CN116270787A - 一种中西复方药物在制备治疗白血病药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种中西复方药物在制备治疗白血病药物中的应用，所述中西复方药物由金银花、穿心莲、板蓝根、蒲公英、对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺和马来酸氯苯那敏为原料药制成。该中西复方药物制剂可通过抑制白血病细胞的增殖及修复白血病患者的免疫功能来治疗白血病，所述白血病包括人急性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病或慢性淋巴细胞白血病。

Description

一种中西复方药物在制备治疗白血病药物中的应用
技术领域：
本发明涉及一种中西复方药物在制备治疗白血病药物中的应用，属于药物新用途领域。
背景技术：
白血病(leukemia)是一类造血干细胞或造血祖细胞的恶性克隆性肿瘤。中医认为其实由于正气内虚、温热毒邪乘虚而入引起的，以热毒、血瘀、痰浊互结，人体伤血为基本病机，以发热、出血、贫血及肝、脾、淋巴结肿大等为主要临床表现的一种造血系统的恶性肿瘤，因为恶性增殖、凋亡障碍和分化受阻等因素形成的白血病细胞在骨髓、脾和肝等组织器官中大量增殖积累和广泛浸润，并且抑制骨髓的正常造血功能。在中医理论中，提出了血液肿瘤的病因与血脉瘀阻、痰浊内生、毒邪侵袭、正气虚损密切相关，可以采用活血化瘀、软坚化痰、清热解毒、补虚扶正为基本治法。据统计，2018年全球白血病患者新增43.7万例，死亡30.9万例，而且白血病占所有儿童癌症(包括良性和交界性恶性脑肿瘤)的29％，严重威胁人类的健康，开发能有效治疗白血病的药物是全球白血病患者的迫切希望；如不加以控制，随着白血病细胞的快速增殖及免疫功能的损伤。因此，开发白血病的治疗药物具有重要的社会意义和医学研究价值。
目前，白血病的治疗尚缺乏理想的治疗药物目前常用诱导化疗方案为柔红霉素、阿糖胞苷联的合治疗方案。但其长期大量使用，可出现抗药性，影响化疗效果，且存在较多的毒副作用，严重影响患者预后。临床上白血病的治疗还有放射治疗﹑靶向治疗、免疫治疗、干细胞移植等方法。然而上述这些治疗方案存在治疗效果不佳，副作用大、易复发和移植物排斥等缺点。因此，寻找一种有效、安全的白血病治疗药物已成为当务之急。
金感胶囊具有清热解毒，疏风解表的功效。用于普通感冒，流行性感冒，外感风热证，症见发热，头疼，鼻塞，流涕，咳嗽，咽痛。金感胶囊的成分为金银花、穿心莲、板蓝根、蒲公英、对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏。当前尚未见有关金银花、穿心莲、板蓝根、蒲公英、对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏组方治疗白血病的报道。
发明内容：
本发明所要解决的技术问题在于提供一种中西复方药物(即金感胶囊组方)在制备治疗白血病药物中的应用。经研究表明，所述中西复方药物可通过抑制白血病细胞的增殖及修复白血病患者的免疫功能来治疗白血病，在防治白血病方面有较好应用价值。
为解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案实现：
一种中西复方药物在制备治疗白血病药物中的应用，所述中西复方药物按照重量组份计算，由金银花350-650份、穿心莲350-650份、板蓝根350-650份、蒲公英350-650份、对乙酰氨基酚350-650份、盐酸金刚烷胺50-150份和马来酸氯苯那敏1-3份为原料药制成。
前述中西复方药物的应用，所述中西复方药物按照重量组份计算，优选由金银花400-600份、穿心莲400-600份、板蓝根400-600份、蒲公英400-600份、对乙酰氨基酚400-600份、盐酸金刚烷胺80-120份和马来酸氯苯那敏1.5-2.5份为原料药制成。
前述中西复方药物的应用，所述中西复方药物按照重量组份计算，最好由金银花500份、穿心莲500份、板蓝根500份、蒲公英500份、对乙酰氨基酚500份、盐酸金刚烷胺100份和马来酸氯苯那敏2份为原料药制成。
前述中西复方药物的应用，所述白血病包括人急性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病或慢性淋巴细胞白血病。
前述中西复方药物的应用，将所述中西复方药物的有效成分与临床药学上可接受和允许的载体制备成口服药物制剂。
前述中西复方药物的应用，所述口服药物制剂的制备方法为：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加药材重量2-5倍的70％-90％乙醇，煎煮2-4小时，第二次加药材重量2-5倍的水，煎煮0.5-2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至40-60℃相对密度为1.25-1.45的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，然后加入辅料或者不加辅料制成，即得。
前述中西复方药物的应用，所述口服药物制剂的制备方法为：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加药材重量3-5倍的75％-85％乙醇，煎煮2.5-3.5小时，第二次加药材重量2-4倍的水，煎煮0.5-1.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至45-55℃相对密度为1.30-1.40的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，然后加入辅料或者不加辅料制成，即得。
前述中西复方药物的应用，所述口服药物制剂的制备方法为：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加药材重量4倍的80％乙醇，煎煮3小时，第二次加药材重量3倍的水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至50℃相对密度为1.35的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，然后加入辅料或者不加辅料制成，即得。
前述口服药物制剂包括口服液、胶囊、片剂、颗粒剂或丸剂。
前述中西复方药物的应用，可以将所述口服药物制剂用30％-60％乙醇溶解后，过滤，减压浓缩成浸膏，进行冻干，制成30％-60％乙醇溶出物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明所述中西复方药物的60％乙醇溶出物可有效抑制白血病细胞的增殖，并促进白血病细胞的凋亡。本发明所述中西复方药物制剂的大鼠含药血清也对白血病细胞增殖有明显的抑制效果，同时促进了细胞的凋亡。另外，通过对白血病小鼠的用药试验结果显示，本发明所述中西复方药物制剂明显降低了白血病模型小鼠脾的大小和重量，且显著抑制了白血病小鼠脾脏中大量嗜碱性白血病细胞的浸润，改善了白血病小鼠肝功能，同时促使小鼠脾脏结构恢复正常。此外，本发明所述中西复方药物制剂明显改善了小鼠脾脏的细胞表面标志物表达，特别是CD11b、B220、CD4和CD8的达到与正常组相当的水平，促使白血病患者免疫力的恢复。综上所述，本发明所述中西复方药物制剂可通过抑制白血病细胞的增殖及修复白血病患者的免疫功能来治疗白血病。因此，该药物在防治白血病方面有潜在应用价值。
本发明进行了大量的实验研究，以下为本发明实验研究的结果：
一、药效学实验
1.1实验材料
1.1.1材料及试药试剂
SPF级BALBc小鼠，出生48h后注射诱导白血病的F-MuLV病毒，共50只；正常鼠10只；BALBc小鼠为实验室繁殖；SD大鼠，雄鼠，体重200±20g，共20只，购自南京模式动物研究所。小鼠和大鼠饲喂生长繁殖饲料，均由上海华雅思创生物公司生产，饮用水为灭菌自来水，试验期间动物自由采食饮水，实验室温度21±2℃，湿度40-70％，实验室许可证号：SYXK(黔)2018-0001。实验用HEL、Jurkat、k562细胞为贵州省中国科学院天然产物化学实验室留存，RPMI1640高糖培养基购自武汉普诺赛生命科技有限公司。Gibco胎牛血清购自赛默飞世尔科技有限公司。金感胶囊是从市场购买，为贵州百灵企业集团制药股份有限公司生产。
1.1.2仪器
台式离心机(Beckman)，生物安全柜(Thermo Scientific)，细胞培养箱(ThermoScientific)，荧光倒置显微镜(Olympus)，恒温水浴锅(Grant)，高压蒸汽灭菌锅(Shenan)，Milli-Q制水机(BioGen)，多功能酶标仪(Bio tek)，流式细胞仪(BD Biosciences)。
2.1实验例1
2.1.1 60％乙醇溶出物配置：取金感胶囊用60％乙醇溶出后，采用冻干机冻干后称取配置成100mg/mL的母液。
2.1.2细胞增殖测试：取“2.1.1”项的母液用无血清培养基稀释成62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL和1500μg/mL的金感胶囊溶液。分别处理HEL、Jurkat、K562和7702细胞24h、48h、72h后用MTT检测细胞的增殖。
2.2实验例2
2.2.1细胞凋亡测试：药物配置方法同实验例1的“2.1.1”项。将配置好的母液用无血清培养基稀释成62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL的金感胶囊溶液，处理HEL细胞48h后用凋亡试剂盒进行染色，后用流式细胞仪对药物处理后的细胞凋亡进行分析。
2.3实验例3
细胞周期测试：药物配置方法同实验例1“2.1.1”项。将配置好的母液用无血清培养基稀释成62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL的金感胶囊溶液，处理HEL细胞48h后收集细胞，用70％乙醇固定过夜，随后用周期试剂盒进行染色，流式细胞仪对药物处理后的细胞周期进行分析。
2.4实验例4
大鼠含药血清配置：将金感胶囊用生理盐水配置成浓度75mg/mL的混悬液，然后用0.28g/kg的计量进行灌胃5-7天。然后，腹动脉采集大鼠全血，随后离心获得大鼠含药血清。
2.5实验例5
大鼠含药血清对细胞增殖及凋亡的影响
含药血清的配置：用无血清RPMI1640培养基将实验例4的大鼠含药血清配置成5～20％的浓度。处理HEL细胞72h后用MTT检测细胞的活力。随后收集细胞，用凋亡试剂盒进行染色，通过流式细胞仪分析含药血清对白血病细胞凋亡的影响。
2.6实验例6
对白血病小鼠的治疗效果
将金感胶囊用生理盐水配置成悬浮液，灌胃剂量为300～1000mg/kg/d，5周后结束给药。随后经过麻醉处死采集小鼠血清、肝脏组织和脾脏组织样品，进行生理生化指标测定、病理切片检测及脾脏生物标志物检测等。明确组方制剂对小鼠白血病的治疗效果。
3实验方法
3.1组方制剂60％乙醇溶出物对白血病细胞增殖和凋亡的影响
3.1.1MTT法检测组方制剂60％乙醇溶出物对白血病细胞增殖的影响
HEL、Jurkat、k562细胞用含5％血清的RPMI1640培养基，在37℃、5％CO2恒温培养箱中培养。将细胞以8000个/孔的密度接种于96孔板中，放入培养箱中培养6-8h，待细胞状态稳定后分别用125、250、500μg/ml的金感胶囊药液处理24h、48h和72h，或含药血清(5％、10％、15％和20％)处理48h和72h后，以二甲基亚砜溶剂(DMSO)为对照组。处理结束后，每孔加入10μL MTT(5mg/ml)溶液，放入培养箱中继续培养4h后，加三联液100μL/孔放置于培养箱过夜，次日早上酶标仪测570nm波长处各孔的吸光值(OD)值，计算抑制率＝(DMSO组OD值-实验组OD值)/DMSO组OD值×100％。
3.1.2流式细胞仪分析组方制剂60％乙醇溶出物对HEL细胞凋亡的作用
将HEL细胞以60万个/孔的密度接种于6孔板中，放于培养箱中培养5h，细胞稳定后分别用DMSO和125、250、500μg/ml的金感胶囊药液处理24h和48h后，或含药血清5％-20％处理72h后。收集细胞1200rpm离心3min，洗涤一遍，转移至1.5mL EP管中，然后用50μL 1×binding buffer重悬细胞。根据凋亡试剂盒说明书，每管分别加入2.5μL FITC和2.5μL PI染料，轻弹混匀，室温避光染色15min后上机检测。
3.2组方制剂含药血清对白血病细胞的作用效果
用组方制剂大鼠含药血清处理白血病细胞HEL，利用MTT法和流式细胞仪检测组方制剂大鼠含药血清对白血病细胞增殖的影响。
3.2.1组方制剂大鼠含药血清制取：
a.组方制剂灌胃正常6周龄，体重200±20g SD大鼠，给药剂量为0.28g/kg，每天一次，连续给药7天。
b.最后一次给药后，禁食不禁水4-8h后开始收集血清。
c.取血前，先用三溴乙醇对SD大鼠进行麻醉。
d.待麻药起作用后，打开SD大鼠腹腔，通过腹主动脉将大鼠血清收集到促凝管中。
e.将促凝管常温放置1-2h，待血完全凝固后，将促凝管置于离心机中4000rpm15min，收集上清，即为含药血清。
f.血清收集完后，将血清置于56℃水浴中灭活30min。将灭活的含药血清用0.22μm微孔滤膜过滤后置于-20℃冰箱保存。
3.2.2组方制剂大鼠含药血清对HEL细胞增殖及凋亡的影响
HEL细胞用含5％血清的RPMI1640培养基，在37℃、5％CO2恒温培养箱中培养。将细胞以8000个/孔的密度接种于96孔板中，放入培养箱中培养6-8h，待细胞状态稳定后用含药血清(5％、10％、15％和20％)处理48h和72h，以二甲基亚砜溶剂(DMSO)为对照组。处理结束后，每孔加入10μL MTT(5mg/ml)溶液，放入培养箱中继续培养4h后，加三联液100μL/孔放置于培养箱过夜，次日早上酶标仪测570nm波长处各孔的吸光值(OD)值，计算抑制率＝(DMSO组OD值-实验组OD值)/DMSO组OD值×100％。
3.2.3组方制剂大鼠含药血清对HEL细胞凋亡的影响
将HEL细胞以60万个/孔的密度接种于6孔板中，放于培养箱中培养5h，细胞稳定后用含药血清(5％、10％、15％和20％)处理72h后。收集细胞1200rpm离心3min，洗涤一遍，转移至1.5mL EP管中，然后用50μL 1×binding buffer重悬细胞。根据凋亡试剂盒说明书，每管分别加入2.5μL FITC和2.5μL PI染料，轻弹混匀，室温避光染色15min后上机检测。
3.3分组及建立白血病模型模型
注射病毒F-MuLV病毒5周后分笼。将50只小鼠，随机分为5组，每组10只。分别为：模型组、阳性对照组、组方制剂低剂量组和组方制剂高剂量组。未注射病毒的正常组小鼠10只为对照组。所有组小鼠均用正常繁殖饲料和灭菌水喂养，持续饲喂8周。
3.4分组给药
实验从小鼠6周龄开始灌胃给药。组方制剂低剂量组415.125mg/kg/d，中剂量组830.25mg/kg/d，连续给药5周。阳性药组长春新碱0.25mg/kg/周；正常组及模型组灌胃等体积的生理盐水，每日一次。给药期间，除正常组外，各组小鼠均继续造模。小鼠每周称一次体重，按体重变化给药量。SD大鼠分为两组(正常组和给药组，各5只)，给药剂量为0.28g/kg，连续给药7天。
3.5实验动物处理
给药5周末，动物禁食不禁水12h，称重。各组小鼠以三溴乙醇麻醉后，脱臼处死小鼠，眼眶取血，收取小鼠血清。并测定各组小鼠血容比。取小鼠肝脏和脾脏冻存于-80℃冰箱中进行后续进行分析检测。并取小鼠三分之一脾脏组织放入4％多聚甲醛中保存备用。
3.6检测指标
3.6.1肝脏和脾样品
给药结束后取小鼠脾样品送至武汉赛维尔生物科技有限公司，对肝脏组织和脾进行病理分析(H&E染色)。
3.6.2酶标仪检测各组小鼠血清样生化指标
小鼠血液生化指标的检测，5周后结束给药，小鼠眼眶取血，3000rpm 4℃离心15min，收集血清。将制备好的小鼠血清样本通过南京检测生物制品有限公司生产的试剂盒通过酶标仪来检测小鼠血清中天门冬氨酸氨基转移(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的水平。
3.6.3流式细胞仪检测小鼠脾脏细胞表面标志物表达情况
取部分脾脏组织研磨制备成单细胞悬液，分别用CD 71、Ter 119、CD 4、CD 8a、B220和CD 11b抗体避光染色30min，流式细胞仪分析小鼠脾脏细胞表面标志物表达情况。
3.7统计方法
实验结果采用SPSS 22.0统计软件，所有数据采用均数±标准差表示，两两比较采用t检验P<0.05为差异有统计学意义。
4实验结果
4.1组方制剂60％乙醇溶出物对细胞增殖的影响
表1结果显示通过对白血病细胞和正常细胞增殖活性的IC50值分析发现，组方制剂60％乙醇溶出物(JG)处理不同白血病细胞48h后有效抑制了细胞的增殖，尤其是对HEL细胞(227.52±15.97μg/mL)的增殖抑制活性显著高于K562(648.93±12.62μg/mL)和Jurkat(528.21±9.87μg/mL)细胞。但组方制剂60％乙醇溶出物对人正常细胞7702的IC50值显著低于K562、HEL和Jurkat细胞。由此可说明组方制剂可选择性抑制白血病细胞的增殖，而对正常细胞的增殖活性影响较小。
表1.组方制剂60％乙醇溶出物处理不同细胞48h的IC50值
Figure SMS_1
4.2组方制剂60％乙醇溶出物对HEL细胞增殖和凋亡的影响
根据组方制剂60％乙醇溶出物对不同细胞的IC50值分析发现，组方制剂60％乙醇溶出物对HEL细胞的抑制效果更加明显，因此选用HEL细胞为代表进一步探究组方制剂对白血病细胞的作用效果。图1显示，组方制剂60％乙醇溶出物处理HEL细胞48h和72h后，乙醇溶出物对HEL细胞的增殖作用随着浓度和时间的增加显著增加。此外，乙醇溶出物处理24h和48h后HEL的凋亡率也呈现出时间和剂量的依赖性(图2B)。因此，组方制剂60％乙醇溶出物不但抑制了HEL细胞的增殖，同时也促进了HEL细胞的凋亡。
4.3组方制剂60％乙醇溶出物对HEL细胞周期的影响
如图3所示，组方制剂60％乙醇溶出物(JG)处理HEL细胞48h后，HEL细胞有丝分裂的G1期显著增加，而S和G2期的比例明显减少。因此，结果表明组方制剂乙醇溶出物可通过将HEL细胞分裂阻止在G1期进而达到抑制HEL细胞增殖的效果。
4.4组方制剂大鼠含药血清对HEL细胞增殖的影响
为进一步探究组方制剂入血成分对HEL增殖的影响，本发明采用组方制剂灌胃SD大鼠得到组方制剂大鼠含药血清。随后通过无血清RPMI1640培养基将大鼠含药血清配置称5％、10％、15％和20％的培养基分别培养HEL细胞48h和72h，通过MTT检测HEL的增殖效果。图4A显示，组方制剂大鼠含药血清对HEL增殖的抑制效果也呈现出时间和剂量的依赖性，其中20％的含药血清处理72h对HEL增殖的抑制达到40％以上。此外，通过显微镜观察我们也可看出随着处理时间和含药血清浓度的增加HEL细胞的增殖明显降低(图4B)。因此，可表明组方制剂入血成分也可有效抑制HEL细胞的增殖。
4.5组方制剂大鼠含药血清对HEL细胞凋亡的影响
如图5所示，组方制剂大鼠含药血清处理HEL细胞72h后，流式细胞仪检测显示HEL细胞的凋亡率显著增加，在含药血清浓度达到20％时HEL细胞的凋亡率达到15％左右。此外，本发明还将通过western blot检测了含药血清处理后HEL细胞中促凋亡蛋白的变化，图5C显示促凋亡蛋白caspase3和caspase9的剪切蛋白显著增加。由此，可说明组方制剂大鼠含药血清入血成分不仅抑制了细胞的增殖还通过激活促凋亡蛋白活性诱导HEL的凋亡。
4.6组方制剂对白血病小鼠脾脏的治疗效果
为进一步探究组方制剂对白血病小鼠的治疗效果，本发明采用本课题组特有的白血病小鼠模型对组方制剂的效果进行分析。如图6所示，在给药5周后白血病小鼠的脾脏的外观形态明显小于模型组(M)达到与阳性药组和正常组相当的水平。另外，通过对各组小鼠脾脏的重量进行统计发现，给药组(JG-D和JG-Z)小鼠脾脏重量显著低于模型组(M)与正常组及阳性药组相当。此外，通过H&E染色发现，模型组小鼠的脾脏组织结构与正常组相比明显改变，而给药后小鼠脾脏结构恢复到了正常状态。由此可表明组方制剂可有效改善了白血病小鼠脾脏的形态，修复了小鼠脾脏的组织结构。
4.7组方制剂对白血病小鼠脾脏细胞表面标志物表达的影响
为明确组方制剂对小鼠免疫系统的影响，本发明对小鼠脾脏细胞表面标志物进行了检测。如图7所示，通过流式细胞仪检测发现，给药后小鼠脾脏免疫细胞标志物发生了明显变化，中剂量组小鼠脾脏免疫细胞CD8和CD4的比例在到达了与正常组相当的水平，且明显优于阳性药组。此外，对小鼠脾脏细胞B220和CD11b进行检测发现，组方制剂组小鼠脾脏细胞标志物B220和CD11b的含量明显增加。由此可见组方制剂明显提升了白血病小鼠机体的免疫系统。
4.8组方制剂对白血病小鼠血清中肝功能指标的影响
为了进一步明确组方制剂可否抑制白血病细胞对肝脏的损伤，本发明检测了各组小鼠血清中肝功能酶的水平。如图8-A和8-B所示，模型组小鼠血清中的ALT和AST的水平显著高于正常组，表明白血病细胞侵入小鼠肝脏后损伤了小鼠正常的肝功能。而在灌胃阳性药、低剂量和中剂量的组方制剂5周后小鼠血清中的ALT和AST的水平明显降低，达到了与正常组相当的水平。此外，本发明的结果还显示组方制剂对小鼠肝脏的保护效果与阳性药相当。由此可知组方制剂可有效抑制白血病对小鼠肝脏的损伤，对小鼠肝脏起到了很好的保护效果。
附图说明：
图1：组方制剂60％乙醇溶出物对HEL细胞增殖和凋亡的影响。(A.组方制剂60％乙醇溶出物处理48h和72h后对HEL增殖的影响。实验结果以mean±SD，n＝3表示，于DMSO组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)；
图2：组方制剂60％乙醇溶出物对HEL细胞凋亡的影响。不同浓度组方制剂60％乙醇溶出物(JG)作用于HEL细胞24h和48h后对HEL细胞凋亡的影响；实验结果以mean±SD，n＝3表示，于DMSO组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)；
图3：组方制剂60％乙醇溶出物对HEL细胞周期的影响；
图4：组方制剂大鼠含药血清对HEL细胞增殖的抑制效果；
图5：组方制剂大鼠含药血清对HEL细胞凋亡的影响(A.不同浓度含药血清处理HEL细胞72h，经Annexin/PI双染，流式细胞仪检测细胞凋亡；B.对细胞总凋亡率进行统计学分析；C.western blot检测HEL细胞凋亡蛋白的变化；实验结果以mean±SD,n＝3表示，于NC组比较，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001)；
图6：组方制剂对小鼠脾脏的影响(A.小鼠的脾脏；B.小鼠脾脏重量的统计图；C.小鼠脾脏组织病理切片分析；NC:生理盐水组；M:模型组；VCR:长春新碱；JG-D:组方制剂低剂量组；JG-Z：组方制剂中剂量组；与正常组相比，**p<0.01；与模型组相比，##p<0.01)；
图7：组方制剂对白血病小鼠脾脏细胞表面标志物表达的影响(NC:生理盐水组；M:模型组；VCR:长春新碱；JG-D:组方制剂低剂量组；JG-Z：组方制剂中剂量组)；
图8：组方制剂对白血病小鼠血清中肝功能指标的影响(A.谷丙转氨酶ALT；B.谷草转氨酶AST。NC:生理盐水组；M:模型组；VCR:长春新碱；JG-D:组方制剂低剂量组；JG-Z：组方制剂中剂量组；与模型组相比，**p<0.01；与正常组相比，##p<0.01)。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
实施列1
组方：金银花500g、穿心莲500g、板蓝根500g、蒲公英500g、对乙酰氨基酚500g、盐酸金刚烷胺100g、马来酸氯苯那敏2g。
制剂工艺：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加80％乙醇为药材重量的4倍，煎煮3小时，第二次加水量为药材重量的3倍，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至50℃相对密度为1.35的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，粉碎成细粉，加入制成量2％的羟丙甲纤维素，另取制成量10％的淀粉，加水溶解，制成浓度为10％的淀粉浆，干燥，整粒，填装胶囊，即得硬胶囊剂。
用法用量：每日2次，每次0.5-1.5g。
功效：用于治疗各种白血病。
实施例2
组方：金银花350g、穿心莲350g、板蓝根350g、蒲公英350g、对乙酰氨基酚350g、盐酸金刚烷胺50g、马来酸氯苯那敏1g。
制剂工艺：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加80％乙醇为药材重量的2倍，煎煮4小时，第二次加水量为药材重量的2倍，煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至40℃相对密度为1.25的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，取制成量1％的硬脂酸镁混合均匀，用60％的乙醇，制粒，干燥，压片，薄膜包衣，即得片剂。
用法用量：每日2次，每次0.5-1.5g。
功效：用于治疗各种白血病。
实施例3
组方：金银花650g、穿心莲650g、板蓝根650g、蒲公英650g、对乙酰氨基酚650g、盐酸金刚烷胺150g、马来酸氯苯那敏3g。
制剂工艺：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加80％乙醇为药材重量的5倍，煎煮2小时，第二次加水量为药材重量的2倍，煎煮0.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至60℃相对密度为1.45的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，取干粉浸膏1份，蔗糖2份，用70％乙醇为润湿剂制颗粒，制成颗粒后于60℃干燥，整粒，即得颗粒剂。
用法用量：每日2次，每次0.5-1.5g。
功效：用于治疗各种白血病。
实施例4
组方：金银花500g、穿心莲400g、板蓝根600g、蒲公英350g、对乙酰氨基酚550g、盐酸金刚烷胺100g、马来酸氯苯那敏2g。
制剂工艺：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加80％乙醇为药材重量的3倍，煎煮3小时，第二次加水量为药材重量的4倍，煎煮0.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至55℃相对密度为1.30的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，取干粉浸膏1份，加入30-60％乙醇2份溶解，过滤，收集滤液，即得口服液。
用法用量：每日2次，每次0.5-1.5g。
功效：用于治疗各种白血病。
实施例5
组方：金银花650g、穿心莲500g、板蓝根350g、蒲公英600g、对乙酰氨基酚400g、盐酸金刚烷胺120g、马来酸氯苯那敏3g。
制剂工艺：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加80％乙醇为药材重量的4倍，煎煮2小时，第二次加水量为药材重量的5倍，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至45℃相对密度为1.40的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，粉碎成细粉，加入蜂蜜适量混合君药，起模成丸，干燥，即得丸剂。
用法用量：每日2次，每次0.5-1.5g。
功效：用于治疗各种白血病。

Claims (9)

1.一种中西复方药物在制备治疗白血病药物中的应用，所述中西复方药物按照重量组份计算，由金银花350-650份、穿心莲350-650份、板蓝根350-650份、蒲公英350-650份、对乙酰氨基酚350-650份、盐酸金刚烷胺50-150份和马来酸氯苯那敏1-3份为原料药制成。
2.如权利要求1所述中西复方药物的应用，其特征在于：所述中西复方药物按照重量组份计算，由金银花400-600份、穿心莲400-600份、板蓝根400-600份、蒲公英400-600份、对乙酰氨基酚400-600份、盐酸金刚烷胺80-120份和马来酸氯苯那敏1.5-2.5份为原料药制成。
3.如权利要求2所述中西复方药物的应用，其特征在于：所述中西复方药物按照重量组份计算，由金银花500份、穿心莲500份、板蓝根500份、蒲公英500份、对乙酰氨基酚500份、盐酸金刚烷胺100份和马来酸氯苯那敏2份为原料药制成。
4.如权利要求1-3中任一项所述中西复方药物的应用，其特征在于：所述白血病为人急性髓细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病或慢性淋巴细胞白血病。
5.如权利要求1-3中任一项所述中西复方药物的应用，其特征在于：将所述中西复方药物的有效成分与临床药学上可接受和允许的载体制备成口服药物制剂。
6.如权利要求5中所述中西复方药物的应用，其特征在于：所述口服药物制剂的制备方法为：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加药材重量2-5倍的70％-90％乙醇，煎煮2-4小时，第二次加药材重量2-5倍的水，煎煮0.5-2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至40-60℃相对密度为1.25-1.45的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，然后加入辅料或者不加辅料制成，即得。
7.如权利要求6所述中西复方药物的应用，其特征在于：所述口服药物制剂的制备方法为：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加药材重量3-5倍的75％-85％乙醇，煎煮2.5-3.5小时，第二次加药材重量2-4倍的水，煎煮0.5-1.5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至45-55℃相对密度为1.30-1.40的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，然后加入辅料或者不加辅料制成，即得。
8.如权利要求7中所述中西复方药物的应用，其特征在于：所述口服药物制剂的制备方法为：按照组方比例称取各药材，金银花、穿心莲、板蓝根和蒲公英切段、混匀后加水煎煮二次，第一次加药材重量4倍的80％乙醇，煎煮3小时，第二次加药材重量3倍的水，煎煮1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至50℃相对密度为1.35的浸膏，然后加入对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、马来酸氯苯那敏混合均匀，喷雾干燥成干粉浸膏，然后加入辅料或者不加辅料制成，即得。
9.如权利要求5所述中西复方药物的应用，其特征在于：将所述口服药物制剂用30％-60％乙醇溶解后，过滤，减压浓缩成浸膏，进行冻干，制成30％-60％乙醇溶出物。
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