CN116286776A - L-天冬氨酸改性的双金属介孔mof固定化酶材料及其应用 - Google Patents

L-天冬氨酸改性的双金属介孔mof固定化酶材料及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于MOF材料技术领域，具体地说是一种L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料及其应用，本发明通过将乙酸锌和四水乙酸钴按一定的比例混合后加入到含有L－天冬氨酸的二甲基咪唑溶液中，5.5h以后自组装合成Asp‑ZIF‑ZnCo，随后加入蜗牛酶固定化10min得到Asp@ZIF‑ZnCo‑Sna，构建双金属介孔固定化酶催化体系。本发明通过构建双金属介孔酶催化体系，一步法合成了笼状固定化蜗牛酶材料ZIF‑ZnCo‑Sna和用L－天冬氨酸(Asp)修饰的混合纳米花基固定化蜗牛酶材料Asp@ZIF‑ZnCo‑Sna。改良后的混合纳米花Asp@ZIF‑ZnCo‑Sna具有更大的比表面积，使酶的负载量达到142.57毫克/克。更丰富的介孔使酶保持了良好的构象，酶活达到游离酶的79.8％。此外，Asp@ZIF‑ZnCo‑Sna对人参皂苷Rb1的总转化率高达88.35％，而ZIF‑ZnCo‑Sna的转化率为79.12％。

Description

L-天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料及其应用
技术领域
本发明属于MOF材料技术领域，具体涉及一种L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料制备方法及其应用。
背景技术
天然人参皂苷的药用价值、生物活性和人体吸收率均低于部分或完全剥离其苷的稀有人参皂苷，如稀有人参皂苷化合物K(CK)、Rg3和Rh2。稀有人参皂苷CK因其广泛的药理特性而受到越来越多的关注。如何将天然人参皂苷高效转化制备稀有人参皂苷CK是目前研究的热点。蜗牛酶是一种具有高生物转化率的混合酶，包括内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶和β－葡萄糖苷酶，可以高效、选择性地水解人参皂苷Rb1的C-3和C-20位的所有糖苷键，产生具有高生理活性的稀有CK。
金属有机框架(MOFs)具有高比表面积、可调节的孔径和易于表面改性的特点。MOFs的这些吸引人的特性表明它们具有潜在的工业催化应用。Zeolitic imidazoles(ZIFs)是固定酶的常用材料，因为其合成简单，比表面积高，生物相容性好。因此，它是大规模工业制备烟酰胺的潜在纳米催化剂。然而，由于单金属材料制备的MOFs孔径单一，酶的负载能力低，其应用受到限制。双金属MOFs可以很好地解决这一问题。以钴离子、锌离子和二甲基咪唑的不同配位方式为灵感，一步合成具有大比表面积的双金属MOFs，产生的中孔可以最大限度地包裹蜗牛酶，这对混合酶的固定化具有重要的现实意义。
然而，固定化是一把双刃剑，在增加稳定性的同时降低了酶的活性。通过改变MOF的形态可以提高酶的活性。氨基酸作为一类手性配体，对二价金属离子中心有较大的亲和力，其侧链的多样性往往导致其与其他主要配体一起被广泛用作MOFs的改性和功能化剂。此外，使用氨基酸作为配体可以改善酶和MOFs之间的相互作用，更大程度地保留酶的活性。L－天冬氨酸预修饰的MOFs与金属有多种配位模式，使其具有更好的稳定性和更丰富的形态。实现天冬氨酸对双金属MOF材料的直接定向修饰，一步到位地制备出比表面积大、介孔丰富、传质效率高的混合杂化纳米花，作为酶的载体，对酶的工业催化将具有重要意义。
金属有机骨架(MOFs)具有高比表面积、稳定的骨架结构、良好的生物相容性和可定制的功能位点等优势受到人们的广泛注意。目前，通过物理吸附、共价连接和交联法对单酶或多酶与MOFs进行固定成为较普遍的方法。然而上述方法目前还存在以下问题，阻碍了酶固定化技术的应用：物理吸附法固定酶时，酶与MOFs之间作用力不够强可能导致酶的泄露；采用共价连接和交联法可能导致部分酶分子的构象发生改变，导致酶活性降低。与上述方法相比，共沉淀法是将酶封装在金属离子和有机配体自组装形成的MOFs框架中，从而保证酶在具有高活性的同时减少酶的泄露。
发明内容
针对上述技术缺陷，本发明提供了一种L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料及其制备方法，该方法是采用以下技术手段实现的：
L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料，其特征在于，包括以下步骤制备而成：
(1)共沉淀法合成Asp-ZIF-ZnCo
称取不同比例乙酸锌和四水乙酸钴混合溶液加入到含有L－天冬氨酸的不同浓度的二甲基咪唑水溶液中，按一定转速混合搅拌以致材料自组装完成后离心，固体成分用去离子水洗涤3次后冷冻干燥，得到Asp-ZIF-ZnCo，4℃保存；
所述乙酸锌：四水乙酸钴的摩尔比为1：2-2：1；
所述金属离子溶液的总摩尔浓度为20mM；
所述L－天冬氨酸添加量为0.4mg；
所述配体的摩尔浓度为20-640mM；
所述金属离子与配体的摩尔比为1：4。
(2)共沉淀法合成Asp@ZIF-ZnCo-Sna
将蜗牛酶加入纯水中，制成蜗牛酶水溶液；
乙酸锌四水乙酸钴水溶液加入到含有L－天冬氨酸的二甲基咪唑中材料自组装一定时间以后加入上述蜗牛酶溶液，固定化一定时间以后离心处理，固体成分用去离子水洗涤3次，冷冻干燥，得到蜗牛酶固定化MOF材料，即Asp@ZIF-ZnCo-Sna。
所述蜗牛酶添加量为5-30mg；
所述乙酸锌：四水乙酸钴的摩尔比为3：2；
所述金属离子溶液的总摩尔浓度为20mM；
所述L－天冬氨酸添加量为0.4mg；
所述配体的摩尔浓度为80mM；
所述加入蜗牛酶固定化时间为10-180min；
优选的，步骤(1)和步骤(2)所述材料自组装阶段均为5.5h，步骤(2)蜗牛酶固定化时间为10min；
优选的，步骤(1)和步骤(2)的乙酸锌：四水乙酸钴的摩尔比为3：2；
优选的，步骤(1)和步骤(2)的金属离子与配体摩尔比为1：4
优选的，步骤(1)和步骤(2)的L－天冬氨酸添加量为0.4mg；
优选的，步骤(1)和步骤(2)的复合酶添加量为15mg。
本发明还提供了所述L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料的应用，具体是利用所述L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料催化转化人参皂苷Rb1，以制备人参皂苷CK。
所述应用方法如下：
将人参皂苷Rb1加入到醋酸－醋酸钠缓冲液中，再加入所述Asp@ZIF-ZnCo-Sna进行催化转化，反应结束后用正丁醇进行萃取，收集有机相，冷冻干燥后得到人参皂苷CK；
所述人参皂苷Rb1的浓度为2mg/mL；
所述Rb1和Asp@ZIF-ZnCo-Sna的质量比为1：4；
所述反应温度为30-60℃；
所述反应pH为3-6；
所述反应时间为12—96h。
优选的，催化转化反应条件包括：温度为50℃，时间为72h，pH为4.5。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
通过L－天冬氨酸对双金属材料进行改性一步沉淀法固定化蜗牛酶，有效提升蜗牛酶的酶活稳定性，pH稳定性、热稳定性和储存稳定性。利用L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料对人参皂苷进行催化，可以提高游离蜗牛酶的催化效率，固定化酶材料对CK转化率高达88.35％，解决了酶法转化稀有人参皂苷CK过程中反应转化率低、自消化、回收困难等问题。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1为本发明设计思路与研究内容；
图2为二甲基咪唑初始浓度(a)、乙酸锌：四水乙酸钴的摩尔比(b)、L－天冬氨酸添加量(c)、酶添加量(d)，以及固定化时间(e)对Asp@ZIF-ZnCo-Sna固定条件优化；
图3为游离蜗牛酶、ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna在温度、pH值、不同储存时间的稳定性；
图4为ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna循环稳定性；
图5为游离酶、ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna在不同催化时间对Rb1催化生成CK的转化率。
具体实施方式
为使本发明的目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。附图中给出了本发明的若干实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容更加透彻全面。
实验测试方法：
1.酶活性测试
通过监测p-NPG的水解速率来测定游离酶与固定化酶的活性。一个单位的蜗牛酶的活性定义为单位时间内水解1μM p-NPG所需的酶量。将待测溶液(100μL)添加到在50℃预热15分钟的醋酸盐缓冲溶液(pH4.5,700μL)中，同时将p-NPG加入上述溶液中，反应10min后立即加入1000mL Na2CO3(1mol/L)终止反应。室温静置5分钟后加入96孔板中，用酶标仪测量405nm处的吸光度，进行3次平行实验。
Figure BDA0004086666990000051
式中Y为酶标仪读取的吸光度值；V1(mL)为反应体系的总体积；V2(mL)为酶液加入量；T(min)是体系的反应时间。
2.酶载量
用考马斯亮蓝法测定反应前后上清液中的蛋白质含量，并使用公式计算酶载量。
Figure BDA0004086666990000052
式中C1(mg/mL)是酶溶液的初始浓度；V1(mL)为加入的酶溶液体积；C2(mg/mL)是上清液中酶的浓度；V2(mL)是上清液的体积。
3.最适制备条件优化
在不同二甲基咪唑初始浓度、不同乙酸锌和四水乙酸钴的摩尔比、不同L－天冬氨酸添加量、不同酶添加量，以及不同固定化时间的条件下测定ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna材料的酶载量及酶活性，实验平行三次。
4.酶动力学
在醋酸－醋酸钠缓冲溶液(pH＝4.5)中探究游离酶和固定化酶在0.0625—0.5mmol p-NPG浓度范围内的酶促反应，对Lineweaver-Burk方程进行线性和回归拟合，计算动力学参数Km和Vm。
5.稳定性研究
5.1pH和温度稳定性、极性溶剂耐受性
在温度范围为30-80℃的条件下孵育30min，pH值为3.0-10.0的条件下孵育4h和不同储存时间测量游离酶和ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna的酶活性，实验平行三次。
5.2重复利用性
将一定量的样品分散在2mL的醋酸－醋酸钠缓冲溶液(pH＝4.5)中，再加入2mgRb1在50℃下进行转化反应。反应结束后离心分离固定化酶材料并用去离子水洗涤，然后加入醋酸－醋酸钠缓冲溶液和Rb1进行下一步循环，实验平行三次。
5.3储存稳定性
将游离蜗牛酶、ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna固定化酶在4℃冰箱保存30天，每隔5天测试其残余酶活性，实验平行三次。
6.转化产物的检测与鉴定
使用Shimadzu HPLC系统通过C18反向色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)使用乙腈(A)-水(B)进行梯度洗脱检测反应产物。乙腈－水溶液梯度洗脱条件如下：
Figure BDA0004086666990000071
流速：0.9mL/min，柱温：30℃，检测波长：210nm
7.数据分析
试验共设3个重复，测定重复平均值和标准差，使用Microsoft Excel 2019和Origin 2021对数据进行方差分析。
实施例1
一种l－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF材料，其特征在于，具体制备步骤如下：
(1)共沉淀法合成Asp-ZIF-ZnCo
称取不同比例乙酸锌和四水乙酸钴混合溶液加入到含有L－天冬氨酸的不同浓度的二甲基咪唑水溶液中，按一定转速混合搅拌以致材料自组装完成后离心，固体成分用去离子水洗涤3次后冷冻干燥，得到Asp-ZIF-ZnCo，4℃保存；
(2)共沉淀法合成Asp@ZIF-ZnCo-Sna
将蜗牛酶加入纯水中，制成蜗牛酶水溶液；
乙酸锌四水乙酸钴水溶液加入到含有L－天冬氨酸的二甲基咪唑中材料自组装一定时间以后加入上述蜗牛酶溶液，固定化一定时间以后离心处理，固体成分用去离子水洗涤3次，冷冻干燥，得到蜗牛酶固定化MOF材料，即Asp@ZIF-ZnCo-Sna。
性能测试结果：
1.固定化条件优化
1.1二甲基咪唑初始浓度
二甲基咪唑初始浓度对固定化酶材料的酶活性影响较大，图2a随着二甲基咪唑初始浓度的增加，酶活性降低，不仅造成浪费，而且影响了链酶的酶活性和效率。这种效应是由于二甲基咪唑在水中的脱质子化导致系统中的强碱性环境，破坏了酶的构象，使其失去活性。因此，在综合考虑产率和酶活性后，二甲基咪唑的初始浓度设置为40mM。
1.2金属离子比例
研究了不同Zn2+：Co2+(1：2、2：1、3：1、3：2、2：1)条件下合成的Asp@ZIF-ZnCo-Sna的残酶活性，以考察金属离子配比对其固定化效率和酶活性的影响。如图2b所示，当Zn2+与Co2 +的比例为2：3时，合成的ZIF-ZnCo-Sna的Sna活性最高。结果表明，固定化材料MOF中双金属的添加比例会影响固定化酶Sna的活性。对于本研究中的复合材料，获得了Zn2+和Co2+的最佳配比，以帮助复合材料产生中孔结构，这对蜗牛酶与材料的结合和酶活性至关重要。
1.3L－天冬氨酸添加量
如图2c所示，L－天冬氨酸剂量为0.4mg时，酶活性和酶活性最佳。引入天冬氨酸到复合材料导致了Asp@ZIF-ZnCo-Sna的化学和结构的多功能性。复合材料中的天冬氨酸可以将金属离子、有机链接剂和酶以模块化的方式结合在一起。天冬氨酸的加入增加了材料的表面积。蛋白质－无机杂化纳米花由于形成的纳米花结构的高表面积而增强了活性。
1.4蜗牛酶添加量
如图2d所示，蜗牛酶添加量(5-30mg)对Asp@ZIF-ZnCo-Sna活性和包封率的影响。结果表明，随着蜗牛酶的添加量的增加，Asp@ZIF-ZnCo-Sna活性先升高后降低。随着被包酶量的增加，酶逐渐充满整个孔隙，在有限的催化反应时间内，酶活性随着酶量的增加而增加。然而，随着酶量的增加，包封率降低可能是因为酶逐渐充满了MOF的外部。因此选择15mg为最佳酶添加量，此时酶载量为142.57mg/g，相对酶活最大。
1.5固定化时间
固定化时间对酶活性和包封率的影响如图2e所示。结果表明，当固定化时间为10min时，蜗牛酶被完全包裹，酶载量随时间变化不明显，酶活会随着时间的增加而降低。以Asp@ZIF-ZnCo-Sna的活性回收率和包封率为指标，确定最佳的固定化反应时间10min。
2.酶动力学
通过对比蜗牛酶、ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna复合材料的动力学参数探究ZIF-ZnCo和Asp@ZIF-ZnCo对底物对蜗牛酶催化效率的影响。与游离酶相比，ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna生物复合材料的Kmax值显著减小，表明固定化样品对底物的亲和力明显增加并能降低最佳底物浓度。上述结果可能是由于ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna复合材料产生的介孔对蜗牛酶构象的保持有利，此外，载体的大孔径捕获更多底物，有利于底物和产物分子的扩散。
表1.游离蜗牛酶和ZIF-ZnCo-Sna以及Asp@ZIF-ZnCo-Sna的动力学参数
Figure BDA0004086666990000091
3.稳定性研究
3.1温度稳定性
在不同温度孵育30分钟后的剩余酶活来分析游离Sna和固定化酶的热稳定性2如图3a。此外，游离酶和固定化酶的剩余活性在80℃孵育30min后随着温度的升高而显著降低。游离酶的残留活性约为4.29％，ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna的残留活性分别约为42.87％和49.51％。此外，Asp@ZIF-ZnCo-Sna活性高于ZIF-ZnCo-Sna。分析结果表明固定化酶显著提高了酶的热稳定性，固定化酶温度稳定性显著提升是由于的ZIF-ZnCo和Asp@ZIF-ZnCo刚性结构可以阻止酶在高温下发生构象转变而导致变性。
3.2pH稳定性
游离酶和固定化酶的pH稳定性研究结果见图3b。游离酶和固定化酶在pH值为3-10的条件下孵育4h，测定其剩余活性。游离酶和固定化酶在pH＝5时的酶活性最佳。随着pH值的增加，在pH＝10时，游离Sna活性迅速下降，剩余活性仅为3.78％。但固定化酶的残留活性明显高于游离蜗牛酶。pH＝10时，ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna的残留活性分别为32.85％和35.30％。固定化酶能在异常条件下保持较高的稳定性，因为该复合材料提供了一个介孔环境，可以保持蛋白质折叠和酶活性。
3.3储存稳定性
测定游离酶和固定化酶在4℃条件下的残留活性，每5天测定一次，连续30天，考察其长期保存稳定性。从图3c可以看出，ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna在贮藏15天后的剩余活性分别约为97.22％和95.63％，而游离蜗牛酶的活性在贮藏15天后显著下降，仅保留其初始活性的78.50％左右。但是，在4℃条件下30天后，Asp@ZIF-ZnCo-Sna仍保留了约92.64％的初始活性，而游离蜗牛酶保留了约57.83％。这可能是由于蜗牛酶与载体表面及表面离子基团之间的非特异性相互作用，使固定化的酶更加稳定，从而减少了酶的构象移位。这些结果表明，固定化酶具有较好的抗恶劣的实验条件，稳定性好，具有较大的实际应用潜力。
3.4循环稳定性
为了研究固定化酶的可回收性，在50℃和pH＝4.5的条件下催化Rb1，测定单循环反应72h后的剩余酶活性如图4a、转化率(图4b)和材料坍缩率(图4c-4d)。6次循环后，ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna的残留活性分别为37.80％和51.61％。一方面，这种活性可能是由于某些复合材料的变形和酶活性位点在反应过程中的阻碍所致。另一方面，这可能是由于实验过程中离心和洗涤造成的复合材料的损失。每次循环后的复合材料XRD测试(图4c-4d)显示，经过6次循环后，材料的整体形貌保持不变，从而允许多次循环。
实施例2
一种利用人参皂苷Rb1制备人参皂苷CK的方法，具体操作如下：
将人参皂苷Rb1加入到醋酸－醋酸钠缓冲液中，再加入所述ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna进行催化转化，反应结束后用正丁醇进行萃取，收集有机相，冷冻干燥后得到人参皂苷CK。
性能测试结果：
1.转化产物鉴定
将转化产物溶解在50％的甲醇溶液中通过高效液相色谱仪在210nm下进行检测。通过记录HPLC色谱图在不同保留时间的峰面积绘制Rd、F2、CK的标准曲线，然后计算不同产物的浓度。最佳条件下人参皂苷Rb1转化产物的HPLC色谱图与人参皂苷标准品的特征峰比对，如图5a得到Rb1、Rd、F2和CK的保留时间分别为5.48、13.05、37.8和45.6min。
2.转化人参皂苷CK时间的优化
为了探究游离蜗牛酶和ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna催化Rb1转化为CK的效率，将酶与底物质量比为2：1在pH＝4.5、50℃的条件下反映了12h—96h。结果表明，在最佳反应条件下，以游离蜗牛酶为催化剂，由人参皂苷Rb1合成稀有人参皂苷CK,48h后得到CK的最高收率为58.88％，中间产物Rd和F2分别为0.9％和0.14％(图5b)。随着时间的不断增加，产物收率保持不变。而ZIF-ZnCo-Sna和Asp@ZIF-ZnCo-Sna对人参皂苷Rb1的催化反应在72h后达到最大值(图5c-d)。人参皂苷Rd的得率分别为1.05％和0.08％，人参皂苷F2的得率分别为14.46％和19.07％，稀有人参皂苷CK的得率分别为59.88％和69.20％(表S5-S7)。随着时间的增加，转化率基本保持不变。催化效率的提高与固定化酶的构象和固定化载体的特殊结构有关，如花状的高表面积。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (6)

1.一种双金属介孔MOF材料，其特征在于，包括以下步骤制备而成：
(1)共沉淀法合成Asp-ZIF-ZnCo
称取不同比例乙酸锌和四水乙酸钴混合溶液加入到含有L－天冬氨酸的不同浓度的二甲基咪唑水溶液中，按一定转速混合搅拌以致材料自组装完成后离心，固体成分用去离子水洗涤3次后冷冻干燥，得到Asp-ZIF-ZnCo，4℃保存；
所述乙酸锌：四水乙酸钴的摩尔比为1：2-2：1；
所述金属离子溶液的总摩尔浓度为20mM；
所述L－天冬氨酸添加量为0.4mg；
所述配体的摩尔浓度为20-640mM；
所述金属离子与配体的摩尔比为1：4。
(2)共沉淀法合成Asp@ZIF-ZnCo-Sna
将蜗牛酶加入纯水中，制成蜗牛酶水溶液；
乙酸锌四水乙酸钴水溶液加入到含有L－天冬氨酸的二甲基咪唑中材料自组装一定时间以后加入上述蜗牛酶溶液，固定化一定时间以后离心处理，固体成分用去离子水洗涤3次，冷冻干燥，得到蜗牛酶固定化MOF材料，即Asp@ZIF-ZnCo-Sna。
所述蜗牛酶添加量为5-30mg；
所述乙酸锌：四水乙酸钴的摩尔比为3：2；
所述金属离子溶液的总摩尔浓度为20mM；
所述L－天冬氨酸添加量为0.4mg；
所述配体的摩尔浓度为80mM；
所述加入蜗牛酶固定化时间为10-180min。
2.根据权利要求1所述L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料，其特征在于，步骤(1)步骤(2)所述材料自组装搅拌时间均为5.5h，步骤(2)再加入蜗牛酶以后搅拌10min。
3.根据权利要求1所述L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)的离心转速均为10000rpm/min。
4.根据权利要求1所述L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)的离心时间为10min。
5.根据权利要求1～4任意一项所述L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料的应用，其特征在于，利用所述L－天冬氨酸改性的双金属介孔MOF固定化酶材料催化转化人参皂苷Rb1，以制备人参皂苷CK。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述方法如下：
将人参皂苷Rb1加入到醋酸－醋酸钠缓冲液中，再加入所述Asp@ZIF-ZnCo-Sna进行催化转化，反应结束后用正丁醇进行萃取，收集有机相，冷冻干燥后得到人参皂苷CK；
所述人参皂苷Rb1的浓度为2mg/mL；
所述Rb1和双酶固定化MOF材料的质量比为1：4；
所述反应温度为50℃；
所述反应pH为4.5；
所述反应时间为12—96h。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN117511899A (zh) * 2023-11-06 2024-02-06 西安工程大学 一种Zn-NiMOF材料固定化的糖基转移酶及其制备方法与应用

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