CN116218736B - 一株贝莱斯芽孢杆菌oot-47及其产高效抑菌物质的方法和应用 - Google Patents

一株贝莱斯芽孢杆菌oot-47及其产高效抑菌物质的方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一株贝莱斯芽孢杆菌OOT‑47及其产高效抑菌物质的方法和应用，所述菌株的保藏编号为：CCTCC NO:M2022988，保藏日期为：2022年6月27日，所述菌株对葡萄座腔菌、拟茎点霉菌、果生刺盘孢菌、立枯丝核菌、灰梨孢菌及美澳型核果链核盘菌有拮抗作用，所述应用方法为：将菌株OOT‑47的发酵液喷施于作物果实上、叶面上或灌根。贝莱斯芽孢杆菌OOT‑47、贝莱斯芽孢杆菌OOT‑47的发酵物、贝莱斯芽孢杆菌OOT‑47的代谢产物2,4‑二叔丁基苯酚能够有效控制植物多种病害的发生，降低植物被多种病原真菌侵染的可能性。表明该株菌在植物病害的生物防治领域具有广阔的应用前景，并在生物防治药剂的开发方面同样有着极高的发展价值。

Description

一株贝莱斯芽孢杆菌OOT-47及其产高效抑菌物质的方法和 应用
技术领域
本发明属于植物病害生物防治技术领域，更具体地说，特别涉及一株贝莱斯芽孢杆菌OOT-47(Bacillus velezensis)及其应用。
背景技术
植物病原真菌的存在严重影响到了农业行业的健康发展，植物病原真菌指的是能寄生于植物并引致病害的真菌。到目前为止，已经记载的植物病原真菌达到了8000种以上，占植物病害总数的80％，由真菌引起的植物病害已超过了3万余种。每年植物病原真菌都会致使粮食、蔬菜、果树等重要农作物产量减少10％～30％，给农业带来上千亿美元的经济损失。
目前，农业上普遍且广泛使用各种化学类杀菌剂等化学防治方法来减少植物病原真菌对农业生产上造成的影响。化学防治方法在农业生产中占有重要的地位，具有见效快、防效好、操作方便等优点。但长期过度使用化学类杀菌剂，会导致农药残留(residue)、有害生物在猖獗(resurgence)以及生物抗药性(resistance)的“3R”问题逐渐突显出来。大多数化学农药在施用后短时间内很难降解，会在农产品和土壤中大量积累，不仅会污染坏境还会影响人类的食用健康。长期且不合理的用药会加速植物病原真菌产生抗药性，导致之后的防治需要增大药剂的使用量，进入恶性循环，直到最后防效大大降低，出现病害再度猖獗的情况。
随着生活质量的提高，人们对于农产品的质量安全问题逐渐重视起来，环境友好型、无残留、安全高效等成为了人们对农药的新要求。微生物农药因其无公害、无残留、防治成本低、不易产生抗药性等优点受到了当前新型农药研究工作者的青睐。在众多生防微生物中，芽孢杆菌扮演着重要的角色，其活菌和/或无菌发酵液对多种植物的病原菌均具有高效的拮抗作用，且分布广泛、抗逆性强。因此寻找适宜的芽孢杆菌菌株，从其发酵产物中提取出高效稳定的抑菌成分用于植物病原真菌的防治具有重要意义。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一株贝莱斯芽孢杆菌OOT-47及其产高效抑菌物质的方法和应用，该菌株本身具有高效和广谱的抑菌活性，且从其无菌发酵液中鉴定出一种更为高效的抑菌物质2,4-二叔丁基苯酚，主要是在生物防治方面的应用。
本发明一种节状镰刀菌堇色变种内生真菌及其应用的目的与功效，由以下具体技术手段所达成：
一株贝莱斯芽孢杆菌OOT-47，所述菌株的保藏编号为：CCTCC NO:M2022988，分类命名为：Bacillus velezensis OOT-47，保藏日期为：2022年6月27日。该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国.武汉.武汉大学)。
本发明的贝莱斯芽孢杆菌OOT-47分离于贵州省六盘水市水城区米萝镇猕猴桃的根际土壤。其菌体成短杆状，属于革兰氏阳性菌，在营养琼脂(Nutrient agar,NA)培养基上菌落为不透明的乳白色，表面有褶皱边缘隆起。其16S rDNA序列如Seq ID No.1所示。
所述的贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的发酵物和代谢产物均属于本发明的保护范围。
上述贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的培养方法，使用NB培养基在温度25℃～40℃、PH为6.4～7.8、摇床转速为180rpm～250rpm的培养条件下培养24h～48h。
上述贝莱斯芽孢杆菌OOT-47产生2,4-二叔丁基苯酚的方法，包括以下步骤。
步骤一：将所述贝莱斯芽孢杆菌OOT-47接种到NB培养基中，在温度为35℃、PH为7.2、摇床转速为180rpm的条件下培养，制成种子液；
步骤二：将生长至OD600为0.6～0.8的贝莱斯芽孢杆菌OOT-47种子液接种到新鲜的NB培养基中，在温度为30℃、PH为7.2、摇床转速为220rpm的培养条件下发酵48h～120h。
步骤三：收集发酵液在4℃、10000rpm的低温高速离心机中离心15min，用0.22μm的微孔滤膜过滤两次上清液，得到含有2,4-二叔丁基苯酚的无菌发酵液。
一株贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的应用，所述菌株对葡萄座腔菌(Botryosphaeriadothidea)、拟茎点霉菌(Phomopsis cauloides)、果生刺盘孢菌(Colletotrichumfructicola)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、灰梨孢菌(Pyricularia grisea)及美澳型核果链核盘菌(Monilinafructicola)有拮抗作用。
一株贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的应用方法，所述方法为：将菌株OOT-47的发酵液喷施于作物果实上、叶面上或灌根。所述方法包括向植物地上部分喷施和/或灌根上述贝莱斯芽孢杆菌OOT-47、贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的发酵物、贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的代谢产物、上述微生物菌剂、上述病原菌抑制剂和/或上述病害抑制剂。
一株贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的应用方法，所述方法为：在发酵条件下，贝莱斯芽孢杆菌OOT-47能产生广谱高效抑菌物质2,4-二叔丁基苯酚。
所述发酵条件为：发酵培养基为营养肉汤培养基(Nutrient broth,NB)、PH为7.2、温度为30℃、转速为200rpm的条件下培养48h～72h。
所述2,4-二叔丁基苯酚在贝莱斯芽孢杆菌OOT-47无菌发酵中的含量为10％～20％。
上述贝莱斯芽孢杆菌OOT-47、贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的发酵物和/或贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的代谢产物在如下(1)-(4)
(1)在抑制病原菌中的应用；
(2)在抑制病害中的应用；
(3)在制备病原菌抑制剂中的应用；
(4)在制备病害抑制剂中的应用。
本发明至少包括以下有益效果：
上述技术方案首次筛选获得贝莱斯芽孢杆菌OOT-47。经实验证明，贝莱斯芽孢杆菌OOT-47、贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的发酵物、贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的代谢产物2,4-二叔丁基苯酚能够有效控制植物多种病害的发生，降低植物被多种病原真菌侵染的可能性。表明该株菌在植物病害的生物防治领域具有广阔的应用前景，并在生物防治药剂的开发方面同样有着极高的发展价值。
附图说明：
图1为本发明贝莱斯芽孢杆菌OOT-47菌落形态；
图2为本发明贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的多基因系统发育树；
图3为本发明贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的生长曲线；
图4为本发明贝莱斯芽孢杆菌OOT-47对植物病原真菌的抑制效果；
图5为本发明贝莱斯芽孢杆菌OOT-47无菌发酵液对植物病原真菌的抑制效果；
图6为本发明贝莱斯芽孢杆菌OOT-47浓缩后的无菌发酵液对植物病原真菌的抑制效果；
图7为本发明贝莱斯芽孢杆菌OOT-47抑菌代谢产物的鉴定峰图；
图8为本发明贝莱斯芽孢杆菌OOT-47代谢产物2,4-二叔丁基苯酚对植物病原真菌的抑制效果；
图9为本发明贝莱斯芽孢杆菌OOT-47代谢产物对猕猴桃软腐病的活体防治效果。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明的实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不能用来限制本发明的范围。
在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上；术语“同轴”、“底部”、“一端”、“顶部”、“中部”、“另一端”、“上”、“一侧”、“顶部”、“内”、“前部”、“中央”、“两端”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
在本发明的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“设置”、“连接”、“固定”、“旋接”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或成一体；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通或两个元件的相互作用关系，除非另有明确的限定，对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
实施例：
本发明提供一株贝莱斯芽孢杆菌OOT-47及其产高效抑菌物质2,4-二叔丁基苯酚的方法和应用，如附图1-9所示，本发明所述的贝莱斯芽孢杆菌菌株OOT-47已于2022年6月27日保藏于中国典型培养物保藏中心(地址：中国.武汉.武汉大学)，保藏编号：CCTCC NO:M2022988，分类命名为：Bacillus velezensis OOT-47。
本发明种涉及到的植物如下：
(1)猕猴桃；
(2)百香果；
(3)烟草；
(4)水稻；
(5)李子。
本发明中涉及到的植物病原真菌如下：
(1)葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)；
(2)拟茎点霉菌(Phomopsis cauloides)；
(3)果生刺盘孢菌(Colletotrichum fructicola)；
(4)立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)；
(5)灰梨孢菌(Pyricularia grisea)；
(6)美澳型核果链核盘菌(Monilinafructicola)。
本发明中涉及到的培养基及溶液如下：
NA培养基：牛肉膏5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl 5g/L、琼脂粉20g/L、无菌水1000mL。
NB培养基：牛肉膏5g/L、蛋白胨10g/L、NaCl 5g/L、无菌水1000mL。
PDA培养基：土豆200g、葡萄糖20g、琼脂粉17g、无菌水1000mL。
1、菌株的分离
从贵州省六盘水市水城区米萝镇猕猴桃种植园区收集健康树体的根际土壤，在实验室里将土壤样品平铺待其自然风干，然后将土样磨细过25目网筛，称取20g磨细的土样倒入250mL的锥形瓶中，再加入80mL的无菌水，在30℃、200rpm的摇床中摇培1h。待混合液自然沉淀分层后，吸取1mL上清液加入9mL无菌水，并用梯度稀释法依次稀释至10-3、10-4、10-5，分别取10-3、10-4、10-5的稀释液100μL在NA培养基上涂布，倒置于30℃培养箱中培养2～3天。挑取形态特征不同的单菌落在新的NA培养基上画线纯化，获得纯培养物。再从中筛选出抑菌效果最好的命名为OOT-47，加入到50％的甘油中保存在-80℃冰箱中。
2、菌株的鉴定
(1)生理生化特征鉴定
形态学观察及生理生化鉴定依据《常见细菌系统鉴定手册》测定。将OOT-47在NA培养基平板上画线，如图1所示。该菌在温度为30℃～37℃培养12h就可以大量生长，菌落呈不透明乳白色突起状，表面干燥不光滑，边缘为不规则圆形且有皱褶，菌落黏性大，挑起时形成丝状体(图1)。
(2)分子鉴定
使用细菌DNA提取试剂盒提取OOT-47的总DNA，用细菌16S通用引物27F(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3')和1492R(5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3')扩增16SrDNA序列。采用特异性引物gyrA-F(5'-CAGTCAGGAAATGCGTACGTCCTT-3')和gyrA-R(5'-CAAGGTAATGCTCCAGGCATTGCT-3')扩增gyrA保守基因；采用gyrB-F(5′-GAAGTCATCATGACCGTTCTGCAYGCNGGNGGNAARTTYGA-3′)和gyrB-R(5′-AGCAGGGTACGGATGTGCGAGCCRTCNACRTCNGCRTCNGTCAT-3′)序列扩增gyrB保守基因。将扩增后的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，将跑出单一条带的PCR产物送交测序公司测序。测序的结果使用NCBI数据库中的BLAST进行比对，取与其同源性较高的菌株序列，采用MEGA 7.0软件的最大似然法(MaximumLikelihood,ML)联合OOT-47的16SrDNA、gyrA和gyrB序列构建其多基因系统发育树。结果显示OOT-47与Bacillus velezensisFJAT-45028聚集在一支，支持率为100％(图2)
3、OOT-47生长曲线的测定
将保存于-80℃的OOT-47取出，在NA培养基上划线活化。待长出单菌落后挑取单菌落接种于50mL的NB培养基中，在30℃，200rpm的摇床中震荡培养至浓度为1×108CFU/mL得到种子液，再按1：50(v:v)将种子液接种到新的NB培养液中，在28℃，180rpm的摇床中培养36h，在这期间每隔4h进行一次取样测定在波长为600nm处的吸光值。结果表明在上述的培养条件下，OOT-47的生长曲线呈“S”型(图3)，在0-8h处于生长迟滞期，8-24h进入了快速生长期，菌株OOT-47在这一时期增殖最快，随着培养时间的增加，在24-36h进入了生长稳定期，其中34-36h期间OD600出现了略微的下降，说明该时间段OOT-47的死亡速率高于繁殖速率。
4、OOT-47对几种植物病原真菌的广谱抑菌活力测定
将葡萄座腔菌、拟茎点霉菌、果生刺盘孢菌、立枯丝核菌、灰梨孢菌、美澳型核果链核盘菌在PDA培养基上活化，用6mm打孔器分别打取6种病原真菌的菌饼，接种于新PDA平板中央，将浸泡过OOT-47菌悬液的6mm圆形滤纸片均匀放置于距离各病原真菌菌饼25mm的地方，针对每种病原真菌重复3次处理，以无滤纸片且在中央接种病原真菌的平板作为对照。将培养皿倒置于28℃的培养箱中培养5天，观察病原菌生长情况。按以下公式计算抑制率：
实验结果表明，OOT-47对不同植物上的多种病原真菌都具有较强的抑制活性(图4)，对葡萄座腔菌、拟茎点霉菌、果生刺盘孢菌、立枯丝核菌、灰梨孢菌、美澳型核果链核盘菌6种病原真菌的抑制率分别为：76.73％、78.27％、72.72％、70.66％、100％、88.78％。
5、OOT-47无菌发酵液对几种植物病原真菌的抑制效果
将OOT-47发酵5d后的无菌发酵液与PDA培养基以1：10(v:v)均匀混合，用量杯量取10mL的混合培养基倒入培养皿中，使得培养皿中OOT-47无菌发酵液的浓度为100mL/L，用6mm打孔器分别打取6种病原真菌的菌饼，接种于含无菌发酵液的PDA平板中央，以加入相同体积的无菌水作为对照，重复三次。将培养皿倒置于28℃的培养箱中培养5天，观察病原菌生长情况。按以下公式计算抑制率：
实验结果表明，OOT-47的无菌发酵液同样对不同植物上的多种病原真菌具有较强的抑制活性(图5)，对葡萄座腔菌、拟茎点霉菌、果生刺盘孢菌、立枯丝核菌、灰梨孢菌、美澳型核果链核盘菌6种病原真菌的抑制率分别为：77.18％、75.89％、78.03％、76.28％、79.18％、82.33％
6、OOT-47浓缩后的无菌发酵液对几种植物病原真菌的抑制效果。
收集1L菌株OOT-47发酵5天后的无菌发酵液，在121℃的条件下加热20min，使得发酵液中的抑菌蛋白、抑菌脂肽类物质失活。先取100mL无菌发酵液加入到250mL的分液漏斗中，再加入100mL纯度为99.9％的乙酸乙酯作为萃取剂，上下震荡30s使其充分接触，然后静置3min待两种液体完全分层，从下方收集无菌发酵液，从上方收集萃取后的乙酸乙酯。每100mL无菌发酵液重复萃取3次。收集萃取1L无菌发酵液后的乙酸乙酯，每次取200mL加入到旋转蒸发仪中，调节温度为45℃，转速为80rpm。待所有乙酸乙酯旋转蒸发完后加入10mL无菌水超声溶解所得的物质，得到浓度为100mL/L的浓缩发酵液。再将溶解后的发酵液稀释10倍使其浓度为10mL/L，与PDA培养基1：10(v:v)均匀混合使得培养基中浓缩发酵液的最终有效浓度为1mL/L。用量杯量取10mL含浓缩发酵液的PDA倒入培养皿中，将上述六种病原真菌的6mm菌饼接种于培养基中央，倒置于28℃的培养箱中。以加入同体积比无菌水的PDA培养皿作为对照，每种病原真菌重复三次。五天后观察病原菌生长情况。按以下公式计算抑制率：
实验结果表明，OOT-47灭活并浓缩后的无菌发酵液仍然具有抑菌活性，与未处理无菌发酵液的抑菌活性相比较，更低浓度的浓缩无菌发酵液表现出了更好的抑菌活性，1mL/L的浓缩无菌发酵液对葡萄座腔菌、拟茎点霉菌、果生刺盘孢菌、立枯丝核菌、灰梨孢菌、美澳型核果链核盘菌6种病原真菌的抑制率分别为：83.45％、89.27％、84.22％、86.97％、98.62％、91.23％(图6)。
7、OOT-47抑菌代谢产物的鉴定。
使用顶空固相微萃取结合气质联用仪检测OOT-47的代谢产物，取8mL浓缩无菌发酵液移入到15mL萃取瓶中，加入2.5g NaCl和搅拌磁子，然后快速密封。将SPME萃取纤维头在GC-MS进样口于250℃老化至无杂峰。把样品瓶置于固相微萃取装置上，设定温度为80℃，搅拌速度1000rpm。将样品瓶放在萃取装置预热15min后，用SPME萃取头通过瓶盖插入样品的顶空部分，推出纤维头，萃取头高于样品上表面约1.0cm，顶空萃取40min，抽回纤维头，从样品瓶中拔出萃取头。再将萃取头插入GC-MS进样口，推出纤维头，于250℃解析3min，进样分析。其中色谱和质谱条件如下：
色谱条件：色谱柱为HP-5MS(30.0m×250μm,0.25μm)；色谱柱起始温度40℃保持5min，以5℃/min的速度升至120℃，以10℃/min的速度升至260℃保持10min；气化室温度250℃；传输线温度260℃；载气He；载气流量1mL/min；不分流。
质谱条件：EI源；电子能量70eV；离子源温度230℃；四极杆150℃；扫描模式为Scan；扫描质量范围为35～500u。
对检测出的成分采用MS数据库NIST11、保留时间、保留指数进行定性分析；使用面积归一化法定量分析，即以鉴定成分峰面积占所有鉴定成分面积之和的百分比作为定量结果，公式如下：
其中：Ci——某一鉴定成分含量；
Ai——对应某一鉴定成分的峰面积；
n——表示鉴定成分总数。
从OOT-47代谢物的质谱图中可以看出，在质荷比为206处出现了离子峰，峰面积为15.56％(图7)。这与2,4-二叔丁基苯酚(CAS：96-76-4，质荷比：206.17)的相似度为99.92％，因此可以确定在OOT-47的代谢物中存在2,4-二叔丁基苯酚，也说明OOT-47在代谢过程中可以产生该物质，其含量大约为15.56％。
8、OOT-47代谢产物2,4-二叔丁基苯酚对几种植物病原真菌的抑制效果
称取2,4-二叔丁基苯酚标准品1g溶解于装有10mL二甲基亚砜的15mL离心管中，得到浓度为1×105μg/mL的2,4-二叔丁基苯酚母液。使用梯度稀释法，将母液稀释至浓度为50μg/mL的2,4-二叔丁基苯酚药液。将浓度为50μg/mL的2,4-二叔丁基苯酚药液按照1：10(v:v)与PDA培养基混合，使得培养基中的2,4-二叔丁基苯酚浓度为5μg/mL。量取10mL的含药PDA倒入培养皿中，将上述六种病原真菌的6mm菌饼接种于培养基中央，倒置于28℃的培养箱中。以加入同体积比无菌水的PDA培养皿作为对照，每种病原真菌重复三次。五天后观察病原菌生长情况。按以下公式计算抑制率：
实验结果表明，OOT-47代谢过程中产生的2,4-二叔丁基苯酚具有极强的抑菌活性，使用浓度为5μg/mL的2,4-二叔丁基苯酚药液处理葡萄座腔菌、拟茎点霉菌、果生刺盘孢菌、立枯丝核菌、灰梨孢菌、美澳型核果链核盘菌6种病原真菌后，抑制率分别为：71.68％、68.97％、75.19％、68.42％、70.16％、73.66％(图8)。
9、OOT-47代谢产物对猕猴桃软腐病的活体防治效果
选取健康的猕猴桃果实60个，先用无菌水冲洗果实表皮，然后在75％乙醇中浸泡1min，再用无菌水冲洗3次，对其表皮进行消毒处理。待其自然风干后，用无菌注射器在每个果实中部刺出6mm×6mm的圆形区域，将用6mm的打孔器打取的葡萄座腔菌菌饼接种至刺伤部位，将接种病原真菌的猕猴桃放入无菌保险盒中，培养于温度为25℃、相对湿度为75％的人工气候培养箱中。在接种12h后，分别配置以下三种溶液：T1)100mL/L发酵液、T2)1mL/L浓缩发酵液、T3)10μg/mL的2,4-二叔丁基苯酚药剂。均匀喷施于猕猴桃果实上，每个浓度5个猕猴桃果实。喷施无菌水的作为对照处理，每个处理重复三次。重新放回人工气候培养箱中，分别在处理后的第6天、第9天和第12天观察果实发病情况。按以下公式计算治疗率：
猕猴桃果实在第6天、第9天和第12天后，使用T1溶液处理后治疗率分别为74.56％、64.71％、57.91％；使用T2溶液处理后治疗率分别为81.23％、78.21％、63.11％；使用T3溶液处理后治疗率为100％、100％、100％。该实验结果表明，三种处理对猕猴桃软腐病的发生都有治疗效果，其中5μg/mL的2,4-二叔丁基苯酚处理后的果最好，完全未出现发病情况(图9)。
10、序列表：
Seq No.1贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的16S rDNA序列、gyrA序列及gyrB序列
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从猕猴桃根际土壤中分离出来的生防细菌OOT-47，其对猕猴桃、百香果、烟草、水稻、李子等多种作物上的多种病原真菌具有良好的抑制活性，经形态学和分子生物学鉴定该菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。除此以外，在菌株OOT-47的代谢产物中检测出了一种稳定且高效的抑菌活性物质——2,4-二叔丁基苯酚，低浓度情况下对葡萄座腔菌、拟茎点霉菌、果生刺盘孢菌、立枯丝核菌、灰梨孢菌、美澳型核果链核盘菌还能有很好的抑菌活性。活体实验表明，被葡萄座腔菌侵染的猕猴桃使用10μg/mL 2,4-二叔丁基苯酚药液处理后，并未出现发病情况。说明生防菌株贝莱斯芽孢杆菌OOT-47在农业病害生物防控方面具有极好的应用价值和商业开发潜力。
上述技术方案首次筛选获得贝莱斯芽孢杆菌OOT-47。经实验证明，贝莱斯芽孢杆菌OOT-47、贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的发酵物、贝莱斯芽孢杆菌OOT-47的代谢产物2,4-二叔丁基苯酚能够有效控制植物多种病害的发生，降低植物被多种病原真菌侵染的可能性。表明该株菌在植物病害的生物防治领域具有广阔的应用前景，并在生物防治药剂的开发方面同样有着极高的发展价值。
本发明未详述之处，均为本领域技术人员的公知技术。
本发明的实施例是为了示例和描述起见而给出的，而并不是无遗漏的或者将本发明限于所公开的形式。很多修改和变化对于本领域的普通技术人员而言是显而易见的。选择和描述实施例是为了更好说明本发明的原理和实际应用，并且使本领域的普通技术人员能够理解本发明从而设计适于特定用途的带有各种修改的各种实施例。

Claims (6)

1.一株贝莱斯芽孢杆菌，其特征在于：所述菌株为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis) OOT-47，保藏编号为：CCTCC NO: M2022988，保藏日期为：2022年6月27日。
2.一株如权利要求1所述的贝莱斯芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述菌株对葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）、拟茎点霉菌（Phomopsis cauloides）、果生刺盘孢菌（Colletotrichum fructicola）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、灰梨孢菌（Pyricularia grisea）及美澳型核果链核盘菌（Monilinafructicola）有拮抗作用。
3.根据权利要求2所述的贝莱斯芽孢杆菌的应用，其特征在于：将菌株OOT-47的发酵液喷施于作物果实上、叶面上或灌根。
4.根据权利要求2所述的贝莱斯芽孢杆菌的应用，其特征在于：在发酵条件下，贝莱斯芽孢杆菌OOT-47产生广谱高效抑菌物质2,4-二叔丁基苯酚。
5.根据权利要求4所述的贝莱斯芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述发酵条件为：发酵培养基为营养肉汤培养基(Nutrient broth, NB)、PH为7.2、温度为30℃、转速为200 rpm的条件下培养48 h~72 h。
6.根据权利要求4所述的贝莱斯芽孢杆菌的应用，其特征在于：所述2,4-二叔丁基苯酚在贝莱斯芽孢杆菌OOT-47无菌发酵液中的含量为10%~20%。
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