CN116270952A - 一种用于缓解痛风的提取物及其提取方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于缓解痛风的提取物及其提取方法和应用，属于缓解痛风药物技术技术领域，本发明提取方法包括以下步骤：分别称取新鲜的大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜，然后分别按下述操作进行处理：水清后切碎，超声辅助蒸馏水提取至少3次，然后趁热抽滤得到滤液和固体，滤液减压浓缩后混合得到混合液，固体混合后干燥；将混合液与干燥处理的固体一同用超临界流体萃取；将萃取液离心，取上清液，即完成。本发明具有节能、高效和无污染等优点；且本发明制备的大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物可以改善痛风大鼠的肾脏损伤情况，具有缓解大鼠痛风的作用。
Description
技术领域
本发明属于缓解痛风药物技术领域，具体涉及一种用于缓解痛风的提取物及其提取方法和应用。
背景技术
痛风是一种临床表现为血尿酸升高和单钠尿酸结晶沉积而引起相关炎症反应的慢性疾病。由于两者在机体内的含量过高，机体内含有过多的结晶状的物体嘌呤，这些嘌呤在血管里和血管壁进行摩擦，使得某一个区域发炎。其突出的临床特点为高尿酸血症及特征性急性关节炎反复发作等，严重可导致关节畸形和活动障碍等。我国古籍对痛风一词早有描述，随着现代医学的发展，除古籍中记载的外邪侵袭、脾肾亏虚、湿热浊度等，其还被认为与内有积热，外感风寒湿热邪等有关。
大蒜(AlliumsativumL.)又称胡蒜、蒜头等，是百合科葱属类的植物，以鳞茎入药，其不仅是生活中的调味品，更是一种传统中药。自古以来，大蒜的药用价值都被人们熟知和利用，《本草纲目》中记载大蒜的通窍、驱寒、助消化等多种生物功效，其富含黄酮、有机硫、皂苷类、酚类和多糖等多种活性化合物，其中大蒜黄酮具有抗菌、防治心血管疾病、抗癌等多种功效，大蒜多酚具有抗氧化、抗菌、抗癌等功能活性，大蒜多糖具有抗衰老、抗凝血、护肝等作用。
花椒(Zanthoxylum bungenumMaxim)又称香椒，山椒等，根据果皮颜色的不同可将其分为红花椒和青花椒。红花椒原植物是芸香科花椒属花椒，青花椒原植物为芸香科花椒属竹叶花椒。花椒是重要的食品调味原料，也作香料和中药材使用，其具有麻醉、止痒、祛湿、抑菌等功效。花椒中化学成分主要有黄酮、挥发油、酰胺、酚类等，其中花椒中的黄酮具有抗炎、抗氧化等功效，花椒多酚具有抗氧化、抗菌等活性。
辣椒(Capsicum annuum L.)又称番椒，海椒等，是茄科植物辣椒或其栽培变种的干燥成熟果实。其性辛热，有增进食欲、改善消化、促进血液循环作用，从而达到温中散寒等功效，传统中医常用辣椒治疗胃寒风湿等疾病。其富含黄酮、多糖、辣椒素等多种生物活性物质，辣椒黄酮具有抗氧化、抗癌、抑菌等多种功效，辣椒多糖具有抗氧化、抗衰老等功效。
生姜(Zingiber officinal Roscoe)又称白姜，川姜等，是姜科植物姜的鲜根茎。据史书记载，早在周秦时代我国就有种植、食用和医用生姜的习惯，距今已有2000多年的历史。其性辛，微温，有增加食欲、促进消化等作用。有研究发现，生姜可以兴奋血管运动中枢和呼吸中枢，升高血压，促进发汗。生姜中化学成分主要有黄酮、挥发油、多糖、酚类等，其中生姜黄酮具有有降血脂、降血压、抗心脑血管疾病、抗衰老等功效，生姜多糖具有抗氧化、抗疲劳、预防脑损伤等作用，生姜多酚具有降血脂、降血糖等功能活性。
韭菜(Allium tuberosum Rottler ex Sprengle.)又称长生韭、扁菜等，是百合科多年生宿根蔬菜。其性辛，温。中医认为，其具有健胃、提神、止汗等功效，还可外用治跌打损伤、瘀血肿痛和外伤出血等。欧洲医学认为韭菜具有杀菌作用，可助肠胃消化，清洗血管，加快人体新陈代谢速度等作用。其富含黄酮、皂苷类、酚类等多种活性物质，韭菜黄酮具有降压降脂，抗氧化、抑菌等作用，韭菜多酚具有抗氧化、抗诱变、抑制肿瘤等作用。
目前，以大蒜、花椒、辣椒、生姜和韭菜这五种天然植物为原料获取的提取物在改善痛风中鲜有报道。
发明内容
有鉴于此，本发明目的在于提供一种用于缓解痛风的提取物及其提取方法和应用。
本发明首次采用超声辅助超临界CO2萃取大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合提取物。本发明方法具有节能、高效和无污染等优点，且本发明获取的提取物具有改善大鼠痛风的作用。
为实现上述目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种用于缓解痛风的提取物，所述提取物的原料为大蒜、花椒、辣椒、生姜和韭菜。
进一步地限定，大蒜、花椒、辣椒、生姜和韭菜的质量比为5∶1∶1∶3∶2。
本发明还提供了一种用于缓解痛风的提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)分别称取新鲜的大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜，然后分别按下述操作进行处理：水清后切碎，超声辅助蒸馏水提取至少3次，然后趁热抽滤得到滤液和固体，滤液减压浓缩后混合得到混合液，固体混合后干燥；
(2)将步骤(1)混合液与经步骤(1)干燥处理的固体一同用超临界流体萃取；
(3)将步骤(2)获取的萃取液离心，取上清液，即得到用于缓解痛风的提取物。
进一步地限定，步骤(1)中，超声提取温度为40℃，时间为30min，料液比为1g:6mL。
进一步地限定，步骤(1)中，减压浓缩温度为45℃。
进一步地限定，步骤(2)中，采用CO2萃取，CO2流体的流量为20kg·h-1。
进一步地限定，步骤(3)中，离心转速为4000r·min-1，离心时间为7min。
上述提取物或者上述方法得到提取物，包括没食子酸月桂酯，邻苯二甲酸单丁酯，(E)-阿魏酸二十六烷基酯，邻苯二甲酸二异壬基酯，1，2，3，4-十八烷四醇，糖质酸-1,4-内酯，烯丙基半胱氨酸，3-O-β-D-半乳呋喃糖基-α-D-吡喃型半乳糖等。
上述提取物或者上述任一方法得到提取物在制备治疗缓解痛风药物中的应用。
本发明采用腺嘌呤联合氧嗪酸钾盐法诱导大鼠产生痛风，从而揭示大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物对于痛风大鼠的治疗机理。除空白组灌胃给予等量生理盐水，喂食普通饲料外，其余各组大鼠每日上午灌胃100mg·kg-1·d-1腺嘌呤-300mg·kg-1氧嗪酸钾溶液，并喂食10g·kg-1酵母饲料，每日下午，阳性组灌胃阳性药苯溴马隆4.7mg·kg-1，给药组分别以低(100mg·kg-1·d-1)、中(200mg·kg-1·d-1)、高(400mg·kg-1·d-1)剂量组灌胃混合物。
本发明获取的混合物具有驱寒祛湿等功效，适用于发病期的痛风大鼠。动物试验表明，本发明获取的混合物可以改善大鼠肾小管的坏死程度，降低肾小管上皮细胞和炎性细胞浸润程度。
本发明通过腺嘌呤联合氧嗪酸钾盐法诱导痛风大鼠模型，应用本发明制备的提取物灌胃给药，结果表明，本发明的混合物能够缓解大鼠痛风现象，可以减轻大鼠炎症反应，而大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合提取物在此方面相关报道极少，说明其在缓解痛风的应用中具有明显前景。
本发明采用超声辅助超临界CO2萃取大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物，不仅可以分离溶剂与萃取物，还具有操作简便、无毒和可循环利用等优点。
本发明制备的大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物具有缓解大鼠痛风的功效。
附图说明
为更清楚地阐述本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图进行简单介绍，显而易见，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1a为实施例6制备的提取物的组成分析及混合物的离子的结构液质联用全扫描一级正离子质谱图；
图1b为实施例6制备的提取物的组成分析及混合物的离子的结构液质联用全扫描一级负离子质谱图。
图2为实施例6制备的提取物对痛风大鼠血清中BUN、UA、Cr及XOD含量影响的结构示意图(注：与Con组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与Mod组比较，*P<0.05，**P<0.01)，图2中a--大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合物对痛风大鼠BUN含量的影响，b--大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合物对痛风大鼠UA含量的影响，c--大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合物对痛风大鼠Cr含量的影响，d--大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合物对痛风大鼠XOD含量的影响。
图3为实施例6制备的提取对痛风大鼠肾组织病理学观察结果的结构示意图。
具体实施方式
本部分将详细描述本发明的具体实施例，本发明之较佳实施例在附图中示出，附图的作用在于用图形补充说明书文字部分的描述，使人能够直观地、形象地理解本发明的每个技术特征和整体技术方案，但其不能理解为对本发明保护范围的限制。
实施例1：
本实施例中一种用于缓解痛风的提取物的提取方法，步骤包括：
称取大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜各100g，经24h烘干后粉碎过筛，装入超临界流体萃取装置，以提取釜为1L，CO2流体流量20kg·h-1进行萃取得大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物。所得其混合物提取率为3.12％。
实施例2：
本实施例中一种用于缓解痛风的提取物的提取方法，步骤包括：
称取大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜各100g，分别以1g:4mL、1g:6mL、1g:8mL加入蒸馏水，在超声条件为温度40℃，时间30min，提取3次，进行超声辅助蒸馏水提取。得到提取液后趁热抽滤，将滤液以45℃进行减压浓缩，后与干燥原料共同装入超临界流体萃取装置，以提取釜为1L，CO2流体流量20kg·h-1进行萃取得大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物。根据超声预处理的料液比不同进行优化，所得其混合物提取率分别为4.17％、5.23％、5.01％，因此，优选以料液比为1g:6mL进行超声预处理。
实施例3：
本实施例中一种用于缓解痛风的提取物的提取方法，步骤包括：
称取大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜各100g，按1g:6mL的料液比加入蒸馏水，分别在超声温度为30℃、40℃、50℃，提取时间30min，提取3次进行超声辅助蒸馏水提取。得到提取液后趁热抽滤，将滤液以45℃进行减压浓缩，后与干燥原料共同装入超临界流体萃取装置，以提取釜为1L，CO2流体流量20kg·h-1进行萃取得大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物。根据超声预处理的温度不同进行优化，所得其混合物提取率分别为5.17％、5.23％、4.97％，因此，优选以超声温度为40℃进行超声预处理。
实施例4：
本实施例中一种用于缓解痛风的提取物的提取方法，步骤包括：
称取大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜各100g，按1g:6mL的料液比加入蒸馏水，在超声温度为40℃，提取时间30min，分别提取2、3、4次。得到提取液后趁热抽滤，将滤液以45℃进行减压浓缩，后与干燥原料共同装入超临界流体萃取装置，以提取釜为1L，CO2流体流量20kg·h-1进行萃取得大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物。根据超声预处理的处理次数不同进行优化，所得其混合物提取率分别为4.32％、4.76％、4.65％，因此，优选以预处理3次进行超声预处理。
实施例5：
本实施例中一种用于缓解痛风的提取物的提取方法，步骤包括：
称取大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜各100g，按1g:6mL的料液比加入蒸馏水，在超声条件为温度40℃，时间30min，提取3次，进行超声辅助蒸馏水提取。得到提取液后趁热抽滤，将滤液以45℃进行减压浓缩，后与干燥原料共同装入超临界流体萃取装置，以提取釜为1L，CO2流体流量分别为10kg·h-1、20kg·h-1、30kg·h-1进行萃取得大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物。根据CO2流体流量不同进行优化，所得其混合物提取率分别为5.48％、5.76％、5.62％，因此，优选以CO2流体流量为20kg·h-1进行萃取。
实施例6：
本实施例中一种用于缓解痛风的提取物的提取方法，步骤包括：
(1)分别称取新鲜的大蒜500g、花椒100g、辣椒100g、生姜300g、韭菜200g，然后分别按下述操作进行处理：水清后切碎，超声辅助蒸馏水提取至少3次，然后趁热抽滤得到滤液和固体，滤液以45℃进行减压浓缩后混合得到混合液，固体混合后干燥；
(2)将步骤(1)混合液与经步骤(2)干燥处理的固体一同装入超临界流体萃取装置，以提取釜为1L，用超临界CO2流体萃取，流体流量为20kg·h-1；
(3)将步骤(2)获取的萃取液离心，离心转速为4000r·min-1，离心时间为7min，取上清液，即得到用于缓解痛风的提取物；提取物提取率为5.97％。
本实施中大蒜、花椒、辣椒、生姜和韭菜的质量比为5∶1∶1∶3∶2，因大蒜具有具有抗炎，风湿，抑制溃疡等作用，所以选取大蒜为主要材料；花椒和辣椒都具有驱寒的功效，但由于二者过量食用可能会诱发痛风，所以应将花椒与辣椒的比例降至最低；生姜和韭菜均具有抗氧化、祛湿等功效，又由于生姜具有散寒的功效，所以应将生姜的比例稍微升高。五个组分相互协同作用下，具有缓解大鼠痛风的功效。
进一步阐述说明本发明制备的大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物在缓解大鼠痛风时具备的优异效果，采用下述实验验证发明效果，具体内容如下：
选取SPF级健康SD大鼠，雄性，180～220g，共48只，适应性饲养7d后，将这些大鼠随机分为6组，空白组、模型组、阳性药物组、由实施例6制备的大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜混合物低、中、高给药组，每组各8只。
采用腺嘌呤联合氧嗪酸钾盐法诱导大鼠产生痛风，每日在给药前4h，除空白组灌胃给予等量生理盐水，喂食普通饲料外，其余各组大鼠每日上午给予100mg·kg-1·d-1腺嘌呤-300mg·kg-1氧嗪酸钾溶液，并喂食酵母饲料，每日下午，阳性组灌胃阳性药苯溴马隆，给药组分别以低(100mg·kg-1·d-1)、中(200mg·kg-1·d-1)、高(400mg·kg-1·d-1)剂量组灌胃混合物。注：酵母粉摄入量控制为10g·kg-1d-1，连续28d。
各组大鼠在实验结束前禁食24h，自由饮水。采用3mL·kg-1的10％水合氯醛腹腔注射麻醉，进行腹主动脉采血，以3000r·min-1离心20min后分装血清，于-80℃保存；在冰上快速获取肾脏，去除膜，用生理盐水冲洗干净，经液氮冷冻后转入-80℃保存。检测BUN、UA、Cr、XOD含量。结果如下：
(1)对BUN含量的影响：
与空白比较，模型大鼠BUN含量极显著升高(P<0.01)；与模型组比较，阳性药物组BUN含量极显著降低(P<0.01)，低剂量组BUN含量无明显变化，中、高剂量组BUN含量显著降低(P<0.05)。实验结果见图2。由2可知，大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合物可缓解大鼠血清中BUN的含量，改善痛风大鼠的肾功能减退。
(2)对UA含量的影响：
与空白组比较，模型组大鼠UA含量极显著升高(P<0.01)；与模型组比较，阳性药物组UA含量极显著降低(P<0.01)，低剂量组UA含量显著降低(P<0.05)，中剂量组UA含量极显著降低(P<0.01)，高剂量组UA含量显著降低(P<0.05)。实验结果见图2。由2可知，大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合物可缓解大鼠血清中UA的含量，减轻UA诱导的肾脏损伤。
(3)对Cr含量的影响：
与空白组比较，模型组大鼠Cr含量显著升高(P<0.05)；与模型组比较，阳性药物组Cr含量极显著降低(P<0.01)，低剂量组Cr含量无明显变化，中、高剂量组Cr含量显著降低(P<0.05)。实验结果见图2。由2可知，大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合物可缓解大鼠血清中Cr的含量，改善大鼠肾小球滤过障碍。
(4)对XOD含量的影响：
与空白组比较，模型组大鼠XOD含量极显著升高(P<0.01)；与模型组比较，阳性药物组XOD含量极显著降低(P<0.01)，低剂量组XOD含量无明显变化，中剂量组XOD含量显著降低(P<0.05)，高剂量组XOD含量无明显变化。实验结果见图2。由2可知，适当剂量的大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合物可缓解大鼠血清中XOD的含量。
实验2
以苏木精-伊红(HE)染色法评价大鼠肾组织得病理学变化。结果如下：
空白组大鼠肾脏组织未见明显病理病变；与空白组比较，模型组大鼠肾小管排列紊乱，病变坏死，且肾间质伴有大量的炎性细胞浸润；与模型组相比，阳性药物组大鼠肾脏组织病变程度减轻，中、高剂量组大鼠肾脏组织病变程度也有一定改善。实验结果表明，大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合物能改善痛风大鼠肾脏组织的病变程度，结果见图3。
由图3可知，Con组大鼠肾小球形态正常，肾小管上皮细胞排列整齐，大小均一，无炎症细胞浸润；与Con组比较，Mod组大鼠肾小球结构损坏严重，肾小管上皮细胞出现明显水肿，坏死，肾间质伴有大量的炎性细胞浸润；与Mod组相比，阳性药组大鼠肾小球坏死程度改善显著，肾小管细胞水肿和炎性细胞浸润程度减轻，低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠肾小球坏死程度改善较明显，肾小管上皮细胞和炎性细胞浸润程度较为减轻。
| 组别 | 空白组 | 模型组 | 阳性药物组 | 低剂量组 | 中剂量组 | 高剂量组 |
| BUN | 7.33 | 16.19 | 8.76 | 12.11 | 9.95 | 11.27 |
| UA | 62.42 | 140.80 | 67.19 | 120.23 | 77.07 | 127.59 |
| Cr | 55.69 | 69.05 | 57.50 | 63.43 | 61.12 | 59.47 |
| XOD | 14.45 | 38.35 | 22.20 | 14.45 | 24.18 | 20.18 |
由表1可知，BUN组的模型大鼠与空白比较，BUN含量极显著升高；与模型组比较，阳性药物组BUN含量极显著降低，中、高剂量组BUN含量显著降低；UA组的模型大鼠与空白比较，UA含量极显著升高；与模型组比较，阳性药物组UA含量极显著降低，中剂量组UA含量极显著降低，低、高剂量组UA含量显著降低；Cr组的模型大鼠与空白比较，Cr含量显著升高；与模型组比较，阳性药物组Cr含量极显著降低，中、高剂量组Cr含量显著降低；XOD组的模型大鼠与空白比较，XOD含量极显著升高；与模型组比较，阳性药物组XOD含量极显著降低，中剂量组XOD含量显著降低。由此可知，适当剂量的大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜的混合物可缓解大鼠血清中BUN、UA、Cr、XOD的含量，改善痛风大鼠的肾功能减退、肾小球滤过障碍，减轻UA诱导的肾脏损伤。
Claims (9)
1.一种用于缓解痛风的提取物，其特征在于，所述提取物的原料为大蒜、花椒、辣椒、生姜和韭菜。
2.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于，大蒜、花椒、辣椒、生姜和韭菜的质量比为5∶1∶1∶3∶2。
3.如权利要求1或2的提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)分别称取新鲜的大蒜、花椒、辣椒、生姜、韭菜，然后分别按下述操作进行处理：水清后切碎，超声辅助蒸馏水提取至少3次，然后趁热抽滤得到滤液和固体，滤液减压浓缩后混合得到混合液，固体混合后干燥；
(2)将步骤(1)混合液与经步骤(1)干燥处理的固体一同用超临界流体萃取；
(3)将步骤(2)获取的萃取液离心，取上清液，即得到用于缓解痛风的提取物。
4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，超声提取温度为40℃，时间为30min，料液比为1g:6mL。
5.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，减压浓缩温度为45℃。
6.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，采用CO2萃取，CO2流体的流量为20kg·h-1。
7.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中，离心转速为4000r·min-1，离心时间为7min。
8.权利要求书1或2所述提取物或者权利要求3～7任一项所述方法得到提取物，包括没食子酸月桂酯，邻苯二甲酸单丁酯，(E)-阿魏酸二十六烷基酯，邻苯二甲酸二异壬基酯，1，2，3，4-十八烷四醇，糖质酸-1,4-内酯，烯丙基半胱氨酸，和3-O-β-D-半乳呋喃糖基-α-D-吡喃型半乳糖。
9.权利要求1或2所述提取物或者权利要求3～7任一项所述方法得到提取物在制备预防和/或治疗痛风药物中的应用。
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