CN1162317A

CN1162317A - 功能性三联吡啶-金属配合物，其制备方法和带有三联吡啶-金属配合物的寡核苷酸结合物

Info

Publication number: CN1162317A
Application number: CN 95195985
Authority: CN
Inventors: R·汉纳; J·豪尔; D·赫斯金; U·皮尔利斯; H·穆沙
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1994-09-02
Filing date: 1995-08-30
Publication date: 1997-10-15

Abstract

通式V的化合物，其中R₂和R₇各自独立代表H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆烷基芳基或卤素，R₃和R₆各自独立地为H，C₁-C₄烷基，C₇-C₁₂芳基烷基或C₆-C₁₆芳基，R₄代表H，C₁-C₂₀烷基，C₅-C₈环烷基，C₆-C₁₂芳基或C₇-C₁₂芳基烷基，这里烷基、环烷基、芳烷基和芳基残基不被取代或以C₁-C₄烷氧基、F、Cl、Br、-CN、C₁-C₄烷基或-NO₂取代，Me表示一种镧系金属或钇，Y表示一种酸的阴离子，n是一个2或3的数，m是一个1、2或3的数，R₉表示一个式VI的基团，和-X_p-A-X′_q-A′_r-Oligo(VI)，R₈代表H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳烷基，或C₆-C₁₆芳基，或R₉表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳烷基或C₆-C₁₆芳基和R₈表示一个式VI的残基，p、q和r分别代表0或1，X和X′分别表示一个未取代的或以C₁-C₄烷基，F，Cl，Br，-CN，C₁-C₄烷基或-NO₂取代的选自下列基团的残基：C₁-C₁₀亚烷基，C₂-C₁₂亚烯基，C₂-C₁₂亚炔基，-(C_xH_2xO)_y-，其中x等于一个2到6的数，y是一个1到20的数，C₅-C₈亚环烷基，C₆-C₁₂亚芳基和C₇-C₁₂亚芳烷基，A和A′分别表示-O-，-S-，-S-S-，-NR₁₂-CO-NR₁₂，-NR₁₂-CS-NR₁₂-，-NR₁₂-，-NR₁₂-C(O)-O-，-C(O)O-，-C(O)S-，-C(O)NR₁₂-，-C(S)S-，-C(S)O-，-C(S)NR₁₂-，-SO₂NR₁₂-，-SO₂-，P(O)(OH)O-，P(S)(SH)S-，-P(S)(SH)O-，-P(S)(OH)O-，-P(O)(SH)S-，P(O)(OH)S-，-P(O)(SH)O-，-P(O)(OH)-NR₁₂-，-P(S)(SH)-NR₁₂-，-P(S)(OH)-NR₁₂-，-P(O)(SH)-NR₁₂-，-HP(O)O-，-HP(S)S-，-HP(O)NR₁₂-或-HP(S)NR₁₂-，其中R₁₂表示H或C₁-C₆烷基，和Oligo代表一个由天然的，修饰的或合成的脱氧核苷或肽核酸片段衍生的天然、修饰或合成的序列，通过一个核酸碱基、一个核苷酸内的桥或一个糖基来结合并且在内部区域互补于一个靶RNA。

Description

功能性三联吡啶-金属配合物，其制备方法和带有三联吡啶-金属配合物的寡核苷酸结合物

本发明涉及环状三联吡啶-镧系金属配合物，在其所成之大环上有8个氮原子和10个碳原子，在其三联吡啶部分含一个功能基，一种通过三联吡啶肼与吡啶-2，6-二醛或酮缩合的制备方法，这些配合物与寡核苷酸的缔合以及这些缔合物用于RNA序列专一性裂解的方法。

RNA在金属离子催化条件下水解久已为人熟知。这种裂解一般发生在RNA的未配对区域，在英语中称之为“环”“loops”。对于t-RNAp^he裂解的同一应用目的，W.J.Krzyzosiak等人在‘生物化学’1988，27，5771-5777文中建议用二醋酸铅，G.J.Murakawa等在‘核酸研究’1989，17，5361-5375文中述及嵌入1，10-菲咯啉的铜配合物，J.Ciesiolka等人在‘欧洲生化杂志’1989，182，445-450著文揭示了三氯化铕应用于同一目的：裂解tRNA^phe。C.S.Chow等人在‘美国化学会志’1990，112，2839-2841文中应用了钌和铑与菲咯啉配体的配合物。而在‘生物化学’29卷2515至2523页L.S.Behlen等提及tRNA^phe与二醋酸铅的变体。此后，N.Hayashi等人在‘无机化学’1993年32卷5899至5900页描述了镧系配合物也适于tRNA裂解。

后来D.Magda等人在美国化学会志1994年116卷7439-7440报告，由铕(III)-Texaphyrin和带DNA-片段的寡核苷酸之结合物来裂解一靶RNA，其中在RNA/寡核苷酸配合物中的Texaphyrin配合物仅被裂解约30％。这种Texaphyrin配合物也有不利之处，在配体中须有另外的羟丙基结合，才能保证足够的溶解度。配体的亚胺基不耐水解，所以在水性环境中其效力相当快地减低，这就是说作治疗应用时只有一个微不足道的存留时间。通过配体的水解金属被激离出来，引起严重的毒性问题和非选择性RNA裂解。因为它是弱路易斯酸，当铕离子电荷经一个配体中和，一个二元配体配合物就形成了。上述的配合物都是通过昂贵的合成方法得到的。

我们知道，细胞中生理上有害的多肽发生是通过基因调控下的mRNA合成而完成。为了抵抗或阻止疾病就希望有种方法阻止mRNA的作用。特别是能够通过在确定位点不可逆裂解而破坏mNRA，因之失去其所含信息。因此还可以希望通过RNA链的序列特异性裂解提供一种碎片，以迅速在反义区构成寡核苷酸为诊断目的之用(生物传感器)或能用于疾病治疗中以影响细胞内代谢过程。

人们发现，一个对于靶RNA是序列互补并且结合一个三联吡啶-镧系配合物的寡核苷酸是高效的，并且能够实现靶RNA的序列专一裂解。

本发明就是通式I的化合物：

其中

R₁为H或一个取代基和R₅为一个一价功能基，

或

R₁为一个一价功能基，R₅为H或一取代基，这里功能基直接通过一个基团Z连接到吡啶环上，基团Z是在必要时以-O-，-S-，-NR₁₂-，-C(O)O-或-C(O)NR₁₂-隔开的选自下列基团的残基：C₁-C₂₀亚烷基，C₂-C₁₂亚烯基，C₂-C₁₂亚炔基，C₅-C₈亚环烷基，C₆-C₁₂亚芳基和C₇-C₁₂亚芳烷基，

R₂和R₇彼此独立地表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳烷基，C₆-C₁₆芳基或卤素，

R₃和R₆彼此独立地表示H，C₁-C₄烷基，C₇-C₁₂芳烷基或C₆-C₁₆芳基，

R₄为H，C₁-C₂₀烷基，C₅-C₈环烷基，C₆-C₁₂芳基或C₇-C₁₂芳烷基，

R₁₂为H或C₁-C₆烷基，

Me表示一个镧系金属或钇，

Y表示一种酸的阴离子，

n表示数字2或3，和

m为数字1、2或3。

在这里烷基、环烷基、芳基烷基、芳基和基团Z残基是未被取代的或以C₁-C₄烷氧基、F、Cl、Br、-CN、C₁-C₄烷基或-NO₂取代。

R₁和R₅作为取代基优选选择C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基或C₆-C₁₆芳基，带有O，S，N作为杂原子的C₄-C₁₆芳基，C₆-C₁₂杂芳基，C₁-C₄烷基硫基，双(C₁-C₄烷基)氨基，卤素基、磺酰胺基或羧酰胺。

R₁和R₅优选是连接在吡啶环氮原子的对位。

R₂、R₃、R₆和R₇代表烷基时优选是甲基和乙基，作烷氧基时优选是甲氧基和乙氧基，作芳烷基优选是亚苄基或亚苯乙基，而作芳基则优选是萘基和特别是苄基。在一种实施方案中R₂和R₇为H和R₃、R₆为烷基，尤其是R₂和R₇为H及R₃和R₆为C₁-C₄烷基，并且特别是都为甲基。R₂、R₃、R₆和R₇也可以是以O、S、N作杂原子的C₄-C₁₂杂环芳基，例如吡啶基、噻唑基、咪唑基、噁唑基、呋喃基、吡啶基、苯硫基。此外还能是C₁-C₄烷基硫基，卤素基、双(C₁-C₄烷基)氨基、磺酰胺和羧酰胺。

R₄作为烷基含有1-12C、优选1-8C，特别是1-4C原子。烷基的若干例子如甲基、乙基和丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十八烷基、十九烷基和二十烷基的各异构体。

R₄作为环烷基优选含有5或6环碳原子。作为环烷基的若干例子如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环戊基和环辛基。

R₄表示芳基则优选是萘基特别是苯基。当R₄为芳基烷基时，它优选是苄基或苯乙基。

对R₄而言一组优选的基团是H，C₁-C₄烷基，特别是甲基及苯基或苄基。

R₁以及R₅作为烷基优选是甲基或乙基，作为烷氧基优选是甲氧基或乙氧基，作为芳基优选是萘基或苯基，作为芳烷基优选是苄基或苯乙基，优选是R₁及R₅是为H、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基。

在本项发明范围内其一价功能基主要由下列基团中选取：-OR₁₀，-SR₁₀，-NCO，-NCS，-NHR₁₁，-C(O)OR₁₁，-C(O)SH，-C(O)NHR₁₁，－C(O)Cl，-C(S)SR₁₁，-C(S)NHR₁₁，-C(S)OR₁₁，-SO₃R₁₁，-SO₂NHR₁₁-SO₂Cl，-P(O)(OH)₂，-P(O)(OH)-NHR₁₁，-P(S)(SH)₂，-P(S)(SH)-NHR₁₁，-P(S)(OH)₂，-P(S)(OH)-NHR₁₁， -P(O)(SH)₂，-P(O)(SH)-NHR₁₁，-P(O)(OH)H，-P(O)(NHR₁₁)H，-P(S)(SH)H，-P(S)(NHR₁₁)H，-P(S)(OH)H，-P(O)(SH)H，其中R₁₀为H，-C(O)NH₂，-C(S)NH₂，-C₁-C₆-烷基，-C_xH_2x-NH₂，-C_xH_2x-SH或-(C_xH_2xO)_y-H和R₁₁为H，-C₁-C₆-烷基，-C_xH_2x-NH₂，-C_xH_2x-SH或-(C_xH_2xO)_y-H，x等于一个2到6的数字，y等于一个1到20的数。尤其优选的功能基选自这些：-OR₁₀，-SR1₀，-NCO，-NCS，-NHR₁₁，-C(O)OR₁₁和-P(O)(OH)₂，特别是选自-NCS，-C(O)O_R11和-P(O)(OH)₂这些基团。

通式I的化合物可优选自：其中R₂和R₇表示H，R₃和R₆代表C₁-C₄烷基，R₄是H，C₁-C₄烷基、苯基或苄基，R₁是一个通过C₁-C₃亚烷基、C₃-亚炔基、亚苯基或C₇-亚芳烷基，特别是C₂-C₃亚烷基或亚苯连接的一价功能基，R₅是H、甲基或甲氧基，或者R₅是一个经C₁-C₃亚烷基、C₃-亚炔基、亚苯基或C₇-亚芳烷基，尤其是C₂-C₃亚烷基或亚苯基连接的一价功能基，以及R₁是H、甲基或甲氧基。

在本发明范围内镧系金属是全部的镧系，即认为是镧(La)，铈(Ce)，镨(Pr)，钕(Nd)，钷(Pm)，钐(Sm)，铕(Eu)、钆(Gd)、铽(Tb)，镝(Dy)，钬(Ho)、铒(Er)，铥(Tm)，镱(Yb)和镥(Lu)，优选是镧、铈、钕、铕和钆，特别是镧和铕，尤其是优选铕。

络合盐的适当阴离子可由下列一类中选出：卤素离子(如Cl^-，Br^-和I^-)，含氧酸的阴离子，BF₄ ^-，PF₆ ^-，SiF₆ ^-和AsF₆ ^-。

含氧酸的阴离子可举出的例子如硫酸根、磷酸根、高氯酸根、高溴酸根、高碘酸根、锑酸根、硝酸根、碳酸根、C₁-C₈羧酸的阴离子例如甲酸根、乙酸根、丙酸根、丁酸根、苯甲酸根、苯乙酸根、一取代、二取代或三取代氯或氟乙酸根，磺酸根类如甲磺酸根、乙磺酸根、丙磺酸根、丁磺酸根、三氟甲磺酸根(Triflat)，必要时带C₁-C₄烷氧基、C₁-C₄烷氧基或卤素取代基，特别是氟、氯或溴取代基的苯磺酸或苄基磺酸，例如甲苯磺酸、甲磺酸、对溴苯磺酸、对甲氧或对乙氧基苯磺酸、五氟苯磺酸或2，4，6-三异丙基苯磺酸，和膦酸例如甲基膦酸、乙基膦酸、丙基膦酸、丁基膦酸、苯基膦酸、对甲基苯基膦酸和苄基膦酸根。适当的阴离子还有酒石酸根、柠檬酸根和乳酸根。在本发明的范围优选的阴离子是F^-，Cl^-，Br^-，I^-，PF₆ ^-，SbF₆ ^-，BF₄ ^-，B(Ph)₄ ^-，醋酸根，NO₃ ^-，硫酸根和磷酸根，特别优选的阴离子是Cl^-，醋酸根和NO₃ ^-。

上述的那些优选和注释，特别是那些取代基，适于所述的通式I化合物也适于下述通式V的化合物。

本项发明的另一方面是通式V的化合物。

其中

R₂和R₇彼此独立地表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基或卤素，

R₃和R₆彼此独立地表示H，C₁-C₄烷基，C₇-C₁₂芳基烷基或C₆-C₁₆芳基，

R₄是H，C₁-C₂₀烷基，C₅-C₈环烷基，C₆-C₁₂芳基或C₇-C₁₂芳基烷基，

这里的烷基、环烷基、芳基烷基和芳基或不被取代或以C₁-C₄烷氧基、F、Cl、Br、-CN、C₁-C₄烷基或-NO₂取代；

Me表示一个镧系金属或钇，

Y表示一个酸的阴离子，

n是一个2或3的数，

m是一个1、2或3的数，

R₉表述为式VI的一个残基

-X_p-A-X′_q-A′_r-Oligo (VI)

R₈是H或一个取代基或者

R₉表示H或一个取代基和R₈为式VI的一个残基，

p、q和r彼此独立地为0或1，

X和X′相互独立地表示一个未被取代基团或者以C₁-C₄烷氧基、F，Cl，Br，-CN，C₁-C₄烷基或-NO₂取代的选自：C₁-C₂₀亚烷基，C₂-C₁₂亚烯基，C₂-C₁₂亚炔基，-(C_xH_2xO)_y-，其中x等于一个2到6的数，y是一个1到20的数，C₅-C₈亚环烷基，C₆-C₁₂亚芳基和C₇-C₁₂亚芳烷基的基团。

A和A′相互独立地代表-O-，-S，-S-S，-NR₁₂-CO-NR₁₂-，-NR₁₂-CS-NR₁₂-，-NR₁₂-，-NR₁₂-C(O)-O-，-C(O)O-，-C(O)S-，-C(O)NR₁₂-，-C(S)S-，-C(S)O-，-C(S)NR₁₂-，-SO₂NR₁₂-，-SO₂-，-P(O)(OH)O-，-P(S)(SH)S-，-P(S)(SH)O-，-P(S)(OH)O-，-P(O)(SH)S-，-P(O)(OH)S-，-P(O)(SH)O-，-P(O)(OH)-NR₁₂-，-P(S)(SH)-NR₁₂-，-P(S)(OH)-NR₁₂-，-P(O)(SH)-NR₁₂-，-HP(O)O-，-HP(S)S-，-HP(O)NR₁₂-或 HP(S)NR₁₂-，其中R₁₂表示H或C₁-C₆烷基，以及

Oligo表述为一个由天然的、修饰的或合成的脱氧核苷或肽核酸片段衍生而来的天然、修饰或合成的序列，它经过一个核酸碱基、一个核苷酸间的桥或一个糖基来连接，并且在其区域内部互补，特别是对于靶RNA是完全互补的。

因此q优选1。

作为取代基的R₈和R₉适用上述对R₅和R₁的已有规定及相应的优选。

在本发明的范围内靶RNA意味着必须存在一个RNA序列靶物。因此能存在多聚核糖核酸(RNA)，优选地涉及m-RNA(信使RNA)，pre-m-RNA(前体信使RNA)，t-RNA(转移RNA)，sn-RNA(小核RNA)，r-RNA(核糖体RNA)和病毒RNA。它也能存在由RNA和脱氧核糖核酸(DNA)的混合序列，例如嵌合的RNA-DNA(Okazaki片段)。RNA提供同样多的片段(Bausteine)，一个与寡核苷酸的复合物(双链)就得以构成。

在本发明范围内一个序列是被理解为在其区域内，例如序列的外部核苷酸片段可有多至5个，优选是3个，优选是1到2个不必与靶RNA互补。这样就有其优点，联接上三联吡啶-镧系金属配合物的序列的末端能够运动并从而起作用。

寡核苷酸可以部分地或完全由与靶RNA互补天然DNA片段，或者同样由互补于靶RNA的非天然的合成核苷酸来构成，在此部分意味着，在寡核苷酸序列中靶RNA天然DNA片段通过同样的互补非天然合成核苷酸替代。合成的片段包含着对天然片段在核酸碱基、呋喃糖环和/寡核苷酸的桥基团的修饰。合成的结构一般着眼于以增强双链结构的配合物的形成和/或寡核苷酸稳定性，来提高其抗核苷酶分解能力。修饰的核苷在‘反义技术’领域作为合成或修饰互补的寡核苷酸已有大量已知结果，这里不再赘述(例见于E.Uhlmann等，化学评论，1990年，90卷，4期，543-584页)。

作为修饰，可以考虑基团的改变，这些改变发生在核素碱基部分(如取代、取代基的删除)，在核苷酸桥联基团(如磷酸酯基团改变或为另一桥联基团替代)，在呋喃糖环(如在2′-羟基上取代，呋喃糖的O原子被替代，呋喃糖环被单或双碳环替代，呋喃糖环为开链结构所替代)。

在寡核苷酸序列中片段的选择和顺序依靶RNA必要的双螺旋结构选定，并且与三联吡啶-镧系金属配合物联结的种类和位置也影响到片段的选择和次序。

在寡核苷酸中片段和数目是按与靶RNA杂合的完成而确定。这种寡核苷酸可具有5到100个，优选是5到50个，更好地是8到30个，优选是10到25个片段。与靶RNA高级结构配对(核苷酸碱基配对)优选是排在寡核苷酸的中间序列部分，例如在后四个之间，或后三个，后两个或该序列的最后一个片段。例如一个有20个片段的寡核苷酸其配对的片段优选是在其4到7片段。

寡核苷酸优选是由嘌呤类和嘧啶型核苷构成，特别是2′-脱氧-2-氨基腺苷，2′-脱氧-5-甲基胞苷，2′-脱氧腺苷，2′-脱氧胞苷，2′-脱氧尿苷，2′-脱氧鸟苷和2′-胸苷。特别优选的是2′-脱氧腺苷(A)，2′-脱氧胞苷(C)，2′-脱氧鸟苷(G)和2′-胸苷(T)。修饰的结构单元按嘌呤型和嘧啶型天然核苷来进行，特别优选是腺苷，胞苷，鸟苷，2-氨基腺苷，5-甲基胞苷，胸苷和其脱氧衍生物。这些核苷也可采用2′-修饰的核糖核酸。

在本发明中一个很优选的实施方案是向一个靶RNA互补由天然的脱氧核苷来的寡核苷酸，特别是由2′-脱氧腺苷(A)，2′-脱氧胞苷(C)，2′-脱氧鸟苷(G)和2′-胸苷(T)或者由互补的非天然合成的片段所构成。在本发明范围内所有这些修饰的寡核苷酸，抗核苷酶的稳定性提高的核苷均是优选的。

寡核苷酸也可由肽核酸(PNA)的序列组成，这样三联吡啶-镧系金属配合物就优选是在核酸碱基上连接氨基或羧基端。对于DNA序列的构成，关于寡核苷酸的优先选择的同样适用。例证可见于‘科学杂志’254卷，14970-1500页。

三联吡啶-镧系金属配合物主要通过一个桥联基团连接到寡核苷酸序列中的3′-或5′-端基的N-或O-原子上，但也可连接到核酸碱基的C、N-或O-原子上或在序列末端中呋喃糖环的2′-位置，或连接于序列中核苷酸桥基的O-，S-或N-原子上。结合的方式有赖于三联吡啶-镧系配合物及其功能基团的种类。一个桥联基团可以是改造了的功能基，它能直接地或通过一化合物基团连接到三联吡啶-镧系金属配合物或寡核苷酸上。在寡核苷酸上结合的可以是离子键，优选是共价键。三联吡啶-镧系金属配合物也能连接到一个碳环核苷酸类似物的6′-碳原子上。

作为三联吡啶-镧系金属配合物和寡核苷酸之间的桥组成部分，X和X′有直接结合的形式X₀或X₀′，或以X₁或X₁′形式，这是些二价的具有1-22个碳原子的开链或环状碳氢基团，这些基团不断开或以-S-，-NR₁₂-，-C(O)O-或-C(O)NR₁₂-断开，或具有1-12个亚噁烷基单元的聚亚噁烷基，且在亚烷基中含2-3个碳原子。碳氢化合物基团可如一线性或分枝的C₁-C₂₀亚烷基，优选是C₁-C₁₈亚烷基，特别优选是C₁-C₁₂亚烷基，最优选是C₁-C₈亚烷基，还有C₃-C₈亚环烷基，优选的是C₅-或C₆-亚环烷基，C₁₂-亚芳基或C₇-C₁₂亚芳烷基。二价烃类基的一些例子是亚甲基，亚乙基，1，2-或1，3-亚丙基，1，2-，1，3-或1，4-亚丁基，1，2-，1，3-，1，4-或1，5-亚戊基，1，2-，1，3-，1，4-，1，5-或1，6-亚己基，1，2-，1，3-，1，4-，1，5-，1，6-或1，7-亚庚基，1，2-，1，3-，1，4-，1，5-，1，6-，1，7-或1，8-亚辛基，以及亚壬基，亚癸基、亚十一烷基，亚十二烷基、亚十三烷基，亚十四烷基，亚十五烷基，亚十六烷基，亚十七烷基，亚十八烷基，亚十九烷基，亚二十烷基，亚环戊基、亚环己基，亚环萘基和尤其是亚苯基，亚苄基和亚苯乙基的异构体。亚聚噁烷基的一些例子是亚乙氧基，双亚乙氧基，三亚乙氧基，四亚乙氧基和1，2-丙氧基。尤为优选的是桥联基团，在其中X为C₁-C₃亚烷基，C₃-亚炔基、亚苯基或C₇-亚芳基，特别优选是C₂-C₃亚烷基或亚苯基。

还有一些优选的桥联基团，其中X′为C₁-C₂₀亚烷基，特别优选是C₁-C₁₀亚烷基。

二价的基团A可以是-NR₁₂-CS-NR₁₂-或-C(O)NR₁₂，特别优选是-NH-CS-NH-或-C(O)NH-。

通式V的优选化合物是这样一些，其中A′不是现有的基团或是-P(O)(OH)O-。

通式V的优选化合物是这样一些，其中R₂和R₇相互独立地表示H或C₁-C₄烷基。

R₃和R₆各自独立地表示H或C₁-C₄烷基是有利的。

在另一些优选的实施方式中R₄表示H或C₁-C₂₀烷基。

关于适当的镧系金属及阴离子的优化是选内容是已经列举过的，这也适用于通式V的化合物。

本发明的另一方面是为通式I化合物合成的中间产物。这就是通式II的化合物。

其中

R₁表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳烷基或C₆-C₁₆芳基，或一个一价功能基，这个功能基直接或经过一个基团Z连接到吡啶环上，基团Z必要时可由-O-，-S-，-NR₁₂-，-C(O)-或-C(O)NR₁₂-断开，可选自C₁-C₂₀亚烷基，C₂-C₁₂亚烯基，C₂-C₁₂亚炔基，C₅-C₈亚环烷基，C₆-C₁₂亚芳基和C₇-C₁₂亚芳烷基，

R₂和R₇各自独立地表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳烷基，C₆-C₁₆芳基或卤素，和

R₃和R₆分别独立地是H，C₁-C₄烷基，C₇-C₁₂芳烷基或C₆-C₁₆芳基，

R₁₂是H或C₁-C₆烷基，

这里残基是烷基，环烷基，芳烷基，芳基，基团Z不被取代或以C₁-C₄烷氧基，F，Cl，Br，-CN，C₁-C₄烷基或-NO₂取代。

制备通式I化合物过程中的另一中间产物，及本发明的另一目的是通式III的化合物。

其中

R₅表示一个经过C₂-C₂₀亚烷基连接在吡啶环上的一价功能基，这里的功能基选自-C(O)-OR₁₂，-C(O)-NHR₁₂，-SO₂-R₁₂和-SO₂NHR₁₂，R₁₂是H或C₁-C₆烷基，

和

R₄为H或C₁-C₂₀烷基。

对这些中间产物，那些对最终产物所作描述的优选方案也相应地适用。

本发明的又一目的是制造通式I化合物的方法，其中通式II的三联吡啶

与通式III的吡啶二醛或吡啶二酮

在式IV的一种盐类存在下缩合

Meⁿ⁺(Y^m-)_n/m (IV)其中R₁，R₂，R₃，R₄，R₅，R₆，R₇，Me，Y，n和m在此前已描述其定义，特别是对于通式I化合物的定义，优选和注释。

作为实例的方法实施，是将通式II、III和IV的化合物以优选的当量数溶于一种溶剂，然在升高的温度一同转化。同时使用缩合催化剂，例如浓无机酸，特别是盐酸或酸性离子交换树脂。加入吸水剂或从反应混合物中移去反应水可能是符合目的的。

反应温度可在例如40到220℃，优选在50到150℃。

使用有机极性质子惰性溶剂为溶剂是有益的。适当的溶剂如水和极性质子惰性溶剂，可与水混溶的为佳。这样一些溶剂的例子有醇类(甲醇、乙醇、n-或i-丙醇，丁醇，1，2-亚乙基二醇，丙二醇，乙二醇单甲醚，二乙二醇，二乙二醇单甲醚)，醚类(乙醚，二丁醚，四氢呋喃，二噁烷，乙二醇二甲醚，乙二醇二乙醚，二乙二醇二乙醚，三乙二醇二甲醚)，卤代烃(二氯甲烷，氯仿，1，2-二氯乙烷，1，1，1-三氯乙烷，1，1，2，2-四氯乙烷，氯苯)，羧酸酯及内酯类(乙酸乙酯，丙酸甲酯，苯甲酸乙酯，2-甲氧基乙酸乙酯，γ-丁内酯，δ-戊内酯，新戊内酯)，N-烷基化羧酰胺和内酰胺(N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基甲酰胺，N，N-二甲基乙酰胺，四甲基脲，六甲基磷酸三酯，N-甲基-γ-丁内酰胺，N-甲基-ε-己内酰胺，N-甲基吡咯烷酮)，亚砜类(二甲亚砜，四亚甲亚砜)，砜类(二甲基砜，二乙基砜，三亚甲砜，四亚甲砜)，季胺(三甲胺，三乙胺，N-甲基哌啶，N-甲基吗啉，吡啶)，取代苯类(氯苯，O-二氯苯，1，2，4-三氯苯，硝基苯，甲苯，二甲苯)和腈类(乙腈，丙腈，苯腈，苯乙腈)。

通式IV的金属盐类是一般所知的并且大部分可购得。

通式II所包含化合物的新功能基制备可类似地依E.C.Constable在‘多面体’杂志1988年7卷24期2531-2536页所述方法实现，这些功能基在必要时可带保护基。

带有或没有功能基的式II和式III化合物一般都是已知的或者能按照已知或类似的方法制备。通式III的化合物中，R₄为H，R₅表示C₂-C₁₈亚烷基-X₅，而X₅表示-C(O)-OR，-C(O)-NHR，-SO₂-R或-SO₂-NHR，以及R是H或C₁-C₆烷基，这些都是新的化合物并可由下述方法得到：在钯催化下将一个相应的3-卤代吡啶-1，5-二羧酸酯以一个通式为CH₂＝CH-C₁-C₁₅-亚烷基羧酸酯的烯使之烯化，催化氢化烯基，还原成相应的1，5-二羟基甲基吡啶烷基羧酸酯，氧化羟基甲基成为醛基并且在必要时水解酯基成为羧酸基或将酯基酰胺化成羧酸酰胺。

通式III的化合物，其中R₄表示C₁-C₁₂烷基，R₅为C₂-C₁₈亚烷基-X₅，X₅表示-C(O)-OR，-C(O)-NHR，-SO₂-R或者-SO₂-NHR，R是H或C₁-C₆烷基，这些化合物是新的并可由下述方法得到：在钯催化下将一相应的化合物如乙酰保护的3-卤代-1，5-二羟基甲基吡啶(得自相应的3，5-二羧酸甲酯还原)以一个式为CH₂＝CH-C₁-C₆亚烷基羧酸酯的烯使之烯基化，氢化烯基例如催化氢化，羟基脱保护并在必要时氧化成相应的3，5-吡啶醛，这些醛基能以例如格氏试剂作C₁-C₁₂烷基化，在必要时再将酯水解成为羧酸或将酯基酰胺化成为酰胺，并将仲醇基氧化成为酮基。

本发明的另一个方面是式V化合物的制备方法，其中一个式I的化合物

a)与式VIa的化合物反应

A″-X′-A′_0或1-Oligo (VIa)

其中

A″是一个选自下述基团中的适当一价功能基：-OR₁₀，-SR₁₀，-NCO，-NCS，-NHR₁₁，-C(O)OR₁₁，-C(O)SH，-C(O)NHR₁₁，-C(O)Cl，-C(S)SR₁₁，-C(S)NHR₁₁，-C(S)OR₁₁，-SO₃R₁₁，-SO₂NHR₁₁，-SO₂Cl，-P(O)(OH)₂，-P(O)(OH)-NHR₁₁，-P(S)(SH)₂，-P(S)(SH)-NHR₁₁，-P(S)(OH)₂，-P(S)(OH)-NHR₁₁，-P(O)(SH)₂，-P(O)(SH)-NHR₁₁，-P(O)(OH)H，-P(O)(NHR₁₁)H，-P(S)(SH)H，-P(S)(NHR₁₁)H，-P(S)(OH)H，-P(O)(SH)H，其中R₁₀是H，-C(O)NH₂，-C(S)NH₂，-C₁-C₆-烷基，-C_xH_2x-NH₂，-C_xH_2x-SH或-(C_xH_2xO)_y-H，R₁₁表示H，-C₁-C₆-烷基，-C_xH_2x-NH₂，-C_xH_2x-SH或-(C_xH_2xO)_y-H，x是一个2到6的数，y是一个1到20的数，

X′是一个不被取代或以C₁-C₄烷氧基，F，Cl，Br，-CN，C₁-C₄烷基或-NO₂取代的下述基团：C₁-C₂₀亚烷基，C₂-C₁₂亚烯基，C₂-C₁₂亚炔基，-(C_xH_2xO)_y-，其中x是2到6的数，y是1到20的数，C₅-C₈亚环烷基，C₆-C₁₂亚芳基，C₇-C₁₂亚芳烷基，

A′表示-O-，-S-，-S-S-，-NR₁₂-CO-NR₁₂-，-NR₁₂-CS-NR₁₂-，-NR₁₂-，-NR₁₂-C(O)-O-，-C(O)O-，-C(O)S-，-C(O)NR₁₂-，-C(S)S-，-C(S)O-，-C(S)NR₁₂-，-SO₂NR₁₂-，-SO₂-，-P(O)(OH)O-，-P(S)(SH)S-，-P(S)(SH)O-，-P(S)(OH)O-，-P(O)(SH)S-，-P(O)(OH)S-，-P(O)(SH)O-，-P(O)(OH)-NR₁₂-，-P(S)(SH)-NR₁₂-，-P(S)(OH)-NR₁₂-，-P(O)(SH)-NR₁₂-，-HP(O)O-，-HP(S)S-，-HP(O)NR₁₂-或-HP(S)NR₁₂-，其中R₁₂为H或C₁-C₆烷基，和

Oligo可描述为一个由天然的、修饰的或合成的脱氧核苷或肽核酸片段而来的天然、修饰或合成的序列，它们通过一个核碱基、一个核苷酸内的桥或一个糖基相连接并且其内部区域与靶RNA互补，或者

(b)与一个式VIb的化合物反应

A″-Oligo (VIb)

其中

A″和Oligo的意义已如(a)项中所述。

本发明的制造寡核苷酸结合物方法可以如下进行，将一种在必要时功能化的寡核苷酸溶解在一种溶剂或混合溶剂中，然后加入带适当功能基的三联吡啶-镧系金属配合物，必要时在搅拌下进行反应。所得的结合产物再以很熟知的方法提纯并在必要时进行分离。

反应温度可在0°到120℃之间，优选是20到80℃，优选使反应在室温进行。

酯化、酯交换(Umesterungs)或酰胺化是互相联系的，有关的羧酸基可用熟知的方式活化，例如经由与碳化二亚胺和N-羟基丁二酰亚胺反应。

反应物按克分子关系加入是合乎目的的，但可使用过量的催化剂或寡核苷酸。

为了纯化可用些通常的方法，例如渗析，电泳和色谱法，像高效液相色谱(HPLC)，反相HPLC，亲合色谱，离子交换色谱和凝胶色谱都是有利的。

所使用的功能化寡核苷酸能以已知方法用自动合成仪制造，这些都可购得。用于此合成的核苷是已知的，部分可买到或按类似方法制造。

本发明的三联吡啶-寡核苷酸结合物特别适于RNA序列的序列专一性裂解，只须微不足道量的加进去就有催化作用。

本项发明的另一目的是在生理条件下和在一种合成的三联吡啶-镧系金属配合物影响下裂解核糖核酸的磷酸核苷酸桥的方法，其特征在于，a)靶RNA与一个寡核苷酸复合，其内部序列与靶RNA互补，再在它上面结合一个三联吡啶-镧系金属配合物；b)然后再起反应并裂解。

本发明的方法能经体内施用寡核苷酸或在体外配合靶RNA和本发明相关的，所使用的寡核苷酸来实行。

方法的施行可在专家们熟悉的生理条件下进行，如在水性介质中pH5到9范围内，优选是pH5到8优选是pH5到范围内，该水介质亦可含惰性组分，例如碱金属或碱土金属的盐，以及在一个缓冲体系中。

此方法可在0°到100℃的温度下施行，优选是在20°到50℃，优选是在30°到40℃。

以本发明的方法实现了以形成带有2′，3′-环磷酸酯基和5′-羟基端基片段，将磷酸酯桥连化合物经酯交换反应裂解。这种环磷酸酯可以接着进行进一步水解。

本发明的三联吡啶-寡核苷酸结合物被发现可作为药物使用。它对于核苷酶降解具有很高的稳定性。特别意外的是它们与RNA-Typ的互补核苷酸链的极好的配对。此外还表现出意外的高度细胞吸收性。这种发明的寡核苷酸特别适用于反义技术，这就是说通过结合到mRNA上一个适当的互补核苷酸序列以阻止不希望的蛋白产物表达(EP266099，WO 87/07300和WO 89/08146)。它们能通过在核酸水平上阻断生物活性蛋白的表达来治疗感染或疾病。

本发明的另一目的也是关于所发明的寡核苷酸在治疗方法中的应用，这是通过在体内失活核苷酸序列而治疗温血动物包括人类疾病的治疗方法。体重约70kg的温血动物每日用药量为0.01到1000mg。给药尤以胃肠外制剂形式给药，例如静脉内或腹膜内给药。为了胃肠外给药首先一种水溶性生物活性物质的水溶液是适用的，例如一种水溶性生理上无须多虑的盐，或这一生物活性物质的水性悬浮液，其中含有增粘度物质如羧甲基纤维钠、山梨醇和/或葡聚糖和特别的稳定剂，这样生物活性物质必要时与助剂一起以一种冻干形式存在，给药前补加适当溶剂配成溶液使用。本发明的结合物也能以一种吸入或以一种脂质体形式的给药方式应用。

本发明的结合物也能作诊断目的之用，或作为序列特异性内核糖核酸酶的分子生物学助剂。

本发明的又一目的是关于一种含水组合物尤其是基于一种含水溶液或悬浮液的药物制剂，其中仅含有效量的式V化合物或与另一种生物活性一起，水作为药物赋形剂，优选以大量存在，必要时，含有助剂。

药理学有效的化合物可以胃肠外给药的制剂或输注溶液(Infusionsloungen)的形式应用。这样的溶液主要是等渗水溶液或悬浮液，例如用亲水性制剂，其中只含有有效物质或同时含一种载体物质如甘露糖制备而应用。药物制剂可以被灭菌，并/或含有助剂，例如防腐剂、稳定剂、浸润剂和/或乳化剂、溶解促进剂，盐类以调节渗透压和/或作缓冲剂。这种药物制剂，根据需要还可含有其它的治疗上有效的物质如抗生素类，用已知熟知的方法来制造，例如用方便的溶解法或亲水化处理方法，其中所含有的活性物质约0.1到90％，优选是0.5到30％，如1％到5％之间。

图中是由一个反义寡核苷酸和一个底物RNA分子得到的杂种分子结构实例。

图1所示为一个由底物RNA(标有5′的线)和一个反义寡核苷酸(标有3′的线)结合到发明的配合物(以Ln表示)所成的杂种分子(所谓结合物)。底物RNA的核苷酸片段所给的编号如此定义，编号如此进行：底物RNA的核苷酸互补于反义寡核苷酸的核苷酸，在其结合于配合物之处，编号为“0”。然后其它的编号为：凡在底物RNA 3′-方向的依次升高为+1，+2等，在5′方向则为-1，-2等。

图2表示一个由具体的底物RNA(CG-1352，见实例)和一个本发明的反义寡核苷酸结合物(以3′注明)杂种分子的表示线。底物RNA的粗体印刷核苷酸(此处为G)互补于反义寡核苷酸结合物的核苷酸，配合物在此处结合。

下述实施例用以说明本发明。

A.制备三吡啶-镧系金属配合物的初始化合物

实施例A1：三联吡啶双肼类化合物制备

a)向6-乙酰基-2-溴吡啶(100mMol)在200ml甲醇中的溶液冰浴冷却下加入40ml 2N氢氧化钾水溶液。再加入相应取代的苯甲醛(400mMol)后移去冰浴，反应混合物在室温下继续4小时。产物被过滤，水洗3次并用冷甲醇洗两次，于高真空下干燥。

按这种方法制得的化合物：a.1(R₁，苯基-4-OCH₃。MS 317.7)，a.2(R₁，苯基-4-NO₂，MS 333.6)，a.3(R₁，苯基-3-NO₂，MS 334)，a.4(R₁，苯基-2-NO₂，MS 334)和a.5(R₁：苯基)。

(b)由(a)所得的α，β-不饱和羰基化合物(30mMol)，1-(2-溴代吡啶羰基甲基)吡啶碘化物(12.1.克，30mMol)和醋酸铵(13.9克，180mMol)置烧瓶中并加100ml醋酸。该混合物被加热回流，2小时后冷却室温，过滤所得产物于高真空下烘干。

按此方法制得的化合物.b.1(R₁，苯基-4-OCH₃，MS497.1)，b.2(R₁，苯基-4-NO₂，MS512)，b.3(R₁，苯基-3-NO₂，MS513)，b.4(R₁，苯基-2-NO₂，MS512)和b.5(R₁，苯基)。

向四氯化钛(30mMol)在75ml无水四氢呋喃溶液于室温并在氩气氛下分次加入氢化铝锂(22mMol)。该悬浮液于室温搅拌20分钟，接着冷却到0℃。加入化合物b.2(10mMol)，此悬浮液于室温搅拌30分钟。于0℃小心滴加50ml水后再加入25ml25％氨水溶液。该混合物中加150ml氯仿经硅藻土过滤。分离出水相并用氯仿提取三次。将有机相合并，水洗一次后在硫酸钠上干燥并浓缩。按这个程序制备化合物b.6(R₁，苯基-4-NH₂，MS 482.5)，同类化合物b.7(R₁：苯基-3-NH₂，MS482)和b.8(R₁，苯基-2-NO₂，MS 482)也被制得。

(c)由(b)所得的相应二溴代三联吡啶化合物(10mMol)溶于30ml甲肼中，加热回流17小时。冷却到室温后浓缩，残渣溶于20ml甲醇。产物被过滤并于高真空下烘干。

按这个方法制得化合物c.1(R₁，苯基-4-OCH₃，M要427)，c.2(R₁，苯基-4-NH₂，MS 412.5)，c.3(R₁，苯基-3-NH₂，MS 412)，c.4(R₁，苯基-2-NH₂，MS 412)和c.5(R₁，苯基)。

化合物c.1(10mMol)悬浮于100ml氯仿中，用冰浴冷却20分钟再加入1当量浓度的三溴化硼在二氯甲烷中的溶液(50ml)。此悬浮液被加热回流5天，冷却到室温后倒入300ml冰水中，以200ml 2N盐酸水溶液酸化。乙醚提取(两次)后水相用10％硫酸钠水溶液调pH9.0并且搅拌30分钟。沉淀的化合物c.6(R₁，苯基-4-OH，MS 413.5)被过滤并在高真空下烘干。

实施例A2：3-[4′-(2′，6′-二甲酰基吡啶)]丙酸制备

(a)3.5克4-溴吡啶-2，6-羧酸二甲酯，390毫克三甲苯基膦，9.3ml丙烯酸特丁酯，7.1ml三乙胺，30ml二甲基甲酰胺和287mg醋酸钯混合并加热到110℃。90分钟后反应混合物被冷却到室温，用乙醚/二氯甲烷(1∶1)稀释并用NH₄Cl/H₂O震摇提取。有机相用Na₂SO₄干燥，旋转蒸发仪上浓缩并在高真空下烘干。

C H N

计算值：59.81 5.96 4.36

测定值：59.8 6.0 4.1

250mg钯活性碳(5％)和2.5克上述化合物溶在250ml甲醇中于室温下氢气氛中氢化过夜。产物用Hyflo过滤，滤液在旋转蒸发器上浓缩并在室温下高真空烘干。

C H N

计算值：5943 6.55 4.33

测定值：59.3 6.6 4.3

5.0克上述化合物溶于50ml甲醇和50ml四氢呋喃中，冷却到0℃后加入1.1克NaBH₄。50分钟后再加1.1克NaBH₄，并在130分钟后加0.5克NaBH₄。温热到室温共165分钟后再冷却到0℃。3.5小时后再次加入1.1克NaBH₄。6小时后浓缩到60ml体积。然后滴加饱和氯化铵溶液，用二氯甲烷提取4次，有机相用氯化铵溶液洗一次，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩。

C H N

计算值：62.90 7.92 5.24

测定值：63.0 7.9 5.2

19.8克上述化合物溶于330ml二噁烷，然后加入16.2克二氧化硒。反应混合物被加热到100℃并搅拌，45分钟后冷却到室温。再搅拌两小时反应混合物被过滤并在旋转蒸发器上浓缩。

C H N

计算值：63.87 6.51 5.32

测定值：64.1 4 6.53 5.43

4.7克上述化合物加入17.2ml冰冷却的三氟乙酸，转化成酸后该混合物于0℃浓缩。

C H N

计算值：57.97 4.38 6.76

测定值：57.55 4.21 6.61

(b)5克4-溴吡啶-2，6-二羧酸二甲酯于室温溶于175ml氢呋喃，然后加入75ml甲醇。冷却到0℃，于45分钟内分次加入3.44克硼氢化钠并温热至室温。1小时后在10分钟内滴入30ml丙酮。加热反应混合物使回流1小时，然后将反应混合物以旋转蒸发器浓缩至干，残渣于室温下混入50ml吡啶。然后加入0.1克4-二甲胺基吡啶，冷却至0℃。于30分钟内滴加34.4ml醋酸酐，将此悬浮液温热至室温，再加入50ml四氢呋喃。在室温下搅拌过夜后反应混合物被过滤并以约50ml四氢呋喃洗涤两次，滤液在旋转蒸发器上浓缩，产物经重结晶得4-溴-2，6-二(乙酰氧甲基)吡啶(熔点：66-69℃)。

0.982克4-溴-2，6-二(乙酰氧甲基)吡啶，1.5克3-(三丁基锡基)丙烯酸乙酯和176毫克四(三苯基膦)钯溶于25ml二噁烷并加热到90℃。90分钟后反应混合物被冷却，分离固体产物并从正己烷/乙酸乙酯中重结晶。

MS 321(M⁺)

2.74克上述得到的化合物和70毫克Wilkinson催化剂溶于150ml苯中，加入12.2ml三乙基硅烷，此溶液被加热回流，再于1小时内分次加入270mg催化剂三乙基硅烷。产物经色谱法纯化。

MS 323。

267mg钠溶于50ml己醇中，7.2ml此溶液加于1.845克上述所得化合物于35ml乙醇的溶液中。于室温下搅拌2.5小时后此反应混合物经过硅胶过滤，滤液浓缩至干，产物在高真空下干燥过夜。NMR(CDCl₃)δ7.0(2H，s)，4.7(4H，s)，4.1(2H，q)，2.9(2H，t)，1.2(3H，t)。

1.27克上述产物溶于30ml二噁烷，向其中加入714mg二氧化硒。反应混合物被加热并在2小时后经棉花过滤，滤液浓缩至干。残渣溶于乙酸乙酯/二氯甲烷(5％)再经硅胶过滤。¹H-NMR(CDCl₃)δ10.1(2H，s)，8.0(2H，s)，4.1(2H，q)，3.1(2H，t)，2.7(2H，t)，1.2(3H，t)。

向45ml乙醚和350mg上述产物的溶液于0℃加13ml一制备好的溶液(0.949克溴化铜，二甲亚砜在10ml乙醚中；冷却到0℃后加入5.9ml甲基锂)。室温搅拌5.5小时后冷却到0℃，加入2ml冰醋酸在8ml乙醚中的溶液。于室温搅拌过夜后加入的60ml水，用二氯甲烷萃取四次。有机相用硫酸钠干燥，过滤，滤液在旋转蒸发器上浓缩，产物经色谱纯化。MS 266(M+H)⁺。

向4.5ml二氯甲烷和草酰氯的溶液于-78℃加入0.5ml DMSO(二甲亚砜)。15分钟后此溶液加于193mg上述产物于4ml二氯甲烷的溶液中。于-78℃两小时后再加1.5ml三乙胺。于0℃搅拌30分钟后加入15ml水，用乙醚提取四次。有机相以Na₂SO₄干燥，并在旋转蒸发器上浓缩，经色谱纯化。

C H N

计算值：63.87 6.51 5.32

测定值：63.96 6.55 5.45

0.464克上述产物和5ml 4N HCl-起被加热到50℃。90分钟后反应被冷却到室温并用冰水稀释，得晶体产物。

C H N

计算值：61.27 5.57 5.95

测定值：61.2 5.5 6.2

实施例A3.其它三联吡啶-双肼化合物和2，6-二羰基吡啶类化合物的制备

1. 2，6-二羰基化合物(f)的制备

(a)化合物(d)的制备

0.3克(1.4mMol)2，6-双(羟甲基)4-溴吡啶，0.25克(2.8mMol)N-甲基氨基乙酸和0.11克(2.8mMol)NaOH加于15ml甲醇和15ml水的溶液部，用氮气加压到250巴，再于100℃加热到无固形的2，6-双(羟甲基)-4-溴吡啶时止。两天后反应结束。棕色的反应物被浓缩，产物被色谱纯化(流动相，20-80％MeOH/CH₂Cl₂)，得一种黄色油状物。

¹H-NMR(MeOH)δ6.6(2H，s)，4.5(4H，s)，3.8(2H，s)，3.1(2H，s)，3.0(2H，s)。

(b)化合物(e)的制备

将5.4g上述的产物(d)悬浮于450ml甲醇中并加热至沸，向其中加入6ml浓硫酸，这样得一清亮溶液。此溶液加热回流3小时后冷却，向溶液中加5克碳酸钾并搅拌10分钟。固体物被过滤，滤液在旋转蒸发器上浓缩。粗产物在硅胶柱上纯化(硅胶44克，流动相1/9/50，乙酸/甲醇/二氯甲烷)，得黄色晶体。

¹H-NMR(MeOD)δ6.8(2H，s)，4.6(4H，s)，3.7(2H，s)，3.7(3H，s)，3.2(3H，s)。

(c)化合物(f)的制备

上述产物(e)(0.557g，2.31mmol)在8ml吡啶/二恶烷(1∶1)中的溶液被加热至沸，向所得的黄色溶液中加入1.54g二氧化硒(13.7mmol)，并加热回流4小时(直至不再有离析物)。冷却到室温后用约100ml丙酮/二氯甲烷(1∶9)处理，经一个小硅胶柱过滤再用少量溶剂洗脱。得到的清亮黄色溶液在旋转蒸发器上浓缩，粗产物用柱色谱纯化(流动相：丙酮/二氯甲烷1∶40)，得白色固体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ10.1(2H，s)，7.3(2H，s)，4.2(2H，s)，3.8(3H，s)，3.2(3H，s)。

2. 2，6-二羰基吡啶类化合物(k)的制备

(a)化合物(g)的制备

580mg叔丁醇钾(5.17mmol)及20ml二甲亚砜置于氩气保护的100ml三口瓶中，1克4-羟基-2，6-吡啶二羧酸二甲酯(4.7mmol)分次加入(微入热反应)。10分钟后缓慢滴加1.04ml溴乙酸叔丁醇酯(7.05mmol)在2ml二甲亚砜中的溶液并继续搅拌3小时。然后加入冰水停止反应，反应物用乙醚提取3次，乙醚相用30ml水洗一次后用硫酸钠干燥。溶液在放置蒸发器上浓缩并在高真空烘干。得到白色微黄晶体，再于硅胶柱上(70g硅胶60F，Merck 9385，流动相：甲醇/二氯甲烷1∶100)纯化，得到白色晶体。

¹H-NMR(CDCl₃)δ7.8(2H，s)，4.7(2H，s)，4.0(6H，s)，1.5(9H，s)。(b)化合物(h)的制备

1.17克(3.6mmol)上述制得的化合物(g)溶于65ml二甲氧基乙烷并冷却至0℃。680mg NaBH₄分小份加入，于0℃搅拌15分钟后，反应物被热到室温。在室温下反应3小时后该反应物再冷至0℃。加入12ml丙酮并搅拌15分钟。反应物温热到室温过夜。滤液在旋转蒸发器上浓缩并随之于高真空下烘干。由第一个反应的粗产物溶于55ml吡啶并冷却至0℃，加入6.8ml(72mmol)醋酸酐和44mg(0.36mmol)二甲基胺基吡啶。此混合物被加热到室温，用水稀释后乙醚提取3次。有机相用Na₂SO₄干燥并在旋转蒸发器上浓缩，然后在高真空下烘干，残留一种棕色油状物。此产物用柱色谱纯化(100g硅胶，流动相：1％甲醇的CH₂Cl₂)，得纯化产物。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ6.8(2H，s)，5.2(4H，s)，4.6(2H，s)；

(c)化合物(i)的制备

170mg(0.46mmol)上述得到的化合物(h)溶于6.5ml甲醇并冷却到0℃。加入1.7ml 32％氨水，继续搅拌1.5小时。反应混合物在旋转蒸发器上浓缩并在高真空下烘干。得一种黄色胶状物，此物经柱色谱(20g硅胶60F，Merck编号9385，流动相：甲醇/二氯甲烷，1∶15)纯化，最终产物为白色固体。

¹H-NMR(CD₃OD)δ7.0(2H，s)，4.8(2H，s)，4.5(4H，s)，1.5(9H，s)；

(d)化合物(j)的制备

在25ml锥形瓶中于氩气保护下溶解260微升(μl)草酰氯(3.0mmol)在6ml二氯甲烷中，冷却到-78℃，接着加入370μl二甲亚砜(5.25mmol)。反应物于-78℃搅拌混合15分钟。再加入上述所得化合物(i)(200mg，0.75mmol)在2ml二氯甲烷/200μl二甲亚砜中的溶液加入(控制温度！)。然后继续在-78℃搅拌2小时，用1.04ml三乙胺(2.5mmol)在2ml二氯甲烷中的溶液萃灭反应。于0℃继续搅拌15分钟后，反应物在旋转蒸发器上浓缩并在高真空烘干。得棕色晶体，再经硅胶60F过滤(流动相：正己烷∶乙酸乙酯，2∶1)。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ10.1(2H，s)，7.6(2H，s)，4.7(2H，s)，1.5(9H，s)；

(e)化合物(k)的制备

65mg上述制得的化合物(j)在14ml 4N盐酸溶液中室温下搅拌1.5小时，此反应物在旋转蒸发器上浓缩至干并在高真空下干燥。得微黄色晶体粗产物。

¹H-NMR(CD₃OD)：δ 7.4(2H，s)，5.1(2H，s)；

3.三联吡啶-双肼基化合物(o)的制备

(a)化合物(m)的制备

11.49g(205mmol)KOH磨细，再与20g(164mmol)4-羟基苯甲醛和1.66g(4.09mmol)Aliguat 336(三辛基甲基氯化铵)一起用单锚式搅拌混合，在冰浴冷却下小心滴加l2.24ml(164mmol)3-溴丙醇。反应混合物被加热到100℃。暗棕色悬浮液在氩气保护下于100℃加热过夜。向反应混合物中加入250ml CH₂Cl₂继续搅拌。所得的悬浮液经Hyflo过滤、浓缩并在高真空下烘干。粗产物分两部分以快速柱色谱纯化(流动相：2％THF/CH₂Cl₂)，得最终产物。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ9.9(1H，s)，7.8(2H，d)，7.0(4H，d)，4.2(2H，t)，3.9(2H，m)，1.9(1H，s)。

(b)化合物(n)的制备

13g上述制得的化合物(m)(0.072mol)，28.86g 2-乙酰基-6-溴吡啶(0.144mol)，63.72g乙酰胺(1.08mol)和41.58g乙酸铵(0.54mol)置于一烧瓶中，并于180℃搅拌2小时。此棕色悬浮液冷却到120℃并滴加140克氢氧化钠在300ml水中的溶液。反应混合物再加热2小时。反应物结成暗棕色胶状物，然后倾去溶剂，再用水洗一次。黑色胶状物溶于尽可能少的醋酸中，在热溶液中加入等当量的溴化氢水溶液(48％水溶液)并放置过夜。吸滤出亮黄色晶体，用水溶解并用4当量氢氧化钾溶液调节pH值7-8。此黄色悬浮液用二氯甲烷萃取3次，有机相经棉花过滤，在旋转蒸发器上浓缩并于高真空下烘干。粗产物用乙醇重结晶，得黄色晶体。

MS 计算峰值：543m/z(M+H⁺)

测定峰值：542m/z(M+H⁺)

(c)化合物(o)的制备

6.38g上述得到的化合物(n)置于88ml甲基肼中，加热到85℃并搅拌2小时。冷却后加入150ml MeOH，产物沉淀出来。该悬浮液被过滤，所得晶体烘干。

¹H-NMR(DMSO)：δ8.5(2H，s)，7.8(4H，m)，7.7(2H，t)，7.2(2H，d)，7.1(2H，d)，4.6(2H，t)，4.1(2h，t)，3.5(2H，m)，3.3(2H，s)，1.9(2H，m)。

4.三联吡啶-双肼基化合物(q)的制备

(a)化合物(p)的制备

2.6g 9-醛基蒽(12.5mmol)，5g 2-乙酰基-6-溴吡啶(25mmol)，11.2g乙酰胺(187.5mmol)和7.1g醋酸铵(93.7mmol)置于一烧瓶中，所得棕色液体被加热回流2小时(浴温180℃)，然后冷却到110℃，滴加33g氢氧化钠溶于71ml水中的溶液。反应物再回流2小时，再冷却到90℃。所得溶液被倾析，固体物用水洗两次。此黑色物质溶解在25ml醋酸中。加入1.75ml 48％溴化氢水溶液并放置5天。此悬浮物被过滤，所得绿色沉淀用乙醚洗涤。该晶体悬浮于水中，用2当量氢氧化钾溶液调节pH值到8。用二氯甲烷提取，有机相用硫酸钠干燥后，在旋转蒸发器上浓缩并在高真空下干燥，得绿色物质。此物用约400ml乙醇重结晶。所得晶体溶解于乙醇/二氯甲烷混合溶剂中，以饱和碳酸铵溶液提取两次。有机相再在硫酸钠上干燥，复原并在高真空干燥。粗产物在一柱上纯化(流动相：乙酸乙酯/正己烷，1∶9)，得绿棕色晶体。

MS 计算峰值：568m/z(M+H⁺)

测定峰值：569m/z(M+H⁺)

(b)化合物(q)的制备

1.43g(2.5mmol)如上所得的化合物(p)加到50ml甲基肼中并加热回流过夜，得一暗棕色溶液，反应物在旋转蒸发器上浓缩。产物悬浮于热甲醇中然后过滤，得400mg绿色晶体。由CH₃CN中重结晶，先是清亮滤液，冷却后过滤。在高真空下干燥后得绿色晶体。这些晶体由CH₃CN再重结晶一次以得纯化，仍得一绿色结晶物。母液也同样被浓缩，可得1g棕色晶体。由CH₃CN同样经重结晶再高真空干燥后，得一淡棕色晶体。

元素分析：

计算值：74.83％C 5.47％H 19.70％N

测定值：74.76％C 5.55％H 19.42％N

5.2，6-二羰基化合物(r)的制备

118μl(1.38mmol)草酰氯在氩气保护下加入2ml CH₂Cl₂中并冷却到-78℃，然后小心滴加195μl(2.75mmol)DMSO。此反应物于-78℃搅拌15分钟。另将100mg(0.458mmol)2，6-二(羟甲基)-4-吡啶溶于100μl DMSO中并以1ml CH₂Cl₂稀释。将此溶液加到上述反应物中，并在-78℃搅拌1小时。再加381μl(2.75mmol)Et₃N后在0℃搅拌15分钟。浓缩后残渣溶于H₂O和CH₂Cl₂。两相分离，水相用CH₂Cl₂洗两次。有机相经棉花过滤。浓缩后在高真空下干燥，得淡棕色晶体。

¹H-NMR(CDCl₃)：δ10.1(2H，s)，8.7(2H，s)；

6.三联吡啶-双肼基化合物(s)的制备

72mg实施例A1(b)中所得化合物b.5(0.16mmol)加到480mg丁基肼(5.44mmol)中，并在氩气保护下加热到110℃。此悬浮物继续加热过夜。然后反应混合物被冷却，用乙醚和甲醇稀释，滤去固体物。滤液在旋转蒸发仪上浓缩，再加入甲醇使沉淀溶解。由冷却的溶液中滤出结晶并用少量甲醇清洗。产物在低真空干燥，得本色晶体。

MS 计算峰值：482m/z(M+H⁺)

测定峰值：481m/z(M+H⁺)

B.三联吡啶-镧系金属配合物的制备

实施例B1：

1.)1mMol由实施例A1(c)所述三联吡啶-双-肼基化合物在氩气保护下溶于60ml绝对甲醇中，加入镧系金属(III)醋酸盐(1mMol)，并加热回流10分钟。向此溶液依次加入1.2mMol前述2，6-二羰基化合物和5mMol浓盐酸水溶液，煮沸两天。冷却到室温后过滤产物并在高真空下干燥。

按此程序可制备表1中化合物1.1到1.28。

2.)由实施例A1(c)所述的三联吡啶-双肼基化合物1mMol在氩气保护下溶于60ml无水甲醇中，加入镧系金属(III)氯化物(1mMol)并加热回流10分钟。向此溶液依次加1.2mMol实施例A2(a)中得到的化合物，再煮沸过夜。冷却到室温后除去溶剂，产物由二甲亚砜和甲苯中重结晶。

按此程序制备表1中的化合物1.29到1.32及同类物1.33到1.44。

3.)带取代基R₅的三联吡啶-镧系金属配合物的制备

(a)化合物1.45的制备

168mg实施例A1(c)所得产物c.5(0.423mmol)溶在20ml干燥甲醇中并加热至沸。然后向其中加入155mg三氯化铕六水合物(0.423mmol)，此黄色悬浮物继续搅拌15分钟。再加入100mg实施例Al(c)所得产物(f)(0.423mmol)在15ml干燥甲醇中的溶液后，此悬浮液在氩气保护下加热回流过夜。将反应混合物冷却至室温后，使其过滤，并取出获得的黄色溶液的2/3溶剂加入乙醚从溶液中沉淀出桔黄色晶体并经微孔过滤器过滤。固体物在高真空下干燥，得桔黄色晶体。MS 计算峰值：821m/z(M-Cl^-)

实测峰值：821m/z(M-Cl^-)表1中的同类化合物1.46到1.58也可同样得到。(b)化合物1.59的制备

10mg(0.0116mmol)上述得到的化合物1.45加入5ml水中并加热回流，得一黄色溶液。三天后反应物被过滤，浓缩并在高真空下干燥，得一黄色固体。

4.)带其它取代基R5的三联吡啶-镧系金属配合物制备

(a)化合物1.60的制备

48mg实施例A1(c)所得物质c.5(0.12mmol)于7.5ml甲醇中在氩气中加热回流，向其中加入44mg三氯化铕六水合物(0.12mmol)并继续加热回流15分钟。然后加入实施例A3.2(e)所得化合物(k)在2.5ml甲醇中溶液，使此溶液保持回流45分钟。冷却的悬浮物经滤过后，清亮的黄色滤液在旋转蒸发器上浓缩至约2ml。加入乙醚以沉淀出黄色沉淀，然后以乙醚/甲醇1∶1溶剂洗一次和用乙醚洗两次。残渣在高真空下干燥，得黄色晶体。

MS 计算峰值：807m/z(M-Cl^-)

实测峰值：809m/z(M-Cl^-)

(b)化合物1.61的制备

化合物1.61由化合物1.60制得，方法类似于从化合物(1.45)制备化合物(1.59)。

MS 计算峰值：1056m/z[M-3Cl^-+2(C₈H₇O₄)^-]

实测峰值：1055m/z[M-3Cl^-+2(C₈H₇O₄)^-]

5.带有另一些取代基R₁的三联吡啶-镧系金属配合物的制备

(a)化合物1.62的制备

136mg实施例A3.3(c)所得化合物(o)(9.54mmol)溶于干燥甲醇并在氩气保护下加热回流。然后加入1.53g三氯化铕六水合物(5.94mmol)，反应物加热回流0.5小时。再将溶于100ml干燥甲醇中的1g 2，6-二乙酰基吡啶(5.94mmol)和两滴浓盐酸加入所得之清亮黄色溶液。将此反应混合物加热回流8天，冷却至室温过滤此悬浮液。所得之清亮黄色溶液旋转蒸发器上浓缩，加入乙醚得到沉淀物。用乙醚/甲醇1∶1混合溶液洗涤沉淀一次，再以乙醚洗涤两次，沉淀物在高真空下干燥，得桔黄色固体。

MS 计算峰值：822m/z(M-Cl^-)

实测峰值：822m/z(M-Cl^-)

6.带其它取代基R₅的三联吡啶-镧系金属配合物的制备

(a)化合物1.63的制备

96mg实施例A1(c)所得化合物c.2(0.234mmol)溶于20ml干燥甲醇中并于氩气保护下加热回流，然后加入60mg三氯化铕六水合物(0.234mmol)，此反应混合物加热回流0.5小时。再将溶于15ml干燥甲醇中的实施例A3.5所得化合物(r)(0.234mmol)和2滴浓盐酸加入所得之清亮黄色溶液。将此反应物加热回流过夜，冷至室温后将此暗红色悬浮液经Hydrofilter过滤。所得之清亮红色滤液在旋转蒸发器上浓缩并加入乙醚使之沉淀。沉淀物用乙醚/甲醇1∶1混合溶剂洗一次再用乙醚洗两次。产物在高真空下干燥，得暗红色固体。

MS 计算峰值：813m/z(M-Cl^-)

实测峰值：812m/z(M-Cl^-)

7.带有取代基R₁或R₅的三联吡啶-镧系金属配合物的制备

(a)化合物1.64到1.74的制备

按上述的类似的反应如化合物1.62和1.63制备，由所述的取代2，6-二羰基吡啶类化合物和所述之取代三联吡啶-双肼基化合物制得表1中的化合物1.64到1.74。

表1：化合物编号 Ln³⁺ R₁ R₄ R₅ 分子量[M-Cl]

计算值/实测值1.1 La Ph H H 706/7051.2 La Ph-4-OH H H 722.4/722.31.3 La Ph-4-OCH₃ H H 736.4/735.61.4 La Ph-4-NH₂ H H1.5 La Ph CH₃ H 734.4/734.41.6 La Ph-4-OH CH₃ H 750.4/750.91.7 La Ph-4-OCH₃ CH₃ H 764.5/765.01.8 La Ph-4-NH₂ CH₃ H 749.5/749.51.9 Eu Ph H H 719.4/718.91.10 Eu Ph-4-OH H H 735.4/735.81.11 Eu Ph-4-OCH₃ H H 749.5/749.31.12 Eu Ph-4-NH₂ H H 734.5/734.51.13 Eu Ph CH₃ H 747.5/7471.14 Eu Ph-4-CH CH₃ H 763.5/763.71.15 Eu Ph-4-OCH₃ CH₃ H 777.5/777.31.16 Eu Ph-4-NH₂ CH₃ H 762.5/762.51.17 Ce Ph-4-NH₂ CH₃ H 750.7/749.31.18 Pr Ph-4-NH₂ CH₃ H 751.4/750.91.19 Nd Ph-4-NH₂ CH₃ H 754.8/752.71.20 Gd Ph-4-NH₂ CH₃ H 767.8/766.31.21 Tb Ph-4-NH₂ CH₃ H 769.5/768.71.22 Dy Ph-4-NH₂ CH₃ H 773.1/773.21.23 Ho Ph-4-NH₂ CH₃ H 775.5/774.41.24 Er Ph-4-NH₂ CH₃ H 777.8/776.81.25 Tm Ph-4-NH₂ CH₃ H 779.5/778.81.26 Yb Ph-4-NH₂ CH₃ H 783.6/783.01.27 Lu Ph-4-NH₂ CH₃ H 785.5/784.71.28 Y Ph-4-NH₂ CH₃ H 699.4/698.11.29 La H H CH₂CH₂COOH1.30 Eu H H CH₂CH₂COOH1.31 La Ph H CH₂CH₂COOH^*1.32 Eu Ph H CH₂CH₂COOH^**1.33 Ce Ph H CH₂CH₂COOH 911/9121.34 Pr Ph H CH₂CH₂COOH 782/7811.35 Nd Ph H CH₂CH₂COOH 915/9151.36 Gd Ph H CH₂CH₂COOH 1060/10591.37 Tb Ph H CH₂CH₂COOH 1062/10621.38 Dy Ph H CH₂CH₂COOH 1066/10651.39 Ho Ph H CH₂CH₂COOH 1068/10681.40 Er Ph H CH₂CH₂COOH 1070/10701.41 Tm Ph H CH₂CH₂COOH 905/9031.42 Yb Ph H CH₂CH₂COOH 1076/10761.43 Lu Ph H CH₂CH₂COOH 911/9081.44 Y Ph H CH₂CH₂COOH 922/9221.46 Ce Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1071/10711.47 Pr Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1072/10711.48 Nd Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1075/10731.49 Gd Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1089/10911.50 Tb Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1091/10921.51 Dy Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1094/10941.52 Ho Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1097/10971.53 Er Ph H N(CH₃)CH₂C(O)CCH₃ 1099/10991.54 Tm Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1101/11021.55 Yb Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1104/11021.56 Lu Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1107/11041.57 Y Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1020/10201.58 La Ph H N(CH₃)CH₂C(O)OCH₃ 1071/10701.64 Eu Ph-4-NH₂ Bu H 888/8881.65 Eu Ph-4-NH₂ Ph H 847/8491.66 Eu Ph-4-NH₂ Ph-4-OCH₃ H 947/9481.67 Eu Ph-4-NCS Bu H 889/8921.68 Eu Ph-4-NCS Ph H1.69 Eu Ph-4-NCS Ph-4-OCH₃ H 1085/1086^***1.70 Eu 9-Anthracenyl H CH₂CH₂C(O)CCH₃ 906/908

1.71 Eu Ph-2-NH₂ CH₃ H 763/762

1.72 Eu Ph-2-NH₂ CH₃ H 805/804

1.73 Eu Ph-3-NH₂ CH₃ H 727/729

1.74 Eu Ph-3-NH₂ CH₃ H 805/804

Ph：苯基 Bu：丁基

* C H N Cl

计算值(+2DMSO)： 45.81 4.16 11.55 10.96

测定值： 45.5 4.3 11.8 10.6

** C H N Cl

计算值(+2DMSO+4H₂O)：42.11 4.58 10.62 10.07

测定值： 42.2 4.6 10.6 9.5

***

反离子是THA^-(C₈H₇O₄ ^-)

实施例B2：异硫氰酸酯衍生物的制备

向4.4mMol碳酸氢钠和3.5mMol硫光气在4ml氯中的悬浮液加入一种表1所列配合物的溶液。该混合物于室温下剧烈搅拌2.5小时。氯仿相被分离并以水洗一次。所有的水相合并并被弄干，所得的表2中产物2.1到2.15无需进一步纯化。类似地由表1中其它一些含有伯胺基作取代基的化合物制得相应的异硫氰基化合物。表2：化合物 Ln³⁺ R₁ R₄ R₅ ^- 分子质量数[M-Cl]编号计算值/实测值2.1 Ce Ph-NCS CH₃ H 792.7/792.72.2 Pr Ph-NCS CH₃ H 793.5/791.22.3 Gd Ph-NCS CH₃ H 809.9/807.42.4 Tb Ph-NCS CH₃ H 811.5/811.72.5 Dy Ph-NCS CH₃ H 815.1/815.92.6 Ho Ph-NCS CH₃ H 817.5/816.22.7 Er Ph-NCS CH₃ H 819.9/819.02.8 Tm Ph-NCS CH₃ H 821.5/820.12.9 Yb Ph-NCS CH₃ H 825.6/826.42.10 Lu Ph-NCS CH₃ H 827.6/825.52.11 Y Ph-NCS CH₃ H 741.5/740.22.12 La Ph-NCS CH₃ H 791.5/792.12.13 Eu Ph-NCS CH₃ H 804.6/804.72.14 La Ph-NCS H H2.15 Eu Ph-NCS H H

C.氨基寡核苷酸的制备

约30mg可控微孔玻璃(CPG)固相装入一个作1.5μMol合成用的标准实用生物合成反应器中。此CPG-固相(1)带有为合成氨基寡核苷酸的连接3′-片段(例如dc)。

为了寡聚，加入氨基亚磷酸脂(6)，(7)，(8)，(9)。

为了后面经氨基打开金属配合物，特定的氨基亚磷酸酯(10)，(11)，(12)，(13)，(14)，(15)和(16)被插入。

(14)：n＝3，R＝P(N(i-Propyl)₂)OCH₂CH₂CN(15)：n＝4，R＝P(N(i-Propyl)₂)OCH₂CH₂CN(16)：n＝5，R＝P(N(i-Propyl)₂)OCH₂CH₂CN

氨基亚磷酸酯(14)，(15)和(16)制备实施例：

-初始化合物(14a)(n＝3，R＝H)的制备

4.0g 3-氨基-1-丙醇，3.28g 4-甲氧基三苯基氯甲烷和35ml吡啶置于一无水烧瓶中，于室温和氩气氛中搅拌4.5小时左右。溶剂被蒸去，残渣用甲苯洗一次，乙腈处理两次并不时搅动。所得残渣溶于二氯甲烷并用饱和碳酸氢钠溶液洗两次。水相用二氯甲烷提取三次，有机相合并，在硫酸钠上干燥并浓缩。然后粗产物经快速色谱法(硅胶)纯化(流动相：乙酸乙酯/正己烷＝1∶2)，得到一黄色的油。

¹H-NMR：δ值于CDCl₃中，OCH₃＝3.65

初始化合物(15a)(n＝4，R＝H)和(16a)(n＝5，R＝H)类似地由4-氨基-1-丁醇及5-氨基-1-戊醇制得。

¹H-NMR：δ值于CDCl₃中，OCH₃＝3.65(15a)和3.65(16a)。

-氨基亚磷酸酯(14)的制备：

于氩气氛中将1.99g N，N-二异丙胺四唑复盐和3.5g 2-氰乙基-N，N，N′，N′-四异丙胺基亚磷酸酯置于150ml二氯甲烷中，在20分钟内滴加上述所得化合物(14a)在120ml二氯甲烷中的溶液。此黄色的细悬浮物搅拌4.5小时，然后以250ml二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤二次。水相用二氯甲烷提取三次，有机相合并后于硫酸钠上干燥，浓缩，然后粗产物以快速柱色谱(硅胶)纯化(流动相：乙酸乙酯/正己烷＝1∶4+0.5％N-甲基吗啉)，得一黄色油。

¹³P-NMR：δ值在CDCl₃中，146.9。

氨基亚磷酸酯(15)和(16)类似地由上述所得化合物(15a)和(16a)制得。

¹³P-NMR：δ值于CDCl₃中，146.9(15)和147.0(16)。

按Applied Biosystem公司的标准记录，使用该公司的394型合成器合成周期是有变化的〔脱氧序列(6)，(7)，(8)和(9)的氨基亚磷酸酯偶合时间共2分钟，(10)和(11)为10分钟，(12)为5分钟，(13)共40分钟；(13)使用了100倍于剩下那些的时间〕。为了所得的寡核苷酸与金属配合物偶合，相应的保护基要在标准条件下裂解。

可以购得的试剂有：

0.1M氨基亚磷酸

四唑/乙腈：4％，96％叔丁基苯氧乙酸酐/吡啶/四氢呋喃：10％，10％，80％N-甲基咪唑/四氢呋喃：16％，84％，三氯乙酸/二氯甲烷： 2％，98％碘/水/吡啶/四氢呋喃：3％，2％，20％，75％下列的氨基寡核苷酸被合成：(821)5′-GAC TGG CGA GAT^*CGG CAG TCG GCT AG-3′，其中T^*代表

这里T表示胸腺嘧啶(823)5′-GAC TGG CGA GAT^*CGG CAG TCG GCT AG-3′，其中T^*代表

这里T为胸腺嘧啶(940)5′-GAC TGG CGA GAT CGG CAG T^*CG GCT AG-3′，其中T^*代表

(1759)5′-H₂N(CH₂)₃OP(O)₂-CGA GAT CGG GAG TCG GCT AG-3′，

(1760)5′-H₂N(CH₂)₄OP(O)₂-CGA GAT CGG CAG TCG GCT AG-3′，

(1761)5′-H₂N(CH₂)₅OP(O)₂-CGA GAT CGG CAG TCG GCT AG-3′，und

(1757)5′-H₂N(CH₂)₆OP(O)₂-GGA GAT CGG CAG TCG GCT AG-3′.

D.三联吡啶-镧系金属-寡核苷酸结合物的制备

实施例D1：寡核苷酸结合到镧系配合物的三联吡啶部分的结合物的制备

(a)0.2mg所述之氨基寡核苷酸溶于15μl吡啶/水/三乙胺(90∶15∶1)中，加入1mg表2中所述之异硫氰基配合物后，该混合物于室温搅拌1小时。此反应混合物在0.1克分子氯化钾溶液中渗析一次，水中渗析三次。所得产物经反相HPLC(90分钟溶剂梯度：0.05M醋酸三乙胺中乙腈由0％到30％)从Nucleosil-C₁₈柱精制，或经离子排阻-HPLC于60℃由PVDI.400DA-柱，5μm精制(梯度：10分钟20％1M氯化钾溶液和80％20mM pH6磷酸钾溶液，其中含20％乙腈，然后用80％氯化钾溶液60分钟)，得到表3的结合物3.1到3.13和3.18，3.21。

(b)3mg所述之氨基寡核苷酸悬浮于200μl DMSO/100μl N-甲基吗啉中，加入1mg所述之异硫氰酸酯配合物后(见表2及表1制得的异硫氰酸酯配合物的所述化合物)，此混合物于室温放置2-3小时。产物以32％氨水处理以使固相裂解和完全脱保护(室温3小时)。经反相-HPLC纯化制得表3的化合物3.26到3.44。

实施例D2：寡核苷酸连接到镧系金属配合物的吡啶部分上的结合物制备

(a)3μMol前述羧酸衍生物1.29到1.32(表1)在200μl二甲亚砜中的溶液，加入3.3μMol二环己基羰二亚胺和3.3μMol N-羟基丁二酰亚胺，室温放置16小时。加入100μMol N，N-二异丙基乙胺后再加0.2mg所述之氨基寡核苷酸。室温下四天后在50mM三乙胺酸或碳酸盐溶液中渗析两次，并在水中渗析两次。再经反相-HOLC[(见D1(a)]纯化得表3中3.14到3.17，3.19，3.20和3.22到3.25这些化合物。

(b)3μMol所述的羧酸衍生物(见表1)于200μl二甲亚砜中的溶液，加入3.3μmol二环己基羰二亚胺和3.3μmol N-羟基丁二酰亚胺，室温放置16小时。加入3mg氨基寡核苷酸后再加100μl N-甲基吗啉。室温3天之后以DMSO洗两次，水洗一次。产物以32％氨水处理以使固相裂解并完全脱保护(室温下3小时)。经反相-HPLC纯化得表3的化合物3.45到3.49。

表3：

化合物 Ln R₄ R₉ R₈ MM(MS) RZ

编号

3.1 La CH₃ Ph-4-691 H 7082/7093

3.2 Eu CH₃ Ph-4-691 H 7095/7090

3.3 Ce CH₃ Ph-4-691 H 27,4

3.4 Pr CH₃ Ph-4-691 H 42,5^*

3.5 Gd CH₃ Ph-4-691 H 27,0

3.6 Tb CH₃ Ph-4-691 H 27,7

3.7 Dy CH₃ Ph-4-691 H 27,6

3.8 Ho CH₃ Ph-4-691 H 26,7

3.9 Er CH₃ Ph-4-691 H 27,2

3.10 Tm CH₃ Ph-4-691 H 27,5

3.11 Yb CH₃ Ph-4-691 H 28,8

3.12 Lu CH₃ Ph-4-691 H 27,9

3.13 Y CH₃ Ph-4-691 H 27,4

3.14 Eu H -苯基 A-691 7060/7065

3.15 La H -苯基 A-691 7048/7072

3.16 Eu H H A-691

3.17 La H H A-691

3.18 Eu CH₃ Ph-4-821 H 9843/9853

3.19 La H -苯基 A-821 9800/9800

3.20 Eu H -苯基 A-821 9813/9839

3.21 Eu CH₃ Ph-4-823 H 9842/9861

3.22 La H -苯基 A-823 35,6^*

3.23 Eu H -苯基 A-823 9811/9826

3.24 La H -苯基 A-940 9757/9829

3.25 Eu H -苯基 A-940 9770/9794

3.26 Eu CH₃ Ph-3-691 H 7092/7117

3.27 Eu CH₃ Ph-4-1759 H 7050/7043

3.28 Eu CH₃ Ph-4-1760 H 7064/7071

3.29 Eu CH₃ Ph-4-1761 H 7078/7078

3.30 Eu H Ph-4-691 H 7067/7066

3.31 La H Ph-4-691 H 7078/7060

3.32 Eu CH₃ Ph-3-1759 H 7053/7058

3.33 Eu CH₃ Ph-3-1760 H 7067/7064

3.34 Eu CH₃ Ph-3-1761 H 7081/7085

3.35 Eu CH₃ Ph-2-691 H 7096/7098

3.36 Eu CH₃ Ph-2-1759 H 7053/7055

3.37 Eu CH₃ Ph-2-1760 H 7067/7065

3.38 Eu CH₃ Ph-2-1761 H 7081/7083

3.39 Eu H Ph-4-1759 H 7025/7030

3.40 Dy H Ph-4-1759 H 7036/7043

3.41 Gd H Ph-4-1759 H 7031/7034

3.42 Dy H Ph-3-1759 H 7036/7038

3.43 Gd H Ph-3-1759 H 7031/7029

3.44 Eu H Ph-3-1759 H 7025/7026

3.45 Eu H -苯基 A-1759 7018/7021

3.46 Eu H -苯基 A-1757 7100/7123

3.47 Gd H -苯基 A-691 7065/7217

3.48 Tb H -苯基 A-691 7078/7067

3.49 Eu H -苯基 B-691 7075/7097

MM：分子质量数计算值/实测值

RZ：离子排阻高效液相色谱保留时间(分)

Ph-4-691：-苯基-4-N(H)C(S)-oligo 691

Ph-4-821：-苯基-4-N(H)C(S)-oligo 821

Ph-4-823：-苯基-4-N(H)C(S)-oligo 823

Ph-3-NH-691：-苯基-3-N(H)C(S)-oligo 691

Ph-2-NH-691：-苯基-2-N(H)C(S)-oligo 691

Ph-4-1759：-苯基-4-N(H)C(S)-oligo 1759

Ph-4-1760：-苯基-4-N(H)C(S)-oligo 1760

Ph-4-1761：-苯基-4-N(H)C(S)-oligo 1761

Ph-3-1759：-苯基-3-N(H)C(S)-oligo 1759

Ph-3-1760：-苯基-3-N(H)C(S)-oligo 1760

Ph-3-1761：-苯基-3-N(H)C(S)-oligo 1761

Ph-2-1759：-苯基-2-N(H)C(S)-oligo 1759

Ph-2-1760：-苯基-2-N(H)C(S)-oligo 1760

Ph-2-1761：-苯基-2-N(H)C(S)-oligo 1761

A-691：-4-CH₂CH₂C(O)-oligo 691

A-821：-4-CH₂CH₂C(O)-oligo 821

A-823：-4-CH₂CH₂C(O)-oligo 823

A-940：-4-CH₂CH₂C(O)-oligo 940

A-1759：-4-CH₂GH₂C(O)-oligo 1759

A-1757：-4-CH₂CH₂C(O)-oligo 1757

B-691：-4-N(CH₃)CH₂C(O)-oiigo 691

^*反相-HPLC保留时间(分)

E底物RNA(钯RNA)的制备

实施例E1：底物RNA合成

约30mg‘可控微孔玻璃’(CPG)固相放在一个标准的应用生物系统反应器以作1.5μmol量合成。此CPG-固相(1)含有作合成RNA的保护的3′-片段(实施例中rC)。

为了寡聚加入氨基亚磷酸酯(2)，(3)，(4)和(5)。

按Applied Biosystem公司的标准方案，用394型该公司的自动合成仪时进行合成循环(脱氧核糖序列的氨基亚磷酸酯的偶合时间共10分钟)，(使用手册，第二部(1992)，1.0μmol，附录1-41)。

其它可购买的试剂：

0.1M氨基亚磷酸酯

四唑/乙腈：4％，96％

叔丁基苯氧乙酸酐/吡啶/四氢呋喃：10％，10％，80％

N-甲基咪唑/四氢呋喃：16％， 84％

三氯乙酸/二氯甲烷：2％，98％

碘/水/吡啶/四氢呋喃：3％，2％，20％，75％

下列的底物-RNA被合成：

CG-690 5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC CAC UCU AC)

CG-1352 5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC UGA CUG AC)

实施例E2：固相(CPG)裂解和碱基的脱保护

固相物(1.5μMol合成量)以800μl氨饱和乙醇处理并在室温培育过夜。氨饱和的乙醇由一份乙醇和三份33％氨液制得。温育后将氨饱和的乙醇溶液倾析，CPG有氨化乙醇清洗，纯化了的溶液冻干。

实施例E3：叔丁基二甲硅烷基(TBDMS)保护基的脱保护。

冻干的样品以800μl 1M氟化四丁铵-四氢呋喃溶液处理，样品被剧烈混合30分钟，再避光于室温培育24小时。

此RNA和50mM三乙胺碳酸氢盐(TAHC)溶液pH7.0(1+1)混合并直接在4℃渗析(水要有毫微级10^-9纯度)。

实施例E4：渗析

渗析在7.5mM TAHC溶液中pH 7.0进行3次(此溶液用毫微级10-9纯水配制，以CO₂调整pH 7.0并冷却到4℃)。样品被冻干并以焦碳酸二乙酯处理〔参见Sambrook，Fritsch，Mamatis，分子克隆，实验室手册，第二版，Cold Spring Habor实验室出版社(1989)〕，再于压热器中吸收水(DEPC-H₂O)。取一份在260nm作浓度测定。其余带RNA部分与RNA酶作用并去杂离子。

实施例E5：用³³[P]-γATP 5′-标记底物RNA

由上述合成记录的100μMol RNA为进行激酶反应在20μl体积中于37℃温育20分钟，反应溶液中含0.5μl T₄聚核苷酸激酶(Promega产，10单位/微升)，2μl激酶缓冲液(50mM Tris-HCl，pH 7.5，10mMMgCl₂，5mM 1，4-二硫DL-苏糖醇，0.1mM亚精胺)和0.5μl ³³[P]γ-ATP(Amersham，＞1000 Ci/mMol，10μCi/μl)。接着加入138μlTris-HCl/EDTA(10mM/1mM，pH 7.5)，2μl糖原(35mg/ml)和40μlNH₄CH₃COO(10M)。加600μl乙醇之后样品被冷却至-20℃，然后于4℃离心20分钟。所得沉淀经冻干，再以15μl染色液(0.025％溴酚兰，0.025％二甲苯兰(酸性兰)于80％甲酰胺中1∶1混合，和7M尿素，20mM柠檬酸，1mM EDTA)处理，在95℃变性处理1分钟，立即放在冰上并上样于1.0cm×1mm袋中作凝胶电泳分离。凝胶电泳在55瓦进行40分钟后再在55瓦进行2.5小时。

实施例E6.经激酶处理的底物RNA纯化和分离

为作酶反应物的电泳分离先制备12％聚丙烯酰胺凝胶(1mm×30cm×40cm)。聚合反应在170ml体积中，将51ml丙烯酰胺溶液(40％丙烯酰胺/双丙烯酰胺，10∶1)，17ml TBE-缓冲液(0.89M三个(羟甲基)氨基甲烷，0.89M硼酸，0.02M乙二胺四乙酸)和71.4g尿素与所述量的水混合。聚合作用以170μl过氧二硫酸铵溶液(25％w/v)和170μl TEMED(N，N，N′，N′-四甲基乙二胺)引起。1小时后该凝胶即可使用。作为工作缓中液(Laufpuff)可用10倍稀释的TBE缓冲液。

分离的RNA在360μl洗脱液中用40μl NaCH₃COO(3M pH 5.2)和1ml乙醇处理，样品在-20℃冷冻20分钟然后在4℃离心20分钟。所得沉淀以30μl H₂O渗析，溶液按Czerenkow记录在闪烁计数器上测定并调整到12000cpm/μl。

F以三联吡啶-镧系金属配合物-寡核苷酸结合物进行裂解的实验。

实施例F1：用寡核苷酸镧系金属配合物结合物进行底物RNA裂解

为了作裂解反应后RNA产物的凝胶电泳分离和鉴定，要制备一种Long Ranger凝胶(AT Biochem，改性聚丙烯酰凝胶)(0.4mm×30cm×40cm)。聚合反应在90ml体积中进行。21ml Long Ranger溶液(50％)，11ml TBE缓冲液(0.89M三个(羟甲基)氨基甲烷，0.89M硼酸，0.02M乙二胺四乙酸)和37g尿素与所述数量的H₂O混合，用450μl过氧二硫酸铵溶液(10％w/v)和45μl TEMED引发聚合作用，1小时后凝胶即可使用。作工作缓冲液的可用稀释16.66倍的TBE-缓冲液。分离在60瓦进行75分钟。凝胶电泳分离之后，标记的裂解产物(RNA-寡聚物)放在一张X光胶片上或借助于磷光检测器来分别计数。

裂解反应在10μl体积进行。

向1μl底物-RNA(12000cpm)用吸管加入1μl寡核苷酸结合物(10μM)，4μl Tris-HCl缓冲液(50mM，37℃ pH 7.4)和所述数量的H₂O。此混合物于85℃加热1分钟，再在37℃培育16小时。加入5μl染色缓中液(0.025％溴酚兰，0.025％二甲苯兰(酸性兰)在80％甲酰胺中1∶1混合，并带7M尿素，20mM柠檬酸和1mM EDTA)使反应结束。为了作凝胶电泳分离将7.5μl样品于95℃失活1分钟，立即放在冰上并上样在凝胶板上。

此底物RNA浓度是下述估算的25倍：按所述的原始记录以100pMolRNA粗产物和凝胶纯化10％收率，发现底物RNA最终浓度0.04mM，在反应混合物中是1mM寡核苷酸结合物。

只有三联吡啶-镧系金属配合物用来比较，所以需要400mM配合物才能达到大致相同的裂解。对于底物-RNA则以10000倍过量配合物处理。

实施例F2：底物RNA CG-690以寡核苷酸-铕配合物第3.2号化合物温育

裂解反应依实施例F1所述之基本原则进行。

(80％未裂解的起始物)

CG-690 5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC CAC UCU AC)

主要裂解产物

(∑15％)

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC CAC UCU Acp

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC CAC UCUcp

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC Ccp

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGcp

其它裂解产物

(∑5％)

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGCcp

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU Ccp

实施例F3：底物RNA CG-690和寡核苷酸-镧配合物结合物第3.15号化合物温孵

裂解反应按实施例F1所述之基本原则进行。

(80％未裂解的起始物)

CG-690 5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC CAC UCU AC)

主要产物

(∑ 20％)

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC CAC UCUcp

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC Ccp

(CP＝2′，3′-环磷酸酯)

实施例F4：底物RNA CG-1352用寡核苷酸-铕配合物结合物第3.14号化合物温孵

裂解反应按实施例F1所述之基本原则进行。

(＜5％未裂解之起始物)

CG-1352 5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC UGA CUG AC)

主要产物(＞70％)

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC UGcp)

残余裂解产物

(∑ 25％)

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC Ucp)

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC UGAcp)

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC UGA Ccp)

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC UGA CUcp)

5′r(CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGC UGACUGcp)

实施例F5：底物RNA CG-1352以寡核苷酸-三联吡啶-金属配合物结合物进一步裂解

进一步裂解反应依实施例F1所述之基本原则进行。表4列出底物RNA CG-1352用表3中各种三联吡啶-金属配合物-寡核苷酸结合物裂解的结果。符号+3表示主要裂解发生在底物RNA的核苷酸+3和+4之间(见表1和表2及注释)。人们知道，在制造中裂解最好是发生在+3位置。

表4：低物RNA CG-1352的主要裂解产物(黑体位置)。指明的是所用的结合物(亦见表3)。

3.2	3.1	3.3	3.6	3.11	3.7
3.2	3.1	3.3	3.6	3.11	3.7	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G
3.8	3.9	3.10	3.12	3.5	3.13	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G
3.8	3.9	3.10	3.12	3.5	3.13	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G
3.4	3.30	3.31	3.26	3.27	3.28	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G
3.4	3.30	3.31	3.26	3.27	3.28	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G
3.29	3.32	3.33	3.34	3.35	3.36	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G
3.29	3.32	3.33	3.34	3.35	3.36	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G
3.37	3.38	3.39	3.40	3.41	3.44	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G
3.37	3.38	3.39	3.40	3.41	3.44	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G
3.42	3.43	3.15	3.48	3.49	3.45	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G
3.42	3.43	3.15	3.48	3.49	3.45	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G	+3G

Claims

1.通式I的化合物

其中

R₁表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基，以O，S或N作杂原子的C₄-C₁₂杂芳基，C₁-C₄烷硫基，二(C₁-C₄烷基)氨基，卤素，磺酰胺或羧酰胺和一个一价功能基R₅；

或者

R₁是一个一价功能基，R₅是H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基，以O、S或N作杂原子的C₄-C₁₂杂芳基，C₁-C₄烷硫基，二(C₁-C₄烷基)氨基，卤素、磺酰胺或羧酰胺；

这里功能基直接或通过一个基团X连接到吡啶环上，基团Z是必要时可通过-O-，-S-，-NR₁₂-，-C(O)O-或-C(O)NR₁₂-断开的选自下述这些基团的残基：C₁-C₄亚烷基，C₂-C₁₂亚烯基。C₂-C₁₂亚炔基，C₅-C₈亚环烷基，C₆-C₁₂亚芳基和C₇-C₁₂亚芳烷基；

R₂和R₇相互独立地表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基，卤素，O，S或N作杂原子的C₄-C₁₂杂芳基，C₁-C₄烷硫基，二(C₁-C₄烷基)氨基，磺酰胺或羧酰胺；

R₃和R₆相互独立地为H，C₁-C₄烷基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基，卤素，以O，S或N作杂原子的C₄-C₁₂杂芳基，C₁-C₄烷硫基，二(C₁-C₄烷基)氨基，磺酰胺或羧酰胺，

R₄代表H，C₁-C₂₀烷基，C₅-C₈环烷基，C₆-C₁₂芳基或C₇-C₁₂芳基烷基，

R₁₂代表H或C₁-C₆烷基，

Me代表一种镧系金属或钇，

Y表示一个酸阴离子，

n是一个2或3的数，和

m是一个1、2或3的数。

这里的基团为烷基、环烷基、芳烷基和芳基和基团Z为不被取代或以C₁-C₄烷氧基、F、Cl、Br、-CN、C₁-C₄烷基或-NO₂取代。

2.权利要求1之化合物，其特征在于，R₁代表H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基，和R₅为一价功能基；

或

R₁为一价功能基和R₅为H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基。

3.权利要求1或2的化合物，其特征在于，基团Z代表C₁-C₃亚烷基，C₃-亚炔基，亚苯基或C₇-亚芳烷基。

4.权利要求1至3的化合物，其特征在于基团Z是C₂-C₃亚烷基或亚苯基。

5.权利要求1至4的化合物，其特征在于R₂和R₇各自独立地为H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基或卤素。

6.权利要求1至5之化合物，其特征在于R₂和R₇各自独立地为H或C₁-C₄烷基。

7.权利要求1至6之化合物，其特征在于R₃和R₈各自独立地为H，C₁-C₄烷基，C₇-C₁₂芳基烷基或C₆-C₁₆芳基。

8.权利要求1至7之化合物，其特征在于R₃和R₈各自独立地为H或C₁-C₄烷基。

9.权利要求1至8之化合物，其特征在于R₄代表H或C₁-C₂₀烷基。

10.权利要求1至9之化合物，其特征在于一价功能基选自下述基团：-OR₁₀，-SR₁₀，-NCO，-NCS，-NHR₁₁，-C(O)OR₁₁，-C(O)SH，-C(O)NHR₁₁，-C(O)Cl，-C(S)SR₁₁，-C(S)NHR₁₁，-C(S)OR₁₁，-SO₃R₁₁，-SO₂NHR₁₁，-SO₂Cl，-P(O)(OH)₂，-P(O)(OH)-NHR₁₁，-P(S)(SH)₂，-P(S)(SH)-NHR₁₁，-P(S)(OH)₂，-P(S)(OH)-NHR₁₁，-P(O)(SH)₂，-P(O)(SH)-NHR₁₁，-P(O)(OH)H，-P(O)(NHR₁₁)H，-P(S)(SH)H，-P(S)(NHR₁₁)H，-P(S)(OH)H，-P(O)(SH)H，其中R₁₀为H，-C(O)NH₂，-C(S)NH₂，-C₁-C₆-烷基，-C_xH_2x-NH₂，-C_xH_2x-SH或-(C_xH_2xO)_y-H，R₁₁为H，-C₁-C₆-烷基，-C_xH_2x-NH₂，-C_xH_2x-SH或-(C_xH_2xO)_y-H，x等于一个2到6的数，y等于一个1到20的数。

11.权利要求10之化合物，其特征在于R₁₀表示H。

12.权利要求1至11之化合物，其中之功能基选自如下基团：-OH，-SH，-NCO，-NCS，-NHR₁₁，-C(O)-OR₁₁和-P(O)(OH)₂。

13.权利要求1至12之化合物，其中之功能基选自如下基团：-NCS，-NHR₁₁，-C(O)-OR₁₁和-P(O)(OH)₂。

14.权利要求1至13之化合物，其中之镧系金属是镧、铈、钕、铕和钆。

15.权利要求1至14之化合物，其中之镧系金属是镧和铕。

16.权利要求1至15之化合物，其中之镧系金属是铕。

17.权利要求1至16之化合物，其中之阴离子是F^-，Cl^-，Br^-，J^-，PF₆ ^-，SbF₆ ^-，BF₄ ^-，B(Ph)₄ ^-，醋酸根，NO₃ ^-，硫酸根或磷酸根。

18.权利要求1至17之化合物，其中之阴离子是Cl^-，醋酸根或NO₃ ^-。

19.通式V的化合物

其中

R₂和R₇各自独立地表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基，卤素，以O，S或N作杂原子的C₄-C₁₂杂芳基，C₁-C₄烷硫基，二(C₁-C₄烷基)氨基，磺酰胺或羧酰胺；

R₃和R₆各自独立地为H，C₁-C₄烷基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基，卤素，以O，S或N作杂原子的C₄-C₁₂杂芳基，C₁-C₄烷硫基，二(C₁-C₄烷基)氨基，磺酰胺或羧酰胺；

R₄代表H，C₁-C₂₀烷基，C₅-C₈环烷基，C₆-C₁₂芳基或C₇-C₁₂芳基烷基；

这里的烷基、环烷基、芳基烷基和芳基或未被取代，或以C₁-C₄烷氧基、F、Cl、Br、-CN、C₁-C₄烷基或-NO₂取代；

Me代表镧系金属或钇，

Y表示一个酸的阴离子，

n是一个2或3的数，

m是一个1、2或3的数，

R₉表示一个式VI的残基

-X_p-A-X′_q-A′_r-Oligo (VI)

R₈表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基，以O，S或N作杂原子的C₄-C₁₂杂芳基，C₁-C₄烷硫基，二(C₁-C₄烷基)氨基，卤素，磺酰胺或羧酰胺，或者

R₉表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基，以O，S或N作杂原子的C₄-C₁₂杂环芳基，C₁-C₄烷硫基，二(C₁-C₄烷基)氨基，卤素，磺酰胺或羧酰胺和R₈代表一个式VI的残基，

p、q和r各自独立地表示0或1，

X和X′分别独立地表示一个未取代的或是以C₁-C₄烷氧基，F，Cl，Br，-CN，C₁-C₄烷基或-NO₂取代的下述基团：C₁-C₂₀亚烷基，C₂-C₁₂亚烯基，C₂-C₁₂亚炔基，-(C_xH_2xO)_y-，其中x等于一个2到6的数，y是一个1到20的数，C₅-C₈亚环烷基，C₆-C₁₂亚芳基和C₇-C₁₂亚芳烷基；

A和A′分别表示-O-，-S-，-S-S-，-NR₁₂-CO-NR₁₂-，-NR₁₂-CS-NR₁₂-，-NR₁₂-，-NR₁₂-C(O)-O-，-C(O)O-，-C(O)S-，-C(O)NR₁₂-，-C(S)S－，-C(S)O-，-C(S)NR₁₂-，-SO₂NR₁₂-，-SO₂-，-P(O)(OH)O-，-P(S)(SH)S-，-P(S)(SH)O-，-P(S)(OH)O-，-P(O)(SH)S-，-P(O)(OH)S-，-P(O)(SH)O-，-P(O)(OH)-NR₁₂-，-P(S)(SH)-NR₁₂-，-P(S)(OH)-NR₁₂-，-P(O)(SH)-NR₁₂-，-HP(O)O-，-HP(S)S-，-HP(O)NR₁₂-或-HP(S)NR₁₂-，其中R₁₂表示H或C₁-C₆烷基，和

Oligo代表一个由天然的，修饰或合成的脱氧核苷或肽核酸片段(Bausteinen)衍生来的天然、修饰或合成的序列，它经一个核酸碱基、一个寡核苷酸间的桥或一个糖基联接，并且其内部区域互补于一个靶RNA。

20.权利要求19的化合物，其特征在于，R₉是一个式VI的残基：

-X_p-A-X′_q-A′_r-O1igo (VI)

R₈表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基或C₆-C₁₆芳基，或

R₉是H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基或C₆-C₁₆芳基和R₈代表一个式VI的残基，和

p、q和r分别独立地表示0或1。

21.权利要求10或20之化合物，其特征在于，q代表1。

22.权利要求19至21的化合物，其特征在于，R₂和R₇各自独立地表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基或卤素。

23.权利要求19至22之化合物，其特征在于，R₂和R₇各自独立地表示H或C₁-C₄烷基。

24.权利要求19至23之化合物，其特征在于，R₃和R₆各自独立地表示H，C₁-C₄烷基，C₇-C₁₂芳基烷基或C₆-C₁₆芳基。

25.权利要求19至24之化合物，其特征在于R₃和R₆各自独立地表示H或C₁-C₄烷基。

26.权利要求19至25之化合物，其特征在于R₄代表H或C₁-C₂₀烷基。

27.权利要求19至26之化合物，其中之镧系金属是镧、铈、钕、铕和钆。

28.权利要求19至27之化合物，其中之镧系金属是镧或铕。

29.权利要求19至28之化合物，其中之镧系金属是铕。

30.权利要求19至29之化合物，其中之阴离子是F^-，Cl^-，Br^-，J^-，PF₆ ^-，SbF₆-，BF₄-，B(Ph)₄-，醋酸根，NO₃-，硫酸根或磷酸根。

31.权利要求19至30之化合物，其中之阴离子是Cl^-，醋酸根或NO₃ ^-。

32.权利要求19至31之化合物，其中之阴离子是Cl^-。

33.权利要求19至32之化合物，其特征在于x表示C₁-C₃亚烷基，C₃-亚炔基，亚苯基或C₇-亚芳烷基。

34.权利要求19至33之化合物，其特征在于x是C₂-C₃亚烷基或亚苯基。

35.权利要求19至34之化合物，其特征在于A代表-NR₁₂-CS-NR₁₂-或-C(O)NR₁₂-。

36.权利要求19至35之化合物，其特征在于A代表-NH-CS-NH-或-C(O)NH-。

37.权利要求19至36之化合物，其特征在于X′表示C₁-C₂₀亚烷基。

38.权利要求19至37之化合物，其特征在于X′表示C₁-C₁₀亚烷基。

39.权利要求19至38之化合物，其特征在于A′表示非已有的或-P(O)(OH)O-基。

40.通式II的化合物

其中，

R₁表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基或C₆-C₁₆芳基或一个一价功能基，这里功能基直接或通过一个基团Z连接到吡啶环上，基团Z是必要时通过-O-，-S-，-NR₁₂-，-C(O)O-或-C(O)NR₁₂-断开的选自下述基团的残基：C₁-C₂₀亚烷基，C₂-C₁₂亚烯基，C₂-C₁₂亚炔基，C₅-C₈亚环烷基，C₆-C₁₂亚芳基和C₇-C₁₂亚芳烷基，

R₂和R₇各自独立地表示H，C₁-C₄烷基，C₁-C₄烷氧基，C₇-C₁₂芳基烷基，C₆-C₁₆芳基或卤素，

R₃和R₆分别独立地为H，C₁-C₄烷基，C₇-C₁₂芳基烷基或C₆-C₁₆芳基，

R₁₂表示H或C₁-C₆烷基，

这里的烷基，环烷基，芳烷基，芳基残基，基团Z不被取代或以C₁-C₄烷氧基，F，Cl，Br，-CN，C₁-C₄烷基或-NO₂取代。

41.通式III的化合物

R₅表示一个经C₂-C₂₀亚烷基连接在吡啶环上的一价功能基，这个功能基选自下述基团：-C(O)-OR₁₂，-C(O)NHR₁₂，-SO₂-R₁₂和-SO₂NHR₁₂，其中R₁₂是H或C₁-C₆烷基，和

R₄是H或C₁-C₂₀烷基。

42.通式I的化合物制备方法，其特征在于通式II的三联吡啶

与通式III的吡啶二醛或吡啶二酮

在式IV的盐类存在下缩合

Meⁿ⁺(Y^m-)_n/m (IV)其中R₁，R₂，R₃，R₄，R₅，R₆，R₇，Me，Y，n和m有着前面指定的意义。

43.权利要求19至39之通式(V)的化合物制备方法，其特征在于将权利要求1-18之任一的通式(I)的化合物

(a)与一个式VIa的化合物相反应

A″-X′-A′_0或1-Oligo (VIa)

其中

A″表示一个选自下述基团的适当一价功能基：-OR₁₀，-SR₁₀，-NCO，-NCS，-NHR₁₁，-C(O)OR₁₁，-C(O)SH，-C(O)NHR₁₁，-C(O)Cl，-C(S)SR₁₁，-C(S)NHR₁₁，-C(S)OR₁₁，-SO₃R₁₁，-SO₂NHR₁₁，-SO₂Cl，-P(O)(OH)₂，-P(O)(OH)-NHR₁₁，-P(S)(SH)₂，-P(S)(SH)-NHR₁₁，-P(S)(OH)₂，-P(S)(OH)-NHR₁₁，-P(O)(SH)₂，-P(O)(SH)-NHR₁₁，-P(O)(OH)H，-P(O)(NHR₁₁)H，-P(S)(SH)H，-P(S)(NHR₁₁)H，-P(S)(OH)H，-P(O)(SH)H，其中R₁₀为H，-C(O)NH₂，-C(S)NH₂，-C₁-C₆-烷基，-C_xH_2x-NH₂，-C_xH_2x-SH或-(C_xH_2xO)_y-H，R₁₁为^H，-C₁-C₆-烷基，-C_xH_2x-NH₂，-C_xH_2x-SH或-(C_xH_2xO)_y-H，x等于一个2到6的数，y是一个1到20的数，X′是一个不被取代或以C₁-C₄烷氧基，F，Cl，Br，-CN，C₁-C₄烷基或-NO₂取代的选自下述基团的残基：C₁-C₂₀亚烷基，C₂-C₁₂亚烯基，C₂-C₁₂亚炔基，-(C_xH_2xO)_y-，其中x等于一个2到6的数，y是一个1到20的数，C₅-C₈亚环烷基，C₆-C₁₂亚芳基和C₇-C₁₂亚芳烷基，A′表示-O-，-S-，-S-S-，-NR₁₂-CO-NR₁₂-，-NR₁₂-CS-NR₁₂-，-NR₁₂-，-NR₁₂-C(O)-O-，-C(O)O-，-C(O)S-，-C(O)NR₁₂-，-C(S)S-，-C(S)O-，-C(S)NR₁₂-，-SO₂NR₁₂-，-SO₂-，-P(O)(OH)O-，-P(S)(SH)S-，-P(S)(SH)O-，-P(S)(OH)O-，-P(O)(SH)S-，-P(O)(OH)S-，-P(O)(SH)O-，-P(O)(OH)-NR₁₂-，-P(S)(SH)-NR₁₂-，-P(S)(OH)-NR₁₂-，-P(O)(SH)-NR₁₂-，-HP(O)O-，-HP(S)S-，-HP(O)NR₁₂-或-HP(S)NR₁₂-，其中R₁₂表示H或C₁-C₆烷基，和

Oligo代表一个由天然的，修饰的或合成的脱氧核苷或肽核酸片段而来的天然、修饰或合成的序列，它通过一个核酸碱基、一个核苷酸内的桥或一个糖基连接，并在内部区域与靶RNA互补，或者

(b)与一个式VIb的化合物相反应

A″-Oligo (Vib)

其中

A″和Oligo具有(a)项中所述的意义。

44.权利要求43的方法，其特征在于R₁₀是H。

45.一种在生理条件下，和一种由金属配合物和寡核苷酸结合物的作用下，裂解核糖核酸的磷酸核苷酸桥的方法，其特征在于(a)靶RNA与一个如权利要求19至39的化合物配合，(b)再经反应并裂解。

46.权利要求19至39的式(V)化合物在治疗温血动物包括人类疾病的一种疗法中的应用，它通过使体内核苷酸序列失活而起作用。

47.一种基于一种水溶液或悬浮液的药物制剂，其中含有单独的或与另一种生物活性物质一起的有效量的权利要求19至39项之式(V)化合物，作为药物载体的水及必要的助剂。

48.权利要求19至39之式(V)化合物在治疗温血动物包括人类疾病中的应用。它通过使体内核苷酸序列失活而起作用。