，吸附能力强，吸附速度快，适于香豆素类化合物的富集和提取，从而有效提高检测香豆素类化合物的方法的检测回收率和精确度，尤其适于复杂基质中的香豆素类化合物的检测。
根据本发明的实施例，利用磁性纳米粒作为磁性固相萃取吸附剂用于香豆素类化合物的残留的净化与富集，不仅能有效提高色谱质谱联用检测的回收率和精确度，而且，且可重复使用，操作简单，省时快速，检测成本低，有机试剂用量少，安全环保。在一些实施例中，检出限可达0.001-0.005mg/kg。
为了便于理解该定性/定量检测香豆素类化合物的方法，根据本发明的实施例，对该方法进行解释说明，该方法包括：
S100提取处理
根据本发明的实施例，利用提取溶剂对待测样本进行提取处理，以便得到提取液。由此，利用提取溶剂能有效提取待测样本中的香豆素类化合物。
根据本发明的实施例，所述提取溶剂为乙腈溶液。由此，提取的效率好，有利于充分提取样本中的香豆素类化合物，检测的准确度和灵敏度高。
S200萃取处理
根据本发明的实施例，利用磁性纳米粒对所述提取液进行萃取处理，以便富集所述香豆素类化合物，得到待测液。由此，利用磁性纳米粒作为磁性固相萃取吸附剂用于香豆素类化合物的残留的净化与富集，不仅能有效提高色谱质谱联用检测的回收率和精确度，而且，且可重复使用，操作简单，省时快速，检测成本低，有机试剂用量少，安全环保。
根据本发明的实施例，所述萃取处理包括：将所述磁性纳米粒与所述提取液混合10-20分钟，以便得到混合溶液；在外磁场下对所述混合溶液进行固液分离处理，以便得到吸附后的纳米粒和分离液；以及利用洗脱剂对所述吸附后的纳米粒进行洗脱处理，以便得到所述待测液。由此，提取效率高，固液分离方法简单，且纳米粒洗脱后可重复利用，萃取成本低。
根据本发明的实施例，所述洗脱剂为含有乙腈和氨水的混合液，优选地，所述乙腈和氨水的体积比为20：1。由此，洗脱的效果好，效率高，有利于充分将吸附在纳米粒上的香豆素类化合物充分洗脱下来。
根据本发明的实施例，所述洗脱剂为1～10mL，优选的，为2mL。由此，在保证香豆素类化合物充分洗脱下来的前提下，减少洗脱剂的用量，避免洗脱剂对后续检测的干扰。
根据本发明的实施例，该磁性纳米粒包括：核体和壳体，其中，所述核体是超顺磁性四氧化三铁构成的；所述壳体覆着在所述核体的表面上，所述壳体是由式I所示的重复单元构成的。
Figure BDA0004099335250000051
根据本发明的实施例，以式I所述的有机框架结构形成的壳体具有丰富的氢键，在水中分散性好；该纳米粒吸附能力强，晶型稳定，具有丰富的吸附官能团，在水中分散性好，见图3。
根据本发明的实施例，所述的磁性纳米粒的磁强度为20-30emu/g。在此条件下，磁性纳米粒能够对外界磁场产生强的反应，为磁固相萃取的快速进行提供了基础。从而实现磁性纳米粒与样品基质的快速分离，缩短操作时间，同时磁性纳米粒在样品溶液中具有更短的分析物扩散距离，进而可以提高吸附效率。
根据本发明的实施例，基于2mL提取液，所述磁性纳米粒的用量为4-8mg，优选地，为6mg。由此，在保证香豆素类化合物被充分提取的前提下，减少磁性纳米粒的用量。
为了便于理解前述的磁性纳米粒，根据本发明的实施例，对制备该磁性纳米粒的方法进行解释说明，该方法包括：
S10第一超声
根据本发明的实施例，将四氧化三铁纳米粒与四(4氨苯基)甲烷接触并进行第一超声，以便得到第一混合物。由此，将四(4氨苯基)甲烷优先通过锚定在四氧化三铁上，以便得到四(4氨苯基)甲烷功能化的磁性纳米粒子，并且，以四(4氨苯基)甲烷为功能单体，原料易得，不需要任何催化剂，反应条件温和。
S20第二超声
根据本发明的实施例，将所述第一混合物与四(4氨苯基)甲烷接触并进行第二超声，以便获得所述磁性纳米粒。由此，利用上一步骤功能化的纳米粒作为桥梁，以PPDI和TAPM作为功能单体进行接合反应制备聚合物，合成条件温和，操作简单，不需要调pH值，无其他副产物生成，并且，制备得到的微孔有机聚合物(TAPM-PPDI)，具有丰富的氢键，性质稳定，在水中分散性好。
根据本发明的实施例，想第一混合物中缓慢加入对苯二异氰酸酯(PPDI)。由此，PPDI和TAPM能充分接触进行反应。
根据本发明的实施例，所述四氧化三铁纳米粒与所述四(4氨苯基)甲烷的质量比为1:0.8-1.2，优选地，质量比为1:0.9-1.1。由此，该比例下可以使四(4氨苯基)甲烷更好的包覆在功能化四氧化三铁表面，形成制备磁性共价有机框架材料的桥梁。
根据本发明的实施例，所述对苯二异氰酸酯与所述四(4氨苯基)甲烷的质量比为1:1-2，优选地，质量比为1:1.2。由此，在上述比例范围内，有利于TAPM更充分地反应，使反应的收率更高，有机框架结构形成的核壳结构更好，产率相对较高。
根据本发明的实施例，所述第一超声是在1，4-二氧六环中进行的，以1，4-二氧六环为反应溶剂，可以使单体更好的分散，从而保证了反应体系的充分接触，进而可以获得较好的反应效果。
根据本发明的实施例，所述第一超声的时间为20-40分钟，优先的，为30分钟。由此有利于反应充分进行，产品的产率较高。
根据本发明的实施例，所述第二超声的时间为110-130分钟，优先的，为120分钟。由此，有利于反应充分进行，产物的产率较高。
根据本发明的实施例，所述第一超声和所述第二超声的温度均为65-75℃，优选地为70℃；转速为500-1000rpm，优选地，为700rpm。由此，该条件下，反应速度较快，产品的产率较高。
根据本发明的实施例，该方法进一步包括：将所述第二超声后的混合液进行减压抽滤处理，以便获得所述磁性纳米粒。由此，从混合液中分离得到固态磁性纳米粒。
S300分析检测
根据本发明的实施例，利用超高效液相色谱-质谱联用系统对所述待测液进行分析检测，以便对所述待测样品中的香豆素类化合物进行定性/定量检测。
根据本发明的实施例，所述超高效液相色谱-质谱联用系统的色谱条件包括：柱温：40℃；色谱柱：C18柱，3.5μm，2.1×150mm；流速：0.4mL/min；流动相：A：乙腈，B：0.1％甲酸水溶液；梯度洗脱条件：0-2分钟，30％B，2-13分钟，30％-90％B；13-13.01分钟，90％-30％B；13.01-15分钟，30％B。由此，在该色谱条件下，目标化合物的出峰时间，各种香豆素类化合物的色谱峰的峰型好，分离度高，检测的精确度、回收率和重现性好。
根据本发明的实施例，所述超高效液相色谱-质谱联用系统的质谱条件包括：检测器：高效液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源(ESI)；扫描方式：正离子模式；监测方式：多反应离子监测(MRM)；离子源温度，600℃；电喷雾电压4500V；气帘气压力，GS1和GS2分别是20psi、55psi和50psi；碰撞池出口电压:14V；驻留时间：100ms。由此，该质谱条件适于检测香豆素类化合物，检测的准确度和灵敏度高。
根据本发明的实施例，所述香豆素类化合物为选择香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素、7-甲基香豆素、环香豆素和3,3'-羰基双(7-二乙胺香豆素)中的至少一种。
根据本发明的另一方面，本发明提供了磁性纳米粒在制备定性/定量检测香豆素类化合物的试剂盒中的用途。根据本发明的实施例，所述试剂盒包括前述的磁性纳米粒。由此，该试剂盒包含的磁性纳米颗粒具有优越的化学和热稳定性，并且，磁性强，在水中分散性好，吸附能力强，吸附速度快，适于香豆素类化合物的富集和提取，从而利用该试剂盒对香豆素类化合物进行检测，检测的回收率和精确度高，尤其适于复杂基质中的香豆素类化合物的检测。
根据本发明的实施例，所述香豆素类化合物为选择香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素、7-甲基香豆素、环香豆素和3,3'-羰基双(7-二乙胺香豆素)中的至少一种。
下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明性的，而不能理解为对本发明的限制。
下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，例如可以采购自Sigma公司。
实施例1
本实施例中，利用TAPM与PPDI为单体合成磁性纳米粒Fe3O4@TAPM-PPDI，并对该磁性纳米颗粒的磁性分离性能进行检测。
1、脲类官能团修饰的微孔有机聚合物(TAPM-PPDI)的制备：
(a)将Fe3O4纳米颗粒(230mg)和四(4氨苯基)甲烷(TAPM)(230mg)置于20mL超干1,4-二氧六环中，进行超声5分钟，然后在室温下搅拌，将溶液置于70℃油浴约20分钟。
(b)将对苯二异氰酸酯(PPDI)(190mg)溶于15mL超干1,4-二氧六环中，进行超声处理，将溶液缓慢加入混合溶液中，加入完毕后继续搅拌2小时。
(c)将步骤(b)得到的反应液使用减压抽滤进行固液分离，所得固体用丙酮、乙腈、乙醇分别洗涤2次，烘箱干燥得到有机聚合物修饰的磁性纳米材料(Fe3O4@TAPM-PPDI)。对聚合物TAPM-PPDI行分析检测，如图1所示，TAPM的红外光谱在3148，3394cm-1存在N-H的两个特征吸收峰，PPDI的红外光谱在2268cm-1存在异氰酸酯的特征吸收峰，而TAPM-PPDI的红外光谱中上述两种特征峰消失，在1658cm-1附近产生的脲羰基(-C＝O)的特征峰，表明两种单体成功聚合形成脲官能团。
2、磁性纳米颗粒的检测
对磁性纳米颗粒进行红外检测，结果如图1所示，磁性纳米粒Fe3O4@TAPM-PPDI红外光谱图在560cm-1附近出现四氧化三铁中Fe-O特征峰，表明TAPM-PPDI成功修饰在Fe3O4表面，图2为磁性纳米颗粒的透射电镜图。
3、磁性纳米粒的磁性分离性能检测
取6mg磁性纳米粒Fe3O4@TAPM-PPDI于样品瓶中，加入2mL去离子水，超声30秒后涡旋振荡15分钟得到图3A所示悬浮液，将磁铁至于样品瓶外侧吸附磁性纳米颗粒使其与水溶液分离，得到图3B所示澄清溶液。该磁性分离试验表明Fe3O4@TAPM-PPDI具有良好磁性。
实施例2
利用实施例1制备的磁性纳米材料Fe3O4@TAPM-PPDI对香豆素进行检测，具体如下：
1、样品中香豆素的分离与富集：
(1)分别取5g饮料(两种饮料均从北京超市采购)和其他食品样品(饼干和芝麻糊，从北京超市采购)(1g)，加入10mL乙腈，涡旋振荡30s，超声提取10min后，加入3g氯化钠(3g无水硫酸钠)，以10000r/min，4℃离心3min，取上清液，氮吹至近干；
(2)将吹干的样品加2mL水溶解，加入6mg磁性纳米材料，涡旋15分钟，再外加磁铁作用下将磁性材料与样品溶液分离；
(3)将分离的磁性材料用2mL乙腈/氨水(体积比20：1)洗脱，洗脱液氮气下吹干，1mL流动相溶解后得到解析液。
2、香豆素类化合物的仪器测定：
使用LC-30AD岛津UHPLC与Qtrap 6500+三重四级杆质谱串联仪(AB SCIEX,Redwood,USA)。使用C18 Xbridge色谱柱(150mm×2.1mm,3.5μm)，在40℃下进行色谱分离，样品进样体积为5μL，流速为0.4mL/min，流动相由乙腈和0.1％甲酸水溶液组成。梯度洗脱在以下条件下进行：0-2min,30％ B；2-13min,30-90％ B；13-13.01min，90-30％B；13.01-15min,30％ B。
质谱仪器参数如下：电离模式，ESI+；检测模式，多反应监测(MRM)；离子源温度，600℃；电喷雾电压4500V；气帘气压力，GS1和GS2分别是20、55和50psi；碰撞池出口电压14V；驻留时间：100ms。提取得到各类香豆素类化合物的DP和CE如下表所示。
Figure BDA0004099335250000091
3、不同提取条件对实验结果的影响
五个参数包括吸附剂用量、pH值、提取时间、洗脱溶剂和洗脱时间对实验结果均有不同程度的影响。
(1)过多或者过少的吸附剂量均对实验结果影响很大，如图5所示，吸附剂量从1-6mg时，实验回收率随着吸附剂量的增加而增大；当用量超过6mg时，实验回收率几乎保持不变，因此吸附剂量选为6mg，溶液中的目标物几乎被完全吸收，达到动力学平衡，优选吸附剂量是6mg。
(2)pH值能够影响磁性固相材料表面离子的和香豆素类化合物的离子化，因此对pH值进行了优化，提取溶液pH值从2-11进行优化，结果如图6所示，由于香豆素类化合物和Fe3O4@TAPM-PPDI分子间之间的氢键和π-π非共价键结合的影响，pH值并没有显著性的影响，因此优选7作为提取溶液的pH。
(3)提取时间可能影响Fe3O4@TAPM-PPDI和提取溶液之间的平衡回收率，因此本实验选用了从1-30分钟不同的提取时间，如图7所示，实验发现15分钟的时候达到平衡。因此优选用15分钟作为提取时间。
(4)吸附目标物后，使用正确的洗脱溶剂是提高实验回收率的关键因素之一，因此本实施例为了优选洗脱效率，选用了四种洗脱溶剂，甲醇、乙醇、乙腈和丙酮，按照上述实验条件进行实验比较，结果如图8所示，乙腈回收率较其他溶剂更佳。由于洗脱溶液的酸碱性也会进一步影响回收效率，因此对乙腈，乙腈：甲酸(20:1)、乙腈：氨水(20:1)、乙腈：甲酸(10:1)、乙腈：氨水(10:1)，最终选用乙腈：氨水(20:1)。
(5)本实施例对洗脱时间进行了测试，从1-25分钟进行测试，结果如图9所示，优选5分钟的洗脱时间。
4、分析性能
基于上述优选条件，在饮料、饼干、芝麻糊里面进行了分析，结果表明：线性范围为2-50ng/g，线性良好R2为0.9990-0.9998，日内和日间相对标准偏差RSD在4.7％和6.1％以内，表明所建立的方法具有良好的重复性和重现性，检出限和定量限分别为0.001-0.005mg/kg和0.002-0.01mg/kg，表明该方法具有较高的灵敏度。
Figure BDA0004099335250000101
5、实际样品分析
(1)对饼干和饮料和芝麻糊进行了实际样品检测，结果如图4所示，其中仅一个饮料样本中检出少量香豆素，其他样品均为阴性，含量约为40μg/kg，可能由于样品的原料中存在天然香豆素的成分。
(2)为了验证开发方法的准确性，对样品进行了加标处理，获得三个不同浓度(10、20、50μg/L)的加标回收率，样品的回收率在73.8-113.5％。这些结果表明本发明实施例的检测方法是准确高效的。
Figure BDA0004099335250000102
Figure BDA0004099335250000111
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种定性/定量检测香豆素类化合物的方法，其特征在于，包括：
利用提取溶剂对待测样本进行提取处理，以便得到提取液；
利用磁性纳米粒对所述提取液进行萃取处理，以便富集所述香豆素类化合物，得到待测液；以及
利用超高效液相色谱-质谱联用系统对所述待测液进行分析检测，以便对所述待测样品中的香豆素类化合物进行定性/定量检测，
其中，
磁性纳米粒，包括：
核体，所述核体是超顺磁性四氧化三铁构成的；以及
壳体，所述壳体覆着在所述核体的表面上，所述壳体是由式I所示的重复单元构成的。
Figure FDA0004099335240000011
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磁性纳米粒的所述壳体的厚度为40-60nm，优选地，为50nm，
任选地，所述的磁性纳米粒的磁强度为20-30emu/g，
任选地，基于2mL所述提取液，所述磁性纳米粒的用量为4-8mg，优选地，为6mg。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取溶剂为乙腈溶液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述萃取处理包括：
将所述磁性纳米粒与所述提取液混合10-20分钟，以便得到混合溶液；
在外磁场下对所述混合溶液进行固液分离处理，以便得到吸附后的纳米粒和分离液；以及
利用洗脱剂对所述吸附后的纳米粒进行洗脱处理，以便得到所述待测液，
任选地，所述混合溶液的pH值为6-8，优选地，为7。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述洗脱剂为含有乙腈和氨水的混合液，优选地，所述乙腈和氨水的体积比为20：1，
任选地，所述洗脱剂为1～10mL，
任选地，所述洗脱处理的时间为3-8分钟。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-质谱联用系统的色谱条件包括：
柱温：40℃；
色谱柱：C18柱，3.5μm，2.1×150mm；
流速：0.4mL/min；
流动相：A：乙腈，B：0.1％甲酸水溶液；
梯度洗脱条件：0-2分钟，30％B，2-13分钟，30％-90％B；13-13.01分钟，90％-30％B；13.01-15分钟，30％B。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-质谱联用系统的色谱条件包括：
离子源：电喷雾离子源；
扫描方式：正离子模式；
监测方式：多反应离子监测；
离子源温度：600℃；
电喷雾电压：4500V；
气帘气压力、GS1和GS2分别是20psi、55psi和50psi；
碰撞池出口电压：14V；
驻留时间：100ms。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述香豆素类化合物为选择香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素、7-甲基香豆素、环香豆素和3,3'-羰基双(7-二乙胺香豆素)中的至少一种。
9.磁性纳米粒在制备定性/定量检测香豆素类化合物的试剂盒中的用途，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-8任一项所述的磁性纳米粒。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述香豆素类化合物为选择香豆素、7-甲氧基香豆素、7-乙氧基-4-甲基香豆素、7-甲基香豆素、环香豆素和3,3'-羰基双(7-二乙胺香豆素)中的至少一种。
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