CN116194107A

CN116194107A - 用于治疗covid-19的甲基硫堇鎓化合物

Info

Publication number: CN116194107A
Application number: CN202180043994.3A
Authority: CN
Inventors: C·M·魏锲克; M·阿拉斯托; M·P·马赞尼
Original assignee: Wista Laboratories Ltd
Current assignee: Wista Laboratories Ltd
Priority date: 2020-05-05
Filing date: 2021-04-30
Publication date: 2023-05-30
Also published as: AU2021269001A1; MX2022013885A; GB202006659D0; EP4146224A1; CA3181391A1; TW202200151A; JP2023524127A; KR20230014709A; WO2021224145A1; BR112022022527A2; US20230165876A1

Abstract

本发明提供了使用甲基硫堇鎓化合物治疗受试者的COVID‑19的方法。

Description

用于治疗COVID-19的甲基硫堇鎓化合物

技术领域

本发明总体上涉及用于治疗COVID-19的方法和材料。

背景技术

2019年新型SARS冠状病毒2型(SARS-CoV-2)的出现引发了持续的严重肺炎样疾病的全球大流行，此疾病被命名为冠状病毒病2019(COVID-19)。COVID-19在全球范围内构成了重大的医疗和经济威胁。

对已知药物的重新定位可以显著加快COVID-19疗法的开发和部署，因此分析可以抑制病毒复制的已知药物受到关注。例如Riva等人("A Large-scale Drug RepositioningSurvey for SARS-CoV-2Antivirals."bioRxiv(2020))概述了大约12,000种临床阶段或FDA批准的小分子，并报告了在测试条件下抑制病毒复制的30种已知药物的鉴定，其中六种被表征为细胞剂量-活性关系，并示出他们认为可能与患者的治疗剂量相匹配的有效浓度。这些药物包括PIKfyve激酶抑制剂阿匹莫德，半胱氨酸蛋白酶抑制剂MDL-28170、Z LVGCHN2、VBY-825、和ONO 5334，以及CCR1拮抗剂MLN-3897。

然而，这种类型的筛选只关注了SARS-CoV-2的单一属性(此处：Vero E6细胞中的病毒复制)，而在筛选中使用的化合物的浓度(此处：5μM)可能不是检测所有有希望的候选对象的最佳选择，或可能不会预测适当的体内治疗剂量。

此外，据报道，COVID-19对如老年人等弱势患者特别有害。许多潜在的疗法可能不适合在上述患者组中使用。

由此可见，提供可在老年人群中安全使用的化合物或化合物组合可以靶向COVID-19病因学的多种属性，并且，提供适用于上述化合物的剂量信息能为本领域提供有用的贡献。

发明内容

本发明提供了某些氢甲基硫堇盐(以下称为“LMTX”)作为治疗COVID-19的单一疗法或组合疗法(与氯喹/羟氯喹)的用途。根据本文的公开内容，可以预期的是，这种治疗可以提供许多有益的或协同的治疗效果。

如下文所解释，初步的未经证实的研究表明MTC(甲基硫堇鎓氯化物，亚甲基蓝)可能有能力降低报告符合COVID-19的症状(Henry等，2020年)的弱势患者的发病率。

LMTX系统地递送相同的MT(甲基硫堇)部分，但比MTC更适合口服和静脉内使用，因为它改进了吸收、红细胞渗透和深层室分布(Baddeley等，2015)。LMTX可以在远低于MTC的剂量下使用，因此耐受性更好。

独立于MTC，抗疟疾化合物氯喹和相关羟氯喹目前正在全球范围内被研究，以评估它们作为针对SARS-CoV-2的抗病毒药物的有效性。

然而，氯喹的治疗比率很窄，以至于当血浆浓度接近氯喹药理活性所需的微摩尔范围时，会产生显著的电生理效应。据报道，巴西一项对COVID-19病例进行的两剂量二磷酸氯喹试验(https://doi.org/10.1101/2020.04.07.20056424)因心脏死亡而中止。

LMTX具有更加良好的安全性。诸位发明人已经证实，LMTX未展现出心脏毒性。

本说明书公开了LMTX不仅可为受试者提供减少病毒载量的好处，而且还能复合可以在COVID-19中直接或间接提供支持活性的血红素，另外还可以减轻由肺部的炎症、高氧和机械损伤造成的对肺内皮的损害。再加上LMTX不具有限制了氯喹治疗剂量和持续时间的心脏毒性，无论是单独使用还是与该药剂组合使用，LMTX都可以提供更安全的治疗方法。

先前描述LMTX盐一般用于治疗病毒性疾病(参见WO2007/110627和WO2012/107706)，但未用于治疗COVID-19或其他冠状病毒。

因此，在一方面，公开了一种对受试者的COVID-19进行治疗性治疗的方法，

所述方法包括向所述受试者施用含有甲基硫堇鎓(MT)的化合物，

其中所述含有MT的化合物是具有下式的LMTX化合物：

其中H_nA和H_nB(如果存在)中的每一个均是质子酸，所述质子酸可以是相同或不同的，并且其中p＝1或2；q＝0或1；n＝1或2；(p+q)×n＝2，

或其水合物或溶剂化物。

优选地，所述施用每日向所述受试者提供10与30mg MT之间的总日口服剂量，任选地分成2个或更多个剂量，或所述施用每日向所述受试者提供10与25mg MT之间的总日静脉内(IV)剂量。

在一个实施方案中，所述受试者是已被诊断为患有COVID-19的人。所述方法可以包括进行所述诊断。

在一方面，公开了一种对受试者的COVID-19进行预防治疗的方法，

其中所述含有MT的化合物是如上文定义的LMTX化合物，或其水合物或溶剂化物。

优选地，所述施用每日向所述受试者提供10与30mg MT之间的总日口服剂量，任选地分成2个或更多个剂量，或所述施用每日向所述受试者提供10与25mg MT之间的总日静脉内(IV)剂量，

在一个实施方案中，所述受试者是已被评估为疑似或可能患有COVID-19的人，例如，与一个或多个COVID-19病例密切接触的受试者；至少65岁的受试者；居住在疗养院、护理院或长期护理机构中的受试者；具有相关潜在医疗病症的受试者。

如本文所解释，适合于本发明的组合目的的MT的适当口服剂量为大约10-30mg/MT天。

所述总日剂量可以是12与27mg之间。

所述总日剂量可以是14与20mg之间。

所述总日剂量可以是15与18mg之间。

所述总日剂量可以是约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、或30mg。

在一个实施方案中，剂量为16mg MT，与约27mg LMTM相当。也就是说，这与AD中最佳活性所需的相同。

可以将所述化合物的总日剂量以每天两次或每天三次的分次剂量施用。

如下所解释，当将MT分次剂量以更大数量的剂量/天来施用时，与每日单次给药或更少数量的剂量/天相比，可能希望在所列举的范围内使用更小的总量。

对于需要呼吸支持的受试者(或原本可能不易于口服摄取LMTX的患者)，可优选静脉内施用LMTX。

一个每日IV剂量是每天给予受试者10与25mg之间的MT。

所述总日IV剂量可以是约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25mg。

优选的总日IV剂量是每天给予受试者14与20mg之间的MT。

给药可以是通过连续输注，或是间歇给药(例如，每天2、4或6次，每次持续几分钟)。

例如，与间歇给药(每6小时经5分钟施用4.8mg或大约20mg/天)相比，更小的剂量对于连续输注(例如0.6mg/hr或大约14mg/天)是优选的。

中间型施用的中间剂量可以由本领域的技术人员根据本文的公开内容从这些值中推导出来。

LMTX化合物

优选地，所述LMT化合物是WO2007/110627或WO2012/107706中所述类型的“LMTX”化合物。

因此，所述化合物可以选自下式的化合物、或其水合物或溶剂化物：

H_nA和H_nB(如果存在)中的每一个均是质子酸，所述质子酸可以是相同或不同的。

“质子酸”意指在水溶液中的质子(H⁺)供体。因此，质子酸A^-或B^-是共轭碱。因此，质子酸在水中的pH小于7(即水合氢离子的浓度大于10^-7摩尔/升)。

在一个实施方案中，盐是具有下式的混合盐，其中HA和HB是不同的单质子酸：

/>

然而，优选地所述盐不是混合盐，并且具有下式：

其中H_nX中的每一个均是质子酸，如二质子酸或单质子酸。

在一个实施方案中，盐具有下式，其中H₂A是二质子酸：

优选地，所述盐具有下式，其是双单质子酸：

可以存在于本文使用的LMTX化合物中的质子酸的例子包括：

无机酸：氢卤酸(例如，HCl、HBr)、硝酸(HNO₃)、硫酸(H₂SO₄)

有机酸：碳酸(H₂CO₃)、乙酸(CH₃COOH)、甲磺酸、1,2-乙二磺酸、乙磺酸、萘二磺酸、对甲苯磺酸，

优选的酸是单质子酸，并且盐是双(单质子酸)盐。

优选的MT化合物是LMTM：

重量因子

无水盐具有大约477.6的分子量。基于LMT核心的分子量是285.1，在本发明中使用该MT化合物的重量因子是1.67。“重量因子”意指含有纯MT的化合物相对于其含有的MT的重量的相对重量。

可以计算例如本文的MT化合物的其他重量因子，并且可以由此计算相应的剂量范围。

其他示例性LMTX化合物如下。还示出了它们的分子量(无水)和重量因子：

/>

因此，本文所述的关于MT的剂量加以必要的修改应用于这些含有MT的化合物，如根据其分子量进行调整。

积累因子

如本领域技术人员所理解的，对于给定的日剂量，更频繁的给药可以导致更大的药物积累。

因此，在所要求保护的发明的某些实施方案中，MT化合物的总日给药量可以当更频繁给药时(例如每天两次[bid]或每天三次[tid])相对更低，或当每天一次[qd]给药时更高。

治疗和预防

如本文所用，在治疗病症的上下文中的术语“治疗”通常涉及治疗和疗法，无论是对人还是动物(例如，在兽医应用中)，其中实现了一些希望的治疗作用，例如病症进展的抑制，并且包括进展速率的降低、进展速率的停止、病症的消退、病症的改善和病症的治愈。

如本文所用的术语“治疗有效量”涉及本发明的化合物或者包含所述化合物的材料、组合物或剂型的这样的量，所述量当根据所希望的治疗方案施用时有效产生与合理的效益/风险比相称的一些所希望的治疗作用。本发明诸位发明人已经证明，就本发明的疾病而言，MT化合物的治疗有效量可以比本领域迄今所理解的低得多。

本发明还涵盖作为预防措施的治疗。

如本文所用的术语“预防有效量”涉及本发明的化合物或者包含所述化合物的材料、组合物或剂型的这样的量，所述量当根据所希望的治疗方案施用时有效产生与合理的效益/风险比相称的一些所希望的预防作用。

在本说明书的上下文中，“预防”不应被理解为限制为完全成功，即完全保护或完全预防。相反，在本发明上下文中的预防是指在检测到有症状的病症之前施用的措施，其目的是通过帮助延迟、减轻或避免此特定病症而保持健康。

组合治疗和单一疗法

术语“治疗”包括“组合”治疗和疗法，其中组合了针对COVID-19的两种或更多种治疗或疗法(例如，依序或同时)。这些可以是对证治疗或疾病缓解治疗。

具体组合将由医生决定。

在组合治疗中，药剂(即，如本文所述的MT化合物+一种或多种其他药剂)可以同时或依序施用，并且可以以单独变化的剂量方案和通过不同途径施用。例如，当依序施用时，可以以紧密的间隔(例如，经5-10分钟的时间段)或以更长的间隔(例如，相隔1、2、3、4或更多个小时，或在需要时甚至更长时间段的间隔)施用所述药剂，精确的剂量方案与所述一种或多种治疗剂的性质相称。

本发明的组合治疗的一个例子是其中所述LMTX治疗与氯喹或羟氯喹组合。

氯喹或羟氯喹的剂量可由医生选择。所提出的建议用于SARS-CoV-2感染的方案包括每日两次口服给予400mg负荷剂量的硫酸羟氯喹，然后每日两次给予200mg维持剂量的所述药物，持续4天。一种替代方案是提前5天每日两次给予500mg的磷酸氯喹(参见例如Yao等人“In Vitro Antiviral Activity and Projection of Optimized Dosing Design ofHydroxychloroquine for the Treatment of Severe Acute Respiratory SyndromeCoronavirus 2(SARS-CoV-2)”Clinical Infectious Diseases,2020年3月9日。

可以将所述含有MT的化合物和所述氯喹或羟氯喹彼此相隔12小时内依序施用；或者可以对受试者用一种药剂进行一个持续时间段的预治疗，之后用另一种药剂治疗；或者可以将这些药剂同时施用，任选地在单个剂量单位内。

如本文所述，关于组合疗法，本发明提供了增强作为MT化合物的第一化合物的治疗有效性的方法，所述第一化合物的剂量是本文针对COVID-19的治疗所述的，所述方法包括向所述受试者施用第二化合物，所述第二化合物是氯喹或羟氯喹。

本发明进一步提供了以本文在另外包括用第二化合物进行的治疗的治疗方案中在治疗受试者的COVID-19的方法中所述的剂量的第一化合物(其为MT化合物)，所述第二化合物为氯喹或羟氯喹。

本发明进一步提供了化合物(其为氯喹或羟氯喹)增强本文在受试者的COVID-19的治疗中所述的剂量的MT化合物的治疗有效性的用途。

本发明进一步提供了本文所述剂量的MT化合物和氯喹或羟氯喹，其用于本发明的组合方法。

本发明进一步提供了作为氯喹或羟氯喹的化合物，其用于增强本文在受试者的COVID-19的治疗中所述的剂量的MT化合物的治疗有效性的方法。

本发明进一步提供了本文所述剂量的第一化合物(其为MT化合物)与第二化合物的组合在制造用于治疗COVID-19的药物中的用途，所述第二化合物为氯喹或羟氯喹。

本发明进一步提供了本文所述剂量的MT化合物在制造用于治疗COVID-19的药物中的用途，所述治疗进一步包括使用第二化合物，所述第二化合物为氯喹或羟氯喹。

本发明进一步提供了氯喹或羟氯喹用于制造用于治疗受试者的COVID-19的药物的用途，所述治疗进一步包括使用本发明所述剂量的MT化合物和COVID-19。

其他组合治疗包括所述MT化合物和以下中的一种或多种：洛匹那韦-利托那韦；阿比多尔；阿奇霉素、瑞德西韦、法匹雷韦、抗炎治疗如雅美罗(托珠单抗)、皮质类固醇如地塞米松和其他治疗如恢复期血浆(参见例如Thorlund,Kristian等人,"A real-timedashboard of clinical trials for COVID-19."The Lancet Digital Health(2020)。

在其他实施方案中，治疗是“单一疗法”，也就是说未将含有MT的化合物与另一种活性剂组合(在上面讨论的含义内)用于治疗受试者的COVID-19。

治疗持续时间

对于COVID-19的治疗，基于低剂量MT化合物的治疗方案将优选地延长持续的时间段以适于疾病和症状。具体的持续时间将由医生决定。

例如，治疗的持续时间可以是：

1至14天，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14天。

1至4周，例如1、2、3或4周。

对于预防，治疗可以是持续进行的。

在所有情况下，治疗持续时间通常将服从医生的建议和评论。

药物剂型

本发明的MT化合物，或包含所述MT化合物的药物组合物，可以口服(或通过鼻胃管)施用于受试者/患者的胃中或静脉内施用。

典型地，在本发明的实践中，所述化合物将以包含所述化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的组合物的形式来施用。

在一些实施方案中，所述组合物是药物组合物(例如，配制品、制剂、药物)，其包含如本文所述的化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。

如本文所用的术语“药学上可接受的”涉及在合理的医学判断范围内适合用于与所讨论的受试者(例如，人)的组织接触使用而没有过多的毒性、刺激、过敏反应、或其他问题或并发症的与合理的益处/风险比相称的化合物、成分、材料、组合物、剂型等。在与配制品的其他成分相容的意义上，每种载剂、稀释剂、赋形剂等也必须是“可接受的”。

在一些实施方案中，所述组合物是药物组合物，其包含至少一种如本文所述的化合物，以及一种或多种本领域技术人员熟知的其他药学上可接受的成分，包括但不限于药学上可接受的载剂、稀释剂、赋形剂、佐剂、填充剂、缓冲剂、防腐剂、抗氧化剂、润滑剂、稳定剂、增溶剂、表面活性剂(例如，润湿剂)、掩蔽剂、着色剂、调味剂和甜味剂。

在一些实施方案中，所述组合物进一步包含其他活性剂，例如其他治疗剂或预防剂。

合适的载剂、稀释剂、赋形剂等可以在标准药学文献中找到。例如，参见《药物添加剂手册》，第2版(编辑：M.Ash和I.Ash)，2001年(Synapse Information Resources，Inc.，Endicott，纽约，USA)，《雷明顿药学》，第20版，Lippincott,Williams&Wilkins出版社，2000年；《药物辅料手册》，第2版，1994年。

本发明的一个方面使用包含如本文所述的MT化合物(例如，通过本文所述的方法获得或可通过本文所述的方法获得；具有如本文所述的纯度等)和药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂的剂量单位(例如，药物片剂或胶囊)。

“MT化合物”虽然以相对低的量存在，但为所述剂量单位的活性剂，也就是说，旨在对于COVID-19具有治疗或预防作用。相反，所述剂量单位中的其他成分将是无治疗活性的，例如，载剂、稀释剂或赋形剂。

因此，优选地，除了与本文所述的组合治疗有关之外，所述剂量单位中将不存在其他活性成分，不存在旨在对于有待使用所述剂量单位所针对的障碍具有治疗或预防作用的其他药剂。

在一些实施方案中，所述剂量单位是片剂。

在一些实施方案中，所述剂量单位是胶囊。

在一些实施方案中，所述胶囊是明胶胶囊。

在一些实施方案中，所述胶囊是HPMC(羟丙基甲基纤维素)胶囊。

所述组合物中MT的适当量将取决于受试者每天施药的频率。

示例性剂量单位可含有10至30mg MT。

在一些实施方案中，所述量是约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30mg MT。

使用本文所述或解释的重量因子，本领域技术人员可以选择适当量的含有MT的化合物以用于口服配制品。

如以上所解释的，LMTM的MT重量因子是1.67。由于使用单一或简单分量的活性成分是方便的，因此非限制性示例性LMTM剂量单位可以包括17mg等。

在一个实施方案中，提供了一种剂量单位药物组合物，其包含约17、27、34mg等的LMTM。

受试者、患者和患者组

在一些实施方案中，所述受试者可以是已被诊断为患有(“确诊”)COVID-19的人，或者其中所述方法包括进行所述诊断。

可以通过本领域已知的任何方法进行COVID-19的诊断。例子包括实验室检测SARS-CoV-2病毒的存在-例如，直接基于病毒本身的存在(例如，使用RT-PCR和等温核酸扩增，或抗原蛋白的存在)，或间接通过响应于感染产生的抗体进行检测。其他诊断的方法包括胸部X线检查，任选地与如下所述的特征症状相结合(参见例如Li,Xiaowei等人,“Molecular immune pathogenesis and diagnosis of COVID-19.”Journal ofPharmaceutical Analysis(2020)；Fang,Yicheng等人,“Sensitivity of chest CT forCOVID-19:comparison to RT-PCR.”Radiology(2020):200432；Chan,Jasper Fuk-Woo等人,“Improved Molecular Diagnosis of COVID-19by the Novel,Highly Sensitive andSpecific COVID-19-RdRp/Hel Real-Time Reverse Transcription-PCR AssayValidated In Vitro and with Clinical Specimens.”Journal of ClinicalMicrobiology 58.5(2020)；Tang,Yi-Wei等人,“The laboratory diagnosis of COVID-19infection:current issues and challenges.”Journal of Clinical Microbiology(2020)。

在一些实施方案中，所述受试者是基于情境或其他数据被评估为有COVID-19风险或可能患有COVID-19的人。

有特定COVID-19风险的人包括：

●与一个或多个COVID-19病例有密切接触的人；

●65岁以上的人；

●居住在疗养院、护理院或长期护理机构的人；

●有相关潜在医学病症的，特别是没有得到很好控制情况下的所有年龄段的人，

包括：

○患有慢性肺部疾病或中至重度哮喘的人

○患有严重心脏病症的人

○免疫功能受损的人

■如本领域中已知的，许多情况可导致人的免疫功能受损，包括癌症治疗、吸烟、骨髓或器官移植、免疫缺陷、控制不佳的HIV或AIDS、以及长期使用皮质类固醇和其他免疫弱化药物

○患有重度肥胖症的人(体重指数(BMI)为40或更高)

○患有糖尿病的人

○经历透析的患有慢性肾脏疾病的人

○患有肝脏疾病的人

表明患有潜在(“可能”)COVID-19的症状或情况包括：

1)患者有急性呼吸道感染(以下中的至少一种突然发作：咳嗽、发烧、呼吸急促)，并且没有其他病因可完全解释临床表现，并且在症状发作前14天期间，有在被报告COVID-19在当地或社区传播的国家/地区旅行或居住史；

或者

2)患者患有任何急性呼吸系统疾患，并且在症状发作前的最近14天内曾与确诊或可能患有COVID-19的病例有过密切接触；

或者

3)患者患有严重急性呼吸系统感染(SARI)(发烧和至少一种呼吸系统疾病的病征/症状(例如咳嗽、发烧、呼吸急促))，并且需要住院治疗，并且没有其他病因可完全解释临床表现。

如本文所用的“密切接触”定义为：

●与COVID-19病例同住一户的人；

●与COVID-19病例有过直接身体接触(例如握手)的人；

●无保护措施直接接触COVID-19病例的传染性分泌物(例如咳嗽飞沫、徒手触摸用过的纸巾)的人；

●与COVID-19病例有过2米内并>15分钟的面对面接触的人；

●与COVID-19病例同处于封闭环境(例如教室、会议室、医院候诊室等)中15分钟或更长时间，并且距离小于2米的人；

●医护人员(HCW)或其他为COVID-19病例提供直接护理的人，或在没有穿戴推荐的个人防护装备(PPE)或PPE可能损坏的情况下处理COVID-19病例样本的实验室工作人员；

●在飞机上坐在COVID-19病例两个座位(任何方向)以内的接触者、旅行同伴或提供护理的人，以及在指示病例所在的飞机机舱内服务的机组人员(如果症状的严重程度或病例的移动程度表明暴露范围更广，则坐在整个机舱内的乘客或飞机上的所有乘客可被视为密切接触)。

与可能或确诊病例的流行病学联系可发生在所考虑的疑似病例发病前14天的时间段内。

鉴于AD和COVID-19风险人群(例如护理院人群)之间的人群特征的重叠，以及在该高危人群中使用LMTX的安全性，本发明的治疗原则上可以结合用于AD的治疗来进行。

所述患者可以是成年人，并且本文所述的基于群体的剂量以该基础(典型体重50至70kg)为前提。如果希望，则可以通过使用受试者重量因子将相应剂量用于在此范围之外的受试者，因而受试者体重除以60kg以提供所述个体受试者的乘积因子。

标签、说明书和试剂盒

本文所述的单位剂量组合物(例如，低剂量的含有MT的化合物+任选地其他成分，或更通常用于AD治疗的MT组合物)可以在标记的小包中连同它们的使用说明书一起提供。

在一个实施方案中，所述包装是瓶子，诸如在制药领域中熟知的。典型的瓶子可以由药典级HDPE(高密度聚乙烯)制成，其具有儿童防护式HDPE推锁封口，并且含有存在于小袋或小罐中的硅胶干燥剂。瓶子本身可以包括标签，并且包装在纸板容器中，其中具有给我们的说明书和任选的标签的另外副本。

在一个实施方案中，包装或小包是泡罩包装(优选地具有铝腔和铝箔)，因此基本上不透水。在这种情况下，包装可以包装在纸板容器中，其具有给我们的说明书以及在容器上的标签。

所述标签或说明书可以提供关于COVID-19或SARS-CoV-2的信息。

治疗方法

如上所解释的，本发明的另一方面涉及COVID-19的治疗方法，其包括向需要治疗的患者施用预防或治疗有效量的如本文所述的化合物(优选处于药物组合物的形式)。

在疗法方法中的用途

本发明的另一方面涉及如本文所述的化合物或组合物，其用于通过疗法对人体或动物体的COVID-19进行治疗的方法。

在制造药物中的用途

本发明的另一方面涉及如本文所述的MT化合物或组合物在制造用于治疗COVID-19的药物中的用途。

在一些实施方案中，所述药物是组合物，例如，如本文所述的低剂量单位剂量组合物。

氧化MT化合物和还原MT化合物的混合物

本发明中使用的含有LMT的化合物可以包括在合成过程中作为“杂质”的氧化(MT⁺)化合物，并且还可以在合成后氧化(例如，自动氧化)以产生相应的氧化形式。因此，如果不是不可避免的话，则可能的是，包含本发明化合物的组合物将含有作为杂质的至少一些相应的氧化化合物。例如，“LMT”盐可以包含高达15％，例如10％至15％的MT⁺盐。

当使用混合MT化合物时，MT剂量可以使用存在的化合物的分子量因子容易计算。

盐和溶剂化物

虽然本文所述的含有MT的化合物本身是盐，但它们也可以以混合盐的形式(即，本发明的化合物与另一种盐组合)提供。此类混合盐旨在涵盖在术语“及其药学上可接受的盐”中。除非另有规定，否则对特定化合物的提及还包括其盐。

本发明的化合物也可以以溶剂化物或水合物的形式提供。术语“溶剂化物”在本文中以常规含义使用，是指溶质(例如化合物、化合物的盐)和溶剂的复合物。如果溶剂是水，则溶剂化物可以方便地称为水合物，例如，一水合物、二水合物、三水合物、五水合物等。除非另有说明，否则对化合物的任何提及还包括溶剂化物及其任何水合物形式。

当然，化合物的盐的溶剂化物或水合物也涵盖在本发明中。

本文引用了许多专利和出版物，以便更全面地描述和公开本发明以及本发明所属领域的现状。这些参考文献中的每一个通过引用以其整体并入本文的公开内容中，其程度如同每个单独的参考文献被具体和单独地指示通过引用并入。

贯穿本说明书及其后的权利要求，除非上下文另有要求，否则词语“包含(包括)(comprise)”以及变型如“包含(包括)(comprises)”和“包含(包括)(comprising)”应当被理解为暗示包括所述整体或步骤或者整体或步骤的组，但不排除任何其他整体或步骤或者整体或步骤的组。

必须指出，如在说明书和所附权利要求书所使用，单数形式“一个/一种(a/an)”和“所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另外清楚地规定。因此，例如，对“一种药物载体”的提及包括两种或更多种这此类载体的混合物等。

范围在本文中通常表达为从“约”一个特定值和/或至“约”另一个特定值。当表达这样的范围时，另一个实施方案包括从一个特定值和/或至另一个特定值。类似地，当通过使用先行词“约”将值表示为近似值时，将理解特定值形成另一个实施方案。

本文中的任何子标题仅出于便利而被包括，并且不应被解释为以任何方式限制本公开文本。

现在将参考以下非限制性附图和实施例进一步描述本发明。本领域技术人员根据这些内容将会想到本发明的其他实施方案。

本文引用的所有参考文献的公开内容，因为可以由本领域技术人员使用来实施本发明，因此通过交叉引用特此具体地并入本文。

附图说明

图1：高亲和力LMT/MT⁺-血红素相互作用的计算化学模型。

参考实施例1-作为抗病毒药的甲基硫堇鎓氯化物(MTC)

MTC(甲基硫堇鎓氯化物，亚甲基蓝)自1876年以来一直可用作药物。它在世界卫生组织的主要药物清单上，这是卫生系统中最安全和最有效的药物的清单。

已有多项研究调查了MTC的抗病毒活性。一项这样的研究得出结论，在36名登记的丙型肝炎患者中，有23名患者在连续50天接受每日130mg/MTC(即每日98mg/MT当量)的剂量方案后，病毒计数下降70％与100％之间。12名患者(52％)的病毒载量减少了0.7与1个对数之间，6名患者(26％)的病毒载量减少了1与2个对数之间并且5名患者(22％)的病毒得到清除。这些未经证实的结果表明，MTC可能具有治疗丙型肝炎的有用活性(Wood等人,2006；Mehta等人,2006)。

已被提出的MTC在体内发挥或增强抗病毒作用的一种潜在机制是通过核酸嵌入(参见Jamison,J.M.等人,“RNA–Intercalating Agent Interactions:in vitroAntiviral Activity Studies.”Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1.6(1990):333-347)。

进一步的支持来自于光活化的MTC用于血液制品病毒灭菌的常规用途。易受MTC治疗影响的病毒包括HIV-1和HIV-2、疱疹、丙型肝炎和披膜病毒(Muller-Breitkreutz 1998,Mohr,1999)。

在最近的一份报告中，对2,500名脆弱的患者的群组进行了SARS-CoV-2感染率的回顾性检查，所述患者接受了口服剂量为每日315mg/MTC(每日236mg/MT当量)的MTC作为其常规癌症化疗方案的一部分。这一群组来自具有经受硫辛酸/羟基柠檬酸代谢治疗的30,000个人的数据库。截至2020年3月27日，接受MTC的患者中没有人具有符合COVID-19的临床症状(Henry等人,2020)。然而，这篇论文没有报告未接受MTC的患者中的病例频率。然而，基于这一结果，据报道，作者已经在临床诊断为COVID-19的患者中启动了一项MTC的开放前瞻性单中心研究，剂量为每日150mg/MTC(每日113mg/MT当量)(https://guerir-du- cancer.fr/essai-ouvert-testant-le-bleu-de-methylene-dans-le-covid-19/)。

参考实施例2-作为抗病毒药的氯喹/羟氯喹

一些研究已经表明氯喹在体外对SARS-CoV有效(Vincent 2005,Keyaerts 2004)。最近，还表明氯喹对SARS-CoV-2有效(Liu等人,2020)。法国的研究人员发表了一项研究，其中他们用羟氯喹治疗了20名COVID-19患者。他们的结论是，所述药物显著降低了鼻拭子中的病毒载量(Gautret等人,2020)。

在对现有可得证据的综述中(Cortegiani等人,2020年)，作者得出结论，在COVID-19患者中临床研究使用氯喹是合理的，尽管这应该限制在伦理批准的试验或在受监测的紧急使用未登记干预措施框架下。然而，根据一项新闻报道，最近的一项研究显现没有发现对晚期病例有任何益处，因为在接受或不接受氯喹治疗的患者中，死亡率是相似的。(https://www.scmp.com/news/china/science/article/3080055/anti-malarial-treatment-hailed-tr ump-has-no-benefit-coronavirus)。

另有报道称，通过抗炎症特性和淋巴细胞减少症的恢复，可能会产生有益的效果。(Tang,Wei等人,“Hydroxychloroquine in patients with COVID-19:an open-label,randomized,controlled trial.”medRxiv(2020)。

研究人员还报告了在减少肺炎恶化、改善肺部影像表现、促进转为病毒阴性状态和缩短病程方面的积极治疗效果，但数据不可用(Gao等人,2020)。中国国家卫健委(National Health Commission for the People’s Republic of China)的专家审查了现有数据，并建议将氯喹纳入即将出台的指导方针中。

抗疟疾化合物氯喹/羟氯喹对SARS-CoV-2病毒具有潜在活性的机制尚不清楚。

实施例3-作为COVID-19的单一疗法的氢甲基硫堇盐

甲基硫堇鎓(MT)部分可以以氧化MT⁺形式和还原LMT形式存在：

MTC是所述氧化MT⁺形式的氯盐。它需要通过肠道中的一种噻嗪染料还原酶活性转化为LMT形式，以允许吸收并分配到包括红细胞和脑在内的深层室中(Baddeley等人,2015)。类似地，在分离的红细胞制剂中，MT+需要转化为LMT以允许细胞摄取(May等人,2004)。

WO 2007/110627公开了某些3,7-二氨基-10H-吩噻嗪鎓盐，其有效地作为用于治疗疾病(包括阿尔茨海默病和诸如额颞叶痴呆(FTD)的其他疾病，以及一般的病毒性疾病)的药物或前药。当考虑MTC时，这些化合物也呈“还原”或“无色”形式。这些无色甲基硫堇鎓化合物在本文中称为“LMTX”盐。

WO 2012/107706描述了特性优于以上列出的LMTX盐的其他LMTX盐，包括无色甲基硫堇鎓双(氢甲磺酸盐)(LMTM)(WHO INN名称：氢甲基硫堇)：

LMTX和LMTM化合物的合成可根据这些公开案中描述的方法或类似于那些的方法进行。

LMTM正在开发用于治疗阿尔茨海默病(AD)和相关的神经退行性障碍(Gauthier等人,2016；Wilcock等人,2018；Schelter等人,2019；Shiells等人,2020)。一项针对AD的全球性临床试验目前正在进行中，使用的剂量(16mg/天)显示对AD的临床和神经影像终点具有最佳活性(Schelter等人,2019)。

MTC先前是AD潜在治疗的焦点，因为它能够阻止微管相关蛋白τ蛋白的病理性聚集，τ蛋白能形成神经原纤维缠结并导致AD的临床痴呆(Wischik等人,1996；Harrington等人,2015)。一项针对MTC的2期剂量探索研究确定138mg/天为最低有效剂量(Wischik等人,2015)。

由于从LMTM中吸收LMT的效率要高得多，所以发现抗痴呆作用所需的最小有效剂量为8mg/天，并且发现16mg/天是最佳有效剂量(Schelter等人,2019)。这归因于LMTM的脑:血浆比率提高多于60倍，这是由于LMTM被快速摄取到红细胞中并分布到深层室组织导致的。游离血浆LMT经受高效的首过代谢，将其转化为无活性的缀合物并且是血浆中的优势物质。当静脉内施用时，红细胞的LMTM摄取率也提高了20倍(Baddeley等人,2015)。

应当指出的是，一旦被细胞吸收，LMT将与MT+保持平衡，所述平衡取决于细胞中还原当量的可用性。

WO2018/019823中讨论了LMT化合物在低剂量下具有活性的潜力以及剂量-反应的明显缺乏，并且假设在τ蛋白聚集抑制剂靶标处的活性可能存在临界阈值，并且在高于1μM的脑浓度下，更高剂量的作用可能趋于平稳或甚至变成负值。WO2020/020751表明0.5-1.0ng/mL的血浆浓度对于治疗AD是理想的。

显现具有抗病毒活性的MTC口服剂量的范围为每日100-236mg/MT。使用AD中的活性数据作为比较的基础，我们计算出这相当于每日12-27mg/MT范围内的LMTM剂量。这与AD中最佳活性所需的剂量范围(每日16mg/MT当量)相同。这表明，临床抗病毒和抗痴呆药理活性需要作用部位处相似浓度的LMT。我们预期Henry等人报告的高剂量MTC(每日236mg/MT当量)不太可能被充分吸收(Baddeley等人,2015)，这与更低的LMTM剂量要求一致。因此，每日16mg/MT当量的口服剂量是COVID-19患者中抗SARS-CoV-2活性的合适治疗。

使用在先前3期试验中曾口服接受LMTM的1475名患有阿尔茨海默病或行为变异型额颞叶痴呆的患者的PK参数(另参见WO2020/020751)，预测了达到0.5-1.0ng/mL所期望谷浓度所需的静脉内LMTM剂量。

通过将单独值乘以0.75(以解释假定为口服配制品的75％的系统生物利用度)来将口服给药后的这些PK参数扩展为IV给药。然后使用一个简单的两室模型来预测不同给药方案下药物浓度随时间的变化。

当通过持续输注给予时，预计0.6mg/hr的输注速度导致95.5％的受试者实现超过0.5ng/mL的稳态浓度，其中8.8％的受试者的稳态浓度超过1.0ng/mL。

因此，当经5分钟以间歇性推注剂量施用时，预计每六小时4.4mg的剂量导致95.4％的受试者的稳态谷浓度超过0.5ng/mL，其中6.2％的受试者的稳态浓度超过1.0ng/mL。

已经完成三项LMTM的3期双盲对照研究(患有轻度和轻度至中度AD的受试者各一项，以及患有bvFTD的受试者的一项)。AD研究的结果已经发表(Gauthier等人,2016；Wilcock等人,2018；Shiells等人,2020)。这些研究提供了在LMTM 16mg/天剂量下可能预期的更常见的不良事件的概述。在这三项研究中，1897名受试者接受了至少一种剂量的LMTM。其中，860名受试者接受了8mg/天的LMTM，以及1037名受试者接受了150至250mg/天的更高剂量中至少一种剂量的LMTM。研究参与者的平均年龄为：患有AD的受试者为71岁(范围最高达89岁)，并且患有bvFTD的受试者为63岁(范围最高达79岁)。

暴露于8mg/天的LMTM的总人年是995.2人年，并且暴露于150至250mg/天的更高LMTM剂量的总人年是988.6人年。百分之六(6％)的受试者因不良事件而停用8mg/天的LMTM；在更高剂量组中，因不良事件而停用的受试者比例更高(14％)。

被认为至少可能与以8mg/天剂量给予的LMTM相关的最常见的治疗中出现的不良事件(TEAE)是胃肠的(大多是腹泻和恶心)、泌尿生殖系统的(大多是尿频和尿失禁)、血液系统的(贫血、叶酸减少和叶酸缺乏)、以及与神经系统有关的(大多是疲劳、头晕、头痛、激越、和失眠)。在研究的更高LMTM剂量(150至250mg/天)下，在以下情况的发生方面存在剂量相关的增加：贫血相关TEAE(除了贫血、叶酸减少和叶酸缺乏之外，还有血红蛋白减少)、胃肠道事件(包括呕吐和腹泻)、以及泌尿生殖系统事件(除了尿频和尿失禁之外，还包括排尿困难、排尿急、和明显的尿路感染)。在跌倒和神经系统/精神疾病事件(激越除外)中剂量反应的缺乏表明，它们与受试者的基础状况而非治疗相关。

血液学参数显示出RBC计数、血红蛋白和血细胞比容呈剂量依赖性下降，其中与显示出最小变化的8mg/天LMTM相比，在更高剂量组中下降幅度更大。基于生命体征测量、ECG或C-SSRS，没有观察到具有临床意义的趋势。

因此，总而言之，LMTM的安全性已经在1期和3期试验中在超过2400名患者中进行了研究，重复剂量高达450mg/天。即使在测验的最高剂量下，LMTM的安全性仍然是良好的，并与进一步的临床开发相一致。

有证据表明，氯喹和LMT的作用方式均与抗疟疾剂相似(Atamna等人,1996；Blank等人,2012)。血红蛋白氧化形成metHb是寄生虫成熟所需的，依赖于使得铁卟啉环无毒。寄生虫通过从高铁血红素(haematin)(卟啉-Fe3⁺)中形成疟色素(haemazoin)聚合物来实现这一点。氯喹和LMT均与高铁血红素形成复合物，阻止其聚合，从而使寄生虫在消化食物泡内的血红蛋白后，高铁血红素仍对寄生虫保持毒性。

结合血红素的SARS-CoV-2蛋白可能会损害血液携氧能力这一提议最近受到了关注。这一点在一份(非同行评审)计算建模报告(Liu和Li,2020)中进行了讨论，该报告后来在一份(非同行评审)评论(Read,2020)中被证明存在技术缺陷。

然而，存在一些证据支持在COVID-19中对于红细胞的作用。猕猴在感染SARS-CoV-2后显示出红细胞数量下降(Munster等人,2020)。据报道，SARS-CoV-2的易感性显现是由血型决定的(Yang等人,2020)。在Chen等人(2020)对武汉COVID-19患者的报告中，患者的血清铁蛋白升高，并且总胆红素升高。铁蛋白水平的升高可能是铁从血红素中解离的结果(Sassa,2006)，而升高的胆红素与无效的红细胞生成有关(Trier等人,2013)。然而，铁蛋白水平升高也可能是巨噬细胞活化综合征的结果，并且COVID-19患者的溶血显现与流感感染患者相比更少(Emmenegger等人,2002；Huang等人,1981)。Abrahams(2020)在另一篇(非同行评审)评论文章中认为，SARS-CoV-2的某些血液学特征类似于急性卟啉症。这可以解释在卟啉症(Pischik和Kauppinen,2015；Sassa,2006)和高达50％的COVID-19患者(Poggiali等人,2020；Zhao等人,2020；Mao等人,2020)两者中可见到的脑脊髓交感神经系统和神经学的症状。

自20世纪30年代以来，MTC一直用于治疗高铁血红蛋白症和氰化物中毒，并且至今仍是这些病症的标准治疗方法。在高铁血红蛋白症中，血红素铁处于铁(Fe³⁺)态，而不是正常的亚铁态(Fe²⁺)，并且因此不能有效地结合氧气(Curry等人,1982)。MTC典型地以1-2mg/kg的剂量静脉内给予，并与高铁血红蛋白症的快速临床改善和消退有关。

LMT在疟疾和高铁血红蛋白症中的作用模式非常相似。在这两种情况下，作为MTC给予的甲基硫堇的氧化MT⁺形式首先在细胞表面还原为LMT，作为进入红细胞的先决条件(May等人,2004)。然后是LMT，作为血红素位点处的活性物质，与卟啉结合并允许电子转移，将Fe³⁺转化为Fe²⁺，在此过程中生成MT⁺(Yubisui等人,1980；Blank等人,2012)。然后，MT⁺被能通过红细胞内的糖酵解进行持续再生的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和其他还原等价物转化回LMT。图1所示的计算化学模型提供了解释高亲和力LMT/MT⁺-血红素相互作用动力学的结构基础。LMT氮在

内朝向血红素卟啉的Fe³⁺(图1中的虚线)。然后这种紧密的相互作用促进了电子从LMT向Fe³⁺的转移，从而将其还原为Fe²⁺，并由此形成MT⁺。

本发明的诸位发明人已经注意到，与血红蛋白的卟啉核心相互作用的能力对于氯喹和LMT是共有的。已知氯喹可诱导与组织结合的卟啉的释放，并且已表明在向迟发性皮肤卟啉病(PCT)患者施用氯喹后，最初的事件是结合的肝卟啉的释放和快速消除(Scholnick等人,1973)。

尽管如此，诸位发明人提出，除了直接的抗病毒作用之外，作为LMTX递送的LMT与血红素的复合可以提供对COVID 19病因的另一种干预。

LMT的氧化还原电势接近于零，所述氧化还原电势介于线粒体电子传递链中复合物I和复合物IV的电势之间。因此，LMT有能力通过充当电子穿梭物来增强线粒体的功能(Atamna&Kumar 2010)与此一致的是，LMTM最近被证实在τ蛋白转基因小鼠模型中可增强脑复合物IV的活性(Riedel等人,2020)这种活性转化为抗局部缺血活性，所述抗局部缺血活性在单侧结扎的大脑局部缺血大鼠脑模型中限制了脑梗塞的程度(Rodriguez等人,2014)。

诸位发明人提出，由于在给予LMTX后，LMT迅速分布到深层室中，因此在氧气递送有限的情况下，它可用于增强许多组织中的线粒体功能。因此，这可以对COVID-19的病因提供进一步的干预。

除了增强线粒体功能外，口服给予MTC还证明可增加线粒体的生物合成(Stack等人,2014)。线粒体生物合成的增强与Nrf2水平的增加的能力有关(Gureev等人,2016)。Rojode la Vega和同事们在对研究文献的广泛综述中认为，Nrf2对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ADI/ARDS)中的氧化和炎性肺损害发挥重要的保护作用(Rojo de al Vega等人,2016)。他们呈现的证据显示，预期Nrf2的药理活化不仅可改善由原发感染引起的肺泡损害，而且还可改善由通气所致肺损伤(VILI)导致的机械和高氧损伤引起的肺泡损害。口服给予30mg/kg的MTC显示出可增加脑中Nrf2的水平(Stack等人,2014)。与在红细胞中相同，氧化MT⁺需要被还原为LMT，才能被肺内皮细胞摄取(Merker等人,1997)。

诸位发明人提出，由于LMT具有在ADI/ARDS中诱导Nrf2的潜力，LMTX可以用于改善肺泡损害。因此，这可以对COVID-19的病因提供进一步的干预。

实施例4-用于治疗COVID-19的氢甲基硫堇盐

基于上述基本原理，LMTX类别的化合物可以在单独治疗(包括预防性治疗)以及与氯喹(或其类似物，例如羟氯喹)组合治疗COVID-19患者中提供益处。

综上所述，LMTX可以在以下方面为受试者提供益处：(1)减少病毒载量；(2)与可以在COVID-19中直接或间接提供支持活性的血红素复合；(3)减轻由肺部的炎症、高氧和机械损伤造成的对肺内皮的损害。

此外，LMTM不具有限制了氯喹/羟氯喹治疗剂量和持续时间的心脏毒性，因此无论是单独治疗还是与所述药剂组合治疗，都可以提供更安全的治疗方法。

适合于所有这些目标的MT的适当剂量为每日大约10-30mg/MT p.o.，例如每日15或16mg/MT当量，如AD中最佳活性所需的。

对于IV给药，优选是向受试者每日给予大约10至25mg的MT，更优选4至20mg的MT。

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