CN116183570A - 一种多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，属于多色成像技术领域，包括：光源合束模块，用于对m个激光光源发出的激光光束进行合束形成合束光，每个所述激光光源发出的激光光束的波长不同，所述m≥2，且为正整数；光片压缩模块，用于对所述合束光进行压缩得到照明光片，并基于导光柱将所述照明光片以斜光片照射至样本上，所述导光柱的输入端与输出端的中心线与所述照明光片的光轴同轴，且所述导光柱的输入端与输出端位于不同介质中；成像模块，用于获取样本被所述斜光片照射激发出的部分荧光信号图像。本发明实现了大面积厚组织切片样本的三维成像。

Description

一种多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统

技术领域

本发明涉及多色成像技术领域，特别涉及一种多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统。

背景技术

一直以来，传统光学荧光显微镜的分辨率、成像视野和成像速度相互制约，难以兼顾，同时照明光的光毒性会影响样本的生物活性，造成荧光信号淬灭。

传统宽场荧光显微镜成像时，物镜焦平面上下的样本也会被照亮，从而导致引入额外的光毒性，在对厚样本进行三维成像时，对每一样本层扫描时的激发光都会将整个轴向的样本照亮，多次扫描后会造成荧光信号的淬灭；激光扫描共聚焦荧光显微镜使用点扫描方法成像，为达到较快的成像速度，光束照射每个点的时间很短，则需要更强的激发功率，与传统宽场荧光显微镜相比，光漂白和光毒性更加严重；双光子激光扫描显微镜使用近红外激光照明，能降低对样本的光毒性，并且能穿透更深的样本，但是双光子的信号弱、采集速度慢、成本高，不适合对大面积厚样本进行成像。因此，上述照明方式的显微镜不适合大面积厚样本的扫描。

斜光片荧光显微镜与传统的宽场荧光显微镜相比，只有在探测物镜焦平面的样本会被光片照亮，光毒性较低；相比于激光扫描共聚焦和双光子激光扫描显微镜等点扫描显微镜，光片荧光显微镜成像速度更快。因此，斜光片荧光显微镜作为成像视野更大、分辨率更高、成像速度更快的三维显微成像工具，受到越来越多的关注。

但是，在斜光片荧光显微镜技术中，通常采用在光路中插入一片柱透镜将光斑压缩再经照明物镜聚焦的方式产生光片，产生光片的照明物镜一般浸泡在生化液体里，因此，照明光路中最后一个柱透镜与样本之间至少存在两种介质，光程会随样本的移动而发生变化，造成光片焦点漂移。同时，不同波长的激光光片由于色差原因导致其焦点之间的距离超过其瑞利距离，不能无缝切换不同波长的照明光，大面积厚样本的多色扫描将受到限制。

发明内容

为了解决现有的斜光片荧光显微镜装置无法实现大面积厚组织切片样本的大视野、高速、高分辨率多色三维显微成像的技术问题，本发明实施例提供了一种多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统。所述技术方案如下：

多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统包括：

光源合束模块，用于对m个激光光源发出的激光光束进行合束形成合束光，所述m≥2，且为正整数；

光片压缩模块，用于对所述合束光进行压缩得到照明光片，并基于导光柱将所述照明光片以斜光片照射至样本上，所述导光柱的输入端与输出端的中心线与所述照明光片的光轴同轴，且所述导光柱的输入端与输出端位于不同介质中；

成像模块，用于获取样本被所述斜光片照射激发出的部分荧光信号图像。

进一步地，所述光源合束模块包括m个激光光源、合束光路及滤波器，所述合束光路包括m-1个二向色镜，m-1个所述二向色镜沿第一激光光束传播方向布置，m-1个所述二向色镜按照工作波长顺序排列，其余的每个激光光束通过一个所述二向色镜汇入所述第一激光光束形成合束光，所述合束光通过滤波器。

进一步地，所述多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统还包括色差消除模块，所述色差消除模块包括：

色散单元，用于对所述合束光进行色散分束，每个所述色散分束后的激光光束均通过一扩束单元和一焦点调节单元；

扩束单元，用于对述色散分束后的激光光束进行扩束，所述扩束后的激光光束为平行光束；

焦点调节单元，用于调节所述照明光片中各个激光光束的焦点位置，使得使得所述照明光片中各个激光光束的焦点位置重合；以及，

合束单元，用于将所述已调节焦点位置的激光光束进行合束，得到合束光。

进一步地，所述扩束单元包括沿激光光束传播方向依次设置的第一凸透镜和第二凸透镜，所述第一凸透镜的后焦点和所述第二凸透镜的前焦点重合，所述第一凸透镜的焦距小于所述第二凸透镜的焦距。

进一步地，所述焦点调节单元包括沿激光光束传播方向依次设置的第一柱透镜和第二柱透镜，所述第一柱透镜和所述第二柱透的焦距相等。

进一步地，所述色散单元为等边色散棱镜组。

进一步地，所述多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统还包括：

成像预览模块，用于预览样本被所述合束光照明激发的宽场荧光信号图像，以便从所述宽场荧光信号图像中确定目标区域，并基于所述目标区域调整所述斜光片的观测位置；

所述色差消除模块还包括分束单元，用于将所述合束光分为两束，分别输入至所述光片压缩模块和成像预览模块。

进一步地，所述成像预览模块包括照明光路和成像预览光路，所述照明光路包括依次设置在合束光传播方向上的耦合物镜、光纤、准直物镜、第三凸透镜、第四凸透镜、第一反射镜、第一二向色镜及聚焦物镜。

进一步地，所述光纤为方形多模光纤。

进一步地，所述照明光路包括依次设置在合束光传播方向上的第二反射镜、第三凸透镜、第四凸透镜、第一反射镜、第一二向色镜及聚焦物镜。

本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果至少包括：

本发明提供了一种多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，将不同波长的激光光束进行合束，并通过光束压缩得到照明光片，最终通过导光柱将照明光片以斜光片照射至样本上，导光柱的输入端和输出端的中心线与照明光片的光轴同轴，且输入端和输出端位于不同的介质中，可以确保照射光程不受样本移动的影响，实现对厚组织切片样本进行大面积成像扫描而光片不离焦，同时通过导光柱便于调节斜光片照射样本的角度。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统的功能模块图；

图2是本发明的导光柱的工作原理图；

图3是本发明的光源合束模块的光路结构图；

图4是本发明的光片压缩模块的光路结构图；

图5是本发明的成像模块的光路结构图；

图6是本发明的色差消除模块的功能模块图；

图7是本发明的色差消除模块的光路结构图；

图8是本发明的成像预览模块的光路结构图；

图9是本发明的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统的光路结构图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

如图1所示，本发明实施例提供了一种多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，包括光源合束模块10、光片压缩模块20和成像模块30。

光源合束模块10用于对m个激光光源发出的激光光束进行合束形成合束光，m≥2，且为正整数。

光片压缩模块20，用于对合束光进行压缩得到照明光片，并基于导光柱将照明光片以斜光片照射至样本上，其中，导光柱的输入端与输出端的中心线与照明光片的光轴同轴，且导光柱的输入端与输出端位于不同介质中。

图2为本发明的导光柱的工作原理图，导光柱的输入端和输出端的中心线与照明光片的光轴同轴，且输入端和输出端位于不同的介质中，照明光片由在空气介质中的输入端注入，由浸泡在样本池的液体中的输出端输出，聚焦于待测样本上。

在一般的斜光片荧光成像中，尽管最后一个柱透镜与样品之间的距离是固定的。但是光在空气走的路程和液体中走的路程发生变化，也会导致光程发生变化，造成光片焦点漂移。本申请中照明光片通过半插入液体中的导光柱传播，用一个玻璃“固体”抵消掉液体波动引起的光程差，确保最后一个柱透镜到样本之间的光程不受样本移动的影响，实现对厚组织切片样本进行大面积成像扫描而光片不离焦。进一步地，成像模块30用于获取样本被斜光片照射激发出的部分荧光信号图像。

本发明实施例提供的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，将不同波长的激光光束进行合束，并通过光束压缩得到照明光片，最终通过导光柱将照明光片以斜光片照射至样本上，导光柱的输入端和输出端的中心线与照明光片的光轴同轴，且输入端和输出端位于不同的介质中，可以确保照射光程不受样本移动的影响，实现对厚组织切片样本进行大面积成像扫描而光片不离焦，同时通过导光柱便于调节斜光片照射样本的角度。

进一步地，光源合束模块10包括m个激光光源、合束光路及滤波器，合束光路包括m-1个二向色镜，m-1个所述二向色镜沿第一激光光束传播方向布置，m-1个所述二向色镜按照工作波长顺序排列，其余的每个激光光束通过一个所述二向色镜汇入所述第一激光光束形成合束光，所述合束光通过滤波器，最后一个二向色镜后设置一个滤波器，用来控制不同波长的激光光束的通断，从而实现多色照明功能。

可以理解的，激光光源可以是大于2的任意个数，激光光束的波长可以相同也可以不同，波长不同可以覆盖更大的成像范围。参照图3，为本发明中光源合束模块10的光路结构图，以4个激光光源为例，激光波长分别为405nm、470nm、532nm和640nm。

合束光路包括3个二向色镜DM1、DM2、DM3，4个激光光束通过5个反射镜M1、M2、M3、M4、M5依次进入二向色镜，二向色镜DM1、DM2、DM3按照工作波长降序(或升序)排列，4个激光光源发出的激光光束的波长不同，按照波长从小到大的顺序依次排列为激光光束1、2、3、4，并且激光光束4的波长大于二向色镜DM1工作波长，激光光束3的波长小于二向色镜DM1工作波长，大于二向色镜DM2工作波长，激光光束2的波长小于二向色镜DM2工作波长，大于二向色镜DM3工作波长，激光光束1的波长小于二向色镜DM3工作波长。

在一些实施例中，可以使用反射镜对激光光束的方向进行调节。如图3所示，波长最大的激光光束4通过反射镜M1和M5后进入二向色镜DM1，激光光束3被反射镜M2及二向色镜DM1反射进入二向色镜DM2，同理，激光光束2被反射镜M3及二向色镜DM2反射进入二向色镜DM3，激光光束1被反射镜M4及二向色镜DM3反射进入滤波器。四个激光光束经过3个二向色镜后形成一合束光，通过在二向色镜DM3后的滤波器，可以控制不同波长的激光光束的通断，从而实现多色照明功能。

可选地，滤波器可以是AOTF(Acousto-optic tunable filter，声光可调谐滤波器)。AOTF是一种固体的电调带通滤波器，它利用了各向异性介质中的声光原理，能够与多种激光光源(混合气体激光器，激光二极管……)或者宽带光源(氙灯，卤灯)一起使用，从入射光源中选择、透射出单一波长的光。通过调节射频信号的幅度，能达到调节透射光(滤出光)强度的目的，能获得很高的消光比。

进一步地，参照图4，为本发明光片压缩模块20的光路结构图，柱透镜CL9的焦距为f3，柱透镜CL10的焦距为f4，f3大于f4，柱透镜CL9的后焦点和柱透镜CL10的前焦点重合且两柱透镜的旋转角度一致，输入光通过柱透镜CL9和CL10实现横向压缩，然后通过反射镜M16进入柱透镜CL11，柱透镜CL11的旋转角度与前两个柱透镜相垂直，将光束进行纵向压缩产生照明光片。柱透镜CL11后设置有导光柱，导光柱的输入端和输出端的中心线与照明光轴同轴，且输入端和输出端位于不同的介质中，照明光片通过导光柱传播，照射至样本上。

参照图5，为本发明成像模块30的光路结构图，由物镜O1探测收集样本受斜光片激发的荧光信号，Filter(滤色片)过滤被反射的激光，最终通过管镜TL1将荧光信号聚焦在Camera1(相机1)上，得到样本的部分荧光信号图像。

进一步地，由于不同波长的激光光束存在色差，因此，不同波长的激光光束通过滤波器后的输出光折射角不同，不利于实现多色照明。因此，多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统还包括色差消除模块40，用于对合束光进行扩束，并对扩束后的激光光束进行焦点调节后再合束，消除最终照明光片聚焦时的色差。

参照图6，色差消除模块40具体包括：

色散单元401，用于对所述合束光进行色散分束，每个所述色散分束后的激光光束均通过一扩束单元和一焦点调节单元；

扩束单元402，用于对所述色散分束后的激光光束进行扩束，所述扩束后的激光光束为平行光束；

焦点调节单元403，用于调节所述扩束后的激光光束的焦点位置，使合束后的激光光束的焦点重合；以及

合束单元404，用于将所述已调节焦点位置的激光光束进行合束，得到合束光。

具体地，通过色散单元401将滤波器输出的合束光进行色散分束再对色散分束后的每一光束进行操作后，可以消除不同波长的激光光束之间的色差及焦点不重合的问题。

通过扩束单元402对色散分束后的每一激光光束进行扩束，每个扩束单元都包括沿激光光束传播方向依次设置的第一凸透镜和第二凸透镜，第一凸透镜的后焦点和第二凸透镜的前焦点重合，且第一凸透镜的焦距小于第二凸透镜的焦距。将每一激光光束扩束到相同半径，便于激光光束的调节。

通过焦点调节单元403调节照明光片中各个激光光束的焦点位置，使得照明光片中各个激光光束的焦点在样品上重合。具体地，每个焦点调节单元都包括沿激光光束传播方向依次设置的第一柱透镜和第二柱透镜，第一柱透镜和第二柱透的焦距相等，两个柱透镜的角度与最终照明光片压缩的方向平行。

在实际使用中，第一柱透镜和第二柱透镜焦点重合，构成4f系统。合束单元404将焦点位置调节后的激光光束再次进行合束，得到合束光。合光片压缩模块20对合束光进行压缩得到照明光片，并基于导光柱将照明光片以斜光片照射至样本上。通过调节激光光束光路中第一柱透镜和第二柱透镜的位置，调节照明光片中该激光光束的焦点位置，使得照明光片中各个激光光束的焦点在样品上重合。

照明光片中各个激光光束焦点位置重合，方便照明光片以束腰部分穿过样品，束腰部分面积更小，能量密度更高，激发信号强度也更高，能够减少图像噪声，使得成像图像信噪比高，显著提高成像质量。同时，焦点位置重合配合AOTF的滤波，方便在同一位置对不同波长的激光光束进行成像原位。

在一些实施例中，色散单元401可以为等边色散棱镜组。例如，该棱镜组包括1～3个60度等边色散棱镜，棱镜之间的间距为15～30mm，合束光依次穿过色散棱镜进行色散分束。单一棱镜色散效果较小，需要较长的光路才能把光束分开，通过选用棱镜组可以增强色散的效果。

在一些实施例中，所述扩束单元包括沿激光光束传播方向依次设置的第一凸透镜和第二凸透镜，所述第一凸透镜的后焦点和所述第二凸透镜的前焦点重合，所述第一凸透镜的焦距小于所述第二凸透镜的焦距。

在一些实施例中，所述焦点调节单元包括沿激光光束传播方向依次设置的第一柱透镜和第二柱透镜，所述第一柱透镜和所述第二柱透的焦距相等。

参照图7，为本发明色差消除模块40的光路结构图，光源合束模块输出的合束光通过Prism(棱镜组，图中未示出)被色散分束为4个光束，经由4个反射镜M6、M7、M8、M9分别进入每一光束的扩束单元，每一扩束单元包含2个凸透镜，以最左侧光束为例，凸透镜L1焦距为f1，凸透镜L2焦距为f2，f1小于f2，凸透镜L1的后焦点和凸透镜L2的前焦点重合，光束通过2个凸透镜后的截面直径放大的倍率为f2/f1，扩束后的光束仍然以平行光的形式传播进入焦点调节单元，即柱透镜CL1和CL2，柱透镜CL1和CL2的焦距相等，通过调整其中一个柱透镜的位置，可以对各光束最终产生的光片焦点位置进行调节。同样地，对另外3个光束，基于两个凸透镜进行扩束，基于两个柱透镜调整焦点的位置，最终使4个光束对应的光片焦点位置重合，实现多色照明。对4个光束分别进行扩束及焦点调节后，通过反射镜M10、M11、M12、M13、M14以及二向色镜DM4、DM5、DM6，将不同波长的激光光束再次进行合束，得到合束光。

进一步地，因为斜光片显微镜的视场为样本的切面，无法通过斜光片显微镜进行预览，难以直接找到感兴趣的目标区域进行成像，因此，多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统还包括成像预览模块50，用于预览样本被合束光照明激发的宽场荧光信号图像，以便从宽场荧光信号图像中确定目标区域，并基于目标区域调整斜光片的观测位置。

参照图7，在色差消除模块40中还包括一分束单元，用于将合束光分为两束，分别通过反射镜M15输入至光片压缩模块20、通过反射镜M16输入至成像预览模块50。可选地，分束单元为一分束立方体(Beamsplitters Cube，BC)。

具体地，成像预览模块50包括照明光路和成像预览光路，照明光路包括依次设置在合束光传播方向上的耦合物镜、光纤、准直物镜、第三凸透镜、第四凸透镜、第一反射镜、第一二向色镜及聚焦物镜，合束光经耦合物镜耦合进光纤。光纤的输出光由准直物镜准直后通过第三凸透镜和第四凸透镜进行扩束，然后由第一反射镜反射至第一二向色镜，最后通过聚焦物镜聚焦后照射至样本，激发样本的荧光信号。

在一些实施例中，该光纤为多模光纤，输出光场为方形的多模光场，光场能量分布比较均匀，有利于宽场显微镜的照明。

优选地，该光纤的纤芯为方形，方形光纤的光场分布均匀，视场中被激发的信号强度比较均衡，同时，也可以与显微镜的视场配合，减少光毒性对样品的损伤。

进一步地，在成像预览光路中，聚焦物镜收集样本受激发产生的荧光信号，并通过第一二向色镜的反射进入滤色片，利用滤色片过滤反射上来的激光，最终由管镜将荧光信号聚焦在相机上，实现宽场成像。

参照图8，为本发明成像预览模块50的光路结构图，首先通过耦合物镜O2将合束光耦合进光纤，光纤的输出光由准直物镜O3准直后通过凸透镜L9和凸透镜L10进行扩束，然后由第一反射镜M17反射至第一二向色镜DM7，第一二向色镜DM7透射合束光，反射样本的荧光信号，合束光由聚焦物镜O4聚焦后照射样本，样本上的荧光分子被激发发出荧光信号，经第一二向色镜DM7反射至Filter(滤色片)，利用滤色片过滤部分反射上来的激光，最终由管镜TL2将荧光信号聚焦在Camera2(相机2)上。

在一些实施例中，可以用第二反射镜代替耦合物镜、光纤和准直物镜，合束光经第二反射镜反射后直接进入凸透镜L9和凸透镜L10进行扩束。

如图9所示，为本发明多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统的光路结构图，多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统包括光源合束模块10、色差消除模块40、光片压缩模块20、成像模块30、成像预览模块50。本发明的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统工作时，光源合束模块10将不同波长的激光光束合束为合束光入射到色差消除模块40中，色差消除模块40将不同波长的激光光束扩束到相同的大小并通过柱透镜消除最终照明光片聚焦时的色差，输出光束经过光片压缩模块20形成具有一定入射角度的照明光片，并由导光柱将照明光片以斜光片照射至样本上激发样本的荧光信号，由成像模块30探测成像。同时，将照明光片输入至成像预览模块50中，用于预览样本的宽场荧光信号图像，找到样本中感兴趣的区域，从而有针对性地利用斜光片显微镜进行成像。在实际使用时，通过成像预览模块的宽场俯视确定感兴趣的区域坐标，并测量物镜O1和聚焦物镜O4的焦点之间的距离，确定斜光片的观测位置。

依照图9的光路结构图，利用ZEMAX设计仿真光路，分别测试柱透镜CL11选用不同焦距时，不同波长的光片的厚度和瑞利距离。当柱透镜CL11选用50mm焦距的消色差胶合柱透镜，波长为405nm、470nm、532nm、640nm的激光光片的厚度和瑞利距离分别是1.29μm和13.02μm、1.49μm和14.98μm、1.69μm和16.93μm、2.03μm和20.82μm。当柱透镜CL11选用100mm焦距的消色差胶合柱透镜，波长为405nm、470nm、532nm、640nm激光光片的厚度和瑞利距离分别是2.58μm和51.96μm、2.99μm和59.88μm、3.38μm和67.70μm、4.07μm和81.57μm。当柱透镜CL11选用200mm焦距的消色差胶合柱透镜，波长为405nm、470nm、532nm、640nm激光光片的厚度和瑞利距离分别是5.18μm和207.93μm、5.98μm和239.54μm、6.77μm和270.80μm、8.15μm和326.25μm。

根据ZEMAX仿真结果可知，在自由空间中利用柱透镜组压缩光束产生光片，将光片直接聚焦到待测样本上，可以兼顾光片的瑞利距离和厚度，即同时保证了光片视野和轴向分辨率，且最后一个用于产生光片的柱透镜焦距远大于照明物镜，柱透镜与样本之间具有较大操作空间。

以上仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，其特征在于，包括：

光源合束模块，用于对m个激光光源发出的激光光束进行合束形成合束光，所述m≥2，且为正整数；

光片压缩模块，用于对所述合束光进行压缩得到照明光片，并基于导光柱将所述照明光片以斜光片照射至样本上，所述导光柱的输入端与输出端的中心线与所述照明光片的光轴同轴，且所述导光柱的输入端与输出端位于不同介质中；

成像模块，用于获取样本被所述斜光片照射激发出的部分荧光信号图像。

2.根据权利要求1所述的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，其特征在于，所述光源合束模块包括m个激光光源、合束光路及滤波器，所述合束光路包括m-1个二向色镜，m-1个所述二向色镜沿第一激光光束传播方向布置，m-1个所述二向色镜按照工作波长顺序排列，其余的每个激光光束通过一个所述二向色镜汇入所述第一激光光束形成合束光，所述合束光通过滤波器。

3.根据权利要求1所述的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，其特征在于，所述多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统还包括色差消除模块，所述色差消除模块包括：

色散单元，用于对所述合束光进行色散分束，每个所述色散分束后的激光光束均通过一扩束单元和一焦点调节单元；

扩束单元，用于对所述色散分束后的激光光束进行扩束，所述扩束后的激光光束为平行光束；

焦点调节单元，用于调节所述照明光片中各个激光光束的焦点位置，使得所述照明光片中各个激光光束的焦点在样品上重合；以及，

合束单元，用于将所述已调节焦点位置的激光光束进行合束，得到合束光。

4.根据权利要求3所述的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，其特征在于，所述扩束单元包括沿激光光束传播方向依次设置的第一凸透镜和第二凸透镜，所述第一凸透镜的后焦点和所述第二凸透镜的前焦点重合，所述第一凸透镜的焦距小于所述第二凸透镜的焦距。

5.根据权利要求3所述的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，其特征在于，所述焦点调节单元包括沿激光光束传播方向依次设置的第一柱透镜和第二柱透镜，所述第一柱透镜和所述第二柱透的焦距相等。

6.根据权利要求3所述的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，其特征在于，所述色散单元为等边色散棱镜组。

7.根据权利要求1-6任一项所述的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，其特征在于，所述多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统还包括：

成像预览模块，用于预览样本被所述合束光照明激发的宽场荧光信号图像，以便从所述宽场荧光信号图像中确定目标区域，并基于所述目标区域调整所述斜光片的观测位置；

所述色差消除模块还包括分束单元，用于将所述合束光分为两束，分别输入至所述光片压缩模块和成像预览模块。

8.根据权利要求7所述的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，其特征在于，所述成像预览模块包括照明光路和成像预览光路，所述照明光路包括依次设置在合束光传播方向上的耦合物镜、光纤、准直物镜、第三凸透镜、第四凸透镜、第一反射镜、第一二向色镜及聚焦物镜。

9.根据权利要求8所述的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，其特征在于，所述光纤为方形多模光纤。

10.根据权利要求8所述的多通道斜光片荧光显微镜多色成像系统，其特征在于，所述照明光路包括依次设置在合束光传播方向上的第二反射镜、第三凸透镜、第四凸透镜、第一反射镜、第一二向色镜及聚焦物镜。

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