CN116270350B

CN116270350B - 一种花卉组合物及其制备方法和应用

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Publication number: CN116270350B
Application number: CN202310300528.XA
Authority: CN
Inventors: 李丽; 易帆; 孟宪瑶
Original assignee: Beijing Technology and Business University
Current assignee: Beijing Technology and Business University
Priority date: 2023-03-24
Filing date: 2023-03-24
Publication date: 2024-03-29
Anticipated expiration: 2043-03-24
Also published as: CN116270350A

Abstract

本发明提供了一种花卉组合物及其制备方法和应用，涉及化妆品制剂领域。该花卉组合物包括白牡丹花、白荷花、白芙蓉花、白梅花和黄柏，各组分相互配伍，重量份比为0.1‑5：0.1‑5：0.1‑5：0.1‑5：0.01‑2；制得的花卉组合物经水和/或醇类溶剂加热提取后，提取物具有良好的抗氧化、抗炎和舒缓肌肤的效果，将该花卉组合物应用于具有显著抗氧化、抗炎、舒缓修护、抗皱紧致功效的化妆品中，可有效延缓肌肤衰老，解决炎症、细菌增长等问题，为花卉组合物的应用提供了新的方向，同时为其在化妆品的应用提供依据。

Description

一种花卉组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于化妆品制剂领域，具体涉及一种花卉组合物及其制备方法和应用。

背景技术

氧自由基包括氧化物自由基、羟基自由基、超氧化物阴离子和臭氧等。体内的自由基若不能及时去除，容易对生物体组织造成伤害。有研究表明，自由基与肿瘤、癌症、衰老、艾滋病、动脉粥状硬化、免疫力下降、心脑血管疾病、炎症的发生有密切关系。比如，蛋白质和脂质过氧化生成丙二醛，丙二醛会导致形成老年斑，从到导致肌肤衰老；自由基与恶性肿瘤的生长过程也有关系，自由基容易造成DNA受损，进而引起DNA的解聚加重癌细胞的扩散。

肌肤随着年龄的增长而导致胶原蛋白流失，皮肤失去弹性，皮肤容易被氧化；同时，随着社会的不断发展，人体肌肤由于接触强光、环境的污染、或者肌肤敏感、清洁不到位，而使得肌肤受损，加快肌肤衰老，严重者可能诱发炎症，甚至皮肤癌等疾病。因此，需要在肌肤外敷用具有抗氧化和抗炎功能的产品，如维生素C、茶多酚(多酚类物质)等。但是，这些成分大多为化学合成类产品，从天然植物提取有效成分越来越受到人们的广泛推崇。

我国植物资源丰富，其中，开发和利用花卉植物已成为人们关注的热点。而且，无论是古代还是现代，人们对花卉植物的抗氧化能力均做了大量的研究。根据明代《本草纲目》中的记载，牡丹根皮“滋阴降火，解斑毒，利咽喉，通小便血滞。赤花者利，白花者补，人亦罕悟，宜分别之”。《红楼梦》中也有记载一种冷香丸，将白牡丹花、白荷花、白芙蓉花、白梅花的花蕊用黄柏煎汤，可治哮喘。现代研究，田星等人(食用花卉中多酚化合物的种类及其抗氧化性研究进展[J].食品工业，2021)对花卉中多酚化合物的种类及其抗氧化活性进行了研究，研究表明，花卉中的抗氧化活性主要成分为酶类抗氧化成分，超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、过氧化物酶等，以及非酶类抗氧化成分，谷胱甘酶、维生素(VA、VC、VE)、酚类和黄酮类物质等。

吕镇城等人(44种花卉抗氧化活性研究[J].热带农业科学，2016)对44种花卉的花瓣进行高温水提，分别测定了花卉提取液的DPPH自由基清除能力，超氧自由基清除能力，OH-清除能力以及还原力测定，相同浓度下不同花卉对DPPH自由基的清除率介于1.16-88.36％之间，其中，龙眼、月季和石榴的对DPPH自由基清除力较强，在79％以上，具有较高的抗氧化性能。

中国发明专利CN115181604A公开了一种牡丹花蕊精制油及其制备方法和应用，将牡丹花蕊经有机溶剂提取后制得牡丹花花蕊精制油，与牡丹花蕊改性油、维生素E，水杨酸混合。含有大量不饱和脂肪酸的牡丹花蕊油与抗坏血酸进行反应，有效提高了其抗氧化性能，抗衰、消炎、保湿的养肤作用。但是，该制备方法在花蕊经有机溶剂提取后，需要进行脱胶、脱酸等后处理步骤，且花蕊提取物还需要与VE、水杨酸协同配合使用，才能发挥较高的抗氧化性能，制约了植物本身的抗氧化、抗炎的应用。

鉴于此，本发明将白牡丹花和白荷花(Nelumbonucifera)、白芙蓉花(Hibiscusmutabilis Linn.)、白梅花以及黄柏协同配伍，在合适的配方比例下，以抗氧化和抗炎功效为指标，研究得到一种具有高抗氧化和抗炎能力的花卉组合物，该花卉组合物的组方称之为冷香丸，将其应用于具有显著抗氧化及抗炎功效化妆品中，为其在化妆品中的应用提供依据。

发明内容

本发明针对现有技术存在的问题，提供了一种花卉组合物及其制备方法和其在化妆品中的应用，将白牡丹花和白荷花、白芙蓉花、白梅花以及黄柏协同配伍，研究得到一种具有高抗氧化和抗炎能力的花卉组合物的组方，将其应用于具有显著抗氧化及抗炎功效化妆品中，为其在化妆品中的应用提供依据。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

首先，本发明提供一种具有抗氧化、抗炎能力的花卉组合物，按照重量份包括以下成分：0.1-5份白牡丹花、0.1-5份白荷花、0.1-5份白芙蓉花、0.1-5份白梅花和0.01-2份黄柏。

优选地，所述花卉组合物，按照重量份包括以下成分：0.5-2份白牡丹花、0.5-2份白荷花、0.5-2份白芙蓉花、0.5-2份白梅花和0.01-1份黄柏。

进一步优选地，所述花卉组合物，按照重量份包括以下成分：0.5-2份白牡丹花、0.5-2份白荷花、0.5-2份白芙蓉花、0.5-2份白梅花和1份黄柏。

更进一步优选地，所述花卉组合物，按照重量份包括以下成分：1份白牡丹花、1份白荷花、1份白芙蓉花、1份白梅花和1份黄柏。

优选地，所述花为花瓣。

然后，本发明提供上述花卉组合物的提取方法，包括步骤：取配方量的白牡丹花、白荷花、白芙蓉花、白梅花和黄柏，按照料液比1：5-40与溶剂混合，于70-110℃下提取1-3h，冷却后精滤，收集滤液得到提取物。

优选地，所述提取方法中，料液比为1:10-30。

进一步优选地，所述料液比为1:30。

优选地，所述提取方法中，溶剂选自水、醇类溶剂中的至少一种。

进一步优选地，所述溶剂选自水、甲醇、乙醇、正丁醇、丁二醇中的至少一种。

更进一步优选地，所述溶剂选自水、乙醇、丁二醇中的至少一种。

更进一步优选地，所述溶剂选自水、乙醇、1,3-丁二醇中的至少一种。

更进一步优选地，所述溶剂选自水、1,3-丁二醇中的至少一种。

进一步优选地，所述醇类溶剂的浓度为20-50％。

更进一步优选地，所述醇类溶剂的浓度为25-40％。

更进一步优选地，所述醇类溶剂的浓度为30％。

优选地，所述提取方法中，提取的温度为80-100℃，提取时间为1-2.5h。

进一步优选地，所述提取的温度为90-100℃，提取时间为1.5-2.5h。

更进一步优选地，所述提取的温度为100℃，提取时间为2h。

最后，本发明提供上述花卉组合物在制备具有抗氧化、抗炎、调控抗菌肽、舒缓修护、抗皱紧致、减少水分流失功效的化妆品、日化用品中的应用。

优选地，所述化妆品、日化用品包括修护霜、洗面奶、乳液、护肤精华、爽肤水、面霜、防晒霜、防晒喷雾、防晒乳、面膜、护手霜、护发素、身体乳、沐浴露。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

1、本发明将白牡丹花、白荷花、白芙蓉花、白梅花和黄柏复配制得复合花卉组合物，各组分配比合理，协同配伍，具有显著抗氧化、抗炎、调控抗菌肽、延缓衰老、减少水分流失的作用。

2、本发明利用水或/和醇类溶剂对花卉组合物进行活性成分提取，在一定提取温度和提取时间下，提取物具有显著抗氧化、抗炎功效，对肌肤具有舒缓、抗皱紧致的作用。

3、本发明将所制得的花卉组合物(冷香丸)应用于制备具有抗氧化、抗炎功效的化妆品中，为冷香丸的应用提供了新的方向，同时为其在化妆品的应用提供依据。

附图说明

图1是本发明花卉组合物的提取物应用于修护霜中的经皮水分散失图。

具体实施方式

以下非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。下述内容仅仅是对本申请要求保护的范围的示例性说明，本领域技术人员可以根据所公开的内容对本申请的发明做出多种改变和修饰，而其也应当属于本申请要求保护的范围之中。

下面以具体实施例的方式对本发明作进一步的说明。本发明实施例中所使用的各种化学试剂如无特殊说明均通过常规商业途径获得。

下述实施例中，花卉组合物的组分包括白牡丹花、白荷花、白芙蓉花、白梅花和黄柏；所述花卉组合物在本申请中命名为“冷香丸”。所述白荷花为水芙蓉花，Nelumbonucifera；所述白芙蓉花为木芙蓉花，Hibiscus mutabilis Linn.。

实施例1-7所述白牡丹花的采摘期为4-6月，所述白荷花的采摘期为6-9月，所述白芙蓉花的采摘期为8-10月，所述白梅花的采摘期为1-2月。

实施例1

称取白牡丹花1g，白荷花1g，白芙蓉花1g，白梅花1g，黄柏0.01g于三口烧瓶中，按照料液比花卉组合物：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物1。

实施例2

称取白牡丹花1g，白荷花1g，白芙蓉花1g，白梅花1g，黄柏0.01g于三口烧瓶中，按照料液比花卉组合物：去离子水＝1：20加入去离子水，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物2。

实施例3

称取白牡丹花1g，白荷花1g，白芙蓉花1g，白梅花1g，黄柏1g于三口烧瓶中，按照料液比花卉组合物：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物3。

实施例4

称取白牡丹花1g，白荷花1g，白芙蓉花1g，白梅花1g，黄柏1g于三口烧瓶中，按照料液比花卉组合物：去离子水＝1：20加入去离子水，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物4。

实施例5

与实施例3不同的是，花卉组合物的组分配比不同，具体为：

称取白牡丹花1g，白荷花1g，白芙蓉花2g，白梅花2g，黄柏1g于三口烧瓶中，按照料液比花卉组合物：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物5。

实施例6

与实施例3不同的是，花卉组合物的组分配比不同，具体为：

称取白牡丹花0.5g，白荷花0.5g，白芙蓉花1g，白梅花1g，黄柏2g于三口烧瓶中，按照料液比花卉组合物：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物6。

实施例7

与实施例3不同的是，花卉组合物的制备方法不同，具体为：

称取白牡丹花1g，白荷花1g，白芙蓉花1g，白梅花1g，黄柏1g于三口烧瓶中，按照料液比花卉组合物：30％乙醇＝1：20加入30％乙醇，80℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物7。

对比例1

称取白牡丹花5g于三口烧瓶中，按照料液比白牡丹花：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物8。

对比例2

称取白荷花5g于三口烧瓶中，按照料液比白荷花：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物9。

对比例3

称取白芙蓉花5g于三口烧瓶中，按照料液比白芙蓉花：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物10。

对比例4

称取白梅花5g于三口烧瓶中，按照料液比药材：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物11。

对比例5

称取黄柏1g于三口烧瓶中，按照料液比黄柏：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物12。

对比例6

称取白牡丹花花蕊1g，白荷花花蕊1g，白芙蓉花花蕊1g，白梅花花蕊1g，黄柏0.01g于三口烧瓶中，按照料液比组合物：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物13。

对比例7

与实施例3不同的是，花卉组合物的组分不同，组分中不含有白牡丹花，具体为：

称取白荷花1g，白芙蓉花1g，白梅花1g，黄柏1g于三口烧瓶中，按照料液比组合物：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物14。

对比例8

与实施例3不同的是，花卉组合物的组分不同，组分中不含有白荷花和白芙蓉花，具体为：称取白牡丹花1g，白梅花1g，黄柏1g于三口烧瓶中，按照料液比组合物：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物15。

对比例9

与实施例3不同的是，花卉组合物的组分不同，组分中不含有黄柏，具体为：

称取白牡丹花1g，白荷花1g，白芙蓉花1g，白梅花1g于三口烧瓶中，按照料液比组合物：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物16。

对比例10

与实施例3不同的是，花卉组合物的组分配比不同，具体为：

称取白牡丹花1g，白荷花6g，白芙蓉花1g，白梅花6g，黄柏0.1g于三口烧瓶中，按照料液比组合物：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物17。

对比例11

与实施例3不同的是，花卉组合物的制备方法不同，提取温度为45℃。

其余参数和方法均与实施例3相同，收集滤液得到组方提取物18。

对比例12

与实施例3不同的是，花卉组合物的组分不同，组分中将白牡丹花替换为白月季花，具体为：称取白月季花1g，白荷花1g，白芙蓉花1g，白梅花1g，黄柏1g于三口烧瓶中，按照料液比花卉组合物：30％1，3-丁二醇＝1：20加入30％1，3-丁二醇，100℃条件下热回流提取2h，冷却后精滤，收集滤液得到组方提取物19。

试验1DPPH自由基抑制实验，检测组方提取物的抗氧化功效

(1)DPPH乙醇溶液的配置：

称取20mgDPPH，加入无水乙醇溶解并定容于250mL容量瓶中，DPPH浓度配制为2×10^-4mol/L；0-4℃下避光保存，现配现用，4h内有效。阳性对照选用维生素C。

(2)待测液的配置：

取组方提取物1-19用无水乙醇配制得0.5mg/mL、1.0mg/mL浓度的待测溶液。

(3)实验步骤：

按表1试剂配比表加入各试剂。

(3.1)取1mL的待测液与1mL的2×10^-4mol/L的DPPH溶液混匀(A管)；

(3.2)取1mL的溶剂与1mL的2×10^-4mol/L的DPPH溶液混匀(B管)；

(3.3)取1mL的溶剂与1mL的待测液混匀(C管)；

(3.4)避光反应30min后，在517nm下测A、B、C管吸光度值。

表1

编号	DPPH溶液	溶剂	待测液	总体积
					A	1mL	——	1mL	2mL
B	1mL	1mL	——	2mL
					C	——	1mL	1mL	2mL

(4)DPPH自由基抑制率计算公式：DPPH抑制率(％)＝(B+C-A)/B。

(5)DPPH自由基抑制率检测结果，表2为组方物提取物1-19对DPPH的抑制率结果。

表2

结果显示，组方提取物能够显著抑制DPPH自由基，且组方提取物3相比于对比例6替换花蕊后抗氧化效果显著提高，且提升黄柏比例后抑制作用显著，具有显著抗氧化功效。

试验2COX-2体外抑制实验，检测组方提取物的抗炎功效

用COX-2试剂盒测试不同样品对COX-2的抑制率，具体操作根据厂家提供的使用说明：

(1)配制样品培养基：将样品用DMSO稀释至待测浓度(100μg/mL)。

(2)试剂配制：

a.融解除rhCOX-2以外的其它所有试剂至室温，略离心使溶液沉淀至管底，再混匀备用。COX-2Probe、COX-2Cofactor(50X)和COX-2Substrate(50X)配制在DMSO中，可37℃水浴0.5-2min促进融解。使用完毕后宜立即-20℃避光保存。

b.COX-2Cofactor工作液的配制：按照每个样品需要5微升COX-2Cofactor工作液的比例配制适量的COX-2Cofactor工作液。取适量的COX-2Cofactor(50X)，按照1:49的比例用COX-2Assay Buffer稀释。例如4微升COX-2Cofactor(50X)加入196微升COX-2AssayBuffer配制成200微升COX-2Cofactor工作液。配制好的COX-2Cofactor工作液可4℃存放，仅限当日使用。

c.COX-2工作液的配制：按照每个样品需5微升COX-2工作液的比例配制适量的COX-2工作液。取适量的rhCOX-2(25X)，按照1:24的比例用COX-2Assay Buffer稀释。例如8微升rhCOX-2(25X)加入192微升COX-2Assay Buffer配制成200微升COX-2工作液。配制好的COX-2工作液可在冰浴上暂时保存，1小时内酶活性基本稳定。注：所有涉及COX-2的操作应在冰上进行。

d.COX-2Substrate工作液的配制：按照每个样品需5微升COX-2Substrate工作液的比例配制适量的COX-2Substrate工作液。取适量的COX-2Substrate(50X)，加入等体积的Substrate Buffer，充分涡旋混匀，该混合物再按照1:24的比例用Milli-Q级纯水或重蒸水稀释，充分涡旋混匀。例如20微升COX-2Substrate(50X)加入20微升Substrate Buffer，涡旋混匀后，再加入960微升Milli-Q级纯水或重蒸水，再充分涡旋混匀，最终获得1毫升COX-2Substrate工作液。配制好的COX-2Substrate工作液可在冰浴上暂时保存，1小时内较为稳定。注：COX-2Substrate工作液也可在样品检测时37℃孵育10分钟的过程中配制。

e.阳性抑制剂Celecoxib溶液的配制：本试剂盒提供的阳性对照抑制剂Celecoxib浓度为100μM，配制在DMSO中，可以根据需要使用与待测抑制剂一样的溶剂稀释成所需浓度或浓度梯度。通常Celecoxib的IC50约为10nM-100nM。

(3)样品检测：

a.参考表3的试剂配比表，使用96孔黑板设置对照孔和样品孔，并按照下表依次加入样品和各溶液。加入待测样品后，混匀，37℃孵育10分钟。

表3

注：*样品溶剂是指配制和稀释待测抑制剂所用的溶剂。

b.各孔加入COX-2Probe5微升。

c.各孔快速加入COX-2Substrate工作液5微升，混匀。注：加入COX-2Substrate工作液后反应即会开始，如果孔数较多，可以在低温操作或使用排枪操作以减小各孔间加入COX-2Substrate工作液的时间差而导致的误差，混匀也可以在培养板振荡器上进行。

d.37℃避光孵育5分钟后进行荧光测定。激发波长为560nm，发射波长为590nm。当荧光读数偏低时，也可适当延长孵育时间至10-20分钟。

(4)计算：

a.计算每个样品孔和空白对照孔的平均荧光值，可分别记录为RFU空白对照、RFU100％酶活性对照、RFU阳性抑制剂对照和RFU样品。RFU，Relative Fluorescence Unit。

b.计算每个样品的抑制百分率。计算公式如下：

抑制率(％)＝(RFU100％酶活性对照-RFU样品)/(RFU100％酶活性对照-RFU空白对照)×100％。(5)COX-2抑制率检测结果见表4。

表4

表4结果显示，组方提取物对COX-2具有抑制作用，且组方提取物3抑制作用最显著，具有显著舒缓修护功效。

试验3活性成分黄酮含量检测

(1)精密称取芦丁对照品0.1g，用体积分数为75％的乙醇溶解、定容至100mL容量瓶，此芦丁溶液质量浓度为1.0g/L。

(2)分别精密吸取上述芦丁溶液0.0mL，2.0mL，4.0mL，6.0mL，8.0mL，10.0mL于10mL容量瓶内，用体积分数为75％的乙醇稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度分别为0.0mg/mL，2.0mg/mL，4.0mg/mL，6.0mg/mL，8.0mg/mL，10.0mg/mL的对照品溶液。

(3)对照品测定：分别取1mL不同浓度的对照品溶液于10mL容量瓶中，依次加入4mL去离子水、0.3mL质量分数为5％的NaNO₂水溶液，5min后加入0.3mL质量分数为10％的Al(NO₃)₃水溶液，反应6min后依次加入2mL质量分数为1mol/L的NaOH水溶液以及2.4mL去离子水，10min后510nm下测定吸光度；以吸光度值A为纵坐标，芦丁对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。

(4)样品测定：取1ml各实施例和对比例的提取物于试管中，依次加入4mL去离子水、0.3mL质量分数为5％的NaNO₂水溶液，5min后加入0.3mL质量分数为10％的Al(NO₃)₃水溶液，反应6min后依次加入2mL质量分数为1mol/L的NaOH水溶液以及2.4mL去离子水，10min后510nm下测定吸光度。

黄酮含量检测结果见表5。

表5

试验4对抗菌肽LL-37的影响

采用痤疮丙酸杆菌诱导HaCaT细胞模型，检测冷香丸对抗菌肽LL-37的影响

(1)配制样品培养基：根据CCK-8细胞毒性检测结果，将样品用无血清培养基稀释至1.0％，2.0％浓度。

(2)痤疮杆菌配制：用复苏3代后的新鲜痤疮杆菌，用离心机离心后，除去上清液，用PBS稀释痤疮杆菌，然后用酶标仪测OD600nm＝0.5(2×10⁸CFU/mL)的菌浓度，现用现配。

(3)铺板：配制细胞浓度2×10⁵cells/mL，96孔板每孔接入200μL细胞液，置于培养箱37℃，5％CO₂环境中培养。

(4)当HaCaT细胞生长贴壁后，进行样品孵育和痤疮杆菌刺激(刺激剂量为20μL/孔)。设置空白组、模型组及样品组，按照以下分组：

空白组，不加样品，不加痤疮杆菌刺激。

模型组，不加样品，6h后加20μL的痤疮杆菌刺激。

样品组，加入样品，孵育6h后，加20μL的痤疮杆菌刺激。

(5)将96孔板置于培养箱37℃，5％CO₂环境中培养24h，收集细胞上清液，进行LL-37含量检测。

冷香丸提取物对LL-37含量检测结果见表6。

表6

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结果显示，冷香丸组方提取物对抗菌肽LL-37含量具有调控作用，抑制炎症后，将抗菌肽调控至正常水平，且提取物3调控作用最显著。

试验5弹性蛋白酶抑制试验

采用弹性蛋白酶抑制实验，检测冷香丸对弹性蛋白酶的影响：

在96孔板中加入各试剂，每孔总体积为100μL：

(1)A孔：25μL弹性蛋白酶溶液+50μL待测液+15μL底物溶液+10μL缓冲液；

(2)B孔：25μL弹性蛋白酶溶液+50μL待测液+15μLTris-HCl溶液+10μL缓冲液；

(3)C孔：25μL弹性蛋白酶溶液+50μLTris-HCl溶液+15μL底物溶液+10μL缓冲液；

(4)先加入酶溶液和待测液(或Tris-HCl溶液)孵育10min后，再加入底物溶液和缓冲液孵育60min，在405nm处测定吸光度值。

(5)弹性蛋白酶抑制率计算公式：抑制率(％)＝100×[1-(A-B)/C]，其中，A为A孔的吸光度值，B为B孔的吸光度值，C为C孔的吸光度值。

所述弹性蛋白酶溶液的浓度为5μg/mL，购自Sigma公司，货号为E8140；所述待测液为本申请实施例和对比例的组方提取物，用0.1mol/L的Tris-HCl溶液将组方提取物稀释至5％的浓度；所述底物溶液为N-甲氧基琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val对硝基苯胺；所述缓冲液为PBS(pH＝6.5)。

弹性蛋白酶抑制率检测结果见表7。

表7

结果显示，冷香丸组方提取物对弹性蛋白酶具有抑制作用，能够抑制其对弹性蛋白的降解，保持皮肤弹性，起到抗皱紧致功效，且提取物3抑制作用最显著。

试验6保湿性能

将实施例的冷香丸组方提取物和对比例的组方提取中应用于修护霜的制备中，并将修护霜涂抹于人体皮肤表面，进行水分散失的测试。

修护霜的具体配方见表8：

表8

修护霜的制备方法：

按顺序称取A相进行加热至80℃，称取B相(先将黄原胶分散在多元醇中后按顺序添加其他原料，卡波940最后均匀分散在B相中，不要搅拌)加热至80℃，将B相倒入A相中均质5min，待温度降为60℃时加入C相，降至45℃时加入D相，最后补水至100。

选取18-35岁的52名女性志愿者，分为13组，每组4人，在相同的位置(手臂内侧位置)进行人体皮肤水分散失测试对比，修护霜的涂抹量为1g/cm²，每隔0h、1h、2h、4h手臂内侧皮肤的经皮水分散失，实施例3冷香丸组方提取物应用于修护霜中，其保湿性能实验结果如表9、图1所示。

经皮水分散失的抑制率(％)＝-(4h-0h)/0h×100％，经皮水分散失的抑制率越高，说明效果越好。

所述志愿者的受试部位前7天不能使用化妆品、外用药品或内服保健品。

表9

图1中可看出，含本发明实施例3的屏障修护霜能显著降低皮肤水分散失，说明冷香丸组方对屏障修护霜的影响较大，能够减少皮肤水分散失，具有修护皮肤屏障的功效。表9可以看出，实施例3的屏障修护霜能显著降低皮肤水分散失，效果显著优于对比例。

最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本发明的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.一种具有抗氧化、抗炎能力的花卉组合物，其特征在于，按照重量份包括以下成分：0.5-2份白牡丹花、0.5-2份白荷花、0.5-2份白芙蓉花、0.5-2份白梅花和1份黄柏；

所述花卉组合物由包括以下步骤的制备方法所制备得到：取配方量的白牡丹花、白荷花、白芙蓉花、白梅花和黄柏，按照料液比1：5-40与醇类溶剂混合，于70-110℃下提取1-3h，冷却后精滤，收集滤液得到提取物。

2.根据权利要求1所述的花卉组合物，其特征在于，所述花卉组合物，按照重量份包括以下成分：1份白牡丹花、1份白荷花、1份白芙蓉花、1份白梅花和1份黄柏。

3.权利要求1-2任一项所述花卉组合物的制备方法，其特征在于，包括步骤：取配方量的白牡丹花、白荷花、白芙蓉花、白梅花和黄柏，按照料液比1：5-40与醇类溶剂混合，于70-110℃下提取1-3h，冷却后精滤，收集滤液得到提取物。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述醇类溶剂的浓度为20-50％。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇、正丁醇、丁二醇中的至少一种。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述醇类溶剂选自乙醇、丁二醇中的至少一种。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的提取的温度为80-100℃，提取时间为1-2.5h。

8.权利要求1-2任一项所述的花卉组合物在制备具有抗氧化、抗炎、调控抗菌肽、舒缓修护、抗皱紧致、减少水分流失功效的化妆品、日化用品中的应用。